TP Hidratos de Carbono - Campus Virtual FFyB

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LABORATORIO EN EL
PACIENTE
DIABETICO
Departamento de Bioquímica Clínica
Facultad de Farmacia y Bioquímica
Universidad de Buenos Aires
2016
Diabetes Mellitus
Conjunto de enfermedades metabólicas caracterizadas
por
hiperglucemia
crónica
con
trastornos
del
metabolismo de los carbohidratos, de las grasas y de
las proteínas que son el resultado de defectos de la
secreción de insulina, de la acción de la insulina o de
ambas.
ADA, OMS,1999
CLASIFICACION ETIOLOGICA
* Diabetes Tipo 1
* Diabetes Tipo 2
* Otros tipos específicos
* Diabetes Mellitus Gestacional (DMG)
ADA (1997), OMS (1999)
CRITERIOS PARA DIAGNOSTICO
DE DIABETES (ADA,OMS )
Síntomas clásicos de diabetes con glucemia al azar
≥ 200 mg/dl
Glucemia en ayunas ≥ 126 mg/dl
PTOG: Glucemia 120 min ≥ 200 mg/dl
HbA1C ≥ 6.5 % (ADA)
Diab. Care, vol 38, Sup 1, enero 2015
Diabetes mellitus gestacional (DMG)
OMS/SAD
 Glu ayunas ≥ 100 mg/dl (confirmación)
 PTOG glu 120 min ≥ 140 mg/dl
Rev, SAD,Vol 46,Nº Especial:Recomendaciones 2012
CATEGORIAS DE RIESGO INCREMENTADO PARA
DIABETES (PREDIABETES)
GAA (Glucemia en ayunas alterada ): glucemia: 111-125mg/dl
TGA (tolerancia a la glucosa alterada): glucemia a los 120 min
(PTOG): 141 – 199 mg/dl
HbA1c : 5.7 – 6.4 % (ADA)
Diab. Care, vol 38, Sup 1, enero 2015
SEGUIMIENTO
HEMOGLOBINA GLICOSILADA
Hemoglobina A1c
Muestra:
sangre entera anticoagulada con EDTA
Utilidad: evaluación del control glucémico durante los
últimos dos a tres meses.
Molécula de hemoglobina A
HEMOGLOBINA
TOTAL
HbA
HbF
HbA2
ααββ 97 %
ααγγ 0.5 %
ααδδ 2.5 %
HbA0
HbA1
No glicosilada
Glicosilada
HbA1a
HbA1b
HbA1c
90 %
Glicosilación proteica no enzimática
1) Formación de una base de Schiff
2) Reordenamiento de Amadori
3) Etapa irreversible (productos AGE)
Glicosilación proteica no enzimática
Unidades y valor de referencia
DCCT -UKPDS
NGSP
ESTANDARIZACIÓN
Método de referencia
Certificación
HPLC: método
provisorio
Nuevas unidades
Método de referencia Internacional Federation of
Chemistry (IFCC):
Clinical
El método se basa en el clivaje enzimático de la molécula
intacta de hemoglobina con una endopeptidasa
para obtener los hexapéptidos-N terminales de la cadena β
glicados y no glicados. Los péptidos son separados por HPLC
y cuantificados por espectrometría de masa. Se expresa la
HbA1c como la relación entre los hexapéptidos N-terminal
glicados y no glicados.
(Consenso 2007 entre Asociación Americana de Diabetes,
Federación Internacional de Diabetes, Asociación Europea
para el Estudio de Diabetes e IFCC)
Valores de referencia HbA1c IFCC / NGSP
Valores de referencia HbA1c
Límite
inferior
NGSP
IFCC
4
20
Límite
superior
6
42
Unidad
%
mmol/mol
METODOLOGIAS
POR CARGA:
 Cromatografía de intercambio iónico
 Cromatografía líquida de alta performance
(HPLC)
POR ESTRUCTURA:
 Cromatografía de afinidad
 Inmunológicos
Cromatografía de intercambio iónico
Intercambio catiónico: la fase estacionaria
intercambia cationes.

 La HbA1c tiene menos carga positiva que el
resto de las hemoglobinas
es la primera
que eluye.
Se mide la absorbancia del eluato en
espectrofotómetro.
 Mide HbA1c
Cromatografía de intercambio iónico: factores que afectan

Temperatura
 pH y fuerza iónica del buffer de elución
 Intermediarios lábiles
 Variantes genéticas del Hb (F, C, S)
 Variantes carbamiladas y acetiladas
 Triglicéridos
 Bilirrubina
Cromatografía de afinidad
Fase estacionaria: ácido borónico que tiene alta
afinidad por los grupos cis-glicol.

