QUANTA LiteTM dsDNA

QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen
704545
Para Diagnóstico In Vitro
Complejidad de CLIA: Alto
Aplicación
El QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen es un ensayo de inmunoabsorción ligada a enzimas (ELISA) para la
detección semicuantitativa de anticuerpos IgA e IgG frente a péptidos desaminados sintéticos derivados de
la gliadina en el suero humano. La presencia de estos anticuerpos antipéptidos desaminados puede
utilizarse conjuntamente con los resultados de la exploración física y otras pruebas de laboratorio para
ayudar a diagnosticar la enfermedad celíaca tanto con suficiente IgA como deficitaria en IgA, así como la
dermatitis herpetiforme.
Sumario y Explicación de la prueba
La enfermedad celíaca y las enteropatías sensibles al gluten son afecciones crónicas cuya principal
manifestación consiste en la inflamación y característico aplanamiento histológico de la mucosa que provoca
un síndrome de mala absorción intestinal. La etiología precisa de la enfermedad sigue siendo desconocida,
aunque está claro que la gliadina, o la fracción soluble en alcohol del gluten de trigo, es el agente tóxico.1
Originalmente, se utilizaban una serie de biopsias intestinales múltiples para diagnosticar la enfermedad
celíaca y los trastornos relacionados. Hoy en día, se han propuesto los tests serológicos para el muestreo
de pacientes con evidencias de enteropatías sensibles al gluten, así como para controlar la adecuación de
la dieta.2-5 La Sociedad Europea de Pediatría Gastroenterológica y Nutrición (European Society of Pediatric
Gastroenterology and Nutrition; ESPGAN) ha recomendado el uso de marcadores serológicos como la
gliadina, así como los anticuerpos de la reticulina y endomisio para reducir el número de biopsias
intestinales necesarias para efectuar el diagnóstico.6
Recientes investigaciones han revelado que los anticuerpos anti-gliadina presentes en los pacientes
celíacos se unen a un número muy limitado de epítopes específicos de la molécula de gliadina.7,8 Los
mismos estudios revelaron, además, que la desaminación selectiva de la gliadina por la enzima
transglutaminasa tisular, asociada a la enfermedad celíaca, potencia la unión a los anticuerpos anti-gliadina.
Basándose en las anteriores observaciones, se ha demostrado que los análisis que utilizan péptidos
desamidados y específicos consiguen una mayor exactitud en el diagnóstico de la enfermedad que los
análisis anti-gliadina y tTG habituales.9,10,11
Tanto los anticuerpos de la gliadina IgA como de la IgG son detectables en el suero de pacientes con
enteropatías sensibles al gluten.2,3 Una estrategia de muestreo sensible para una población de riesgo
incluiría los tests para los anticuerpos de la, tanto de tipo IgG como de tipo IgA, puesto que una importante
proporción de los pacientes con trastornos celíacos tienen carencia de gliadina IgA.12 Los anticuerpos de la
gliadina IgA resultan más interesantes para realizar un seguimiento de la actividad de la enfermedad a lo
largo del tiempo y para controlar hasta qué punto se sigue una dieta sin gluten.5
La dermatitis herpetiforme (DH) es una enfermedad de la piel que, al igual que la enfermedad celíaca, se
produce por la ingesta de proteínas del trigo. La mayoría de los pacientes con DH presentan una atrofia de
las vellosidades intestinales del yeyuno idéntica a la encontrada en la enfermedad celíaca, y una dieta
estricta sin gluten mejora tanto las lesiones intestinales como cutáneas.13,14 Los métodos serológicos
actuales, como los ensayos EMA y tTG tienen un rendimiento muy pobre cuando se utilizan en la DH, ya
que sus rangos de sensibilidad solo alcanzan entre el 60% y el 75%15,16, en comparación con la sensibilidad
del 95% o superior que muestran para la enfermedad celíaca.
El QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen es una prueba conrendimiento mejorado para la detección simultánea
de anticuerpos IgA e IgG contra un péptido sintético desaminado selectivamente, derivado de la proteína del
trigo gliadina y que permite la detección de la enfermedad celíaca incluso si coexiste una deficiencia de IgA.
Procedimiento de trabajo
Los péptidos de sintético gliadina purificados se unen a las cavidades de una placa microperforada de
poliestireno en condiciones que conservan el antígeno en su estado original. Se añaden controles y
muestras convenientemente diluidas en pocillos separados, uniéndose durante la incubación los anticuerpos
anti gliadina al antígeno que los recubre. El resto de componentes no unidos se elimina mediante lavado y
se añade conjugado anti IgA y IgG humana a cada pocillo. Un segundo paso de incubación permite que el
conjugado se una a los anticuerpos presentes. Tras un lavado que elimina el conjugado sobrante, se añade
un sustrato cromógenico y tras incubación la actividad enzimática presente en el pocillo es proporcional a la
intensidad de color desarrollado. El ensayo puede ser evaluado fotométricamente comparando la intensidad
de color en las muestras con la de los controles.
Reactivos
1.
2.
3.
4.
5.
La placa microperforada de poliesterino utilizada en los análisis ELISA se cubre de péptidos de
gliadina purificados (12-1 x 8 pocillos), envasada en su soporte en una bolsa de aluminio con
desecante
Control negativo ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano ausente de
anticuerpos humanos IgA e IgG contra péptidos de la gliadina anti -gliadina, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA Celiac DGP Screen Positivo Débil, Un vial de tampón con conservante y anticuerpos
séricos humanos IgA e IgG contra péptidos de la gliadina, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA Celiac DGP Screen Positivo Fuerte, Un vial de tampón con conservante y anticuerpos
séricos humanos IgA e IgG contra péptidos de la gliadina, prediluido, 1.2 ml
Diluyente de Muestra HRP, 1 frasco color rosado conteniendo tampón con Tris, Tween 20 y
conservante, 50 ml
1
6.
7.
8.
9.
Solución de Lavado Concentrada HRP, 1 frasco de concentrado 40x color rojo conteniendo tampón
con Tris y Tween 20, 25ml. Referirse a la Sección “Metodología” para instrucciones de dilución.
Conjugado HRP Ig G/A, con anti- IgG y IgA humana de cabra, 1 frasco - incolora conteniendo
tampón, estabilizante de proteína y conservante, 10ml
Cromógeno TMB, 1 frasco conteniendo estabilizantes, 10ml
Solución de Parada HRP, Acido Sulfúrico 0.344 M, 1 frasco, incolora, 10 ml
Advertencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Aviso: Este producto contiene cloramfenicol al 0.02% en el Diluyente de muestras, controles y
conjugado considerado en el estado de California como causante de cáncer.
Todo material de origen humano usado en la preparación de los controles para este producto se ha
examinado resultando negativo para anticuerpos contra HIV, HBsAg y HCV por métodos aprobados
por la FDA. Ningún método puede sin embargo ofrecer garantía completa que HIV, HBV, HCV o
otros agentes contagiosos estén ausentes. Por lo tanto, los controles Celiac DGP Screen ELISA
positivo fuerte, Celiac DGP Screen ELISA positivo débil y ELISA negativo deben manejarse como si
fueran material potencialmente contagioso.17
Dado que se utiliza azida sódica como conservante, este producto puede ser tóxico por ingestión o
absorción a través de piel o mucosas. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o cobre de las
tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desagües para la
eliminación de reactivos se recomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la formación de
dichas azidas metálicas.
El Conjugado HRP contiene diluido un producto químico venenoso y corrosivo que puede ser tóxico
si se ingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos.
El Cromógeno TMB contiene un irritante. Puede ser dañino si es inhalado, ingerido o absorbido por
la piel. Evitar la inhalación, ingestión o contacto con piel y ojos.
La Solución de parada HRP consiste de una solución diluida de ácido sulfúrico. Evitar exposición a
bases, metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con ácidos. El ácido Sulfúrico es
venenoso y corrosivo, puede ser tóxico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con
piel y ojos.
Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit.
Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su
laboratorio acerca de la eliminación de residuos.
Precauciones
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Este producto es para ser usado en el Diagnóstico In Vitro.
La sustitución de componentes diferentes de los incluidos en el sistema puede generar resultados
inconsistentes.
Un lavado incompleto o ineficiente y una eliminación insuficiente de líquido de los pocillos puede dar
lugar a una pérdida de precisión y/o un fondo elevado.
La adaptación de este ensayo para su uso en procesadores automáticos u otros dispositivos,
totalmente o en parte, puede producir diferencias en los resultados en comparación con el
procedimiento manual. Es responsabilidad de cada laboratorio de validar sus procedimiento
automatizado y comprobar que produce resultados dentro de los límites aceptables.
Existe una variedad de factores que influyen en la realización del ensayo. Esto incluye la
temperatura inicial de los reactivos, la temperatura ambiente, la exactitud y reproducibilidad de
técnica de pipeteo, la calidad de la técnica de lavando, el fotómetro que se utiliza para medir los
resultados, y los tiempos de incubación durante el ensayo. Es necesario un exquisito cuidado y un
trabajo consistente para obtener resultados exactos y reproducibles.
Se recomienda seguir estrictamente el protocolo.
El sellado incompleto de la bolsa “zip-lock” que contenga tiras sin usar y desecante provocará la
degradación del antígeno que se apreciará en un empeoramiento de la precisión de resultados.
Pueden observarse absorbancias inaceptablemente bajas tras dos o más usos separados de un
conjugado HRP. Es importante seguir todas las recomendaciones de manipulación específicas para
este producto para evitar que esto ocurra.
La contaminación química del conjugado HRP puede ocurrir como resultado de una limpieza o
secado inadecuados del equipo o instrumentos. Residuos de productos químicos comunes en el
laboratorio como formalina, lejía, etanol, o detergente causan la degradación del conjugado HRP con
el tiempo. Enjuague bien todo equipo o instrumentos después de usar dichos productos.
Condiciones de Almacenaje
1.
2.
3.
Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8°C. No congelar. Los reactivos son estables hasta
la fecha de caducidad si son almacenados y manipulados correctamente.
Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes
cerrándola herméticamente y almacenándola a 2 -8ºC.
La solución de lavado diluida es estable 1 semana a 2 -8°C.
Recolección de Muestras
Este kit requiere suero como muestra. La adición de azida u otros conservantes a las muestras puede
afectar adversamente los resultados. No deben utilizarse muestras contaminadas, tratadas por calor o que
contengan partículas visibles. Deben asimismo evitarse las muestras lipémicas o hemolizadas.
Tras la recolección de las muestras de sangre, el suero debe ser separado del coágulo. El documento CLSI
(NCCLS) H18-A3 recomienda las siguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las
muestras a temperatura ambiente no más de 8 horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas,
2
refrigerar la muestra a 2-8°C. 3) Si el ensayo no se va completar entre 48 horas, o para enviar las muestras,
congelar a -20°C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas las muestras deben agitarse bien antes
de utilizarse.18
Procedimiento
Materiales Suministrados
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Microplaca Celiac DGP Screen ELISA (12-1 x 8 pocillos), con soporte
1.2 ml control prediluido ELISA negativo
1.2ml control prediluido Celiac DGP Screen ELISA Positivo Débil
1.2ml control prediluido Celiac DGP Screen ELISA Positivo Fuerte
50ml Diluyente de muestra HRP
25ml Solución de lavado concentrada 40X
10ml Conjugado Ig G/A (cabra) anti IgG y IgA humana
10ml Cromógeno TMB
10ml Solución parada HRP (Ácido Sulfúrico 0.344M)
Material necesario no incluido
Micropipetas para 5, 100, 200-300 y 500µl
Puntas desechables para micro pipeta
Tubos para dilución de muestras, 4ml
Agua destilada
Recipiente de 1L para la solución de lavado reconstituida
Lector de microplacas capaz de medir densidades ópticas a 450nm (y a 620nm para lecturas de doble
longitud de onda)
Metodología
Antes de empezar
1.
