iv congreso cono sur asocíacíon pan ame ri can a

Transcripción

IV CONGRESO CONO SUR
ASOCÍACÍON P A N AME RI C A N A DE SOCIEDADES DE BIOQUÍMICA
(PAABS)
X X I X REUNION A N U A L DE L A
SOCIEDAD DE BIOLOGIA DE CHILE
X REUNION A N U A L DE L A
SOCIEDAD DE BIOQUÍMICA DE CHILE
V I I I REUNION A N U A L DE L A
SOCIEDAD DE F A R M A C O L O G I A DE CHILE
COMUNICACIONES LIBRES
Pucón, Chile
26 al 29 de noviembre de 1986
R 168
EVIDENCIAS D E IA DEPENDÊNCIA D E CÁLCIO EXTKACELULAR EN
EL ACOPLAMIENTO EXCTTACION-LIBERACION D E TERM3NALE3
AMINQACIDICOS EN ESTRIADD DE RATA. (Evidence for extracellular calcium dependence on the excitation-liberation
coupling in aminoacidic nerve terminals from rat striatum) . Abarca, J.
Lab. Farmacologla-Bicquicia, P. Universidad Católica d e Chile.
En estúdios realizados en nuestro laboratório, hemos
encontrado que el análogo d e Sc. L-Glutámico, el Sc.
[3H]-D-aspãrtico (D-asp) se libera rapidamente por condiciones despolarizantes y depende dei cálcio extracelular en menor proporcióh aparente que la liberacion d e
anúnas biogénicas, sugiriendo que parte dei C a 2 externo
participa en el acoplamiento excitacióh-liberacion de
aminoácidos excitatorios. Estos resultados nos llevõ a
estudiar si condiciones que alteran la movilizacioh d e
Ca+2, como cationes divalentes o antagonistas d e cálcio
son capaces d e modificar la liberacion evocada d e D-asp
en estriado d e rata.
+
Cortes estriatales, preincubados con D-asp, se superfundieron con KRF en presencia d e diversas agentes y se
estimularon con exceso d e K*" o Veratridina y se determino la radioactividad en los perfusados. El B a
(2 m M ) ,
induce la liberacion d e D-asp, en mayor magnitud q u e la
respuesta evocada por K+ (53 mM) o Veratridina (10 u M ) .
El ionóforo A-23187 evoco una liberacion d e D-asp significativa. El Mn+2 (0,5-2 mM) inhibe la liberacion d e
D-asp y este efecto es mãs intenso que el descrito para
la liberacion d e Dopamina estriatal. Los inhibidores d e
Ca
Nifedipina, Verapamil y Diltiazen (100 uh) inhiben
la liberacion inducida d e D-asp. Aderrâs Trifluoroperazina disminuyó la liberacion evocada d e D-asp.
+ 2
+ 2
;
EFECTOS DE MORFINA AGUDA Y CRÔNICA EN LA NEUROTRANSMISION DE LA VEJIGA URINARIA D E RATON (Effects of acute
and chronic morphine in the neurotransmission of the
mouse urinary bladder). Aoevedo,C.G.; Contreras,E. Departamento Ciências Fisiológicas, Facultad Ciências Biológicas y Recursos Naturales, Universidad de Concepcién.
La suspension de un tratamiento crônico con morfina
incrementa la sensibilidad de ôrganos o tejidos inervados por el sistema nervioso autônomo. E n este trabajo
se estúdio la influencia de tratamientos agudos y crônicos oon morfina en la sensibilidad de la vejiga urinaria
a acetilcolina y ATP, dos neurotransmisores que participan en la respuesta contractu, de este ôrgano.
Se empleô la técnica de Ôrgano aislado para trozos
de vejiga de ratones con y sin tratamiento con morfina
mantenidos en soluciôn Tyrode. Cuando se realizo estimulaciôn eléctrica el tejido se ubicó entre electrodos de
platino y se estimulo con frecuencias de 0.1 a 50 Hz con
pulsos de 0.5 mseg de duración y voltaje supramâximo.
Acetilcolina se ensayô en forma acumulativa y el ATP en
dosis simples. Ias contracciones isometricas de la vejiga se registraron en un plígrafo Grass.
La respuesta de acetilcolina fue incrementada por la
administraciõn aguda de morfina. E n cambio la acciõn de
ATP no fue modificada por la administraciõn aguda dei anal
gésico. El tratamiento crônico oon morfina no altero Ias
respuestas d e la vejiga a la acetilcolina o ATP. La administraciõn de metadona o ketociclazocina disminuyó
Ias respuestas a la estimulaciôn eléctrica, efectos depresores que no fueron modificados por naloxona.
En conclusion, nuestros datos sugieren que condiciones que promueven o decrecen la entrada d e cálcio, aumentan o inhiben el acoplamiento excitacióh-liberacion
d e D-asp d e terminales nerviosos, indicando un importante rol para el cálcio extracelular en el proceso d e l i beracion d e neurotransmisores dei tipo aminoácidos excitatorios .
Los resultados sugieren la inexistência de receptores opiáceos en la vejiga urinaria de ratôn como tambiên
la ausência de efectos directos de morfina en la uniôn
neuroefectora.
Proyecto 20.33.13 Dirección Investigaciôn, Universidad
de Concepciôn.
MECANISMOS
SENSORIALES
DE
LAS
BACTÉRIAS
QUIMIOUTOTROFICAS: QUIMIOTAHS Y RESPUESTA AL STRESS.
(Sensorial mechanisms in chemolithotrophic bacteria: chemotaxis and
stress response). Acuna,J., Peirano,I. y Jerez,C.A. Departamento de
Bioquímica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
CARACTERÍSTICAS
I3ENERALES
DE
LA
ENDONUCLEASA D E RESTRICCION
BstV
I.
(General
r o p e r t i e s of t h e r e s t r i c t i o n
endonuclease
stV
I).Alejandro
A d a m * * - L a b o r atorio
de
Bioquímica,
Facultad
de Ciências
Químicas
y
Farmacêuticas,
Universidad
de
Chile.
(Patrocínio: Alejandro v e n e g a s ) .
Las bactérias quimiolitotróficas acidtífilas tienen gran importância
en la biolixiviaciún de minerales. En su ambiente natural, estos
microorganismos se ven enfrentados a diversos tipos de stress,
tales como câmbios bruscos de temperatura, câmbios de pH,
presencia de metales pesados,etc. En este trabajo hemos estudiado
los mecanismos quimiotácticos y de respuesta al shock térmico en
estas bactérias, ya que estos pueden desempertar un importante
papel durante la lixiviación bacteriana.
Empleamos cepas puras de Thiobacillus ferrooxidans y
Leptospirillum ftrrooxidans, las que se marcaron radiactivamente
ya sea en presencia de L-(metiPH)metionina o Na2^C03 y se
analizaron los componentes mediante electroforesis mono y
bidimensional seguidos de autorradiografía. La quimiotaxis in vivo
se determina utilizando células radiactivas mediante la técnica dei
capilar.
Encontramos que tanto T. ferrooxidans como L. ferrooxidans
responden al shock térmico como lo hacen la mayoría de los
organismos vivos estudiados, es decir, inhibiendo la sintesis de la
mayor parte de los componentes celulares, y sintetizando en mayor
cantidad un conjunto de proteínas denominadas proteínas del shock
téVmico. Estas proteínas tienen pesos moleculares en los rangos de
80 a 90 K, 68 a 74 K y 18 a 30 K> confirmando la universalidad dei
fenômeno del shock térmico.
Por otro ladoi encontramos proteínas receptoras que
aparentemente hacen que Ias bactérias naden hacia Ni++ y Fe++
(atrayentes) y se alejen de sustancias como aspartate (repelentes).
Estos resultados demuestran que Ias bactérias que participan en la
biominería poseen tanto mecanismos defensivos como de adaptaciân,
los cuales es necesario conocer ya que podrían ser eventualmente
manipulados para obtener cepas mas eficientes en el proceso de
lixiviacitín.
Financiado por Proyecto PNUD/ONUDI CHI/85-002-01, FONDECYT
1108-85 y Universidad de Chile, B-1972-8634.
P
Algunas
propiedades
de
BstV
I,
un
isosquizómero termoestable
de
X h o I, h a n
sida comunicadas anteriormente. Este trabajo
dice relación
c o n u n a caracter- i z ac-i ón
en
mayor profundidad de esta p r o t e í n a .
La
enzima
BstV
I
es
producida
por
Bacillus
stearothermophilus,
de donde
se
obtiene con un
rendimiento
entre
1-2MÍO' '
u n i d a d e s p o r g r a m o d e c é l u l a s (peso h ú m e d o ) .
Tal h e c h o c o n v i e r t e a e s t a
cepa
bacteriana
en el m a y o r
sobreproduetor
(silvestre)
de
endonucleasas de restricciòn descrita
a
la
•fecha.
La enzima se obtuvo
libre
de
nucleasas
inespecificas
por
solo
dos
pasos
cromatográ-f i c o s :
DEAb-celulosa
y
Azul
de
Cibacrón. Su peso molecular fue
determinado
por
-filtración
en
Bepharose
CL-6B
y
corresponde a 33 Kdaltons. sin embarga,
par
PAGE-SDS hemos logrado obtener na menos
de
t r e s bandas polipeptldicas. En
este
estada
de pureza
la
enzima
es
1 i o-f i 1 i zabi e s i n
di-ficultad, lo cual h a c e m u y -fácil s u m a n e j o
y almacenamiento.
Las condiciones óptimas determinadas para
su e n s a y o
s o n : Tris-HCl
10 m M , p H B . O ;
NaCl 10 m M ; MgCl =, 5 m M y 10 ug/ml
de BSA,
aun
cuando
esta
últifiia
condicion
es
a b s o l u t a m e n t e d i s p e n s a b l e . El
cation
divalente p u e d e ser r e e m p l a z a d o par CoCl? 1 mM
o M n C l a 5 m M , s i n a-fectar l a e s p e c i i í c i dad
d e la e n z i m a .
Bst.V 1 E s r e s i s t e n t e
a
vários
agentes
desnaturante
como
s o n : T r i t o n - X - 1 0 0 2o7.,
B r i j 5 8 57., S D S 0.0157.,
-formamida
o,o/, y
DMSO 2 0 % . L a enzima
puede
ser
preincubada
1-2 h r s a
75 C
o
1 min a
9 0 ° C , con
r e t e n c i ô n d e m a s dei 707. d e
la
actividad.
Tales
propiedades
la c o n v i e r t e n
en
un
e x c e l e n t e c a n d i d a t o p a r a u s o c o r r i e n t e en el
l a b o r a t ó r i o , en a n á l i s i s
de
restricciòn
y
clonamiento
molecular,
operación
en
que
fragmentos de DNA producidos
por- d i g e s t i o n
c o n BstV I p u e d e n -.er l i g a d a s
en
el
sitio
p a r a l a e n z i m a Sal I d e d i f e r e n t e s
vectores
^pBR322, pUCB, pUC9, M13mpB, e t c ) .
1
0
Financiada
E/B34-1.
por
Kondecyt
5035/85
e
IFS
I N C I D Ê N C I A D E L F I T O M E J O R A M I E N T O EN L A C A N T I D A D Y P R O P O R C I O N DE A L C A L Ó I D E S EN S E M I L L A DE L u p i n u s m u t a b i l i s SWEET
( I n c i d e n c e o f b r e e d i n g i n amount and p r o p o r t i o n o f a l k a l o i d s i n seed o f Lupinus m u t a b i l i s SWEET). A g u i l l ó n . J . C .
y v o n B a e r , D.
F a c . de F a r m á c i a , U. de Concepciõn. v o n
B a e r , E . e I b á h e z , R. CAMPEX, T e m u c o . ( P a t r o c i n i o : R .
Massone).
Lupinus mutabilis,espécie o r i g i n a r i a del A l t i p l a n o Andin o , d e s t a c a p o r e l a l t o c o n t e n i d o d e p r o t e í n a s ( > 45%)
y d e a c e i t e ( h a s t a 20%) e n s u s e m i l l a . L o s a l c a l ó i d e s q u i .
n o l i z i d í n i c o s , amargos y t ó x i c o s , en c o n c e n t r a c i o n e s may o r e s d e 0 . 0 2 % l i m i t a n l a u t i l i z a c i ó n d i r e c t a d e l a semi_
11a. En e l p r e s e n t e t r a b a j o s e e v a l ú a l a i n c i d ê n c i a d e
l a s e l e c c i ó n de f o r m a s de muy b a j o c o n t e n i d o de a l c a l ó i des llamadas " d u l c e s " , en el c o n t e n i d o de a l c a l ó i d e s t o t a l e s y e n l a p r o p o r e i ón de cada u n o de e l l o s . L a c u a n t i _
f i c a c i ó n de a l c a l ó i d e s se e f e c t ú a por c r o m a t o g r a f í a de
g a s c o n d e t e c t o r T S D ( s e l e c t i v o p a r a N y P ) . De I a s 1 1 n e a s a n a l i z a d a s , s o m e t i d a s a f i t o m e j o r a m i e n t o , l a más ba_
j a en a l c a l ó i d e s t i e n e un c o n t e n i d o r e s i d u a l de s ó l o
0.0025%, e n cambio e n m u e s t r a s d e i m a t e r i a l o r i g i n a l no
sometido a s e l e c c i ó n l o s a l c a l ó i d e s t o t a l e s llegan a
3.66%. E l l o i m p l i c a q u e m e d i a n t e s e l e c c i ó n g e n é t i c a s e
h a l o g r a d o r e d u c i r s o b r e 1000 v e c e s e l n i v e l d e a l c a l ó i des en s e m i l l a de L . m u t a b i l i s .
E n I a s 29 m u e s t r a s a n a l i z a d a s e l a l c a l ó i d e p r e s e n t e en mayor p r o p o r c i ó n es L u panina, mientras los otros (Esparteína, Hidroxilupaninas
T e t r a h i d r o r o n b i f o l i n a ) están presentes en proporciones
menores y v a r i a b l e s .
Se d i s c u t e a d e m á s , e n b a s e a I a s r e s p e c t i v a s v i a s m e t a b ó
l i c a s i n v o l u c r a d a s , l o s f u n d a m e n t o s d e l a c o r r e i a c i ó n ne_
g a t i v a observada e n t r e contenido de p r o t e í n a s y de a l c a l ó i d e s en s e m i l l a de l í n e a s de s e l e c c i ó n de L . m u t a b i l i s
bajas en a l c a l ó i d e s .
Proyecto
20.71.05
D i r e c c i ó n de I n v e s t i g a c i ó n
U n i v e r s i d a d de Concepción.
INHIBIDOR ENDOCENO DE LA CMP-AcSIALICO: CER-LAC-SIALIL
TRANSFERASA (HEMATOSIDO SINTETASA) DE CÉREBRO DE RATA.
(Endogenous inhibitor of the CMP-Neu NAc: Lac Cer-Nacetylneuraminyl transferase of rat brain). Albarracín.
Lassaga, F.E. y Caputto, R.
Dto. riuímica Biológica, CIQUIBIC, Fac. C. Químicas,
Univ. Nacional de Cordoba, Argentina.
El sobrenadante de 100.000 x g de cérebro de rata inhi
be la actividad de hematãsido sintetasa de cérebro de
rata. El inhibidor fue purificado por los procedimentos siguientes: calentamiento, cromatografía de filtra
cion molecular y cromatografía de intercâmbio iãnico.
El material purificado, con una actividad específica de
170 veces mayor que el sobrenadante de 100.000 x g,
presenta una sola banda proteica por electroforesis en
gel de poliacrilamida sin SDS; cuando se corrio por
electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS se
desdoblo en dos bandas proteicas que migran con un peso molecular aparente de 15 y 22 Kd. Pierde parte de
su actividad inhibitoria por acciõn de enzimas proteolíticas (tripsina y quimotripsina). Presenta predomínio de aminoãcidos ácidos sobre aminoãcidos básicos
cuantificados por cromatografía líquida de alta presíõn. El material purificado presenta una inhibiciôn
de tipo no competitiva respecto a los sustratos dador
(CMP-ãcido siãlico) y aceptor (ceramida-lactosa).
R 169
A N A U S I S ELÍCTROKRETICO
VE UNA FITOHEUOAGLUTININA
AISLADA VE "MURT1LLA" ügni molinae
[MIRTACEA CHILENA]
lElectlophoietic
analytic
oi a phytohaemagglutinin
isolated
ilom "muJttitla" UgyU molÁmxe a Chilean
Uiltacea)
.
Alay,
F., Gavilán,
J.F., Gonzalez,
R., Cabello,
J. y
Almonacid,~W.
Vepaltamento
de Biologia
Moleculal,
Facultad
de CZenciai
Biolâgicat
y de Re.cu.iito/>
Natuiklet,
Untveuídad
de Concepciân.
Vloyecto
VÍC NZ0.S1.07.
La pietencia
de compuettot
quXmicoi
ca.pcLc.oA de
aglutinai
glõbulot
no jot
de veitebladot
ha tido
inioimada
pai numeiotot
autoiet.
Enfie
lai
aplicacionet
de eitoi
compuettot
ei notoiia
tu utilidad
en la
identiiicaciôn de glupot
tangutneot
humanot ABO, MW y H, dado que
te anen a deteiminantet
antigínicot
pietentet
en la
tupei{icie
de lot
eiitiocitoi,
lazõn
pol la cuãl lot
(>ítohemoaglatininai
dt tipo
etpeciíico
pueden t e i u t i l i zadai como maicadoiei
gen&ticoi.
ComunA.cacA.onei
pieviat
de nuettio
Laboiatoiio
kan et
tablecido
el piocedimiento
de extiacciõn
pana aJjtlai
tina iitohemoaglutinina
de. U. mollnae.
Tambiín
ie ha dei
clito
la capacidad
de aglutinai
entiociXot
humanai,
de.
latõn
{A.iviii)
y de otlai
etpeciet,
encontfutndoie
que
lai
3 iiaccLonet
ciomatúgiAlicat
analizadai
(1,11 ylI7)
leaccionan
potiXivamente
Ciente
a lot
muettAat
de
glóbuloi
lojot.
Eito paiece
indicai
la existência,
de una
panaglutinina.
El piei ente tAabajo
comunica
una nueva etapa en la
puiiiicaciân
dei compuetto
mediante
electiu
ioietit
de
loi
extiactot
cuudot
colectadoi
duiante
S metei
(tkwzo
a úctiíbie
de 19S5) y de lai
itaccíonet
I, II
III obtenidat
de cada uno de loi miimoi.
La electio
ioietit
te kizo
en gelei
de poliaclilamida
al S%, pH í , l ;
apli
cando 3m A/tubo,
tehidoi
con Amido Slack.
Loi
gelei
maettian
la pleiencia
de 1 banda en lai
inaccionet
I,
II y III, y de 2 bandat
en loi
extiactoi
cmdoi.
Eitoi
leiultadoi
ie diteuten
y ie lelacionan
con loi
ettablecidoi
paia loi
metei
de mayol actividad
aglutinante
de
la
iitohemoaglutinina.
TRYPANOSOMA CRUZI: EFECT0 VE LA GLUC0SA, EL OXIGENO V
VR0GAS SOBRE SU CRECIMIEWTO EW CULTIVO.
(Eêetò
oi
glucoie,
oxygen and diugi
on the cultuJie
giowth).
3oige
Aldunate,
Luit
ttunoz,
Lgol
Lipchenca,
Kimena t/ííóquez y Volanda
Repetto.
Vepaitamento
de Sioquímica.
Facultad
de Medicina.
Univeiiidad
de Chile.
Caiilla
700S6
Santiago
- 7
Chile.
El T. OUÍZÍ, piotozoo
cantante
de la en£eiinedad
de Chagai
et ponhle
de cuJttivai
en iu faoima epimattigote
en
mediot
líquidot
libiet
de cílulat.
En nuettlo
labolatotio
te cultiva
en medio Viamond'i,
que ei pobie
en
hidiatot
de caibono.
Fue nuettlo
inteiít
eitudixn
el e&ec
to de glucoia
tobie
lot
cultivot
tanto
en condicionei
~
aeiâbicai
y anaeiôbicai.
Ademát te adiciono
diogat
t>vLpanotomicidat
como nidultimox
y benznidazol
y
tuitanciat
antioxidantet
como el hidtioxianiiol
butilado
(BHA) y el
hixLloxitolueno
butilado
(BHT), que ion atado
en (,o;una ha
bitual
como aditiva
de alimentot.
~
El ciecimiento
de lot
cultivot
aumenta en un 400% al adicionaile
glucoia
al 0.251. Eite
inciemento
et
dependiente
de oxigeno,
puet no ie maniiietta
en
condicionei
anaeiâbicai.
Lai diogat
tlipanotomicidat
inhibieion
el
ciecimiento
de. lot
cultivot
a concentlacionet
iu-peiwlei
a 10 uM. El
enceto
de BHA y BUT tambiín
£ue ínhibitonÁa
a
concentia
cionet
tupeiioiet
a 100 uM, al mantenei
loi
cultivot
ih
pietencia
de oxigeno.
En cambio,
al agiegai
eitoi
anti
oxidantet
en condicionei
anaeiôbicai
no te maniiietta.
~
el eíecto
ínhibitoiio
dei ciecimiento.
Tal hecho,
colio
bola nuettiot
leiultadoi
pieviot
que BHA y BHT actúan
~
inhibiendo
la cadena letpiiatoiia
del T. cmzi
en
elteg
mento NAVH-citoclomo
b.
_
financiado
pol UNV?/WB/lilH0/TVR,
pol CONÍCYT-CHTLE
poi la Univeliidad
de Chile
giant
B-1S54.
y
R 170
E F E C T O DE E X T R A C T O S H I P O T A L A M I C O S EN R A T O N E S
T I M E C T O M I Z A D O S . (Effect of h y p o t h a l a m i c e x tracts on t h y m e c t o m i z e d m i c e ) .
A l f a r o , L. ,
H e n a , M. y E s q u i v e i , P. I n s t , de M e d i c i n a E x p e r i m e n t a l . U n i v e r s i d a d A u s t r a l de C h i l e .
El e f e c t o de e x t r a c t o s h i p o t a l ã m i c o s s o l u bles sobre la r e s p u e s t a i n m u n e a t i r o g l o b u l i na (Tg) h a sido r e c i e n t e m e n t e c o m u n i c a d o .
De
b i d o a que hay e v i d e n c i a s q u e en este s i s t e m a
e x i s t i r i a un eje de r e g u l a c i õ n en que e l or ga
no t a r g e t s e r i a e l tirao, se p r o p u s o a n a l i z a r
el rol q u e e s t o s e x t r a c t o s tienen en un m o d e lo en que el timo h a sido t e m p r a n a m e n t e r e m o vido.
R a t o n e s RK fueron timectoraizados a las
6 s e m a n a s de edad y a d i f e r e n t e s t i e m p o s post
t i m e c t o m i a r e c i b i e r o n un e x t r a c t o de h i p o t ã l a
mo s i n g e n e i c o .
P o s t e r i o r m e n t e fueron i n m u n i z&
dos con el m é t o d o s t a n d a r d de i n y e c c i o n de Tg
+ L P S . L a r e s p u e s t a i n m u n e c o n t r a Tg se d e t e r m i n o en las s e m a n a s s i g u i e n t e s .
Los resultados d e m u e s t r a n que a las 5 s e m a n a s p o s t - t i m e c tomia e l e x t r a c t o hipotalãraico induce u n a b u e na r e c u p e r a c i o n de la r e s p u e s t a , r e d u c i d a p o r
la t i m e c t o m i a .
Sin e m b a r g o , a las 24 s e m a n a s
post t i m e c t o m i a el a n i m a l t i m e c t o m i z a d o r e c u p e r a e s p o n t a n e a m e n t e su n i v e l de r e s p u e s t a n o r
m a l an ti T g , la cual es d r a s t i c a m e n t e s u p r i m i da a l i n y e c t a r e l e x t r a c t o h i p o t a l ã m i c o . Situa
cion s i m i l a r a u n q u e con d i f e r e n c i a s de t í t u l o
m u c h o m a s s i g n i f i c a t i v a s se o b s e r v a a las 38
seman as p o s t - t i m e c t o m x a .
Los resultados p r e s e n t a d o s p u e d e n i n t e r p r e t a r s e en e l s e n t i d o de
tener en e l e x t r a c t o h i p o t a l ã m i c o f a c t o r e s e s t i m u l a d o r e s o s u p r e s o r e s d e p e n d i e n d o su e x p r e siõn de la p r e s e n c i a o a u s ê n c i a de c é l u l a s t í micas.
(Parcialmente financiado por Proyectos
FONDECYT 1070/85 y DID-UACH S - 8 4 - 0 8 ) .
EXPRESION DE LA SUBUNIDAD 200K DEL NEUROFILAMENTO
DURANTE LA MADURACION NEURONAL (Expression of the
200K neurofilament subunit during neuronal matura t i o n ) . Allende, M., Cross, D. y Krauss, R. Grupo d e
Neurobiologia Molecular, P. Universidad Católica d e
Chile, Santiago. (Patrocinio: G. R u i z ) .
Los neurofilamentos (NF) son elementos fibrila res de la neurona los cuales son transportados por
flujo axonal y están constituídos por 3 subunidades
( 6 8 - 1 6 0 - 2 0 0 K ) . De estas, la mayor, presenta un inte
rés especial debido a que su localización es exclusivamente axonal. Por lo tanto, hemos decidido usar
la como marcador de la diferenciación neuronal.
Para estudiar el NF hemos preparado un anticuer
po anti-subunidad 200K el cual fue generado usando
como inmunógeno, la subunidad respectiva purificada
por electroforesis preparativa, a partir de medula
de bovino. El suero obtenido que fue caracterizado
por ELISA y Western blotting presenta un título de
2
para la subunidad de 200K y de 2 " para la de
1 6 O K . Para cuantificar pequenas cantidades d e NF
(20-^0 ng) a partir de homogenizados de tejido neu ral, se desarrolló un "dot-blot immunobinding
assay". Con este método más el Western blotting, se
ha establecido: (1) la abundância relativa del NF
en distintas regiones dei cérebro de rata y (2) la
biosíntesis del NF axonal, en oocitos de Xenopus inyectados con mRNA cerebral obtenido de ratas adul tas .
En trabajos futuros se analizará la aparición
del NF y de su mRNA durante el desarrolló postnatal
de rata en condiciones normales y en animales que
presentan alteraciones de maduración neuronal.
Financiado por proyectos Stiftung Vokswagenwerk y
DIUC ( 8 7 / 8 5 ) a los Drs. J. Alvarez y N.C. Inestrosa
DIS0CIACI0N DE LAS RESPUESTAS DE PR0LIFERACION Y CRECIMISNT0 HIPERTR0FIC0 EN GLÂNDULA PAR0TIDA DE RATON.
(Dissociation of proliferation and hypertrofic growth
responses in mouse parotid gland). Alliende, C. y
Díaz B6rquez H. Depto. Biologia Celular y Genética
Div. Norte y Depto. Cs. Med. Biol, y Básicas Div. Sur
Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
PERDIDA DE P0TASI0 AS0CIADA A CAMBIO DE FORMA
CELULAR EN ERITK0CIT0S HUMANOS.(Potassium loss
associated to cell shape change in human erythrocytes). Alyarado,V., Sanchez.V. y Behn.C.
Depto.Fisiologia Normal y Patológica,Fac.Med.,
Universidad de Valparaiso y Depto. Fisiologia
y Biofísica,Pac.Med..Universidad de Chile.
La administraciõn intraperitoneal de una dosis farmacolôgica de isoproterenol a ratones provoca
simultaneamente proliferaciôn celular y crecimiento
hipertrófico en par&tidas de rat6n. El análisis de
los eventos moleculares diferencialmente asociados
a estas dos respuestas precisa de su disociaciÔn experimental. Este trabajo tuvo como objeto abordar
esta disociaciôn mediante la evaluaci6n de a ) umbrales de respuesta, b) desfase en el cese de ambas respuestas y c) reinducciôn diferencial en glândulas h i pertrofiadas en regresiôn. La respuesta de crecimien
to celular y glandular fue medida por métodos gravimétricos y por estereometría de células acinares. La
respuesta proliferativa fue medida por incorporaci&n
de ^H-timidina y valoraciôn de los índices de marca—
cion y mitôtico. La diferencia de umbrales observada, el cese diferido de ambas respuestas y el efecto
diferencial provocado por la reestimulaciÔn de glândulas bipertrôficas en regresiôn, indican que proliferation y crecimiento son fenômenos disociables en
Ias glândulas parôtidas estimuladas por isoproterenol,
Eritrocitos periperfundidos con solución salina
(pH7.4 pCa8,6) responden al antibi&tico clorotetraciclina (CTC) adoptando una forma estomatocitica (videomicroscopia) y perdiendo K (fotometria de llama). Se examina la relaciôn entre ambos efectos influenciàndolos separadamente .
La salida de K por efecto de CTC (0,1 , 0,5 y
1,0 mM) en pCa 3,2 y pCa 8,6 fue 0,02 y 0,02
umol/min , 0,03 y 0,12 jimol/min y 0,04 y 0,16
ûnol/min respectivamente (n=6 en cada condicion). En pCa 3,2 la falta de salida de K en
respuesta a CTC coincide con un efecto equinocitogênico dei antibiótico en estas condiciones. El tratamiento prévio de los eritrocitos
con glutaraldehido (0,02% v/v,120 min) previene la estomatocitosis y la perdida de K inducLclaB
por ÇTC ( 0 , 5 mM) en pCa 8,6. Ambos efectos de
CTC tambien ocurren en respuesta al análogo demetilclorotetraciclina(0,5 m M ) . Tetraciclina,
en cambio,no tiene efecto alguno.
A23187 (0,01 m M ) provoca una salida de K que es
mayor en pCa 3,2 que en pCa 8,6. Quinina (0,01
mM) no impide la salida de K ni la estomatocitosis inducida por CTC ( 0 , 5 m M ) . A 17, 27 y
37 C la salida de K inducida por CTC ( 0 , 5 m M )
en pCa 8,6 fue 0,03 , 0,08 y 0,12 umol/min respectivamente.
La salida de K inducida por CTC no corresponde
a un efecto Gârdos. Su bloqueo mediante diferentes procedimientos que impiden la estomatocitosis implica un rol causai de ésta.DICT, DIB.
1
(Proyectos B-2366/8613 Universidad de Chile y Proyecto FONDECYT).
R 171
CALIBRES Y MICROTUBULOS D E AXONES PERIFÉRICOS
EN LA R A T A D E S N U T R I D A D U R A N T E EL D E S A R R O L L O .
( C a l i b e r s and m i c r o t u b u l e s o f p e r i p h e r a l a x o n s
o f the d e v e l o p i n g r a t ) . A l v a r e z , J. y C o r d e r o
M.E.
L a b . N e u r o c i t o l o g i a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó lica y D e p . C i ê n c i a s B á s i c a s , F a c u l t a d d e M e d i cina, Universidad de Chile, Santiago, Chile.
G R U P O S S U L F H I D R I L O S EN LA D E S C A R B O X I L AS A DIFOS^
F O M E V A L O N I C A DE H I G A D O D E P O L L O . ( S u l f h y d r y l
g r o u p s in m e v a l o n a t e d i p h o s p h a t e d e c a r b o x y l a s e
of a v i a n l i v e r ) . A l v e a r , M . , J a b a l q u i n t o , A.M.
y C a r d e m i l , E. D e p a r t a m e n t o de Q u í m i c a , F a c u l tad de C i ê n c i a , U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de Ch i^
le .
El e m p a c a m i e n t o d e los m i c r o t ú b u l o s (MTs)
a x o n a l e s s e c o r r e l a c i o n a i n v e r s a m e n t e c o n el
c a l i b r e d e la f i b r a n e r v i o s a .
Esta c o r r e l a c i ò n
n o se a f e c t a p o r el d e s a r r o l l o , r e g e n e r a c i ó n ,
d i a b e t e s , e t c . E s t u d i a m o s el e f e c t o d e la d e s n u t r i c i ó n d u r a n t e el d e s a r r o l l o s o b r e el c a l i b r e y los M T s e n l a f i b r a p e r i f é r i c a Las ratas t u v i e r o n u n a r e s t r i c c i ó n a l i m e n t a r i a q u e s e
p r o l o n g o h a s t a el s a c r i f í c i o , a los d o s m e s e s .
El p e s o (106 g) e r a m e n o s d e i 5 0 % d e l c o n t r o l .
Los axones m i e l i n i c o s del nervio sural tenían
u n e s p e c t r o d e c a l i b r e s s e m e j a n t e al d e l o s
controles.
L a d e n s i d a d d e M T s fue d e 2 3 - 6
MT/um
en a x o n e s d e 3 ;um, la q u e n o d i f e r i a e s t a d í s t i c a m e n t e dei v a l o r c o n t r o l ( 2 6 - 9 ) .
En
a x o n e s a m i e l i n i c o s , el á r e a (0.34 jm )
fue m e n o r ( p < 0 . 0 l ) q u e e n i a s r a t a s c o n t r o l e s (0.47
^jim ).
H a b i a u n d e s p l a z a m i e n t o simple, h a c i a la
i z q u i e r d a , d e l e s p e c t r o d e c a l i b r e s d e la r a t a
desnutrida.
S i n e m b a r g o , la c o r r e l a c i ò n c a l i b r e v s densidad d e M T s era c o m p a r a b l e a la dei
axón n o r m a l .
Se sabe que la d e s c a r b o x i l a s a d i f o s f o m e v a
l ó n i c a de h í g a d o de polio no r e q u i e r e de redu £
tores de g r u p o s s u l f h i d r i l o s p a r a su a c t i v i d a d
o e s t a b i l i d a d . Sin e m b a r g o , e x p e r i m e n t o s reali
zados con r e a c t i v o s e s p e c í f i c o s para g r u p o s
s u l f h i d r i l o s ( r e a c t i v o s de E l l m a n ( D T N B ) y m e t i l m e t a n o t i o s u l f o n a t o ( M M T S ) i n d i c a n que la en
zima es i n a c t i v a d a por b a j a s c o n c e n t r a c i o n e s
de e s t o s r e a c t i v o s , lo que h a c e i n t e r e s a n t è su
estúdio.
M M T S i n a c t i v a a la e n z i m a s i g u i e n d o una
c i n é t i c a de p s e u d o - p r i m e r o r d e n en el rango de
c o n c e n t r a c i o n e s e n s a y a d a s , i n d i c a n d o una r e a c ciõn i r r e v e r s i b l e e n t r e la e n z i m a y 2 m o l é c u l a s
de m o d i f i c a d o r . T a n t o ATP como M V A P P p r o t e g e n
de la i n a c t i v a c i ó n y en a m b o s c a s o s se o b s e r v a
que la p r o t e c c i ó n e j e r c i d a por la p r e s e n c i a com
b i n a d a de s u s t r a t o y M g
es m e n o r . La e n z i m a
p a r c i a l m e n t e m o d i f i c a d a no p r e s e n t a v a r i a c i õ n
en las Km a p a r e n t e s para los dos s u s t r a t o s . Se
d e t e r m i n o la c o n s t a n t e de d i s o c i a c i ó n para el
c o m p l e j o enz ima-ATP (1,81 x 1 0 " ^ M ) y el pKa de
los g r u p o s r e a c t i v o s ( 7 , 3 ) .
2
2
2
C o n c l u í m o s q u e la d e s n u t r i c i ó n d u r a n t e el
d e s a r r o l l o afecta los calibres d e axones amiel i n i c o s p e r o n o a f e c t a a p a r e n t e m e n t e la o r g a n i zación interna dei axoplasma.
Los axones m i e l i n i c o s no e s t a r i a n a f e c t a d o s .
ACTIVACION DE DROGAS HIPOLIPIDEMICAS A ACIL-COENZIMÜ A
TIOESTERES
(Activation
of hapolipidemic druas to
acal-coenzime
A
thioeste rs>
A»ião»L.fBronfman»H»
Departamento de Bioloáia Celular*Facultad de Ciências
BiolódicastP.Universidad Católica de Chile*
La mayor ia de Ias drodas hipolipidémicas aue
inducen
proliferaciOn
peroxisomal
son
ácidos
carhoxilicos o contienen árupos aue* en la célula son
transformados a ácidos carboxilicos.
Con el fin de
estudiar la posibilidad aue estas drodas sean activadas
a derivados acil-CoA» microsomes de hidado de rata se
incubaron con Ciprofibrato»Nafenopin ó ácido Clofibrico
en la presencia de ATP a CoASH» a los productos de la
reacción se separaron por HPLC» Para Ias tres d rodas
eapleadasf
a solo con la mezcla de reacción completa*
se formaron compuestos can las características de un
tioéster de CoASH.
El orden de reactividad de 1 as
d rodes usadas fue
í
CiprofibratoíNafenopin!ácido
Cl of íbrico=75íl2U.
La
actividad de la acil-CoA
sintetasa microsomal con respecto a Ciprofibrato fue
alta (0.1-0.2 unidades/sr hidado), El espectro UV dei
derivado formado y de sus productos de hidrólisis
alcaline»
indican aue el compuesto es un derivado
acil-CoA tioéster de la droda.
En base a estos datas»
se propone la siduiente
bipótesis sobre el modo de acción de estas drodas* los
derivados aci1-CoA de compuestos hipolipidémicos son
sus
espécies
farmacolodicamente
activas y» como
anélodos de los sustratos naturales pueden
interferir
con las diversas reacciones aue* en la célula usan
acil-CoAs» ya sea como sustrato o coma modulador.
(Financiado por proyecto DIUC 82/8A)
+ +
E x p e r i m e n t o s p r e l i m i n a r e s con r e a c t i v o s e £
p e c í f i c o s p a r a d i t i o l e s v e c i n a l e s i n d i c a n que
la e n z i m a es i n a c t i v a d a por e s t o s .
E s t o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n la p r e s e n c i a de
al m e n o s 2 g r u p o s s u l f h i d r i l o s en o c e r c a dei
sitio de u n i ó n de los s u s t r a t o s a la e n z i m a ,
los que p o d r í a n c o r r e s p o n d e r a un d i t i o l v e c i nal.
F i n a n c i a d o por U S A C H y F o n d o N a c i o n a l de Ciência.
ALBUHINA SERICA DE CARPAiPURIFICACION POR CROHATOGRAFIA
DE AFINIDAD Y CARACTERIZACIDN.
(Carp serum albumin:
Affinity chromatography purification and characterizaion). R.Aathmumr.instituto de Bioquímica, Facultad de
Ciências, Universidad
Austral de Chile.
Valdivia,
Chile. (Patrocínio de M.Krauskopf.).
En el pez Cyprinus
Ckrpio
se ha encontrado que la
albumina sérica decrece significativamente en invierno.
Estúdios en hepatocitos aisi ados de car pa
demuestran
que tanto la cantidad como el tipo de proteínas que se
sintetizan var í an estacionalmente. Estos antecedentes
nos han 1 levado a seleccionar
a albúmina como un
posible
marcador
de
expresián
gènica
durante
aclimatación. Para contar con herramientas que nos
per*i tan estudiar su gen y expresiôn hemos ai si ado y
caracterizado esta proteína.
Para purificar la albúmina a partir de plasma de
carpa hemos optinizado una técnica cromatografíca de
afinidad en Cibacron
blue-sephirose,
con una elución
por afinidad utilizando ácido
8-anilino-l-naftaleno
sulfónico. Mediante esta metódica, se logra purificar
en una sola etapa la proteína con un alto rendímiento y
grado de pureza. El peso molecular determinado por
electroforesis en condiciones nativas
resulta
de
106,000. En geles de poliacri1 amida-SDS muestra dos
cadenas polipeptidicas de pesos moleculares 24.500 y
11.000 respectivamente. En ambas cadenas, purificadas
por electroforesis en
geles de poliacrilamida
SDS
y posterior electroelución, sus grupos N terminales se
encuentran bloqueados.
La composi ci ón aminoacidica
determinada después de hidrólisis en HC1 6 N, revela
que tanto la proteína nativa como sus cadenas son ricas
en ácido glutáiúco, lisina y leucina. Cisteína no pudo
ser detectada aún cuando la proteína fue oxidada con
ácido perfórmico prévio a la hidrólisis.
La proteína aislada, se diferencia de todas Ias
albúminas
descritas
en
el
número
de
cadenas
polipeptidicas, elevado peso molecular y ausência de
cisteína. Proyectos RS-83-52 D1UACH, 1042/85 FQNDECYT
y OEA.)
R 172
srnos D E U N I C N D E
L - T D E MEMBRANAS DE ERITROCITOS DE RATA.
(Isolation and characterization of L-T, binding sites
on membranes frcm rat erythrocytes). Angel, R., Botta,
J^, Morero, R.D., y Farias, R.N.
A i s u t o E M i t ) y ORACTERIZACICN DE
Departamento Bioquímica Nutritional. INSIBIO (CXMICETUNT). Instituto de Química Biológica. Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia.U.N.T. Chacabuco 461 -4000
San Miguel de Tucumin.
Conunicacionss previas de nuestro laboratório demostrarem la presencia de si tios de union para L-T en
membranas de eritrocitos de ratas, que se comportaBan
como proteínas integrales de membrana. En el presente
trabajo tales sítios de union fueron solubilizados por
detergentes, purificados por cromatografía de aflnidad
y su peso molecular determinado por electroforesis en
geles de poliacrilamida y oolumnas de filtracióh molecular.
Sitios de union para L-T- de membranas de eritrocitos de ratas obtenidas par el mgtodo de Dodge, lavadas con EDTA 2 mM pH 11, fueron solubilizados con lauril sarcosina o CHAPS con una carcentraciôn final de 8
y 5 mM respectivamente. Las preparaciones fueron centrifugadas 80.000 xg durante 1 h a 4°C y los sobrenadantes se pasaron por una columna de aflnidad de CH-Se
pharosa 4B - T . Los sitios de union se eluyeron oon
L-T, 10-6 M. lis fracciones activas se diaHTarem oontraTxiffer fosfato 10 mM pH 7.6 a 4°C y luego se liofi
lizaron. Aproximadamente 1 mg de proteína fue abtenida
de 1 g de proteína de membrana de glóbulos rojos.
El material actlvo purificado eluyâ por una colum
na de Sephadex G-200 como una proteína globular con pa
so molecular aparente de 60.000. Análisis de electrofõ
resis en placas de geles de poliacrilamlda en S D S revelarem la presencia de dos bandas mayoritarias de pro
teínas de peso moleculares 55.000 y 66.000.
DISTRIBUTION ESPACIAL Y ESTRUCTURA DE LOS SISTEMAS DE
GALERIAS DE CTENOMYS MAULINUS BRUNNEUS (RODENTIA, CTENOMYDAE). (Spatial distribution and burrow system
structure of Ctenomys maulinus brunneus (Rodentia.Ctenomyidae). Anrique.J.A y Gallardo,M.H. Instituto de
Ecologia y EvoTución, Universidad Austral de Chile,
Valdivia.
Los roedores subterrâneos mantienen sistemas de galerias discretas que facilitan el estúdio de sus âmbitos de hogar y distribuciôn
El presente estúdio se realizo en Lonquimay, entre
Enero y Marzo de 1986, confeccionândose para ello un
retículo de 50x70 m . La distribuciôn de los animales
se analizô por el método de distancia al vecino más
próximo. La arquitectura y configuración de Ias cuevas
se examino por exeavación a mano de los sistemas de ga
lerías de cuatro machos y dos hembras.
Se encontro que en los 23 animales capturados
(d=0.0062/m ) la relaciôn de sexos es 1:1 y que la mayoría de la muestra está compuesta por animales adul tos. El tamafio de la camada es de 2.85. Las galerias
son de trayectoria longitudinal, con muchas ramifica ciones laterales. Se capturaron machos y hembras en
una misma boca. Las exeavaciones evidenciaron mayor nú
mero de animales que de nidos.
Los análisis de distribuciôn muestran desviación
dei azar (P<0.05), con tendência al espaciamiento.
Los animales son agresivos y solitários, sin embargo,
en la época reproduetiva practicarían monogamia seriada que se infiere por el hallazgo de nidos compartidos
Las colônias no son densas, probablemente debido a que
la vegetación es el factor limitante.
2
2
(Financiado por Proyecto S-85-17, D.I.D., U.A.Ch.)
VACIAMIENTO GÁSTRICO EN PERROS, RELACION CON LA PRESION
INTRAGASTRICA. (Gastric emptying in dogs relationship
to intragastric pressure). AnRelo S., Solari J., Defili
ppi C. Departamento de Fisiologia y Biofísica, Facultad
de Medicina, Universidad de Chile.
El vaciamiento gástrico (VG) es un fenômeno complejo
que involucra distintos mecanismos tanto para líquidos
como para sólidos. La velocidad de (VG) de los líquidos
es modificada por la osmolaridad y la acidez de Ias solu
ciones. Los mecanismos que intervienen en este fenômeno
no están bien establecidos; se postula que serían de im
portancia: la presiõn intragãstrica (PIG) proximal y la
resistência anivel antropilórico y duodenal.
En 6 perros con cãnula gástrica y duodenal se estúdio
el (VG) de 350 ml, de HC1 80 mM, glucosa 850 mM comparan
do con NaCl 154 mM. El (VG) se estima mídiendo el volumen remanente en el estômago a los 10 minutos. Simultaneamente se registro la (PIG) proximal mediante un balõn
de polietileno y la presiõn intraduodenal mediante un
sistema de catêteres perfundidos.
El volumen remanente de NaCl 154 mM fue significativa
mente menor que el de Ias otras soluciones. Con NaCl
154 mM se observa una relaciõn lineal inversa entre la
PIG proximal y el volumen remanente, fenômeno que no se
observa con las otras soluciones.
Se concluye que el (VG) de NaCl isotónico está regula_
do por la (PIG) proximal y que soluciones ácidas e hipej:
osmõticas reducen la velocidad de (VG) por un mecanismo
independiente de la (PIG) proximal.
Financiado por Proyecto M 1353-865 F, D.l.B. Universidad de Chile.
E F E C T O DE F 0 S F 0 L I P I D 0 S Y P 0 L I L I S I N A SOBRE L A A C T I V I D A D
DE L A A D E N I L A T 0 C I C L A S A DE MEMBRANAS DE 0 0 C I T 0 S DE
laevis.
( E f f e c t o f p h o s p h o l i p i d s and p o l y l y s i n e on t h e
a c t i v i t y o f membrane-bound a d e n y l a t e c y c l a s e o f amphibian o o c y t e s . )
A n t o n e l l i , M. y A l l e n d e , J . E . D e p t o .
de B i o q u í m i c a , F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v . de C h i l e .
La i n d u c c i o n de l a m a d u r a c i o n m e i o t i c a de o o c i t o s de
a n f í b i o p o r p r o g e s t e r o n a i n v o l u c r a l a i n h i b i c i ó h de l a
a d e n i l a t o c i c l a s a ( A C ) de l a membrana de e s t a s c é l u l a s
por la progesterona.
Esta inhibicldn,
adema's d e s e r
n o v e d o s a p o r r e p r e s e n t a r el p r i m e r e j e m p l o de una a c cio'n de una hormona e s t e r o l d a l
sobre el sistema del
cAMP, e s t a m b i e n de i n t e r e s pues no esta* mediada p o r l a
subunidad r e g u l a t o r i a
N-j q u e p a r t i c i p a
en todas l a s
otras
inhibiciones
hormonales de a d e n i l a t o
ciclasa.
Hemos p r o b a d o e l e f e c t o d e a s o l e c t i n a , u n a c o m b i n a c i o ' n
de f o s f o l f p i d o s de f r i j o l de s o y a , s o b r e l a a c t i v i d a d
de l a a d e n i l a t o c i c l a s a .
La a s o l e c t i n a
(0,5 mg/ml)
p r o d u c e una l e v e p e r o r e p r o d u c i b l e e s t i m u l a c i o ' n de l a
a c t i v i d a d d e l a AC m e d i d a e n p r e s e n c i a d e G p p ( N H ) p .
S i n e m b a r g o , e l e f e c t o m i s i m p o r t a n t e de e s t e f o s f o l f p i d o e s u n a r e d u c c i o ' n muy s i g n i f i c a t i v a d e l a
inhibid i n d e l a AC p o r p r o g e s t e r o n a .
E s t a r e d u c c i o n no se
d e b e a un s e c u e s t r o d e l a p r o g e s t e r o n a p o r e l f o s f o l f p i d o , pues una c o n c e n t r a c i o ' n s i m i l a r de a s o l e c t i n a no
i m p i d e que p r o g e s t e r o n a g a t i l l e l a maduracio'n de l o s
oocitos.
Se p o s t u l a q u e l a a s o l e c t i n a f a c i l i t a l a a c t i v a c i o n de l a subunidad c a t a l f t i c a por N .
Polilisina
a f e c t a a v a r i a s e n z i m a s p r e s e n t e s en l a membrana de o o citos: protefnas quinasas, f o s f a t l d i l i n o s i t o l
quinasas
y f o s f o d i e s t e r a s a s de n u c l e d t i d o s c í c l i c o s .
Tambien
afecta a la adenilato ciclasa.
C o n c e n t r a c i o n e s d e 10
uM - 50 uM d e p o l i l i s i n a a c t l v a n a l a a d e n i l a t o c i c l a s a
m e d i d a e n p r e s e n c i a d e 10 mM F " , p e r o c o n c e n t r a c i o n e s
mayores son i n h i b i t o r i a s .
Al usar Gpp(NH)p se obtiene
un e f e c t o s i m i l a r .
La p o l i l i s i n a no a f e c t a l a i n h i b i c i ó h d e AC c a u s a d a p o r p r o g e s t e r o n a .
[ E s t e t r a b a j o r e c i b i o ' apoyo del D I B de l a U n i v e r s i d a d
d e C h i l e y de l a 0EA.1
s
R 173
DETECCION DE CANCERÍGENOS QUÍMICOS MEDIANTE
CULTIVO DE CÉLULAS DE
LIQUIDO
AMNIOTICO.
( D e t e c t i o n of
Chemical
carcinogens
in
human
a m n i o t i c f l u i d c e l l s ) . A r a n d a , M., A g u i r r e ,
S.
y S a l a s , C. D e p a r t a m e n t o d e
Ciências
Básicas,
Escuela Tecnológica y Departamento de Quimica y
Bioquímica, Facultad de Ciência, Universidad de
Santiago de Chile.
Diversas estratégias se nan
desarrollado
para
identificar sustancias potencialmente cancerige
nas.
Los
métodos
mas
comunes
van
de
la
deteccion
de
revertantes
en
procariotes,
induccion de bacteriofagos,
transformacion
de
c é l u l a s e u c a r i o n t e s in v i t r o a
inoculacion
en
animales.
La
mayoria
de
estos
analisis
se
r e a l i z a n en c é l u l a s n o
humanas,
limitando
la
v a l i d e z d e los r e s u l t a d o s .
