Diagnostico HP (Helicobacter Pylori)

XIV Jornadas Internacional de
Gastroenterología, Endoscopía y
Hepatología La Plata 2010
TEMA:DIAGNÓSTICO HP
Dr. Juan Seiguerman
Epidemiología
La bacteria es de fácil contagio y el 80% de la población
de países en vías de desarrollo está infectado por ésta,
siendo comúnmente asintomática. En la población infantil
crece a una tasa del 10% anual entre los 2 y 8 años de
edad. Es recurrente en las personas mayores de 60 años.
Diagnóstico
Invasivos
Endoscopía c/ biopsia
1)Test de ureasa
2) Histología
3) Cultivo
No Invasivos En sangre anticuerpos
En aire espirado
En m fecal (antigeno)
PCR
Prueba Serológica
Para la detección temprana de la infección, se ha
utilizado una prueba serológica que detecta la IgG Hp
específica, cuya sensibilidad y especificidad es
cercana a 90%. No obstante, esta prueba no es útil
para valorar la erradicación de Hp, pues los niveles de
IgG permanecen altos aún después de un tratamiento
adecuado.
Endoscopía Gástrica
Determina
el
tipo
de
enfermedad
gastroduodenal producida por la bacteria, y
además permite tomas de biopsia para
examen histológico, cultivo microbiológico con
estudio de sensibilidad a antibióticos.
Antigeno en mat fecal
Las pruebas de detección de antígenos en materia fecal
representan una alternativa para el test de la urea con
una sensibilidad del 89-98% y una especificidad mayor al
90%. Son apropiadas para realizar seguimiento, siempre
que se realice con un intervalo de 8 semanas después de
realizado el tratamiento.
Diagnosis of Helicobacter pylori infection with a new non-invasive antigen-bassed
assay. Dino Vaira et als. LANCET, Saturday 3 July 1999. Vol. 354No. 9172.
Pags. 30-33.
Resultados
Individuales
Antígeno en
heces
Test del
Aliento
Positivos verdaderos
256
266
Falsos negativos
16
13
Falsos positivos
18
5
Negativos verdaderos
201
217
Resultados en performance (IC 95%)
Sensibilidad
94.1
95.3
Especificidad
91.8
97.7
Valor predictivo
positivo
Valor predictivo
negativo
Correlación
93.4
98.2
92.6
94.3
93.1
96.4
Test de aliento
En esta prueba, se administra por vía oral una
solución de Urea marcada con 14-C
(radioactivo) y más tarde se procede a tomar
una muestra de aliento. Técnica Sencilla que
utiliza un isótopo Radiactivo.
Reacción en cadena de la polimerasa
La PCR es un método de alta sensibilidad y especificidad,
capaz de detectar cantidades tan bajas como una sola
bacteria. Es por esto que se ha sugerido como patrón de
oro, pero experimental. Tiene varias limitaciones: es
costosa, el resultado no es inmediato, requiere una
solución buffer especial para depositar la muestra de
tejido y congelarla hasta su determinación y exige un
laboratorio de alta tecnología. A su favor cuenta con la
ventaja de poderla utilizar también con muestras de jugo
gástrico, saliva, placa dentaria y heces, conviertiéndola en
una prueba no invasiva
Product Helicobacter pylori PCR detection Kit
A qualitative diagnostic kit for detection of H.
pylori DNA in clinical samples like biopsy. Kit
contains reagents for Polymerase Chain
Reaction technique. Ready to use PCR mix,
Descrip positive control and other qualified reagents
along with an easy to follow protocol are
tion
included. Specific primers amplify conserved
region in H. pylori genome. Using this kit, as
low as 10 copies/ml of bacterial genome can be
detected.
Storage -20°C
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Isótopos del Carbono
A
X
ZA
X
Z
A: Número másico
Z: Número
atómico
12
6
C Isótopo natural
13
6
C Isótopo estable
14
6
C Radioisótopo
(13C) Tests del Aire Espirado
Tejido
13C-Sustrato
Órgano
Microorganismo
Actividad
enzimática
13CO
2
Aire espirado
Dosis oral del
sustrato
marcado con 13C
Páncreas:
13C triglicéridos
13C trioleína
Almidón de maíz
(biomarcado)
13/12CO
2
Estómago:
13C-urea
Hígado:
13CMetacetina
13C Cafeína
Intestino delgado:
13C Lactosa
13C Glucosa
13C-Test
del Aire Espirado (13C-UBT) para
determinación de colonización por
Urea Breath Test
Helicobacter pylori
Estómago
Pulmón (aire espirado)
NH2
O = 13C
Urea NH2
Ureasa
(H. pylori)
NH3 +
13CO
2
GS-MS
13C-UBT para determinación de
colonización por Helicobacter pylori
Fundamento
La prueba está basada en la fuerte actividad ureasa del
Helicobacter pylori.
