α-AMI - Labtronicca

α-AMI
Kit de α-amilasa (método de la IFCC)
3.
Contiene azida sódica. No ingerir. Evite el contacto con la piel y las
Información para pedidos
4.
Tome las precauciones necesarias para la utilización de reactivos de laboratorio.
El desecho de todos los materiales se debe realizar conforme a las
membranas mucosas.
Nº de cat.
Tamaño de envase
5.
AMY0102
R1 1 × 38 ml + R2 1 × 10 ml
6.
AMY0103
R1 4 × 20 ml + R2 2 × 10 ml
AMY0104
R1 4 × 45 mL + R2 4 × 12 mL
AMY0105
R1 2 × 250 ml + R2 1 × 125 ml
directrices locales.
Los usuarios profesionales que lo soliciten disponen de hojas de datos de
seguridad de los materiales.
Preparación del reactivo
R1 y R2 están listos para su utilización.
Almacenamiento y estabilidad
Finalidad de uso
Se mantiene estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se
El reactivo
almacena sin abrir entre 2 ºC y 8 ºC, protegido de la luz.
actividad
Una vez abierto, el reactivo se mantiene estable durante 35 días si permanece
α-AMI está indicado para la determinación cuantitativa de la
de α-amilasa (1,4-α-D-glucanohidrolasas) en suero o plasma en
sistemas fotométricos.
refrigerado en el analizador o un frigorífico.
Evite la contaminación de los reactivos.
Resumen1, 2
α-amilasas se originan en diferentes órganos y se producen, principalmente, en
el páncreas (tipo P) y en las glándulas salivares (tipo S). Las α-amilasas catalizan la
No congele los reactivos.
degradación hidrolítica de los carbohidratos poliméricos, como amilosa, amilopectina
La absorbancia del blanco del reactivo a 405 nm debe ser < 0,6 A.
Las
α
Absorbancia del blanco de reactivo
y glucógeno mediante la segmentación de los enlaces 1, 4- -glucosídicos en
diferentes fragmentos. La amilasa pancreática se produce en el páncreas y se libera
Materiales necesarios pero no incluidos
en el tubo digestivo; la amilasa salivar se sintetiza en las glándulas salivares y se
1.
El calibrador y los controles que se indican a continuación.
secreta en la saliva. Debido a su pequeño peso molecular, la amilasa sanguínea se
2.
Solución de 9 g/l de NaCl.
elimina a través del riñón y se excreta en la orina. Una elevación de la actividad de la
3.
Equipo de laboratorio general.
amilasa en la orina refleja el aumento de la actividad de la amilasa en suero. La
medición de
α-amilasa en suero y orina se utiliza principalmente para el diagnóstico
de trastornos pancreáticos, así como para detectar el desarrollo de complicaciones.
Por lo general, las
Recogida y preparación de muestras
1.
α-amilasas presentan una actividad reducida, en una pancreatitis
muestra. No se recomienda el uso de sangre entera y hemólisis. Utilice
preferentemente suero, plasma u orina recién extraído.
aguda la actividad de la amilasa sanguínea aumenta en las 8 a 12 horas posteriores
a la aparición del dolor abdominal, con picos después de aproximadamente 12 a 24
2.
Utilice los tubos o contenedores de extracción apropiados y siga las
instrucciones del fabricante, evite el efecto de los materiales de los tubos
horas. La actividad de la amilasa sanguínea regresa a los valores normales, como
o contenedores de extracción.
muy tarde, después de 2 a 5 días, aunque el nivel alto de amilasa en orina permanece
3.
durante 5 a 7 días.
Puede utilizar suero, orina, plasma heparina o plasma EDTA como
Centrifugue las muestras que contienen precipitados antes de realizar el
ensayo.
Sin embargo, algunas enfermedades sin origen pancreático como, por ejemplo,
parotiditis, insuficiencia renal o inflamación pulmonar, también pueden aumentar los
4.
niveles de amilasa. Para confirmar los trastornos pancreáticos, se recomienda
Suero y plasma: 7 días entre 20 y 25 ºC
determinar al mismo tiempo enzimas específicas del páncreas, lipasa o
Estabilidad:
α-amilasa
3 semanas a -20 ºC
Procedimiento del ensayo
Método3,4,5
Este método cumple con las recomendaciones de control continuo de la
Federación Internacional de Química Clínica (IFCC).