Hemos iniciado un estúdio con
células
fetales
h u m a n a s c o m o a l t e r n a t i v a p a r a la
deteccion
de
sustancias con poder transformante. Células
de
liquido amniotico humano de
cariotipo
normal,
fueron
morfologicamente
transformadas
con
compuestos quimicos cancerígenos d e
referencia
(acetamidofluoreno, benzo-a-pireno, 2-hidroxi
b e n z o - a - p i r e n o ) la e s t i m a c i o n d e la t r a n s f o r m a
c i o n s e e v a l u o en a g a r
semisolido.
El
efecto
citotoxico, LC50 dei
cancerigeno,se
determino
m e d i a n t e la e f i c i ê n c i a d e f o r m a c i o n d e c o l ô n i a s
e n m e d i o H a m m a s s u e r o f e t a l al 2 0 %.
En
este
e s t ú d i o s e c o m p a r o la
tasa
de
crecimiento
y
f o r m a c i o n d e c o l ô n i a s en u n m e d i o c o n 5 y 2 0
%
de
suero,
la
densidad
de
saturacion,
el
c a r i o t i p o y la a c t i v i d a d g a m m a - g l u t a m i l t r a n s p e p
t i d a s a en
células
tratadas
con
cancerigenos
quimicos y células controles.
CARACTERÍSTICAS FARMMODOGICAS DE RECEPTORES PARA AMINOÃCIDOS EXCITATORIOS EN SUBSTANCIA NIGRA D E CÉREBRO DE
RATA. (Pharmacological characteristics of receptors for
excitatory aminoacids in the rat brain substantia nigra) . Araneda, R.A. y Bustos, G. Laboratório d e Farmacologia Bioquímica, P. Universidad Católica d e Chile.
Estúdios realizados en nuestro laboratório han indicado la existência d e terminales nervioscs que captan y
liberan aminoãcidos excitatorios a nivel d e la substancia nigra (SN) . En base a esto, hemos decidido estudiar la existência de receptores para estos aminoãcidos
y su posible interaccióh con neuronas dopaminérgicas ni
grales.
Cortes d e SN se incubaron con ^H-Dopamina (DA) y se
superfundieron con solución Krebs-Ringer-Fosfato. Solo
en condiciones d e superfusión en las que se omiti6 el
ion Mg+2 del medio, agonistas como el L-Glutámico y N metil-D-aspartico (NM3A) a una concentracióh d e 100 pM,
estimularon marcadamente la liberacióh d e DA. El efecto
producido por NMDA fue dependiente d e C a
y antagonizado por 2-amino-5-fosfonovalérico (APV) y por tetrodotoxina. Esto último sugiere la participacion d e una
intemeurcna, al respecto, glicina estimulo la liberación d e DA, tanto en ausência como en presencia de Mg+2
y este efecto fue antagonizado por estricnina y APV.
+ 2
Estos resultados sugieren la existência d e receptores del tipo NMDA a nivel d e la SN. La activación d e
estos receptores resulta en un aumento en la liberacióh
d e DA desde las dendritas d e las neuronas dopaminérgicas
nigrales. Parte d e este efecto seria mediado por una
intemeurona d e tipo glicinérgico.
Financiado por Grant 1182/85 Fondecyt
Financiado por DICYT, proyecto
10-85-74AL
C Â M B I O S C O N F O R M A C I O N A L E S EN P R E A L B Ú M I N A I N D U C I D O S POR T I R O X I N A . ( T h y r o x i n e - i n d u c e d c o n f o r
m a t i o n a l c h a n g e s in p r e a l b u m i n ) . A r a v a , R.,
Paladinij A.* y G o n z a l e z , G. Instituto d e Qui
m i c a , U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e V a l p a r a i s o , ChT
le e I N G E B I , B u e n o s A i r e s , A r g e n t i n a . '
La h o r m o n a t i r o x i n a e s t r a n s p o r t a d a e n la
s a n g r e p o r la p r o t e i n a p l a s m á t i c a p r e a l b ú m i n a
de peso molecular 55.000 y compuesta por c u a tro s u b u n i d a d e s i g u a l e s .
La p r o t e í n a t i e n e
dos sitios de union de tiroxina con c o n s t a n t e s d e a s o c i a c i ó n d e 1,05 x 1 0
M l y 9,55 x
10 5 M - l .
A u n q u e los dos sitios son e s t r u c t u
r a l m e n t e i d ê n t i c o s la d i f e r e n c i a e n l a s c o n s tantes de union parece implicar una cooperati
vidad negativa entre e l l o s , que resultaria en
un c a m b i o c o n f o r m a c i o n a l e n la p r o t e i n a al
u n i r s e la t i r o x i n a al s i t i o d e m a y o r a f i n i d a d ,
t r a n s f o r m a n d o al o t r o s i t i o e n m e n o s a c c e s i ble.
Experimentos efectuados con prealbúmina
marcada c o n el fluoróforo N - i o d o a c e t i l - N - ( 5 sulfo-l-naftil) etilendiamina (AEDANS) mostra
r o n q u e la u n i o n d e l p r i m e r m o l d e t i r o x i n a
p r o d u c e un c a m b i o c o n f o r m a c i o n a l d e t e c t a d o
por una d i s m i n u c i ó n del r e n d i m i e n t o c u á n t i c o
y p o r un c o r r i m i e n t o h a c i a el r o j o e n la e m i
sión del f l u o r ó f o r o .
Este c a m b i o t a m b i é n se
d e t e c t o p o r un a p a g a m i e n t o e n la e m i s i ó n d e i
fluoróforo en presencia de acrilamida.
Los
experimentos de polarización de fluorescenc i a en f u n c i ó n d e la v i s c o s i d a d d e l m e d i o
m o s t r a r o n q u e la u n i ó n d e la t i r o x i n a p r o d u c e u n a d i s m i n u c i ó n e n el v o l u m e n d e la p r o teína.
Los r e s u l t a d o s d e e s t a i n v e s t i g a c i ó n
s u g i e r e n un c a m b i o c o n f o r m a c i o n a l en la p r e a l
b ú m i n a al u n i r s e a e l l a el l i g a n d o t i r o x i n a .
8
_
-
E S T Ú D I O CONFORMACIONAL DE P R O T E Í N A S NO C R I S T A L I Z A B L E S .
E L CASO DE C L U P E I N A Y I I .
(Conformational study of noncrystal lizable proteins.
The case o f Clupein Y I I ) .
A r e l l a n o A . , B e r a t t o V . , C a n a l e s M . , L l a r e n a A . L a b , de
P r o t e í n a s , F a c u l t a d de C i ê n c i a s , U . de C o n c e p c i ó n .
B r u n e t J . E . , J u l l i a n C . , I n s t i t u t o de Q u í m i c a , U . Cato
l i c a de V a l p a r a i s o .
La e s t r u c t u r a de l a s p r o t a m i n a s
-proteínas básicas
de b a j o peso m o l e c u l a r que se e n c u e n t r a n a s o c i a d a s
con
e l DNA e n e l n ú c l e o d e l e s p e r m a t o z o i d e no e s t á d i l u c i
dada d e b i d o a que no h a n p o d i d o s e r c r i s t a l i z a d a
hasta
ahora.
B a s a d o s e n t r a b a j o s de p r e d i c c i ó n de e s t r u c t u r a s e c u n d a r i a , hemos d e s c r i t o q u e l a m o l é c u l a de C l u p e í n a Y I I
posee
4 B-turns i n t e r c a l a d a s en zonas al a z a r .
Estas
e s t r u c t u r a s deben c o n f e r i r a l a m o l é c u l a una c o n f o r m a - ción globular.
E s t ú d i o s de d e p o l a r i z a c i ó n de f l ú o r e s - c e n c i a con C l u p e í n a Y I I marcada c o n F I T C , han demostrado q u e l a m o l é c u l a e f e c t i v ã m e n t e p o s e e e s t r u c t u r a e s f é r i c a , c o n d i â m e t r o d e 23 A .
E x p e r i m e n t o s de c o n d e n s a c i ó n de C l u p e í n a Y I I v i a c a r
b o d i i m i d a han demostrado, ademãs, que e l e x t r e m o N - t e r m i n a l y e l e x t r e m o C - t e r m i n a l e s t á n muy p r ó x i m o s .
Basados e n e s t a s e v i d e n c i a s t e ó r i c a s y e x p e r i m e n t a l e s , hemos c o n s t r u í d o u n m o d e l o d e K e n d r e w , e n e l c u a l
hemos m e d i d o c o o r d e n a d a s a t ô m i c a s e i n i c i a d o
con e l l a s
un e s t ú d i o c o m p u t a c i o n a l d e m i n i m i z a c i ó n de e n e r g i a b a s a d o e n l a c o n t r i b u c i ó n e l e c t r o s t á t i c a , de v a n d e r W a a l s
y d e e n l a c e s h i d r ó g e n o ; d e modo d e p o d e r e v a l u a r l a con^
f i g u r a c i ó n de l a c a d e n a p o l i p e p t í d i c a e n t o r n o a I a s
B-turns predichas.
P r o y e c t o ( 2 0 . 1 3 . 4 1 ) D i r e c c i ó n de I n v e s t i g a c i ó n , U .
de C o n c e p c i ó n y P r o y e c t o FONDECYT 5041/85.
R 174
CLONADO MOLECULAR Y SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS DEL GEN DE
STREPTAVIDINA. (Molecular cloning and nucleotide sequence of the streptavidin gene) Argarafia Ç-E ., Kuntz,
I.D., Birken, _S_., Axel, R. y Cantor, C.R.
Department of Genetics and Development, College of Physicians and Surgeons, Columbia University. New York,
Estados Unidos.
C A R A C T E R I Z A C I O N U L T R A E S T R U C T U R A L DEL TUMOR
V E N E R E O TRANSMISIBLE (TVT) CANINO .(U11ras t r u c t u r a l c h a r a c t e r i z a t i o n of c a n i n e T V T ) .
A r i a s , J . L . .Vivanco.E.,G rudsky,R.,Rivas,V.
L a b .Biologia C e l u l a r , D e p t o . C i ê n c i a s B i o l ó gicas Animales,Fac.Ciências Veterinárias y
P e c u á r i a s . U n i v e r s i d a d de C h i l e .
Streptavidina (STV) es una proteína secretada por
"Streptomyces avídinii" (SA) cuya principal propiedad
es la de unir biotina con alta afinidad (Kd = 1 0 ^ M ) .
Se determino la secuencia de 40 a.a. de la region Nterminal de STV utilizando un secuenciador automático.
Con la finalidad de obtener un "probe" específico para
clonar el gen de STV se sintetizo una mezcla de oligonucleotides (STV14) que represento todas las combinaciones posibles de codones que codifican una pequena
porcion de la secuencia de a.a. de la proteina.
Se construyo un banco de clones a oartir de DNA de
SA utilizando como "vector" bacteriõfago Charon 30.
La mezcla de oligonucleotides fue marcada con 32p
utilizada para localizar, mediante hibridización, el
gen de STV en el banco de clones.
Se aislõ DNA de clones supuestamente positivos y la
presencia del gen de STV fue confirmada mediante "Southern blot" utilizando como "probes" STV14 y una segunda mezcla de oligonucleotides derivada de otra region de la secuencia de a.a. Ambos "probes" detectaron
un fragmento de = 2Kb. Dicho fragmento fue subclonado
en el bacteriófago M13 y se determino la secuencia de
nucleotídos mediante el método de Sanger. El anãlisis
de la secuencia indico la presencia del gen que codifica para STV como así tambiên una region que codifica
para el "peptido serial" de la proteína.
U n a c a r a c t e r í s t i c a p e c u l i a r de I a s c é l u l a s
n e o p l á s i c a s dei tumor venéreo transmisible
( T V T ) c a n i n o es su r e l a t i v a f a c i l i d a d de c r e c e r c u a n d o s o n t r a n s p l a n t a d a s d e s d e un t u m o r
e s p o n t â n e o o e x p e r i m e n t a l a un h u e s p e d g e n e t i c a m e n t e h o m ó l o g o . C o m o un p a s o pnevio a l
t r a n s p l a n t e se r e a l i z o u n a c a r a c t e r i z a c i ó n
u l t r a e s t r u c t u r a l de Ias c é l u l a s p r o v e n i e n t e s
d e un T V T e s p o n t â n e o y de c é l u l a s de T V T c u l t i v a d a s in v i t r o .
La p a r t i c u l a r f o r m a d e i n ú c l e o , l a d i s t r i b u c i õ n de la c r o m a t i n a , l a a p a r í e n c i a de los ó r g a n e l o s c i t p p l a s m á t i c o s , l a p r e s e n c i a de c o m p l e j o s laminares,la forma c e l u l a r . y los m o d o s de a s o c i a c i ó n i n t e r c e l u l a r e s . e n t r e o t r a s
c a r a c t e r í s t i c a s , s o n d i s c u t i ias c o m p a r a t i v a m e n t e a la l u z de los a n t e c e d e n t e s a c t u a l e s
a c e r c a de la n a t u r a l e z a , p r o p i e d a d e s y c o n d u c t a b i o l ó g i c a de e s t e t i p o de t u m o r e s .
T
- 1
v
F i n a n c i a d o por
U n i v e r s i d a d de
P r o y e c t o A - 2 4 2 3 , D .1 ,B , ,
Chile
Se presentará, ademãs, un estúdio sobre la homología
de las estrueturas primarias y secundarias entre STV y
una proteína de eucariotas denominada avidina con propiedades físico-químicas similares a STV.
SITIOS DE RECONOCIMIENTO EN F0SFOLIPASAS A DE VENENOS
DE SERPIENTES CON ACTIVIDADES NEUROTOXICA Y MIOTOXICA.
(Recognition sites in snake venom phospholipases A.
with neurotoxic and myotoxic activities). Arrlagada, E.
Departamento de Biologia Molecular, Facultad de Cien-.
cias Biológicas y de Recursos Naturales. Universidad de
Concepción.
La grari similitud en estructura primaria entre las
fosfolipasas A^ (fk^) de mamíferos y aquellas obtenidas
de venenos de serpientes no permiten explicar las enormes diferencias funcionales. Además, se ha establecido
que la presencia de resíduos básicos en estas últimas es
tá relacionada con su mayor o menor toxicidad.
A fin de establecer la ubicación dei o los sitios de
reconocimiento responsables de la acción tóxica y de aclarar la relación entre actividades tóxicas y fosfolipá
sica, se reallzfi la prediccíón de Ias estrueturas secundarias de PA^ básicas, ácidas y neutras de venenos de
serpientes y de la PA2 básica de pancreas de bovino, la
cual se usa como un estandar de comparación. La prediccíón se hizo por el método de los perfiles de hidrofobicidad.
De acuerdo a los resultados obtenidos, se propone
que la zona de los resíduos de amlnoácidos 53-61 constituiria un "sitio neurotóxico" en Ias PA^ básicas de vene
nos de serpientes. Dicha region por su proximidad a
His-48 podrla estar ligada a la actividad enzimática.
De igual manera se propone que en la acción miotóxica
de la toxinas mionecro*ticas de venenos de serpientes
participaria un "sitio miotóxico" ubicado en la region
de los resíduos de amlnoácidos 76-86.
Proyecto N- 2G.31.12 de la DirecciÓn de Investigación
Universidad de Concepción.
CONDUCTA L0C0MOT0RA DE LARVAS YELLOW EN Drosophila.
(Locomotor behavior of yellow larvae in Drosophila)
Arriagada, J.R., Sunkel, C. y Godoy-Herrera, R. Grupo de Neurobiologia Molecular, Univ.Católica d e Chile y Dep. Biol.Cel. y Genética,Univ. de Chile,
En este trabajo se estúdio la conducta locomot0
ra en larvas de Drosophila Oregon R-C y en mutantes
yellow ("y"). Estos resultados se correlacionan con
estúdios de la cuticula y del sistema nervioso d e l a
mosca.
Para estudiar la conducta^locomotora se utiliza
ron cajas de acrílico de l6cm
llenas con agar. Lar
vas "y" y Oregon R-C de diferentes estados de desarrollo fueron estudiadas. La estructura de la cuticula se analizò por microscopía óptica y de Scanning
y las proyecciones sensoriales se estudiaron usando
HRP como trazador intraaxonal. La actividad de A c e tileolinesterasa (AChE) junto a la separación elec troforética de isoenzimas sirvió para evaluar e l sis
tema colinérgico. Los resultados tnuestran claros cam
bios en la conducta locomotora de las larvas "y".
Al estudiar las estrueturas cuticulares se observan
câmbios en las bandas de espiculas ventrales de los
segmentos abdominales de la larva. No se observan
diferencias en las proyecciones sensoriales y final
mente se estableeió un aumento de la actividad de
la AChE como también la aparición de una nueva iso enzima en las larvas "y".
Se discutirán los posibles mecanismos que expli
quen el cambio en la conducta locomotora de las lar
vas "y" a la luz de los câmbios observados en la cu
tícula y en el sistema nervioso.
Se agradece la colaboración del Dr. Jorge GARRIDO.
Financiado por proyecto de la Fundación Gildemeis ter al Dr. N.C. Inestrosa.
R 175
SINTESIS DE BETA-LACTAMASAS POR BACILLOS CKBEDS
INMOVILIZADO EH AG AH.(Synthesis of beta-lacta
mases by Bacillus cereus immobilized in agar).
Arrieta A , Jilberto C (*)
y Sepulveda M (+).
(*) Laboratório de Microbiologia. Departamento
de Quimica y Biologia.Facultad de Ciência.USACH
( + ) Lab.Control Int.Instituto de Salud Publica.
(Patrocinio : G. Zuniga)
Se estudia la actividad catalitica de las betalactamasas sintetizadas por Bacillus cereus
NRRL 569 inmovilizado en geles esféricos de
agar usando como sustrato penicilina G sodica.
Para esto, se determinaron los
parâmetros
optimos de cultivo usando médios con diferentes
disponibilidades aminoaoidicas, ademas de ácido
fenilaoetico, posible inductor de la sintesis
de penicilinasas. Luego, se hicieron ensayos de
inmovilizaoion de esta bacteria, usandose una
suspension del baoilo en agar al
1,5
%
gelificada por goteo en un liquido no miscible
refrigerado. Los resultados obtenidos indioan
que la calidad y cantidad de
aminoácidos
presentes en el medio inciden en la sintesis de
biomasa pero no en la produccion de las enzimas
estudiadas. La concentracion de agar utilizada
permitio la difusion de las penicilinasas al
medio hasta
una
concentracion
maxima
y
constante de 40.000 0.1./ml al cabo de 96 hrs.
Al renovar
repetidamente
el
medio,
los
microorganismos
produjeron
la
misma
concentracion de enzima en un lapso de 24 hrs
demostrandose una inhibicion por los niveles de
sintesis
alcanzados.
El
sistema
de
inmovilizaoion permite la reutilizacion de los
microorganismos
sin
disminucion
de
su
actividad. Se discute aplicabilidad.
Financiado por DICYT .proyecto 16-08-83-32AE
por el Instituto de Salud Publica.
y
I N F L U E N C I A DEL SEXO EN LA R E G U L A C I O N DE I g E .
( I n f l u e n c e of the sex in the IgE r e g u l a t i o n ) .
A s t o r q u i z a . H . I . . C i s t e r n a s . C . L e a l . X. v
M a l d o n a d o , E. I n s t i t u t o de M e d i c i n a
Experimen
t a l , F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d
Austral
de C h i l e .
En t r a b a j o s p r é v i o s h e m o s p o d i d o
demostrar
que es p o s i b l e m o d u l a r la r e s p u e s t a IgE m e d i a n
te la a d m i n i s t r a c i õ n
de f i t o h e m a g 1 u t i n i n a
(PHA)
uno o dos dias antes del a n t í g e n o . El p r e s e n t e
trabajo a n a l i z a la i n f l u e n c i a dei sexo dei ani_
mal en d i c h a m o d u l a c i õ n .
Se u t i l i z a r o n r a t o n e s RF a d u l t o s (2-3 m e s e s )
de ambos s e x o s , n o r m a l e s y c a s t r a d o s . Se i n y e c t a r o n 80 ul de PHA via i.p., uno o dos dias
antes de i n m u n i z a r con 100 ug OA en 20 mg
A 1 ( 0 H ) ^ gel via s.c. Los a n i m a l e s se s a n g r a r o n
cada 7 dias y se d e t e r m i n o el título de IgE
por PCA en rata y por e n z i m o i n m u n o e n B a y o , y el
título de IgM y/o IgG p o r h e m a g l u t i n a c i õ n
pasi^
va.
Los r e s u l t a d o s i n d i c a n que e x i s t e una m o d u laciõn o p u e s t a de la r e s p u e s t a IgE de a c u e r d o
al sexo dei a n i m a l . La a d m i n i s t r a c i õ n
de PHA
el dia - 1 induce s u p r e s i õ n en la h e m b r a y estí
m u l a c i õ n en el m a c h o , en cambio PHA el dia -2
lleva a un e f e c t o o p u e s t o .
Cuando los a n i m a les son c a s t r a d o s se p i e r d e este e f e c t o m o d u lador i s o t i p o
específico.
Se d i s c u t e la p a r t i c í p a c i õ n de f a c t o r e s s o lubles IgE e s p e c í f i c o s que i n t e r v e n d r í a n
eneel
proceso.
(Proyecto
Inv.
R S - 8 3 - 7 , Univ.
Austral
de
Chile)
SOBRE E L E F E C T O " I N V I T R O " DE P R O G E S T E R O N A E N U T E R O
(Upon t h e " i n v i t r o " e f f e c t o f P r o g e s t e r o n a i n mouse
uterus).H.Asencio, L.Padilla,M.A.Cruz, M.I.Rudolph.
Depto.Ciências Fisiológicas, Fac.Ciências Biológicas y
de R e c u r s o s N a t u r a l e s . U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i õ n .
Si se e s t u d i a e l e f e c t o " i n v i t r o " de c o n c e n t r a c i o n e s
m i c r o m o l a r e s de P r o g e s t e r o n a ( P ) s o b r e c u e r n o s u t e r i n o s ,
se o b s e r v a que e s t a hormona puede aumentar o i n h i b i r I a s
c o n t r a c c i o n e s u t e r i n a s de a c u e r d o a l p e r í o d o dei c i c l o
estral y / o prenez dei animal.Numerosos investigadores
han a n a l i z a d o e s t e fenômeno s u p o n i e n d o una a c c i ó n direc^
t a de P s o b r e l a f i b r a m u s c u l a r l i s a d e i ú t e r o , s i n e n c o n t r a r una e x p l i c a c i ó n r a z o n a b l e para e s t e fenômeno.
En e l p r e s e n t e t r a b a j o s e a n a l i z a n e s t o s r e s u l t a d o s c o r r e l a c i o n a n d o l a i n f l u e n c i a que e j e r c e P t a n t o sobre la
a c t i v i d a d c o n t r a c t u , como s o b r e l a l i b e r a c i o n d e 3 H - N o
radrenalina (3H-NA).
A c t i v i d a d c o n t r á c t i l : E l mayor e f e c t o i n h i b i t o r i o de P
(5 uM)se e j e r c e en ú t e r o s de r a t o n a s t r a t a d a s p r e v i a m e n t e c o n e s t r a d i o l ( 0 . 5 m g / K g , 48 h r s . ) y f u e d e 4 8 . 9 5 +
5.782! (%+ e . s . , n = 7 ) . E s t e e f e c t o e s p a r c i a l m e n t e a n t a g o n i z a d o p o r p r o p r a n o l o l 1 uM ( 3 7 . 0 8 + 7 . 8 1 % ; X + e . s . ; n = 6 ) y
es r e v e r t i d o en ú t e r o de r a t o n a s t r a t a d a s p r e v i a m e n t e
con r e s e r p i n a ( 5 mg/Kg i . p . 2 4 h r s ) o b s e r v á n d o s e un au mento de 147,45+19.852S(X+e.s. , n = 6 ) .
L i b e r a c i o n de 3H-NA: E l mayor aumento de l a l i b e r a c i o n
basal de 3H-NA p o r e f e c t o de P ( 1 0 wM)se o b s e r v a en ú t e r o s de r a t o n a s t r a t a d a s p r e v i a m e n t e c o n e s t r a d i o l
( 0 . 5 m g / K g , 48 h r s ) , f u e d e 2 0 . 3 6 + 3 . 7 1 ( ü + e . s . , n = 3 ) . e f e c t o q u e t i e n e u n a d u r a c i ó n s u p e r i o r a l o s 10 m i n . .
Se p o s t u l a q u e l o s e f e c t o s " i n v i t r o " d e P s e d e b e r i a n
a una a c c i ó n de e s t a hormona s o b r e I a s t e r m i n a c i o n e s
n e r v i o s a s a d r e n é r g i c a s . f a v o r e c i e n d o l a l i b e r a c i o n d e NA
que e j e r c e un f u e r t e c o n t r o l i n h i b i t o r i o s o b r e l a c o n t r a c c i ó n u t e r i n a y cuya a c t i v i d a d a su v e z es r e g u l a d a
" i n v i v o " por I a s hormonas s e x u a l e s .
Proyecto
20.33.28 D i r e c c i ó n
de I n v e s t i g a c i õ n .
E S T I M U L A C I O N 6-ADRENERGICA Y EVENTOS MOLECULARES I N V 0 L U CRADOS EN C A P A C I T A C I 0 N Y / 0 R E A C C I 0 N A C R 0 S 0 M I C A DE E S P E R M A T 0 Z 0 I D E DE M A M Í F E R O . ( 6 - A d r e n e r g i c s t i m u l a t i o n a n d
m o l e c u l a r e v e n t s i n v o l v e d i n mammalian s p e r m c a p a c i t a t i o n a n d / o r t h e a c r o s o m e r e a c t i o n ) . A v e n d a n o C . ,y L l a n o s
M. D p t o . de C i ê n c i a s B á s i c a s y U n i d a d d e B i o l o g i a d e
la
R e p r o d u c c i ó n . F a c . de M e d i c i n a - S u r e I N T A . U . de
Chile.
L a p r o b a b i l i d a d de f e c u n d a c i ó n p o r p a r t e d e l e s p e r m a t o z o i d e , d e s d e un p u n t o d e v i s t a m o l e c u l a r , p u e d e e s t a r
r e l a c i o n a d o c o n l a f u n c i ó n de a g o n i s t a s l y ( a d r e n e r g i c s en e l medio c i r c u n d a n t e al p r o c e s o . E s t e e s t ú d i o p r e
t e n d e d i l u c i d a r l a p o s i b l e f u n c i ó n y a s o c i a c i ó n e n t r e es^
t i m u l a c i õ n 8 a d r e n é r g i c a , t r a n s m e t i l a c i ó n de f o s f o l í p i d o s y a c t i v a c i ó n de l a a d e n i l c i c l a s a ( A C ) d u r a n t e l a c a
p a c i t a c i ó n ( C A P ) y / o r e a c c i õ n a c r o s ó m i c a ( R A ) de e s p e r r o
t o z o i d e s de h a m s t e r i n c u b a d o s i n v i t r o . E s p e r m a t o z o i d e s
e p i d i d i m a r i o s l a v a d o s y s e p a r a d o s e n c o l u m n a de p e r l a s
de v i d r i o s e i n c u b a r e m a 3 7 ° C . b a j o a t m o s f e r a h ú m e d a de
5% C0;>/95% a i r e , e n p r e s e n c i a d e a g o n i s t a s S a d r e n é r g i c o s , i n h i b i d o r e s de r e a c c i o n e s de t r a n s m e t i l a c i ó n ,
análo
g o s de A M P c , como a s i m i s m o de e s t i m u l a d o r e s d e i s i s t e m a
a d e n i l c i c l a s a . A d i f e r e n t e s p e r í o d o s de i n c u b a c i ó n ,
se
evaluó
m o t i l i d a d , h i p e r a c t i v a c i ó n y RA. Cuando l o s e s p e r m a t o z o i d e s s e i n c u b a r o n c o n i s o p r o t e r e n o l , l a s RA a u mentaron s i g n i f i c a t i v a m e n t e en r e l a c i ô n a l o s c o n t r o l e s .
A s u v e z , l o s i n h i b i d o r e s de t r a n s m e t i l a c i ó n
(3-Deazaade
noslna y Homocisteina-tiolactona) inhibieron la ocurrenc i a de RA e n u n 40-60% e n p r e s e n c i a o a u s ê n c i a d e i a g o n i s t a , s i e n d o d i c h a i n h i b i c i õ n superada al i n c l u i r 8 - B r
o B t 2 AMPc e n e l m e d i o de i n c u b a c i ó n .
Activadores sele£
t i v o s de l a A C , F o r s k o l i n y
toxina dei cólera, indujer o n RA e n v a l o r e s s o b r e l o s c o n t r o l e s . L o s r e s u l t a d o s su_
g i e r e n q u e l o s p r o c e s o s de CAP y / o RA e s t a r í a n m o d u l a d o s
p o r u n a c a s c a d a d e s u c e s o s d e p e n d i e n t e s de un a u m e n t o d e i
AMPc i n t r a e s p e r m á t i c o .
D i c h o a u m e n t o s e d e b e r í a a u n a se^
c u e n c i a de e v e n t o s de m e m b r a n a q u e i n c l u i r í a n :
estimulac i ó n B - a d r e n é r g i c a - t r a n s m e t i l a c i ó n de f o s f o l í p i d o s - a c t i v a c i ó n de l a A C .
Financia:
D I B . B - 2 3 9 6 - 8 6 1 3 y G r a n t 83010 OMS.
R 176
MICROPROPAGACIQN DE Gomortega keule (MQL.) BAILLON.
(Micropropagation in Gomortega keule (Mol.J Baillon).
B a e z a , P.C. , Barrales P.H.L. y M ^ ^ n ^ g p Departamento de Botânica, Facultad de Ciências Biológicas y
de Pecursos Naturales, Universidad de Concepción.
r
s
G. keule es una espécie endêmica considerada, junto con
otras 10, como en estado de conservaciôn crítico y clasi
ficándola por lo tanto en la categoria "EN PELIGRO" con
prioridad 4 (CONAF, 1985). Su distribuciôn geográfica
está restringida a las VII y VIII Regiones.
No se dispone de antecedentes confiables sobre su capacidad de reproducciôn, ya sea bajo condiciones naturales
o de laboratório. Tampoco se tiene informaciôn sobre
porcentaje de germinaciõn, viabilidad de Ias semillas,
latencia, etc. Por los antecedentes anteriores se ha es
timado que la técnica de cultivo de tejidos podrla ser
aplicada para dilucidar algunas de estas interrogantes.
Como primera aproximación se intento el cultivo in vitro
de ápices caulinares y axilares,
Yemas apicales y axilares se desinfectaron superficialmente con HgCl^ al 0.05%, se lavaron repetidamente con
agua estéril y se incubaron en medio White con bencil
amino purina (BAP), gliberelina (GA ) y ácido naftalên
acçtico (ANA), en concentraciones de 1.5, 1.0 y 0.1 mg
1' , respect ivament e.
Después de 30 dias los explantes se repicaron a medio
Anderson, con el mismo tratamiento hormonal anteriormente
mencionado. Todas Ias experiências se realizaron bajo
régimen lumínic.o de 16:8 hrs., a una intensidad de
54 uEcirT seg' y a una temperatura de 23°C.
Se observo actividad de Ias yemas a los 15 días, estimada por la apertura de Ias brãcteas. Después de 4 meses
los explantes expandieron 2 a 4 pares de hojas alcanzando un tamano de 10 a 30 mm de alto.
ADHERENCIA SELECTIVA DE SALMONELLA TYPHIMURIUM LT2
AL EPITELI0 INTESTINAL DE RATON.
(Selective adherence of Salmonella typhimurium LT2 to mouse intestinal epithelirtn ) • Bao. L. ; Garrido, J. Laboratório
de Histología, Dpto. Biologia Celular, Facultad de
Ciências Biológicas, Pontificia Universidad Católica
de Chile.
Estúdios prévios realizados en nuestro laboratório, sugieren que is. typhimurium LT2, se adhiere selectivamente al epitelio intestinal de ratón, dependi endo de las condiciones de cultivo. Las bactérias
provenientes de cultivo estático, se adhieren a Ias
placas de Peyer, no así Ias bactérias provenientes
de cultivo agitado; además, esta capacidad de adhesion puede ser correlacionada con el patrón de proteínas de la membrana externa de J3. typhimurium L T 2 .
2
Hemos infectado, con S_. typhimurium L T 2 - ^ P , ratones Swiss. A distintos tiempos se extrajo el intestino delgado y se determino, por centelleo líquido,
la radiactividad asociada a regiones que incluyen
placas de Peyer (PP) y a regiones entre placas de
Peyer (NPP).
Hemos definido, el concepto operacional, "actividad patógena" en función dei índice promedio PP/NPP
(PP/NPP- 1,3 eqüivale al 100# de actividad patógena),
Este da cuenta del dafio que produce, S_. typhimurium
LT2, sobre su huésped. Las bactérias provenientes
de un cultivo agitado exhiben un 70% de actividad
patógena, independientemente, dei estado nutricional
de los ratones y dei tiempo de infección; mientras
que Ias bactérias que provienen de un cultivo estático alcanzan un 100# de actividad patógena 2h hrs.
(ratones no ayunados) ó 16 hrs. (ratones ayunados),
después de iniciada la infección.
Las bases moleculares dei fenômeno observado se
han investigado mediante estúdios de inhibición de
la adhesion por moléculas extraídas de la superfície
bacteriana.
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DEL RECEPTOR PARA
LAMININA DE UNA BIBLIOTECA GENOMICA DE S.AUREUS.
(Isolation and characterization of the laminin
receptor from a S. aureus genomic library) Barardi,
C.R.M.*, Santos, C.L.S. y Brentani, R.R.
Ludwig Institute for Cancer Research, Sao Paulo Branch
- Brasil.
EX1STEN DOS TIPOS 0E RECEPTORES AL L-GLUTAMAT0
EN FI BRAS MUSCULARES O E LARVAS DE
V*060pkitat
(Do muscle fibers from VKOòOphila
larvae
posses two types of L-glutamate receptors?).
Ba r I a , R.
Depto. Biol. Cel. Fac.Cs.Biológicas
Universidad Católica de Chile.
(Patrocínio:
P. Labarca) .
Laminin, a major glycoprotein of basement
membranes, binds to a specific receptor on the surface
of neoplastic and non-neoplastic cells. Laminin
binding proteins were also found in Staphylococcus
aureus, but not in Staphylococcus epidermidis (Lopes,
J.D. et al. Science~229:275,1985). These specific
molecules may apparently be involved in bacterial
adhesion.
High molecular weight DNA was isolated from S.
aureus, partially digested with EcoRI and fractionated
through a 10-40% sucrose density gradient. Fragments
of 4-6 kb in lenght were pooled and ligated to an
expression vector Xgtll, digested with EcoRI. After
infection of E.coli Y1090 with these molecules, the
genomic library obtained was assayed through an
immunological screening. The viral plaques were
transferred to nitrocellulose filters and incubated
with laminin PI fragment followed by rabbit
anti-laminin antibody (affinity purified in a
Sepharose-laminin column) and then anti-rabbit IgG
alkaline phosphatase conjugate. The positive signals
were isolated and were used to infect E . coll Y1089, a
lysogenic host. The proteins were analysed in
PAGE-SDS gel and Western blotting and revealed a
non-fusion protein in the same irrmunological assay.
The molecular weight of this protein was 50kd, similar
to that report of the same receptor. The DNA of this
clone was isolated and after digestion with EcoRI we
observed a 5,0kb insert. Sequences of this clone are
underway.
Los músculos de la larva de VKO&opk-ita
son
un buen modelo para estudiar receptores de Lglutamato con técnicas e1ectrofIstol6gIcas. El
conoclmtento de este receptor reviste gran (nteres en Neuroblo1ogfa porque ha sfdo Identify
cado en sI naps Is excttatorlas en SNC de mamT fe
ros.
He estudlado las vartaclones del
poten clal de membrana (E ) como funcfÓn de la concentred ón de agonlstas aplIcados en el bafto.
Observé* los slgulentes resultados: L-gluta y
qulsqualato producen a concentrac(ones en el
rango 1-1OpH depolarlzaclón de la membrana
(AV
< 1$ m V ) .
A concentraciones > I O O u M tal
efecto se revlerte para alcanzar una depolarlcIón de solo 4 mV.
En ausência de fones cloro
en la sol uc lón estos agonlstas solo Inducen de_
polartzaclón proporcional a sus concen t rac i ones.
Por otra parte el ac. kafnlco solo Induce una leve hIperpo1 ar Izac(On que no se observa en ausência de Iones C1~.
Al tratar las fibras musculares durante 15
mfn. con 50uM de concanavalfna-A, L-gluta y
qulsqualato solo provocan una depolarlzaclón.
Esto suglere que Con-A Imptde la desenstbll Iza_
cIón de los receptores excftatorlos como se ha
descrito en músculo de otros Invertebrados.
Nuestros resultados Indican la existência de
dos tipos de receptores: uno excftatorlo y
otro Inhlbltorlo que son f a rmacol Óg I camen te à\_
fcrentes.
* C.R.M.Barardi is a fellow of FAPESP.
M
E M
CARACTER IZAC10N DE ANTIGENQS ESPERMAT1C0S HUMANOS POR
ANTICUERPÜS MONDCLONALES MURINQS (Characterization of
Human Sperm Antigens by Murine Monoclonal
Antibodies)
Raul Barnier v
Elcira
Pérez
Laboratório
de
Inmunologia,
Departamento
de
Biologí a
Celular,
Facultad
de
Ciências
Biológicas,
Pontificia
Universidad Católica de Chile. (Patrocinio: Lisette
Ley ton)
Con el propósito de identificar y caracterizar antígenos espermàticos que se encuentran involucrados en
el proceso de fecundation, hemos utilizado la metodologia de anticuerpos monoclonales murinos, la cual
per«i te disectar la composición antigénica dei espermatozoide y estudiar la función de cada antigeno en
parti cular.
En este trabajo se inmunizaron ratones de Ias cepas
Balb/c y CB10F1, con espermatozoides humanos completos
o extractos de estos. Los hibridomas obtenidos por
fusion de los linfocitas esplénicos de los animales
inmunizados con la llnea mieloide NS02, fueron seleccionados por ELISA, usando como antigeno el mismo inmunógeno. Posteriormente, se determino la localizaciún
dei antigeno por inmunofluorescencia indirecta y su
peso molecular por western
blotting.
Se seleccionaron dos anticuerpos para estudiar su
efecto en la interacción de gametos in vitro.
El anticuerpo EET-1A11 que reconoce un antigeno intrínseco y
presenta, sói o en espermatozoides capacitados, un patron ecuatorial; es capaz de inhibir la penetración de
ovocitos de hamster sin zona pelücida por espermatozoides humanos. Por otra parte el monoclonal HS-2H3,
dirigido contra un antigeno presente en el líquido
seminal, tiene un un patron de fluarescencia postacrosomal y cola, inhibe la union de los espermatozoides humanas a la membrana de ovocitos de hamster.
Estos estúdios indican que tanto antígenas intrínsecos
como extrlnsecas dei espermatozaide pueden estar implicados en el proceso de fecundación.
Financiado por Brant IDRC 3-P-B3-1006-01
COMPROBACION DE UN MODELO ESTRUCTURAL DE LAS 8-LACTAMASAS. ROL DEL DOMÍNIO II EN LA ACTIVIDAD CATALITICA.
(A test for a model structure for 8-lactamases. The
rol of domain II in the catalytic activity). L. Barros
y J• Martinez» Departamento de Biologia Molecular, Facultad de Ciências Biológicas y de Recursos Naturales,
Estúdios de prediccidn de estructura secundaria han
permitido postular un modelo estructural para estas en
zimas, consistente en dos domínios, con la actividad ca
talltica localizada en el dorainio N-terminal (Dominiol)
Estúdios de hidrfílisis de la enzima con BrCN en con
diciones no denaturantes, y con quimotripsina, han demostrado la presencia de un péptido asimilable al Dominio I que conserva actividad enzimática.
Para determinar la posible participación del Domínio II en el proceso catalitico, se han determinado las
constantes cinéticas K^, K^, número de recambio y energia de activacifin de la 8 - lactamasa de B. cereus nativa, y del dominio I, en presencia de sustratos e inhibidores, utilizando métodos espectrofotométricos.
Con el objeto de establecer si las diferencias encontradas son atribuibles al proceso de separaciõn del
dominio I por hidrfilisis con BrCN, se hacen tambiên estúdios con el dominio I obtenido por hidrfilisis enzimática con quimotripsina.
Proyecto de Investigacidn 20.31.12, D. Inv. Universidad
de Concepcifin.
Proyecto de Investigación 1085 de FONDECYT
R 177
ESTADO DE TIROSINACION DE LA TÜBULIKA EN OVOCITOS, EMBRIONES Y CÉREBRO DE SAPO. (State of tyrosination of
tubulin in oocytes, embryos and brain of toad). Barra,
H.S., Arce, C A . y Modesti, N.M.
Centro de Investigaciones en Química Biológica de Cordoba (CIOUIBIC). Facultad de Ciências Químicas. Universidad Nacional de Cordoba. Cordoba. Argentina.
El terminal COOH de la tubulina o( puede ser modificado mediante la incorporaciõn o liberacion postraduccion de tirosina por acción de tubulina:tirosina ligasa
o tubulina carboxipeptidasa, respectivamente. La fraccion de tubulina que es capaz de incorporar tirosina se
denomina tubulina tirosinable y comprende a la tubulina
tirosinada y no-tirosinada. Se ha determinado que en
cérebro de aves y mamíferos, parte de la tubulina es notirosinable y que Ias distintas espécies de tubulina
cambian con el desarrolló.
En el presente trabajo se determinaron las proporciones de cada una de Ias espécies de tubulina en ovocitos,
embriones y cérebro de Bufo arenarum. En extractos de
ovocitos la tubulina soluble estã compuesta principalmente (95%) de tubulina no-tirosinable. La fracciõn
restante (52) estã compuesta por tubulina tirosinada,
no habiêndose encontrado tubulina no-tirosinada. Resultados similares fueron obtenidos con embriones de 2 y
22 hs posfertilizaciõn. En cérebro hay una alta proporciõn (16X) de tubulina tirosinable cuya composición es
diferente de la encontrada en ovocitos o embriones; la
mayor proporciõn (70Z) estã constituída por tubulina notirosinada.
La ligasa fue detectada en todos los tipos de extractos estudiados. En cambio, la carboxipeptidasa se encont r a solamente en extractos de cérebro.
La variaciõn en Ias proporciones entre tubulina tirosinada y no-tirosinada debe interpretarse como la resultante de Ias actividades relativas de Ias dos enzimas.
En cambio, la variaciõn entre tubulina tirosinable y notirosinable podría deberse tanto a una modificaciõn postraducciSn como a la expresiõn de genes diferentes.
B I O Q U Í M I C A DEL VENENO DE L A ARANA L . l a e t a Y SU IMPORTAN
CIA BI0TECN0L0GICA. { B i o c h e m i s t r y o f L. l o e t a s p i d e r v e nom a n d i s B i o t e c h n o l o g i c a l i m p o r t a n c e ) . B o s c u r , L . ,
M e d i n a . J . N . y Y e v e n e s . I . D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a
F a c u l t a d d e M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
V á r i o s a u t o r e s Hon d e s c r i t o l o s daninos e f e c t o s d e l
a r a c n i d i s m o e n C h i l e , y h a n e n f o c a d o e l problema de que
no s e d i s p o n e a c t u a l m e n t e d e u n a t e r a p i a a d e c u a d a . E l
o b j e t i v o de n u e s t r o t r a b a j o es e s t u d i a r e l mecanismo
b i o q u í m i c o d e l v e n e n o de l a a r a n a de l o s r i n c o n e s L o x o s celes laeta.
En e s t e t r o b a j o se p r e s e n t a n l o s r e s u l t a d o s d e l e f e c t o q u e p r o d u c e e n e l r i n ó n de c o n e j o , e l v e n e n o de l a L .
l a e t a i n y e c t a d o p o r v i a i n t r a d é r m i c a . E l dano r e n a l f u é
e v a l u a d o midiendo l a s a c t i v i d a d e s e n z i m ó t i c a s de l a f o s fatasa ácida, fosfatosa olcalina, tronsaminasa glutámico
o x a l o a c é t i c a (GOT) y tronsaminasa g l u t ó m i c o - p i r ú v i c a
( G P T ) e n l a o r i n a d e c o n e j o s r e c o l e c t a d a e n 24 h r s ^ y e l
experimento dur6 6 d l a s .
En l o s r e s u l t a d o s obtenidos se o b s e r v o que p o s t - i n y e c
c i ó n del veneno, los 4 enzimas estudiadas comenzaron a
aumentar sus a c t i v i d a d e s enzimóticas hasta a l c a n z a r un
m á x i m o a l a s 72 h r s . y l u e g o c o m e n z a r o n a d i s m i n u i r l e n t a m e n t e a l a s 96 h r s . y 120 h r s .
L a c o n c l u s i o n n u e s t r a , e s que e l r i n ó n de c o n e j o f u e
danado p o r e f e c t o d e l t ó x i c o v e n e n o de l a L . l o e t a . A l gunos a u t o r e s h a n demostrado que l a mordedura de arana o
d e a b e j a p r o d u c e u n s í n d r o m e n e f r ó t i c o y d e s t r u c c i ó n dr;
l a s c é l u l a s t u b u l a r e s . Pensamos que l a d e s t r u c c i ó n d e l
t e j i d o r e n a l es l o que ha p r o d u c i d o l a l i b e r a c i o n a l a
o r i n o de l a s 2 t r a n s a m i n a s e s . A s i m i s m o , e l t ó x i c o e f e c t o d e l v e n e no c a u s o e l a u m e n t o de l a a c t i v i d o d d e l o s
f o s f a t a s a s a l c o l i n o y á c i d o . L a importância que n u e s t r a s
i n v e s t i g a c i o n e s puedan t e n e r poro l a B i o t e c n o l o g i a es
que u n c o n o c i m i e n t o p r o f u n d o de l a e s t r u c t u r a d e l v e n e n o
n o s p e r m i t i r á preparar e l a n t i s u e r o e s p e c í f i c o p a r a e l
veneno y s i n t e t i z a r a l g u n a d r o g a que pueda c o n t r a r r e s t a r
e l efecto venenoso.
R
178
ALTERACIONES CPOMOSOMICAS INDUCIDAS POR LINDANO EN MERISTEMAS RADICULARES DE Chlorophytum comosum.
(Chromosomical modifications induced by Lindane in radi
cular Tnerystems of Chlorophytum como sum) . Bastias , J.
Guerrero, c . Laboratório de Citogenética, Departamento
de Ciências Básicas, Instituto Profesional de C h i l i a n .
(Patrocínio: R. Godoy Herrera).
El Lindano es un insecticida organoclorado cuyo
potencial genotóxico se conoce parcialmente. A pesar
de ello, este compuesto es utilizado ampliamente en me
dicina para el tratamiento de la sarna y pediculosis
en general. Esto nos motivo a indagar sobre la mutagenicidad dei agente en cuestiõn utilizando a C. comosum
una espécie de centinela vegetal.
Para ello se indujo el crecimiento radicular de
2 0 plântulas colectadas de una misma planta madre en
una câmara de cultivo bajo condiciones controladas
(luz, temperatura y oxigenaciõn). Una v e z que Ias raíces tenían 2 cm. de longitud s e separaron en 3 grupos:
a) Controles, b) Tratadas con l x l O gr/ml de Lindano
por 2 horas para luego pasarlas a medio limpio por 3,
6, 12 y 24 horas posterior al pulso y c) Tratadas con
lxlQ 4 gr/ml de Lindano en forma contínua por 3, 6,
12 y 24 horas.
-4
-
Transcurrido el tiempo de tratamiento de los 3
grupos, se colocaron en colchicina al 0,1% por 3 horas, siendo cortadas Ias raíces y fijadas en metanolãcido 3:1. Las preparaciones se confeccionaron siguiendo la metodologia dei aplastado, siendo Ias placas metafãsicas analizadas y fotografiadas en un microscópio Leitz, modelo Dialux-20.
Nuestro hallazgo revela que el Lindano induce:
1) Quiebres de cromãtidas; 2) Quiebres de cromosomas;
3) Gaps y 4) Descondensación cromosómica. Los resultados encontrados se contrastan estadísticamente y se
discuten considerando el mecanismo de acción dei agen
te.
S-ADENOSIL-L-METIONINA Y PORFIRIA CUTANEA TARDIA-TRATAMIENTO EXIT0
SO E N D O S N I N O S . ( S - A d e n o s y l - L - m e t h i o n i n e a n d P o r p h y r i a C u t a n e a
T a r d a - S u c c e s s f u l t r e a t m e n t in t w o c h i l d r e n ) . B a t l l e , A . M . d e l C . * ;
Stella, A.M.*; Melitto, V . * ; Guzman Mariano, H.**; Kaminskv,. A.
R.***y K a m i n s k v ,
C.***
* C e n t r o de I n v e s t i g a c i o n e s s o b r e P o r f i r i n a s y P o r f i r i a s - C I P Y P (FCEN, U B A y C O N I C E T ) , * * H o s p i t a l M i l i t a r C e n t r a l " D r . C . Argerich"
***Hospital Zubizarreta.
La Porfiris C u t a n e a T a r d i a ( P C T ) se roanifiesta g e n e r a l m e n t e d e s p u é s d e l o s 4 0 a n o s , a u n q u e se h a n d e s c r i p t o c a s o s a i s l a d o s y r a r o s
de P C T i n f a n t i l .
Se p r e s e n t a n dos n u e v o s c a s o s de P C T i n f a n t i l e n lbs cuales se h a
aplicado con êxito una nueva terapia combinada
de S - a d e n o s i l - L - m e tionina(SAM) y cloroquina.
E n u n nifio de 12 afios y u n a nifla de 7, e n b a s e a los t í p i c o s s i g nos c l í n i c o s de f o t o s e n s i b i l i z a c i ó n e h i p e r t r i c o s i s , se c o n f i r m S e l
d i a g n ó s t i c o de P C T h e r e d i t a r i a c o n l o s e s t ú d i o s b i o q u í m i c o s , c a r a c t e r í s t i c o p a t r o n de e x c r e c i õ n u r i n a r i a , d i s m i n u c i ó n de l a a c t i v i d a d
de la U r o p o r f i r i n ó g e n o D e c a r b o x i l a s a ( U R O - D ) e r i t r o c i t a r i a y e l e v a do í n d i c e de P o r f i r i n a s P l a s m ã t i c a s ( I P P ) c o n m á x i m o de e m i s i ó n a
617-618 nm.
