Louisville APL Diagnostics, Inc.

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2622 NASA Pkwy Ste. G2, Seabrook TX 77586-3447, USA
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Tech. Support: 800-624-3192
LAPL-A-001
Fax: 770-455-6499
Calibradores IgA aCL
Desarrollados para la determinación de anticuerpos IgA anticardiolipina (aCL) por ELISA
Para uso de investigación solamente
Calibradores Liofilizados
El Juego consiste de seis muestras de suero liofilizadas. A estas muestras las llamaremos Calibradores IgA. Estos
calibradores fueron especialmente seleccionados y cubren un amplio rango de concentraciones de anticuerpos
IgA aCL. Estos fueron preparados para la calibración de un ensayo ELISA para la detección de anticuerpos IgA
aCL en suero humano. La prueba puede ser realizada en forma similar a la descrita para la detección de
anticuerpos IgG e IgM aCL (1).
Preparación y almacenado de los Calibradores IgA
Cada Calibrador debe ser reconstituido con 120 µl de agua destilada estéril (dH2O). Luego de que el material se
haya disuelto completamente, se recomienda fraccionarlo en alícuotas de 15-20 µl y guardarlo a temperatura de
-20 °C o menores, para su uso en el futuro. Cuando se corra una prueba ELISA, descongelar una alícuota de cada
calibrador, diluirla 1/50 en 10% Suero Bovino Adulto-Tampón Fosfato Salino (10% SBA-TFS) y probar cada uno
de los calibradores en duplicado usando el método estándar para la prueba de anticardiolipina ELISA (1).
Calibradores
El juego incluido en el envase contiene seis calibradores con diferentes cantidades de anticuerpos IgA aCL. Los
calibradores no tienen actividad IgG e IgM aCL. Los calibradores fueron cuidadosamente seleccionados y cubren
valores negativo, positivo bajo, positivo mediano y positivo alto. Las unidades APL han sido determinadas en
nuestro laboratorio y asignadas a cada calibrador. Una unidad APL puede ser definida como la actividad
anticardiolipina de aproximadamente 1 µg/ml de anticuerpo IgA aCL purificado de un suero positivo estándar.
(2)
Puntos de corte y niveles de Positividad
Se ha determinado que el punto de corte debe ser de 12-15 unidades APL. Valores menores de 12-15 unidades
APL deberán ser considerados negativos. Sin embargo, se recomienda que cada laboratorio determine su propio
punto de corte en su propio ensayo.
Preparación de la Curva de Calibración
El ensayo anticardiolipina esta sujeto a considerables variaciones inter-ensayo día a día. La reproducibilidad
puede ser mejorada con la construcción de una curva de calibración en cada prueba. Así como para otros isotipos
anticardiolipina, se ha encontrado que una traza tipo log-logit de lecturas de densidad óptica (D. O.) contra los
valores APL (Figura 1), dan los resultados más exactos y reproducibles. (3)
Se recomienda utilizar el siguiente método: Colocar los 6 calibradores IgA en los 6 primeros pocillos por
duplicado (frecuentemente se colocan también los 6 calibradores en los 6 últimos pocillos por duplicado para
obtener cuadruplicados de la curva de calibración). Las muestras de suero desconocidas se colocan en los otros
pocillos de la placa. En el último paso del ensayo ELISA, se debe detener la reacción de color cuando el calibrador
designado A4 alcance lecturas de D. O. de 0,9± 0,1. Se deberá luego construir una gráfica log-logit de los valores
D. O. de los seis calibradores contra sus valores en unidades APL (Figura 1). Existen varios programas para la
computación de esta curva y pueden ser utilizados usando un lector de placas ELISA conectado a una
computadora. Cuando la curva de calibración ha sido establecida, los valores de las muestras desconocidas
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Revisión 3: Enero 1o, 2008
Soporte Técnico: [email protected]
Web: www.louisvilleapl.com
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pueden ser derivados de la curva de calibración (en unidades APL) cuando se conoce el valor de lectura de la
D. O. Los resultados de muestras anticardiolipina IgA con niveles que excedan las 100 unidades APL son
inexactos.
Estas muestras deberán ser diluidas y testadas nuevamente y los valores obtenidos multiplicados por el factor de
dilución.
Calibradores IgA
Tabla de Unidades APL
Designación
del Calibrador
A4
A6
A8
A9
A10
A13
UNIDADES
APL
120
80
40
20
10
2,7
1.03
A
B
S
O
R
B
A
N
C
E
Plot: Log-Logit; Abs. = (A - D) / (1 + (Conc. / C) ^ B)
Coefs: A= 0.12178 B= 2.0160 C= 39.666 D= 1.1338
Std. Err:
0.0648 abs. units
+ D
0.86
0.69
0.52
0.34
0.17
10.000
21.128
44.641
69.146
94.319
120.00
CONCENT RA T I ON
Figura 1: Gráfica de D. O. vs. concentración (en unidades APL) usando
log-logit. Las concentraciones de las muestras desconocidas pueden ser
derivadas de la curva cuando se conoce la D. O.
Se ha determinado la unión de los calibradores IgA a pocillos vacíos y cubiertos con Fosfatidilcolina (FC).
La siguiente tabla muestra que la unión de los estándares a FC y pocillos vacíos es insignificante.
Comparación de la unión de los Calibradores IgA a CL, FC y pocillos vacíos
Calibrador
D. O. de la unión
CL
FC
Pocillo Vacío
A4
0,899
0,290
0,315
A6
0,844
0,132
0,183
A8
0,588
0,134
0,143
A9
0,446
0,098
0,134
A10
0,329
0,132
0,123
A13
0,200
0,132
0,123
REFERENCIAS
1. Harris, EN. (1990) Antiphospholipid Antibodies (Annotation). Brit. J. Haematol. 74: 1-9.
2. Pierangeli S, Davis SA, Harris EN. (1992). IgA Calibrators for the Anticardiolipin Test Arthritis Rheum. 35, S359
3. Pierangeli S, Greenberg R, Harris EN. (1989). Determination of the calibration equation which achieves best accuracy and
precision of the anticardiolipin assay (abstract). Arthritis Rheum 32 (supplement), S123.
Garantía – Cualquier producto que no funcione como se indica será reemplazado sólo y cuando el Usuario haya reconstituido y guardado los
estándares o calibradores de acuerdo con las instrucciones incluidas con el producto y una muestra del producto sin contaminar se remita a
nuestro laboratorio para un análisis detallado.
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