Seraclone® Anti-D (RH1) Blend Seraclone® Anti

[UK]
®
Seraclone Anti-D (RH1) Blend
For the detection of the red cell antigen D
[REF]
802 032
10 ml
[REF]
802 033
10x10 ml
[PRES] Preservative: < 0.1 % NaN3
[ACT]
Activity / Min.titer
[IVD] Diagnostic reagent for in vitro use only
To be used by trained laboratory personnel only. The [ACT] is printed on the
vial label. Symbols are used according to regulation EN 980. Symbols not
contained in regulation EN 980 are described.
Test purpose
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend is used for the detection of the blood group
characteristic D (rhesus system).
Test principle
The test principle is hemagglutination to detect red cell antigens. The rhesus
characteristic D is defined by its presence or absence on red cells. The
antigens D reacts specifically with the corresponding antibodies contained in
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend.
Reagent
As reactive component Seraclone® Anti-D (RH1) Blend contains a blend of
human monoclonal antibodies of the immunoglobulin class IgG (clone BS221
and H41 11B7) and IgM (clone BS232). They are derived from cell culture
supernatant and demonstrate the consistent specificity and reproducability
characteristic for monoclonal antibodies. The blend combines the strong
agglutination effect of IgM molecules with the ability to perform indirect
antiglobulin tests because of the IgG content. Due to the blend of clones, all
known categories of the D-antigen can be detected.
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend
clones BS221 and H41 11B7 (IgG)
clone BS232 (IgM)
Additional reagents and material
•
Slides and tiles, Bioplate
•
Pipettes (drop volume 40-50μl)
•
Isotonic saline solution
•
Anti-Human-Globulin (e.g. Anti-Human-Globulin [REF] 804 020, 804 025
or Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 115, 804 120 and 804 130)
•
Glass tubes
•
Laboratory centrifuge
•
Seraclone Control AB0+Rh ([REF] 805 171)
Sample material
Blood samples should be prepared following general blood sampling
guidelines. Fresh, non-hemolytic samples (native, EDTA or citrate blood)
should be used.
If needed prepare a red cell suspension from a centrifuged blood sample (2
minutes at 1000 x g) in isotonic saline solution.
Strongly lipemic, icteric or microbiologically contaminated samples may lead to
false results.
Test procedure
◄
Rapid Test
The test is performed on a viewbox with a surface temperature of 40- 50°C.
1. Place 1 drop reagent on plate or slide.
2. Add 1 drop whole blood and mix well.
3. Gently rock plate or slide back and forth and observe for agglutination.
Reading of results should not exceed 2 minutes because drying out may
falsely be interpreted as a positive reaction.
In case of negative, weak or unclear results, a tube test should be performed.
Incubation test
1. Suspend red cells to be tested 5-10% in isotonic saline solution or use
whole blood.
2. On a slide or tile mix 1 drop reagent and 1 drop red cell suspension or
whole blood.
3. Incubate 30 minutes at room temperature or 37°C (cover to prevent drying
out).
4. Gently rock slide or tile and observe for agglutination.
In case of negative, weak or unclear results, a tube test should be
performed.
Tube Test
1. Prepare a 3-5% suspension of the red cells in isotonic saline.
2. In a properly marked tube mix 1 drop reagent with 1 drop of the red cell
suspension.
3. Centrifuge for 2 minutes at 150 - 200 x g or 20 seconds at 800 -1000 x g.
4. Gently dislodge the cell button and observe for agglutination.
5. In case of a negative, weak or unclear result, incubate the tube 15-30
minutes at room temperature.
6. Centrifuge for 2 minutes at 150 - 200 x g or 20 seconds at 800 -1000 x g.
7. Gently dislodge the cell button and observe for agglutination.
If the reaction with Seraclone® Anti-D (RH1) Blend is negative after incubation
at room temperature, an additional test for weak D characteristics (Dweak or
Dvariant) may be performed.
Test for weak D characteristics
1. Incubate tube for 15-30 minutes at 37°C.
2. Wash red cells 3 times with isotonic saline solution. Remove supernatant
completely.
3. Add 2 drops of Anti-Human-Globulin.
4. Centrifugate for 20 seconds at 800 -1000 x g.
5. Gently dislodge the cell button and observe for agglutination.
A positive test result indicates the presence of a weak D characteristic (Dweak or
Dvariant).
A positive and a negative control should be performed in parallel (1).
Interpretation of results
Evaluation of the reaction strength is carried out according to the Technical
Manual (2):
Reaction strength
Agglutination
4+
One single agglutinate. No free red cells.
3+
Strong reaction. Some large agglutinates.
2+
Medium-size agglutinates, no free red cells.
1+
Numerous small agglutinates against a
background of free red cells.
+/Just a few macroscopically detectable
agglutinates within red cell suspension. Numerous
microscopically detectable agglutinates.
Homogenous red cell suspension without
detectable agglutinates.
If agglutinates can be resuspended by gentle shaking, the reaction is to read as
negative.
Performance characteristics and limitations of the method
For the detection of weak antigens, tube testing is recommended.
In case of questionable resulsts of unknown origin our Bio-Rad Service (phone:
+49-6103-3130-611) will assist you.
Shelf life
After opening the reagent the product can be stored until its expiry date under
proper storage conditions (2...8°C). The expiry date is printed on the label. Do
not use damaged vials.
Warning and precautions
Turbidity or other visible changes may indicate a bacterial contamination. In this
case the reagent must be discarded. The cause for turbidity must be examined
by the manufacturer.
Manual techniques are to be performed according to the manufacturer’s
instructions. The use in automated systems may require dilution of the reagent.