E l t r a t a m i e n t o q u e se p r o p o n e comb o t r a a l t e r n a t i v a t e r a p ê u t i c a
c o n s i s t e e n l a a d m i n i s t r a c i ó n i n i c i a l y s i m u l t â n e a de S A M o r a l ( c o m p r i m i d o s - 1 2 m g / k g d i á r i o s ) d u r a n t e 3 s e m a n a s y de b a j a s d o s i s de c l o r o q u i n a o r a l (2x100 mg-Bemanal) d u r a n t e a p r o x i m a d a m e n t e 120-150 d í a s
o hasta completa normalización y estabilización dei cuadro clínico y
bioquímico.
S-ADEN0SIL-L-METIONINA E INT0XICACI0N P O R PLOMO. ESTÚDIO COMPARATIVO
D E L A V I A D E A D M I N I S T R A C I O N . ( S - A d e n o s y l - L - M e t h i o n i n e a n d lead i n t o x i c a t i o n . C o m p a r a t i v e study o f the r o u t e of a d m i n i s t r a t i o n . )
B a t l l e , A . M . d e l C.; P a r e d e s , S.R.; F u k u d a H . ; K o z i c k i P . A . y
Sossetti.M.V. .
C e n t r o de I n v e s t i g a c i o n e s s o b r e P o r f i r i n a s y P o r f i r i a s ( C I P Y P ) FCEyN-UBA-CONICET.
La
ô-aminolevíilico d e h i d r a s a ( A L A - D ) e s u n o de los m á s s e n s i b l e s
p a r â m e t r o s de l a i n t o x i c a c i ó n por p l o m o . E l e f e c t o i n h i b i t o r i o d e l
m e t a l s o b r e e s t a e n z i m a p u e d e r e v e r t i r s e con G S H q u e se e n c u e n t r a
t a m b i e n d i s m i n u i d o e n e l s a t u m i s m o . L a S - A d e n o s i l - L - M e t i o n i n a (SAM)
es u n e x c e l e n t e p r e c u r s o r d e l G S H , r e s t a u r a n d o e l n i v e l d e l tiol e n
h i g a d o . U n a i m p o r t a n t e v i a de e l i m i n a c i ó n de l o s m e t a l e s
es la b i liar; e l GSH participa en este proceso
a s í c o m o e n la d e t o x i f i c a c i Õ n g e n e r a l d e xenibióticoB a través de la f o r m a c i o n de a d u c t o s .
E n b a s e a e s t a s c o n s i d e r a c i o n e s , se e s t ú d i o c o m p a r a t i v a m e n t e la
a c c i ó n d e l S A M a d m i n i s t r a d o e n f o r m a o r a l , s . c . o i.v. e n la i n t o x i c a c i ó n por p l o m o .
Se a d m i n i s t r o SAM d i a r i a m e n t e s . c . (20 m g / k g ) y o r a l (80 m g / k g ) a
r a t o n e s i n t o x i c a d o s por plomo e n f o r m a a g u d a d u r a n t e 2 0 d í a s . P a cientes íntoxicados crónicamente p o r plomo recibieron SAM diariam e n t e e n f o r m a í.v. (12 m g / k g ) y o r a l (25-30 m g / k g ) .
E n t o d o s l o s casos d e s p u é s d e l S A M , a u m e n t o la c o n c e n t r a c i ó n de
GSH, que se encontraba inicialmente reducido correspondientemente
d i s m i n u y ó e n f o r m a rápida el c o n t e n i d o de p l o m o y se r e c u p e r a r e m
los niveles d e A L A - D .
L a m a y o r p a r t a dei p l o m o m o v i l í z a d o
se e l i m i n o p o r h e c e s , m o s t r a n
d o u n p i c o d e n t r o de Ias 2 4 - 4 8 h r s . e n l o s a n i m a l e s t r a t a d o s c o n S A M
La e x c r e c i õ n u r i n a r i a fue m u y b a j a .
Los n i v e l e s de A L A , P B G y p o r f i r i n a s , a u m e n t a d o s e n a l g u n o s c a s o s
d e i n t o x i c a c i ó n p o r p l o m o , a l c a n z a r o n c i f r a s n o r m a l e s l u e g o de la
terapia.
Se observo* u n a b u e n a c o r r e a l c i ó n e n t r e l a r e c u p e r a t i o n d e l G S H ,
la a c t i v i d a d d e l A L A - D y l a d i s m i n u c i ó n d e i c o n t e n i d o de p l o m o , a p o y a n d o n u e s t r a h i p õ t e s i s de q u e , como c o n s e c u e n c i a de l a a d m i n i s t r a c i ó n de S A M se i n c r e m e n t a l a d i e p o n i b i l i d a d de G S H , f a c i l i t á n d o s ç e l
p r o c e s o de d e t o x i f i c a c i ó n y r á p i d a e l i m i n a c i ó n d e i p l o m o de los d i ferentes compartimientos y , c o n s e c u e n t e m e n t e , r e v i r t i é n d o s e la i n a c t i v a c i S n de l a e n z i m a p o r e l m e t a l .
E l h f g a d o j u g a r í a u n p a p e l i m p o r t a n t e e n la c a p t a c i õ n y t r a s p o r t e
d e i p l o m o c o m o u n c o n j u g a d o c o n e l G S H , h a c i a l a b i l i s , d a n d o como
resultado una mayor excreciõn biliar dei m e t a l .
INTERCÂMBIO 0RT0F0SFATO-PI ROF0SFATO C ATALIZ AD0
POR LA PI RO F0S FATASA SOLUBLE Y DE MEMBRANA.
ROL DEL GRADIENTE DE H . (0rthophosphatc-pyrophosphate exchange catai (zed by soluble ano]
membrane-bound pyrophosphatases. Role of H
gradient). Behrens , M.I, de me Iis, L , Cells, H ,
Romero, 1 , Gomez-Puyou, M.T, Gomez-Puyou, A.
Dept.Bloq.Univ.Federal RTo Janeiro
y Centro
Invest.FIslol.Cel.Unlv.Autónoma de México.
+
La p I rofosfatasa de membrana de crómatóforos
de RhodotpiKitlum
lu.bn.um catai Iza un Intercâmbio ortofosfato-pIrofosfato (PI-PPI), que requ fere un gradiente electroqufmlco de H . Se
comparo la reacción catai Izada por esta enzima
con la que se obtlene con la pIrofosfat asa soluble de levedura, donde no hay gradiente de HT
En ambos sIstemas la velocldad de I n tercamblo aumento al Incrementar el pM y Ia concentración de M g C l . El Ko.s para PI de la plrofos_
fatasa soluble disminuyó al agregar solventes
orgAn I cos al medio o al aumentar la concentración de MgCl . Los valores de K
obtentdos
fueron menores que tos observados con los crómatóforos de R.tub-*um. La disminución del Ko,s
de la enzima soluble no se asoetó a una dlsmlnuclón de la razón entre las velocidades de h_i_
dróllsls y síntesfs de PPf. En presencia de Mg
C l ImM la razón hid róiIsls/sfntesls de PPI me
dida a pK 7.8 fue similar en ambos sistemas. ~
En presencia de 1OmM MgC1 esta razón dfsmtnuyó mas de 10 veces en los crómatóforos y 2-3
veces en la enzima soluble.
Estos resultados Indican que para la plrofos
fatasa no habrfa relaclÓn entre el Ko.s para PT
y la razón h I drÓ1Is I s/s Intes1s de PPI. El fón
Mg* parece estar Involucrado en la disminución de esta razón cuando se forma el gradlen
te de H en los crómatóforos.
Financiado por FINEP y CNPq, Brasil.
+
2
2
En e s t o s n i ü o s se l o g r o u n a t o t a l r e c u p e r a c i ó n c l í n i c a y b i o q u í m i c a d e n t r o de l o s 3 m e s e s , s i n r e c i d i v a s l u e g o de 8 m e s e s . N o ae ob_
s e r v a r o n r e a c c i o n e s o f t a l m o l ó g i c a s n i o t r o s e f e c t o s c o l a t e r a l e s inde
seados.
En c o n c l u s i o n , e l t r a t a m i e n t o p r o p u e s t o e s s e g u r o , s i m p l e y c o n f o r t a b l e p a r a los p a c i e n t e s . Se c o n s i g u e u n a r e m i s i ó n c o m p l e t a y e s table e n c o r t o t i e m p o y a u n q u e l a P C T i n f a n t i l e s e x c e p c i o n a l , e s t a
t e r a p i a s e r i a la m á s i n d i c a d a p a r a nifios y a q u e l l o s p a c i e n t e s q u e n o
pueden tolerar flebotomías repetidas.
Se p o s t u l a un m e c a n i s m o de a c c i ó n e n e l cual e l e f e c t o d e l S A M se
atribuye a que este compuesto incrementa la disponibilidad dei g l u t a t i o n h e p ã t i c o , f a c i l i t a n d o a s í la m o v i l i z a c i ó n y r á p i d a e x c r e c i S n
b i l i a r d e i h i e r r o libre t ó x i c o , a d e m á s de c o n t r i b u i r a l e s t a d o de
óxido-reducción intracelular necesario para una optima funcionalidad
de l a U R O - D .
0s
2
2
2
+
R 179
TIROSINACION DE MICROTÜBULOS Y TUBULINA EN GLÓBULOS
ROJOS DE AVES. (Tyrosination of microtubules and nonassembled tubulin in avian red cells). Beltramo, P.M.,
Arce, C A . y Barra, H.S.
Centro de Investigaciones en Química Biológica de Cordoba (CIQUIBIC). Facultad de Ciências Químicas. Universidad Nacional de Córdoba. 5016-Cõrdoba. Argentina.
E F E C T O S DE M E T A B O L I T O S DE V I T A M I N A D , SOBRE L A C O M P O S I C I Ó N DE F O S F O L Í P I D O S DE M I O B L A S T O S E N C U L T I V O ( E f f e c t s
o f v i t a m i n D3 m e t a b o l i t e s o n p h o s p h o l i p i d
composition
o f c u l t u r e d m y o b l a s t s ) . B e l 1 i d o , T . , D r i t t a n t i , L . , Bp_l a n d , R y R. de B o l a n d , A . D e p a r t a m e n t o de B i o l o g i a ,
U n i v e r s i d a d N a c i o n a l d e l S u r , 8000 B a h i a B l a n c a , A r q e n tina.
Estúdios prévios han demostrado que el terminal COOH
de tubulina ot puede ser modificado por la incorporaciõn
de un residuo de tirosina mediante la acción de tubulina:tirosina ligasa. In vitro, la ligasa actúa sobre tubulina en su estado no-ensamblado pero no sobre microtubules. Sin embargo, experimentos realizados en cortes de
cérebro sugieren la posibilidad de que in vivo la incorporaciõn se realice preferentemente sobre microtübulos,
aunque cabe senalar que esta conclusion se ve complicada por la alta velocidad de intercâmbio entre tubulina
y microtübulos. En este trabajo investigamos nuevamente
esta cuestiõn pero utilizando glóbulos rojos de polios
donde los microtübulos estân confinados a una banda marginal que intercambiaría muy lentamente con la poblacion
de tubulina no-ensamblada.
E l t r a t a m i e n t o in vivo c o n v i t a m i n a D3 m o d i f i c a l a
c o m p o s i c i ó n d e f o s f o l í p i d o s d e m e m b r a n a d e m ú s c u l o esque_
l é t i c o de o o l l o . En e l p r e s e n t e t r a b a j o s e c a r a c t e r i z a r o n l o s e f e c t o s d e m e t a b o l i t o s d e v i t a m i n a D3 e n m ú s c u l o e m b r i õ n i c o in vitro.
Se c u l t i v a r o n m i o b l a s t o s de e m b r i ó n d e p o l l o d e 12 d i a s e n p r e s e n c i a d e c o n c e n t r a c i o n e s f i s i o l ó g i c a s d e 2 5 - h i d r o x i - v i t a m i n a D3 (25OHD3) y
1 , 2 5 - d i h i d r o x i - v i t a m i n a D3 ( l , 2 5 ( O H ) 2 D 3 ) d u r a n t e 4 , 8 ,
12 y 24 h o r a s . E n f o s f o l í p i d o s i n d i v i d u a l e s a i s l a d o s p o r
c r o m a t o g r a f í a e n capa f i n a de e x t r a c t o s l i p í d i c o s de I a s
c é l u l a s s e d e t e r m i n o e l c o n t e n i d o de P y l a c o m p o s i c i ó n
de á c i d o s q r a s o s ( p o r c r o m a t o g r a f í a e n f a s e q a s e o s a d e
l o s d e r i v a d o s m e t i l e s t e r ) . E l 250HÜ3 n o p r o d u j o m o d i f i c a c i o n e s s i g n i f i c a t i v a s en I a s c o n c e n t r a c i o n e s r e l a t i v a s
de l o s d i s t i n t o s f o s f o l í p i d o s m i e n t r a s q u e e l 1 , 2 5 ( 0 H ) 2 D3 i n c r e m e n t o e l c o n t e n i d o d e f o s f a t i d i l c o l i n a
(PC)a
e x p e n s a s d e i de f o s f a t i d i l e t a n o l a m i n a
( P E ) . Los efectos
f u e r o n e v i d e n t e s a I a s 4 h o r a s de t r a t a m i e n t o y a l c a n z a r o n n i v e l e s m á x i m o s a I a s 24 h o r a s {21% i n c r e m e n t o P C ,
p < 0 . 0 0 0 5 ; 19% d i s m i n u c i ó n P E , p < 0 , 0 1 2 5 ) . L o s c â m b i o s s o n
s i m i l a r e s a l o s o b s e r v a d o s in vivo.
No s e d e t e c t a r o n d i f e r e n c i a s en c o m p o s i c i ó n de á c i d o s g r a s o s m a y o r i t a r i o s
( 1 6 : 0 , 18:0, 1 8 : l w 9 , 18:2 w6) para ningún f o s f o l í p i d o .
S i n e m b a r g o , e n I a s c é l u l a s c u l t i v a d a s e n p r e s e n c i a de
1 , 2 5 ( 0 H ) 2 D 3 s e o b s e r v o u n i n c r e m e n t o n o t ó r i o ( d e 1% a
956 d e i t o t a l d e á c i d o s g r a s o s a I a s 4 h o r a s ) e n u n á c i d o
g r a s o m i n o r i t á r i o d e P E , y e n m e n o r p r o p o r c i ó n e n P C , de
t i e m p o de r e t e n c i ó n p r o l o n g a d o . Se r e a l i z a n e s t ú d i o s p a r a l a i d e n t i f i c a c i ó n de e s t e compuesto.
Los glóbulos rojos fueron incubados en presencia de
tirosina- C en condiciones en que la sintesis de proteínas estã inhibida. Despuês de disgregar la membrana en
condiciones en que los microtübulos son preservados, e s tos fueron separados de la poblacion de tubulina noensamblada. Los resultados mostraron que la tubulina noensamblada fue marcada con tirosina- C en una magnitud
mucho mayor que los microtübulos. La baja incorporaciõn
de tirosina-^^C en microtübulos no se debe a la falta de
tubulina aceptora ya que la desintegraciõn de los microtübulos por frio y colchicina condujo a una mayor incorporaciõn de tirosina radiactiva. Estos resultados claramente apoyan la idea de que la ligasa actüa preferentemente sobre tubulina no-ensamblada. Sin embargo no se
puede asegurar que en todos los tipos de células opere
el mismo mecanismo de tirosinaciõn.
E S T Ú D I O S SOBRE L 0 C A L 1 Z A C I 0 N Y FORMAS M O L E C U L A R E S DE L A
F E N I L A L A N I L - t R N A S I N T E T A S A DE O O C I T O S DE
laevis.
( S t u d i e s on t h e l o c a t i o n and m o l e c u l a r s h a p e s o f t h e
phenylalanyl-tRNA
synthetase of
laevis
oocytes.)
B e n f t e z , R . y A r a n c i b i a , F . D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a ,
F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
(Patrocin i o : M. G a t i c a . )
La f e n i l a l a n i l - t R N A s i n t e t a s a ( F R S ) es una e n z i m a q u e
ha s i d o e s t u d i a d a t a n t o e n p r o c a r i o n t e s como e n e u c a r i o n t e s en c u a n t o a s u e s t r u c t u r a y P M , e n c o n t r a ' n d o s e
p a r a e'sta v a l o r e s que v a r i e m e n t r e 130.000 y 2 3 0 . 0 0 0 .
En una p r e s e n t a c i o ' n a n t e r i o r n o s o t r o s e n c o n t r a m o s que
l a FRS s e e n c u e n t r a e n o v a r i o de X e n o p u s l a e v i s f o r m a n do c o m p l e j o s c o n o t r a s tRNA s i n t e t a s a s ( l i s i l ,
isoleuc i l , l e u c i l , e t c . ) y otras proteínas.
En e s t e t r a b a j o r e a l i z a m o s e s t ú d i o s s o b r e l a l o c a l i z a cio'n de l a FRS e n o o c i t o s .
La enzima se e n c u e n t r a
p r i n c i p a l m e n t e en l a f r a c c i o ' n c i t o s d l i c a y no se e n c u e n t r a p r e s e n t e en membranas n i en n ú c l e o s de o o c i t o s .
Al mismo t i e m p o r e a l i z a m o s l a p u r i f i c a c i o ' n de l a e n z i m a
e n f o r m a d e c o m p l e j o y d e t e r m i n a m o s q u e l a Mr e s d e
- 2 x 1 0 " d a l t o n s , medida p o r f i l t r a c i o ' n en S e p h a c r y l
P-300.
P a r a r e a l i z a r un e s t ú d i o s o b r e l a e s t r u c t u r a
n a t i v a de l a enzima l i b r e r e a l i z a m o s una p r e p a r a c i o ' n de
l a enzima de o o c i t o s m e d i a n t e c r o m a t o g r a f í a de a f i n i d a d
a t r a v e ' s de una c o l u m n a de s e p h a r o s a - 4 B - t R N A en l a c u a l
l a a c t i v i d a d de l a e n z i m a s e p r e s e n t o ' en 2 p i c o s , uno
que e l u y e en e l f r e n t e y o t r o que e l u y o ' c o n una c o n c e n t r a c i o ' n 180 mM d e N a C l y q u e p r e s e n t o " u n a Mr d e 1 1 0 . 0 0 0
d a l t o n s medido p o r e l e c t r o f o r e s i s en g e l e s de p o l i a c r i l amida-SDS.
No s a b e m o s s i l a e n z i m a n a t i v a t i e n e u n a 0
v a r i a s subunidades de 110.000.
A l mismo t i e m p o r e a l i z a m o s l a f o s f o r i 1 acio'n de l a e n z i ma p a r a m e d i r c â m b i o s e n s u a c t i v i d a d y c o m p a r a m o s c o n
l o o b s e r v a d o c o n l a FRS d e l e v a d u r a .
Los resultados
o b t e n i d o s no s o n c o n c l u y e n t e s y se e n c u e n t r a n b a j o e s túdio.
t E s t u d i o e f e c t u a d o c o n p a t r o c i n i o d e l D I B y l a 0EA.1
CARACTERIZACION QUÍMICA PARCIAL Y PROPIEDADES DE UN GLICOLIPIDO QUE UNE TOXINA COLÉRICA.
(Partial chemical
characterization and properties of a glicolipid that bind
cholera toxin). Bennun, F .R.; Roth R.A. y Cumar, F.A.
Departamento de Química Biológica. Facultad de Ciências
Químicas. Universidad Nacional de Cõrdoba. Argentina.
r
En el mecanismo de acciõn de toxina colérica se
acepta que el gangliõsido GM1 es el "receptor" de dicha
toxina. Previamente demostramos, por ensayos de union en
TLC 5 por câmbios en los espectros de emisiõn de flúores^
cencia de triptofano, que de 6 gangliôsidos de cérebro
solo GDlb es capaz de interaccionar con toxina colérica
con una capacidad similar a GM1. En extractos de g l i c o H
pidos de células de mucosa intestinal de cerdo, hemos de_
tectado alrededor de 8 compuestos que unen toxina. Cuatro de ellos se comportan similares a GM1, por critérios
cromatográficos y ensayos con neuraminidasa. Las diferen
cias entre ellos podrían deberse a la calidad dei ãcidcT
siãlico y/o porciõn hidrofõbica. Los restantes migran en
TLC similares a GDlb. Sin embargo, uno de estos ültimos,
purificado a homogeneidad cromatogrãfica, revela ausência
de ácido siãlico segün reacciõn colorimétrica y comporta^
miento en DEAE-Sephadex. La identificación química parcial de dicho compuesto por GLC indica una composición
porcentual de ácidos grasos: palmítico 20, palmitoléico
10, esteãrico 14, oléico 26, no identificados 30; y una
composición molar relativa de glücidos: glucosa 1, gala£
tosa 2, fucosa 1. No se descarta la posible presencia de
hexosamínas y esf ingosinas. Por otro lado, parece existir
una relaciôn entre la estructura química dei compuesto
en estúdio y aquella que determina los grupos sangüíneos
ABO ya que puede ser inmunodetectado en TLC con suero
anti-A õ anti-AB pero no con anti-B. Esta propiedad podría ser relevante en la correspondiente patologia en hu
manos. No conocemos que se haya descripto ningün compues
to sin ãcido siãlico, que contenga fucosa y que tenga la
propiedad de unir toxina colérica; ni que exista antecedente de relaciôn alguna entre compuestos que unen toxina y determinantes de grupos sangüíneos.
R 180
INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES DE OPERACION EN LA FORMACION DE PELLETS PARA PRODUCCION DE ÁCIDO CITRICO(Influence of operating conditions on pellets formation for
use in citric acid production)Benuzz*,D.y Segovia,R.
Cátedra de Microbiologia General e Industrial,Facultad
de Química,Bioquímica y Farmácia.Universidad Nacional
de San Luis.San Luis.Argentina.
Es de gran importância para el buen rendimiento de un
proceso de obtencion de cítrico,por Aspergillus niger,
(A.n.) contar con pellets pequenas laxas y esponjosas.
En la estructura influyen Ias condiciones de operaciõn
de la etapa de formacion.Se planteõ entonces la necesidad de manejar Ias distintas variables,cada vez que se
inicia un proceso de producciõn.Paralelamenta se intente
dar explicaciõn a los fenômenos observados.
Me todos:Con esporas de A.n.,de cepas buenas y malas productoras de ãcido cítrico,se inocularon médios líquidos
de formacion de pellets.Se extrajeron muestras a Ias 812-24-36 y 48 h.Durante el proceso se realizo:cambio de
bafles,variaciõn en agitaciõn,câmbios en la proporciõn
C:N del medio,variaciõn del tamano dei inõculo.
Resultados v_ discusi6n:La calidad y estructura de Ias
pellets fue adecuada en erlenmeyers con bafles de acero
inoxidable que producen mayor turbulência que los de vidrio.La agitaciõn se ajusto a 200 rpm o sea que no es
factor contraproducente en la formacion de pellets.El
tamano dei inõculo debe ser bajo pero esto es relativo,
segun nuestra experiência,a la disponibilidad de C.Las
mejores pellets fueron Ias extraídas a Ias 36 h de agitaciõn, presentãndose como tiempo favorable en la maduraciõn de la pellet.Las cepas clasificadas como malas
productoras de cítrico,aumentan su productividad y rendimiento al usarlas en forma de pellets de características õptimas,destacando así la importância de manejar el
conjunto de condiciones que permiten mayor êxito en la
obtencion de pellets pequenas,laxas y esponjosas.
H E T E R O G E N E I T Y OF LYS0S0MES: T H E E F F E C T OF CHL0R0QUINE
ON T H E E Q U I L I B R I U M D E N S I T Y O F LYSOSOMAL P O P U L A T I O N S .
B e r t i n i F . and Colombo I . , IHEM-CONICET; U n i v . N a c . de
Cuyo, Mendoza, A r g e n t i n a .
Lysosomes a r e heterogeneous populations o f s u b c e l l u l a r b o d i e s , and we t h i n k t h a t t h e l y s o s o m o t r o p i s m o f
some d r u g s m a y b e u s e f u l t o d i f f e r e n t i a t e
them.
A lysosomal f r a c t i o n separated by d i f f e r e n t i a l
c e n t r i f u g a t i o n between 1,935 g x 3 m i n a n d 27,000 g x
15 m i n f r o m m o u s e H v e r a f t e r i n j e c t i n g t h e d r u g o r
s a l i n e ( c o n t r o l s ) , w a s a n a l y z e d 1n a P e r c o l l g r a d i e n t
f o r acid h y d r o l y t i c a c t i v i t y and drug d i s t r i b u t i o n .
(L)
In t h e c o n t r o l s , t h e a c t i v i t y o f a l l enzymes studied
p r e s e n t e d a peack i n t h e zone o f h i g h d e n s i t y (1.147
g / m l , dense lysosomes) anda n o t h e r one i n t h e zone o f
l i g h t d e n s i t y (1.070 g / m l , L i g h t l y s o s o m e s ) . With t h e
e x c e p t i o n o f a c i d phosphatase most o f t h e e n z y m a t i c
a c t i v i t y equilibrated with t h e high density lysosomes.
I n t h e CQ t r e a t e d a n i m a l s t h e r e w a s a s h i f t o f t h e
enzymatic a c t i v i t i e s from t h e dense t o t h e l i g h t
l y s o s o m e z o n e , a n d t h e amount o f s h i f t e d
activity
increased with t h e time elapsed a f t e r t h e i n j e c t i o n .
When t h e L p a r t i c l e s w e r e i n c u b a t e d i n v i t r o w i t h C Q ,
o n l y moderate amounts o f a c t i v i t y changed i n d e n s i t y .
T h e r e s u l t s s u g g e s t t h a t b o t h i n t h e 1n v i v o a n d
i n v i t r o e x p e r i m e n t s CQ p e n e t r a t e i n t o t h e s e c o n d a r y
lysosomes. I n t h e f i r s t conditions these l a t t e r increase
i n number d u e t o t h e v a c u o l a t i o n c a u s e d b y t h e d r u g ,
and c o n s e q u e n t l y more enzyme a c t i v i t y c h a n g e i n
equilibrium density with time.
The lysosomes r i c h i n acid phosphatase i n t h e l i g h t
z o n e may r e p r e s e n t p r o l y s o s o m e s f r o m GERL ( G o l g l Endoplasmic - R e t i c u l u m - L y s o s o m e s ) .
ESTÚDIO DE LA CIT0L0GIA VAGINAL DE LA LLAMA (LAMA GLAMA) EN CAUTIVERIO Y SU RELACI0N CON EL CICLO ESTRAL.
(Study of the relationship between the vaginal cytology and the estrus cycle 1n the captive Llama-Lama Glama). Bemal. S. A.; urquleta. M.B.; Bastres, O.C.;
Ferrando. R.G. Sept. Fomento de la Producclõn Animal;
Depto. Ciendas Biológicas Animales.Fac. Cs. Vet. Pec.
Patrocínio: G.R. Ferrando
Se realizo un estúdio cualltatlvo de la morfologla d tológlca vaginal tendi ente a caracterizar el fundonamlento ovirlco. Se emplearon 12 ejemplares adultos; du
rante el período de novlembre - abril de 1986 obtenléndose las muestras semanalmente. Desde el punto de v1s_
ta hlstolõglco se empleó la técnica de Papanlcolau des_
cHto por López y Col.(1982); para la Interpretadón
de los frotis se utlHzó la clas1f1cac1ón descrita por
Schutte (1967). Se determino que el ceio citológlco
tuvo una duradón de 24 a 31 dias, en tanto que el anes_
tro dtológlco presents un rango de 7 a 14 dias. Este
ceio
dtológlco, tuvo una duradón mayor en plena
temporada reproductlva. No se observaron diferencias
en la dtologfa vaginal entre Ias hembras en los distintos estados reproductlvos, solo se evidencio una
abundante presencia de leucodtos durante el Inicio
de la gestadón.
PARÂMETROS T E R M O D I N Â M I C O S DE C 0 M P R E S I 0 N DE CAPAS MONO
MOLECULARES DE G L I C 0 E S F I N G 0 L I P I D 0 S SOBRE SUBFASES DUE
C O N T I E N E N , G L I C E R O L , UREA Y S A C A R 0 S A . ( T h e r m o d y n a m i c
p a r a m e t e r s o f c o m p r e s s i o n o f q l y c o s n h i n q o l i n i d s monol a y e r s on subphases c o n t a i n i n g g l y c e r o l , u r e a and
s u c r o s e ) . Bianco, I . D .y Maggio, B.
D e p a r t a m e n t o d e O c a . B i o l ó g i c a - C I Q U I B I C , F a c u l t a d de
C i ê n c i a s Q u í m i c a s , U n i v e r s i d a d N a c i o n a l de C ó r d o b a .
Argentina.
Se e s t ú d i o l a v a r i a c i o n c o n l a t e m p e r a t u r a ( 1 0 - 3 5 ° C )
de l a e n e r g i a l i b r e d e c n m p r e s i ó n ( A F c ) p a r a c a p a s m o n o m o l e c u l a r e s de g l i c o e s f i n g o l í p i d o s ( G r > L s ) ( G a l C e r ,
sulfátido, G m , G
y G
) y fosfolínidos (PLs)
(dpPC y dpPE) s o b r e s u b f a s e s c o n n l i c e r o l , u r e a y s a c a r o s a ; se c a l c u l a r o n l o s canbios e n e n t a l n i a ( A H c ) y
e n t r o n i a ( A S c ) d e i nroceso de emoanuetamiento bidimens i o n a l . C o n r e s p e c t n a N a C l 145 mM, l o s t r e s s o l u t o s
p r o v o c a n un aumento d e i A F c d e t o d o s l o s GSLs y P L s
estudiados; l a dependência d e l A F c con l a temperatura
es d i f e r e n t e , l o cual se t r a d u c e en d i f e r e n t e s v a l o r e s
de A H c y A S c . E n g e n e r a l A Sc y A H c d e c a p a s m o n o m o l e c u l a r e s d e dpPC y d p P E s o n m u y n o c o m o d i f i c a d o s Dor
l a p r e s e n c i a de e s t o s s o l u t o s e n l a s u b f a s e . E l n r o c e s o
de c o m p r e s i ó n d e G S L s e n p r e s e n c i a d e n l i c e r o l o c u r r e
c o n u n c a m b i o e n A S c h a c i a v a l o r e s más D O s i t i v o s , i n d i cando un mayor d e s o r d e n a m i e n t o . Sobre s a c a r o s a o c u r r e
lo o p u e s t o , y se o b s e r v a que e l nroceso de r e d u c c i ó n
d e W r e a molecular está entrópicamente desfavorecido y
entálpicamente f a v o r e c i d o . En subfases conu r e a , se
o b s e r v a una marcada d e p e n d ê n c i a de l a m a g n i t u d y s i g n o
de l o s p a r â m e t r o s t e r m o d i n â m i c o s c o n e l t i p o d e g r u p o
p o l a r d e l G S L . E s t o s e f e c t o s probablemente se r e l a c i o nan c o n fenômenos de h i d r a t a c i ó n - d e s h i d r a t a c i ó n de l a
interfase.
D
l
a
T l b
R 181
VINCULACION DE LOS RESÍDUOS DE HISTIDINA CON LA FUNCION
BIOLÓGICA DE LA FAMÍLIA DE LAS HORMONAS DE CRECIMIENTO.
(Histidine residues in the biological activity of the
growth hormone family). Biscoglio de Jimenez Bonino, M.
J., Cascone, 0., Fukushiroa, J.G. y Santome, J.A.
Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (UBA CONICET).
La etoxiformilaciõn de las hormonas de crecimiento de
origen bovino y eqüino permitio vincular a los residuos
de histidina 19 y/o 21 con la función biológica de estas
proteínas. Ante la importância de este hallazgo se exten
dió este estúdio a la de origen humano.
Estas proteínas poseen tres residuos de histidina en
su molécula.
La digestion tríptica de derivados convenientemente
modificados y el aislamiento y purificaciõn de los péptidos correspondientes.mediante cromatografía líquida
de alta performance y modulacion de hidrofobicidad,per_
mitieron identificar a la histidina 169 como el residuo
más lento y a Ias 19 y 21 como los mas reactivos. En la
hormona humana solo dos se etoxiformilaron en ausência
de desnaturalizantes, la histidina 151 fue la mas reac__
tiva, la 21 no reaccionó y la 18 manifesto reactividad
intermedia.
La influencia de la modificación química sobre la acción biológica se evaluo midiendo la capacidad de Ias
hormonas modificadas para unirse a los sitios de unión
específica en hígado de rata. La etoxiformilaciõn de Ias
histidinas 19 y 21 de Ias hormonas bovina y equina anulo
esta capacidad
El derivado obtenido con la hormona de crecimiento humana, en el que la histidina 21 es no reactiva retuvo el
40 % de la capacidad de reconocer los sitios de unión es
pecífica.
RELACIÔN ENTRE PRODUCCION DE PROSTAGLAND I NA-E
Y EXCRECION RENAL DE SAL Y ÁGUA EN RATAS
HEMBRAS HIPERTENSAS.
(Re1 at íonshIp
between
prostag1andln-E product Ion and renal salt and
water excret Ion In female hypertensive rats).
R. Bltran y B. Zamorano. Depto. Cs. Ecológicas,
Facultad de Ciências, Universidad de Chile.
2
2
Prostagtandina-E2 ( P G E 2 ) además de su accIÔn
dturétlca y natr I urét I ca , modularia la reactividad vascular a agentes prciores.
Nosotros
estud Iamos si aI aumento de la pres Ion arterial (PA) producIdo por sobrecarga crÓnIca de
preslón (SCP) , se asoclaba a câmbios de la pro
ducclón de P G E 2 renal y de la excreclón de orj_
na y electrol I tos.
La SCP se Indujo en ratas S. Dawley adultas,
por constrtcclén aórtfca sub-dIafragmátIca. Se
flifdtô ta PA y se determino la concentracion
de P G E 2 y «lectrol Itos (Na y K ) , en plasma,
ortna y medula renal a los 7. 15 Y 30 dfas des_
puis de 1 a I ntervencIôn qu I rúrgI ca.
Los resultados demuestran que en ratas con
SCP: 1 ) el aumento de la PA desde un valor
control de 1 1 5 * 2 . 7 • 1 6 6 1 2 . 6 mm de Hg, se asocló a un 2 70% de aumen to de la concentracion
de P G E 2 p1 asmatIca; 2 ) aunque no hubo dlferencta significativa de la concentracion de P G E 2
en tejfdo renal, la excreclón urinaria de PGE
aumenta a los 7 dfas: de 2 2 . 4 ± 1 . 7 1 • 5 4 . 4 * 1 . 7 2 ;
a los 1 5 dias: de 2 2 . 7 H . 3 1 » 5 4 - 9 * 3 . 4 ; y • los
30 dias: de 2 5 . 1 1 1 * 1 6 a 6 6 ± 3 . 5 n g / 8 h; 3 ) este
aumento se correlaciono con una mayor excrec ión
de orlna y electrolltos (P < 0.001).
Estos resultados sug leren que un mecanismo
reiacIonado con PGE participa en la respuesta
compensator I a a este tipo de sobrecarga.
(Financiado por Proyecto 1 1 3 1 , C0NICYT).
+
+
2
2
EFECTO DE REIMPLANTE DE ADENOHIPOFISIS SOBRE RESPUESTAS
ESTROGENICAS EN RATAS ADULTAS. (Effect of adenohypophyseal reimplants on estrogenic responses in t he adult rat). Blarney, C., Gonzalez, G. y Arriagada, R.
Universidad Metropolitana de Ciências de la Educación.
Se ha postulado que los estrógenos presentan a lo menos dos mecanismos de acción independientes entre sí; de
tipo genómico con desrepresión del ADN y no genómica mediado por eosinófilos. Condiciones de hiperprolactinemia
provocan infertilidad. El objetivo de este trabajo fue
estudiar el reimplante de adenohipófisis (AH) sobre respuestas estrogénicas.
Ratas Sprague dawley adultas, mantenidas en condiciones habituales de laboratório con libre acceso al agua y
comida fueron ovariectcmizadas, 9 dias después reimplantadas con una AH o un trozo equivalente de corteza cerebral (CC); al cabo de 5 dias los animales de distribuyeron al azar en 4 grupos: I CC-suero; II CC-estradiol (E2)
III AH-suero; IV AH-E2. El E2 fue inyectado endovenoso
en dósis de 300 ug/Kg; a Ias 06:00 y ?4:00 horas, los
cuernos uterinos fueron pesados y procesados histológica
mente para cuantificación de eosinófilos y morfometría.
En animales AH no tratados se encontro un aumento de
la densidad celular en endometrio superficial y una disminución de la altura del epitelio luminal. Se demostro
además que el E2 indujo mayor edema en el endometrio superficial de animales AH que en CC; en cambio el E„ indu
jo menor hipertrofia miometrial y eosinofilia uterina,
en animales AH que en animales CC. Se observo además que
la hipertrofia luminal inducida por E^ fue deprimida en
animales con AH.
Los resultados indican disociación en Ias respuestas
estrogénicas y atenuación de ellas bajo condiciones de
hiperplactinemia inducida por reimplante de AH.
Financiado por fondo: Proyecto BL 85-011 Universidad MeTropolitana de Ciências de la Educación y Proyecto B 14
93-8655 Universidad de Chile.
ESCHERICHIA C0LI - 2',4-DIHIDROXICHALCONA: SISTEMA
MODELO PARA LÃ ENSENANZA DE CINETICA DE REACC3DN EN
BIOQUÍMICA. (Escherichia coli - 2',4-dihydroxychatccne: Model System for the reaction kinetic teaching in Biochemistry). Blanco, S.E., Segovia, R.F.,
Debattista, N.B., Pappano, N.B. y Ferretti, F.B.
cátedrasde Química-Física II y Microbiologic Industrial, Facultad de Química, Bioquímica y Farmácia.
Universidad Nacional de San Luis. San Luis Argentina.
La mayorfa de los procesos bioquímicos no son fenômenos
especiales sino m£a bien el resultado de un conjunto de
transformaciones que obedecen Ias mismas leyes que Ias
reaccíones químicas comunes. For ello numerosas matérias
de la Carrera de Bioquímica que hacen a la profesi6n en
sí (Bacteriología, Análisis Clínicos, Farmacologia,Química Biológica, e t c ) , requieren para su desarrolló el
conocimiento prévio de conceptos y leyes fundamentales
de Cinetica Química. For otra parte se observa frecuentemente que la ensenanza y aprendizaje experimental de
los temas cinéticos no se realiza directamente sobre sis
temas biolâgicos. Esto provoca en los estudiantes de
Ciências de la Vida un cierto desinterés por la Cinêtica, a la cual ven como un compêndio de recetas y procedimientos matemáticos de difícil aplicaciôn. En este tra
bajo y para facilitar la integraciõn de conocimientos ba
sicos de Cinática de Reacciõn con asuntos y cuestiones
que importan a la Bioquímica Aplicada, se presente un sis
tema original muy conveniente para la ensenanza, aprendizaje y aplicaciôn de conceptos como velocidad específica de crecimiento de microorganismos, tiempo de generaciãn, mecanismos de inhibiciÕn bacteriostatics, etc .
Se determinan Ias curvas da crecimiento de E.co£í &TCC
25 922) en caldos nutritivos adicionados de 2',4-dihi droxichalcona obtenida por sintesis. Las mediciones cinéticas se realizan empleando un método turbidimétrico
a 720 nm. Las experiências propuestas son muy sencillas
de efectuar, utilizan herramientas matemáticas muy simples y solo requieren instrumental comün de laboratório.
R 182
DETERMINACION DE LA VELOCIDAD ESPECIFICA DE INHIBICICS
DE MICROORGANISMOS Y DE CONSTANTES DE ESTABILIDAD DROGA - TRANSPORTADOR QUÍMICO MEDIANTE REGRESION NO UNEAL
(Determination of inhibition specific rate of microorganisms and stability constants of drug - chemical carrier by no lineal regression). Blanco, S•E., Segovia,
R^F., Debattista, N.B., Pappano, N.B. y Ferretti, F.H.
Cátedras de Química-Física II y Microbiologic I n d u s trial, Facultad de Química, Bioquímica y Farmácia. Uni
versidad Nacional de San Luis. San Luis. Argentina.
La velocidad de crecimiento de los microorganismos depende de uns serie de variables y factores tales como
pH, temperatura, «ireación, agitaciõn, etc. Recientemente se determina que el desarrollo de bactérias gram
positivas y gram negativas en caldo nutritivo a 33 °C,
y pH 7 ajustado con buffer PO.H K:PO HNa_, disminuye
notablemente con «1 agregado 3e cantidades de flavonoi
des menores que 100/tg/ml. El efecto bacteriostático ê
jercido por estas sustancias se interpreta mediants un
mecanismo de inhibiciãn de tree etapas que involucre la
formaciõn de un complejo droga - transportador químico
La dependência de la velocidad de crecimiento específi
ca de los microorganismos estudiados con la concentracion de droga adicionada al medio de cultivo se explica por medio de una ecuaciân cinética con cuatro parSmetros. A partir de esta ecuaciân, usando un método de
regresiôn no lineal, se calcula la velocidad específica da inhibiciãn de cepas de Staphylococcus auJitui y
UéíVUdUcL
coti (ATCC 25 923 y 25 922), y tambiín la
constante de estabilidsd de los respectivos complejos
flavonoide - transportador químico. (El programa de ajuste utilizado se basa en el método de Newton para ha
cer mínima la diferencia entre los valores medidos y~
los valores calculados mediante la funciõn f(x) con pa
râmetros a . ) .
PROCESAMIENTO IN VITRO DE SP
TRADUCIDA POR mRNA DE
PLACENTA HUMANA (In vitro processing of SP translated
by human placental mRNA).
Bocco J.L.. Flurv A. y Patrito L.
Departamento de Bioquímica Clínica. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Nacional de Cordoba.
Argentina.
En un trabajo previo identificamos al precursor
de SP
traducido in vitro por poli(A) RNA total de
placenta humana, cuyo peso molecular fue de 31±2 Kd.
En el presente trabajo, se hicieron ensayos de procesamiento in vitro del mismo suplementando el sistema
de tradueción acelular con vesiculas microsomales
de pancreas de perro, ensayos de proteolysis limitada
post-traduccional previa estabilizaciòn de las vesiculas con dibucaina e inmunoprecipitación de SP-^.
La imagen fluorográfica de un gel de poliacrilamida SDS donde se separaron los productos inmunoprecipitjj
dos indicaron la existência de un péptido de 28 Kd
y otro de 46 Kd que son protegidos del ataque de las
enzimas
proteoliticas
adicionadas exógenamente. El
péptido de 46 Kd no se observo cuando el produeto
inmunoprecipitado se sometió a digestion con endoglicosidasa H. Un ensayo control, que contenía además
de proteasas, tritón X-100 0,5 %, no permitió observar
banda alguna.
+
Se concluye que el péptido traducido de 31 Kd
es traslocado al interior de las vesículas microsomales, sufriendo el clivaje de su péptido senal, cuyo
peso molecular seria de 3 Kd, originando la banda
de 28 Kd. La banda de 46 Kd representaria la molécula
madura glicosilada y los pesos moleculares de 90-120
Kd asignados por otros autores a la proteína circulante
en plasma podrían corresponder a formas diméricas
y triméricas de esta molécula.
CÂMBIOS EN LA COMPOSICION DE (GLICO) PROTEÍNAS CUTI
CULARES DURANTE LA METAMORPOSIS EN LA MOSCA MEDITE^
RRANEA Cer-atltls capitate. (Changes In cuticular"
(glyco)protein composition during the metamorphosis of
the medfly Ceratltis eapitata)
Boccaccio, G.L. y Quesada Allué, L.A.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas, "Fundación
Campomar", (1405) Buenos Aires, Argentina
La síntesis y deposición de sucesivos exoesqueletos cuticulares a lo largo del ciclo de vida de los
insectos constltuye un excelente modelo de diferenciación. Sus principales cemponenetes son quitina y
proteínas.
Se estudiaron Ias (glico)proteínas cuticulares insolubles en soluciones salinas y solubles
en SDS 1% (o 7M urea). Los fragmentos cuticulares,
liberados de residuos celulares, se separaron de la
cutícula ]arval tanlflcada (puparlo) por flotación
diferencial en soluciones salinas. Se analizaron Ias
proteínas, parcialmente purificadas, por electroforesis en gples nativos y desnaturalizantes.
Se descrlben 11 proteínas mayoritarias en larvas tardias
(LPC) y 28 proteínas pupales (PCP). Estas últimas
aparecen secuencialmente a lo largo dei estádio (13
son tempranas, de Ias cuales sólo 5 son permanentes,
y 11 tardias). Se detecto la presencia de una proteína específica dei cambio de larva a pupa.
Las
LCP exhiben un peso molecular aparente menor de 40 KD,
en tanto que Ias PCP parecen de tamanos de hasta 100
KD.
Se identificaron 2 glicoproteínas larvales y 11
glicoproteínas pupales tempranas por vários métodos
[Hidrólisis química y enzimática, P.A.S.,
"Affinoblotting"
(Con.A/peroxidasa/ sustrato cremógeno)
etc.3 Se concluye que diferentes grupos de (glico)
proteínas se manifiestan secuencialmente, reflejando
probableniente un fenômeno de actlvaeión/desactivación
de genes específicos a lo largo dei ciclo de vida.
Por analogia con lo eonocldo en Drosophila melanogaster, esta expresiõn estaria regulada por la hormona
de la muda, 20-hidroxiecdisona.
AISLAMIENTO Y C A R A C T E R I Z A C I O N D E UNA/3-LACTA M A S A D E A Z O S P I R I L L U M L I P O F E R U M . (Isolation and
characterization of a /3 -lactamasa from Azospirillum lipoferum). Boggio, S.B., Díaz Ricci, J.C., de Mendoza.D.
y Roveri, O.A.
Centro de Estúdios Fotosintêticos y Bioquímicos (CONICET, F.M. Lillo, Universidad Nacional de Rosário) Suipacha 531, Rosário, Argentina.
Azospirillum lipoferum es un microorganismo habitante
dei suelo muy resistente a ampicilina. Se ha sugerido que
esta resistência se deba a la presencia de una actividad
tipo /b -lactamasa pero no se han demostrado, hasta ahora,
evidencias conclusivas.
Se ha aislado y parcialmente purificado una enzima
con actividad de fb -lactamasa a partir de células de
Azospirillum lipoferum RG20. Esta enzima posee un peso
molecular de aproximadamente 28.500, es capaz de hidrollzar penicilina (KM-155 u M ) y nitrocefina (KM-27 u M ) ,
es inhibida por ãcido penicilãnico sulfona (KI=50 u M ) y
no requiere cationes divalentes.
La enzima se produce a un nivel basal bajo que aumenta unas quince veces con la adiclõn de benzilpenicilina; este aumento es bloqueado por la presencia de cloranfenícol o rifampicina.
En suma, Azospirillum lipoferum R G 2 0 produce una
/J -lactamasa inducible, probablemente responsable de la
resistência dei microorganismo a los antibióticos /3 -lactam icos.
Subsidiado por C O N 1 C E T y Fundacifin R o e m m e r s (Argentina).
R 183
COMPOS ICI ON Y FLUI DEZ DE LIPIDOS AISLADOS DE
LIPIDÜAZUCAHES EN RHIZ0BIUM TFTFUL-II
MEMBRANAS DE ERITROCITOS HUMANOS ES FE ROC ITI COS
(Lipid linked sugars in Rhizobium trifolii) Bosch,
(Composition and fluidity of lipid Isolated
H.j
Inón,
N.,
Dankert,
Instituto
de
from membranes of human spherocytic erlthroInvestigaciones Bioquímicas Pundaclón Campomar,
cytes) . Bon Ilia S. ,CarreRo C. , UI I r i ch H ., LÓpez L.Facultad de Ciências Exactas y Naturales, UBA y
Montai ar Y . , Celedõn G.,Òepartamen tos de FI s i o I o C0NICET, Buenos Aires, ARGENTINA.
gTÜ No rma1 y Pa t o T ó g I ca,Bioquímica y Química,
Bactérias gram-negativas del gênero Rhizobium
Facultad de Medicina, Universidad de Valparaiso.
infect an raices leguminosas y forman nódulos donde
(Pat roc 1nlo: C. Behn).
se flja nitrógeno atmosférico. Los exopolisacáridos
En membranas de erltrocitos humanos esferocÍtlcos con esqueleto proteíco defectuoso observa
mos un aumento de la flutdez de la matriz llpfdica. En el presente trabajo se Investiga la po
sibtlldad que eIlo se deba a alterac(ones en la
composición llpfdlca de la membrana y en la
organizaclõn de los Ifpidos aisI ados.Extractos
1 Ip fdI cos dc memb ranas es ferocÍ11cas y norma 1es
se obtienen segün el método de Folch modificado.
La cromatografía bidimensional en capa fina y
la cromatografía gaseosa no Indican diferencias
en cuanto a fosfolípidos y icI dos grasos respec
tlvãmente.La re laclón molar co leste rol/fos foiípldos fue 0 . 9 9 7 * 0 . 1 1 7 en membranas esferocítlcas(n-M y 0 , 9 8 3 * 0 . 1 0 2 en no rma 1 es . L I pos ornas
unI 1 ame 1 a res de extractos de lípldos de membranas esferocítIcas y normales, preparados por el
método de Inyecclón de los lípldos disueltos en
c lo ro fo rmo a buffer sail no p H 7 * 4 ,se fncuban en
presencia de 3 4 u m o 1 e s / 1 de plreno y se separan
de mieroagregados por filtracl6n en BloGel P-30.
La relaciôn de la intenstdad de fluorescencla
excímero/monomero,usada como Indicador de fluldez fue 0.1*43*0.03 en normales ( n - 3 ) y 0 , 1 6 0 y
0 . 1 3 2 en dos pacientes esferocíticos.Se cone 1 u ye que el aumento observado en el eri trod to no
puede atribuirse a alteraclones en los lípldos
aislados.Las modiflcaclones In situ pueden deberse a defectos en el esqueleto proteíco de la
membrana. DlCT (UV).
(EPS) que estas bactérias producen, parecen estar
involucrados en Ias primeras etapas de infección, y
por lo tanto de la nodulación. Se ha iniciado el
estúdio de la blosíntesis in vitro del EPS que produce Rhizobium trifolii U 2 2 6 . La unidad repetitiva
propuesta para este EPS es la siguiente (Jansson et
al., Carb. Res. 75 (1979) 207-220).
DISTRIBUCIÔN SUBCELULAR DE LA PRENILTRANSFERASA EN FLAVEDO DE Citrus sinensis (Subcellular
distribution of prenyltransferase in Citrus
sinensis flavedo). Bravo, C, Dep.Bioq. y Biol.
Mol., Fac.Cs.Quim. y Farm. U, de Chile (Patrocinio: Dr. 0. Cori).