2.
3.
4.
Llevar todos reactivos y muestras a la temperatura ambiente (20 -26°C) y agitar.
Diluir la solución de lavado HRP 1:40 añadiendo el contenido del envase con concentrado a 975 ml
de agua destilada. Si no va a utilizar toda la placa, puede preparar una cantidad menor de solución
de lavado añadiendo 2.0 ml del concentrado a 78ml de agua destilada para cada 16 pocillos que
vayan a utilizarse. El tampón diluido es estable 1 semana a 2 -8°C.
Preparar una dilución 1:101 de cada muestra a procesar añadiendo 5 µl de muestra a 500 µl de
diluyente. Las muestras diluidas deben ser utilizadas dentro de las 8 horas de su preparación. NO
DILUIR los controles Celiac DGP Screen ELISA positivo débil, positivo fuerte y ELISA negativo.
La determinación de la presencia o ausencia de anticuerpos anti gliadina IgA y/o IgG usando
unidades arbitrarias requiere dos pocillos para cada uno de los tres controles y uno o dos pocillos
para cada muestra. Se recomienda que las muestras se hagan por duplicado.
Procedimiento de Ensayo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
TODOS REACTIVOS DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE (20-26°C) ANTES DE
EMPEZAR EL ENSAYO. Ponga el número necesario de tiras en el soporte. Devolver
inmediatamente las tiras sin utilizar a la bolsa de aluminio y sellarla firmemente para
minimizar la exposición a la humedad.
Agregar 100µl de los controles prediluidos Celiac DGP Screen ELISA Positivo Débil, Celiac DGP
Screen ELISA Positivo Fuerte, ELISA Negativo y las muestras prediluidas a los pocillos. Cubrir los
pocillos e incubar 30 minutos a temperatura ambiente en una superficie plana. El tiempo de
incubación empieza después de la adición de la última muestra.
Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos
pocillos y aspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la
placa y golpearla suavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras el
último lavado. Es importante que cada pocillo esté completamente vacío después de cada paso de
lavado. Mantener la misma secuencia para la aspiración que la usada para la adición de muestras.
Agregar 100µl de Conjugado Ig G/A HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las
condiciones más asépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar solamente la
cantidad de conjugado necesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER CONTAMINACIÓN
POTENCIAL MICROBIANA Y/O QUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL CONJUGADO SIN USAR A
SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar los pocillos 30 minutos como en el paso 2.
Lavado: Repetir el paso 3.
Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a temperatura
ambiente.
Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y
temporalización que la efectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para
mezclar bien los pocillos.
Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea
seguir el método de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de
referencia.
Control de Calidad
1.
2.
Los controles Celiac DGP Screen ELISA Positivo Débil, Celiac DGP Screen ELISA Positivo Fuerte y
Control Negativo ELISA deben procesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos
reactivos y procedimientos funcionan correctamente.
El usuario debe notar que debido a que los controles Celiac DGP Screen ELISA Positivo Débil,
3
3.
4.
Celiac DGP Screen ELISA Positivo Fuerte y ELISA Negativo son prediluidos, no controlan
procedimientos asociados con dilución de especímenes.
Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden
prepararse controles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe
almacenarse a < -20°C.
Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios
especificados a continuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse inválida y
repetirse.
a.
La absorbancia del control Celiac DGP Screen Positivo debe ser superior a la del control
Celiac DGP Screen positivo débil y la de este debe ser superior a la del control negativo.
b.
El control Celiac DGP Screen positivo fuerte debe tener una absorbancia mayor que 1.0
mientras que la del control negativo no debe exceder de 0.2.
c.
La absorbancia del control Celiac DGP Screen positivo débil debe ser superior al doble del
control negativo, u oscilar entre 0.25.
d.