α-amilasa
Principio de la reacción
5Etilideno-G7-PNP + 5H2O
2Etilideno-G5 + 2G2-PNP +
2Etilideno-G4+ 2G3-PNP + Etilideno-G3 + G4-PNP
2G2-PNP + 2G3-PNP + G4-PNP + 14H2O
(PNP－p-nitrofenol; G－
α-glucosidasa
α-glucosa)
D-maltoheptaosido (EPS-G7) se segmenta mediante
Blanco
Muestra
Reactivo 1
200 μl
200 μl
Agua dest.
5 μl
－
Muestra
－
5 μl
Mezclar, incubar durante 5 minutos, a continuación, añadir:
Reactivo 2
5PNP + 14Glucosa
En la reacción del ensayo, el sustrato 4, 6- etilideno-(G7)-1, 4-nitrofenil-(G1)
α,
10 días entre 2 y 8 ºC
1 año a -20 ºC
pancreática.
–
Orina: 2 días entre 20 y 25 ºC
1 mes entre 2 y 8 ºC
α-amilasas
50 μl
50 μl
Mezclar en profundidad, leer la absorbancia después de 1 minuto y controlar el
tiempo. Leer la absorbancia de nuevo después de 2 minutos.
y la
ΔA/mín = [muestra ΔA/mín]- [blanco ΔA/mín]
consiguiente hidrólisis de todos los productos de la degradación en p-nitrofenol
α-glucosidasa (100% de liberación de cromóforos). El aumento
En este documento se incluyen hojas de aplicación para los analizadores de la
en la absorbancia del p-nitrofenol formado a 405 nm es directamente
serie BS. Consulte el manual de funcionamiento correspondiente para obtener
proporcional a la actividad de las
las instrucciones de ensayo de cada analizador.
con la ayuda de
α-amilasas.
Reactivos
Calibración
Componentes y concentraciones
R1：
1.
Tampón TRIS
50 mmol/l
Sulfato de magnesio
10 mmol/l
α-glucosidasa
R2：
realizar la calibración. La trazabilidad del calibrador múltiple se puede
consultar en las instrucciones del mismo de la empresa Mindray.
2.
4.500 U/l
Tampón TRIS
50 mmol/l
E-pNP-G7
5,5 mmol/l
Control de calidad
Se deben analizar al menos dos niveles de material de control con cada lote de
muestras. Estos controles se deben realizar con cada nueva calibración, cada nuevo
1.
Para diagnóstico in vitro.
2.
No pipetear con la boca y garantizar que el reactivo no entra en contacto
2011-07 V8.0 Español
Frecuencia de calibración: Después de un cambio de lote de reactivos.
Conforme a los procedimientos de control de calidad.
Advertencias y precauciones
con la piel. (La saliva y el sudor contienen
Se recomienda utilizar un calibrador humano múltiple de Mindray para
α-amilasa).
cartucho de reactivo y después de los procedimientos de mantenimiento o solución
de problemas específicos, como se detalla en el manual del sistema correspondiente.
Se recomienda utilizar el de control de ensayo humano de Mindray para
α-AMI Página 1 de 2
N/P: 0040-20-32486(8.0)
α-AMI
α-AMI) (y) y el sistema Hitachi/Roche (α-AMI de Hitachi
comprobar el rendimiento del procedimiento de medición.
Mindray y reactivo
Cada laboratorio debe establecer su propio esquema de control de calidad
/Roche, IFCC) (x) con 44 muestras se obtuvo la siguiente correlación (U/l):
interno, así como los procedimientos de acciones correctivas, si los controles no
y=1.0492x+0.8122, R2 = 0.9999 . Los detalles de los experimentos de
se mantienen dentro de las tolerancias aceptables.
comparación se encuentran a disposición de quien así lo solicite.
Cálculo
Referencias
El analizador calcula la actividad de cada muestra automáticamente con un factor
1. Agarwal N, Pitchumoni CS, Sivaprasad AV. Evaluating tests for acute
pancreatitis. Am J Gastroenterol. 1990 Abr; 85(4):356-66.
de calibración válido especificado del proceso de calibración.
Factor de conversión de unidades tradicionales (U/l) en unidades SI (μkat/l):
1 U/l = 16,67 × 10-3 μkat/l
2. Moss DW, Henderson AR. Digestive enzymes of pancreatic origin. En: Burtis
CA, Ashwood ER, editores. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3a ed.