CINETICA DEL TRANSPORTE DE L-ALANINA Y L-LEUCINA EN LA
INTERFASE SANGRE-EPITELIO GÁSTRICO. (Kinetic of Lalanine and L-leucine transport at the blood - tissue
interfase of gastric epithelium). Bravo, I.*, Fuentes,
O-** y Pozo, M.*. *Depto. de Fisiologia, Fac. de Ciências Biológicas y R. Naturales, ** Depto. de Ciências
Básicas, Instituto Profesional de Chilian.
El gran número de isoprenoides con diferentes funciones, que se forman en tejidos vegetales, sugieren la existência de vias paralelas para su biosíntesis presentes en distintos
compartimentos subcelulares.
Se estúdio la distribuciôn de la preniltransferasa, enzima que cataliza una de las etapas
comunes para la bioslntesis de los terpenos.
La actividad enzimática se encontro asociada a
cromoplastos intactos y a una fracción soluble.
Ambas formas de enzima se compararon en cuanto
a masa molecular, requerimiento de metales bivalentes, comportamiento frente a reactivos modificadores de aminoácidos, estabilidad, etc,
Los resultados indican que existen diferencias en el comportamiento de ambas formas de
enzima, lo que confirma que la preniltransfera
sa de la fracciÓn soluble no corresponde a una
enzima liberada por ruptura de los cromoplastos
La presencia de dos formas de preniltransferasa
ubicadas en diferentes compartimentos subcelulares, apoya la existência de vias paralelas
para la biosíntesis de los diferentes compuestos de estructura isoprénica.
Estúdios prévios realizados en nuestro Laboratório
sugieren que en la interfase sangre-epitelio gástrico
operan sistemas de transporte de aminoácidos considerados universales. En este trabajo, disefiado con el fin
de caracterizar Ias agencias que transportan L-alanina
y L-leucina, se presentan los resultados obtenidos en
estômago de perro.
Trabajo dirigido por L.M.Pérez.
Proyectos 5 0 0 1 / 8 5 FONDECYT y B 2 0 7 8 - 8 6 2 2
DIB.
4 G l c A " UGlc—tele
6
\
G a l — 3 G l c — 4 G l c — talc
<)
O
Pyr Pyr
Utilizando un preparado enzlmátieo, consistente
en células permeabillzadas con EDTA, se ha observado incorporaciõn de radioactividad a irate rial
extralble con cloroformo metanol agua en relaciôn
1:2:03,
luego
de
incubar
en
presencia
de
U D P G l c ( C ) , U D P G l c ( P ) , y UDPGlcA( C). Estos
compuestos son lablles en medio ácido, sensibles a
hidrogenación catalitica en presencia de platino;
por
tratamiento
alcalino
suave
dan
ésteres
fosfóricos cíclicos y se retienen en columnas de
DEAE celulosa en metanol 99%. Estas son características de prenildifosfoazúcares. La estructura
de la porción oÜEosacarídica de estos ccmpuestos
está en estúdio. Se piensa que son intermediários
lipídicos en la sintesis del EPS.
14
32
14
En un segmento dei cuerpo dei estômago perfundido
a flujo constante (0,23 ml/min.g). con Tyrode-albúmina,
utilizando la técnica de dilución de trazadores en mezcla, se encontro que alanina-H^ y leucina-H^ son captados en un 30,6 + 12,2 y 35,1 t 13,2, respectivamente.
La captación celular (U) de alanina-H-* fue inhibida por
adición dei isómero frio (2 a 12 mM) o reemplazando al
N a por colina. Además fue inhibido por L-serina. El in
flujo de alanina (v = Ca.U.£>.) sigue una cinética de sa
turación con un kM aparente de 2,56 mM y una Vmáx =
258,5 nM/ml.g. La captación de leucina-H-* fue inhibida
en presencia dei isómero frío (de 10 a 60 mM) y muy levemente en ausência de N a .
+
+
Aparentemente en la membrana basolateral dei epite_
lio gástrico operan al menos dos sistemas de transporte
de amino ácidos neutros. Uno dependiente de N a , que
exhibe afinidad relativamente alta para la L-alanina y
probablemente también para la serina y cisteina (tipo
ASC). Otro, que aunque de menor afinidad, posee mayor
especificidad por L-leucina y probablemente también por
otros amino ácidos neutros de cadena larga.
+
Proy. Dl. N° 20.33.17 y 33.03.22
R 184
ES LA RNA POLIMERASA I DE LEVADURA UNA PROTEINA GLICOSILADA? (Is yeast RNA polymerase I a glycoprotein?).
Bravo,M., Riffo,R. y Bull,P. Laboratório de Bioquímica,
Dpto. Biologia Celular, Facultad de Ciências Biológicas,
Pontifícia Universidad Católica de Chile.
La RNA polimerasa I de levadura es una enzima que cataliza la síntesis de RNA riboscmal y se ubica en el nucléblo. Se desconocen Ias senales que determinan su localizacióh subcelular. Por otro lado, se sabe que la
glicosilaciõn de ciertas proteínas es un proceso funda mental para la transición Gl/S en levadura, y que levadu
ra tiene vias de glicosilaciõn semejantes a Ias de organismos superiores. En este trabajo se pretende averi guar si la RNA polimerasa I presenta hidratos de carbono
en su estructura.
La enzima se purifico a homogeneidad. Se determino
su afinidad por la lectina Concanavalina A (Con A) en q o
lumnas y en geles desnaturantes. Se analizó la activi dad de la enzima en presencia de la lectina. Además, se
adaptaron levaduras a crecer en un medio sin gluoosa, y
se realizaron experimentos de inoorporaciõn in vivo de
manosa - 2 - H a cultivos en fase logarítmica de levadura
adaptada, luego de los cuales se inmunoprecipitõ la enzi^
ma a partir dei extracto. Se determino la radiactividad
asociada a Ias subunidades por fluorografía.
Los resultados muestran que la actividad de la RNA po
limerasa I no se modifica en presencia de Con A hasta al
menos 4.5 pM. La enzima se retiene en columna de Con ASepharosa y es eluída con NaCl 0,1 M, pero no oon a-me tilmanósido. La subunidad de 137.000 une Con A-FITC,
aunque en menor proporciõn que glicoproteínas conocidas
como IgM o ovoalbdmina. Por marcación in vivo esta misma subunidad incorpora manosa-2- H en pequena cantidad.
Los datos disponibles hasta este momento, sugieren
que si hubiera un componente hidrato de carbono en la en
zima, este no seria importante.
3
3
EFECTO DEL ÁCIDO ARAQUIDONICO EN LA CONSTITUCION D E LOS LIPIDOS DEL TRIATOMA INFESTANS
(Vinchuca). Effect of arachidonic acid in the lipid
constitution of Triatoma infestans. Vinchuca). Brenner.
R.R. y Bernasconi. A.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata
(INIBIOLP),
UNLP-CONICET,
Facultad
de
Ciências
Médicas, Universidad Nacde La Plata, Argentina.
En llneas generales el ãcido linoleico no es sintetizado
por los insectos. Tampoco es convertido en ãcido
araquidónico como sucede con otros animales. El T.
infestans a diferencia de otros insectos y por ser
hematõfago ingiere ambos ãcidos con la sangre. En
consecuencia, interesõ estudiar si existe una utilizaciõn
especial dei ãcido araquidónico por ese insecto. Por
ello se analizõ la composiclón lipTdica y la composición
de los ãcidos grasos de cérebro, gonadas y cuerpo
graso de insectos machos y hembras. Se demostro
que ambos ãcidos son incorporados preferentemente
en los fosfoltpidos, pero mientras el linoleico lo hace
en proporciõn uniforme, el araquidónico es secuestrado
especificamente por el fosfatidilinositol. Cérebro y
gonadas contienen cantidades importantes de araquidónico
pero la mayor proporciõn aparece en gonadas masculinas.
Las gonadas femeninas vlrgenes tienen menos ãcido
araquidónico. En Ias gonadas masculinas el araquidónico
no sólo es secuestrado por el fosfatidilinositol sino
tambiên por la fosfatidilcolina. Los espermatõforos
contienen cantidades elevadas de araquidónico que
son transferidas a la hem bra. Existe una posible relaclón
entre Ias cantidades importantes de araquidónico en
los órganos masculinos con la producción de prostaglandinas
y la ovoposlciõn.
Financiado por Proyecto 1177/85 FONDECYT.
ESPERMATOGENESIS EN ANIMALES ADULTOS DE Tegula
(Ghlorostoraa) tridentata (POTIEZ Y MICHAUB, 1838)
(MOLLUSCA, GASTROPODA). (Spermatogenesis in adults
animals of Teguia, (Chlorostoma) tridentata (Potiez
y Michaud, 1838) (Mollusca, Gastropoda). Brown, D.
Departamento de Biologia Celular y Genética, Facultad de Medicina Norte, Universidad de Chile.
T. (_C.) tridentata Arqueogastropodo del intermareal
es dioico de fecundaciôn externa. Las peculiaridades de espermatozoides primitivos en organismos con
tal modalidad reproductiva, comparativamente, hace
interesante caracterizar el gameto y la espermatogenésis.
Gonadas de animales de Babia La Herradura
(Coquimbo, Chile), fueron disecadas, fijadas, deshidratadas e incluidas en plástico. El estúdio se
realizo en cortes semifinos para M.O. y finos para
M.E.T.
La espermatogénesis ocurre en tribulos gonadales con liSmen (vaso "sanguineo"). La linea germinal se desarrolla en forma centrífuga bacia el antro
gonal. Se caracteriza un tipo celular posiblemente
sustentacular y 3 tipos de espermatogonias. Citos I
ya poseen gránuloa proacrosómicos. La espermiohistogenésis desde espermátida esférica pequena se caracteriza por: Polarización de mitocondrias adosadas a
carioteca hasta formar nebenkerne de mitocondrias
voluminosas en parte posterior dei ntfcleo; coalescencia de gxánulos preacrosómicos en vesícula acros6mica} polarización de esta en parte anterior y
transformación en complejo acrosómico cónico prominente,con espacio subacrosômico que aloja un rodete
axial; condensacion de la cromatina con formacion de
un niScleo reducido cilíndrico corto, con indentación
anterior presentando rodete, e indentaciôn posterior
con centríolo proximal perpendicular al distai que
origina, flagelo típico. Características dei acrosóma permiten inferir su interacciôn especial con envolturas dei huevo.
EFECTO DE PROPRANOLOL Y SUSTANCIAS CON ACTIVIDAD FEROMONAL SOBRE EL COMPORTAMIENTO SEXUAL DE
LA RATA MACHO.
(Effect of propranolol and subs
tances with pheromonal activity on the male rat
sexual behavior).
Bruzzone M. E., Zipper J. .
Balboa P., Chavez M. y Cabrera C.; Depto. Fisiol. y Biof., Fac. Medicina, Univ. de Chile.
Sustancias con actividad feromonal son produ
cidas en la hipófisis posterior de la rata hembra bajo estimulación B adrenérgica. Se excretan por la orina y estimulan la conducta sexual
de los machos. Se estúdio el efecto de proprano
loi oral ( 2 0 mg/d. x 4 ds.) sobre la actividad
sexual de un grupo de machos. Otros grupos tratados con propranolol recibieron además sustancias con posible acción feromonal por via orona
sal. Al 4 " dia se coloco cada macho con 3 hembras en proestro. Al dia siguiente se determino
el % de cruzamiento por la presencia de espermios en el frotis vaginal. Al 9 dia postcoital
se cuantificó el n" de imp]antaciones confirman
do el % de coitos fértiles. El propranolol disminuyó significativamente el % de cruzamiento
( 2 1 , 2 1 ) con respecto al grupo control tratado
con salino ( 3 6 , 6 t ) . El efecto fue revertido por:
inyección de epinefrina (E) en los machos
( 6 1 , 1 1 ) , presencia de hembras en proestro inyeç_
tadas con E ( 6 1 , 1 1 ) y los siguientes estímulos
oronasales: E ( 7 2 , 7 t ) ; orina de hembra en proes
tro inyectada con E ( 7 2 , 2 1 ) ; orina de hembras
ovariectomizadas ( 7 2 , 2 1 ) ; orina de hembras ovariectomizadas inyectadas con E ( 7 7 , 8 1 ) ; homogenizado de hipófisis posterior de hembras inyectadas con E ( 7 2 , 2 1 ) y homogenizado de medula
adrenal de hembras en proestro ( 5 0 t ) . Los resul^
tados sugieren oue la E de la medula adrenal de
sempefiaria un rol en la producción de feromonas
urinarias de origen neurohipofisiario sin aparente participación de Ias hormonas ováricas.
o
R 185
ESTRUCTURA DE 4 8 - LACTAMASAS DE BACILOS CEREUS
(Structura of 4 B -lactamasas from Bacillus cereus)
Bunster, M., Carrillo, 0., Vargas, V. e Cid_,_
Depto. Biologia Molecular, Facultad de Ciências Biológi
cas y de Recursos Naturales, Universidad de Concepción.
Las B-lactamasas son enzimas responsables de la inactivación de antibióticos B-lactámicos tales como penicilinas y cefalosporinas. Su estructura terciaria
es aún desconocida, pero estúdios de estructura secunda
ria han permitido proponer un modelo estructural y un
mecanismo catalítico comunes para 4 B-lactamasas obteni
das de B. cereus, B. lincheniformis, S_. aureus y E. coll.
Una predicción de estructura secundaria de otras
3 B-lactamasas III, cepa 569H y B-lactamasas secuenciadas recientemente, provenientes de B. cereus: 8-lactama
sa I cepa 5/B, B-lactamasa III, cepa 569H y B-lactamasa
II, cepa 569H, por los métodos de Chou y Fasman y perfi
les de gudrofobicidad, han permitido establecer la conservaciõn dei modelo de 2 dominios y la factibilidad
dei mecanismo catalítico propuesto, para la dos primeras.
La S-lactamasa II, que requiere Zn como cofactor,
presenta una estructura muy diferente: Se propone un mo
delo tridimensional de estructura secundaria y la posible ubicación dei sitio activo para esta enzima. Este
modelo es compatible con la proximidad de His 86-His 88,
His 210 y Cys 169, ligandos del Zn.
Es interesante hacer notar que tanto B-lactamasa I
5/B y B-lactamasa III 569H obtenidas de B.cereus, presentan en algunas zonas una mayor homologla estructural
con la B-lactamasa de B_. lichenif ormis, que con la B lactamasa I 569H de h. cereus.
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE PROP IEDADES CATALITLCAS
DE G L U T A M A T O D E H I D R O G E N A S A D E T R Y P A N O S O M A C R U Z I
(EFFECT O F TEMPERATURE UPON CATALYTIC PROPERTIES O F
GLUTAMATE DEHYDROGENASE FROM TRYPANOSOMA C R U Z I )
B U R G O S , C., G E R E Z D E B U R G O S , N . M . , ROVA I, L. Y Q ] C I N A , M .
CÁTEDRA D E QUÍMICA BIOLÓGICA, FACULTAD D E C. MÉDICAS,
UNIVERSIDAD NACIONAL D E CORDOBA, CORDOBA, ARGENTINA.
EN N U E S T R O L A B O R A T Ó R I O S E D E M O S T R O Q U E LAS D O S I S O Z I M A S D E CF-HJ'DROXÍÃCÍDO D E H I D R O G E N A S A D E E P IMAST I G O T E S
DE T. CRUZI SON CAPACES D E AJUSTAR INSTANTANEAMENTE SU
ACTIVIDAD CATALÍTICA E N RESPUESTA A LOS CÂMBIOS TÉRMIC O S D E L A M B I E N T E . EL E F E C T O S E E V I D E N C I A P O R EL H E C H O
D E Q U E LA E F I C I Ê N C I A C A T A L Í T I C A R E L A T I V A ( V / K M ) S E M A N TIENE CONSTANTE ENTRE 10° Y 30°C.
S E HA E X T E N D I D O EL E S T Ú D I O A G L U T A M A T O D E H I D R O G E N A SA N A D P D E P E N D Í E N T E ( G L U T D H ) , P U R I F I C A D A D E E P Í M A S T I G O TES D E C U L T I V O . C O N FINES C O M P A R A T I V O S , HEMOS INCLUÍDO
LA M I S M A E N Z I M A O B T E N Í D A D E U N P O I Q U I L O T E R M O (VÍBORA
YARARÁ) Y D E UN HOMEOTERMO (POLLO).
PARA LA E N Z I M A D E O F I D Í O , EL A U M E N T O D E LA R E L A C I Ó N
V / K M C O N LA T E M P E R A T U R A E S S I G N I F I C A T I V A M E N T E M E N O R Q U E
EL Q U E S E O B S E R V A C O N LA E N Z I M A D E H O M E O T E R M O , LO Q U E
INDICA LA E X I S T Ê N C I A D E M E C A N I S M O S C O M P E N S A T Ó R I O S E N EL
P O Í Q U Í L O T E R M O . C O N LA E N Z I M A O B T E N I D A D E T . C R U Z ? , LA
MAYOR EFICIÊNCIA CATALÍTICA S E OBSERVA A 2 0 C . ESTE
E F E C T O E S D E B I D O A Q U E LA V E L O C I D A D M Á X I M A E S LA M I S M A
T A N T O A 2 0 ° C O M O A 3 0 ° C , C O N U N 1 ÍGERO D E S C E N S O D E LA
KM A LA T E M P E R A T U R A M E N O R . E N T R E 2 0 ° Y 1 0 ° C EL C O M P O R T A M I E N T O E S S I M I L A R AL D E I H O M E O T E R M O .
B
E S T O S R E S U L T A D O S S U G I E R E N Q U E , AL M E N O S IN V I T R O ,
LA G L U T D H D E T . C R U Z I A P A R E C E D O T A D A PARA F U N C I O N A R C O N
MAYOR EFICIÊNCIA A 2 0 ° QUE A 30°Y 10°C.
Proyectos de Investigación:
20.31.12, D.I. Universidad de Concepción
1085 FONDECYT.
CARACTERIZACION D E UN DERIVADO FRUCTOSA-1,6—BISFOSFATASAN-KTXLMALEIMIDA ACTIVO INSENSIBLE A INHIBICION POR FRUCT O S A - 2 , 6 - B I S F O S F A T 0 (Characterization of a fructose 1,6bisphosphatase-N-ethylmaleimide active derivative insensitive to fructose 2,6-bisphosphate inhibition). Burgos,
M.E., Reyes, A. y Slebe, J.C. Instituto de Bioquímica,
Universidad Austral de Chile, Valdivia.
Se sabe que la fructosa-1,6-bisfosfatasa (FBPasa) de
rifión de cerdo contiene residuos c i B t e l n a , esenciales
para la activaciÓn de la enzima por K+, cuya reactividad
es aumentada por AMP (Reyes et al. Biochem. Biophys. Res.
Commun. 127, 373, 1985). El tratamiento de la enzima
(50 /iM subunidad) con N-etilmaleimida (NEM, 100 jM)
a
30*C, pH 7,5, p o r 5 min y en presencia de AMP (200 jM)
resulta en la modificación de un grupo SH/subunidad. En
este trabajo presentamos un estúdio de las características cinéticas de la FBPasa así modificada.
El derivado activo que se forma es completamente insensible
a
inhibición
por
fructosa-2,6-bisfosfato
(Fru-2,6-P ) , un regulador p o t e n t e de la enzima nativa.
La perdida de la inhibición se explica por la incapacidad
dei derivado modificado de unir Fru-2,6-P_. AsimiBmo, la
presencia dei azúcar durante la incubacion con NEM protege a la enzima de la perdida de inhibición por
Fru-2,6-P2- Por otra parte, la enzima modificada no presentó inhibición por exceso de sustrato y fue inhibida
por K . Una comparación de otras propiedades cinéticas
entre Ias enzimas nativa y NEM-modificada revela algunas
diferencias (pH óptimo, K
para M g , K , y V
para
Fru-1,6-P2» I 5 para AMP), pero ninguna es tan notable
como la completa perdida de sensibilidad hacia Fru-2,6P d e la FBPasa NEM-modifiçada.
Los datos demuestran que la interacción de F r u ^ ^ - P ^
con FBPasa es de naturaleza exclusivamente alostérica,
punto que era controvertido. Además, indican que la
inhibición por exceso de sustrato de la enzima nativa se
debe a la union del Fru-1,6-P- al sitio alostérico para
Fru-2,6-P .
(Financiado por: DID-UACH, S-85-26; FONDECYT, 1199).
2
2 +
B a x
0
2
2
C A R A C T E R 1 2 A C I ON
PARCIAL
DE T I R 0 S I N A
PROTEIN
GUINASA
DE L I N F 0 C I T O S ACTIVADOS
CON LECTINAS
<Partial
characterization
of Tyrosine
Protein
Kinase from 1 e c t i n - a c t i v a t e d
lymphocytes)
Bustamante
M., & Klempau, A .
Depto.
Biol.
Molec. y Depto. M i c r o b i o l . , F a c .
Ciências Biol,
y de R . N . . U n i v . de C o n c e p c i ó n .
(Patrocinio: L. Sanchez).
La
a c t i v i d a d de t i r o s i n a p r o t e i n q u i n a s a h a
sido
a s o c i a d a a l c o n t r o l de
la
proliferaeiôn
celular.
Los
linfocitos
T ,
en presencia
de
f i t o hemagl u t i n i n a
sufren
t r a n s f ormac i 6n
bl á s t i ca
acompafíada de u n a u m e n t o de l a f o s f o r t 1a c i 6n de
proteinas
en r e s i d u o s de tirosirTfe,
sugiriendo
que e s t a t r a n s - f o r m a c i ón c o n l l e v a
un aumento de
l a a c t i v i d a d de t i r o s i n a p r o t e i n
quinasa.
La
e n z i m a -fue i n v e s t i g a d a
en
linfocitos
T
ac t i v a d o s
con
1ectinas ut i1i zando
< gamma^ P)
A T P y c a s e í n a como
sustratos.
Se d e t e c t o a c t i v i d a d .
se estúdio
el
efecto
de t i e m p o e n l a v e l o c i d a d de r e a c c i ó n ,
el
efecto de c o n c e n t r a c i ó n
de c a s e i n a y A T P . e l
efecto
de
concentración
de M g
y Mn
y su d i s t r i b u c i ón i n t r ace 1 u 1 a r .
En l a c u r v a de p r o g r e s o s e o b s e r v a
lineal id a d h a s t a l o s 30 m i n .
Mg*
y Mn
aumentan
la
a c t i v i d a d e n z i m á t i c a s i e n d o Mn
el mejor
activador.
L o s Km p a r a c a s e i n a y A T P - f u e r o n
0.5
mg/ml
y lOuM r e s p e c t i v a m e n t e .
L a mayor
actividad se e n c u e n t r a en l a f r a c c i ó n
correspondien te
a
membranas.
presentando
u n 86.97. l a
fracción
soluble
e n T r i t o n X - 1 0 0 y un 13.1 l a
fracción
detergente
insoluble.
r
2
+ 2
+
2
+
2
2
Financiado por la Dir.Inv.
del
P r o y e c t o de T e s i s
de
20.36.01 y D e p t o . de B i o l .
+
2
U.
de C .
Magister,
Molecular.
a través
Proyecto
R 186
CULTIVO DE EXPLANTES TISULARES II. GRADO DE LISIS Y SU
PROTECCION POR EL ÁCIDO 6-AMINOLEVULICO. (Tissue
explants cultures II. Cellular lysis and the protection
by the 6-aminolevulic acid). Buzaleh, A.M.; Navone, N.N.
Schoua, A.E.M.; Vazquez, E.S.; Polo, C.F.; Afonso, S.G.
y Batlle, A.M. del C.
Centro de Investigaciones sobre Porfirinas y Porfirias
(CIPYP)-CONICET - Facultad de Ciências Exactas y Natura_
les, Universidad de Buenos Aires
Se ha desarrollado un sistema de cultivo de tejidos
que puede permanecer metabólicamente viable por un perío
do de 48-72 horas (SAIB, 1985). Una de las importantes a_
plicaciones de este modelo es la posibilidad de determinar la toxicidad cutanea de un cierto compuesto y de investigar su mecanismo de acción. Además, se pueden emplear explances de piei provenientes de distintas espécies, lo cual hace posible la comparaciõn de los resultados y la extrapolaciôn de datos obtenidos en animales al
ombre; pare ello es necesario normalizar los valores te
iendo en cuenta el grado de liais de los tejidos.
Con el objeto de cuantificar la lis is celular se es_
tudió la presencia de enzimas marcadoras citoplasmáticas
ty mitocondriales en los médios de mantenimiento de explantes de piei e higado. Se detecto actividad de LDH pe^
xo no de GLDH. La aplicación de diversos tratamientos so_
bre los medios de mantenimiento (sonicaciÕn, concentracion,etc.) o sobre los explantes (congelamiento y descon
gelamiento) solo condujo a un incremento de actividad de
füH.
Se encontro que el ALA (0,8 mg/placa) ejerceria un
efecto protector disoinuyendo la lisis.
Se defínió el grado de lisis de los explantes como
Una función de la actividad de LDH en el medio de mantenimiento.
A L G U N A S CARACTERÍSTICAS DE LA F0TÜSINTESIS DEL FITD
PLANCTGN AIMTARTICO.(Some characteristics of photosynthe
sis in antarctic phytoplancton).
Cabrera.S.* Montecino.V.ff y Graf.M.E.*
•Departamento de Biologia Celular y Genética,Facultad de
Medicina,# Departamento de Ciências Ecológicas,
Facultad de Ciencias.Universidad de Chile.
Las fluctuaciones en la temperatura del aire en el territo
rio antártico,desde -70° a 5°C hace difícil el desarrolló de
vegetaciôn en este medio.En cambio en el agua varia solo
entre -Z" y 5°C.Aún mas.en el mar la salinidad disminuye
el punto de congelación dei agua.Ambos aspectos son deci
sivos para que organismos fotosintetizadores colonicen
preferentemente los ambientes acuáticos en esta region.
A 63"S.las microalgas reciben un 56% menos de radiación to
tal anual que a 34°S,sin embargo la Radiación Fotosintéti
ca Activa (R.F.A.) eqüivale solo a un 49% de este total en
ambos casos.
Estúdios orientados a conocer la fotosíntesis en estos eco
sistemas acuáticos en verano demostraron que: 1) en cuer
pos de agua Iímnicos la R.F.A. alcanza por lo general has
ta el fondo.lo que favorece el desarrolló de fotosintetiza
dores bentónicos(Briófitas) que se presentan con gran den
sidad .Esto implica que la entrada de energia al ecosiste
ma por Ias macrófitas ,puede ser de igual o mayor impor
tancia que por el f i t D p l a n c t o n . 2)En el ambiente marino:
a)La penetración de la R.F.A. tiene relaciôn inversa con la
biomasa (Clorofila a.Cl a ) en los niveles superficiales dei
mar. b)Mientras menor es la cantidad de Cl a en la colum
na eufótica,mayor es el carbono fijado por unidad de Cl a
(Productívidad primaria específica), c) Las areas con bajas
biomasas fitoplanctónicas (Cl a)fijan una cantidad de car
bono igual o mayor que otras donde la densidad fitoplanc
tônica es elevada.De acuerdo con estos resultados parece
necesario revisar para las areas oceânicas el concepto de
pobreza y riqueza fitoplanctónicas.
Financiamiento I.M.A.CH. y DIB -N-2449-86/15 U.de Chile
INTOXICACION POR CIANUR0 Y ACCION DE LA S-ADENOSYL METIONINA ~ (Cyanide intoxicacion and the effect of SAdenosyl Methionine). Buzaleh, A.M.;Vazquez, E.; Wider,
E. y Batlle, A.M.
. Centro de Investigaciones sobre Porfirinas y Porfirias-CIPYP (CONICET y
FCEN, UBA).
Los efectos tóxicos provocados en los mamíferos por
el cianuro son bien conocidos. Este compuesto ejerce su
acción primaria inhibiendo la citocromo oxidasa (cit.
ox.) y en menor grado otras enzimas como la aminolevüli
codehidrasa (ALA-D), y se detoxifica por conversion a
sulfocianuro en una reacción catalizada por la rodenasa
(Rod.).
Se ha estudiado el efecto de la intoxicacion aguda
por cianuro sobre los metabolismos del azufre y del hemo, utilizando ratones a los que se le administro KCN
sc en dosis variables (1-10 mg/kg), otro grupo recibió
simultaneamente con el KCN. una dosis de 15mg/kg de SAdenosyl Metionina (SAM); otro lote sólo recibió SAM y
el grupo control el vehículo. A distintos tiempos (0-60
min) se sacrificaron los animales y se investigaron los
niveles de cit. ox. Rod. y ALA-D, contenido de S lãbil,
SCN y tiosulfato en higado y sangre.
En los animales intoxicados se observo disminución
del 50% de Rod., del 30-60% de cit. ox. y del 20-25%
del ALA-D y correspondiente aumento de CN en higado.Los
datos de S-lãbil, SCN y tiosulfato no variaron con respecto a los controles. En sangre los câmbios fueron menos marcados pero evidentes. En los animales intoxicados
que recibieron SAM, la inhibición de las enzimas fue mu
cho menor a tiempos cortos y la recuperación más rápida,
sugiriendo cierto efecto protector de este generador de
tioles por la via de su trans-sulfuración.
ACCION EEL TAMOXIFEN EN LA PROLIFERACICN CELULAR DE TÜMDRES MAMARIOS
HUMANOS EN CULTIVO. (Tamoxifen^ction oo cell proliferation of breest
tumors in culture). G. Calaf, C.Moyano
y E. Alvarez. 1.- Cpto.
Biologia. Universidad Metropolitana de Cs. de la Educación. 2.- Facultad de Medicina. Division Sur; Stgo.
MDòelos de estúdio ccmo aquellos llevados a cabo en animales de
experimentación y lineas celulares introducer una herramienta útil
para el estúdio de los antiestrogenos. Tales substancias inducen efectos directos en el turor mismo, como en el sistema endocrino, el cual
puede contribuir a la regresicn tumoral. El propósito de este trabajo
fue aralizar la capacidad proliferativa de algunas hornrmas y el tamoxifen en lesiones mamarias humanas en cultivo de ôrgano. Con este objeto, se uso 17B estradiol (0.05 ugfrnl) (E) y|o tamoxifen (0.05
ugjml) (T) ccmo tambien progesterona (I.Oug(ml) (Prog.) para determinar viabilidad celular y sintesis de CNA de lesiones mamarias en
cultivo de ôrgano.
q
Expliantes derivados de tales tejidos fueron cultivados a JI C
(95% aire: 5%CEL) en un medio ojuimicamente deficiente adicionado con
hidrccortisona n.0ug|ml) e insulim (5.0ug|ml) durante 2 y 5 dias.
Estúdios histológicos se basaron en la viabilidad de Ias células, autorradiografia (índice de marcaciôn) y actividad especifica (incorporaciõn de timidina tritiada en el DMA). Los resultados indicaron que
no hubo efecto significativo en grupos tratados en ccmparacion con los
controles, después de 2 dias en cultivo, cuando se analizó células
dei estrema, condueto y alvêolos cemo también sintesis de CNA. Sin embargo, hubo un efecto inhibidor inducido por T o E más T (P<C0.05)
después de 5 dias en cultivo, mientras que E tuvo efecto estimulador
en lesiones malignas (P<.0.05). Estúdios con E senalaron que estirrulaba la sintesis de CNA en tejidos derivados de lesiones con enfermedad fibroquística i?^0.0V
y carcionemas de mujeres preroenopáusicas (P^0.05), pero no tuvo efecto en carcionemas. Por otra parte,
Prog, no tuvo efecto en lesiones benignas, peno inhibió tal sintesis
en carcionemas derivados de mujeres premenopáusicas (P-^0.05)
En conclusion, este sistema de cultivo nos permite predecir La respuesta de Ias lesiones mamarias ante diversos estímulos.
R 187
APROXIMACION A L M E C A N I S M O CINETICO D E LA ATP
SINTETASA MITOCONDRIAL
MEDIANTE EL
EMPLEO
DEL ANION INHIBIDOR BICARBONATO (Approach to
the kinetic mechanism of the mitochondrial ATP synthase
by means of the dead-end inhibitor bicarbonate). Calcaterra. N.B. y Roveri. O.A.
CEFOBI (CONICET, Fund. M. Lillo y Universidad Nacional de Rosário), Rosário. ARGENTINA.
+
La H -ATPasa mitocondrlal es ta enzima responsable
de catalizar la sTntesls de ATP a partir de A D P y P a
expensas de un gradiente electroquTmico de protones generado a través de la membrana interna mitocondrlal por
el transporte de elect rones desde el N A D H o succlnato
al oxigeno.
Fueron realizados estúdios ctnéticos en un amplio range, de concentraciones de A D P (3 a 1000 uM) y P. (50
a 5000 uM). En todos los casos se obtuvleron cinéticas
biffislcas respecto de ambos sustratos.
La presencia de bicarbonato. anion actlvador de la
hidrólisis de A T P (1), no modifico la característica biffislca de Ias cinéticas sl blen resultÓ ser un inhlbidor de
la sfntesis de ATP. no competitivo respecto de Pj
(K. • 20 m M ) en todo el rango de concentraciones ensayaaas, competitivo respecto de A D P (K. - 7 m M ) a bajas
concentraciones de A D P y mixto respecto de A D P (Kj20 m M y oí - 3.5) a altas concentraciones de dicho sustrato.
Estos resultados sugieren que el mecanismo para la
sTntesls de A T P corresponderia a un mecanismo de Random Bi Uni o a un mecanismo Ordenado Bi Uni de tipo
"subsite" con el P como sustrato conductor.
(
1) Roveri, O.A. and Calcaterra. N.B. (1965) FEBS Lett.
192, 123-127.
Subsidiado por CONICET (Argentina).
PROTEOGLTCANES DE MATRICES EXTRACELULARES DE LARVAS
DE Drosophila. (Proteoglycans from Estracellular
Matrix of Drosophila L a r v a e ) .
Cambiazo., V. y
Brandan, E . Grupo de Neurobiología Molecular, P.Universidad Católica de Chile, Santiago.
Estúdios recientes han establecido que los pro teoglicanes (PGs) de matriz extracelular (ECM) es tán involucrados en adhesion celular y morfogénesis.
En este trabajo se presenta la caracterización de
los PGs de ECM como una primera etapa en la evalua ciôn dei papel que estas macromoléculas cumplen en
el desarrollo de Drosophila.
Durante la diferenciación larval, la mayor in corporacxon de
ocurre entre el 2Q y 3er esta do. 7C$ de Ias macromoléculas sulfatadas es sensi ble al ácido nitroso, lo que indica una predominância de heparan sulfato. Los PGs fueron solubiliza dos con
guanidina-HCl, concentrados en Sephadex
G50 y purificados en columnas de DEAE-Sephacel. La
columna fue lavada con un gradiente lineal de NaCl
y la mayoría de los PGs presentes fue eluido
a
0.45M NaCl. Este material presenta una gran sensi bilidad al ácido nitroso. Para establecer cuántos
tipos de PGs estaban presentes, el material obteni do de DEAE-Sephacel fue fraccionado en columnas de
Sepharosa CL-6B, lo que mostro la presencia de 2
espécies con distinto peso molecular. Los resulta dos indican que Ias ECM de larvas de Drosophila po seen al menos 2 PGs de heparan sulfato.
En experimentos en marcha se está evaluando el
efecto que tienen los £-xilósidos (interfieren con
el ensamblaje del P G ) en el desarrollo de Drosophila
Financiado por proyectos D1UC (77/86) y Fundaciôn
Gildemeister al Dr. N . C . Inestrosa.
ÜN MODELO EXPERIMENTAL DE DESMINERALIZAC1 ON DE DENTINA
PULPAR HUMANA.
(An experimental model of human pulp
dentine demineraltzatÍon). Calvo, V.F. Medina, M.E.,
Sanchez, U. Dpto. Ciências Químicas y Físicas, Fac.
Odontologia, Universidad de Chile. (Patrocinante: Aida
Traverso P.)
Se ha divulgado ampliamente la desminera1izacion
de los conductos radiculares, mediante soluciones quelantes tales como EDTA a pH neutro. Sin embargo dura£
te la reacción, la soluciõn quelante se vuelve más ácj_
da.
Previamente habíamos observado que la acidez del
EDTA parece ser determinante de:
a.
La velocidad de desmineralízaciôn por EDTA,
b.
La velocidad de hidrólisis ácida dei mineral dei
diente.
En este estúdio intentamos comprender lo que ocu
rre en el diente mientras Ias condiciones de acidez dei
medio cambian. Se empleÕ como modelo experimental, una
suspension de hidroxiapatita sintética y se comparo con
lo que ocurre en Ias cavidades pulpares de dientes humanos .
Se encontro que tanto Ia liberaciõn de ácido como
el consumo de EDTA son funciones exponencía1 es dei
tiempo, lo cual está de acuerdo con el concepto clínico odontológico de "capacídad autolimítante dei EDTA".
Este modelo permite expl i ca r porque la reacción tiende
a deternerse antes de haberse agotado todo el quelante,
como otros investigadores han determinado. También,
permite disefiar modificacíones simples para aumentar la
capacídad quelante y Ia rapidez con que actüa el EDTA
en los conductos radiculares.
?
(Proyecto D.l.B.
Q-2328-8613).
ESTIMULACI ON AUDITIVA, DIFERENCIAS INDIVIDUALES Y REACTI_
VIDAD HEMISFERICA (Auditory stimulation, Individual
differences and hemispheric reactivity). Camposano, S.,
Etcheberrigaray, R. y Lolas, F. Unidad de Psicofisiología, Depto. Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina
Div. Cs. Médicas Norte, Universidad de Chile.
Para la pendiente de la funciõn intensídad/amplitud
del potencial evocado (PE) cortical, hemos estudiado dis_
tribución hemisférica, influencia de la modalidad sensorial sobre componentes tempranos y tardios y relación
con potencial es dei tronco encefálico,
Se registro 16 Ss diestros, sexo masculino (edades
20 a **0) con electrodos subdérmicos en vertex, C 3 y Cí|
referidos a mastoides bilateral. Se estimulo mediante
clicks binaurales de 1 m s , free. 1/seg, íntensidades 50,
57 y 90 dB SL, ampl if Ícac?ó"n y promediación mediante com
putador Nicolet CA 1000, tiempo de análisis ^00 ms, filtro pasa banda 0-150 Hz, promedios de 100 estímulos- Se
evaluó amplitud y latencia de componentes P 1 N 1 , N 1 P 2 y
P 2 N 2 » calculando pendientes intensÍdad/amplitud que fueron positivas en el vertex en la mayoría de los Ss para
Pi Ni y N 1 P 2 y negativas para P 2 2 en 5 casos. Se observo correlaciòn positiva (Spearman p<0.00l) entre vertex
y cada uno de los hemisférios en pendientes de los compo
nentes N 1 P 2 y P2^2» ausente para P1N|. La pendiente intens Ídad/ampl i tud P1Nt fue mayor en C3 que en Cí» (Wilcoxon p < 0 . 0 2 5 ) . Al aqrupar los sujetos según Ias pendientes P 2 N 2
el vertex (positivas o negativas - aumen^
tadores o reduetores) la correlaciòn entre vertex y derj^
vaciones hemisféricas está ausente en el grupo de los re
duetores sólo en P 2 N 2 .
No se observo correlaciòn entre
variables hemisféricas y potenciales dei tronco.
Los resultados concuerdan con datos prévios. En la
modalidad auditiva hay raramente "reduccíón" en derivac iones centrales ; el hem i sfer io i zquierdo (C3) presenta
pendientes mayores que el derecho. También sugieren la
existência de diferencias individuates, más acentuadas
en el componente P 2 ^ 2 *
N
e
n
R 188
REGULACION DE LA PIRUVATO QUINASA DE GLÂNDULA MAMARIA DE
RATA.(Pyruvate kinase regulation from rat manmary gland)
Campos, E.O.* Dpto. de Bioquímica y Biologia Molecular,
Fac. Cs. Químicas y Farmacêuticas, Universidad de Chile.
(Patrocínio: Dr. M. Sapag-Hagar)•
La piruvato quinasa (PK) es una enzima regulable de la
via glicolitica.La isoenzima alostérica posee un control
intracelular (fructosa-1,6-di£os£ato ô FDP, ATP, alanina
y 6-fosfogluconato 5 6-FG) y un control extracelular por
fosforilación-desfosforilaciõn dependiente de AMP cíclico via receptores, mecanismo de gran importância en
los tejidos gluconeogénicos.
Hemos establecido la existência de dos isoenzimas de PK
en la glândula mamaria de rata.Una de ellas, la de mayor
actividad, se encuentra en las células epiteliales secre
toras de la glândula, demostrada por cromatografías en
sobrenadantes de homogenizados de Ias células aisladas.
Estas células, aisladas por digestion enzimática controlada, son funcionales e incorporan ^H-leucina a caseína
y H-uridina a RNA.Asimismo, demostramos que los/0-rece£
tores, ya caracterizados en glândula completa por nuestro Laboratório, son también operables.
La isoenzima presente en Ias células epiteliales secreto
ras tiene un K 0 . 5 de 0.35 mM para fosfoenolpiruvato y
presenta cooperatividad + para FDP ( K 0 . 5 de 0.08 mM), es
inhibida por ATP y alanina (entre un 40 y SOI) y 6-FG no
afecta su actividad.Estúdios en células aisladas y en
cultivo de tejido de glândula completa, en presencia de
isoproterenol (0.01 mM), toxina dei cólera (0.15 ug/ml)
ô forskolin (0.05 mM) no muestran efecto sobre la actividad de la enzima.
3
Se informa que la isoenzima presente en Ias células epiteliales secretoras de la glândula posee solo regulación
intracelular y no tendría, aparentemente, regulación por
fosforilación, lo que confirmaria la escasa relevância
de la gluconeogénesis en la glândula mamaria.
(Proyecto B-2116-8623 de la Universidad de Chile, 1986).
*Financiamiento parcial por Beca DIB, U. de Chile.
M O D I F I C A C I O N E S Q U Í M I C A S E S P E C I F I C A S EN B - L A C T A M A S A DE
SkígMa
dítxneAl
UCSF-129.
( S p e c i f i c chemical modifica_
t i o n s i n B - l a c t a m a s e f r o m ShigeJUa
&lexneJU
UCSF-129).
Campos, H . , A l a r c ó n , M . , G o n z a l e z , H . ,
Rios,
& F l o r e s , H . D e p a r t a m e n t o d e Q u í m i c a , F a c u l t a d de
C i ê n c i a s , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n .
L a s B - l a c t a m a s a s s o n p r o d u c i d a s p o r más d e 80 c e p a s
d i f e r e n t e s y v a r í a n c o n s i d e r a b l e m e n t e en sus p r o p i e d a d e s
fisicoquímicas.
Se c a r a c t e r i z a n p o r h i d r o l i z a r e l a n i —
U o B - l a c t á m i c o de l a s p e n i c i l i n a s y c e f a l o s p o r i n a s , g e nerando compuestos b a c t e r i o l ó g i c a m e n t e i n a c t i v o s ; causa
fundamental de l a r e s i s t ê n c i a b a c t e r i a n a a a n t i b i ó t i c o s .
De a h í q u e , n o s e n c o n t r a m o s a b o c a d o s a l e s t ú d i o d e i C e n t r o A c t i v o d e B - l a c t a m a s a d e ShiqeMci
(,lzxneAí
UCSF-129,
cepa patógena que p r e s e n t a r e s i s t ê n c i a a l a
ampicilina;
siendo periplasmica, l a enzima producida.
E s t a se caraça
t e r i z a p o r s e r g l o b u l a r , c o n s t i t u í d a por una s o l a cadena
p o l i p e p t í d i c a d e p e s o m o l e c u l a r 2 3 . 6 0 0 e n 219 r e s i d u o s a
minoacídicos.
C a b e d e s t a c a r , l a p r e s e n c i a d e 4 T y r , 12~
S e r , 1 C y s y 25 P r o ; s i e n d o L y s e l a m i n o á c i d o
N-terminal y - T y r - G l y - L y s - C O O H , e l f r a g m e n t o o b t e n i d o c o n Carbo^
x i p e p t i d a s a B. Mediante r e a c c i ó n c o n t e t r a n i t r o m e t a n o
y
e s t ú d i o s de p r o t e c c i ó n c o n e l s u s t r a t o , se d e t e r m i n o que
una T y r e s t a r i a e n l a v e c i n d a d d e i C e n t r o A c t i v o .
Un r e s i d u o d e S e r s e m o d i f i c o c o n á c i d o 6 - B - y o d o p e n i
cilánico ( 1 : 2 ) , inhibidor competitivo y altamente especT
fico.
L a r e a c c i ó n s e l l e v ó a c a b o a pH 7 . 5 , p o r 5 m i n .
a 25°C, c o n p e r d i d a t o t a l de l a a c t i v i d a d e n z i m á t i c a . S e r
f o r m a r i a un c o m p l e j o a c i l - e n z i m a , a l i g u a l que en l a qui_
m o t r i p s i n a y en enzimas que i n t e r v i e n e n
en la
sintesis
de l a pared b a c t e r i a n a ( e . g . t r a n s p e p t i d a s a s ) .
Se e s t a b l e c i ó q u e e l r e s i d u o d e C y s n o e r a r e l e v a n t e
en l a a c t i v i d a d e n z i m á t i c a , al m o d i f i c a r l o c o n : H g ( I I ) ,
D T N B , PMB, N T C B ; e n e x c e s o c o n s i d e r a b l e .
N u e s t r o o b j e t i v o f i n a l e s s i n t e t i z a r y d i s e n a r e l in_
h i b i d o r e s p e c í f i c o que permita r e c u p e r a r l a a c c i ó n t e r a pêutica o r i g i n a l de l o s a n t i b i ó t i c o s
B-lactámicos.
F i n a n c i a d o p e r P r o y e c t o D i r e c c i ó n de I n v e s t i g a c i ó n
N°20.13.20, U n i v e r s i d a d de Concepción.
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DE CEPAS DE Thiobacillus
ferrooxidans DEL NORTE DE CHILE RESISTENTES A ARSENICALES . (Isolation and characterization of Thiobacillus
ferrooxidans arsenic resitant strains from northern
Chile).Campos, G ., y Olivares, H. Unidad de Bioquímica, Depto. Cs. Biológicas. Facultad Cs. de la Salud,
Universidad de Antofagasta.(Patrocinio: I. Northland).
En la obtención de sales solubles de cobre, el proceso de lixiviación bacteriana tiene gran importância
para el país. Para poder aplicar este método a los minerales de baja ley de la zona norte contaminados con
altos niveles de As es necesario contar con cepas de
T. ferrooxidans resistentes al As para ello se aislaron
a partir de plantas de lixiviación química cepas de T.
ferrooxidans, las que se denominaron según su orígen en
MB y MI.
El crecimiento celular se siguió midiendo la D.O a
550 nm, por recuento celular y titulación Fe
remanente en el medio de cultivo en presencia de o- fenantrolina. De crecimiento en medio sólido 9 K. a pH 3.0 se
aislaron cepas isogénicas las que se utilizaron para
su caracterización y estudiar la resistência a distintos arsenicales. La caracterización se realizo por reac
ción de inmunodifusión en agarosa e inmunoprecipitación líquida analizando los inmunoprecipitaãos por
electroforesis en geles de poliacrilamida- SDS.
+
Ambas cepas oxidaron el medio líquido a 9 K a pH 1.5
a 309 c y crecieron en presencia de CuSO. hasta 6 g/l.
La concentracion del arsenical suplementado en el medio líquido oscilo entre 50 y 1.000 ppm. Los resultados
indicaron que ambas cepas crecen en presencia^de As,
siendo los más tóxicos ks
y NaASO^ , los que producen un considerable aumento en el período de retardo
y disminución en el crecimiento celular, en cambio los
compuestos que contenían As
como 2 ° 5
"
°
fueron menos tóxicos.
A s
v
a
H
A
s
4
FINANCIADO: DIEXAT U. de Antofagasta. Proyecto S03-85.
RELACIÔN ESTRUCTURA FUNCIÓN DEL L I P 0 P 0 L I S A C A R I D O Y A L G U NAS P R O T E Í N A S DE L A MEMBRANA E X T E R N A DE T H I O B A C I L L U S
FERROOXIDANS.
( S t r u c t u r e and f u n c t i o n r e l a t i o n s h i p
of
t h e l i p o p o l y s a c c h a r i d e a n d some p r o t e i n s f r o m t h e o u t e r
membrane o f T h i o b a c i l l u s f e r r o o x i d a n s ) .
C a m p o s . S . , G o m e z - S i l v a . B . y R o d r i g u e z . M.
L a b . M i c r o b i o l o g i c , F a c . C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a de C h i l e .
El a n á l i s i s de l a e s t r u c t u r a y c o m p o s i c i ó n de l a s u p e r f i c i e externa del quimiolitótrofo Thiobacillus f e r r o o x i dans es fundamental para e n t e n d e r su r o l en e l p r o c e s o
de a d h e r e n c i a a m i n e r a l e s d u r a n t e l a b i o l i x i v i a c i õ n .
El l i p o p o l i s a c á r i d o ( L P S ) f u e p u r i f i c a d o l i b r e de ácidos
nucleicos y proteínas, y fue analizado por microscopía
electrónica y espectroscopía i n f r a r r o j a , indicando
su
semejanza a LPS de e n t e r o b a c t e r i a s gram ( - ) , aunque su
m a y o r c o n t e n i d o d e l í p i d o s l e c o n f i e r e un a s p e c t o menos
compacto a l m i c r o s c ó p i o e l e c t r ó n i c o y s u t o x i c i d a d es
menor que e l
LPS de
í. c o l i •
La membrana e x t e r n a p o s e e 5-6 p o l i p é p t i d o s d e masa m o l e c u l a r m e n o r a 60 K D a . E l p o l i p é p t i d o d e 40 KDa e s t á p r e sente en mayor proporeión y sus c a r a c t e r í s t i c a s e l e c t r o f o r é t i c a s s u g i e r e n un r o l de p o r i n a a e s t a p r o t e í n a .
E s t ú d i o s de a d h e r e n c i a a c a l c o p i r i t a usando LPS p u r i f i cado de T h i o b a c i l l u s i n d i c a n que esta macromolécula se
a d h i e r e al m i n e r a l , a d i f e r e n c i a del LPS de e n t e r o b a c t e rias.
E s t r u c t u r a s como p i 1 i o m u c o p o l i s a c á r i d o s á c i d o s
no p a r e c e n e s t a r i n v o l u c r a d o s e n e s t e f e n ô m e n o .
F i n a n c i a d o p o r G r a n t PNUD-UNIDO
CHI-85/002.
ROL DEL CAMP EN LA REGULATION DE LA BIOSINTESIS DEL HEMO.
(Role of cAMP in heme biosynthesis regulation).Cânepa.E.
T., Llambias.E.B.C. y Grinsteln.M.