Los controles ELISA negativo y Celiac DGP Screen positivo fuerte están pensados para
monitorizar problemas de reactivo de magnitud substancial. El control Celiac DGP Screen
positivo fuerte no puede asegurar precisión alguna en el punto de corte del ensayo.
e.
El usuario puede referirse al documento CLSI (NCCLS) (National Committee of Clinical
Laboratory Standards) C24-A2 para una guía adicional acerca de buenas prácticas de
laboratorio.19
Cálculo de Resultados
Debe determinarse en primer lugar el promedio de densidades ópticas de cada juego de duplicados. La
reactividad para cada muestra se calcula dividiendo la densidad óptica promedio de la muestra por la
densidad óptica promedio del control Celiac DGP Screen positivo débil.
DO Muestra
Valor de la Muestra = ————————————————— x Celiac DGP Screen Valor ELISA Positivo Débil
(unidades)
Celiac DGP Screen DO ELISA Positivo Débil
(unidades)
La reactividad de la muestra está relacionada de manera no lineal con la cantidad de anticuerpo presente.
Mientras que los aumentos y disminuciones en la concentración de anticuerpos del paciente se reflejarán en
el aumento o disminución correspondiente de la reactividad, los cambios no son proporcionales (por
ejemplo, al doblarse la concentración de anticuerpo no se dobla la reactividad).
Interpretación de los Resultados
La técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de
pacientes. Los valores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe
establecer su propio rango normal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de
pacientes.
La muestra puede clasificarse con un valor negativo, positivo débil, positivo moderado o positivo fuerte
según la tabla siguiente.
Unidades
<20
20 – 30
Negativo
Positivo Débil
De positivo moderado a
Positivo Fuerte
1.
2.
3.
>30
Un resultado positivo indica la presencia de anticuerpos de la gliadina IgA y/o IgG y sugiere la
posibilidad de que existan ciertas enteropatías sensibles al gluten, como la enfermedad celíaca o la
dermatitis herpetiforme.
Un resultado negativo indica la ausencia de anticuerpos anti gliadina IgA o IgG o niveles inferiores al
punto de corte del ensayo.
Se sugiere que los resultados informados por el laboratorio incluyan la afirmación “Los siguientes
resultados se obtuvieron con el kit INOVA QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen ELISA. Los valores
obtenidos con kits de diferentes fabricantes pueden variar y no pueden intercambiarse entre ellos. La
magnitud de los niveles informados de IgA y/o IgG no puede correlacionarse con un punto final”.
Limitaciones del Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
Un resultado negativo en un paciente no tratado no descarta totalmente una enteropatía sensible al
gluten. Las muestras negativas pueden someterse a pruebas para detectar otros anticuerpos
relacionados con la enfermedad celíaca, como el endomisial (EMA) o el de la transglutaminasa
tisular (tTG).
En el caso de los pacientes sometidos a tratamiento que presentan anticuerpos anti-IgA, los niveles
de anticuerpos de la gliadina IgA sirven mejor como indicadores del estricto cumplimiento de la dieta
que la concentración de anticuerpos de la gliadina IgG.5
Es posible que se produzcan falsos positivos (altos niveles de anticuerpos sin hallazgos histológicos
característicos). En raras ocasiones, otros trastornos gastrointestinales, así como muestras
normales, pueden presentar anticuerpos que reaccionen con el antígeno DGP.
La relación entre la dermatitis herpetiforme y la enteropatía sensible al gluten es tan fuerte que se ha
llegado a sugerir que ambas enfermedades tienen una etiología común; en estos pacientes,
determinar la existencia de anticuerpos de la gliadina resulta útil para detectar enfermedades
celíacas asintomáticas y para evaluar la gravedad de los efectos gastrointestinales.13,14
Esta prueba detecta simultáneamente anticuerpos tanto IgA como IgG. Si se prefiere la
4
6.
