PE-M-10 Pseudomona Aeruginosa en agua

LABORATORIO BIO 9000
PROCEDIMIENTO PE-M-10
PARA LA
DETERMINACION DE PSEUDOMONA
PSEUDOMONA
AERUGINOSA EN AGUAS
Rev. nº: 02
Fecha de revisión: 04/04/06
REV.
FECHA
HOJA/S
01
17/08/04
1a5
02
04/04/06
CAUSA DEL CAMBIO
Revisión completa y cambio de referencias a PG´s
Revisión completa
Realizado
Revisado
Aprobado
Fdo.: Fco. Miguel Rguez. Peña
Fecha: 04/04/06
Fdo.: Fco. Miguel Rguez. Peña
Fecha: 04/04/06
Fdo.: Juan Carlos Dominguez
Fecha: 04/04/06
PROCEDIMIENTO ESPECIFICO
ESPECIFICO
PE-M-10
PARA EL
Rev. 02
DETERMINACION DE PSEUDOMONA
PSEUDOMONA
AERUGINOSA EN AGUAS
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INDICE
1.-OBJETO
2.-ALCANCE
2.1.-Intervalo de trabajo
3.-REFERENCIAS
3.1.- Documentos utilizados para la elaboración de este PNT.
3.2.- Documentos a utilizar conjuntamente con este PNT.
4.-GENERAL
4.1.-Nivel de riesgo
4.2.-Control de calidad
5.-DESCRIPCION
5.1.-Equipos y materiales
5.2.-Preparación equipo
5.3.-Procedimiento
5.4.-Tratamiento de resultados
PROCEDIMIENTO ESPECIFICO
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PARA EL
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DETERMINACION DE PSEUDOMONA
PSEUDOMONA
AERUGINOSA EN AGUAS
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1.-OBJETO
Asegurar la calidad e integridad de los resultados obtenidos en el recuento de
Pseudomonas aeruginosa a partir de la técnica de filtración en membrana.
2.-ALCANCE
Determinación Pseudomonas aeruginosa en todo tipo de aguas (aguas potable, piscinas,
Pozos, manantiales, etc.) mediante la técnica de filtración en membrana.
2.1.-Intervalo de trabajo
Mediante la técnica de filtración en membrana es posible la determinación de los
Pseudomonas aeruginosa que posea una muestra (por muy alta o muy baja que fuera la
cantidad de éstos en el agua).
El nivel de detección de esta técnica es dependencia directa de la dilución de la muestra
(cantidad de agua filtrada).
3.-REFERENCIAS
3.1.-Documentos utilizados en la elaboración de este PNT.
- APHA-AWWA-WPCF (1989): Métodos Normalizados para el análisis de aguas
potables y residuales. Ed. Diaz de Santos, 17ºEdición. Madrid.
- Orden del 1 de Julio de 1987 por la que se aprueban los métodos oficiales de
Análisis Físico-Químicos para aguas potables de consumo público. BOE 163 de 9-71987.
- PG-01: “Gestión, elaboración y control de los documentos del sistema de la
calidad”. Procedimientos Generales Bio 9000.
- PG-03: “Organización”
- R.D. 1138/1990 de 14 de Septiembre por el que se aprueba la reglamentación
Técnico Sanitaria para el abastecimiento y el control de la calidad de las aguas
potables de consumo público. BOE 226 de 20-09-1990.
3.2.-Documentos a utilizar junto a este PNT.
- IT-07: "Instrucción para la realización de filtración de membrana"
- IT-10: "Instrucción para la realización de una galería API"
- PE-EQ-15: “Procedimiento para el funcionamiento, mantenimiento y control de la
bomba de vacío”.
- IT-01: "Procedimiento para la preparación de medios de cultivo".
- IT-08: Instrucción para la realización de la prueba de la Oxidasa.
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- Ver la ficha de elaboración de los medios de cultivo indicada por el fabricante
4.-GENERAL
4.1. Nivel de Riesgo.
Siempre que se trabaje con bacterias o productos portadores de ellas, hay que trabajar
con guantes y extremando las medidas de precaución, ya que algunas podrían tener un
carácter patógeno.
4.2.-Control de calidad
Periódicamente se realizan controles positivos:
Control positivo: A partir de una cepa patrón (de la Colección Española de Cultivos
Tipos) de Pseudomonas aeruginosa se realiza una solución en medio acuoso. Se hace un
recuento de ufc/ml mediante siembra en placas de Pseudomona agar a partir dilución en tubos.
En función de éste se seleccionan los tamaños de la muestra a filtrar. Se incuban las placas y
se procede al cálculo de recuperación de Pseudomonas aeruginosa del medio.
Periódicamente se realizan análisis de intercomparación, que el laboratorio se encarga
de contratar.
5.-DESCRIPCION
5.1.-Material y Equipos
-Equipo de filtración
-Bomba vacío
-Pinzas de filtración
-Filtros de 0.45µm
-Agua destilada estéril
-Medio Pseudomona Agar en placas de 60mm.
-Mechero Bunsem
-Muestra de agua.
5.2.-Preparación de la muestra
Antes de proceder a la filtración de la muestra hay que seleccionar el tamaño de la
muestra.
Un volumen ideal de muestra es el que proporciona alrededor de 50 colonias de
Pseudomonas aeruginosa y no más de 200 colonias de todos los tipos. El agua potable se
analiza filtrando100-500 ml o más, o bien muestras duplicadas de volúmenes más pequeños,
por ejemplo, analizar dos muestras de 50 ml o cuatro de 25 ml. Las demás aguas se analizarán
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filtrando tres volúmenes distintos (diluidos o no), en función de la densidad bacteriana que se
espere. Cuando se filtren menos de 20 ml (diluidos o no), se añadirán alrededor de 10 ml de
agua estéril al embudo antes de la filtración. Se aumenta con ello el volumen del agua, lo que
ayuda a obtener una dispersión uniforme de la suspensión bacteriana en la totalidad de la
superficie filtrante efectiva.
5.3.-Procedimiento
Proceder tal y como se describe en IT-07 (Filtración de membrana)
Una vez realizada la filtración colocad el filtro sobre una placa de Pseudomona e
incubarla a 42ºC durante 48 horas.
5.4.-Tratamiento de resultados
Recuento:
A las 24 horas ± 2 h se cuentan como presuntamente positivas de Pseudomonas
aeroginosa, aquellas colonias de verde, cremosas y con emisión de fluorescencia.
Verificación de colonias sospechosas:
Se procede a la realización de una galería de pruebas bioquímicas API. (IT-10)
Calculo de la densidad de Pseudomonas aeruginosa:
Comúniquese la densidad de Pseudomonas aeruginosa como el total de Pseudomonas
aeruginosa por 100 ml. Calcúlese el recuento utilizando filtros de membrana que tengan 2080 colonias de Pseudomonas aeruginosa y no más de 200 colonias de todos los tipos por
membrana, y aplicando la siguiente ecuación:
Colonias Pseudomonas aeruginosa/100 ml = Colonias de P.aeruginosa contadas x 100
ml de muestra filtrados