Departamento de Química Biológica,Facultad de Ciências
Exactas y Naturales,Universidad de Buenos Aires,Argentina
Las porfirias hepáticas son enfermedades causadas por al_
teraciones en el camino bloslntético del nemo y pueden
ser producidas por ciertas drogas,entre ellas el fenobar
bital.En base a resultados que presentamos anteriormente,
fue necesario confirmar que existe una relación entre
los niveles de cAMP endógeno y la inducción de activida
des de enzimas reguladoras de la biosintesis del nemo y
contenido de citocromo P-450.Se utilizan hepatocitos de
ratas normales y tratadas con estreptozotocina ,prepara
dos según Fry et al.(Anal.Bicchem.71,341,1976) y las mediciones se hacen según los métodos descriptos por Cánepa et al.(Biochim.Biophys.Acta 841,186,1985).La inducción mediada por fenobarbital de Ias actividades de ALA—
sintetasa y ferroquelatasa,y dei contenido de citocromo
P-450,es mayor en hepatocitos de ratas diabéticas.El agregado de dibutiril cAMP potência esta inducción sólo
en hepatocitos de ratas normales.3-metil-l-lsobutilxantina y_ papaverina,inhibidores de la fosfodiesterasa,potencial la acción inductora dei fenobarbital,sólo en he
patocitos de ratas normales.La adenosina,que es inhibidor de la proteinquinasa,inhibe parcialmente esta indue
ción en hepatocitos de ratas normales y diabéticas,indT
cando una posible fosforilación proteica responsable dei
efecto dei cAMP.El 8BrAMPciclico, análogo no metaboliza
ble dei dibutiril cAMP,potência el efecto dei fenobarbi
tal sólo en hepatocitos normales,mientras que otras sus
tanclas relacionadas, como el butirato de Na y el dibutiril cGMP no tienen efecto.El descenso de los niveles
de cAMP endógeno por aloxano y/o imidazol disminuye la
inducción mediada por fenobarbital.Estos resultados con
firmarlan el rol preponderante dei cAMP en la regulacion
de la biosintesis del hemo.
CAMP EXTRACELULAR EN ALGUNOS MODELOS DE HIPER TENSION. (Extracellular cAMP in some hypertension models). Carmona, M.T. y Becerra, M.
Depto. Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
R 189
ALTERACIONES DE ESTEROIDES PLASMATICOS Y DEL TRANSPORTE
OVULAR INDUCIDAS POR ESTRES EN LA RATA.(Changes of
plasma steroids and in ovum transport induced by stress
in the rat). Cárdenas-Sankán, H.- Laboratório de Endocrinologia, Facultad de Ciências Biológicas, Pontifícia
El estrés puede alterar el proceso reproduetivo.
Anteriormente demostramos que la inmovilizaciõn a 10* C
por dos horas aplicada en los primeros 4 dias de prefiez
no afecta el transporte ovular en la rata, y que la natación en agua fria (16° C) aplicada en el dia 3 de prefiez acelera discretamente el transporte ovular en dicha
espécie. Tratando de entender quê factores median esta
diferencia medimos los niveles de corticosterona circulante (C) mediante HPLC con el propósito de verificar
la efectividad de los estímulos estresantes usados, y
también los niveles plasmâtlcos de estradiol (E2)y progesterona (P) mediante RIA en ratas estresadas y controles. Ambos estímulos produjeron importantes aumentos de la C, lo que confirma que fueron estímulos estresantes efectivos. La inmovilizaciõn en frio produjo un importante aumento de la P (300% sobre el nivel
control) mientras que la natación en frio produjo
aumento del E- (70% sobre el nivel control) sin câmbios
de la P.
Considerando que aumentos del E2 sobre lo normal
aceleran el transporte ovular en la rata prenada, y
que aumentos de la P contrarrestan este efecto del E2,
los resultados sugieren que la diferencia de efecto de
estos dos estímulos estresantes sobre el transporte ovular podria estar mediada por Ias distintas alteraciones
de esteroides que ellos inducen.
(
Financiamiento: DIUC 82/83 y RF 83016.
FOSFORILACIÓN DE FOSFATIDILINOSITOL POR VESICU
LAS DE TUBULOS TRANSVERSALES Y SU POSIBLE PAPEL
EN ACOPLAMIENTO EXCITACION-CONTRACCION.
(Phosphorylation of phosphatidylinositol by
transverse tubule vesicles and its possible
role in excitation-contraction coupling).
Cantidades variables de cAMP son vaciadas al
Carrasco, M.A., Hidalgo, C , Magendzo, K..
fluído extracelular desde algunos tejidos someJaimovich, S. Departamento de Fisiología y Bio
tidos a acci6n hormonal, las que mueven el
fisica, Facultad de Medicina, Universidad de
"pool" libre y difundible de cAMP. Dentro de
Chile y Centro de Estúdios Científicos de Sannuestra llnea de investigación, y por el rol
tiago.
que cumple el cAMP, quisimos saber cufil es la
Membranas aisladas de túbulos transversales
situación de este nucleótido en algunos modelos
de músculo esquelético de rana fosforilan fosexperimentales de hipertensifin crfínica, a saber
fatidilinositol a fosfatidilinositol-4-fosfato
contricciín aôrtica y Goldblatt 1 y 2.
y este último a fosfatidilinositol-4,5-bisfosUtilizamos ratas Sprague-Pawley hembras. La
fato cuando se usa [ (f^P] ATP como substrato.
presiôn sistfilica se midifi en la cola por pleAmbas reacciones de fosforilación se comply
tismografla. Las muestras de sangre se obtuvietan en 1 5 segundos a 25°C, son dependientes de
ron directamente de la aorta en animales aneste
Mg**en el rango milimolar y son reguladas por
siados. La determinacifin de cAMP plasmático se
Ca**. La incorporación de * P en fosfatidilinosihizo segfln NastTup Madsen y col. (1975), técnitol-4-fosfato es máxima a concentraciones de
ca hasada en la union competitiva a proteína.
Ca'* de 10 M o menores, mientras que la incorpoLos resultados indican un alza de la presifin
ración en fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato
arterial al cabo de 4 a 5 semanas de tratamienaumenta significativamente a partir de 1 0 " M.
to. Es una hipertensifin de 150-190 mm Hg. Los
Tetraçaína, un inhibidor dei acoplamiento exciniveles de cAMP en ratas hipertensas son mSs
tación-contracción, aparentemente inhibe la for
elevados (25 pmol/ml) que en ratas controles
mación de fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato.
(19 pmol/ml). El stress quirúrgico por si solo
Membranas aisladas de retículo sarcoplásmico
provoca un alza de cAMP plasmfitico (Gill y col., forman fosfatidilinositol-4-fosfato con menor
1975), por lo que no se hace muy significativa
actividad que la membrana de túbulos transverla diferencia entre ratas controles e hipertensales y no producen fosfatidilinositol-4,5-bissas.
fosfato.
El alza de cAMP plasmítico observado en ratas
Estos resultados muestran que Ias membranas
con sobrecarga crônica de presiôn, seria un reaisladas de túbulos transversales poseen la caflejo de la actividad hormonal que haría que se
pacídad de formar los precursores de inositol
vacie probablemente desde el tejido cardíaco
trisfosfato, posible mediador fisiológico dei
y/o desde el tejido vascular cAMP a la circulaacoplamiento excitación-contracción.
cifin, escapando a la acción de la fosfodiesteGrants: HL 2300? de NIH/Muscular Distrophy
rasa.
Tinker Foundation Inc.
Assoc.
Trabajo financiado por proyecto N° 1131-CONICYT
DIB-2149 / DIB-2123
R
190
R E L A C I Ô N L L U V I A DE P O L E N / V E G E T A C I ON EN C H I L O E
(Pollen
rain in r e l a t i o n t o v e g e t a t i o n in C h i l o é ) .
C a r r i 1 l o , R.
y V i I l a g r á n , Z.
I n s t i t u t o de B o t â n i c a , U n i v . A u s t r a l 7
Dpto. B i o l o g i a , F a c u l t a d de C i ê n c i a s , U n i v . de C h i l e .
Con e l p r o p ó s i t o d e e v a l u a r l a p r o d u c c i ó n y d i s p e r s i o n de p o l e n de l o s d i s t i n t o s t a x a d e l bosque de C h i l o é ,
se e s t a b l e c e l a r e l a c i ô n p o l e n a t m o s f é r i c o / v e g e t a c i ó n
c i r c u n d a n t e en la C o r d i l l e r a de P i u c h u é , I s l a Grande.
C a d a 50 m d e a l t i t u d s e c o l e c c i o n a r o n m u e s t r a s d e m u s g o s
( u t i l i z a d a s como c a p t a d o r e s d e l a l l u v i a d e p o l e n ) y s e
m u e s t r e a r o n 100 á r b o l e s .
Para cada e s p é c i e , se c a l c u l o
l a r e l a c i ô n e n t r e I a s f r e c u e n c i a s de i n d i v í d u o s y I a s
dei p o l e n c o n t e n i d o en l o s musgos ( í n d i c e s t / p ) .
Lor r e s u l t a d o s muestran los s i g u i e n t e s câmbios a t r a
v é s d e ] g r a d i e n t e a l t i t u d i n a l : ( i ) B a j o 250 m d e a l t u r a " ,
e l e s p e c t r o de p o l e n s e c a r a c t e r i z a p o r l a mayor i m p o r t â n c i a de l o s i n d i c a d o r e s de bosque v a l d i v i a n o ,
como
G e v u i n a / L o m a t i a ( h a s t a 41%), E u c r y p h i a / C a I dc I uv i a ( h .
13%) y A e x t o x i c o n ( h . 12.53); ( i i ) E n t r e 200 y 400 m e l
e s p e c t r o se c a r a c t e r i z a por la dominancia de M y r t a c e a e
( X 5 0 % ) , e n c o r r e s p o n d ê n c i a c o n l a compos i c i õ r r d e i b o s que n o r d p a t a g ó n i c o c a r a c t e r í s t i c o de e s t e s e c t o r ; ( i i i )
S o b r e 400 m , e l e s p e c t r o s e c a r a c t e r i z a p o r l a c o d o m i n a n c i a d e N o t h o f a g u s ( h a s t a 583), S a x e - q o t h a e a ( h . 35%)
y P o d o c a r p u s ( h . 3 2 % ) , t a x a c a r a c t e r í s t i c o s de I a s c i mas d e l a C o r d i l l e r a .
Los v a l o r e s t / p muestran que en
la l l u v i a de polen e s t a r í a n s o b r e r e p r e s e n t a d o s N o t h o f a gus , Podocarpus y T e p u a l i a ( t / p < 1 ) ; e q u i 1 i b r a d a m e n t e
representados Drimys y Saxe-gothaea ( t / p = 1-5); y subre
presentados Myrtaceae y Laurel ia ( t / p > 5 ) .
De l a c o n c o r d â n c i a f l o r í s t i c a o b s e r v a d a e n t r e l o s es_
p e c t r o s p o l í n i c o s y l a s a s o c i a c i o n e s f o r e s t a l e s d e i gra_
d i e n t a e s t u d i a d o , se desprende que e l p o l e n d i s p e r s a d o
a l a r g a d i s t a n c i a n o c o n s t i t u y e u n a c o n t r i b u c i ó n impoi—
t a n t e e n l a l l u v i a p o l í n i c a d e i á r e a . S i n e m b a r g o , l a ma
y o r p r o d u c c i ó n de p o l e n de I a s e s p é c i e s a n e m õ f i l a s , e n
c o m p a r a c i ó n c o n I a s e n t o m ó f i I a s , j u g a r f a un r o l i m p o r t a n
t e en l a mayor r e p r e s e n t a t i v i d a d de e s t o s t a x a e n e l p o len a t m o s f é r i c o l o c a l .
( P r o y e c t o DIB N2010/8635, C . V . )
DETERMINATION DE VELOCIDADES FRACCIONALES DE SINTESIS DE
PROTEÍNAS Y LECTINA EN DISCOS DE PAPA. (Determination of fractional
rates of protein and lectin synthesis i n potato slices). Casalonoué. C A . v
Pont Lezica. R.
Instituto de Investigaciones Biológicas, Fac. Ciências Exactas y Naturales,
Universidad Nacional de M a r del Plata y Centro de Investigaciones
Biológicas, FIBA.
La lectins de papa es una glicoproteína presente en la pared c e l u l a r ,
r i c a en h i d r o x y p r o l i n a Estructuralmente es semejante a otras
glicoproteinas constitutivas de la pared como las extensinas. E n la
actualided se desconocen las funciones de la lectina, asi como muchos
aspectos ligados a la sintesis, glicosilación y secreción de la m i s m a E n
trabajos anteriores encontramos que la lectina es abundante en tubérculo
y que los discos eireados de perénquima amiláceo e r a n copaces de
sintetizar lectina. E l objetivo de este trabajo fué cuantificar la sintesis de
lectina y otras proteínas en discos aireedos, para determiner s i la sintesis
de la misma tiene la misma magnitud durante todo el tiempo ob eireeción o
presente óptimos bien precisos.
P a r a r e a l i z a r Ias mediciones se procedió a saturar el pool de p r o l i n e
con dosis masives de L - [ H ] p r o l i n o ( 5 0 m M ) , midiendo Ias velocidades
iniciales de sintesis de proteínas totales y lectins a distintos tiempos de
aireecion por incorporaciõn de radiactivided. Se determino el contenido de
P r o en Iss proteínas a los distintos tiempos y en lectina. £1 contenido de
lectina se determino inmunológicamente.
3
Los resultados indiesn que el contenido total de proteínas aumenta sólo
un 9% en Iss p r í m e r s s 3 6 h de siresclón. l a sintesis de proteínas totales
tiene un máximo en Ias p r i m e m 12 h d e a i r e a c i ó n , lo que representa u n
19X de incremento sobre la velocidad inicial de sintesis. P o r o t r a p a r t e ,
si bien el contenido total de lectina no v a r i o notablemente durante la
aireación, s u sintesis se aumento u n 7 6 Z con respecto a le velocidad
inicial a Ias 36 h de aireación. Se concluye que el sistema de discos
aireedos es apropiado para el estúdio de sintesis, glicosilación y secreción
de lectina, dado que por tener una sintesis tardia, no se v e i n t e r f e r i d a p a la sintesis de otras proteínas de la papa que e c u r r e en tiempos distintos.
Trabajo realizado con subsidies de CONICET y CIC.
CLONAMIENTO DEL GEN ESTRUCTURAL DE INVERTASA DE NEUROSFORA CRASSA POR EXPRESION EN LEVADURA (Cloning of the
structural gene for invertase of Neurospora crassa by
expression in yeast). Carú, M., CifuenteB, V. y Jimenez, A*. Laboratório de Genética, Departamento de Cien
cias Ecológicas, Facultad de Ciências, Universidad de
Chile, "Centro de Biologia Molecular, CSIC, UAM, Madrid,
Espana. (Patrocínio: G. Pincheira) .
La invertasa de N. crassa (B-D fructofuranosidasafructohidrolasa EC 3.2.1.26) es una glicoproteína que
cataliza la hidrolisis dei enlace B-fructosido en una
variedad de sustratos, entre ellos la sacarosa.
El gen estructural de invertasa (inv) de Neurospora
se clonâ por complementación génica de la mutaciõn suc°
de Saccharomyces cerevisiae (cepa M R 1 7 A ) .
Para el clonado se utilizo una libreria genõmica construída en el
plásmido de replicación autônoma de levadura (YRp7).
El DNA genómico de la cepa silvestre de Neurospora crassa (7^1 ~A) se digirio parcialmente con la endonucleasa
de restricciòn BamHI y los fragmentos resultantes se in
sertaron en el único sitio BamHI dei plásmido vector.
+
De los clones transformantes de levadura sue se ais^
16 un plásmido recombirrante (pNC-2) que posee un inserto de 7.6 Kb que híbrida con el DNA genômico de Neurospora.
Los transformantes de levadura suc tienen actividad
enzimática detectable y los ensayos inmunológlcos indican la presencia de un peptide inmunoreactivo con suero
anti-invertasa de Neurospora.
+
El plásmido recombinante transforma un mutante_de
Neurospora que carece de invertasa funcional (inv ).
El análisis dei DNA de los transformantes indica que el
modo de transformación es recombinación homóloga.
ACTIVIDADES PR0TE0LITICAS NEUTRA Y ÁCIDA EN HIQA00 Y RIN0N DE
RATONES EN DIETAS C0N DIFERENTE CONTENIDO PR0TEICO. ( N e u t r a l and
acid proteolitic activities i n l i v e r and kidney f r o m mice under different
protein diets). Cassia. R 0 . . S a n l l o r e n t i . P.M. v Conde. R.D. Instituto de
Investigaciones Bioleogicas, Facultad de Ciências Exactas y Naturales,
Universidad Nacional de Mar del P l a t a
El contenido proteico de hígodo y r i n ó n d i s m i n u y e un 4 0 * en animales
alimentados s i n proteínas durante 5 dias. A l realimentarlos con una dieta
completa recuperan rapidamente s u contenido proteloo n o r m a l . Esto se
debe a una inhibición general de I s proteólisis intracelular. La regulación
de la capacidad protsolítica intracelular podría e j e r c e r s e al n í v e l de
proteases neutras ( p H o p t i m a 7 5 ) o el n í v e l de proteases lisosomales
( p H o p t i m a 5 . 0 ) . En este trabajo se enali2eron Ias actividades
proteoliticas neutra y ácida en nomogenatos de higado y r i n ó n de animales
controles, privados de proteínas y realimentados con dieta completa E l
ensayo consistió en medir le h i d r o l i s i s de azoceseine. Se obtuvíeron los
siguientes resultados: la actividad a p H 5.0 fue la más sita en todos los
casos. Asimismo este aclividod, p o r gramo de r i n ó n , fue dos voces mayor
que en higado. Además, esta actividad proteolitica no se modifico en ambos
órganos como consecueneta dei tratamiento n u t r t c l o n a l , especialmente en
el r i n ó n . E n promedio, le actividad n e u t r a p o r g r a m o de r i n ó n fue cinco
veces m a y o r que en higado. A l realimentar los órganos no m o s t r a r o n una
franca recuperación de la actividad proteolitica n e u t r a
Los resultados obtenidos no p e r m i t e n concluir que hay una correlación
absoluta entre Ias capacidades degradotivas in yivoy Ias actividades
proteoliticas neutra y lisosomal de ambos tejidos. Sin embargo, llama la
atención que Ias actividades neutras decaigan y no acompanen al proceso de
recuperación dei contenido proteico. Esto podría estar relacionado con la
inhibición de la degradacion que exhiben los órganos en recuperación.
Financiado p o r C0NICET, C I C y FIBA.
R 191
EXCRECIÕN DE AMONÍACO Y UREA EN ORINA DE ANUROS DE D I F E RENTES HABITATS.{Urinary ammonia and urea excretion in
anurans o f differents habitats). C a s t a f l é , P U , R o v e d a t t i ,
MG y S a l i b i á n , A.Universidad Nacional de Luján y Comiaión de InveaLigaciones Cientificus de )u Província de
Bs. As.
La mayoría de los batracioa excretan por orina NH^(A)
y urea (U) y, en menor escala, ácido úrico (AU). Se acep_
ta que el A predomina en larvas y adultos acuáticos, y
la U en Ias espécies terrestres. La presencia de AU está
descripta en algunas espécies sin haber una corresponden
cia con el habitat conto en los o t r o B casos. Se sabe que
vuriou fucloreu (uutudo nutricionul, Lemperutura, celución, etc) inciden sobre el metabolismo proteico alteran
do el perfil de l a excreciõn urinaria. Se ha evaluado el
A y la U en la orina de cuatro anuros pre-adaptados a
condiciones de humedad, temperatura y estado nutricional
conlroludos: B u f o aranaru» (peso 27.9 * 2.5 g; n: 2 4 ) ,
B . g r a n u l o s u s (peso 17.5 + 1.4 g ; n: 1 8 ) , L c p t o d a c t y l u s
o c e l l a t u » (peso 50.5 + 4.2 g ; n: 19) y B . a r u n c o (peso
63.0 + 5.1 g ; n: 33); los primeros tres son terrestres,
cavfcola y semlacuátlco, y e l último de l o s vulles monta
riosos chilenos de la Cordillera Central. Lus determinaciones de U y A fueron realizadas por i a técnica de Faw
cett y Scott (con y sin ureasa). Los resultados están
en U(í-N/ml y expresados como % dei total de los producLou mudidoti. I.oii % de N-U fuoron: B . a r e n a r u a , 9b. 0 v
0.5; B . g r a n u l o s u s , 95.6 • 0.7; L . o c e l l a t u s , 91.1 »
0.6; B . a r u n c o , 95.0 + 0.5. Los valores absolutos de U
y A mostruron p.run variabilidad estucionai pero al con
uiüurarlou como % ellou ruuul l.uron homugóncou.
M0DIFICACION DE I A QUINASA PIRUVTCA DE MUSCULO DE CONEJ0
POR 8-AZlDO-l,N -ETENO ADP. (Modification of rabbit
muscle piruvate kinase by 8-azido,l,N -etheno A D P ) .
Castillo,Y., WiIkens,M., Salas,L., Schãfer,H-J. y Bazaes
S.
Laboratório de Bioquímica, Facultad de Ciências Biológicas, P . Universidad Católica de Chile e Instituto de
Bioquímica, Universidad de Mainz, Alemania.
6
6
Con el objeto de marcar el sitio activo de la quinasa
pirGvica de musculo de conejo (PK) se empleó el reactivo
fluorescente de fotoafinidad 8-Azido-l,N -eteno ADP
(eN ADP) .
Al irradiar la enzima en presencia de eN ADP se produ
ce la inactivación progresiva de ella, alcanzSndose un
valor máximo de inactivación que depende de la concentra
ción de e.N ADP empleada. Junto con la inactivación se
produce la incorporación del reactivo fluorescente a la
enzima. Se encontro una relación hiperbólica entre p e r dida de actividad y concentración de eN ADP. Por extrapolación a concentración infinita dei reactivo se obtuvo
un 100% de inactivación.
3
3
3
3
Lo^ nucleotides ADP y ATP en ausência y en presencia
de Mg protegen eficazmente a la enzima de la inactivación, no así la adenosina. E l Mg también produce buen
efecto protector y el PEP casi no produce protección.
La PK parcialmente inactivada presenta la misma Km para
el ADP que la enzima nativa. L a incorporación de " C - B azido ADP (N ADP) a la PK nativa es de alrededor de 1
mol por subunidad de enzima; este valor se reduce propor
cionalmente al grado de inactivación en la PK parcialmen
te inactivada por cN ADP.
2
+
2
3
3
Se concluye que el e N A D P actúa como reactivo de foto
afinidad, sobre la PK de músculo de conejo, de modo simi
lar al N A D P empleado previamente.
3
3
Proyecto DIUC 90/85, P . Universidad Católica de Chile.
La diferente disponibilidad de agua en los habitats a
los cuales pertenecen Ias espécies estudiadas no se refleja en el perfil de su excreciõn nitrogenada.
CONTRIBUCION A LA LIMNOLOGIA DE LAGUNA REDONDA,
CONCEPCIÓN. UN SISTEMA EN EUTROFICACION (Contribution to the Limnology of Laguna Redonda
Concepción. A system In process of eutrophycatlon). Castro, H. , Dellarossa, V. Lab. Llmnolog f a , Depto Botânica, Fac.Cs.B1ol.y de Rec. Nat.
U . de Concepción (Patrocínio: Irmã V11a).
La Laguna Redonda, un peque fio lago dentro de
la cíudad de Concepción (36° 50' S, 70° 0 2 ' W.)
se encuentra en proceso de eutroflcadón por t ç
tlvldad cultural y r e c r e a d o n a l . Se describe Is
morfologfa en Laguna Redonda y se discute su 1n
fluencla en los ciclos blogeoqufmlcos para comprender su f u n d onamlento.
El estúdio se realizo durante 1nv1erno-pr1ma
vera de 1985. Para batlmetrfa se usó un ecosonda. Los parâmetros morfométrlcos, ablótlcos y
blóticos se midéeron seqún la metodologia es tan
dar. Los resultados 1nd1can:una profundi dad de
17.75 m, un ancho máximo de 195 m, largo máximo
de 210 m, un vglumen de 0,3 km3 y una superfície de 2,88 k m . L« clrcuíadón es Invernal, la
t ° , el O 2 , el pH y nutrientes se dlstrlbuyen ho
mogeneamente. El fltoplancton está dominado por
Microcystis aeruginosa. La es tratl f 1 c a d ón dlst1ngue:un eplllmnlo con sobresaturadón de 0 ? ,
la termocllna se presenta entre 5-7 m (3.5°C/m)
un h1pol1mn1o anóxlco a profundidades mayores
de 7 m. El fltoplancton está dominado por
Perldlnlum w11 lei. Las curvas cllnogradas de Og
y pH sumadas a altos valores de nutrientes, sugieren un proceso en desarrollo de eutroflcac1 ón.
2
PROPIEDADES DE LIPOSOMAS CONTENIENDO SULFOBR0M0FTALEI_
NA ENCAPSULADA. (Properties of liposomes containing
sulfobromophthalein entrapped) Catalã, A. y Zanetti, R.
Instituto Multidisciplinario de Biologia Celular
(IMBICE) C.C. 403, (1900) La Plata, Argentina.
La sonicación de fosfolipidos en agua produce poblaciones uniformes de liposomas de bicapa simple (200Â)
con un alto grado de curvatura, que afecta muchas de
las propiedades fisicas de los fosfolipidos en la vesicula. En el presente trabajo se estudiaron la formacion y propiedades de liposomas unilamelares (1000Â).
Liposomas de lecitina, conteniendo sulfobromoftaleina
(BSP) encapsulada, fueron preparados a partir de lecitina y deoxicolato (1:2). La eficiência de encapsulamiento de estas vesículas fue funcion de la concentración de BSP, alcanzando un máximo para una relación
lecitina/BSP = 25. Las características espectrales de
BSP en diferentes solventes (£ max) relacionadas con
la polaridad aparente del solvente (ET), indican que
el entorno de BSP en liposomas corresponde a aquel del
colorante en agua. Se observo liberaciõn de BSP desde
liposomas cuando estos fueron incubados con albumina,
El BSP liberado aparece asociado a albümina cuando la
mezcla es analizada por filtración a traves de Sepharosa 4B. El BSP es también liberado de las vesículas
cuando estas son incubadas con ãcido oleico. Sin embargo la cantidad de BSP liberado fue raucho menor que
la observada en presencia de albumina. Estas vesículas
parecen ser adecuadas como aceptores en estúdios de
transferencia de ácidos grasos entre membranas.
R 192
ATPasa DE T. cruzi: MODIFICACTON DE RESIDUOS DE CISTEINA POR ACCION DE RADICALES DEL 0 . i T . rr,mi
ATPase:
modification of cysteine residues by oxygen radicals).
Cataldi de Flombaum. M.A. y Stoppani. A.P.M.
Centro de Investigaciones Bioenergeticas y Cátedra de
Química Biológica, Facultad de Medicina, Universidad da
Buenos Aires.
2
Es sabido que espécies moleculares generadas por reducciõn parcial del oxigeno, especialmente al radical
OH*, producen la inactivación de numerosas enzimas, entre Silas la ATPasa mitocondrial del Trypanosoma cruzi.
En trabajos prévios se demostro que esta enzima posee
arginina en el centro catalítico, como asi tambien grupos SH de los cuales depende la actividad da la ATPasa.
En el presente trabajo se realizaron cinSticag de inhibición a fin de localizar el sitio de acción da los produccos de la reduccion parcial del oxigeno genarado por
el sistema Cu-ascorbato. Sa estúdio el efecto de la inhibición, en forma conjunta, de radicales OH', a concentracion constante y de fenilglioxal (reactivo da argininas) a concentracion variable. El análisis de loa resultados por gráficos de Dixon (de l/v en función de la
concentracion de inhibidor) dan como resultado inhibición lineal no competitiva, indicando que ambos inhibidores pueden afectar la enzima simultaneamente, actuando a nivel de distintos residuos de aminoácidos. Resultados coincidentes se obtuvieron en condiciones da ATPMg variable ya que el análisis de los datos por gráficos de dobles recíprocas responde a inhibición dei tipo
no competitivo. El estúdio de cinática de inhibición
por concentraciones variables de £-cloromercuribenzoato
y constantes de OH', actuando simultaneamente, es dei
tipo competitivo, es decir que los dos inhibidores se
excluyen mutuamente. Los resultados obtenidos sugieren
que la inhibición producida por los produccos de la reducción parcial del 02 sobre la ATPasa se localizo a
nivel de restos SH.
CARACTERIZACIÓN DE DOS BACTERIOPAGOS RELACIONADOS A
CÂMBIOS EN LA SUPERFÍCIE CELULAR Y OOMPETITIVIDAD
DE RHIZOBIUM MELILOTI. (Characterization of two
bacteriophages related to cell surface changes and
competlveness of Rhizobium mellloti). Cavalgnac,
S^, Colra. J.A. y Ugalde, R.
—
Instituto de Investigaciones Bioquímicas Pundación
Campomar y CONICET, Bs. As., Argentina.
En Ia cepa 102P51 de
mellloti se han identificado
dos
fenotipos,
caracterizados
por
diferente
aglutinabilidad
por
aglutlninas
de
alfalfa, competltivldad y sensibilidad a los fagos
16B y P20. Estos bacteriõfagos pueden ser usados
para identificar câmbios en la superfície celular y
habilldad de nodulación de R^ mellloti. Los mlsmos
fueron caracterizados por mlcroscopía electrónlca,
alslamlento dei ácido nuclelco, análisis con endonucleasas de restricciòn y electroforesis en gel de
poliacrilamida de sus proteínas. El fago 16B tiene
oabeza ioosaédrlca de 58 nm de diâmetro, cola de
100 nm de longltud y 6.1 nm de diâmetro, DNA 2c de
50 Kb, dos proteínas mayorltarias de 39 y 16 Kd y
otras siete minoritárias entre 14 a 140 Kd. El fago
F20 tiene cabeza ioosaédrlca de 55 nm de diâmetro
cola, de 47,5 nm de longltud y 9 nm de diâmetro,
DNA 2c de 40 Kb, una proteína mayorltaria de 42 Kd
y otras once minoritárias entre 12 a 98 Kd. Los
estúdios realizados lndican que los fagos 16B y F20
son muy
diferentes. De
distintos
suelos de
alfalfares de la Argentina se han ais lado fagos
semejantes al 16B con respecto a su rango de
huésped.
C O R R I E N T E S I O N I C A S EN UNA L I N E A C E L U L A R CARDIA
CA DE RATA A D U L T A . (Ionic c u r r e n t s in an adult
rat c a r d i a c c e l l l i n e ) .
C a v i e d e s . P.
y
J a l m o v i c h , E . D e p a r t a m e n t o de F i s i o l o g i a
y
B i o f í s i c a , F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d
de C h i l e .
GENOTOXICIDAD DEL ALCOHOL EN LA POBLACION CHILENA. UN
ESTÚDIO PRELIMINAR. (Alcohol Genotoxicity in the Chilean Population). Cea, G., Weigert, G., Alarcón, M.,
Shiith, C., Mena, M. y Venegas, W.
Facultad de Ciências Biológicas y de Recursos Naturales
Universidad de Concepcidn. Proyecto N- 20.31.14 DIC.
Una l l n e a c e l u l a r c a r d í a c a fue e s t a b l e c i da p o r n u e s t r o l a b o r a t ó r i o y se m a n t i e n e
en
cultivo permanente por tres a n o s . Las células
•antienen parâmetros morfológicos diferenciados y b i o q u í m i c o s o r g a n o e s p e c l f i c o s d e s c r i t o s
p r e v i a m e n t e , tras d o s m e s e s de c u l t i v o e n m e dio d e f i n i d o con 0 . 5 % de s u e r o de b o v i n o .
M e d i a n t e la t é c n i c a d e l p a t c h - c l a m p ,
en
c o n f i g u r a c l ó n de r e g i s t r o en c é l u l a e n t e r a ,
se d e t e e t a r o n c o r r i e n t e s i ó n i c a s a c t i v a s en
3 3 % de los s e l l o s e s t a b l e c i d o s .
Con potenc i a l c o n t r o l a d o , se o b s e r v a r o n c o r r i e n t e s de
e n t r a d a de h a s t a 2.S n A / c m 2 que se i n a c t i v a n ;
s e g u i d a s de c o r r i e n t e s de s a l i d a de h a s t a
B nA/ca
q u e no se i n a c t i v a n .
Los p o t e n c i a l e s de i n v e r s i o n de Ias
c o r r i e n t e s de e n t r a d a se e n c u e n t r a n a + 1 1 9 mV
y +90 m V , con t i e m p o s de a c t i v a c i ó n p r o m e d i o
de 2.7 y 2.1 n s e o r e s p e c t i v a m e n t e .
Algunas
de d i c h a s c o r r i e n t e s se a b o l i e r o n en p r e s e n cia de TTX 20 n M .
E s t o s h a l l a z g o s p e r m i t e n e s t a b l e c e r la
p e r s i s t ê n c i a de a l g u n a s p r o p i e d a d e s de e x c i t a b i l i d a d en esta l i n e a c e l u l a r .
En Chile el alcoholismo es un problema de salud pública (5% de alcoholicos, 15% de bebedores excesivos).
En 1973, Jones y Smith definieron la patologia conocida
como Sindrome Fetal Alcohdlico (FAS), que demuestra el
efecto teratogénico del alcohol. Mena et^ al_ (1984) encuentran en la Octava Regidn un 10.2% y 19.0% de prevalência de FAS en escuelas especiales y hogares del
SENAME, respectivamente. Un 18.0% de los nifios con padres bebedores excesivos y madres abstêmias presentaban
signos parciales de FAS y bajo IQ.
2
F i n a n c i a d o p o r DIB U n i v . de Chile B . 2 1 2 U ,
B. 2 1 2 3 y M u s c u l a r D y s t r o p h y A s s o c i a t i o n .
Estos datos y los de otros autores, sugieren que el
alcohol y/o sus catabolitos inducen mutaciones transmisibles en las células germinales humanas. Debido a esto se ha decidido investigar el dano genético inducido
por el alcohol en alrrededor de 200 grupos familiares
clinicamente caracterizados, que presentan ninos con
FAS.
El estúdio comprende la determinacidn de la frecuencia de aberraciones cromosómicas e intercâmbio de
cromâtidas hermanas (ICH) en linfocitos de los miembros
de estas famílias, tipificadas de acuerdo a sus patrones de ingesta alcohdlica.
Los resultados de un estúdio piloto preliminar, realizado en un grupo familiar tipo III (padre bebedor excesivo, madre abstêmia e hijo con FAS), muestran una
frecuencia de ICH por célula elevada en el nino con FAS
(22.1) y en el padre (11.1) con respecto a la de los
controles (7.6) ( p - 0 . 0 1 ) .
Este Proyecto forma parte de un proyecto multldisciplinario en relaciôn al alcohol y sus efectos en la poblacion chilena.
INHIBICIÓN DE HEXOQUINASAS POR UNA PROTEÍNA CITOSOLICA
DEPENDIENTE DE FRUCTOSA-2,6-BISF0SFAT0. (Inhibition of
hexokinase by a fructose-2,6-bisphosphate-dependent
cytosolic protein).Cerpa, C. , Niemeyer, H., Rabajille,
E. y Acoria M. Departamento de Biologia, Facultad de
Ciências, Universidad de Chile.
El fructosa-2,6-bisfosfato (Fru-2,6-P ) inhibe la
actividad hexoquinásica en el citosol de higado de
rata. Las hexoquinasas se miden espectrofotométricamente en el citosol filtrado por Sephadex G-25, con un
sistema acoplado de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa
de L . mesenteroides y NAD. La inhibición es función
dei volumen de citosol y de la concentracion de
Fru-2,6-P . A concentracion constante de citosol, el
Fru-2,6-P disminuye la velocidad máxima y
el
de la función de saturación con glucosa de la actividad hexoquinásica endógena total dei citosol. El
Fru-2,6-P
fue muy específico en su efecto, pues
otros metabolitos no produjeron inhibición ni interfirieron en la inhibición por Fru-2,6-P,,. Las 4 hexoquinasas de mamífero (A, B, C, D) semipuri ficadas, así
como la hexoquinasa de levadura, fueron inhibidas por
Fru-2,6-P , pero solo en presencia de citosol. El
inhibidor citosólico es inestable y el Fru-2,6-P fue
un protector efectivo de su inactivación térmica. El
inhibidor no fue retenido en DEAE-celulosa en condiciones en que Ias hexoquinasas de higado son retenidas y
precipito entre 30 y 4056 de saturación de sulfato de
amonio. Por filtración en gel se estimo un peso
molecular de 200.000. Se postula que el inhibidor es
una proteína reguladora dependiente de Fru-2,6-P .
2
2
2
2
R 193
P A T R O N E S DE R E S I S T Ê N C I A Y ROL DE A C I N E T A B A C T E R
C A L C O A C E T I C U S COMO I N T E R M E D I Á R I O EN EL INTERCAM
BIO DE I N F O R M A C I O N G E N É T I C A . (Resistence patterns"
and role of A. calcoaceticus as an intermediary in the
genetic information exchange). Chabouty, H., Montoya,R.
*Bello, H., *Mondaca, M.A. y *Zemelman, R.
Departamento de Biologia Molecular y *Departamento de Microbiologia, Facultad de Ciências Biológicas y de Recursos Naturales, Universidad de Concepción.
Cepas de A. calcoaceticus han sido aisladas de productos
patológicos, de ambientes con y sin contaminación por co
liformes de la zona de Concepción.
Las cepas presentan una elevada resistência para antibió
ticos beta lactámicos (CMI>256 mcg/ml), variable para
aminoglicócidus (CMI: 2 - 1024 mcg/ml), mediana para sul
fametoxazol, estreptomicina y cloranfenicol (CMK256
mcg/ml) y baja para tetraciclina y ácido nalidíxlco
(CMI í 2 mcg/ml).
La investigación de plasmidios demuestra su presencia en
sólo dos de Ias cepas estudiadas.
Experimentos de traspaso de información genética:
2
2
a) Conjugación con IS. coli plasmidio RP 4, £. flexneri
plasmidlo UC 1,
b) Transformaciones con el plasmidio pBR 322 y otros, de
muestra la posibilidad de Ias cepas de A. calcoaceticus para actuar como intermediários en el intercâmbio
de información genética en ambientes contaminados
principalmente por enterobacterias.
2
Financiado por Proyectos dei Departamento de Investigaciõn y Bibliotecas, Universidad de Chile, dei Fondo
Nacional de Ciências y Tecnologia y de la Organizaciõn
de los Estados Americanos.
IBOVnrDACIO» Y BBFH0B1XCI0B EB EL ALCOHOLISMO m P S H K f t J
TAL (Peoundation 4 Reproduction in Experimental Alooho
llaa')?Ch«la.S.;Camt>a»â.I.?Cru«.II.C..Roll».A. y Allien*
d » . ? . Universidad de Chile-raoultad i e Kadloiaa- Ina^
tltuto de Hedioina Experimental. (Patroolnloil. Bgaga).
BI alcohol (gtOH) y su derivado A1CH0 produaen altera
oidn neuxofi siopat oldgi oa j bioquímloa «a dlverses Ó£
canoa, M C «atra et res .Se ha diseHado aodeloa da alooheliaao experimental que na entraSan neoanieaes gwnítioo y otro en qaa «para la genetioldad. Bn nueatzc Institute sa ored al alooaelien© permanente y ge—
naraeiemal (AO rata)íneoanie»« genítioo. Bata Matar
normal y a O / 2 5 (suaoepa areada en nuestro Instituto
oebe exeluairameate EtOI 25!» durante 16 gener. Se ea—
pled 11 y 12ava gtmer. 4ã $ normal j 4 8 $ AO/25 orusadaa oonr/Vioxaal 7 AQ/2*>. Se sstudld diariaaente fretia vaginal oiolo estral) oruoe an dfa fértll.preíss
oon el hallaafo de tu eaperaio al frotls. 8a oantrold
neoaatalea y orfaa al d eat et e. 4 grupoail iÇ-Ioraal y
cfSoraal) 2 i 9 AO/25 ycPAfl/.»- 3-SA0/25 yo*í«r«al| 41
% lormal 7<fkQ/25.
Resultado». Loa oioloa prevloe al
oruoe fueron irregulares y da mayor duraeiòn en AQ/25
00 aparadas oon oontrol• Laa 2 AO/25 turlexon mayor difioultad para preBarae en eondioionea aiallarea a sus
oontrol es, necao que ae potenoló oono*AO/25, iate no
fuá determinante por a í solo. BaYbaraao no se prolongo
en el ale. materno y/o paterno. BI materno y paterno
redujo loa implantes, sin dlferenolas eon aleohollsmo
mixto y materno exolualvo. El paterno exoluairo indujo menor reduooion. El V de orfaa aertinataa y el B*
de abortos no ae afeettf por eltfV/o-jL. Bl materno exclusivo ea preponderante en la reduocldn de orfaa al
deatete. El alcoholismo paterno no influyd l a vi abi li,
dad. Críae naoidaa vivaa fueron menos en rata* AG/25.
Conolualòn iBl ale. materno mayor efecto en reprodneoidn, alterando loa oiolaa, dificultando el erooe (ma.
yor N» de oruoes en dfa fértil ain preBes). Preaenttf""
menor JJ» da implantea, de aeonatalea y viabilidad. El
paterno taablen determind alteraoionea aunque nenores.
« Alumnaa-ayudantes-inreatigadoraa.
o
Se investiga la presencia de trasposones que expliquen
la codificación de resistência hacia antibióticos aminoclicósidos detectada en algunas de Ias cepas aisladas.
PARTICIPACION DEL COMPLEJO FERREDOX1NA N A D P
REDUCTASA/PROTEINA DE UNION EN EL TRANSPORTE DE ELECTRONES FOTOSINTETICO. (Involvement of
ferredoxin-NADP reduetase-binding protein complex in
the photosynthetic electron transport chain). Chan, R.L..
Sonctni. F.C y Vallejos. R.H.
Centro de Estúdios Fotosintêticos y Bioquímicos (CON1CET, F.M. Lillo, Universidad Nacional de Rosário) Suipacha 531, Rosário, Argentina.
Se ha demostrado que la ferredoxina-NADP reductasa
estã unida a la membrana tilacoide de cloroplastos de
espinaca a través de un trfmero de un polipêptido de 17.5
kDa que sentiria el gradiente protónico y se Io transmitiria a la reductasa [Vallejos y col. (1984) J. Biol. Chem.
254, 8048]. La reductasa es una enzima extrfnseca regulada por luz, esto es, la luz aumenta la afinidad de la
misma por sus sustratos naturales: ferredoxina y N A D P
[Carríllo y Vallejos (1983) TIBS 8(2) 521.
Se prepararon fragmentos Fab de IgG contra la proteína de unión (polipêptido de 17.5 kDa) de espinaca. Estos fragmentos inhiben el transporte de electrones lineal
desde agua hasta NADP, probablemente impidiendo la
formación del complejo ternario entre fotosistema I, ferredoxina y el complejo reductasa-protefna de unión.
La velocidad de inactivación es mayor cuando la incubación de las tilacoides con los Fab se hace en luz y
en presencia de ferredoxina indicando que la generación
dei gradiente protónico producido por el transporte de
electrones cíclico alrededor dei fotosistema I, producirfa
un cambio conformacional en el complejo reductasa-protefna de unión aumentando la exposiciSn de esta última
a los Fab. Los Fab anti-proteína de unión inhibieron la
fotofosforilación acoplada al transporte cíclico y este
efecto dependia de la concentracion de ferredoxina.
R 194
APRENDIZAJE MONOCULAR CONFLICTIVO ENTRENANDO EN INVERSION EL OJO IPSI O CONTRALATERAL EN LA RATA ALBINA (Conflict learning in albino rats when a monocularly learned
task is reversed with the ipsi or contralateral e y e ) .
Susana Aronsohn, Andrea Chellew, Humberto Guadagno y Teresa Pinto-Hamuy. Depto. de Fisiología y Biofísica, Facultad de Medicina Norte, Universidad de Chile.
Se ha considerado el sistema visual de la rata albi
na como equivalente al de un cérebro dividido por ser
esencialmente cruzado (90* de fibras contralaterals) lo
que tnducirfa a una escasa interacción hemisférica. Se
trato de demostrar conductualmente la relativa indepen dencia de hue lias mnémicas entre ambos hemisférios mediante la adquisición dei hábito de inversion. Se entrenaron 3 grupos de ratas en una tarea de discriminación
de triângulos (erecto vs.invertido): Grupo control binocular (n-6), Grupo ipsilateral monocular (n-7) y Grupo
contralateral monocular (n-8). Todos adquirieron el hábi
to en un número semejante de ensayos y errores. En la tã"
rea de inversion (se cambia el valor de refuerzo de l o s
estímulos) se comparo el número de errores en la primera
sesión. Las ratas entrenadas con el mismo ojo (ipsilate
ral) no se distinguen dei grupo control en el sentido dê"
que sistematicamente responden al estímulo reforzado anteriormente. El grupo contralateral en cambio, no muestra claramente esta preferencia, siendo su rendimiento
significativamente diferente al de los otros dos grupos
(pC05). Finalmente, en un test en que todos los sujetos
se enfrentan binocularmente ante los mismos estímulos
prévios, sólo el grupo control elige sistematicamente el
último reforzado. Estos resultados sugieren una relativa
independência funcional de Ias huellas de memória entre
ambos hemisférios.
-
Financiado por el proyecto DIB B-1903-8633
ESTÚDIOS SOBRE LA RESISTÊNCIA A TELURITO
EN
BACTÉRIAS DEL GÊNERO
Ther mus.
(Studies
on
Lhe r e s i s t a n c e t o t e l u r i t e
in Thermus
sp)
Chiong
M . , Barra,
R., G o n z a l e z ,
E.
y
Vasquez,
C.
Labor a torlo
de
Bioquímica,
Facultad
de
Ciências
Químicas
y
Farmaceúticas,
Universidad
de
Chile.
9
D u r a n t e e s t o s u l t i m a s afíos,
nuestro
m t e r é s s e h a e n f o c a d o h a c i a el e s t ú d i o d e la
expresión génica a altas temperaturas. Hemos
e s c o g i d o c o m o m o d e l o a T. thermophilus
HB8 y
T. flai'us
AT62 y sus plasmidios
respectivos
pTTB y pTF62. No ha sido
pasible
adscribir
un
marcador
genético
a
tales
elementos
e x t r a c r o m o s o m a l e s , par lo q u e e s
necesario,
m e d i a n t e m a n i p u l a t i o n iri
vitto,
incorporar
algún gen marcador a tales p l a s m i d i o s .
Las
espécies
mencionados
puseen
resistência a sales de telurio. Hemos iniciado
experimentos
tendientes
a
aislar
y
c a r a c t e r i z a r e s t e gen a fin d e i n s e r t a r l o en
los
plasmidios
ya m e n c i o n a d o s
como
un
marcador
genético.
F'aral el a m e n t e ,
hemos
comenzado
un
estúdio
de
la
actividad
e n z i m a t i c a r e s p o n s a b l e d e tal r e s i s t ê n c i a la
que hemos denominado telurito reductasa
por
su c a p a c í d a d p a r a r e d u c i r K^TeOs
a Te°, a
e x p e n s a s d e la o x i d a c i ó n d e N A D H .
El
peso
molecular determinado para esta enzima e s de
50-55 Kdaltons.
S u extrarío
comportamiento
cromatografico ha dificultado su
obtencion,
aún c u a n d o s e h a l o g r a d a u n a p u r i f i c a c i ó n d e
3 0 v e c e s c o n r e s p e c t u al e x t r a c t ü c r u d o .
Hemos determinado algunas propiedades
de
la t e l u r i t o r e d u c t a s a , s u T ° o p t i m a -fluctúa
entre 6 5 - 7 5 ° C , su p H òptimo
es
7,5, es
i n h i b i d a c o m p l e t a m e n t e p a r NaCl 0,3 i'1 y S D 5
0.01'/.. S i n e m b a r g a , u r e a 1,5 M y T r i t o n - X I O O
3 % , n o a-fectan
su actividad.
Esta
enzima
p u d i e r a e s t a r r e l a c i o n a d a c o n un
mecanismo
de resistência general
a
metales
pesadas.
Tal
posibilidad
crea
una
potencial
aplicacioii b i o t e c n o l ó g i c a
al
mecanismo
de
r e s i s t ê n c i a m e n c i o n a d o , e s p e c i a l m e n t e en l a
que
se refiere
a
descontaminacion
de
ambientes en q u e tales metales s e encuentran
presentes.
F i n a n c i a d o por D I B B 2 3 1 8 8 6 1 3 , IFS E/834-1
Fondecyt 5035/85.
y
MULTIRRESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS Y TRANSFERENCIA G E N É T I CA EN C E P A S DE S a l m o n e l l a t y p h i m u r i u m . ( A n t i b i o t i c
resistance and genetic t r a n s f e r i n Salmonella typhimurium
S t r a i n s . ) Cofre,G. .Miranda, M.,Morales,R. y Henriquez.V.
L a b o r a t ó r i o de M i c r o b i o l o g í a , Departamento de B i o l o g i a
C e l u l a r , F a c u l t a d de C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s , P o n t i f i c i a U n i versidad
Católica de C h i l e .
M 0 D I F I C A C I 0 N P O R F L U O R E S C A M I N A DE C A N A L E S DE
S 0 D I 0 EN M U S C U L O E S Q U E L É T I C O DE RANA.
( M o d i f i c a t i o n of sodium c h a n n e l s in F l u o r e s c a m i n e t r e a t e d frog s k e l e t a l m u s c l e ) .
C o m p a g n o n , D . y L i b e r o n a , J. L. D e p t o . F i s i £
l o g l a y B i o f í s i c a , Facultad de M e d i c i n a , Uni_
v e r s i d a d de C h i l e .
La r e s i s t ê n c i a m u l t i p l e
a drogas se ha d e t e c t a d o
en S . t y p h i m u r i u m
en un elevado porcentaje (80-90%), en
comparacion a o t r a s e n t e r o p a t ó g e n a s . Se e s c o g i ó un grupo
de c i n c o c e p a s S . t y p h i m u r i u m a i s l a d a s de c u a d r o s d i a r r e i
cos i n f a n t i l e s c o n e l f i n de e s t u d i a r l a r e s i s t ê n c i a a
a n t i b i ó t i c o s y su p o s i b l e mecanismo g e n é t i c o .
La m o d i f i c a c i â n de g r u p o s a m i n o p r i m á r i o s
d i s m i n u y e la a f i n i d a d p o r t e t r o d o t o x i n a ( T T X )
de los r e c e p t o r e s de m e m b r a n a a i s l a d a de s u p e r f í c i e (con m a y o r s e n s i b i l i d a d ) y de t ú b u l o
t r a n s v e r s a l . Esto se r a t i f i c a u s a n d o f l u o r e s c a m i n a a p H 7 . , c o n d i c i o n e s en que o t r o s m a r c a d o r e s de la m e m b r a n a p e r m a n e c e n i n t a c t o s .