7.
determinación individual de anticuerpos específicos IgA o IgG, INOVA dispone, para este propósito,
de kits ELISA distintos para IgA y para IgG (QUANTA LiteTM Gliadin IgA II y QUANTA LiteTM Gliadin
IgG II).
Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clínicos y otras
pruebas serológicas.
La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.
Valores Esperados
Se evaluó la capacidad del ensayo QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen para detectar anticuerpos IgA e IgG
antigliadina mediante comparación con los kits ELISA QUANTA LiteTM Gliadin IgA II y QUANTA LiteTM
Gliadin IgG II.
Rango Normal
Se realizaron pruebas de anticuerpos contra el antígeno DGP a 497 individuos sanos asintomáticos,
seleccionados aleatoriamente, residentes en Estados Unidos. Trescientos de estos donantes se
encontraban en un rango de edad conocido entre 14 y 78 años, con un número igual de varones y mujeres.
Cuatro muestras (0.8%) estaban por encima del umbral de las 20 unidades. Dos fueron resultados positivos
débiles, con valores de 20.1 y 20.2 unidades, y uno resultó un positivo moderado, con un valor de 46.6
unidades. La cuarta muestra positiva, con 25,4 unidades, se cree que correspondía a un verdadero celíaco,
debido a que la muestra también resultó fuertemente positiva para anticuerpos IgA antitransglutaminasa
tisular (57 unidades). El valor medio de las 497 muestras fue de 3.17 unidades. La desviación estándar de
las muestras fue de 3.0 unidades. El valor medio está 6 desviaciones estándar por debajo del umbral de las
20 unidades.
Características específicas de rendimiento
Comparación con otros ensayos comercializados con la misma finalidad
Se analizaron internamente 101 muestras procedentes de tres laboratorios de referencia para la enfermedad
celíaca, utilizando los kits ELISA QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen, QUANTA LiteTM Gliadin IgA II y
QUANTA LiteTM Gliadin IgG II. A continuación se muestran esos resultados, junto con los de las 497
muestras normales.
N= 598
Celiac DGP Screen
Gliadin IgG II y/o Gliadin IgA II
Positivo
Negativo
Positivo
39
3*
Negativo
11**
545
Porcentaje de concordancia positivo:
Porcentaje de concordancia negativo:
Concordancia global:
39/50 (78.0%)
545/548 (99.4%)
548/598 (91.6%)
* De las tres muestras que dieron positivo en la prueba Celiac DGP Screen, pero negativo en las pruebas
Gliadin IgA II y Gliadin IgG II, dos pertenecían a pacientes que seguían una dieta sin gluten, con 28.7 y 20.9
unidades. La tercera muestra pertenecía a un familiar de primer grado de un paciente celíaco, con 20.2
unidades.
** De las once muestras que dieron negativo en la prueba Celiac DGP Screen, pero positivo en las pruebas
Gliadin IgA II y Gliadin IgG II, nueve procedían del estudio normal. Las dos restantes pertenecían a
pacientes celíacos que seguían una dieta sin trigo. Una arrojó un resultado de 20.1 unidades en la prueba
Gliadin IgG II y la otra de 25.3 unidades en la prueba Gliadin IgA II.
Estudios clínicos
Las muestras estaban clínicamente definidas como pertenecientes pacientes celíacos, pacientes celíacos
con deficiencia de IgA, pacientes celíacos con una dieta sin trigo, familiares de primer grado de pacientes
celíacos, pacientes con dermatitis herpetiforme, controles con deficiencia de IgA o pacientes sin enfermedad
celíaca, y se analizaron en estudios clínicos tanto internos como externos mediante la prueba QUANTA
LiteTM Celiac DGP Screen. A continuación se presenta un resumen de las muestras definidas clínicamente,
más 517 de las muestras anteriormente mencionadas con valores dentro de los límites de la normalidad.