The use in automated systems is to be validated by the user. The user’s
responsibility comprises all changes in the reagent, i.e. freezing on
microtiterplates.
Used test material must be discarded as hazardous material. Waste
management according to national guidelines.
Because of biotechnological manufacturing of human monoclonal antibodies, a
contamination with infectious diseases can be considered impossible.
Nevertheless, all test reagents of biological origin must be regarded as
potential transmitters of infectious agents. Appropriate safety precautions are
recommended.
The bovine albumin used for the production of this reagent is purchased from
BSE-free sources.
The user must perform regular in-house quality control procedures. For a
quality control test antisera are examined with test red cells carrying the
corresponding expressed heterozygous antigen.
National guidelines apply , e.g. (1).
References
(1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur
Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005,
Deutscher Ärzte-Verlag Köln.
(2) Technical Manual, 15th edition, Section 1, American Association of Blood
Banks
Key: Underline = Addition or significant change ◄= Deletion of text
[DE]
®
Seraclone Anti-D (RH1) Blend
Zum Nachweis des erythrozytären Antigens D
[REF]
802 032
10 ml
[REF]
802 033
10x10 ml
[PRES] Konserviert mit : < 0,1 % NaN3
[ACT]
Aktivität / Mindesttiter
[IVD] Reagenz zur In-vitro-Diagnostik
| 0197
186935/15 – 08/2012
Der Test darf nur von geschultem Fachpersonal durchgeführt werden. Der
[ACT] ist dem Fläschchenetikett zu entnehmen. Symbole werden entsprechend
der Norm EN 980 verwendet. In EN 980 nicht enthaltene Symbole sind im
weiteren Text erklärt.
Verwendungszweck
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend wird zum Nachweis des Blutgruppenmerkmals
D (Rhesus-System) eingesetzt
Testprinzip
Das Testprinzip ist ein Hämagglutinationstest zum Nachweis des
entsprechenden Erythrozyten-Antigens. Das Rhesus-Merkmal D wird durch
das Vorhandensein oder das Fehlen auf den Erythrozyten definiert. Das
Antigen D reagiert spezifisch mit den korrespondierenden Antikörpern in
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend.
Reagenz
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend enthält als reaktiven Bestandteil humane
monoklonale Antikörper der Immunglobulin-Klassen IgG (Klon BS221 und H41
11B7) und IgM (Klon BS232). Sie werden aus dem Zellkultur-Überstand
gewonnen und weisen die für monoklonale Antikörper geltende konstante
Spezifität und Reproduzierbarkeit auf. Diese Mischung vereinigt die stark
agglutinierende Wirkung der IgM-Moleküle mit der Möglichkeit, durch den IgGAnteil im Reagenz auch den indirekten Antihumanglobulintest durchführen zu
können, wobei aufgrund der Auswahl geeigneter Klone alle bisher bekannten
Kategorien des D-Antigens erfaßt werden können.
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend
Klone BS221 und H41 11B7 (IgG)
Klon BS232 (IgM)
Zusätzlich benötigte Reagenzien und Materialen
•
Glasobjektträger, Tüpfelplatte, Bioplate
•
Pipetten (Tropfenvolumen 40-50 μl)
•
Isotone Kochsalzlösung
•
Anti-Human-Globulin (z. B. Anti-Human-Globulin [REF] 804 020, 804 025
oder Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 115, 804 120 und 804 130)
•
Glasröhrchen
•
Laborzentrifuge
•
Seraclone Control AB0+Rh ([REF] 805 171)
Probenmaterial
Blutproben werden nach allgemeingültigen Entnahmeverfahren gewonnen. Es
sollten frische, nicht hämolytische Proben (Nativ-, EDTA- oder Citratblut)
verwendet werden analog zu den genannten Testmethoden. Wird für die
Durchführung der Methode eine Erythrozytensuspension benötigt, wird diese
aus den Eryhrozyten der abzentrifugierten Blutprobe (z. B. 2 Min. bei 1000 x g)
mit isotoner Kochsalzlösung als Suspensionsmedium erstellt.
Wir empfehlen, die zu untersuchenden Erythrozyten vor Herstellung der
Zellsuspension mindestens 2 mal zu waschen, ggf. so lange bis der Überstand
klar ist.
Stark lipämische, ikterische oder mikrobiell kontaminierte Proben können zu
unzuverlässigen Testergebnissen führen.
Testdurchführung
◄
Schnelltest
Die Untersuchung erfolgt auf der Lichtbox bei einer Oberflächentemperatur von
40 – 50 °C.
1. Auf einen Objektträger 1 Tropfen Reagenz geben.
2. 1 Tropfen Vollblut hinzufügen und gut mischen.
3. Den Objektträger leicht hin- und herbewegen und innerhalb von 2 Minuten
auf Agglutination prüfen. Die Ablesung nach 2 Minuten beenden, da sonst
Eintrocknungserscheinungen am Rand eine positive Reaktion vortäuschen
können.
Bei negativem, schwachem oder zweifelhaftem Befund muß der Röhrchentest
durchgeführt werden.
Inkubationstest
1. Die zu untersuchenden Erythrozyten 5 bis 10%ig in isotoner Kochsalzlösung
suspendieren oder Vollblut verwenden.
2. Auf einem Objektträger oder einer Tüpfelplatte 1 Tropfen Reagenz und 1
Tropfen Erythrozytensuspension bzw. einen kleinen Tropfen Vollblut
mischen.
3. 30 Minuten bei Raumtemperatur oder bei 37°C inkubieren (zum Schutz vor
Eintrocknung in geeigneter Weise abdecken).