La a p l i c a c i ó n de a n t i b i o g r a m a a e s t a s cepas r e v e l o
un p a t r ó n d e r e s i s t ê n c i a s i m i l a r y m u l t i p l e a l o s a n t i b i ó
ticos: cloranfenicol, ampicilina,
estreptomicina.tetracic l i n a y kanamicina. L a c o n c e n t r a c i ó n mínima i n h i b i t o r i a
( C I M ) p a r a c a d a a n t i b i ó t i c o f l u c t u ó e n t r e 125 a 250 u g / t n l ,
a excepción de l a r e s i s t ê n c i a a l a ampicilina que alcanz ó a v a l o r e s s u p e r i o r e s * a 250 u g / m l . L a s i m i l i t u d d e e s tas cepas s e confirmo a l comparar s u s patrones plasmidia^
l e s en g e l e s d e a g a r o s a a l 0.8%. En cada cepa s e o b s e r v a
r o n , p o r l o m e n o s , c u a t r o b a n d a s d e DNA p l a s m i d i a l
cuyos
p e s o s f u e r o n d e : 116 K b , 2 3 , 7 K b , 8 , 6 K b y 2 , 6 K b .
Se e s t u d i a r o n las c o r r i e n t e s de
sodio
( i N a ) en f i b r a m u s c u l a r c o r t a d a b a j o p o t e n c i a l c o n t r o l a d o , b l o q u e a n d o las c o r r i e n t e s de
salida con a s p a r t a t o de THA ( 1 2 0 n M ) i n t r a c e lular.
La c o r r i e n t e m á x i m a (4 m A / c m ? ) es
i n h i b i d a a un 5 0 % p o r InM T T X .
El t r a t a m i e n t o con c o n c e n t r a c i o n e s b a j a s
de f l u o r e s c a m i n a (50 y 100 u M ) p r o d u c e a l t e r a c i o n e s m e n o r e s en INa sin p r o d u c i r c o r r i e n t e s de f u g a .
Se d i s c u t e la p o s i b i l i d a d
de que este t r a t a m i e n t o a l t e r e l a s e n s i b i l i dad d e l c a n a l de s o d i o a T T X y a o t r a s t o x i La t r a n s f e r e n c i a de e s t o s plásmidos mediante c o n j u nas sin que v a r i e n las p r o p i e d a d e s de c o n g a c i ó n c o n E . c o l i K - 1 2 , f u e d e b a j a f r e c u e n c i a y e l úni_
ductancia del canal.
co m a r c a d o r o b s e r v a d o e n I a s b a c t é r i a s t r a n s c o n j u g a n t e s
fue e l de r e s i s t ê n c i a a l a a m p i c i l i n a . Resultados simila^
r e s s e o b t u v i e r o n a l p u r i f i c a r e l DNA p l a s m i d i a l e i n t r o
d u c i r l o p o r transformación a E. c o l i
HB101 y S . t y p h i m u - F i n a n c i a d o p o r D I B , Univ. de C h i l e 2 1 2 3 ,
M u s c u l a r D y s t r o p h y A s s o c i a t i o n y N I H -GM
rium
L T . L a stransformantes fueron todas a m p i c i l i n a r e 35981-01.
sistentes y sensibles al resto de l o s a n t i b i ó t i c o s
ensayados.
?
El
o r i g e n g e n é t i c o de I a s o t r a s
resistências
vadas se a t r i b u y e a genes cromosómicos.
Financiado parcialmente
por Proyecto
FONDECYT 8 5 / 8 6
obser
CARACTERÍSTICAS ULTRAESTRUCTUFALES DE LAS ZONAS DE CONTACTO ENTRE CÉLULAS D E LANGERHTttJS Y LTNFOCITOS EN PRCCE
SOS PATOLÓGICOS EXPERIMENTAI4ES Y HLMANOS. (UltxastructU
ral analysis of the attachment between lymphocytes and
Langerhans cells in experimental and human diseases).
Concha ,M., Fiqueroa,C.D. y Caorsi,!. Instituto de Histo
logia y Patologia, Facultad de Medicina, Universidad
Austral de Chile.
La célula de Langerhans (CL) posee la capacidad de
captar y presentar antigenos a linfocitos T, induciendo en estos una respuesta inmunitaria. La presencia de
zonas de contacto entre ambas células seria la expresion
morfológica de esta función.
En este trabajo se describen Ias características ultraestructurales de estas zonas de contacto en dermatitis por contacto experimental con y sin tratamiento con
colchicina, en câncer cérvico uterino y micosis fungoides. Las muestras se fijaron en aldehídas, OSO4-K4
[Fe ( C N ) ] , con tincion de acetato de uranilo en bloque
o en mezcla f ijador-hidroxido de lantano. El análisis
con microscopla electrordca de alta resolución revelo
3 tipos de contactos: a) puentes intercelulares, b) gli
cocalix-glicocalix y c) aposición de membranas oon sellamiento dei espacio intercelular. Aparecían asociados
a estas uniones microfilamentos y el grânulo de la C L .
En la dermatitis por contacto, colchicina en dosis de
10 u g / 2 0 gr de peso produjo un aumento de los contactos
CL-linfocitos, 24 y 48 hrs después de inyectada, sin mo
dificar la estructura de Ias uniones.
0
Los resultados sugieren que estas estructuras de con
tacto representan interrelaciones transitórias producidas por modificaciones de la membrana plasmâtica, depen
dientes dei citoesqueleto. Es posible que permitan el
intercâmbio de senales o cctnunicaciones de una célula
a otra.
Financiado por Proyecto S-85-16, Direccióh de Investigaciones, U.A.CH. y Proyecto 1233/84 CONICYT.
C A R A C T E R I Z A C I Ó N P A R C I A L DE A C T I V I D A D P R O T E O L I TICA EN F R A C C I O N S O L U B L E DE C R O M A T I N A D E H U E V O
F E C U N D A D O D E E F I Z O DE MAR T. n i g e r , ( P a r t i a l
c h a r a c t e r i z a t i o n of p r o t e o l y t i c a c t i v i t y in so
l u b l e c h r o m a t i n f r a c t i o n from f e r t i l i z e d sea
u r c h i n egg T. ni g e r ) . C o n t r e r a s , M . y S a n c h e z ,
L. D e p t o . B i o l o g i a M o l e c u l a r . F a c . C s . B i o l , y
de R e c . N a t . U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n . C h i l e .
Se ha r e p o r t a d o a c t i v i d a d e s p r o t e o l i t i c a s
en f r a c c i ó n n u c l e a r de h u e v o no f e c u n d a d o y fe_
c u n d a d o de e r i z o de m a r T. n i g e r y se ha s u g e rido que p o d r i a n d e s e m p e n a r u n a f u n c i ó n en la
r e g u l a c i ó n de la e x p r e s i õ n g é n i c a .
En este t r a b a j o se i n f o r m a de la a c t i v i d a d
p r o t e o l i t i c a en la f r a c c i ó n s o l u b l e de c r o m a t i
na en NaCl 0.7M o b t e n i d a de h u e v o s f e c u n d a d o s
( c i g o t o s 80 m i n ) . D e g r a d a c a s e i n a - u r e a con un
pH O p t i m o de 7 a 9.A pH 7.0 d e g r a d a s e l e e t i v a m e n t e p r o t e í n a s de la m i s m a f r a c c i ó n , c o m o tam
b i e n h i s t o n a s de e s p e r m a t o z o i d e s de la m i s m a
e s p é c i e . La h i s t o n a Hi es más s e n s i b l e a la de_
g r a d a c i ó n a 0°C y H 2 A y Hi, a 3 7 ° C .
El e f e c t o de i n h i b i d o r e s de p r o t e a s e s , s o bre la d e g r a d a c i ó n de histona-s, fue: P M S F i n h i b i t en f o r m a p a r c i a l la d e g r a d a c i ó n de t o d a s
e l l a s . ITPS i n h i b i ó p a r c i a l m e n t e la d e g r a d a c i ó n
de h i s t o n a H A . T L C K i n h i b i ó p a r c i a l m e n t e la
d e g r a d a c i ó n de h i s t o n a s HgA y
. TPCK inhibió
la d e g r a d a c i ó n de h i s t o n a
casi en su totali_
dad. C u a n d o la a c t i v i d a d que d e g r a d a
es
inhibida por TPCK ocurre una rápida degradación de h i s t o n a Ho y a l g o m e n o s de h i s t o n a H2B
y HI,.
E s t o s r e s u l t a d o s i n d i c a n la e x i s t ê n c i a de
actividades proteoliticas tipo tripsina y q u i m o t r i p s i n a y s u g i e r e un rol r e g u l a d o r de esta
ú l t i m a s o b r e la a c t i v i d a d que d e g r a d a h i s t o n a
H3.
F i n a n c i a d o por P r o y e c t o 20.31.08. U. de C.
2
R 195
E F E C T O DE P O L I A M I N A S SOBRE L A S Q U I N A S A S DE F O S F A T I D I L I N 0 S I T 0 L Y F O S F O D I E S T E R A S A DE N U C L E O T I D O S C Í C L I C O S DE
MEMBRANAS DE O O C I T O S OE X e n o p u s l a e v i s .
( E f f e c t of
p o l y a m i n e s on t h e a c t i v i t y o f p h o s p h a t i d y l i n o s i t i d e k i nases and c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e s o f X e n o pus l a e v i s o o c y t e m e m b r a n e s . )
Connelly, C , Plaza, M.,
C a r r a s c o , D . y M a r i n c o v i c , B. D e p a r t a m e n t o de B i o l o g f a ,
F a c u l t a d de C i ê n c i a s , y Departamento de Bioqufmica,
E s t ú d i o s de n u e s t r o l a b o r a t ó r i o han d e m o s t r a d o que p o l i l i s i n a ( 0 . 1 - 1 mM) y o t r a s p o l i a m i n a s e s t i m u l a n n o t o r i a m e n t e l a f o s f o r i l a c i o ' n de p r o t e f n a s y l a a d e n i l a t o
c i c l a s a p r e s e n t e en membranas de o o c i t o s de X . l a e v i s .
E s t e h a l l a z g o n o s ha i n t e r e s a d o en d e t e r m i n a r s i e s t o s
c o m p u e s t o s tambie'n pueden a f e c t a r a o t r a s e n z i m a s de
membrana que pueden p a r t i c i p a r
en l a t r a n s d u c c i o ' n de
s e n a l e s en d i c h o s o r g a n e l o s .
Se a n a l i z o ' l a f r a c c i o ' n
l i p f d i c a obtenida por extraccio'n con cloroformo-metanol
a c f d i c o de membranas i n c u b a d a s p o r 3 m i n c o n
lATP.
En e s t o s e s t ú d i o s s e pudo e s t a b l e c e r que l a p r e s e n c i a
de p o l i l i s i n a (25 l i s i n a ) (50-200 uM) c a u s o ' u n e s t f m u l o
de 2 v e C e s en l a f o r m a c i o ' n de f o s f a t i d i 1 i n o s i t o l
4f o s f a t o y un i n c r e m e n t o a p r e c i a b l e en f o s f a t i d i l i n o s i tol-4,5 difosfato.
C o p o l i m e r o s de l i s i n a c o n a l a n i n a y
s e r i n a y p o l i o r n i t i n a mostraron efectos s i m i l a r e s , pero
H i s t o n a HI y p o l i a r g i n i n a f u e r o n m e n o s e f i c i e n t e s .
Un
p é p t i d o s i n t é t i c o d e 14 a m i n o a ' c i d o s q u e c o n t i e n e 8 l i sinas y la secuencia carboxi terminal
de l a p r o t e f n a
o n c o g e ' n i c a K i - r a s humana t a m b i e ' n e s t i m u l a l a f o s f o r i l a cio'n de f o s f a t i d i 1 i n o s i t o l .
Al ensayar la f o s f o d i e s t e r a s a de n u c l e o ' t i d o s
cfclicos
p r e s e n t e en I a s mismas
membranas se pudo o b s e r v a r que p o l i l i s i n a (P.M.20.000),
a c o n c e n t r a c i o n e s d e 5 a 50 u M , p r o d u c e u n a i n h i b i c i o ' n
d e u n 50% e n l a a c t i v i d a d d e e s t a e n z i m a .
Estos r e s u l t a d o s i n d i c a n que p o l i p e p t i d o s
r i c o s en g r u p o s aminos
t i e n e n un n o t a b l e e f e c t o s o b r e I a s m e m b r a n a s , m o d i f i cando en f o r m a d i f e r e n t e l a a c t i v i d a d de e n z i m a s p r e s e n t e s en e s t a s membranas.
( T r a b a j o apoyado por el DIB
d e l a U n i v e r s i d a d d e C h i l e y 0EA.J
FORMAS ENZIMATICAS DE LA DE AMI NAS A DE $CLCchatL0myc&6
ceAe.uco.iae. (Enzymic species of Deaminase from
SacckaAomyceA
ceAeu-ci-ute). Corrêa Garcia, S. R. ,Rossetti.
M. V. y Batlle, A. M. del C.
Centro de Investigaciones sobre Porfirinas y PorfiriasCIPYP- (FCEN, UBA - CONICET).
La Deaminasa, proteína que cataliza la formación de 1
molécula de Uroporfirinõgeno I a partir de 4 unidades de
Porfobilinõgeno (PBG), ha sido estudiada en numerosas
fuentes, sin embargo existe muy poca información acerca
de la mísma en la levadura S. ceACU-ci-úie.. En este trabajo se emplearon como fuente de enzima Ias cepas D27, nor
mal en lo que a la sintesis de hemo se refiere y su mutante D27/C6, que se caracteriza por una elevada sintesis de citocromos como consecuencia probablemente de una
anomalia enzimática a nivel de la Deaminasa (J. Mattoon,
Univ. Colorado). En la mayoría de Ias fuentes estudiadas
se encontro para esta proteína un único pico de PM 40,000
con la única excepcion de la enzima de EugZzvia. qHXLCÁJLÍò
para la cual se obtuvo además un segundo pico activo de
PM 20.000. En este caso, sucesivos pasajes por Sephadex
0 1 0 0 de la enzima de la cepa D27 pareceria indicar la
presencia de 2 picos de actividad cuyos PMs serían de
20.000 y 10.000; sin embargo, cuando se estúdio la Deaminasa de la cepa mutante solo se obtuvo un único pico
activo de PM 20.000
Además, teniendo en cuenta que para la enzima de otras fuentes se han detectado multiples formas moleculares por cromatografía de intercâmbio iõnico, cuyo origen
no esta aun totalmente esclarecido, se decidió estudiar
el comportamiento de la enzima en un pasaje a través de
DEAE-celulosa. Los perfiles de elución obtenidos para
Ias dos cepas fueron diferentes según la enzima se eluyera en ausência o presencia de su sustrato, obteniéndose en este último caso vários picos de actividad en la
zona de alta fuerza ionica que no aparecían cuando la co^
rrida se hizo en ausência de PBG, sugiriendo por lo tanto la posible existência de distintas formas enziraãticas
que podrian corresponder a diferentes complejos E-PBG.
R 196
PURIFICACION DE LA UDP-N-ACETILGALACTOSAMINA: GM3 NACETILGALACTOSAMINIL TRANSFERASA DE CÉREBRO DE EMBRION
DE POLLO (Purification of UDP-N-acetylgalactosamine;
GM3 N-acetylgalactosaminyl transferase from chick
embryo brain).Cortassa S.,Rosa A.L. y Maccioni H.J.F.
Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciências
Químicas, CIQUIBIC,CONICET, Universidad Nacional de
Cordoba. Cordoba. Argentina
En estádios tempranos del desarrolló embrionário del
sistema nervioso central de aves y mamíferos los ganglíõsidos mayoritarios son de cadena oligosacãrida
simple (GD3), mientras que en. estádios avanzados lo
son de cadena compleja (GDla). Resultados de este laboratório muestran que el cambio en el perfil de gangliõsidos ocurre, al menos en parte, debido al aumento de
la actividad GM3: N-acetilgalactosaminil transferasa.
Esta actividad fue parcialmente solubilizada de microsomas de cérebro de embriõn de polio de 14 dias por
tratamiento con 0,5% Triton X 100, 0.64M sucrosa y sonicaciõn extensiva. El extracto se llevo a 3% dodecilsulfato de sodio (SDS), se calentõ 2 min. a 90°C y se
cromatografiõ en Sephadex G 200 equilibrado en 0,1%
SDS, 0,1M Tris, pH 7,2. La actividad en las fracciones
se determino luego de eliminar el SDS y renaturalizar
la enzima en presencia de ltpidos- El 60% de la actividad eluyõ cerca del Vt con menos del 5% de la proteína
sembrada. La electroforesis del extracto en geles de
poliacrilamida en presencia de SDS permitia ubicar la
actividad en dos regiones del gel de PM 30 y 90 kD. El
producto de reacción de la enzima renaturalizada fue
identificada como GM2 por critérios cromatogrãficos.
La posibilidad de tener una gangliôsido glicosil transferasa purificada permitiria iniciar estúdios de su
expresión a nivel molecular durante el desarrolló dei
sistema nervioso.
BIOTRANSFORMACIONES
ESTEREOSELECTIVAS DE D,L-5-HIDANTOINAS SUSTITUIDAS A D- o L-AMINOACIDOS.
(Stereoselective Bioconversions of D,L-5-substituded Hydantoins to
D - or L-Aminoacids).
D. Co toras*, A. Mòller C. Syldatk y F_. Wagner. Instituto de Bioquímica y Biotecnologia, Universidad de Braun
schweig, Alemania Federal. (Patrocínio: M.A. Valenzuela).
Acoplando reacciones enzimáticas a un proceso de
sintesis química es posible introducir quiralidad en
el producto deseado. Las 5-hidantoinas sustituidas racemicas son suatratos adecuados para una biotransformación, ya que pueden ser sintetizadas químicamente a bajo costo.
Se obtuvo los dos enantiomeros puros de diferentes aminoácidos, hidrolizando estereoselectivamente D,
L-5-hidantoinas sustituidas, mediante dos microorganismos aislados de muestras de suelo.
La bacteria D-específica (cepa AM2) hidroliza D,
L-5-metilhidantoina a N-carbamil-D-alanina y D-alanina.
Las condiciones óptimas de la reacción completa, con
células en reposo, fueron: pH 9,2 y temperatura 50-55
°C.
La D-hidantoina y la D-carbamilasa son específicas
D y tienen una amplia especificidad de sustrato.
La bacteria L-específica (cepa BH20) hidroliza D,
L-5-indolilmetilhidantoina a N-carbamil-L-triptofano y
L-triptofano.
Las condiciones óptimas de la reacción
completa, con células en reposo, fueron: pH 7,5 y temperatura 27°C.
Con células enteras, sólo la segunda
reacción fue estereoselectiva y un grupo limitado de D,
L-5-hidantoinas sustituidas fueron hidrolizadas a L-ami
noácidos.
(
Se discute la aplicación industrial de ambas reacciones para la producción de aminoácidos
ópticamente
activos.
* Dirección actual: Departamento de Bioquímica y Biolo
gía Molecular, Facultad de Ciências Químicas y Farmacêuticas, Universidad de Chile.
CITOCROMO P-450 Y QUIMIOLUMINISCENCIA (QL) DE HIGADO DE
RATA EN LA HIP0XIA HIPOBARICA CRÔNICA. (Chemiluminescen
ce and Cytochrome P-450 of rat liver in chronic hypobaric hypoxia). Costa, L. y Boyeris, A.
Ininca, Iquifib (Conicet) Universidad de Buenos Aires.
Se ha postulado que el citocromo P-450 interviene en el
transporte de O2 intracelular en los hepatocitos y en
la producción de radicales libres, procesos que tendrLan
relevância en la hipoxia. El objetivo de este estúdio
fue determinar el contenido de citocromo P-450 en el hi
gado y la velocidad de peroxidacíõn lipídica mediante
QL de la superfície del organo "in situ" en la adaptación a la hipoxia hipobãrica crônica. Se utilizaron 60
ratas de ambos sexos, la mitad de las cuales fueron sometidas a una altura simulada de 4.400 m o 5.500 m duran_
te 2 a 11 meses en una câmara de hipopresión y el resto
permanecieron a presión atmosférica ambiental. La QL se
midiõ en ratas hembras mediante un contador de fotones.
La emision se expresa como cps/cm^. La emisiôn espontânea fue 25% menor en las ratas sometidas a hipoxia.
C (control): 17.5 + 1 . 3 , H (hipoxia): 13.2 +_ 1.2, p <
0.05. La QL inducida por administraciõn i.p. de C I 4 C fue
46% menor en las ratas hipoxicas. C: 5 5 + 6 , H: 2 6 + 2 ,
p < 0 . 0 1 . El citocromo P-450 microsomal determinado espectrofotométricamente y expresado en nmol/mg de protei^
na, no mostro diferencias significativas por efecto de
la hipoxia. Hembras, C: 0.98 + 0.05,, a 4.400 m: 0.89 +
0.08, a 5.500 m: 0.98 + 0.05. Machos, C: 1.27 + 0.05,
a 4.400 m: 1.32 + 0.08, a 5.500 m: 1.42 + 0.01. La estimación dei contenido de retículo endoplãsmico sefialó una
disminuciõn dei mismo en Ias hembras hipôxicas, por lo
cual el contenido de citocromo P-450, expresado en nmol/
g de tejido fue menor. C: 11.6 + 1.3, H: 8.6 + 0.6, p <
0.05. Los resultados no apoyan la hipõtesis de un aumento dei citocromo P-450 como mecanismo de adaptación a la
hipoxia y sugieren que una disminuciõn de su contenido,
por disminuciõn dei retículo endoplãsmico hepãtico, daria cuenta de la menor QL observada en los animales hipõxicos.
ESTÚDIOS DE EXPRESION DEL SEN
OMPF
MEDIANTE
TRANSFORMAI:ION D E M U T A N T E S
DE
PROTEÍNAS
DE
MEMBRANA EXTERNA D E
f.
coli - <Transf ar mati on
and e x p r e s s i o n of ompF g e n e in £ . eu J1
outermembrane protein m u t a n t s ) .
C o t o r á s , H. , Z â T o r , M . I. , Imarai , tl. , C l a u d e
. A . , G o m e z , I. , Yudelevi c h , A. y
Venegas
A.
Labor ator io
dú
Bioquímica*
Facultad
de
Ciencias
Biológicas,
Un ivei
s idad
Cato
1ica
Cas i l i a H4-D
Santiago,
Chile.
f
f
Estudi o s
previos
han
suger i do
que
el
antibiótico carbenici1ina seria
transportado
a t r a v é s d e la p o r i n a Q m p F
ya
que
mutantes
seleccianados
por
resistência
a
este
a n t i b i ó t i c o carecen de OmpF
en
la
membrana
externa. Para corroborar
este
planteamiento
s e e s t ú d i o la e x p r e s i ó n d e o m p F en
distintos
mutantes de p r o t e í n a s de m e m b r a n a externa.
P a r a e s t o s e c o n s t r u y ó un v e c t o r sin el g e n
d e b e t a - 1 a c t a m a s a , por d e l e c i ú n c o n t r o l a d a en
el s i t i o P s t I d e p B R 3 2 9 . En
el
gen
CAF
de
e s t e v e c t o r s e i n c o r p o r o un
-fragmento
EcoRI
a i s l a d o d e p L F 4 c o n el geri o m p F
de
£.
coli
(vector
pMC53S>.
Con
este
plásmido
se
transformaron los
mutantes
W7NR,
MC41G4
y
MC4105.
W7NR
parece
ser
un
mutante
r e g u l a t o r i o en q u e n o s e e x p r e s a O m p F , y G m p C
s e e x p r e s a e s c a s a m e n t e . En c a m b i o ,
MC4104
y
MC4105
son
mutantes
de
los
genes
e s t r u c t u r a l e s o m p C y o m p F r e s p e c t i v a m e n t e . En
ninguno
de
ellos
se
detecto
actividad
b e t a - 1 a c t a m á s i ca.
Los
tr ans-f o r m a n t e s
se
i denti f i car on -for el f e n o t i p o T e t , CAF "
y
por la p r e s e n c i a d e
pMC538.
Se
detecto
la
e x p r e s i ó n del g e n medi a n t e
analisis
de
Ias
p r o t e í n a s en g e l e s p o l i a c r i l a m i d a - S D S
y
por
^Western
blotting"
con
anticuerpos
anti — p o r i n a s .
Luego de transformación
con
pMC538,
W7NR
b a j ó su r e s i s t ê n c i a a c a r b e n i c i l i n a d e
80
a
4 0 ug/ml o b s e r v a n d o s e m o d e r a d a
expresión
de
OmpF.
El
mutante
MC410S
transformada
con
pMC538, mostro sabreexpresión
de
OmpF,
sin
câmbios
significativos
en
sensibilidad
a
carbeni ci1ina.
Se concluye que carbenicilina es transport a d a p r e f e r e n temen te por O m p F en W 7 N R .
R
*Fi nanei a d o por- p r o y e c t o
D I U C 81 / 8 6 .
8
RELACIÓN MIOSINA/ACTINA EN ACTOMIOSINA DE MERLUZA (Me£
luccius hubbsi) EN PRE Y POST - DESOVE. (Myosin/actin
ratio in pre and post-spawned Hake (Merluccius hubbsi)
actomyosin)-Crupkin, M.; Montecchia, C.L.and Trucco, R.
Centro de Investigaciones de Tecnologia Pesquera
(CITEP - INTI), Marcelo T. de Alvear 1168, (7600) Mar
del PLata, Argentina.
Se cuantifícõ la relación miosina/actina de la actomiosina de merluza, a lo largo de su ciclo reproduce
vo.
La deterrainación fotodensitométrica, luego de la
electroforesis de la proteína en geles de SDS-Poliacrilamida 10%, revelo que el valor de la relación es
1,50 + 0,27 en la actomiosina de pescado capturado en
pre-desove, y de 2,59 + 0,60 en la de post-desove.
El
R 197
Tratamiento enzimático dei agua de cola de la industria
de narina pescado en proteasas de Cucurbita Ficifolia
(Enzymatic Treatment Stickwater from Fichmeal Industry
with the Protease from Cucurbita Ficifolia).Curotto E..
Aguirre C , IIlanes A. y Shaffeld G. Instituto de Quxmica y Escuela de Ingeniería Bioquímica. Universidad Católica de Valparaiso (Patrocínio: G. Gonzalez).
Anualmente se procesan 2,5 millones de tt de agua de
cola en la industria de harina de pescado. El proceso de
evaporación del agua de cola es la etapa inicial en la
obtencion de la harina integral. Durante la evaporación,
la viscosidad aumenta; entre los compuestos que favorecen este aumento estan las proteínas. La elevada viscosi
dad del fluido produce vários problemas en la obtencion"
del producto y en la industria. La utilización de protea
sas permite obtener fluidos de menor viscosidad. El uso
de estas enzimas podría bajar el costo de operación en
la industria de harina de pescado. En este trabajo se uti
lizó proteasas de C.Ficifolia para analizar el efecto e n
la viscosidad del agua de cola y comparar los datos obte
nidos con los de alcalasa 0.6L, proteasa importada.
Se utilizaron Ias proteasas precipitadas al 30% de sa
turación con (NHjpSCL en una relación enzima-sustrato
1:20. El método de nlnhidrina se usó para cuantificar la
hidrólisis dei agua de cola en función dei tiempo y de
la temperatura. Se determino la viscosidad dei agua de
cola hidrolizada en distintas etapas de evaporación.
Las meiores condiciones determinadas para la hidrólisis fueron temperatura 60 C y tiempo de reacción 1 hora.
En estas condiciones presentan mayor actividad Ias proteasas de la C.Ficifolia que la alcalasa. La viscosidad
dei agua de cola hidrolizada disminuye en un 6 5 % en relación a la no tratada, pero es mayor en un 2 0 % a la
viscosidad obtenida con alcalasa.
—
perfil de la relación miosina/actina fue similar al del
índice Hepato Somático (IHS) a lo largo del ciclo repro_
ductivo de la merluza, encontrãndose una buena relación
entre ambos parâmetros (r= 0,804 P < 0 , 0 1 ) .
Estos resultados sugieren que la composición de la
actomiosina de merluza es influenciada por su condición
biológica.
ROL DE PROTEÍNAS CITOESQUELETICAS EN LOS CÂMBIOS DE
FORMA DE CÉLULAS OXINTICAS DE AVE. (Role of cytoske
letal proteins in the changes in shape of avian
oxyntic cells). Dabiké, M . Koenig, C. y Munizaga,
A_. Dpto. Biologia Celular, Fac. Ciências Biológicas,
RE6ULACI0N DE LA A C T I V I D A D N I T R A T O REDUCTASA EN R.$PHER0W£S
5 W ( Regulation of the n i t r a t e reductase a c t i v i t y I n R.Spheroidss Qfi
Castro. R . . K e r b e r . N . L . Massucn. S.V. y G a r c i a . A f Instituto de
Investigaciones Biológicas, FocuUod de Ciências Exactas y Naturales,
Universidad Nacional de Mar del Plata, A r g e n t i n a .
El cambio morfofuncional que experimentan las célu
las oxínticas durante la secreción de ácido clorhídrico (HC1), parece estar mediado por proteínas citoesqueléticas. La célula oxíntica de ave es un
excelente modelo para estudiar el rol dei citoesqueleto en este proceso de movilidad cíclica por tener
un polo secretor prominente expuesto hacia el lumen
glandular.
En algunos procarlontes fototróílcos e l n i t r a t o es redocldo a t r a v e s de
un camlno d i s l m i l a t o r i o permltlendo e l c r e c i m i e n t o en presencia de
n i t r a t o como única fuente de nitrógeno. También e x i s t e una aparente
actividad de tipo dislmilatorio. En este trabajo se Investiga el poslble r o l
de la reduccfõn de n i t r a t o en kSptmotdBS$W w a pesar de tener esta
capacídad enzfmótlca no puede a s f m l l a r n i t r a t o durante s u crecimiento.
Se realizo un estúdio comparativo" de la estructura
y localización inmunocitoquímica de miosina, filamina y filamentos intermédios (Fl) en células oxínti cas de ave en reposo y actividad. Se estableció que
la célula oxíntica en reposo presenta una superfície
lisa y canalículos intercelulares cortos. La estinm
lación determina la aparición de profundos canalículos intercelulares, llenos de prolongaciones citoplás
micas ricas en microfilamentos, generados por despia
zamiento de los comple jos de unión hacia el ter cio
basal de la célula. La inmunofluorescencia mostro
que en glândulas en reposo, miosina, filamina y FI
forman un anillo adyacente al lumen glandular, el
cual se despiaza hacia el tercio basal como resultado de la estimulación. En ambos estados funcionales
miosina y filamina se distribuyen difusamente en el
resto dei citoplasma mientras que FI forman una red
que se proyecta desde el anillo hacia la base de la
célula.
Los resultados que se presentan Indican que en este procartonte
íototrófloo la reducclón de n i t r a t o este p a r d a l y simultaneamente
regulada por:
t
Se concluye que el desplazamiento de los complejos
de unión y dei anillo citoesquelético mediarían la
formación de los canalículos intercelulares. La
reorganización ultraestructural seria consecuencia
de câmbios en la distribución e interacciones entre
FI, actina y proteínas asociadas.
a) dlspontbllldad de espacto físico para s u I n s e r t i o n en la membrana
cltoplasmóttcai
b ) variaciones en la disponibilldad de poder r e d u c t x , l o q u e r e g u l a r i a
la cantldad de electrones que se canall2an a t r a v é s de la n i t r a t o
reductase.
c ) potencial electroqulmlco de Ias células, que nos ha p e r m i t i d o
c o n j e t u r a r que bajo condiciones de c r e c i m i e n t o limitado p o r una
menor producción energética, el n i t r a t o es reductdo de una manera
disimilatorla
para
c o n t r i b u i r a los requertmtenlos dei
metabolismo general.
A pesar de algunas diferencias e n t r e la e x p r e s i ó n ' in viva e"in vitrô
de la e n z i m a , solamente ha sido poslble detecar una única actividad
mediante geles de electroforesis no dlsoclanles.
Financiado por C I C y C O N I C E T .
R 198
FOSFORILACION ENDOGENA DEL RECEPTOR COLINERGICO NICOTINI
co, p r o t e í n a s n o r e c e p t o r a s y f o s f o l í p i d o s e n l a m e m b r a n a P O S T S I N A P T I C A . A.M.R. de Fernandez, I.C.B. de Romanelli y F . J . Barrantes; Instituto de Investigaciones Bioquímicas, U N S / C O N I C E T , 8000 Bahia Blanca, Argentina.
Vários tipos de proteína quinasas han sido caracterizadas
en la membrana postsinãptica de ôrgano eléctrico, rica en
receptor colinérgico (AChR), que fosforilan Ias subunidades dei mismo y proteínas no receptoras. Se conoce poco
acerca de quinasas semejantes que actuén sobre los lípidos de tales membranas, e n analogia a lo que ocurre en
otros sistemas quimioexcitables. Membranas enriquecidas
e n AChR (T. marmorata)fueron incubadas con A T P - y | ^ p | en
médios apropiados para determinar la incorporaciõn dei
radioisôtopo en lípidos y proteínas. En los primeros, al
rededor dei 95% de la marca se concentra en los polifosfoinosítidos, constituyentes minoritários de estas membranas. En presencia de C a
y calmodulina la fosforilaciõn se ve marcadamente inhibida, especialmente a nivel
d e PIP. Tratamiento de Ias membranas con NaOH produce la
deplecion de proteínas periféricas e inesperadamente, la
extracciõn de fosfoglicéridos, en particular PIP y P I P 2 Cuando se marcan electrocitos de D. tschudii con ^ P mãs
dei 70% de la radioactividad se incorpora a fosfolípidos
acídicos, que es co-extraída por el tratamiento alcalino.
Por otra parte, cuando se compara el perfil de membranas
nativas ricas en AChR con aquellas deplecionadas de proteínas periféricas se evidencia fundamentalmente la disminuciõn de la fosforilaciõn de Ias proteínas de 4 3 KDa
( v ) conjuntamente con una apraciable disminuciõn de la
marcaciôn de la subunidad y (M^. 56000) dei AChR. Esta
subunidad es sustrato de dos proteína quinasas: la AMPcdependiente y una tirosina quinasa. Si bien la co-extrac
ciõn de proteínas periféricas no receptoras y ciertos lí
pidos no permite afirmar la existência de relaciones estructurales entre ambos en la membrana nativa, los resul
tados sugieren 1 ) la posibilidad de tal asociación in
si_tu y 2) la union laxa a la membrana de proteína quinasas cuyos sustratos incluyen proteínas no receptoras
y la subunidad y dei AChR.
-
2
2 +
2
SOBREVIVÊNCIA DE EMBRIONES DE CHOROMYTILUS CHORUS (MOLL.
BIVALVIA) DESPUÉS DE HABER SIDO CONGELADOS Y DESCONGELADOS. (Survival of CH.chorus (Moll, Bivalvia) embryos
after freezing and thawing). Del Campo,M.R., Gallardo,
C.S., Leal,P. y Filún,L. Instituto de Reprod.Animal e
Inst, de Zoologia, UACH.
Las técnicas de congelaciSn de embriones, aplicadas
en mamíferos, han abierto un campo ilimitado de investigación en otro tipo de animales. Aparte de su importância científica, la ventaja de estos estúdios radica en
su aplicaciõn prãctica.
El presente estúdio se realizo para determinar si
embriones de Ch. chorus sobreviven tras haber sido congelados/descongelados. Los embriones fueron colocados su
cesivamente en 4 soluciones crecientes de glicerol y
agua de mar. En seguida fueron envasados en pajuelas" de
plástico de 0,5 ml de capacidad en la soluciõn de equili
brio (1,4 M de glicerol) y posteriormente enfriados a
l°C/min desde 6°C a -7*C, y a 0,3°C/min hasta -35°C. A
esta temperatura fueron sumergidos en nitrõgeno líquido
y almacenados por mãs de 15 dias. Después de la desconge
laciõn los embriones recuperados fueron sometidos a solu
ciones decrecientes del crio-protector y agua de mar y
posteriormente cultivados por 48 hrs. Se observo que un
porcentaje significativo (sobre 80%) de los embriones re
cuperados y llevados a cultivo, continuaron su desarrolló alcanzando estados larvales. Estos resultados preliminares demuestran que la técnica de congelaciõn usada
puede ser aplicada con êxito en la preservaciõn de embrio
nes de esta espécie.
Subvencionado por Direcciõn de Investigaciõn UACH.
Proyecto RS-83-4 y por la Agencia Internacional de
Cooperaciõn de Japõn (JICA).
TRIPANOSOMATIDOS:MUTANTES NATURALES DE LA NGLICOSILACION DE PROTEÍNAS
(Trypanosomatids
a r e n a t u r a l m u t a n t s in p r o t e i n N - g l y c o s y l a t i o n )
d e la C a n a l / L . y P a r o d i , A . I n s t i t u t o d e I n v e s tigaciones Bioquímicas, Fundaciôn Campomar,
Buenos Aires, Argentina.
La N - g l i c o s i l a c i õ n d e p r o t e í n a s i n v o l u c r a la
transferencia de Glc3MangGlcNAC2 dei derivado
d e D o l i c o l - P - P (Dol-PP) a la p r o t e í n a . El
D o l - P - P - G l c N A C 2 M a n q G l c 3 se s i n t e t i z a p o r a d i c i õ n d e r e s i d u o s d e m o n o s a c ã r i d o d e m a n e r a Cín i c a y o r d e n a d a . En t o d o s l o s t r i p a n o s o m á t i d o s
e s t u d i a d o s en n u e s t r o l a b o r a t ó r i o el o l i g o s a c ã r i d o t r a n s f e r i d o a p r o t e í n a s "in v i v o " a) no
c o n t i e n e Glc y, b) el n u m e r o d e m a n o s a s v a r í a
e n t r e 6 y 9 s e g ú n la e s p é c i e . A q u i se e s t u d i a
la s i n t e s i s d e D o l - P - P - o l i g o s a c ã r i d o s e n s i s t e m a s l i b r e s d e c é l u l a s c o n el o b j e t o d e c a r a c t e r i z a r Ias d e f i c i ê n c i a s o b s e r v a d a s "in v i vo" .
S e m u e s t r a q u e la a u s ê n c i a d e G l c en el o l i g o s a c â r i d o t r a n s f e r i d o se d e b e a la f a l t a d e
la a c t i v i d a d q u e s i n t e t i z a D o l - P - G l c (dador d e
r e s t o s g l u c o s i l o ) en t o d a s I a s e s p é c i e s e s t u diadas. Estos tripanosomátidos sintetizan
D o l - P - M a n p e r o d i f i e r e n e n su c a p a c i d a d d e sín
t e s i s d e M a n 5 _ G l c N A c 2 - P - P D o l ; c u a n d o se i n cuban membranas de parâsitos con G D P - M a n ( ^ C ) ,
Dol-P y una mezcla de Man5_gGlcNAc2-P-P-Dol
frio c o m o s u s t r a t o se o b s e r v a q u e T . c r u z i (in
v i v o s i n t e t i z a M a n q G l c N A C 2 ) t i e n e t o d a s Ias
actividades de manosiltransferasa. C.fascicula
ta y L. e n r i e t t i i (in v i v o Man-yGlcNAc2) no t i e n e n a c t i v i d a d d e t r a n s f e r a s a 8 y 9. B . c u l i c i s
(in v i v o M a n g G l c N A c 2 ) °o t i e n e I a s t r a n s f e r a sas 7, 8 y 9.
Se c o n c l u y e q u e los t r i p a n o s o m á t i d o s son m u t a n t e s n a t u r a l e s d e la N - g l i c o s i l a c i õ n d e p r o teínas.
_
8
3
EFECTOS DE L-GLUTAMAT0 SOBRE LA SECRECIÓN DE H-N0RADRE
NALINA Y LA ACTIVIDAD CONTRACTIL DEL C0NDUCT0 DEFERENTE
DE RATA.
(Glutamate effects on ^-noradrenaline release and contractile activity of the rat vas deferens).
Del Villar, M., Peirano, A. y Lara, H. Departamento de
Bioquímica y Biologia Molecular. Fac. Ciências Químicas y Farmacêuticas. Universidad de Chile.
L-glutamato (L-glu), neurotransmisor
excitatorio en el
sistema nervioso central, puede actuar como neuromodula
dor de las neuronas catecolaminérgicas. Aün no se ha es
tudiado la participación de L-glu como modulador en sis
tema nervioso periférico. En este trabajo se estúdio
el efecto de L-glu sobre la secreción de 3H-noradrenali_
na (^H-NA) y sobre la actividad contractu del conducto
deferente de rata.
+
3
La secreción inducida por K 65 mM de H-NA recién captada, aumenta en un 30$ cuando se estimula en presencia
de L-glu 10"^M. La secreción espontânea de ^H-NA es in
hibida en un 301 por Glu 10~^M, este efecto es menor
cuando se estudia a 10"^ M y desaparece a concentraciones de 10~4 M. Fracciones de membrana aisladas por cen
trifugación diferencial de homogeneizados de conducto
deferente, presentan unión de alta afinidad para L-^HGlu.
La unión máxima es un 20% de la obtenida en membranas aisladas desde el gânglio periférico en donde se
originan Ias neuronas adrenérgicas que inervan el conducto deferente. La adición de NA a una preparación de
conducto deferente evoca una respuesta contractu depen
diente de la dosis. L-Glu en dosis equimolares induce
contracciones cuya magnitud es un 10-20$ de Ias obtenidas con NA. Este efecto no aparece al agregar L-Glu
junto con NA al bario de incubación.
Estos resultados sugieren que L-glu puede actuar como
neuromodulador de la actividad contractu del conducto
deferente actuando sobre los terminales noradrenérgicos.
No se descarta la posibilidad de una posible inervación
glutamatérgica en el órgano.
R 199
REGULACICN POR GLUCOCORTICOIDES DEL SISTEMA ^-RECEPTORADEN I LATO CICLASA DE GLÂNDULA MAMARIA DE RATA. (Glucocorticoids regulation on /^-receptor-adenylate cyclase system from rat mammary gland). Depix, M.S. y Sapag-Hagar,
M. Dpto. Cs. Biológicas, Fac. Cs. de la Salud, U. de Antofagasta y Dpto. Bioquímica y Biologia Molecular, Fac.
Cs. Químicas y Farmacêuticas, Universidad de Chile.
Resultados recientes, obtenidos en nuestro Laboratório,
indican que los glucocorticoides (GCs), tales como la
hidrocortisona (He), no afectan el N° de receptores 4-adrenérgicos mamarios en ratas adrenalectomizadas (ADX),
pero si se observan aumentos significativos en los niveles intracelulares de AMP cíclico (AMPc).Este efecto de
los GCs podría estar relacionado con la proteína Ns o
con la adenilato ciclasa (AC) del sistema /3-adrenérgico.
Células de neuroblastoma, in vitro, han permitido establecer que los GCs potencian la formacion de AMPc, actuando sobre la AC (subunidad catalítica) sin alterar el
N° de receptores.
Ahora estudiamos el efecto de la He en glândula mamaria
de ratas ADX, sobre el sistema proteína Ns-adenilato ciclasa.
Se evaluó in vivo e in vitro, en células epiteliales aisladas de la glândula y en cultivo de tej ido (36 horas),
el efecto de la He (in vivo 1 mg/Kg peso; in vitro 1 ug/
ml) en los niveles intracelulares de AMPc basales y estimulados por/^-agonistas, toxina dei cólera y fluoruro
(proteína N s ) , y forskolin (AC) y también al bloquear
los receptores/í-adrenérgicos con propranolol.
Nuestros resultados indican que, probablemente, la acción de los GCs podría estar relacionada con una mayor
interacción receptor-proteína Ns y/o proteína Ns-AC, o
bien una mayor actividad funcional de la proteína Ns o
de la AC, debido a que se observan aumentos en los niveles de AMPc en presencia de Hc en ratas ADX, sin variar
el N° de receptores /9-adrenérgicos ni la actividad de la
AMPc-fosfodiesterasa en la glândula.
(Proyecto B-2116-8623 de la Universidad de Chile, 1986).
INTERACCIÓN DE ALCOHOLES ALIFATICOS CON EL
TRANSPORTADOR DE COLINA DE ERITROCITOS HUMANOS.
(Interaction of aliphatic alcohols with the cho
line carrier of erythrocytes). Deves R. y Câceres, J.
Depto. Fisiología y Biofísica, Fac.
Medicina, U. de Chile y Depto. Biologia, Fac.
Medicina, II. de Valparaiso.
El transporte de colina a través de la membrana del glóbulo rojo ocurre por medio de un
transportador que oscila entre dos estados conformacionales e involucra, por lo tanto, al men o s una etapa de reorganización de la proteína.
Una forma de investigar la naturaleza dei camb i o conf ormacional es mediante el uso de inhihi^
dores que interfieren a este nivel.
En este trabajo demostramos que el transportador es inhibido reversibfemente por alcoholes
alifáticos sin que estos afecten la etapa de re
conocimiento dei sustrato.
Esto sugiere que su
efecto se debe al bloqueo dei cambio conformacional responsable de la translocación.
En una
primera etapa, hemos caracterizado el mecanismo
de inhibición utilizando una serie de alcoholes
de cadena recta de 2 a 10 átomos de carbono. To
dos inhiben el sistema en forma no competitiva
y con una dependência de la concentración compleja (coeficiente de Hill 1 , 6 - 1 , 9 ) .
La dosis
requerida para inhibir en un 501 Ciso) decrece
a medida que aumenta el numero de carbonos,
existiendo una relación lineal entre el ln Iso
y el número de átomos de carbono. Esto sugiere
la existência de un mismo sitio de acción.
La
inhibición es simétrica afectándose por igual
el movimiento en una y otra dirección.
Los alcoholes difieren sin embargo, en su capacidad
para exponer un grupo sulfhidrilo susceptible a
modificación p o T N-etilmaleimida.
Proyecto B 1 540-8355
DIB.
(II. de Chile).
t
EFECTO DEL DIETILPIROCARBONATO, REACTIVO K DE
W O O D W A R D Y P I C R I L S U L F O N A T O S O B R E LA A C T I V A C I O N
DE LA F R U C T O S A - 1 , 6 - B I S F O S F A T A S A D E C L O R O P L A S T O P
M E D I A D A P O R A N I O N E S C A O T R O P I C O S . (Effect o f d i
e t h y l p y r o c a r b o n a t e , W o o d w a r d ' s K r e a q e n t , and
p i c r y l s u l f o n a t e o n t h e c h a o t r o p e - m e d i a t e d acti^
vation of chloroplast fructose-1,6-bisphosphat a s e ) . de Prat G a y , Gonzalo y Wolosiuk, Ricardo
Fundaciõn Campomar, Buenos Aires, Argentina.
Los a n i o n e s c a o t r ó p i c o s e s t i m u l a n la a c t i v i d a d e s p e c í f i c a d e la f r u c t o s a - 1 , 6 - b i s f o s f a t a sa (FBPasa) d e los c l o r o p l a s t o s . E n t o d o s los
c a s o s l o s c â m b i o s e n las p r o p i e d a d e s c i n é t i c a s
no i m p l i c a n u n a m o d i f i c a c i ó n d e l p e s o m o l e c u lar d e la e n z i m a . E n el p r e s e n t e e s t ú d i o se an a l i z a r o n l o s e f e c t o s q u e s o b r e el p r o c e s o d e
la a c t i v a c i ó n t i e n e n r e a c t i v o s e s p e c í f i c o s d e
grupos histidilo (dietilpirocarbonato), carbox i l o (reactivo K d e W o o d w a r d ) , y a m i n o ( p i c r i l sulfonato).
La p r e i n c u b a c i ó n d e la F B P a s a c o n d i e t i l p i r o c a r b o n a t o o c o n el r e a c t i v o K d e w o o d w a r d
previa a su activaciõn con m o d u l a d o r e s , p r o v o ca u n a d i s m i n u c i ó n d e la a c t i v i d a d e s p e c í f i c a ;
la p r e s e n c i a d e d i t i o t r e i t o l o f r u c t o s a 1,6-bis
fosfato en dicha preincubación previene p a r c i a T
m e n t e tal i n h i b i c i ó n . El a g r e g a d o d e d i e t i l p i r o c a r b o n a t o o r e a c t i v o K d e w o o d w a r d a la e n z i m a a c t i v a d a n o i n f l u y e e n su a c t i v i d a d . El t r a t a m i e n t o d e la F B P a s a n a t i v a c o n p i c r i l s u l f o n a to n o a f e c t a el p r o c e s o d e a c t i v a c i õ n ; p o r el
c o n t r a r i o e s t e r e a c t i v o d i s m i n u y e la a c t i v i d a d
e s p e c í f i c a d e la e n z i m a a c t i v a d a .
Los resultados obtenidos indican que a)la
exposición de vários residuos de aminoãcidos es
m o d i f i c a d a p o r la a c t i v a c i õ n d e la F B P a s a , y b)
a l g u n o s son e s e n c i a l e s p a r a el p r o c e s o d e a c t i v a c i õ n , e n t a n t o o t r o s lo son p a r a la c a t ã l i s i s
EFECTO DE MXECULAS ANFIFILICAS SOBRE ESPERMATÜZOIDES DE
ANFÍBIOS. (Effect of amphophilic molecules onAmphibian
Spermatozoa) .Diaz Fontdevila M..Cabada M.,Bloj B.INSIBIO
(UNT-CONICEDFac. Bioq.Qca.y Farm.TucumSn.Argentina.
En estúdios prévios (XIV Reunion Anual de SAB.Rosário.
Argentina. 1985) se comunico que cuando se compara el efec
to de Fosfatidilcolinas (PCs)de distinta longitud de cade
na(C
a C )sobre la capacidad fecundante de espezmato
zoides de 3Qfo arenarum ,1a Didecanoil-PC{C. PC) resulta
ba la mas efectiva.En el presente estúdio se establece
que PCs de cadena mâs corta(C C_ y C„)resultan menos
efectivas que C PC.A una concentración de 0,01 umoles/ml
Cj_PC provoca una completa inhibición a los pecos segun
dos de agregada a la suspension de espermatozoides,mien
tras a esa concentración ninguna de Ias otras PCs presen
ta efecto aün después de 2 hs. de incubación.Cuando se
ensaya a esa misma concentración ácido decanoico hasta 4
hs. de incubación no presenta efecto y Monodecanoil-Gli_
cerol presenta algúh efecto recién a Ias 2 hs.
Estúdios efectuados sobre glóbulos rojos de esta espe
cie muestran que C^gPC en una concentración de 0,01 umo
les/ml es el agente hemolítico mâs eficaz produciendo he
mfilisis completa,mientras no se detecta hemólisis por
efecto de ácido decanoico o Monodecanoíl-Glicerol en la
misma concentración.