Grupo Pacientis
#
Positivo Celiac DGP
%
Celíacos
85
81
95.3%
Celíaco IgA Deficiente
50
50
100%
Celiacos Dieta sin gluten
33
9
27%
Familiares en primer grado
18
2*
11%
La dermatitis herpetiforme Pacientis
65
59**
91%
IgA Deficiente Controles
36
0
0%
No-Celiaco Pacientes de enfermedad 81
1
1.2%
Normales sanos
517
4***
0.8%
* Uno de los familiares presentó 41.3 unidades y fue positivo tanto para h-tTG como para EMA. El segundo
presentó 20.2 unidades y fue negativo tanto para h-tTG como para EMA.
** En este mismo grupo de pacientes, sólo 54 (83%) fueron h-tTG positivos y 6 de esas 65 personas no
presentaban afectación intestinal (biopsia Marsh 0).
*** De estas cuatro muestras, una dio un resultado de 20.1 unidades y la otra de 20.2 unidades. El umbral
está en 20 unidades. Otra de las cuatro muestras dio un resultado de 25.4 unidades y también fue
5
fuertemente positiva para h-tTG y podría tratarse realmente de un celíaco.
Rendimiento de la prueba ELISA Celiac DGP Screen en el diagnóstico de la enfermedad celíaca:
Positivo
QUANTA LITE™
DGP Screen
Positivo
Negativo
Suma
131
4
135
Diagnóstico
Negativo
(La enfermedad Controla y
los Controles Sanos)
5
629
634
Suma
136
633
769
Sensibilidad: 97% (131/135)
Especificidad: 99.2% (629/634)
Sensibilidad – La sensibilidad global para la enfermedad celíaca se calculó agrupando los resultados de los
85 celíacos y los 50 celíacos con deficiencia en IgA. El número total de celíacos es de 135, de los cuales
131 o 97% dieron positivo.
Especificidad – La especificidad puede calcularse agrupando las 517 muestras normales (incluyendo la
muestra que dio positivo para h-tTG), los 81 controles sin enfermedad celíaca y los 36 controles con
deficiencia en IgA. Este grupo da un total de 634 muestras. De ellas, sólo 5 muestras dieron positivo lo que
da una especificidad del 99.2%.
Reactividad Cruzada
Para detectar posibles problemas de reactividad cruzada con otros autoanticuerpos, se analizó una serie de
muestras positivas a autoanticuerpos con un alto nivel de títulos utilizando el kit QUANTA LiteTM Celiac DGP
Screen. En total, se analizaron 86 muestras. Muchas de las muestras eran controles altamente positivos
procedentes de otros kits de pruebas de autoanticuerpos INOVA QUANTA LiteTM. Las especificidades
incluyeron Centrómero (4), Actina (4), Sm (9), SS-A (12), RNP (9), Jo-1 (9), SS-B (8), Scl-70 (8), GBM (4),
MPO (6), RF (5), Ribo P (4) y M2 (4). El valor medio de estas 86 muestras fue de 2.40 unidades. Todas las
muestras dieron negativo en la prueba QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen. Esa muestra dio también
positivo con el kit de referencia de IgG anti-gliadina. El valor medio está 8 desviaciones estándar por debajo
del valor límite de 20 unidades.
Precisión y Reproducibilidad
Se evaluó el rendimiento intra-ensayo para el kit QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen analizando 13
especímenes un total de 5 veces cada uno. Los resultados son mostrados abajo.
Rendimiento intra-ensayo del método ELISA para QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10
Unidades medias
57.5 51.8 102.0 27.5 121.0 162.0 7.9
4.6 5.3 17.7
Desviación estándar
0.3 1.4
0.9 0.4 1.3
2.8 0.4
0.2 0.1 0.4
Coeficiente de variación % 0.5 2.7
0.9 1.6 1.1
1.7 4.7
4.1 2.6 2.2
11 12 13
25.0 17.4 23.4
0.7 0.4 0.7
2.8 2.2 2.8
La variación inter-ensayo se evaluó analizando por duplicado un panel de 8 muestras, así como el control
muy positivo del kit (HPC) dos veces al día (una vez por la mañana y otra por la tarde) durante tres días. A
continuación se muestra un resumen de los resultados del estudio.