4. Unter leichtem Rotieren auf Agglutination prüfen.
Bei negativem, schwachem oder zweifelhaftem Befund muß der Röhrchentest
durchgeführt werden.
Röhrchentest
1. Die zu untersuchenden Erythrozyten 3 bis 5%ig in isotoner
Kochsalzlösung suspendieren.
2. In einem entsprechend beschrifteten Röhrchen 1 Tropfen Reagenz und 1
Tropfen der Erythrozytensuspension mischen.
3. 2 Minuten bei 150 - 200 x g oder 20 Sekunden bei 800 -1000 x g
zentrifugieren.
4. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen.
5. Bei negativem, schwachem oder zweifelhaftem Befund das Röhrchen 1530 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH
Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany
Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724
www.bio-rad.com, [email protected]
6.
2 Minuten bei 150 - 200 x g oder 20 Sekunden bei 800 -1000 x g
zentrifugieren.
7.
Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen.
Fällt die Reaktion mit Seraclone® Anti-D (RH1) Blend nach Inkubation bei
Raumtemperatur negativ aus, kann der Test auf schwache D-Merkmale (Dweak
oder Dvariant) angeschlossen werden.
Test auf schwache D-Merkmale
1. Das Röhrchen 15-30 Minuten bei 37°C inkubieren.
2. Die Erythrozyten 3 mal mit isotoner Kochsalzlösung waschen. Dann den
Überstand vollständig dekantieren.
3. Dem Sediment 2 Tropfen Anti-Human-Globulin zugeben.
4. 20 Sekunden bei 800 -1000 x g zentrifugieren.
5. Unter leichtem Aufschütteln auf Agglutination prüfen.
Fällt die Reaktion positiv aus, so liegt ein schwaches D-Merkmal (Dweak oder
Dvariant) vor. Eine positive und eine negative Kontrolle sollte bei allen
Untersuchungen mitgeführt werden.
Interpretation der Ergebnisse
Die Bewertung der Reaktionsstärken erfolgt analog den Vorgaben des
Technical Manual (2):
Reaktionsstärke
Agglutinationsbild
4+
Ein einziges Agglutinat. Keine freien Erythrozyten.
3+
Starke Reaktion. Einige große Agglutinate.
2+
Mittelgroße Agglutinate, keine freien Erythrozyten.
1+
Viele kleine Agglutinate innerhalb eines Hintergrunds
freier Erythrozyten.
+/Wenige makroskopisch erkennbare Agglutinate
innerhalb der Erythrozytensuspension. Zahlreiche
mikroskopisch erkennbare Agglutinate.
Homogene Erythrozytensuspension ohne erkennbare
Agglutinate.
Lassen sich vermeintliche Agglutinate durch leichtes Aufschütteln
resuspendieren, ist die Reaktion negativ zu bewerten.
Leistungsmerkmale und Grenzen der Methode
Bei zweifelhaften Ergebnissen unklarer Ursache steht der Bio-Rad-Service
(Tel. 06103–3130-611) für Rückfragen zur Verfügung.
Haltbarkeit
Nach Öffnung des Reagenzes ist das Produkt bei sachgemäßer Lagerung
(2...8°C) bis zum Ende der angegebenen Laufzeit haltbar. Die Laufzeit ist dem
Reagenzienetikett zu entnehmen.
Bei beschädigten Fläschchen darf das Produkt nicht mehr verwendet werden.
Warnhinweis und Vorsichtsmaßregeln
Eine Trübung des Produktes kann ein Hinweis auf bakterielle Verunreinigung
sein. In diesem Fall darf das Produkt nicht eingesetzt werden, da die Ursache
der Trübung durch den Hersteller geklärt werden muss.
Manuelle Techniken sind nach den Vorgaben des Herstellers anzuwenden. Für
den Einsatz des Reagenzes in Automaten kann eine Verdünnung des
Reagenzes erforderlich sein. Die Anwendung ist dann vom Anwender und in
Verantwortung des Anwenders zu validieren. Die Verantwortung des
Anwenders gilt auch für jede sonstige Veränderung des Fertigreagenzes, z.B.
Einfrieren auf Mikrotiterplatten. Abgearbeitete Tests müssen als Abfall der
Gruppe B wie beschrieben im „Merkblatt über die Vermeidung und die
Entsorgung von Abfällen aus öffentlichen und privaten Einrichtungen des
Gesundheitsdienstes“ und der „Richtlinie für Krankenhaushygiene und
Infektionsprävention“, entsorgt werden.
Durch die biotechnologische Herstellung der humanen monoklonalen
Antikörper ist das Risiko einer Kontamination durch infektiöse
Krankheitserreger
nahezu
ausgeschlossen.
Trotzdem
sollten
alle
Testreagenzien als potentiell infektiös gehandhabt und die entsprechenden
Vorsichtsmaßnahmen getroffen werden.
Das bei der Herstellung der Reagenzien verwendete Rinderalbumin wird nur
aus BSE-freien Beständen bezogen.
Der Anwender muss eine regelmäßige interne Qualitätskontrolle durchführen.
Dazu werden die Antiseren mit Testerythrozyten, die das korrespondierende
Antigen in heterozygoter Ausprägung tragen, geprüft.
Es gelten die jeweiligen nationalen Richtlinien (1).
Literatur
(1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur
Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005,
Deutscher Ärzte-Verlag Köln.