 Eluyen primero las Hb no glicosiladas.
 Las Hb glicosiladas (HbA1a,HbA1b y HbA1c)
quedan retenidas.
 Mide Hb glicosilada total
 V.R.: 4.5 – 8.5 %
Cromatografía de afinidad
Ventajas:
 Menos suceptible a la temperatura.
No interfieren los intermediarios lábiles.
No interfieren las variantes de hemoglobina
Desventaja: mide todas las hemoglobinas glicosiladas
Método inmunológico
(Inhibición de la inmuno aglutinación)
Anticuerpo
Aglutinador
Ausencia de HbA1c
aglutinación
Alta dispersión
HbA1c del
paciente
Anticuerpo
Aglutinador
Inhibición de la aglutinación
Baja dispersión
Reactivo HbA1c método inmunológico
Método inmunológico
Ventajas:
 Resultados exactos y precisos.
 No interfieren las variantes genéticas de Hb.
 No interfieren los aductos de Hb no glicosilada.
Desventaja:
No reconoce variantes de Hb (F, C, S)
HbA1c
Glicación
Turn-over
de Hb
del GR
• niveles glucémicos
• velocidad de glicación
Factores que modifican el resultado de
HbA1c no dependientes de metodología
Valores bajos:
Valores variables:
- Transfusiones de GR
- Alteraciones de la vida media del GR
- Embarazo
(anemia ferropénica, hemoglobinopatías,
embarazo)
- Insuficiencia renal
- Hemoglobinopatías
- Velocidad de glicación
- Hemodilución
- Vitaminas C y E
Diab.Care, January 2010- Vol 33, Supp 1,
J Kidney Dis 2002; 39:297–307.
Factores que modifican el resultado de
HbA1c según la metodología
Valores aumentados (cromat. de intercambio iónico) :
- Derivados carbamilados
- Componentes glicados lábiles (base de Schiff)
- Hipertrigliceridemia
- Hiperbilirrubinemia
- Derivados acetilados: alcoholismo, altas dosis de
aspirina
- Variantes de Hb (Hb fetal)
Diab.Care, January 2010- Vol 33, Supp 1,
J Kidney Dis 2002; 39:297–307.
Factores que modifican el resultdo de
HbA1c según metodología
Valores disminuidos: (mét.inmunológico)
- Triglicéridos (método inmunológico) ?
- Variantes de Hb no reconocidas por el anticuerpo ( F,C,S )
FRUCTOSAMINA
Fructosamina

Proteínas plasmáticas glicosiladas
 Evaluación del control glucémico 2-3 semanas
previas
 Muestra de elección: suero
 Rango de referencia: hasta 285 µmol/L
Fructosamina
Método: reducción del NBT en medio alcalino
Fructosamina + NBT
FORMAZAN
Consideraciones metodológicas:

pH de la solución reactiva
 Hemólisis de la muestra
 Hiperbilirrubinemia
 Hipertrigliceridemia
Consideraciones fisiopatológicas:
 Alteraciones del metabolismo proteico
(tirotoxicosis, hipotiroidismo)
 Interferencia por altas cc de IgA
- Reacción de IgA con NBT ?
- Glicación de IgA ?
 Hipoalbuminemia
 Pérdida renal de proteínas
 Hepatopatías
CLIN. CHEM.33/12,2153-2163 (1987)
CLIN. CHEM. 34/12, 2444-2447 (1988)
CLIN. CHEM. 35/1,134-138 (1989)
Fructosamina
Utilidad:

Mujer embarazada

Hemoglobinopatías, anemia, alteraciones del
turn-over del GR.

Post cambio terapéutico o al instalar la
terapéutica
 Evaluación de terapia a corto plazo
Seguimiento del paciente DBT
 Glucemia
en ayunas y post prandial
Hb glicosilada
Fructosamina
Péptido C
Orina completa
Urocultivo
Estudio de función renal: urea, creatinina, Cl de
creatinina, proteinuria de 24 hs/albuminuria
Control lipídico
Orina completa
Fisicoquímico:
Microscópico:
- densidad
- Células
- pH
- Leucocitos
- Hemoglobina
- Piocitos
- Bilirrubina
- Hematíes
- Glucosa
- Mucus
- Cuerpos cetónicos
- Microorganismos
- Proteínas
- Levaduras
- Nitritos
- Cilindros
- Cristales
- Otros