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XX Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica IX Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica XIV Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular Veracruz, México 16-18, Marzo 2016 Clave: BEN185HUG20151231 EL EFECTO DE UNA ZEOLITA ALCALINA SOBRE LA BIOSÍNTESIS DE ETANOL POR TRES CEPAS DE SACCHAROMYCES CEREVICIAE. Norma Gabriela Hernández-Villa1, Eneida Campos-Guzmán2; Hugo VelascoBedrán1. 1.,Laboratorio de Ingeniería de Bioprocesos. Departamento de Ingeniería Bioquímica. ENCB. IPN. 2 Departamento de Energía División de Ciencias Básicas e Ingeniería. UAM-A. CORREO ELECTRÓNICO [email protected], [email protected] XX Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica IX Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica XIV Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular Veracruz, México 16-18, Marzo 2016 INTRODUCCIÓN Las zeolitas son aluminosilicatos cristalinos, hidrofílicos, que poseen En los últimos años, el etanol se ha convertido en una fuente importante de energía como biocombustible. Los productos petroquímicos tradicionalmente utilizados son dependientes de los combustibles fósiles, que constituyen una fuente limitada. Además el etanol es menos contaminante y más atractivo desde un punto de vista ambiental. (Voit, 2002). esqueleto rígido, estructural provisto de primera generación, la materia prima es el principal factor de costo. En países nórdicos se desarrollan cepas genéticamente modificadas para poder emplear desechos agrícolas y forestales como materia prima. Éstos últimos son de muy bajo costo. Por lo el rendimientos incremento en producto-sustrato tecnológicamente una prioridad. los es aniónico canales y cavidades bien definidas. En las zeolitas, cada átomo de silicio o aluminio de su estructura se encuentra unido con cuatro átomos de oxígeno mediante enlaces covalentes, a su vez, cada oxígeno está unido a dos átomos distintos de silicio o aluminio (Hidalgo, 2011). (Roque-Malherbe, Tratándose de las tecnologías de anterior un Delgado, Contreras, & Lago, 1987). Trabajaron con las cepas cerevisiae Saccharomyces y Candida pseudotropicallissp.C-23. Concluyeron que la adición de 5-10 g/ L de zeolita incrementa el rendimiento de la fermentación alcohólica, sin embargo sólo reportan un aumento en la producción aproximadamente de de CO2 200% con respecto al de los cultivos control, con diferentes tipos de zeolita, inóculos y Mar del Norte No. 5, Col. San Álvaro Azcapotzalco C. P. 02090, México, D. F. Tel. y Fax: 5623 3088 email: [email protected], [email protected] XX Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica IX Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica XIV Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular Veracruz, México 16-18, Marzo 2016 temperaturas disminución y en una la mayor control. (Castellar, Aires de Barrros, Cabral, & Iborra, 1998), consumo de sustrato en el cultivo con trabaron con la cepa Saccharomyces zeolita con respecto al control. bayanus. (Mübeccer, Mutlu, & Özlem, 1997). Observaron que la zeolita mantiene Trabajaron el pH del medio en valores de 3.7-3.8, con velocidad cultivo Saccharomyces cerevisiae. en una concentración de 8 g/L, de modo que el rendimiento de etanol Concluyen que la adición de EDTA, aumenta. Y este efecto se pronuncia ferrocianuro más o zeolita al medio cuando se utilizan durante la fermentación alcohólica a concentraciones de glucosa inicial partir de melazas de azúcar de caña mayores a 350 g/dm3. Viéndose un tiene un efecto positivo sobre el aumento de hasta el 4% con respecto rendimiento, se utiliza n la misma al cultivo control. concentración de sustrato para todos control tenía un pH de 2.5 al final de los casos (100 g/dm3 de azúcares la fermentación). (El fermentador reductores en las melazas utilizadas) observándose un incremento dl 44% OBJETIVOS en la producción de etanol en el Determinar el efecto de una zeolita medio con EDTA y ferrocianuro con alcalina sobre el flujo intracelular del respecto al control. Siendo en el carbono en el metabolismo anaerobio primero donde se observa el mayor de aumento cerevisiae. en el medio de cepas de Saccharomyces fermentación, al añadir zeolita (14 g/dm3), bajo las mismas condiciones MATERIALES Y MÉTODOS de cultivo la producción del alcohol aumentó en un 53% con respecto al Mar del Norte No. 5, Col. San Álvaro Azcapotzalco C. P. 02090, México, D. F. Tel. y Fax: 5623 3088 email: [email protected], [email protected] XX Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica IX Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica XIV Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular Veracruz, México 16-18, Marzo 2016 Cepas. Se probaron tres cepas de Saccharomyces cerevisiae: ScY4, ScY8 and Fermichamp, obtenidas del Centro de Genomica y Biotecnología (IPN) Reactor. 