(2) Technical Manual, 15th edition, Section 1, American Association of Blood
Banks
Schlüssel: Unterstrichen = Zusatz oder wichtige Änderung ◄= Entfernter Text
[FR]
®
Seraclone Anti-D (RH1) Blend
Pour la détection de l´antigène érythrocytaire D
[REF]
802 032
10 ml
[REF]
802 033
10x10 ml
[PRES] Conservé avec: < 0,1 % de NaN3
| 0197
186935/15 – 08/2012
[ACT]
2.
Activité / Titre minimum
[IVD] Réactif pour usage diagnostique in vitro
Le test ne doit être utilisé que par le personnel de laboratoire formé à cet effet.
Le [ACT] figure sur l´étiquette du flacon. Les symboles sont utilisés
conformément à la norme EN 980. Les symboles non visés dans la norme EN
980 sont expliqués dans le texte.
3.
4.
5.
Application
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend est utilisé pour le dépistage de la caractéristique de groupe sanguin D (système-rhésus ).
7.
Principe du test
Le principe du test est basé sur l´hémagglutination qui décèle les antigènes
correspondants des érythrocytes. La caractéristique rhésus D est définie par la
présence ou l´absence de cet antigène sur les érythrocytes. L´antigène D
réagit de façon spécifique aux anticorps correpondants conte-nus dans
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend.
Réactif
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend est composé d´un mélange d´anticorps
monoclonaux d´origine humaine appartenant à la classe d´immuno-globulines
IgG (clone BS221 et clone H41 11B7) et IgM (clone BS232). Ils proviennent de
l´excédent de culture cellulaire et présentent de ce fait la spécificité et la
reproductibilité constante caractéristique des anticorps monoclonaux. Ce
mélange allie le fort effet agglutinant propre à la molécule IgM avec la
possibilité d´effectuer également, du fait de la proportion d´IgG dans le réactif,
le test indirect à l´antiglobuline humaine. D´ailleurs, le choix de clones
appropriés permet de dépister toutes les catégories de l´antigène D connues à
ce jour.
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend
clone BS221 et H41 11B7 (IgG)
clone BS232 (IgM)
Réactifs et matériel supplémentaires
•
Lame porte-objets en verre, microplaque, bioplaque
•
Pipettes (volume par goutte: 40-50 µl)
•
Solution saline isotonique
•
Anti-Human-Globulin (par ex. Anti-Human-Globulin [REF] 804 020, 804
025 ou Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 115, 804 120 et 804 130)
•
Eprouvettes de verre
•
Centrifugeuse de laboratoire
•
Seraclone Control AB0+Rh ([REF] 805 171)
Echantillons
Les échantillons sanguins sont prélevés selon des méthodes généralement
reconnues. Utiliser, par analogie aux méthodes de test citées, des échan-tillons
frais, non hémolytiques (sang natif, EDTA ou citraté).
Dans la mesure où la conduite du mode opératoire nécessite une suspen-sion
d´érythrocytes, celle-ci est confectionnée à partir des érythrocytes de
l´échantillon de sang centrifugé (par ex. 2 min. à 1000 x g) avec une solution
saline isotonique comme milieu de suspension.
Avant de préparer la suspension cellulaire, il est conseillé de laver les
érythrocytes de test à 2 reprises, voire autant de fois qu'il sera nécessaire pour
obtenir la limpidité du surnageant.
Les échantillons fortement lipémiques, ictériques ou présentant une
contamination microbienne peuvent conduire à des résultats de tests non
fiables.
Mode opératoire
◄
Test rapide
L´étude est effectuée sur une boite à lumière à une température superficielle
de 40 – 50 °C.
1. Déposer sur une lame porte-objets 1 goutte de réactif.
2. Ajouter une goutte de sang total et bien mélanger.
3. Agiter légèrement la lame porte-objets et observer l´agglutination dans les
2 minutes consécutives. La lecture doit être terminée après 2 minutes, car
sinon les traces de dessèchement en bordure pourraient être considérées,
à tort, comme le signe d´une réaction positive.
En cas de résultats négatifs, faibles ou douteux, il convient d´effectuer le test
en éprouvette.
Test par incubation
1. Mettre en suspension dans une solution saline isotonique de 5 à 10% les
érythrocytes à analyser ou bien utiliser du sang total.
2. Mélanger sur une lame porte-objets ou sur une plaque respectivement une
goutte de réactif et une goutte de suspension d´érythrocytes ou une petite
goutte de sang total.
3. Laisser incuber pendant à 30 min. à température ambiante ou 37°C
(recouvrir adéquatement pour éviter le dessèchement).
4. Evaluer l´agglutination en imprimant une légère rotation.
En cas de résultats négatifs, faibles ou douteux, il convient d´effectuer le test
en éprouvette.
Test en éprouvette
1. Mettre en suspension les érythrocytes à examiner dans une solution saline
isotonique de 3 à 5%.
6.
Mélanger respectivement dans une éprouvette adéquatement marquée 1
goutte de réactif et 1 goutte de suspension d´érythrocytes.
Centrifuger pendant 2 min. à 150 - 200 x g ou pendant 20 sec à 800 -1000 x g.
Observer l´agglutination en secouant doucement.
En cas de résultats négatifs, faibles ou douteux, il convient d´incuber
l´éprouvette pendant 15-30 minutes à température ambiante.
Centrifuger pendant 2 min. à 150 - 200 x g ou pendant 20 sec à 800 -1000
x g.
Observer l´agglutination en secouant doucement.
Si la réaction avec Seraclone® Anti-D (RH1) Blend s´avère négative après
ncubation à température ambiante, il est possible de passer au test des
caractéristiques D faibles (Dweak ou Dvariant).