1 μkat/l = 60 U/l
Filadelfia: W.B Saunders Company; 1999:689-698.
3. Kruse-Jarres JD, Kaiser C, Hafkenscheid JC, Hohenwallner W, Stein W, Bohner
Intervalos de referencia
Cada laboratorio debe establecer sus propios intervalos de referencia en función
J et al. Evaluation of a new alpha-amylase assay using
de la población de pacientes. Los intervalos de referencia medidos a 37 °C que se
4,6-ethylidene-(G7)-1-4- nitrophenyl-(G1)-alpha, D-maltoheptaoside as
substrate. J Clin Chem Biochem 1989; 27(2):103-113.
enumeran a continuación están tomados del material de referencia6.
measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37ºC. Parte 8.
Unidades
Tipo de muestra
convencionales
Suero/ plasma
Orina espontánea
4. Schumann G, Aoki R, Carlo A et al. IFCC primary reference procedures for the
Unidades SI
28-100 U/L
0.47-1.67 μkat/L
Varón
16-491 U/L
0.27-8.20 μkat/L
Mujer
21-447 U/L
0.35-7.46 μkat/L
Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of
α-amylase. Clin Chem Lab Med 2006; 44(9):1146–1155.
5. Lorentz, K. Routine alpha-amylase assay using protected 4-nitrophenyl-1,
4-alpha-D-maltoheptaoside and a novel alpha-glucosidase. Clin Chem 2000;
46(5): 644 - 649.
6.Hohenwallner W, Stein W, Hafkenscheid JC, Kruse-Jarres JD, Kaiser C,
Hubbuch A et al. Reference ranges for alpha-amylase in serum and urine with
4,6-ethylidene-(G7)- 1-4-nitrophenyl-(G1)-alpha,D-maltoheptaoside as
Características de rendimiento
A continuación, se ofrecen datos de rendimiento representativos obtenidos del
sistema de Mindray. Los resultados pueden variar si se utiliza un instrumento
diferente, otro laboratorio o procedimiento manual.
substrate. J Clin Chem Clin Biochem 1989; 27(2): 97-101.
7. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Evaluation of Precision
Performance of Clinical Chemistry Devices; Approved Guideline, NCCLS
publication EP5-A 1999, Vol.19, Nº 2.
Interferencias y especificidad
Se ha comprobado la interferencia de las siguientes sustancias mediante esta
metodología. Criterio: Recuperación dentro del ± 10% del valor inicial.
Sustancia
Nivel de prueba
Efecto observado
Ácido ascórbico
30 mg/dl
NSI*
Bilirrubina
40 mg/dl
NSI
Hemoglobina
250 mg/dl
NSI
Lipemia
500 mg/dl
NSI
© 2011 Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd. Reservados todos
los derechos
* NSI: Sin interferencia significativa (dentro de ± 10%)
Intervalo de linealidad
El sistema de Mindray (analizadores de la serie BS de Mindray y reactivo AMI de
Mindray) proporciona los siguientes intervalo de linealidad:
TIPO DE MUESTRA
UNIDADES CONVENCIONALES
Suero, plasma y orina
de 5 a 1.500 U/l
UNIDADES SI
de 0,08 a 25
μkat/l
Si el valor de la muestra supera 1.500 U/l, se debe diluir la muestra con una
solución de 9 g/l de NaCl (p. ej., 1 + 9) y repetir el ensayo con esta dilución, y el
resultado se debe multiplicar por 10.
Sensibilidad y límite de detección
La actividad de
α-AMI más baja que se puede medir, distinta de cero, es 5 U/l
(0,08 μkat/l) con una fiabilidad del 99,7%.
Precisión
El rendimiento de la precisión obtenido mediante la recomendación EP5-A
aprobada por el NCCLS para el control del suero en ensayos se muestra en la
siguiente tabla7. U: U/l
Control II
Tipo de
precisión
Media
En secuencia
Control III
DE
CV%
0,96
1,2
0,55
0,7
Media
DE
CV%
1,71
0,7
1,07
0,4
Entre
secuencias
78,31
258,79
Entre días
1,10
1,4
4,54
1,8
Total
1,56
2,0
4,96
1,9
Comparación de métodos
En una comparación entre el sistema de Mindray (analizadores de la serie BS de
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