Rendimiento inter-ensayo del método ELISA para QUANTA LiteTM Celiac DGP Screen
HPC
A
B
C
D
E
F
G
H
Unidades medias
110.4 54.6 48.5 27.5 157.9 9.8 16.4
22.2 18.8
Desviación estándar
3.4
1.4
1.9
1.0
3.8 0.6
0.1
0.7
0.6
Coeficiente de variación % 3.0
2.5
3.8
3.6
2.4 5.8
4.7
3.2
3.4
6
Referencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
Trier JS: Celiac Sprue. New England Journal of Medicine 325: 1709-1719, 1991.
Troncone R and Ferguson A: Antigliadin antibodies. J Pediatr Gastroenterol Nutr 12: 150-158, 1991.
McMillan SA, Haughton DJ, et al.: Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin,
endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy. BMJ 303: 1163-1165, 1991.
Lindh E, Ljunghall S, et al.: Screening for antibodies against gliadin in patients with osteoporosis.
Journal of Internal Medicine 241: 403-506, 1992.
Burgin-Wolff A, Gaze H, et al.: Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac
disease. Arch Dis Child 66: 941-947, 1991.
Working Group of European Society of Paediatric Gastroenterology and Nutrition. Revised criteria for
diagnosis of coeliac disease. Arch Dis Child 65: 909-911, 1990.
Osman AA, et al.: B-Cell epitopes of gliadin. Clin Exp Immunol 121: 248-254, 2000.
Aleanzi M, et al.: Celiac disease: Antibody recognition against native and selectively deamidaion
gliadin peptides. Clinical Chemistry 47: 2023-2028, 2001.
Schwertz E, et al.: Serologic assay based on gliadin-related nonapeptides as a highly sensitive and
specific diagnostic aid in celiac disease. Clinical Chemistry 50: 2370-2375, 2004.
Prince HE: Evaluations of the INOVA Diagnostics Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kits for
Measuring Serum Immunoglobulins G (IgG) and IgA to Deamidated Glidin Peptides. Clinical and
Vaccine Immunology 13: 150-151, 2006.
Sugai E, et al.: Accuracy of Testing Antibodies to Synthetic Gliadin-Related Peptides in Celiac
Disease. Clinical Gastroenterology and Hepatology 4: 1112-1117, 2006.
Collin P, et al.: Selective IgA deficiency and coeliac disease. Scand Journal Gastroenterology 27:
367-371, 1992.
Stober W: Gluten-sensitive enterophy: A nonallergic immune hypersensitivity of the gastrointestinal
tract. J. Allergy Clin. Immunol. July 202-211,1986.
Smecuol E, et al.: Permeability, Zonulin Production, and Enteropathy in Dermatitis Herpetiformis.
Clinical Gastroenterlogy and Hepatology 3: 335-341, 2005.
Beutner EH, et al.: Sensitivity and Specificity of IgA-class antiendomysial antibodies for dermatitus
herpetiformis and findings relevant to their pathogenic significance. Journal of the American Academy
of Dermatology 15: 464-473, 1986.
Porter WM, et al.: Tissue Transglutaminase Antibodies in Dermatitis Herpetiformis –
Correspondence. Gastroenterology 117:749-750, 1999.
Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control and
Prevention/National Institutes of Health, Fifth Edition, 2007.
CLSI (NCCLS). Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens; Approved
Guidline-Third Edition. CLSI Document H18-A3, Vol 24(38), 2004.
CLSI (NCCLS). Statistical quality control: Principles and definitions; Approved Guideline- 2nd edition
NCCLS Document C24-A2, Vol. 19(5), 2006.
Fabricante:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
United States of America
Representante Autorizado:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
Altenhofstrasse 80
D-66386 St. Ingbert, Germany
Tel.: +49-6894-581020
Fax.: +49-6894-581021
www.mt-procons.com
Technical Service
624545ESP
888-545-9495
October 2008
Revision 2
7