Test des caractéristiques D faibles
1. Incuber l´éprouvette pendant 15-30 minutes à 37°C.
2. Laver les érythrocytes 3 fois avec une solution saline isotonique. Ensuite,
décanter complètement le surnageant.
3. Ajouter au sédiment 2 gouttes d´antiglobuline humaine.
4. Centrifuger pendant 20 secondes à 800 -1000 x g.
5. Observer l´agglutination en secouant doucement.
Si la réaction s´avère positive, il y a présence d´une caractéristique D faible
(Dweak ou Dvariant). Chaque essai effectué doit inclure respectivement un contrôle
positif et négatif.
Interprétation des résultats
L´évaluation des forces de réaction s´opère conformément aux dispositions du
Technical Manual (2):
Force de
Agglutination
réaction
4+
Un agglutinat unique. Aucun érythrocyte libre.
3+
Réaction forte. Quelques agglutinats de grande dimension.
2+
Agglutinats de moyenne dimension, aucun érythrocyte libre.
1+
Nombreux agglutinats de faible dimension sur un fond
d´érythrocytes libres.
+/Peu d´agglutinats macroscopiquement reconnaissables à
l´intérieur de la suspension d´érythrocytes. Nombreux
agglutinats reconnaissables au microscope.
Suspension d´érythrocytes homogène sans agglutinats
reconnaissables.
Si des agglutinats présumés peuvent être remis en suspension en secouant
doucement, la réaction doit être considérée comme négative.
Performances et limites de méthodes
En cas de résultats douteux dont la cause ne serait pas évidente, veuillez
consulter le Bio-Rad-Service (Tél. +49-6103–3130-611) qui se tient à votre
disposition.
Stabilité
Une fois le flacon ouvert, le réactif peut être conservé dans des conditions
adéquates (2...8°C) jusqu´à la date de péremption indiquée. La date de
péremption figure sur l´étiquette du réactif.
Si le flacon est endommagé, le produit ne doit plus être utilisé.
Avertissements et précautions
Tout aspect turbide du produit indique une contamination bactérienne. Dans ce
cas, ne pas utiliser le produit, car le fabricant est dans l´obligation d´éclaircir la
cause de la turbidité de celui-ci.
Toutes les techniques manuelles doivent être appliquées conformément aux
instructions du fabricant. Pour l´utilisation en système automatique, il peut être
nécessaire de diluer le réactif. L´application de ce test dans un système
automatique est sujette à une validation par l´utilisateur lui-même et sous son
entière responsabilité. La responsabilité de l´utilisateur s´étend aussi à toute
modification du réactif prêt à l´emploi, par ex. la congélation sur des plaques à
microtitrage. En application des directives nationales respectives, les matériaux
de tests utilisés doivent être évacués. Les procédés biotechnologiques de
fabrication des anticorps monoclonaux d´origine humaine éliminent
pratiquement tout risque de contamination par des agents pathogènes
infectieux. Cependant, il convient de considérer tout réactif de test comme
étant potentiellement infectieux et de prendre les mesures de sécurité
appropriées. L´albumine d´origine bovine utilisée pour la fabrication des réactifs
provient de stocks certifiés libres de virus de l´ESB. L´utilisateur est tenu
d´effectuer en interne un contrôle de qualité régulier. A cet effet, les antisérums
sont contrôlés à l´aide des érythrocytes de test porteurs des antigènes à
expression hétérozygote correspondants. Les directives nationales respectives
sont applicables par ex. (1).
Bibliographie
(1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur
Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005,
Deutscher Ärzte-Verlag Köln.
(2) Technical Manual, 15th ed., Sect. 1, American Assoc. of Blood Banks
Clé : Souligner = Addition ou modification significative ◄= Effacement du texte
[ES]
®
Seraclone Anti-D (RH1) Blend
Para la detección del antígeno eritrocitario D
[REF]
MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH
Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany
Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724
www.bio-rad.com, [email protected]
802 032
10 ml
| 0197
186935/15 – 08/2012
[REF]
802 033
2.
10x10 ml
[PRES] Conservación: < 0,1 % de NaN3
[ACT]
Actividad / titulo minimo
[IVD] Reactivo para uso diagnóstico in vitro
Las pruebas se realizarán exclusivamente por personal cualificado de
laboratorio. La [ACT] viene indicada en la etiqueta de los viales. Los símbolos
se emplean de acuerdo con la norma EN 980. Los símbolos no contenidos en
la norma EN 980 son explicados en el presente texto.
Finalidad prevista
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend se emplea para la detección de la propiedad D
del grupo sanguíneo (sistema Rhesus).
Principio del test
El test se basa en el principio del test de hemaglutinación para la detección del
correspondiente antígeno eritrocitario. La propiedad Rhesus D es definida por
su presencia o ausencia sobre los eritrocitos. El antígeno D reacciona de modo
específico con los correspondientes anticuerpos contenidos en Seraclone®
Anti-D (RH1) Blend.
Reactivo
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend está compuesto por una mezcla de anticuerpos monoclonales humanos de las clases de inmunoglobulina IgG (clon
BS221 y H41 11B7) y IgM (clon BS232). Estos anticuerpos se obtienen del
sobrenadante de cultivos celulares y presentan la especificidad y reproducibilidad constantes que son propiedades bien conocidas de los anti-cuerpos
monoclonales. Esta mezcla combina el alto efecto aglutinante de las moléculas
IgM con la posibilidad de efectuar el test de antiglobulina humana gracias al
componente IgG del reactivo. Debido a la selección de los clones adecuados
se pueden identificar todas las categorías hasta ahora conocidas del antígeno
D.