100 mg/L de zeolita Valfor100 se inmovilizaron sobre hule. (145ºC, 30 minutes) y se añadieron a un fermentador de 3 L (1.5 L volumen de operación). Se montó un reactor control. La Temperatura se fijó constante a 28 ° C (+- 2 °C) por termostatos y con agitación Figura 1: Medio de cultivo sin inocular sólo con zeolita (triángulos medio sin zeolita, cuadrados y círculos medio con zeolita) magnética a 60 rpm. El pH inicial se ajustó a 5 con ácido sulfúricoAnalisis. Las concentraciones de glucosa, etanol, ácido acético y glicerol se determinaron por cromatografía líquida (Hitachi Elite LaChrom). La biomasa se midió por densidad óptica a 600 nm. RESULTADOS Se encontró que la zeolita alcaliniza el medio de cultivo Figura 2: Medio de cultivo inoculado con levaduras (cuadrados medio inoculado con levaduras en ausencia de zeolita, círculos medio inoculado con levaduras en presencia de zeolita). Mar del Norte No. 5, Col. San Álvaro Azcapotzalco C. P. 02090, México, D. F. Tel. y Fax: 5623 3088 email: [email protected], [email protected] XX Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica IX Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica XIV Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular Veracruz, México 16-18, Marzo 2016 Figura 3: Rendimientos. P (etanol), X (biomasa), Gly (glicerol), para cada color columnas a la izquierda tratamientos con zeolita, columnas a la derecha tratamiento sin zeolita. Mar del Norte No. 5, Col. San Álvaro Azcapotzalco C. P. 02090, México, D. F. Tel. y Fax: 5623 3088 email: [email protected], [email protected] XX Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica IX Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica XIV Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular Veracruz, México 16-18, Marzo 2016 En todos los casos aumentan los El presente trabajo demuestra lo rendimientos contrario. de etanol sobre el sustrato utilizado, con la cepa Y8 se CONCLUSIONES muestran los mayores rendimientos. La mayor concentración de sustrato • La zeolita alcalina “Velfor 100” inicial muestra menores incrementos ocasiona una desviación del en el rendimiento de etanol. flujo de carbono, Paralelamente el rendimiento de incrementando el rendimiento biomasa sobre sustrato disminuye en de etanol, al estresar el presencia de zeolita, así como el metabolismo de rendimiento de glicerolexcepto para la Saccharomyces cerevisiae. cepa Y4. • El modelo estequiométrico define los límites entre los que DISCUSIÓN es viable el rendimiento de El flujo de carbono se ve afectado por etanol (0.51 – 0.66 mol Cetoh/ la zeolita disminuyendo el crecimiento celular. Por el balance interno de óxido-reducción esto ocasiona menor derivación del carbono hacia glicerol. mol Cgluc) • Se previsible un fuerte impacto económico al desarrollar un proceso sobre estos hallazgos. El efecto de estas dos condiciones explica el mayor flujo de carbono hacia el etanol. I. Lin, C.-G., Wang, N., Lin, Y.-H., & Los trabajos previos que refieren la mejora de rendimiento del etanol hipotetizan un efecto de las zeolitas que mejora REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS el crecimiento celular. entorno para el Bai, F.-W. (2012). Veri high gravity ethanol fermentation by floculating yeast under redox potentialcontrolled conditions. Biotachnifan biofuels. Mar del Norte No. 5, Col. San Álvaro Azcapotzalco C. P. 02090, México, D. F. Tel. y Fax: 5623 3088 email: [email protected], [email protected] XX Congreso Nacional de Ingeniería Bioquímica IX Congreso Internacional de Ingeniería Bioquímica XIV Jornadas Científicas de Biomedicina y Biotecnología Molecular Veracruz, México 16-18, Marzo 2016 II. Londoño, S. C. (2009). Estudio comparativo para la producción de etanol entre Saccharomyces cesevisiae silvestre, Saccharomyces cerevisiae ATCC9763 y Candida utilis ATCC 9950. Pereira. III. Madigan, T. B. (1991). Microbiología. México: Prentice Hall Hispanoamericana. IV. Maier, A. (2001). Characterisation of glucose transport in Saccharomyces cerevisiae with plasa membrane vesicles (cotransport) and intact cells (initial uptake) with single Hxt1,Hxt2,Hxt3,Hxt4,Hxt6,Hxt7 or Gal2 transporters. Germany. V. Michael T. Madigan, J. M. (1999). Brock. Biología de los microorganismos. Madrid: Prentice Hall Iberia. Mar del Norte No. 5, Col. San Álvaro Azcapotzalco C. P. 02090, México, D. F. Tel. y Fax: 5623 3088 email: [email protected], [email protected]