Estúdios efectuados con espermatozoides de Leptodacty
lus chaquensis, donde se evaluó el efecto de Ias diferen
tes PCs sobre el índice Acrosómico(l) indican también que
CjjjPC es la mâs efectiva de todas.El hecho que , P C sea
innibitoria a concentraciones por debajo de 0,003 umoles/
ml sugiere que es la forma monemêrica la que se une a la
membrana plasmâtica de los espermatozoides causando des
organización de la misma ,desorganización de los centrio
los y perdida dei acrosoma,efectos que pudieron visual i^
zarse por Microsccpía Electrónica.
lg
n
1
c
n
1.Cabada M. y colaboradores (1984) Develop.Growth and Di
ffer. 26 ,515-523.
R 200
MODELO M A T E M Á T I C O V S I M U L A C I O N COMPUTACIONAL DE LA
RE5ULACIGN EKBRIONICA.
C . F . D o g g e n w e i I e r . F a c . de
C i ê n c i a s U . de C h i I e .
P R O P I E D A D E S DEL I N T E R C Â M B I O N a - C a EN M E M B R A N A S
DE T U B U L O T R A N S V E R S A L A I S L A D A S DE M U S C U L O
ESQ U E L É T I C O DE A N F Í B I O . ( P r o p e r t i e s of the
Na/
Ca e x c h a n g e s y s t e m in t r a n s v e r s e
tubule
m e m b r a n e s from s k e l e t a l m u s c l e ) . D o n o s o , P.
e
H i d a l g o , C. D e p t o . d e F i s i o l o g i a y B i o f í s i c a y
D e p t o T C i ê n c i a s P r e c l í n i c a s , F a c u l t a d de M e d i cina , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
V e s i c u l a s a i s l a d a s de t ú b u l o t r a n s v e r s a l de
m ú s c u l o e s q u e l é t i c o de r a n a ( C a u d i v e r b e r a
c a u d i v e r b e r a ) p r e s e n t a n a c t i v i d a d de i n t e r c â m b i o N a - C a que se estúdio* m i d i e n d o la i n c o r p o r a
ciÓn de ** Ca a v e s i c u l a s p r e c a r g a d a s c o n N a .
Al i m p o n e r un p o t e n c i a l i n t r a v e s i c u l a r p o s i t i v o , m e d i a n t e g r a d i e n t e d e K+ y v a l i n o m i c i n a ,
la v e l o c i d a d i n i c i a l de i n t e r c â m b i o a u m e n t a ,
lo que s u g i e r e que el i n t e r c â m b i o es e l e c t r o g é n í c o con u n a e s t e q u i o m e t r í a p a r a N a / C a > 2 .
La v e l o c i d a d de i n c o r p o r a c i õ n de c á l c i o es
f u n c i ó n h i p e r b ó l i c a de la c o n c e n t r a c i o n
de
c á l c i o e x t r a v e s i c u l a r , con una c o n s t a n t e de
a f i n i d a d a p a r e n t e d e 26 u M .
La d e p e n d ê n c i a
de la c o n c e n t r a c i o n de s ó d i o i n t r a v e s i c u l a r
es s i g m o i d e a , con u n a c o n s t a n t e de a f i n i d a d
a p a r e n t e de 60 m M .
El i n t e r c â m b i o es e s t i m u l a d o p o r pH a l c a lino y p o r K
en e l m e d i o e x t r a v e s i c u l a r ,
e
inhibido por amilorida.
Los r e s u l t a d o s s u g i e r e n que el s i s t e m a de
i n t e r c â m b i o N a - C a de t ú b u l o t r a n s v e r s a l de
m ú s c u l o e s q u e l é t i c o es s e m e j a n t e al d e s a r c o l e m a de m ú s c u l o c a r d í a c o y p o d r í a t e n e r pa_
p e l i m p o r t a n t e en la m a n t e n c i ó n de la c o n c e n
t r a c i ó n i n t r a c e l u l a r de c á l c i o en el m ú s c u l o
esquelético.
La
r e g u l a t i o n en e l d e s a r r o l l ó d e m a m í f e r o s
implica
que l o s b l a s t ó m e r o s de l a m o r u l a son
equivalentes;
por ende,
la internalizac1ón
de
algunas
células,
para
formar
l a masa
celular
interna
dei
blastocisto,
debe depender
de
mecanismos
inespecíficos.
Hemos p r o p u e s t o
un
modelo
q u e da c u e n t a de l a c o m p a c t a c i ó n y de la
i n t e r n a l i z a c i ó n en t é r m i n o s de l a m i n i m i z a t i o n
de
un p a r â m e t r o que d e n o m i n a m o s e n e r g i a de s u p e r f í c i e
ÍGoel,
D o g g e n u e i l e r y Thompson,
J . M a t h . B i o l 48:
167-187). L a v a l i d e : de e s t e m o d e l o s e d e a o s t r ô
mediante simulaciôn computacional.
En
l a búsqueda de una s i t u a c i ó n
más r e a l ,
modificamos el prograaa coaputatiDnal para i n c l u i r
células
de d i f e r e n t e s tamaftos ( q u e en e l
embrión
se
p r o d u c e n p o r l a a s i n c r o n í a de I a s d i v i s i o n e s ) ,
de d i f e r e n t e s p o s i c i o n e s r e l a t i v a s ( q u e d e p e n d e n
de
i a s s e c u e n c i a s de p l a n o s d e s e g m e n t a t i o n )
e
i n c l u s o d i f e r e n c i a s en a d h e s i v i d a d . E l p r o g r a m a de
graficacion
de
resultados
iuè
modiíi c a d o
consecuentemente.
Se c o n c l u y e
q u e e s más p r o b a b l e
que I a s
células
más p e q u e f t a s ( d e d i v i s i o n más
prezai)
o
I a s más a d h e s i v a s r e s u l t e n i n t e r n a l i z a d a s . A p e s a r
de
lo cual,
e l o r d e n de p l a n o s de
segmentation
puede
producir
"atrapamientos"
de
célulai
internalizadas
a u n c u a n d o no s e a n I a s m e n o r e s o
1 a s más a d h e s i v a s .
Se
agradece al
D I B ( P r o y e c t o 2201) y a l
CIES
(Comi s i ón F u l b r i g h t ) .
5
—
+
F i n a n c i a d o p o r DIB U n i v . de C h i l e B . 2 1 4 9 ,
NIH HL 23007 y GM 3 5 9 8 1 - 0 1 y p o r M u s c u l a r
Dystrophy Association.
E S T I M U L A C I O N DE L A M E T I L A C I Ó N DE F O S F O L Í P I D O S EN M I O B L A S T O S POR 1 , 2 5 - D I H I D R O X I - V I T A M I N A D ( S t i m u l a t i o n o f
phospholipid methylation in myoblasts by 1,25-dihydroxyv i t a m i n D3). D r i t t a n t i , L . y A . R . d e B o l a n d . D e p a r t a m e n t o de B i o l o g i a , U n i v e r s i d a d N a c i o n a l d e l S u r , 8000 B a hia Blanca, Argentina.
3
En m i o b l a s t o s d e m ú s c u l o e s q u e l é t i c o s e h a d e t e c t a d o
un r e c e p t o r e s p e c í f i c o p a r a 1 , 2 5 - d i h i d r o x i - v i t a m i n a D
( 1 , 2 5 ( 0 H ) 2 U 3 ) . T r a b a j o s p r é v i o s ( S A I B 1985) s u g i r i e r o n
que e l e s t e r o l e s t i m u l a l a c o n v e r s i o n de f o s f a t i d i l e t a n o l a m i n a ( P E ) a f o s f a t i d i l c o l i n a ( P C ) p o r l a v i a de
t r a n s m e t i l a c i ó n e i n c r e m e n t a l a s i n t e s i s de t r i g l i c é r i dos ( T G ) . Se r e a l i z a r o n e x p e r i m e n t o s a d i c i o n a l e s p a r a
c o r r o b o r a r e s t o s câmbios y e s t a b l e c e r s i l o s mismos e ran e l r e s u l t a d o de l a a c c i ó n n u c l e a r de l a h o r m o n a .
C u l t i v o s p r i m á r i o s de m i o b l a s t o s de m ú s c u l o p e c t o r a l de
e m b r i ó n de p o l l o f u e r o n t r a t a d o s 12 h c o n 1 , 2 5 ( 0 H ) 2 D
(5 x 1 0 - 1 0 M) e n a u s ê n c i a y p r e s e n c i a d e a c t i n o m i c i n a - D
y p o s t e r i o r m e n t e incubados (2 h ) con 3 n - g l i c e r o l o con
^H-colina y ^C-etanolamina simultaneamente. El esterol
aumento s i g n i f i c a t i v a m e n t e l a m a r c a c i ó n con ^ H - q l i c e r o l d e PC y T G y d i s m i n u y ó l a d e P E . E n e l e x p e r i m e n t o
de d o b l e m a r c a c i ó n n o a f e c t ó l a i n c o r p o r a c i õ n d e ^ H ^
l i n a a 1 í p i dos t o t a l e s y PC p e r o i n c r e m e n t o l a d e 1 * C e t a n o l a m i n a a PC a e x p e n s a s d e u n a d i s m i n u c i õ n p r o p o r c i o n a l e n P E . A l s e p a r a r l o s i n t e r m e d i á r i o s de l a v i a
de m e t i l a c i ó n s e o b s e r v o u n i n c r e m e n t o s i g n i f i c a t i v o e n
l a m a r c a c i ó n de d e r i v a d o s d i m e t i l a d o s (130 %) y t r i m e t i l a d o s ( 6 6 %) de P E . L o s c â m b i o s e n m a r c a c i ó n d e l í p i d o s f u e r o n s u p r i m i d o s p o r l a a c t i n o m i c i n a D. L o s r e s u l tados i n d i c a n que el 1,25(0H)2D
estimula la metilación
de f o s f o l í p i d o s e n m i o b l a s t o s a t r a v é s d e u n m e c a n i s m o
nuclear.
3
3
0 0 -
3
INFLUENCIA DE LOS ANTICHAGASICOS NIFURTIMOX Y BENZNIDAZOL SOBRE LA LIPOPEROXIDACION EN MICROSOMAS DE HIGADO DE
RATA IN VITRO,(Influence of the antichagasic drugs nifurtimox and benznidazoles on lipoperoxidation in rat
liver microsomes in vitro). Dubin. M., Grinblat, L.,
Fernandez Villamil. S.H. y Stoppani. A.P.M.
Centro de Investigaciones Bioenergeticas, Facultad da
Medicina, Universidad de Buenos Aires.
Las drogas nitroheterocíclicas, en particular el nifurtimox y el benznidazol, forman radicalea libres por
reacciones redox cíclicas (Docampo y col. Arch.Biochera.
Biophys. 207,316(1981)). Como esos radicalea pueden
afectar los procesos de lipoperoxidaciõn y los lipoperõxidos causan dano celular, se estúdio la acciõn de esas
drogas y análogos sobre la lipoperoxidaciõn en microsomas hepãticoa incubados con los sistemas I) glucoaa-6-P
5.5 mM, glucoea-6-P deshidrogenasa 3 UI, NADP+ 0.55 mM,
Cl2Mg 5.5 mM, ADP 1.7 mM y Cl3Fe 0.1 mM; II) ascorbato
0.5 mM, ADP 2,0 mM y Cl Fe 67 uM, o III) ter-butil hidro
perõxido 2,5 mM, EDTA 0,11 mM, y SO^Fe 0.1 mM. La pero-"
xidaciõn se midió por formación de malondialdehido, con
la reacción dei ãcido tiobarbitürico. Con la concentracion 53 uM, los nitroheterocíclicos produjeron inhibición de la lipoperoxidaciõn (%) como sigue: nifurtimox
35; benznidazol 9.8; nitrofurantoins 9.1; nitroindol 94;
nitroimidazol 0 y cloranfenicol 0. Con los sistemas II
y III, no hubo inhibiciõn, excepto con nitroindol y sistema III, 25%, Con el sistema I, sin ADP-Fe, los nitroheterocíclicos no estimularon la formación de lipoparõxidos* Experimentos complementários con las quinonas
6-lapachona, CBP-10248, CBP-9442 y CBP-8935, 5 uM, mostraron 80-902 de inhibiciõn con el sistema I, pero no
inhibieron, con los sistemas II y III. Teniendo en cuenta la acciõn de Ias quinonas como inhibidores de la lipoperoxidaciõn (Talcott y col. Arch.Biochem.Biophys.241,
88(1985)), se postula una acciõn similar de los nitroheterocíclicos, a saber, captura de radicales libres involucrados en el proceso de lipoperoxidaciõn.
3
R201
CURSO ESTACIDNAL D€ RESISTÊNCIA A LAS BAJAS TEMPERATURAS
EI\I PODDCARPACEAS CHILENAS. (Seasonal changes of frost re_
sistance in Podocarpaceas
from Chile). Ebensperger,
G., *Ríos, D., Peruzzo, G., *Facultad de Ciências Agrope_
cuarias, Universidad de la Frontera, Instituto de Botáni_
ca, Universidad Austral de Chile.
Se estúdio el curso estacionai de la resistência fp_
liar al fria, presián asmática potencial ( f T * * ) y carbohidratos totales dei jugo celular de P_. saliqnus, P. nubigena y S_. conspicua cultivadas en el jardin botânico
de la Universidad Austral de Chile-Valdivia. Esta pro piedad se relaciono con las condiciones climáticas a que
eatuvieran expuestas Ias espécies durante el desarrolló
dei trabajo.
La resistência se determino en câmaras frias autore_
gulables, dande Ias ramas fueron enfriadas a una determi^
nada temperatura durante 12G minutos y posteriormente
descongeladas a 1 C Los danos ae evaluaron en base a
temperatura capaz de lesionar el 50% de la lâmina foliar.
Las-u* se investigaron crioscopicamente y Ids azúcares totales por método colcrimétrico.
En Ias tres espécies, la mayor resistência se obtuvo en invierno y la menor en primavera verano, coinci diendo con un descenso y ascenso de Ias temperaturas mínimas del hábitat respectivamente. La mayor resistência
coincidia con un ascenso de los valores osmóticoa y carbohidratas totales.
Los resultados se dicuten en base a los grados de
resistência encontrados en espécies lefíosas de otros con_
tinentes. Se reafirma la hipótesis de que Ias espécies
dei Hemisfério Sur son menos tolerantes a Ias bajas temperaturas que las dei Hemisfério Norte, debido a que Ias
condiciones climáticas inuernales son más benignas en el
primer caso que en el segundo.
Q
EFECTO DB LA.CTQKSTIOff295 KTAÍOL (EtOE) SO BBS VELOCIDAD DB FLUJO DE C n
EE SISTEMA. ITES7I090 CEBTBAL.
(Effeot ef ethanol intake on C a
influx Telocity in
Central EerrouB Syaten). Egafla. B. j Banires» M.T.
Univeraidad de Chile - Paoultad da Medloina - Inatituto de Medicina Experimental - Laboratório de Heuro
qufnioa - Santiago 7 - Chile.
2 +
2 +
Se ha deneatrado en diferentes aodeloo de alooholisno experinental que EtOH produoe alteration de laa
bioneabranas, especialmente de membrana niteoondrlal
de diferentes drganos, lo que ae traduce en una dieninuoión de l a diaponi Dili dad de energfa indispenaable para los prooeaos oelulares. Woa interest oenooer
el efeoto que nueatro aodelo de alooholisno experinen
tali permanente y generaolonal pudlera tener sobre
el transporte nitooondrial en SIC oon espeeial referencia a Ca2+, oation fundaaental en prooeooa de neuretrausmloión y neuroseoresiln*
lata albino WistarcfV $ t Vernal (Control) y AO/25j
ratas que beben exaluaiYsnente soluoion BtOH 2$% t/tj
aotualaente 16 generaoioneo. Proteína nitooondrial 1520-ng/»l de 3 areas de STC t oortesa oerebral, hipotA
lano y o ©rebel o, obtenida por o en t ri fugaoi 6n diferem
oíal. Canara reaoclonal 4.5 »1 T.f.| termoetatiaadas
25» C. Medio reaoeionalt 75*1 K l , 3aM Ropes, 0.5 mM
KH2PO4, pH 7*4 0*5 mg alb/ml. Substrato 1 Olutanato
10n*/Mal et o 2nM, adioion IDP 360 amoles, Ca2+, oada
pulao 1 jumol• Estúdio polaxogrAfiooj oonauno de oxigeno medido oon electrodo Clark®, transporte de H+
oon electrode oonbinado pH Signa® 7 flujo de oaloio
deteminado oon elect rodo espeoffioo de C a
VTH®ooneotado a pHnetro oon inseriptor.
Loa resultados denoatraron una dleninuoidn do la relo
oided de inoerporaoion de C a
(unolea de C a
ng
prot •~ nin~ ) en ratas AO/25 oonparada oon normal. Be
ta diferencia es aas notable en $ • La nayer dlferenoia se preeento* en oorteaa oerebral.
9
2 +
2 +
1
2 +
1
Proyecto DIDUACH RS-83-19
Grant DIB Proyeoto B IO5O-Ô45-5 Unireraidad de Chile.
;
RELACIÔN ESTRUC1URA-ACTIVIDAD EN RECEP T)RES 112 DE HIS1AMINA. (Structure-activity relationship
in histamine
H2-receptors)- Enriz,R.D.,Ciuffo,G.M., Estrada M.R. y
Jaureûi, E.A.
Cátedra de Química General II. Fac. de Química,Bioquímica y Farmácia. Universidad Nacional de San Luis.
5700 San Luis. Argentina.
Ranitidina y Etintidina son antagonistas en receptores 112 de histamina, de reciente desarrolló. Ambos com
puestos presentan elevada actividad antisecretoria
gástrica, siendo ranitidina la droga mãs usada clinicamente, junto con cimetidína.
Etintidina presenta, debido a la presencia dei atii11o imidazol, dos tautôraeros y un cation, en condiciones fisiológicas. Por otra parte, y debido a la presen_
cia dei grupo cianoguanidina equivalente, ambos compuestos preBentan 4 posibles ísõmeros configuracionales
Para los distintos tautõraeros y los diferentes Ísõmeros configuracionales, se realizo un análisis conformacional teórico, utilizando un potencial ãtomoãtorao empírico, en el cual se supuso que la hidrataciõn eliminaria Ias interacciones electrostãticas.
Para ranitidina, la configuraciõn 7,E es la de mayor poblacion sobre Iob otros isõmeros configuracionales (mãs dei 90 % ) , mientras para etintidina, sg encontro que la configuraciõn E,2 es la preferida (mãs
dei 9Q% de la poblacion). En ambos casos, conformaciones plegadas dei tipo "gauche", con un marcado paralelismo entre los planos dei anillo ( imidazol o furano)
y el grupo cianoguanidina equivalente, resultaron muy
preferidas.Estas conformaciones, similares a Ias obtenidas previamente para cimetidina, presentan distancias entre grupos potencialmente activos en el orden
de 3.5-4 A, como se encontrara previamente para cimetidina e histamine.Estas distancias se han propuesto
como importantes para la interacciõn en este tipo de
receptor.
REACTIVOS BIFUNCIONALES EN LA DETERMINACION DE DISTANCIAS INTRAMOLECULARES EN LA HORMONA DE CRECIMIENTO B0VI_
NA.(Bifunctional regents in the intramolecular distances
determination in bovine growth hormone.) Ermacora, M.,
Nowicki, C.,Wolfenstein-Todel, C. y Santomé, J.A.
Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (UBA CONICET).
En nuestro laboratório se demostro la proximidad es
térica de la lisina 111 y la tirosina 174 de la hormona
de crecimiento bovina (bGH) mediante la formación de un
puente covalente entre estos residuos. Con el fin de ob_
tener nuevos puentes con reactivos bifuncionales, asi co
mo aumentar el rendimiento y la selectividad, la reac_
ciõn se realizo ahora en dos etapas. Por nitraciõn a pH
8.5 con tetranitrometano y posterior reducciõn con hidro
sulfito de sódio se pudo íntroducir grupos amino en Ias
tirosínas 35, 42 y 174, sin afectar el contenido de alfa
hélíce ni la actividad biológica de la hormona. El bajo
pKa de estas aminotírosinas permitiÕ unirles selectivamente a pH 3.6 uno de los extremos reactivos del 1.5-di
fluor-2,4-dinítrobenceno. Después de eliminar el exceso
de reactivo se llevõ a pH 9.3 para permitir la reacción
dei otro extremo.
El derivado obtenido se trato con bromuro de cianõge
no y se cromatografiõ en Sephadex G-50 SF. Las fraccio ~
nes obtenidas se sometíeron a digestion tríptica y frac
cionamiento en SP-Sephadex. Los péptidos con absorbancia
en 345 nm se purificaron por HPLC. La determinaciõn de
la composición en aminoácidos de cada uno de ellos permi
tio identificar los siguientes puentes covalentes: 29-35
29-174, 111-174 y 170-174.Esto sugiere la proximidad espacial de Ias cadenas laterales de los residuos involucrados.
El derivado entrecruzado conserva la capacidad promotora de crecimiento y el contenido de alfa hélice deter
minado por dicroismo circular.
R 202
EFECTO DE LIGANDOS EN LA INACTIVACIÓN DE LAS FORMAS
MUTADA Y NORMAL DE F0SF0FRUCT0QUINASA-2 DE E. coll
POR MODIFICACION DE GRUPOS-SH. (Effect of ligands in
the inactivation of the normal and mutant forme of
phosphofructokinase-2 from E. coli by modification of
SH-groups). Espinosa, X. y Babul, J. Universidad Metropolitana de Ciências de la Educaciôn y Departamento de Química, Facultad de Ciências, Universidad
de Chile.
Bajo condiciones gluconeogénicas, cepas con una
forma mutada de fosfofructoquinasa-2, Pfk-2*, crecen
más lentamente que las que contienen la enzima normal
Pfk-2. Ambas enzimas Bon dímeros de igual peso molecular y MgATP promueve la tetramerización de Pfk-2
solamente. Pfk-2 presenta un sitio alostérico inhibitorio para MgATP el que estaria alterado en Pfk-2* como
consecuencia de la mutaciõn estructural. ATP libre es
un inhibidor competitivo de ambas enzimas. Pfk-2* es
más lábil que Pfk-2, hecho que se acentua en ausência
de ditiotreitol y sugiere que uno o más grupos-SH
están comprometidos en la actividad de las enzimas.
Pfk-2* presentõ una mayor inactivación que Pfk-2
por el ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico) (DTNB) y
N-etilraaleimida (NEM). Ambas enzimaB p r e B e n t a r o n una
cinética de pseudo-primer orden no lineal que indica
dos clases de grupos-SH con reactividades diferentes.
A 0°C los grupos-SH que reaccionan más rapidamente en
Pfk-2* tienen una constante de segundo orden aproximadamente 30 veces mayor que los correspondientes en
Pfk-2. MgATP protegió a Pfk-2 de la inactivación por
DTNB y NEM. Fructosa-6-P, fructosa-6-P más MgATP y
ATP libre no actuaron como protectores. En el caso de
Pfk-2* solo fructosa-6-P actuó como protector, pero
su efecto fue parcial. Estos resultadOB sugieren una
mayor reactividad de los grupos-SH de Pfk-2* que de
Pfk-2 como consecuencia de la mutaciõn estructural y
que la proteccion de MgATP a la inactivación de Pfk-2
resulta de la union de este compuesto al sitio alostérico. Financiado por DIB-U de Chile, Fondecyt y OEA.
C A L I B R E S Y M I C R O T U B U L O S D E A X O N ES A M I E L I N I C O S
EN N E R V I O P E R I F É R I C O : E F E C T O D E L A D E S N U T R I C I O N
I N T E N S A . ( C a l i b e r s and m i c r o t u b u l e s i n n o n medullated axons i n peripheral nerve: effect of
malnourishment)•
F a ú n d e z , V . y R o s s o , P. L a b .
N e u r o c i t o l o g í a, F a c . C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s ,
Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile.
( P a t r o c í n i o : F. N e r v i . )
.
,
El empacafflitílilo tie los m i c r o t u b u l e s ( M T s )
es f u n c i ó n i n v e r s a d e l c a l i b r e a x o n a l .
Una
desnutrición intensa y mantenida podría asoc i a r s e a u n a d i s m i n u c i ó n d e l c a l i b r e . En e s t a
condición debería mantenerse esta correlaciòn.
R a t a s m a c h o s d e 5 7 0 g. f u e r o n a l i m e n t a d a s
c o n el 2 5 % d e l a d i e t a h a b i t u a l h a s t a s u s a c r i f í c i o a l o s 2 7 y 48 d í a s (53 y 46% d e p e s o
inicial, respectivamente).
Los n e r v i o s surales se p r o c e s a r o n para
microscopía electrónica.
Se conto los M T s y
se midió Ias áreas de axones amielínicos.
L a d e s n u t r i c i ó n n o a f e c t ó el p e s o d e i
encéfalo.
Las áreas d e Ias fibras amielínicas
d i s m i n u y e r o n d e 0.61 u m
a 0.57 u m
a l o s 27
d í a s y a 0.41 u m
a los 48 días d e d e s n u t r i ción.
El n ú m e r o d e M T s a u m e n t a b a c o n el c a l i bre del axón, pero su empacamiento disminuía.
Esta c o r r e l a c i ò n s e m a n t u v o c e r c a n a a l a d e
los animales c o n t r o l e s .
2
2
2
Concluímos que la desnutrición hace dismin u i r el c a l i b r e p e r o n o a f e c t a d e m a n e r a i m p o r
t a n t e el e m p a c a m i e n t o d e l o s m i c r o t u b u l e s d e
la fibra amielínica.
Proponemos una labilidad
del SNP frente a la desnutrición intensa.
PIRUVATO KINASA DE THERMUS THERM3PHILUS: PURIFICACTON Y
EFECTO DE IONES METÁLICOS.
(Thermos thermophilus
pyruvate kinase: purification and effect of metal ions).
Eyzaani rrs .J., Sopi r. .A y Ncwak.T. Department of Chemistry, University of Notre Dame, Notre Dame, IN, y Laboratório de Bioquímica, Universidad Católica de Chile.
pyruvate kinase from the thermophilic microorganism
Thermus thermophilus was purified to homogeneity by
protamine sulfate and ammonium sulfate fractionation,
ion exchange chromatography and affinity chromatography
on Affi gel-Blue. The sub-unit molecular weight, as determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, was
found to be 50,000, and the enzyme has a pi of 5.0. The
enzyme has a requirement for divalent metal cations, but
in contrast to eukaryotic pyruvate kinases, no activa tion by monovalent cations was observed. Mn
substi tutes for Mg , but at about one-third the velocity.
Monovalent metal ions inhibit at night concentration, in
creasing the K
for PEP, but this effect is probably
due to ionic strength. Kinetic studies were performed
at 22° and pH 7.0, in the absence of monovalent metal
ions. PEP gives sigmoidal kinetics with K ,-^).8 mM;
addition of G-6-P induces hyperbolic kinetics with Km
(PEP)=0.2 mM. The Km for ADP is 0.23 mM and the K for
G-6-P is 0.02 mM. At pH 6.4 qualitatively similar
kinetics are observed with greater Km values. In the
presence of Mn , pH 7.0, the K
for PEP is 10 uM, and
the addition of G-6-P induces hyperbolic kinetics with a
Km (PEP) =4 uM; Km for ADP is 21 uM. The ligands oxalte
and phosphoglycolate behave as competitive inhibitors
versus PEP with Ki values of 0.37 mM and 4.9 mM, respectively. This research was supported by NIH grant
AM17049.
+
2
2
Q
5
n
2
Q
5
LOS PARASITOS DE LA LISA, MUGIL CBPHALUS L., EN CHILE:
SISTEMÁTICA Y ESTRUCTURA POBLACIONAL. (Parasites of grey
mullet, Mug11 cephalus L. , in Chile: systematics and poblational estructure). Fernandez, J. Dpto. Zoologia, Universidad de Concepción. Concepción.
La lisa es una espécie marina, costera, cosmopolita,
que a pesar de ser un recurso pesquero de cierta important
cia en Chile (738' ton. en 1985), estã muy poco estudiada
desde el punto de vista parasitologic©.
Durante 1985 se estudiaron los parãsitos de M. cephalus en 3 localidades a lo largo de Chile (Arica, Coquimbo, Concepción) cuali y cuantitativãmente. Se identificaron un total de 20 espécies de parãsitos: PROTOZOA: Kudoa
sp.; Myxobolus sp.; Trichodina sp.; MONOGENEA: Ligophorus
huitrempe n.sp.: Metamicrocotyla macracantha (A.); Microcotyle pseudomugilis H.; DIGENEA: Dicrogaster fastigatus
T & S; D. fragilis n.sp.; Hymenocotta manteri o.; Lasiotocus sp.; Phagicola longa (R.)(metacercarias, adultos
obtenidos a partir de infecciones experimentales de Mus
musculus); Saccocoelioides overstreeti n.sp.; S. papernai
n.sp.; CESTODA: Scolex pleuronectis M.; NEMATODA: Contracaecum multipapillatum (D.)(larva); phocanema sp. (larva);
COPEPODA: Bomolochus chalguanus n.sp.; Ergasilus lizae K.;
E. versicolor W.t Naobranchia lizae (K.).
El 100% de los peces de Concepción estaba parasitado por al menos un parasito, distribuyéndose estos a través de todas Ias tallas muestreadas, desde 150 a 460 mm.
Todos los parãsitos, excepto Lasiotocus sp., estãn altamente sobredispersos, indicando una distribución agrupada y no al azar. La carga parasitaria de todas Ias espécies (excepto D. fragilis n.sp.) está positivamente correlacionada con la longitud del pez (P<0,001 y P £ 0 , 0 1 ) .
Existe además una asociación positiva significativa entre
L. huitrempe y M. pseudormiî 1 is (p^ 0,001). Ningún otro
par de parãsitos presenta algín tipo de asociación.
Existen diferencias en la distribución geográfica de
Ias espécies encontradas. Ias cuales se atribuyen en parte a Ias condiciones abióticas a lo largo de la costa
(gradientes de temperatura, areas estuarinas, e t c ) .
R 203
E F E C T O D E L C I A N I D P . M O L ( C N ) SO DAE EL iETA30LI EíiO
DE E T A M O L (E) I ?J V I V O V LA A C T I V I D A D DE E N Z I M A S
I H V O L U G R A D A S EN SU OX ID A C I Oil H E P A T I C A .
(Effect
of c y a n i d a n o l on t h e i n v i v o e t h a n o l
metabolism
a n i o n t h e a c t i v i t y of e n z y m e s i n v o l v e d i n
its
h e p a t i c o x i d a t i o n ] . F e r n a n d e z , V . y I'r i z , A . 'J n i dad de D i o q u i m i c a , Dept. C i ê n c i a s
Biológicas,
F a c . ; - l e d i c i n a - D i v . O c c i d e n t e , U. d e C h i l e .
E l CN cs un p o t e n t e a t r a p a d o r d e
radicales
l i b r e s . D e b i d o a q u e s e h a e v i d e n c i a d o q u e l a o_
x i d a c i o n m i c r o s o m a l h e p ã t i c a d e E t i e n e un c o m p o n e n t e r a d i c a l a r i o , s e e s t u d i a e l e f e c t o d e l CI!
s o b r e e l m e t a b o l i s m o de K y s o b r e l a a c t i v i d a d
de la d e s h i d r o g e n a s a a l c o h o l i c a
(ADH),
sistema
m i c r o s o m a l (MEOS) y c a t a l a s a
(C) h e p ã t i c a s .
R a t a s W i s t a r macho (200 g) r e c i b i e r o n 0,4 g
CN/kg s . c . o s a l i n o i s o v o lumetrico
(controles).
Una h o r a d e s p u é s , t o d o s l o s a n i m a l e s f u e r o n
tra
t a d o s con 2 , 5 g E / k g i . p . ' l u e s t r a s d c s a n g r e
f u e r o n o b t e n i d a s a l a s 2 , 3 , 4 , 5 y 6 hr de admin i s t r a d o E , p a r a su d e t e r m i n a c i ó n
enzimática.
E l e f e c t o d e l CN s o b r e l a a c t i v i d a d A D H , : I E 0 S y
C h e p ã t i c a s s e e s t ú d i o e n un r a n g o d e c o n c e n t r a
c i o n e s d e 0 , 2 a 2 , 0 mM.
CN i n h i b e e l m e t a b o l i s m o d e E i n v i v o en un
20% (P < 0 , 0 0 5 ) . E n e l r a n g o d e c o n c e n t r a c i o n e s
u s a d o , CN n o a f e c t a l a a c t i v i d a d h e p ã t i c a d e
ADH y C . S i n e m b a r g o , l a a c t i v i d a d MEOS se i n h i _
b e p r o g r e s i v ã m e n t e , o b s e r v ã n d o s e un 4 6 % d e
inhi
b i c i o n con 2 , 0 mM C M .
Los r e s u l t a d o s i n d i c a n q u e e l CM i n h i b e s e l e c t i v a m e n t e e l s i s t e m a MEOS, v i a o x i d a t i v a de
E a s o c i a d a a un m e c a n i s m o r a d i c a l a r i o , l o c u a l
s e t r a d u c e en u n a d i s m i n u c i õ n d e l m e t a b o l i s m o
d e E i n v i v o . E s t e e f e c t o e s t á d e a c u e r d o con
l a a c c i õ n a n t i l i p o p e r o x i d a n t e d e l CN o b s e r v a d a
en l a i n t o x i c a c i o n a g u d a con E . ( F i n a n c i a d o p o r
D.I.E., U n i v e r s i d a d de C h i l e ,
E-13G0).
r
3
CAPTACIÓN D E [ 3h]-L-GLOTAT^TO Y [ H ] -DOPAMINA EN ESTRIAEO DE RATA: DEPENDÊNCIA DE IONES CLORURO E INHIBICIÓN
FOR BLOQUEADORES DE TRANSPORTE DE ANIONES. (Chloride
ions dependent uptake of [3H]-L-Glutamate and [%] -Dopamine by the rat striatum: Inhibition by anions transport
blockers). Fiedler, J.L., A m u e r o s , L. Lab. Farmacologia-Bioquímica , P. Universidad Católica de Chile.
En estúdios d e unión d e ác. L-[^]-Glutamic© (L-Glu)
a membranas, hemos encontrado que el L-Glu retenido,
dependiente de CaCl2 y temperatura, corresponderían a
secu est rami ento de L-Glu por Ias membranas. Este hallazgo nos llevó a estudiar el rol dei C l " en la captación de L-Glu y [^Hj-^pamina (DA) por tejido y sinaptosonas est ria tal es y si este proceso era afectado por
inhibidores d e transporte d e aniones.
Cortes d e tejido y sinaptosomas se incubaron con LGlu o DA en KRF durante 2 min a 31°. La reacción se detuvo por filtración. Los inhibidores fueron: 4-acetamido-4' -isotiociano-2-2' disulf onicostilbeno (STTS), 4 [(dipropilamino)sulfonil]benzoico (Probenecid) 2, 4 , 6
trinitrofenol (Pícrico) . La captación de L-Glu y DA se
inhibe totalmente por remoción de N a y baja temperatura. Al sustituir el C l ~ por acetato o citrato, se inhibe la captación d e L-Glu (58 y 38%) y totalmente la DA
(90%). El transporte de L-Glu y DA aumenta en forma lineal al incrementar el Cl~ entre 5 y 100 mM, a mayores
concentraciones no es lineal. STTS, Probenecid y Pícrico (10-5 a 10~ M) inhiben progresivamente el transporte
de L-Glu y DA por los cortes y sinaptosomas. La remoción dei C a 2 externo y/o exceso d e Mg+2 no afectan la
captación d e L-Glu y DA.
En conclusion, la captación de L-Glu y DA en los
terminales nerviosos es dependiente d e la presencia d e
ienes C l en el medio extracelular y en concordância
con esto, inhibidores de transporte d e aniones disrninuyen la captación de L-Glu y DA, sugiriendo un importante rol para el cloruro en el transporte d e alta afinidad d e L-Glu y DA.
+
3
+
-
Financiado por Grant 1182/85 Fondecyt.
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN DE LOS COMPONENTES DEL CUERPO CROHATOIDE DE TESTÍCULO DE RATA. (Isolation and characterization of the
components of rat testis chroaatoid body). Figueroa, J. Instituo
de Bioquímica, Universidad Austral de Chile, Valdivia.
Al cuerpo croiatoide (CC) de testículo de rata, se le ha descrito como una estructura citoplasmática única, de tarnafio aproximado de una um de diáietro, típica de Ias espermátidas y con una ultraestruetura fibrogranular densa. Para caracterizar los componentes de esta estructura y como priiera fase para definir su rol en
espermiogénesis, se desarrollaron dos procedimientos de purificación que consistieron en centrifugación diferencial y gradientes
discontinues de sacarosa. Un segundo procedimiento consistia en el
bandeo isoplcnico de CC en gradientes de metrizamida. Estos todos producen una preparaciÓn conformada por alrededor de un 80% de
CC, los contaminantes consisten en pequeflas membranas.
Análisis dei contenido de RNA mostro una poblacion heterogênea, donde destacan una serie de bandas con tamaflos entre 7S y 4S,
con total ausência de tRNA. Mediante electroforesis en condiciones
der.aturantes (SDS), se determino que esta estructura está compuesta de una gama de polipéptidos cuyos pesos moleculares fluctuaron
entre 10.000 y 68.000. Mediante "Western blot", se demostro que algunos de ellos son reconocidos por los sueros anti-Sm y ANA-N. La
presencia de polipéptidos reconocidos por el suero anti-Sm y la
existência de pequefios RHAs ya mencionados demuestran la presencia
de U-RNP en el CC. Estos resultados se confirmaron por inmunocitoqulmica al microscópio óptico y electrfinico, donde además el CC
reacciono" con un anticuerpo anti-DNA nativo (A-nDNA-A).
El presente trabajo constituye la primera caracterización
de los componentes moleculares dei CC de testículo de rata, que
por su naturaleza sugieren que el rol de esta estructura podría
ser el almacenamíento y transporte de RNA, en forma de ribonucleoprotelnas.
Financiado por los Proyectos S-85-10 DID-UACH, 1/61 457
Stiftung Volkswagenwerk, Alemania.
Patrocínio: L. 0. Burzio.
TRANSFERENCIA DE PLÁSMIDO MEDIADA POR FUSION DE
PROTOPLASTOS A Clostridium acetobutylicum.(Plasmíd
transfer mediated by protoplasts fusion to C. acetobutylicum strains).Floccari M., Schijman, A. y Méndez, B .
t
Departamento Química Biológica, Facultad Ciências Exactas y Naturales,Universidad Buenos Aires- Ciudad Univer
sítaria, Pab. II,1428,Bs. As., Argentina.
Clostridium acetobutylicum posee importância industrial
por su uso en fermentaciones anaerõbicas para la produc_
ciõn de solventes:acetona, butanol. El mejoramiento de
su actividad biológica por manipulaciones genéticas con
ducíría a una mayor eficiência en el proceso industrial
Nuestro objetivo es desarrollar sistemas de transferencia de material genético que permitan ulteriores ensayos con moléculas recombinantes.
En este trabajo se fusionaron protoplastos de una cepa
nativa de C. acetobutylicum con los de distintas cepas
de Bacillus subtilis portadoras de plásmidos con resistência a antibióticos.
La fusion se realizo en presencia de polietilenglicol
y la regeneraciõn de los fusionantes tuvo lugar en anaerobiosis en medio sólido de crecimiento,hipertónico,
suplementado con diversos nutientes. Las colônias portadoras de plásmidos se detectaron por réplica en medio
de crecimiento suplementado con el antibiótico correspondiente. La presencia de plásmidos en los fusionantes fue confirmada por electroforesis en geles de agarosa.
Este método de transferencia de material genético podrã
ser aplicado a plásmidos recombinantes de interés.
R204
R E G U L A C I O N DE LA S E C R E C I Õ N DEL F A C T O R T I M I C O
SERICO:
E F E C T O DE UN E S T I M U L O S E N S O R I A L . ( R e g u l a t i o n of the s e c r e t i o n of t h y m u l i n : E f f e c t
of s e n s o r i a l s t i m u l u s ) .
F o l c h , H., B a h r e , R.,
K u n i k , M. I n s t i t u t o de M e d i c i n a E x p e r i m e n t a l ,
U n i v e r s i d a d A u s t r a l de C h i l e .
El F a c t o r T í m i c o S é r i c o (FTS) es una de
las h o r m o n a s p r o d u c i d a s por el e s t r o m a t í m i c o
cuya funciõn es r e g u l a r la d i f e r e n c i a c i o n de
las c é l u l a s inmuno^competentes. Recienteraente
h e m q s r e p o r t a d o que Is s e c r e c i õ n del FTS por
parte de las c é l u l a s r e t í c u l o e p i t e l i a l e s d e pende de un e s t í m u l o h i p o t a l á m i c o . En el p r e sente trabajo se e s t u d i a el e f e c t o dei ruido
en los n i v e l e s de FTS c i r c u l a n t e en a n i m a l e s
de e x p e r i m e n t a c i õ n ,
En todos los e x p e r i m e n t o s se u s a r o n r a t o nes RK de 2 m e s e s de edad , los que f u e r o n s o m e t i d o s a un ruido puro de 100 Db a 1 0 0 0 H e r t z ,
por una h o r a , d i s t r i b u í d o en 30 a p l i c a c i o n e s
de un m i n u t o cada u n a . P o s t e r i o r m e n t e los ani_
m a l e s f u e r o n s a n g r a d o s , el s u e r o f i l t r a d o y el
FTS e v a l u a d o m e d i a n t e la t é c n i c a de i n h i b i c i ó n
de r o s e t a s .
L o s r e s u l t a d o s d e m u e s t r a n que el e s t í m u l o
a c ú s t i c o a p l i c a d o e l e v a en dos a c u a t r o v e c e s
los n i v e l e s de FTS c i r c u l a n t e en todos los en
s a y o s r e a l i z a d o s , el a u m e n t o de la h o r m o n a se
o b s e r v a unas h o r a s d e s p u é s de a p l i c a d o el e s tímulo y el m ã x i m o se d e t e c t a e n t r e Ias 6 y 2 4
h o r a s d e s p u é s de la e x p o s i t i o n al ruido p a r a
d e c a e r p o s t e r i o r m e n t e . J u n t o con lo a n t e r i o r
es p o s i b l e e v i d e n c i a r un a u m e n t o dei n u m e r o de
timocitos cercano
al 3 0 % .
Financiado por Proyectos
FONDECYT N
1072.
UACH
PURIFICACION DE UMA. PROTEASA Y SU INHIBITOR DE MUSCULO
ESQUELÉTICO DE PESCADO. (Purification of one protease
and its inhibitor from skeletal muscle of fish).
Folco.E., Busconi,L.,Martone,C., Trucco,R., Sanchez,J.J,
INTI, Centro de Investigaciones de Tecnologia Pesquera.
Mar del Plata. ARGENTINA.
Previamente habíamos informado de la presencia en el
músculo de corvina de una proteasa tipo serina y demostrado su acción sobre distintas proteínas miofibrilares
aisladas y miofibrillas intactas, como así también la
acción dei inhibidor endógeno al prevenir la degradación
producida por la proteasa.
Con el fin de conocer la interacción entre la enzima y
su inhibidor endógeno se realiza la purificación de ambos.
La enzima fue purificada por: cromatografía en DEAE-Sephacel, octil-Sepharose, hidroxiapatita y arginil-Sepharose y al inhibidor por DEAE-Sephacel, hidroxiapatita y
tripsina-agarosa.
Las fracciones activas de la columna de octil-Sepharose
al ser cromatografiadas en hidroxiapatita eluyen como
un solo pico de actividad, pero si esas fracciones son
previamente incubadas y luego cromatografiadas en hidroxiapatita se convierten en otras dos formas enzimáticas
diferentes.
Esta conversion es afectada por la presencia de sustratos e inhibidores de la enzima.
S-85-12 y
ff
EL TRANSPORTE OVIDUCTAL DE EMBRIONES SE RETARDA EN RATAS
H I P 0 E S T R 0 G E N I C A S . (Delayed oviductal transport of embryos in hypoestrogenic rats). Forcelledo, M.L.- Laboratório de Endocrinologia, Facultad de Ciências Biológicas, Pontifícia Universidad Católica de Chile.
El paso de embriones al útero se produce en la tarde dei 4 día de prenez en la rata, pero se adelanta si
el estradiol ( E 2 ) plasmático sobrepasa los niveles normales por administración de E 2 exõgeno. Se investigo
si la disminución de E 2 circulante tiene un efecto
opuesto, reduciendo la síntesis de E 2 mediante la administración de un inhibidor de la estrógeno sintetasa,
la 4-OH-Androstenedione (4-OH-A). Se inyectó 4 -OH-A,
1 0 mg/día, desde el día 2 , 3 ó 4 hasta el día 5 de prenez, en el cual se autopsiaron Ias ratas para determinar la distribución de los embriones en el tracto genital.
En otras ratas se determino producción ovárica de
E 2 y progesterona (P) y niveles sistêmicos de testosterona (T). Sólo en Ias ratas tratadas con 4-0H-A desde
el día 2 ó 3 , se encontro embriones retenidos en el
oviducto en el día 5 (50 y 2 0 % respectivamente). 4-OH-A
disminuyó la secreción de E 2 a un 2 0 % de lo normal, no
modifico la producción de P y elevo los niveles de T.
Implantes sc de T produjeron câmbios hormonales y en el
transporte de embriones semejantes a los observados con
4-OH-A. E 2 exógeno normalizo el transporte de embriones en Ias ratas tratadas con 4-0H-!A o con T, por lo
tanto, la retención de embriones observada con ambos
tratamientos, se correlaciona con disminución de E 2 y
no con aumento de T.
HORMONAS Y GABA COMD POTENCIALES MODULADORES D E SISTEMAS
NEUROTRANSMISOFES EN EL OVIDUCTO DE RATA. (Hormones and
GABA as potentials modulators on neurotransmitters systems of rat oviduct). Forray, M.I., Gallequillos, X.,
Pizarro, J., Pcmbet, N_. y Belmar, J. Laboratório d e Farmacologia Bioquímica, Facultad de Ciências Biológicas,
P. Universidad Católica d e Chile.
o
Se concluye que la secreciõn de E 2 durante los 3
primeros días de prenez en la rata, es necesaria para
asegurar el paso de embriones al útero en la tarde dei
4 ° día.
Financiado por RF-86020
En oviducto de rata se han descrito diferentes sistemas d e neurotransmisores (NTs): acetilcolina (ACh), nora
drenalina (NA) y recientemente el ácido y-aminobutírico
(GABA). Algunas propiedades dependerían dei estado endocrino dei animal y/o de interacciones entre ellos. En
nuestro laboratório hemos encontrado que la liberacion
d e 3H-Noradrenalina (^H-NA) cambia a lo largo dei ciclo
estrai, y que la progesterona (P) la inhibe tanto in vitro como in vivo. En este trabajo se presentan los efectos d e estradiol (E) y d e GABA sobre la liberacion d e
3 H - N A y de GABA sobre la actividad mecânica espontânea e
indue ida dei oviducto.
En los estúdios de liberacion, los oviduetos preincubados con ^H-NA fueron superfundidos en presencia de d i ferentes concentraciones d e GABA, de E o de P, y luego
estimulados con K+ (80 m M ) .
La actividad nfâcánica dei
órgano se estúdio en câmara d e superfusión y se registro
con transductores d e tension, GRASS 03.
E aumento la liberacion d e 3H-NA durante estro y dies
tro y la inhibió en proestro, siendo su efecto dõsis d e pendiente. Con P se observo nuevãmente inhibición d e la
liberacion d e 3H-NA. Lo mismo ocurrió con GABA aunque
solo durante el estro. GABA modifico además la actividad espontânea dei oviducto y potenció el efecto de ACh.
Curvas dósis-respuesta d e ACh realizadas en presencia de
GABA a distintas concentraciones sugieren que este NT mo
dificaría la sensibilidad dei oviducto a ACh.
Estos resultados indican a GABA como modulador d e sis
temas d e NTs del oviducto d e rata, pero su efecto dependeria dei ciclo estral.
Financiado por Proyecto DIUC 75/86.
ASOCIACION DE LA ACETILCOLINESTERASA NEURONAL A LA
MEMBRANA PLAS MATICA. (Association of the Neuronal
Acetylcholinesterase to the Plasma Membrane). Fuentes
M.E. e Inestrosa, N . C . Grupo de Neurobiologia Mole cular, P. Universidad CatSlica de Chile, Santiago.
Estúdios recientes han demostrado que ciertas
proteínas de superficie se asocian a la membrana a
través de dominios lipidicos ricos en fosfatidilino
sitol. Entre ellos se encuentran los dimeros de ace
tilcolinesterasa (AChE) presentes en Torpedo.
En este trabajo se ha estudiado como se asocia
la AChE neuronal a la membrana plasmática en el n ú cleo caudado de bovino. Para ello hemos usado un
reactivo de afinidad, que se asocia a regiones hidro
fôbicas de proteínas de membrana, el 3-CTrifluoremet i l ) - 3 - m - ( I ) Iodofenil Diazirina ( I - T I D ) .
1 2 5
1 2 5
1 2
Con el 5 l - T I D
^ establecido que: (i) la
AChE contiene ácidos grasos marcados, Cii) la elec troforesis PAGE-SDS, sin reducciôn muestra marca s o lo en dimeros y tetrámeros de la enzima, (iii) al
reducir, el ^ 0 $ de la marca se ubica en una region
de 20Kd, la cual es dificilmente tenida con plata.
Civ) Fosfolipasa _ç_, que hidroliza fosfatidilinositol
no afecta la movilidad de la banda de 2 0 K d , (v) Di gestiôn con Proteinasa K genera a partir de la ban da de 2 0 K d , un fragmento de 1 3 K d , sin alterar la a c tividad de la AChE, (vi) el fragmento de 1 3 K d no se
une a Con-A y , puede ser purificado en columnas de
L H - 6 0 con solventes orgânicos.
s
e
Podemos concluir que un fragmento de 2 0 K d unido
por enlaces disulfuro al tetrámero de subunidades
catalíticas de la AChE está involucrado en la unión
de la enzima a la membrana neuronal. En este frag mento está contenido uno menor de 1 3 K d de estructura lipídica que no contiene fosfatidilinositol.
Financiado por DIUC ( 7 7 / 8 6 )
y FONDECYT
(1015/85).
E F E C T O DE M A L A T O SOBRE L A A C T I V I D A D DE P I R U V A T O
D E H I D R O G E N A S A DE M I T O C O N D R I A S DE H I G A D O Y " T I P O
ESPERHA" DE RATA Y RATON ( E f f e c t o f m a l a t e o n
pyruvate dehydrogenase o f 1iver and"sperm type"
mitochondria
f r o m mouse a n d r a t ) G a l1 ina , F . G . ,
Gerez de Burgos, N . M . , Burgos, C. y Blanco, A .