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend
clones BS221 y H41 11B7 (IgG)
clon BS232 (IgM)
Reactivos y materiales necesarios que no se suministran
•
Portaobjetos de vidrio, placa de pocillos, Bioplate
•
Pipetas (volumen de dispensación: 40-50 μl)
•
Solución salina isotónica
•
Antiglobulina humana (p.ej. Anti-Human-Globulin [REF] 804 020, 804 025
o Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 115, 804 120 y 804 130)
•
Tubos de ensayo de vidrio
•
Centrifugadora de laboratorio
•
Seraclone Control AB0+Rh ([REF] 805 171)
Muestras
Las muestras de sangre se obtendrán según los métodos generalmente
válidos. Se deben utilizar muestras frescas que no presenten hemólisis (sangre
nativa, con EDTA o con citrato) de forma análoga a los métodos de ensayo
mencionados.
Si para la ejecución del análisis se requiere una suspensión eritrocitaria, ésta
se preparará de los eritrocitos de la muestra de sangre centrifugada (p. ej. 2
min. a 1000 x g) con solución salina isotónica como medio de suspensión.
Antes de preparar la suspensión celular, se recomienda lavar los eritrocitos a
analizar por lo menos 2 veces o hasta obtener un sobrendadante limpio. Las
muestras
extremadamente
lipémicas,
ictéricas
o
contaminadas
microbiológicamente pueden arrojar resultados poco fiables.
Procedimiento
◄
Test rápido
El análisis se realiza sobre una caja de lectura con temperatura de superficie
de 40 – 50 °C.
1. Dispensar 1 gota de reactivo sobre el portaobjetos.
2. Añadir 1 gota de sangre entera y mezclar bien.
3. Mover el portaobjetos suavemente hacia delante y hacia atrás y verificar la
aglutinación en un plazo máximo de 2 minutos. Finalizar la lectura
transcurridos 2 minutos, ya que el secado en el borde se puede interpretar
erróneamente como una reacción positiva.
En caso de resultados negativos, débiles o dudosos, debe ser efectuado el test
en tubo de ensayo.
Test de incubación
1. Suspender los eritrocitos al 5-10% en solución salina isotónica o emplear
sangre entera.
2. Sobre un portaobjetos o una placa de pocillos mezclar 1 gota de reactivo y
1 gota de suspensión eritrocitaria o una gota pequeña de sangre entera.
3. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente ó a 37°C (para evitar el
resecamiento cubrir de modo adecuado).
4. Verificar la aglutinación, girando suavemente el porta/placa.
3.
4.
5.
6.
7.
En un tubo adecuadamente rotulado verter 1 gota de reactivo y 1 gota de
suspensión eritrocitaria y mezclar.
Centrifugar 2 minutos a 150 - 200 x g ó 20 segundos a 800 -1000 x g.
Verificar la aglutinación agitando suavemente.
En caso de resultados negativos, débiles o dudosos, incubar el tubo durante
15-30 minutos a temperatura ambiente.
Centrifugar 2 minutos a 150 - 200 x g ó 20 segundos a 800 -1000 x g.
Verificar la aglutinación agitando suavemente.
Si la reacción con Seraclone® Anti-D (RH1) Blend tras la incubación a
temperatura ambiente es negativa, se puede efectuar a continuación un test
para detectar las propiedades D débiles (Dweak o Dvariant).
Test para las propiedades D débiles
1. Incubar el tubo durante 15-30 minutos a 37°C.
2. Lavar los eritrocitos 3 veces con solución salina isotónica. A continu-ación
decantar el sobrenadante completamente.
3. Añadir 2 gotas de antiglobulina humana al sedimento.
4. Centrifugar 20 segundos a 800 -1000 x g.
5. Verificar la aglutinación agitando suavemente.
Si la reacción es positiva, hay presencia de la propiedad D débil (Dweak o
Dvariant). Para todos los análisis se deberá efectuar paralelamente un control
negativo y uno positivo.
Interpretación de los resultados
La intensidad de reacción se evaluará de acuerdo a lo dispuesto en el
Technical Manual (2):
Intensidad
Aglutinación
e reacción
4+
Un solo aglutinado. Ausencia de eritrocitos libres.
3+
Fuerte reacción. Varios aglutinados grandes.
2+
Aglutinados medianos; ausencia de eritrocitos libres.
1+
Numerosos aglutinados pequeños sobre un fondo de
eritrocitos libres.
+/Unos pocos aglutinados visibles macroscópicamente en el
interior de la suspensión de eritrocitos. Numerosos
aglutinados visibles microscópicamente.
Suspensión homogénea de eritrocitos, sin aglutinados
perceptibles.
Si los presuntos aglutinados pueden ser resuspendidos agitando ligera-mente,
la reacción se debe considerar negativa.
Características de funcionamiento y limitaciones del método
En caso de resultados dudosos de causa desconocida póngase en contacto
con nuestro servicio Bio-Rad de atención al cliente (Tel. +49-6103-3130-611).
Estabilidad
Una vez abierto el reactivo, el producto puede ser conservado en las
condiciones adecuadas (2...8°C) hasta la fecha que se indica. La fecha de
caducidad viene indicada en la etiqueta del reactivo.
No utilizar el producto si el vial está deteriorado.
Advertencias y precauciones
Un enturbiamiento del producto puede ser indicio de contaminación bacterial.
En este caso no se deberá emplear el producto, ya que la causa del
enturbiamiento debe ser esclarecida por el fabricante.