Cuando la 13C-Urea llega al estómago, la enzima ureasa
de Helicobacter pylori la hidroliza en amonio y dióxido
de carbono marcado (13CO2). Este dióxido de carbono
marcado será absorbido por el sistema sanguíneo,
difundido a los pulmones y finalmente espirado. La urea
(13C-Urea) administrada oralmente se metaboliza a
dióxido de carbono y amoniaco, o se integra en el propio
ciclo corporal de la urea.
13C-UBT para determinación de
colonización por Helicobacter pylori
Fundamento
13C-UBT para determinación de
colonización por Helicobacter pylori
Fundamento
Cualquier incremento de
isotópico.
13CO
2
será medido por análisis
La administración de 100 mg de urea marcada, produce
un incremento significativo de 13CO2 en la muestra de
aire espirado de pacientes infectados dentro de los
primeros 30 minutos. Esto ocurre en pacientes
Helicobacter pylori positivos.
13C-UBT para determinación de
colonización por Helicobacter pylori
Fundamento
Las muestras de aliento, tomadas en los tubos de
muestras se analizan por espectometría de masas
específico para la detección del 13C
13C-UBT
Materiales y reactivos
Solución rica en ácido
cítrico
Sorbete
13C-Urea
Tubos
Método de Administración:
•Se administra al paciente una Solución rica en ácido cítrico
•Luego de 10 minutos se recogen las muestras basales.
•La urea marcada con C13, es administrada al paciente
•La Urea será hidrolizada por la ureasa y producirá amonio y
bicarbonato que se exhalará como CO2 marcado
•El DOB (delta over base) se calcula como la diferencia entre la
relación 13C/12C a los 30 minutos respecto del valor basal.
•Las muestras recogidas serán leídas por un espectómetro de
masas específico para 13C.
•DOB 13CO2 igual o superior a 3,5 (‰), el paciente se considera
infectado por H. pylori
Medición de muestras en el
Espectrómetro de Masa (GC-MS)
13C-UBT:
Medición de muestras
13C-UBT:
Medición de muestras
13C-UBT:
Procesamiento de datos
Procesamiento de datos - Informe
Técnica diagnóstica de gran utilidad como
comprobación de la erradicación de la Bacteria,
Post Tratamiento
•Estudio sencillo y No Radiactivo, el cual esta
indicado para cualquier paciente, especialmente
en niños, embarazadas. En esta prueba, se
administra por vía oral un comprimido disuelto
especialmente desarrollado para la detección de
Helicobacter pylori y unos minutos más tarde se
procede a tomar una muestra de aliento. Este
método es sencillo, confiable, rápido y altamente
eficaz.
13C-UBT
es...
•Cómodo…
Técnica no invasiva.
•Seguro…
Utiliza 13C, isótopo estable del carbono (no radiactivo).
•Rápido…
El procedimiento para la toma de muestra se realiza
en 40 minutos.
•Fiable…
Refleja la colonización en toda la mucosa gástrica.
•Adecuado…
Apto para niños, embarazadas y madres lactantes.
MÉTODOS PARA DETECTAR H. PYLORI
Método Sensibilidad/especificidad, % Comentarios Invasor (se necesita
endoscopia y toma de material de biopsia) Ureasa rápida 80-95/95100Método sencillo; resultados negativos falsos si en fecha reciente se
usaron PPI, antibióticos o compuestos de bismuto.
Estudio histológico80-90/>95Requiere preparación histopatológica y
tinción; aporta datos histológicos
Cultivo —/— Técnica lenta, costosa y que depende de la experiencia;
permite conocer la susceptibilidad a los antibióticos
Método no invasor Serología >80/>90Método económico y cómodo; no es
útil para la vigilancia temprana
Detección de urea en el aliento>90/>90Técnica sencilla y rápida; útil para
la vigilancia temprana; produce resultados negativos falsos con la terapia
reciente (véase el método de ureasa rápida); exposición a radiación en
bajas dosis con el método con 14C
Antígeno en heces>90/>90Económico, cómodo; no se ha definido su
utilidad en la erradicación, pero es promisorio