Las técnicas manuales se han de realizar de acuerdo con las instrucciones del
fabricante. Para poder emplear el reactivo en sistemas automatizados puede
que sea necesario diluir el reactivo. En tal caso, la utilización debe ser validada
por el usuario bajo su entera responsabilidad. La responsa-bilidad del usuario
se extiende también a cualquier otra modificación del reactivo listo para usar,
p.ej. su congelación en microplacas.
El material de ensayo ya usado debe ser eliminado de acuerdo con las
normativas nacionales relativas a la eliminación de residuos infecciosos.
Gracias a la producción biotecnológica de los anticuerpos monoclonales
humanos, el riesgo de contaminación por agentes infecciosos queda
prácticamente descartado. No obstante, todos los reactivos del test han de ser
considerados como potencialmente infecciosos, debiéndose tomar las
precauciones adecuadas.
La albúmina de origen bovino empleada para la fabricación de reactivos, se
adquiere exclusivamente de proveedores certificados libres de EEB.
El usuario deberá efectuar controles internos de calidad en intervalos
regulares. Para ello se examinarán los antisueros con eritrocitos de ensayo,
portadores de los antígenos heterocigóticos correspondientes. Se observarán
las normas nacionales vigentes, tales como cifra (1).
Referencias
(1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur
Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005,
Deutscher Ärzte-Verlag Köln.
(2) Technical Manual, 15th ed., Sect. 1, American Association of Blood Banks
Clave: Subrayado = Adición o cambio significativo ◄= Texto borrado
En caso de resultados negativos, débiles o dudosos, debe ser efectuado el test
en tubo de ensayo.
Test en tubo
1. Suspender los eritrocitos que se desean analizar al 3-5% en solución
salina isotónica.
MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH
Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany
Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724
www.bio-rad.com, [email protected]
[IT]
®
Seraclone Anti-D (RH1) Blend
Per la rilevazione dell'antigene eritrocitario D
| 0197
186935/15 – 08/2012
[REF]
802 032
10 ml
[REF]
802 033
10x10 ml
[PRES] Conservato con : < 0,1 % de NaN3
[ACT]
6.
7.
Attivitá / titolo minimo
[IVD] Reagente per uso diagnostico in vitro
Il test deve essere eseguito unicamente da personale di laboratorio esperto ed
addestrato. Il [ACT] è riportato sull'etichetta del flacone. I simboli vengono
utilizzati secondo la normativa EN 980. I simboli non riportati nella normativa
EN 980 sono descritti nel testo.
Finalità d'uso
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend viene utilizzato per la determinazione della
caratteristica D del gruppo sanguigno (sistema Rhesus).
Principio del test
Il test si basa sul principio del test di emoagglutinazione per individuare
l'antigene eritrocitario corrispondente. La caratteristica Rhesus D viene definita
attraverso la sua presenza o assenza sugli eritrociti. L'antigene D reagisce in
modo specifico con gli anticorpi corrispondenti contenuti in Seraclone® Anti-D
(RH1) Blend.
Reagente
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend è composto da una miscela di anticorpi
monoclonali umani delle classi immunoglobuliniche IgG (clone BS221 e H41
11B7) e IgM (clone BS232).
Si ottengono da surnatante di colture cellulari e presentano la specificità e
riproducibilità costanti ben note per gli anticorpi monoclonali. Tale miscela ha il
vantaggio di unire la forza di agglutinazione della molecola IgM alla possibilità
di eseguire anche il test indiretto all'antiglobulina umana grazie al componente
IgG del reagente, in modo da identificare tutte le categorie finora conosciute
dell'antigene D attraverso la selezione dei cloni adatti.
Seraclone® Anti-D (RH1) Blend
3.
4.
5.
Cloni BS221 e H41 11B7 (IgG)
Clone BS232 (IgM)
Reagenti supplementari e materiali necessari
•
Vetrini, piastra, bioplate
•
Pipette (volume di dispensazione: 40-50 μl)
•
Soluzione salina isotona
•
Antiglobuline umane (ad es. Anti-Human-Globulin [REF] 804 020, 804
025 o Anti-Human-Globulin Color [REF] 804 115, 804 120 e 804 130)
•
Provette in vetro
•
Centrifuga da laboratorio
•
Seraclone Control AB0+Rh ([REF] 805 171)
Materiale in esame
I campioni di sangue vanno prelevati secondo le procedure generalmente
valide. Devono essere utilizzati campioni freschi, che non presentino emoli-si
(sangue nativo, con EDTA o citrato), analogamente ai metodi di analisi
descritti.
Se per il procedimento è necessaria una sospensione eritrocitaria, questa
viene preparata dagli eritrociti del campione di sangue centrifugato (ad es. 2
minuti a 1000 x g) con soluzione salina isotona quale mezzo di sospensione.
Si raccomanda di lavare gli eritrociti in esame prima della preparazione della
sospensione cellulare per almeno due volte o fino ad ottenere un surnatante
limpido. Campioni fortemente lipemici, itterici o con contamina-zione microbica
possono dare risultati falsati.
Esecuzione del test
◄
Test rapido
L'analisi avviene su di un agglutinoscopio con temperatura di superficie pari a
40 – 50 °C.
1. Dispensare 1 goccia di reagente sul vetrino.
2. Aggiungere 1 goccia di sangue intero e miscelare accuratamente.
3. Scuotere leggermente il vetrino e verificare l'agglutinazione entro 2 minuti.
Concludere la lettura dopo 2 minuti, poiché l'essiccazione ai bordi
potrebbe simulare una falsa reazione positiva.
In caso di risultati negativi, deboli o dubbi, deve essere eseguito il test in
provetta.
Test con incubazione
1. Sospendere gli eritrociti in esame al 5-10% in soluzione salina isotona o
utilizzare sangue intero.
2. Miscelare su di un vetrino o una piastra 1 goccia di reagente e 1 goc-cia di
sospensione eritrocitaria o una piccola goccia di sangue intero.
3. Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente o a 37 C (coprire in modo
appropriato per evitare l'essiccazione).
4. Verificare l'agglutinazione ruotando leggermente.
Centrifugare per 2 minuti a 150 - 200 x g o per 20 secondi a 800 -1000 x g.
Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente.
In caso di risultati negativi, deboli o dubbi incubare la provetta per 15-30
minuti a temperatura ambiente.
Centrifugare per 2 minuti a 150 - 200 x g o per 20 secondi a 800 -1000 x g.
Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente.
Qualora la reazione con Seraclone® Anti-D (RH1) Blend dopo incubazione a
temperatura ambiente sia negativa, si può eseguire un ulteriore test per la
presenza di caratteristiche D deboli (Dweak o Dvariant).
Test per le caratteristiche D deboli
1. Incubare la provetta per 15-30 minuti ad una temperatura di 37°C.
2. Lavare gli eritrociti 3 volte con soluzione salina isotona. Successiva-mente,
decantare completamente il surnatante.
3. Aggiungere al sedimento 2 gocce di antiglobulina umana.
4. Centrifugare per 20 secondi a 800 -1000 x g.
5. Verificare l'agglutinazione scuotendo leggermente.
Qualora la reazione sia positiva, vi è la presenza di una caratteristica D debole
(Dweak o Dvariant). Per ciascuna analisi vanno effettuati un controllo positivo e un
controllo negativo.
Interpretazione dei risultati
La valutazione della forza di reazione viene eseguita secondo le istruzioni
riportate nel Technical Manual (2):
Forza
Agglutinazione
di reazione
4+
Un unico agglutinato. Nessun eritrocita libero.
3+
Reazione forte. Alcuni agglutinati di grandi dimensioni.
2+
Agglutinati di intermedie dimensioni, nessun eritrocita
libero.
1+
Numerosi agglutinati di piccole dimensioni su uno sfondo di
eritrociti liberi.
+/Pochi agglutinati rilevabili macroscopicamente all'interno
della sospensione di eritrociti. Numerosi agglutinati
riconoscibili al microscopio.
Sospensione eritrocitaria omogenea, senza agglutinati
riconoscibili.
Se i presunti agglutinati possono essere risospesi scuotendo leggermente, la
reazione va considerata negativa.
Caratteristiche delle prestazioni e limiti del metodo
In caso di risultati dubbi con causa ignota è possibile contattare l'assistenza
Bio-Rad (tel. +49-6103-3130-611) per chiarime
Stabilità
Una volta aperto il flacone, il reagente può essere conservato in condizioni
appropriate (2...8°C) fino alla data di scadenza indicata. La data di scadenza è
riportata sull'etichetta del reagente.
Se i flaconi dovessero risultare danneggiati, il prodotto non va più utilizzato.
Avvertenze e precauzioni
L'eventuale presenza di torbidità nel prodotto può essere indice di
contaminazione batterica. In tal caso, il prodotto non va utilizzato in quanto
spetta al produttore chiarire la causa della torbidità.
Le tecniche manuali vanno impiegate secondo le istruzioni del produttore. Per
l'impiego del reagente con apparecchi automatizzati può essere necessario
diluire il prodotto. In tal caso, il prodotto viene utilizzato sotto completa
responsabilità dell'utente che deve validare il metodo. L'utente è altresì
responsabile di qualsiasi modifica apportata ai reagenti pronti all'uso, quali ad
esempio il congelamento su micropiastre.
I materiali dei test utilizzati vanno smaltiti conformemente alle rispettive
normative nazionali. Grazie alla produzione biotecnologica degli anticorpi
monoclonali umani, il rischio di contaminazione con agenti patogeni infettivi può
essere quasi escluso. Tuttavia, tutti i reagenti devono essere considerati come
potenzialmente infettivi e vanno adottate adeguate misure precauzionali.
L'albumina bovina impiegata per la preparazione dei reagenti va acquistata
unicamente da fornitori certificati contro la BSE.
L'utente deve eseguire un regolare controllo di qualità interno. Allo scopo,
devono essere controllati gli antisieri con gli eritrociti del test, portatori degli
antigeni eterozigoti corrispondenti. Valgono le rispettive normative nazionali
vigenti, ad es. (1).
Bibliografia
(1) Richtlinien zur Gewinnung von Blut und Blutbestandteilen und zur
Anwendung von Blutprodukten (Hämotherapie), Gesamtnovelle 2005,
Deutscher Ärzte-Verlag Köln.
(2) Technical Manual, 15th ed., Sect. 1, American Association of Blood Banks
Chiave: Sottolineatura = Aggiunta o cambiamento significativo ◄= Cancellazione di testo
In caso di risultati negativi, deboli o dubbi, deve essere eseguito il test in
provetta.
Test in provetta
1. Gli eritrociti in esame vanno sospesi al 3-5% in soluzione salina isotona.
2. Miscelare 1 goccia di reagente e 1 goccia di sospensione eritrocitaria in
una provetta opportunamente contrassegnata.
MBio-Rad Medical Diagnostics GmbH
Industriestr. 1, D-63303 Dreieich, Germany
Tel.: +49-6103-3130-0, Fax: +49-6103-3130-724
www.bio-rad.com, [email protected]
| 0197
186935/15 – 08/2012