Cátedra de Química Biológica,
Facultad de C.
Médicas, U n i v . N a c .de Cordoba, A r g e n t i n a .
Utilizando sistemas reconstituidos
in vitro
se ha d e m o s t r a d o e n e s t e l a b o r a t ó r i o
que la i s o
zima de l a c t a t o d e h i d r o g e n a s a e s p e c í f i c a d ee s permatozoide (LDH X ) de ratfin p a r t i c i p a en un
s i s t e m a conmutador de h i d r ó g e n o q u e u t i l i z a
la
cupla redox a - O H - á c i d o / a - c e t o ã c i d o de cadena ra
mificada.
La cupla 1actato/piruvato
parece no
operar, y a que con ella se produce un increment o e n l o s n i v e l e s d e NADH e x t r a m i t o c o n d r i a l e n
el s i s t e m a . E s t e e f e c t o es a u n mayor en p r e s e n cia de malato, el cual forma parte de l a l a n z a d e r a ma 1 a t o / a s p a r t a t o .
A f i n de a c l a r a r el mecanismo de acción d e l
malato, se estúdio comparativamente el efecto
del mismo s o b r e l a a c t i v i d a d de p i r u v a t o
dehidrogenasa en mitocondrias
de higado y " t i p o e s perma" de ratón y de r a t a .
(Las mitocondrias
" t i p o esperma" s e a í s l a n de t e s t í c u l o y s o n
idênticas a l a s organelas que forman l a vaina
mitocondrial
de l a pieza media de e s p e r m a t o z o i des).
L o s resultados obtenidos en l a s dos espécies indican q u e ,c o n mitocondrias
de higado,
el m a l a t o no p r e s e n t a e f e c t o a l g u n o s o b r e l a
a c t i v i d a d de la enzima, mientras que c o n mitoc o n d r i a s " t i p o e s p e r m a " m a l a t o ImM i n c r e m e n t a
l a a c t i v i d a d e n z i m á t i c a e n u n 70% e n l a s d e r a t a y e n u n 200% e n l a s d e r a t ó n ; l o c u a l
sugiere que l a p i r u v a t o dehidrogenasa de espermatozoide posee d i f e r e n t e s propiedades
regulatorias
que l a d e h i g a d o .
R205
ACTIVIDAD DE CATALASA HEPÃTICA Y CATABOLISMO
DEL COLESTEROL. (Liver catalase activity and
cholesterol catabolism). Fuentes O.R., Departamento de Ciências Básicas, Division Oriente,
Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
A partir de estúdios in vitro se ha propuesto
un rol del peroxisoma y su sistema de y8-oxidacién en la degradación del colesterol a ácidos
biliares, pero su importância funcional no e s ta bien establecida.
Con el objeto de evaluar el rol funcional que
el peroxisoma pueda tener en el catabolismo de
colesterol se investiga si la inhibicién de la
catalasa hepática por 3-amino-l,2,4-trlazol
(A.T.) bloquea el catabolismo dei colesterol
inducido por colesteramina (CUEMID) en ratas
machos Sprague-Dawley. Diez dias de ingesta de
CUEMID en la dieta (2^,p/p) produce hipocolesterolemia y aumenta la actividad de la catalasa hepática. La inyección i.p. de A.T. (lg/fc
peso) cada 12 h. por 7 dias, reduce a un 15#
la actividad de la catalasa hepática y produce hipercolesterolemia e hipotrigliceridemia.
La administraciõn simultânea de A.T. y CUEMID
por 7 dias produce un 7 7 ^ de inhibición de la
actividad de catalasa hepática y una hipocoles
terolemia mayor que con CUEMID, manteniendose"
el efecto hipotrigliceridámico observado con
A.T. solo. Los resultados sugieren que el catabolismo de colesterol inducido por CUEMID no
requiere actividad de catalasa y ocurriría por
otra via (mitocondrial) o bastaria la actividad de catalasa remanente a la via peroxisomal.
INFLUENCIA DEL ZINC SOBRE LA ESTABILIDAD SE LA CROMATINA DE ESPEHMATOZOIDES HUMANOS (Zinc aotion on the
ohromatin stability of human spermatozoa). Gamboa, M.
y Leiva. S. Departamento de Biologia Celular y Genética, Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
La presencia de zinc en el espermatozoide y el
plasma seminal estaria relacionada con la estabilidad
nuclear y en consecuencia con una adecuada decondensa_
ciôn de la cromatina en el citoplasma ovular.
El zinc ejercerla un rol estabilizador de macromo
leoulas y este dependeria del estado físico-qulmico
de la cromatina presente en espermatozoides normales
(oval) y teratospérmicos.
Con el objeto de conooer y evaluar la acci6n d e l
zinc B o b r e los gpmetos presentes en el semen humano,
se incubaron las células "in vitro" en medio con Zn
SO4 ( 3 . 2 mM) a diferentes tiempos, determinando la
presencia intracelular del 16n previa y post inoubaciSn y evaluando el efecto estabilizante por tratamiento de decondensaoion "in vitro" con un reduotor
de S-S.
Se observi que más células ovales oaptan zinc res_
peoto a las anômalas (p-<_0.0Ol), siendo a los 25 minu
tos mas evidente (p->CP.01). Se detecto que el efecto
estabilizador favorece a la poblacion oval (r-O.49)
en relaoifin a la de teratospérmicos ( r — 0 . 5 2 ) . En con
dioion nativa los anômalos fueron mis afectados por
aooion del reduotor (mayor Í> de deoondensados), pero
tambie'n un poroentaje alto de ovales ( 4 0 ? l ) .
Se oonoluye que el zinc ejerce una acciSn protectora de la decondensaoion nuclear, y esta es selectiT a , siendo ejerolda sobre espermatozoides cuyoe ndcleos ban aloanzado una adecuada diferenciaciSn y m a duraciSn espenuttica. Se discute el B i g n i f i o a d o que
tendrla la acci6n del zinc "in vivo", al asegurar un
estado transitório de mayor e B t a b i l i d a d oomo un mecanismo biológico que asegure el êxito en la transferen
oia d e l genoma paterno. (Proyecto 1 9 7 8 / 8 5 2 3 D.I.B.,
Universidad de Chile).
R 206
E F E C T O A C T I V A D O R DE P E P T I O O S R I C O S EN U S I N A SOBRE L A S
P R O T E I N A q U I N A S A S DE LA MEMBRANA DE O O C I T O S DE X e n o p u s
laevis.
( A c t i v a t i n g e f f e c t o f l y s i n e - r i c h p e p t i d e s on
the p r o t e i n kinases o f Xenopus l a e v i s o o c y t e membranes.)
Marta G a t i c a .
D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a , F a c u l t a d de
M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
La membrana p l a s m a ' t i c a c o n t i e n e p r o t e f n a s y l f p i d o s que
i n t e r v i e n e n en l a t r a n s d u c c i o ' n d e s e n a l e s e x t r a c e l u l a r e s que r e g u l a n el m e t a b o l i s m o y l a prol i f e r a c i o ' n c e l u lar.
Un s i n n u m e r o d e d a t o s e x p e r i m e n t a l e s i n d i c a n q u e
la
fosforilacio'n y desfosforilacio'n
de p r o t e f n a s de
membrana a f e c t a r f a n
la actividad
de l o s mecanismos
transductores.
E s t o j u s t i f i c a n u e s t r o i n t e r e ' s en e s t u d i a r l a s p r o t e f n a s q u i n a s a s p r e s e n t e s en membranas de
o o c i t o s de Xenopus l a e v i s .
N o s o t r o s hemos d e t e r m i n a d o q u e l a p o l i l i s i n a , e n c o n c e n t r a c i o n e s de 0 , 5 m g / m l , p r o d u c e una n o t ó r i a e s t i m u l a c i o ' n de l a f o s f o r i l a c i o ' n de v a r i a s p r o t e f n a s de l a
membrana de o o c i t o s r e a l i z a d a p o r q u i n a s a s e n d o ' g e n a s .
E l m a y o r i n c r e m e n t o s e p r e s e n t a e n p r o t e f n a s d e Mr m e n o r a 30.000 d a l t o n s .
E f e c t o s s i m i l a r e s se o b t i e n e n
con copolfmeros l i s i n a : a l a n i n a y l i s i n a : s e r i n a y con
poliornitina,
pero poliarginina
p r o d u c e ma's b i e n u n a
i n h i b i c i o ' n de l a f o s f o r i l a c i o ' n
de e s t a s
protefnas.
D e n t r o de l a s p r o t e f n a s n a t u r a l e s que c o n t i e n e n s e c u e n c i a s r i c a s en l i s i n a se e n c u e n t r a n l a h i s t o n a H I y l a
p r o t e f n a del oncogen K i r s t e i n r a s ( K i - r a s ) .
Al usar la
h i s t o n a H I y un p e ' p t i d o s i n t e ' t i c o que r e p r o d u c e l a s e c u e n c i a d e l o s ú l t i m o s 14 a m i n o a ' c i d o s d e K i - r a s , s e o b t i e n e e s t i m u l a c i o ' n de l a f o s f o r i l a c i o ' n de p r o t e f n a s de
membranas de o o c i t o y de c é l u l a s de t e j i d o n e r v i o s o
NG-108-15.
Actualmente estamos estudiando l a s o l u b i l i zacio'n de l a a c t i v i d a d
fosforilante
p r e s e n t e en l a s
membranas de o o c i t o .
t E s t e t r a b a j o e s a p o y a d o p o r un p r o y e c t o
U n i v e r s i d a d de C h i l e y p o r l a O E A . ]
D I B de
la
LA C U B I E R T A F O L I C U L A R D E O V O C I T O S D E A N F Í B I O S :
SITIO DE S I N T E S I S DE RNA D U R A N T E LA O V O G E N E S I S .
The f o l l i c u l a r e n v e l o p e of a m p h i b i a n o o c y t e s :
a site of RNA s y n t h e s i s d u r i n g o o g e n e s i s . G e n t a
H.; S a n c h e z R i e r a , A . ; S a n c h e z , S . y C a b a d a , M.
D e p a r t a m e n t o de B i o l o g i a d e l D e s a r r o l l o (INSI=
B I O ) . C O N I C E T - U n i v e r s i d a d N a c i o n a l de T u c u m á n .
La r e l a c i ó n f u n c i o n a l entre el o v o c i t o de
a n f í b i o y la m o n o c a p a de c é l u l a s f o l i c u l a r e s
que lo rodean no está t o t a l m e n t e d i l u s c i d a d a .
Las c é l u l a s f o l i c u l a r e s han sido i m p l i c a d a s
en n u m e r o s o s p r o c e s o s tales como e s t e r oid eogê* =
n e s i s , s í n t e s i s de p r o t e í n a s , p a r t i c i p a c i o n en
la f o r m a c i o n de la e n v o l t u r a v i t e l i n a , e t c .
En t r a b a j o s p r é v i o s h e m o s d e m o s t r a d o que en
los o v o c i r o s o v ã r i c o s t o t a l m e n t e c r e c i d o s de
Bufo a r e n a r u m , e s t a capa c e l u l a r es a c t i v a en
la s í n t e s i s de RNA m a n i f e s t a n d o un c o m p o r t a =
m i e n t o m e t a b õ l i c o d i f e r e n t e según que se e n c u e n tre a i s l a d a o a d h e r i d a al o v o c i t o . En este ul=
timo caso se o b s e r v o que las m a c r o m o l é c u l a s
r e c i e n t e m e n t e s i n t e t i z a d a s son t r a n s f e r i d a s al
o v o c i t o . En la p r e s e n t e c o m u n i c a c i o n c o n f i r m a =
mos m e d i a n t e técnicas a u t o r r a d i o g r á f i c a s que la
v e s i c u l a g e r m i n a l de los o v o c i t o s es muy a c t i v a
en la s í n t e s i s de RNA e s p e c i a l m e n t e en los
e s t á d i o s más j o v e n e s . Por otra parte e n c o n t r a m o s
que las c é l u l a s f o l i c u l a r e s son t a m b i é n muy
a c t i v a s en la s í n t e s i s de e s t a s m a c r o m o l é c u l a s
d u r a n t e todo el p r o c e s o de o v o g e n e s i s . M e d i a n t e
e x p e r i m e n t o s de pulso y chase se o b s e r v a trans=
ferencia de m a t e r i a l r a d i o a c t i v o desde Ias cé=
lulas f o l i c u l a r e s al o v o c i t o en c r e c i m i e n t o .
Este p a s a j e p r e s e n t a c a r a c t e r í s t i c a s d i s t i n t a s
al o b s e r v a d o en los o v o c i t o s t o t a l m e n t e creci=
d o s , p r o b a b l e m e n t e d e b i d o a la a u s ê n c i a total o
p a r c i a l de la c u b i e r t a v i t e l i n a .
ACTJVWAV MICROSOMAL HEPATICA VE 0CT0V0U VECUS TRATAVOS
CON FENOBARBITAL.
[Hepatic
micAoiomal
activity
of
Octodon
Vcgui
with phenobaAbital
treatment].
Gaule,
C , Vega, P. y Vet VillaA
E.
VepaAtamento
de Bioquímica,
Facultaa^
de Medicina,
UniveA
iidad
de Chile.
~
Experimentalmente
ie ha compnobado
que el Octodon
Vegui
(OP.), un caviowoi(,o
chileno,
poiee
una capacidad
detoxi
cante micAoiomal
iupeAion
a la iota
WistaA.
Ve
acuendo~
a eito,
patece
intenesante
evaluoA
la capacidad
de
indue
dan
del iiitema
miowiomal
hepdtico
[oxidaiai
de (,un
~
ciân mixta,
UVVGA ttianiienasai)
de eitoi
animalei.
Se eitudia
el electa
de la adminístnaciõn
de
&enobaribital,
en nelación
al metabolismo
oxidativo
in vifw
de la
teitoitetona,
nafataleno,
aminopiAina
y monJZna;
además
la actividad
de conjugacidn
con UVVGA de la monîna
y
poAanWioienol.
En todoi
elloi
ie utiliza
0V.
inducidoi
y confwlei;
pata testoitenona
adicionalmente
ie
emplean
iotas
WistaA inducidoi
y
controlei.
En loi animalei
contAolei,
la cantidad
de pnoteina
mioio
iomal
y el contenido
de cit.
P-450 total
es mayon en 0V~
y la ijnduccidn
del contenido
de cit.
P-450 es mayoi
enla
iota
WistaA.
En el metabolismo
de la testoitenona
ie obieAvan
di(,eAencMu
en la pnoducciân
de andnoitenediona
y
2 a , 16a
y 7a hidAoxiteitoiteAona
enXAe 0V. y
WistaA
contAolei.
Al compaAaA 0V. contAolei
con.inducidoi,
ie obietva
en
eitoi
últimoi
aumento del contenido
de cit.
P-450 y de
la pnoteina
micAoiomal.
Sin embaAgo, la capacidad
oxida
tiva
no expeAimenta
vaníaciân,
con exception
de la
tei-~
toiteAona
cuyo metabolismo
ie obieAva
diiminuido
mientAas
que el de la monîna
aumenta moderadamente.
La
conjugation
con UVPGA, en OP. inducido,
no muesfia
vaniatiõn
pa
na el poAanitAolenol,
como iustnato,
mientAas
que la mon
faina ie apnecia
una inhibición
iignifaicativa.
~
Se nelacionan
loi leiultadoi
obtenidoi
con el
fenômeno
de nesistentia
a dnogas pnesentado
pon este
cavíomonto.
Pnoyecto
N° 8-/526-8634. PI8 UniveAsidad
de
Chile.
Pnoyecto
«025 C0NÍCVT.
ESTÚDIOS 30ERE UNA MUTANTE DE FHIZOBIUM MELILOTI
QUE INDUCE LA FORMACION DE PSEUDONODULES INACTIVOS
EN ALFALFA. (Studies on a Rhlzoblum melllotl nutant
that elicits pseudonodule formation In alfalfa). R.
Geremla, A^_ Zorreguleta,
Cavalgnae and R. Ugalcie".
Instituto de Investigaciones Bioquímicas, Fundaoion
Campomar, F.C.E. y N., Universidad de Buenos Aires,
CONICET, Buenos Aires, Argentina.
The presence of exopolysaccharlde and ^ 1 - 2 gluoan in the CRT 21S mutant of
mellloti was
studied. This strain was obtained by growing
melllotl QRt at 37.5~C. It elicits pseudonodule
formation in alfalfa roots and produces twice nr>re
exopolysaccharlde than the parental strain. The
sugar, pyruvic acid and acetyl content Is the same
in
the
exopolysaccharlde
obtained
from
both
strains.
p l - 2 gluoan is not present in cells or in the
culture supernatant fluid of the nutant, but the
parental strain accumulates It normally. Further
studies demonstrate that the Isolated internal
membranes of GKT 21S could not synthesize
pl-2
glucan due to the lack of the 235 kD protein intermediate. In addition, the nutant was non-motile
because it has no flagella. This phenotype is Identical to that of the chv B mutants of A ^ tumefaelens, moreover GOT 21S strain harbouring a plasmld
containing the A;_ tumefaclens chv B region synthesized the glucan. Thus, the genetic defect of this
strain seems to be the same that the A. tumefaclens
chv B mutants. Characteristics of the f> 1-2 glucan
synthesized by the complemented mutant will be
reported.
TRANSFERENCIA PASIVA DE NEURONITIS POR HIPERSENSIBILIDAD
(NPH) MEDIANTE SOBRENADANTES DE CÉLULAS INMUNES.(Passive
transfer of Hypersensitivity Pneumonitis with immune
cell supernatants). Gimpel.S., Miranda,D-,Fernandez,E.,
Vega,E., Zelaya,J. y Quezada.A.
Lab. de Inmunología. Deptos. de Cs. Básicas y Med. Experimental, Fac. de Med. Div. Sur. Universidad de Chile.
La participaciôn de hipersensibilidad celular en un
modelo de NHP en ratas, ha sido sugerida por la reproduc
ción de lesiones mediante transferencia pasiva de célu las inmunes y por activaciõn de células pulmonares, detectada en alteraciones citomorfológicas. Para estudiar
el papel de mediadores d e hipersensibilidad en la gene sis de estas lesiones, se transfirieron sobrenadantes
dei cultivo de linfocitos de sangre periférica ÍLSP) y
de células broncoalveolares (CBA) inmunes a receptores
normales por via intratraqueal, realizando morfometría
de Ias lesiones y estúdio ultraestructural dei tejido
pulmonar. Como controles se transfirieron sobrenadantes
de LSP y de CBA d e ratas no inmunizadas- Las lesiones
pulmonares inducidas por sobrenadantes de LSP inmunes
fueron significativamente mayores que los controles.
Con sobrenadantes de CBA no hubo diferencias . Al igual
que en el modelo, la ultraestructura de neumocitos II
demostro câmbios morfológicos consistentes con activa cíôn celular. La transferencia pasiva de sobrenadantes
inmunes ha inducido lesiones pulmonares y fenômenos de
activaciõn en células no inflamatorias. Las lesiones
observadas en los controles pueden atribuirse a la participaciôn de otros mediadores.
R207
METABOLISMO DE RADICALES DEL OXIGENO EN TRYPANOSOMA
CRUZI. (Metabolism of oxygen radicals in Trypanosoma
cruzi). Giulivi, C., Turrens, J.F. y Boveris, A.
Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas. (UBACONICET) Facultad de Farmácia y Bioquímica, Universidad
de Buenos Aires
La deficiência para metabolizar O2 y #2^2*
intermediários de la reducciõn parcial del O2, como resultado de
la ausência de catalasa y dei bajo contenido de superõxido dismutasa, hacen del T. cruzi un excelente sistema para el estúdio dei metabolismo de estas espécies.
La adiciôn de aminotriazol no tuvo efecto sobre la quimioluminiscencia (QL) espontânea de epimastigotes de T.
cruzi (70 + 10 cps/mg proteína) de acuerdo con la ausen_
cia de catalasa; el dietilditiocarbamato produjo un aumento de 4 veces de la QL entre 2 a 3 mM y la concentra
ciõn necesaria para el 50% de la estimulación de la OL
(C50) fue del orden dei
de la superõxido dismutasa
(1,40 m M ) ; el CNK produjo un aumento de 7 a 10 veces
la QL requiriendo una C50 similar al
de la superõxido dismutasa (0,35 m M ) ; la iodoacetamida aumenta la QL
en 3 a 4 veces con una C5Q de 10 pM como consecuencia
de la disminuciõn dei glutatiõn reducido. Las medidas
de la QL y de Ias actividades enzimáticas demostraron
que Ias alteraciones de Ias concentraciones del estado
estacionario de 02 y H2O2 en el espacio citosólico-peroxisomal son las responsables de los aumentos de la
emisiôn de luz, ya que Ias drogas utilizadas no fueron
capaces de alcanzar el espacio mitocondrial. La medida
de la QL demostro ser altamente sensible comparada con
la acumulación de malondialdehído (producto terminal de
la cadena lipoperoxidativa) y resultõ coincidente con
las modulaciones de Ias concentraciones de Ias espécies
derivadas del 0..
Proyecto M.1904-8633 DIB Universidad de Chile.
EFECTO IN VIVO E IN VITRO D E LA A C T H SOBRE
LA BIOSINTESIS D E LOS ÁCIDOS G R A S O S POLINOSATURADOS
ADRENALES
Y
HEPATICOS. (In vivo and
In vitro effect of A C T H on adrenal and liver biosynthesis
of polyunsaturated fatty acids). G6mez D u m m . l.N.T.de.
Mandon. E.C.. Marra, C A . y Alaniz, M.J.T.de.
(INIBIOLP),
CONICET-UNLP,
Facultad
de
Ciências
Médicas, Universidad Nac.de La Plata, La Plata, Argentina.
Los microsomas suprarrenales y hepfiticos de rata
poseen una activa £6 desaturasa para los ácidos llnoleico
y oi -linolênico y una A 5 desaturasa para el ãcido
eicosa-8,11,14-trlenoico. La administraciõn de adrenalina
al animal entero produce una significativa disminuciõn
de la biosfntesis de los ácidos polinosaturados y promueve
la liberacion de ACTH. En vista de estos datos, el
propósito de este trabajo es estudiar in vivo e in
vitro la acción de la A C T H sobre la biosfntesis de
los ácidos grasos poli nos at ura dos en la glândula suprarrenal
y en el hígado. La administraciõn de A C T H a ratas
intactas produce una disminuciõn en la desaturaclõn
de los ácidos I-14C linoleico a
^-linolênico, 1-I4C
of-linolénico
a
oct adeca-6,9,12,15-tetraenoico
y
1- U C
eicosa-8,ll,14-trienolco
a
araquidónico en microsomas
suprarrenales y hepáticos. Las células adrenocorticales
aisladas y los hepatocitos aislados tratados con A C T H
muestran una disminuciõn de la incorporaciõn y de
Ia desaturaclõn del ácido eicosa-8,Il14-trienolco agregado
al medio de incubaciõn. La adición de A C T H al medio
de
incubaciõn
de
células
adrenocorticales
aisladas
de ratas no tratadas produce una Inhibición de la
biosTntesis
del
ácido
araquidónico. Estos
resultados
son mimetizados por el dibutlril A M P cíclico. Se postula
que el efecto de la A C T H sobre la biosTntesis dei
ácido araquidónico podría producirse a través de un
aumento de los niveles intracelulares de A M P cíclico.
t
FACTOR DE CRECIMIENTO EPIDÉRMICO INHIBE ACTIVIDAD
SECRETORA INDUCIDA POR F0RSK0LIN EN GLÂNDULAS GÁSTRICAS DE RATA.
(EGF inhibits forskolin-induced
secretion in rat gastric g l a n d s ) . Gonzalez, A.,
Reinicke, K. F a c . de Medicina y Fac- de Ciências
Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.
El forskolin, un diterpeno activador no-hormonal
de la enzima adenilato-ciclasa, fue capaz de aumentar varias veces loa niveles intracitoplàsmicos de
AMPc en Ias glândulas gástricas de estômagos de r a ta, y de estimular la secreción gástrica de HC1 y
de pepsinógeno en ratas in vivo. Este efecto secretorio no fue inhibido por atropina, metiamida ni por
ablación quirúrgica dei antro, en cambio, fue inhibi
do efectivamente por EGF. Sin embargo, esta hormona no altero el incremento de la sintesis de AMPc
inducida por forskolin en glândulas gástricas aisla
das.
Como era de esperar por reportes prévios, el EGF
también provoco una inhibición de la secreción gástrica de HC1 y de pepsinógeno evocada por estímulos
tales como histamine, pentagastrina y colinérgicos.
En todas Ias circunstancias estudiadas la respuesta
secretoria a los diferentes estímulos fue detectada
en ambas secreciones casi simultaneamente, lo cual
refleja un funcionamiento de Ias células oxínticas
y zimógenas altamente acoplado en la rata.
Los resultados que presentamos aqui apoyan la h i pótesis dei rol dei AMPc como meneajero intracelular
en el proceso secretorio de estas células. Sugie ren, además, que el EGF interfiere con el mecanismo
de acoplamiento estimulo-secreción gástrica en etapas posteriores a las que involucran a los receptores de los secretagogos en la membrana plasmatics y
a los sistemas generadores de AMPc.
R 208
NETflEOLIIACIOK BACTERIANA DE C0HPUEST05 DIHERICOS ÍODELO DE LI6NMA. (Bacterial
aetabolisa of diaeric hqnin-aodel coipounds). 6onzalez.B.. Merino.A. y
Qlave.L. Laboratório de Bioquieua. Departaaento de Biologia Celular.
Facultad de Ciências Biológicas. Pontifícia Universidad Católica de Chile.
LA lignina, junto A la celulosa y heiicelulosa, es un coiponente
fundamental de las estrueturas vegetales. Esta aolecula es un polliero
coiplejo, aaorfo e insoluble foraado por aonoaeros fenilpropanoicos unidos por
distintos tipos de enlace. Estas características confieren A la lignina una
estructura auy estable y difícil de degradar. En la naturaleza la
biodegradaciòn de la lignina es un proceso oxidativo lento llevado a cabo
principalmente por bongos. Se ha deaostrado recienteiente que un hongo, el
Phanerochaete cnrysoiporjii, posee una ligninasa que cataliza la ruptura de
algunos enlaces interaonoaèricos. En contraste, la accibn que Ias bactérias
tienen sobre la lignina es eenos conocida. Por otra parte, para estudiar la
biodegradacion de lignina es necesaria la utilization de coepuestos aodelo
coio aonòeeros, dtieros, etc. Estos oltiios poseen enlaces típicos de la
lignina, coeo arilglicerol-'-arileter l»-(M) y 1,2-diarilpropano (*-l).
En este trabajo se presenta un estúdio licrobiològico y bioqullico de la
•etabohzacion bacteriana de coepuestos ndelo de lignina. Se aislaron de
suelos cercanos a una industria de la aadera, cepas bacterianas capaces de
utilizar diversos aodelos de lignina coio bnica fuente de carbono y energia.
Se Ias dasifico parcialiente y se detereinb la capacidad de crecer en Mdelos
distintos de los utilizados en su aislaiiento, aidièndose la turbidez alxiea
alcanzada por el cultivo en el estado estacionario. Se seleccionaron cepas de
buen crecieiento en dos dleeros: guaiacilglicerol-'-guaiacileter (»-0-4> y
anisoina IM1. Se confeccionaron con ellas curvas de crecieiento en dlaero y
se deterainb, por espectroscopla UV y HPLC, la (orticibn de interiediarios
producidos por la ruptura dei enlace interaonoeerico. En esta presentacion se
describen taabién estúdios in vitro, que deauestran que en un extracto
preparado a partir de una cepa bacteriana, existen enziaas que catalizan
reacciones de aodificacibn y ruptura de coapuestos diaericos. Se ha
identificado la presencia de una deshidrogenasa dependiente de NAD* que
aodifica el grado de oxidacion del carbono alfa de estos dileros. Un anàiisis
preliainar indica que en el extracto existe, adeais, una actividad que
cataliza la ruptura dei enlace interaonoaerico.
Financiado por: D1UC y CELULOSA ARAUCO V COUSTITUCIUN
ANTICUERPOS POLICLONALES CONTRA PROTEÍNAS DE MEMBRANA DE
GRANULOS ^ r E U R 0 S E C R E T 0 R I 0 S (Polyclonal antibodies against
membrane proteins of neurosecretory granules).
Gonzalez, C.B.; Caarsi, C E . ; Berríos, O.T. Instituto
de Fisiología, Universidad Austral de Chile.
INDUCCIÓN DE SÍNTESIS DE DNA VIA RECEPTOR BETA ADRENERGICS) EN PAROTIDA DE RATON (induction of DNA synthesis via B-adrenergic receptor in r i n u s e parotid).
Gonzalez Burgos, M.J, y LSpez Soils, R.O. Depto. de
Biologia Celular y Genética, Facultad de Medicina,
Universidad de Chile.
Isoproterenol, agonista beta adrenérgico, induce secreciõn, síntesis de DNA y crecimiento celular
en glândula parôtida de rat6n. El mecanismo molecular involucrudo en la inducción de secreciõn incluye
al sistema receptor beta adrenérgico-cAMP. Sin embar
go, la inducción de síntesis de DNA ba sido correlacionada con la deaialilaci6n de componentes de la
membrana plasmática de células acinares y no con el
incremento en los niveles de cAMF. Con el fin de establecer si la via conducente a síntesis de DNA se
inicia en el receptor beta adrenérgico, se estúdio
mediante el bloqueo con propranolol la eventual relación entre receptor beta adrenérgico, desialilaci&n
de la membrana plasmática y replicaci&n dei DNA nuclear. Los resultados muestran que propranolol bloquea competitivamente la inducci&n de síntesis de
DNA y que atin cuando existe una fracción de ácido
siálico de la membrana plasmática que es siempre removida cuando se induce síntesis de DNA, su remoci&n
es independiente de la intensidad de la respuesta.
Estos resultados sugieren que la sínte3i3 de DNA requiere de la mediaci6n dei receptor beta adrenérgico
y que la desialilaoi6n de la membrana plasmática es
un proceso necesario pero no suficiente para la inducción de síntesis de DNA.
(Proyectos D.I.B. B-2366/8113 y Fondo Nacional de
Ciências).
OLIGOMERIZACION DE LA PEP CARBOXILASA DE
MAIZ INDUCIDA POR NaCl. (Oligomerization of maize
PEP carboxilase induced by NaCl). Gonzalez. D.H., Wagner. R.. Podesta. F.E. y Andreo. C.S..
Centro de Estúdios Fotosintêticos y Bioquímicos (CONICET, F.M. Lillo, Universidad Nacional de Rosário) SuiEl transporte, liberacion y degradación del material
pacha 531, Rosário, Argentina.
neurosecretorio implica irrteracciones altamente especíSe estúdio el efecto de NaCl sobre la actividad y la
ficas de la membrana del gránulo neurosecretorio (GNS)
estructura cuaternaria de la fosfoenolpiruvato carboxilasa
con otras estrueturas subcelulares. El estúdio de la es- de hojas de maiz.
tructura de la membrana podría dar información sobre esLa enzima disuelta en Tris-CIH 50 m M fue sometida
tas interacciones y su regulación. Una aproximación a es_
a un tratamiento con 200 m M NaCl, y su estructura cuate problema es la generaciõn de anticuerpos contra proternaria estudiada por filtraclõn en gel mediante cromateínas de la membrana dei GNS. En el presente trabajo se
tografía líquida de alta presiôn. A pH 7 se observo una
purificarem GNS los cuales fueron lisados y Ias membrar8pida transiciõn de la forma tetramérica nativa hacia
nasrepurificadaspor ultracentrifugación. Como marcador
la dlmêrica; mientras que a pH 8 tanto el dfmero como
de membrana se uso citecromo bnp^,, el cual es una proteí
el monómero fueron obtenidos, aunque el proceso fue mãs
na integral de la membrana dei GNS. Se obtuvo una fraclento. La disociacíón observada fue dependiente de la
ción altamente enriquecida en citocromo b . , que al mi
concentración de enzima, aumentando su grado con la
croscopio electrónico mòstrS vesículas sin contenido
diluciõn de la carboxilasa.
electrodenso. Electroforesis en geles mostro en esta frac
La actividad de la enzima también fue afectada por
ción 25 a 30 proteínas de pesos moleculares entre 150 K
a 25K. Anticuerpos generados contra un par de 120K dal- NaCl en forma dependiente dei tiempo, disminuyendo
tanto
por preincubación con la sal como por el agregado
ton tifieron por iximunccitoqvrímica, selectivamente el sis
de NaCl al medio de reaccl&n. Se observe una respuesta
tema hipotálamo neurohipofisiario, tanto en mamíferos co
parcial y rápida a pH 7, mientras que a pH 8 se Hegõ
mo vertebrados inferiores. Nitrocelulosa conteniendo Ias
a valores muy bajos de actividad luego de un tratamiento
proteínas de membrana de grâhulos, los cuales habían siprolongado. Cuando se ensayó el efecto de NaCl sobre
do purificados en ausência de inhibidores de la proteoli
la PEP carboxilasa en presencia de todos los sustratos,
sis, mostro bandas inmunoreactivas de menor peso molecuse observo una protección dependiente de la concentralar que aquella contra los cuales se gênero el anticuerción de PEP.
po. Cuando los GNS y membranas fueron purificados en pre
El activador glucosa-6-fosfato protegia contra la calda
sencia de inhibidores se observo la inmunoreacción en el
de actividad, pero no se observaron câmbios en la senpar de 120 K desapareciendo la reacción en bandas de mesibilidad
a este efector.
nor peso molecular. Estos resultados sugieren que los
GNS tienen proteínas específicas a este sistema y que
estas estân ampliamente distribuídas en la escala filoge
nética. Por su sensibilidad a enzimas, algunas de estas
proteínas estarían expuestas al lado citoplasmático de
la membrana del granule
Financiado por proyecto S-83-44 DIUACH.
5 R
R209
C O L A G E N O S F I B R I L A R E S Y SU R E A C T I O N CON E L N M E T I L B E N Z O
T I A Z O L I D O N HIDRAZONA ( M B T H ) . ( F i b r i l l a r c o l l a g e n s
and
its r e a c t i o n with N-methyl benzothiazolone h y d r a z o n e ) .
Gonzalez, E . , Adarmes, H . y Guajardo, R. Departamento
de C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s a n i m a l e s , F a c u l t a d d e C i ê n c i a s
V e t e r i n á r i a s P e c u á r i a s , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
El r e a c t i v o N-Metil b e n z o t i a z o l i d o n hidrazona (MBTH),
e s p e c í f i c o p a r a g r u p o s a l d e h i d o s , s e h a u s a d o p a r a desa^
r r o l l a r una r e a c c i ó n de t i n c i ó n d e l c o l á g e n o , molécula
que posee e s t o s g r u p o s q u í m i c o s l i b r e s o f o r m a n d o e n t r e lazos intra o intermoleculares.
En t i n c i o n e s de t e j i d o s
c o n g e l a d o s s e ha o b s e r v a d o una a s o c i a c i ó n e n t r e c o l o r y
t i p o g e n é t i c o de c o l á g e n o , dada p r o b a b l e m e n t e p o r d i f e rentes estructuras reaccionantes.
Como u n a a p r o x i m a c i ó n
al e s c l a r e c i m i e n t o de e s t a s e s t r u c t u r a s se e s t u d i a
Ia
reacción con colágenos e x t r a í d o s .
PIRUVATO QUINASA
DE
LEVADURA;
ROL
DE
UN
RESÍDUO D E LISINA ANALIZADO POR
MUTAGENESIS
SITIO-ESPECIFICA.<
Yeast
piruvate
kinase:
r o l e of a l y s i n e a n a l y z e d
by
site-speci-fic
mutagenesis) . BpnzâUvz.
E-.
Gomez ,
I. ,
Imarai,
M. , b u i x e , V.
y
Venegas,
A.
Labor atorio
de
Bioquímica,
Facultad
de
Cienc ias Biológicas,
Universidad
Católica
de
Chile.
La piruvato quinas*
çataliza
etapa
c l a v e d e la v i a g l i c o l i t i c a :
la
conversion
d e P E P en p i r u v a t o y d e A D P en A T P .
Numerosa
evidencia
serial a
la
parti cipación esencial de una
lisina
especifica
en el s i t i o d e u n i ó n d e
nucleótido
de
Ias
p í r u v a t o qui n a s a ai s 1 a d a s
de
museu1o
(tipo
Mi).
La
comparación
de
la
estructura
p r i m a r i a d e la e n z i m a d e
levadura
con
las
determinadas para varias enzimas
tipo
M»,
s u g i e r e n un rol a n á l o g o p a r a L y s ' * ' d e
Ia
piruvato quínasa de levadura (YPK).
La
aplicaciôn
de
la
metodologia
de
mutagenesis
si ti o-especi f i c a
por
oligonucleotides
sintéticos,
conjuntamente
con
m a n i p u l a c i o n e s in vitro del g e n q u e c o d i f i c a
para YPK, nos ha permitido obtener
mutantes
p a r a e s t a e n z i m a , en l o s q u e L y s
ha sido
r e e m p l a z a d a por G l u . L e u o A r g .
En e x t r a c t o s c r u d o s d e c e p a s m u t a n t e s , la
actividad
de
YPK
corresponde
a
aproxim a d a m e n t e u n 2 0 % d e la d e t e c t a d a e n la
cepa
c o n t r o l . Tal d i s m i n u c i õ n en la a c t i v i d a d
no
e s d e b i d a a u n a m o d i f i c a c i ó n d e la r e s p u e s t a
d e 1 a s e n z i m ã s ntutadas al e f e c t o r a l o s t é r i c o
f ructosa-1,6-bifosfato.
Las mutantes de YPK m e n c i o n a d a s presentan
una
alteración
en
su
comportamiento
cromatográf ico,
la
que
se
puede
correlacionar
con
la
drasticidad
de
la
modi-ficación í n t r o d u c i d a
en
la
estructura
pr i mar ia
de
YPK.
Las
enz i m a s
han
si d o
purificadas y
se
han
determinado
algunos
parâmetros cinéticos tales como
So.a
para
P E P y A D P , c o e f i c i e n t e d e Hi 11 <n„j\
activaciòn
por
fructosa-1,ó-bifosfato.
Los
valores obtenidos para Ias mutantes de
YPK,
n o son s i g n i f i c a t i v a m e n t e d i f e r e n t e s
a
los
d e t e r m i n a d o s p a r a la e n z i m a t i p o s i l v e s t r e .
L o s r e s u l t a d o s o b t e n i d o s en e s t e
estúdio
estab1ecen que
Lys ^
no
es
un
residuo
e s e n c i a l p a r a la a c t i v i d a d c a t a l í t i c a d e Y P K
y a b r e u n p a r é n t e s i s d e d u d a a c e r c a d e lo y a
determinado para Ias enzimas tipo M .
33
3 3 < r
Se r e a l i z a r o n
e x t r a c c i o n e s de l o s colágenos t i p o I ,
I I y I I I de p i e i f e t a l y c a r t l l a g o nasal b o v i n o , o b t e niéndose los l i o f i l i z a d o s correspondientes; estos
se
c a r a c t e r i z a r o n como c o l á g e n o s p o r d e t e r m i n a c i o n e s
de
grupos aldehidos, p r o l i n a , h i d r o x i p r o l i n a y e l e c t r o f o r e s i s e n p o l i a c r i l a m i d a - S D S , c o n y s i n r e d u c t o r D T T . Se
r e a l i z o l a r e a c c i ó n d e t i n c i ó n c o n MBTH y e l c o l o r f u e
registrado
fotográficamente.
Se o b s e r v a u n a r e a c c i ó n c o n u n p r o d u c t o d e c o l o r c a r a c t e r í s t i c o en l o s l i o f i l i z a d o s de colágenos de d i s t i n to t i p o g e n é t i c o , c a r a c t e r i z a d o s así por su comportamien
to e l e c t r o f o r é t i c o .
E l e s t ú d i o e s p e c t r o f o t o m é t r i c o po^s
t e r i o r d e e s t a r e a c c i ó n , a s í como l a s e p a r a c i ó n d e l o s
d i s t i n t o s componentes c o l o r e a d o s , p e r m i t i r á una c a r a c t e
r i z a c i ó n de I a s e s t r u c t u r a s que c o n s t i t u y e n l o s entrela^
zos de l o s colágenos de d i s t i n t o t i p o .
3 3
t
Financiamiento
P r o y e c t o A-2027, D I B .
CARACTERIZACIÓN DE LA RESPUESTA INMUNE CONTRA ESPERMATQZOIDES EN INDIVÍDUOS VASECTOMIZADOS
(Characterization of iamune response against spermatozoa in
vasectomized aen) Fernanda Gonzalez v Luz P. Blanco
Laboratório de Inaunologia, Departamento de Biologia
Celular, Facultad de Ciências Biológicas, Pontifícia
(Patrocínio: Maria I. Becker)
Uno de los probleaas fundamentals en el estúdio de
la infertilidad huaana con causa inaunalògica, es el
desconociaiento de la estructura y función de la
aayoria de los antígenos espermáticos.
Los esperaatozoides, noraalaente, se encuentran secuestrados dei
sistema inmune por la barrera heaatotesticular, la
cual es rota en el procedimiento quirúrgico usado en
la vasectomia, esto libera esperaatozoides que estiaulan la producción de anticuerpos contra ellos.
En este trabajo heaos utilizada coao herrasienta
para identificar y caracterizar auto-antlgenos espermàticos suero de pacientes vasectoaizados.
El análisis por inaunof1uorescencia indirecta
(IFI)
en esperaatozoides, con muestras de suero provenientes
de indivíduos vasectoaizados con data quirúrgica de
hasta 3 meses indico, que el 281 dei total de sueros
probados son positivos por este critério y además
presentan mayoritariaaente un patron de fluorescencia
en la region acrosomal y/o ecuatorial
de los esper• atoz oi des.
Con el propósito de identificar el bianco molecular
de dichos anticuerpos, Ias muestras de suero consideradas positivas por IFI, se ensayaron por la técnica
de Uestern
Blotting
contra polipéptidas presentes en
un extracto de proteínas de membrana de espermatozoides. Se obsevaron bandas inmunoreactivas entre 30
y 90 K, y además, se observaron bandas inespecíficas.
En resumen aproximadamente un tercio de los indivíduos de hasta três meses después de vasectoaizados
desarrollan anticuerpos contra sus propios esperaatozoides; ademas, la metodologia empleada
permite
observar diferencias individuales cualitativas y cuantitativas en la respuesta anti-espermática.
Financiado por Grant IDRC 3-P-83-1006-01.
Financiado
Fondecyt.
po
DIUC
66/84,
PNUD-UNE5CÜ
y
INVESTIGACTON DE LA ACTIVIDAD TRIPANOCIDA EN PRODUCTOS
NATURALES DE LA FLORA AUTOCTONA DEL NORTE CHILENO (Invés
tigation of trypanocidal activity in natural products of
the autochthonous flora of the North of Chile). Gonzalez,
J., Sagua, H., Estrada, M., Pereira, J., Araya, J., Mora
les, G. y Loyola, L. Grupo de Parasitología y Laboratorio de Productos Naturales. Universidad de Antofagasta
(Patrocínio: M. Cikutovic)
Actualmente, se acepta que Trypanosoma cruzi. agente causal de la enfermedad de Chagas, puede ser transmitido mediante transfusion sangüínea, oonstituyendo este
el principal mecanismo de infección en sectores urbanos
de áreas endêmicas. Por ello, es necesario valorar antiguas y nuevas drogas que aparte de su efecto tripanoci
da, reunan otras características que avalen su uso en la
quimioprofilaxis de esta zoonosis, como ser de bajo costo, solubles, no presentar efectos adversos al ser trans
fundidas y no provocar efectos deletereos
en la serie
roja.
Con el propósito de evaluar "in vitro", la actividad tripanocida de compuestos orgânicos aislados de espécies de la flora autáctona dei norte chileno, se presenta un "screening" practicado sobre 25 compuestos, los
cuales fueron valorados según el método descrito por Cover y Gutteridge (1982).
Una marcada actividad tripanocida, se observo" en
dos derivados de Bacharis boliviensis, PN-3 y PN-58 y en
un derivado de Parastrephia cuadrangularis, Pq-B5A. Efe£
to tripanocida moderado pudo constatarse en dos derivados de Senecio graveolens, SG-IV y SG-V; dos derivados de
Chersedoma jodopappa, Chj-A y Chj-B, y en derivados de
Bacharis boliviensis BB7-12; Molinum crasifolium, MC-2;
Senecio rosmarinus, SR-I y Chondrus canaliculatum, Chcl.
Leve actividad tripanocida se observo en un derivado de Senecio phylloleptus, SP-I.
La evantual posibilidad que derivados orgânicos ve
getales, se utilicen en la quimioprofilaxis de la enfermedad de Chagas post-transfusional, es aqui discutida.
R210
FOSFORILACION DE PROTEÍNAS Y SECRECIÕN DE HC1.
(Protein phosphorylation and HC1 secretion).
Gonzalez, P.R. Lab. de Bioquímica, Universidad de
Santiago de Chile y Lab. de Histología, Pontifícia
ATRIBUTOS DEMOGRÁFICOS DE MIGRANTES EN AKDDON OLIVACEUS
Y ORYZOMYS i^GICAUDATUS EN ZONA BOSCOSA DEL SUR DE CHI
LE. (Dispersers demographic attributes of A. olivaceus
and 0. longicaudatus populations in southern Chilean to
restj. Gonzalez, L.A., Murfla, R. yjofré, C. Instituto"
de Ecologia y Evolución, Facultad de Ciências, Universi
dad Austral de Chile.
La fosforilación es uno de los mecanismos regulatorios de la función de proteínas incluyendo aquellas que forman parte del citoesqueleto.
Durante la secreciõn del HC1, en las células oxin
ticas, los câmbios topográficos que ocurren en el
polo apical, dependen de modulares que, a cierto
plazo modifican las ínterrelacionee de proteínas ci
toesqueléticas. Hemos implementado un sistema in vitro que nos permite estudiar si la fosforilaci3n de
proteínas es una instância primaria en la regulación de este fenômeno.
Glândulas o células de estômago de rata son homogeneizadas con tampón de gelificación. 1 mL dei sobrenadante de 1 0 0 . 0 0 0 g por 60 min. es incubado con
500 microCuries de ATP-gamma P ( ? 2 ) en presencia de
2uL de membranas suspendidas en el mismo tampón.
Luego de incubar a 37 grados C se forma un gel que
puede recogerse por centrifugación. Este g e l , opera
cionalmente, está definido como citoesqueleto.
Una proteína de ^3 KDa, muy similar a la actina
es fosforilada por una quinasa endógena de Ias membranas de Ias células gástricas. Esta quinasa, al
parecer, es típica de estas membranas ya que en experimentos de reconstitución heterólogos usando mem
branas de hepatocitos o de cérebro, no se fosforila
la actina; sin embargo Ias membranas de glândula
fosforilan actina exógena. Hemos caracterizado esta
proteína por electroforesis, HPLC e inmunodetección.
La proteína de hj> KDa fosforilada, residiria en la
fracción de membrana.
La migración es un fenômeno de importância en la mi cro y macro distribución geográfica de las espécies y
de fuertes consecuencias demográficas en la poblaciôn.
El presente estúdio pretende establecer las relacio nes entre la densidad y el número de migrantes y los atributos demográficos de residentes y migrantes en po blaciones de A. olivaceus y 0. longicaudatus.
El área de estúdio se locaTiza en el Bosque Experimen
tal San Martin, Valdivia, Chile entre Marzo de 1982 y
Abril de 1984. El disefio comprendió un reticulo central
(1.2 has, 12x12 trampas Sheiman) y 12 reticulos de dispersion (0.09 has de 4x4 trampas) agrupados de a tres
en linea en direccifin de los 4 puntos cardinales.
0. lcmgicaudatus muestra una asociación significativa
entre la densidad y el número de migrantes en su ciclo
anual, en cambio A. olivaceus sólo en algunas fases del
ciclo.
En A. olivaceus los migrantes presentaron un mayor pe
so tanto en machos como hembras con predomínio de ma -"
clios en 1982; en cambio en 1983 no hubieron diferencias
significativas de peso con los residentes, y la proporciõn de sexos fue cercana a 1:1. En 0. longicaudatus se
observo un mayor peso en las hembras inmigTantes y ma chos emigrantes sin diferencia en la proporciõn de
sexos en el afio 1982; en cambio en 1983 se observa una
mayor proporciõn de machos, no mostrándose diferencias
significativas en el peso.
Financiado por DICYT, DIUC y apoyo especial de
Merck Química Chilena S.L.
(Financiado por Proyecto RS-82-17 de la D.I.D., U.A.CH.)
RAICES PROTEIFORMES EN LA FLORA CHILENA.(Proteold roots of the Chilean flora). Grlnberqs.
J_., Valenzuela, E_., Contreras. p_. y Ramirez.
C. Institutos dê" Microbiologla
y Botânica,
Universidad Austral de Chile, Valdivia.
Las raíces protelformes son una proliferaci6n anormal de ralei lias en Proteiceas, que
aumentan así su superfície de absorción. El
presente trabajo da cuenta de estúdios realizados en material chileno, tendientes a delimitar el fenômeno y dilucldar su origen.
Se prospectaron
Ias espécies chilenas de
Proteiceas, cuantlficando la frecuencia y el
tamano de los nódulos. Se realizaron estúdios
morfológicos e hlstológicos en raíces protelformes de Gevulna avellana, cuya germinación
fue previamente investigada.
Este fenômeno está presente en todas Ias
espécies de Proteáceas chilenas, aunque no
siempre en todos los Indivíduos. El tamano y
la forma de los nódulos es un caracter específico. Sin perlearpo y en condiciones estériles se logro más de un 90% de germinación
de Gevulna avellana. En Ias plantulas la formacion de nódulos se inicia una vez que han
caído los cotiledónes
y se hace abundante
después de los 140 días. Se constato una enorme variacion en el número de nódulos, que
depende de la naturaleza dei sustrato y de la
edad de la planta. El tamano de los nódulos y
su dlsposición difieren
conslderablemente en
indivíduos
juveniles y adultos de la misma
espécie. Los nódulos presentan una vida activa corta y después de envejecer se disgregan
perdlendo su capacidad de aglomerar suelo.
Proyectos: FONDECYT NO 1038/85 y
DID-UACH NO S-85-27.
S I N G L E CHANNEL F L U C T U A T I O N S FROM BONE C E L L S : E V I D E N C E F O R
Na , Ca
AND K P E R M E A B I L I T I E S .
G u g q i n o , S a n d r a , E. and
S a c k t o r , B. N a t i o n a l I n s t i t u t e on A g i n g , N I H , B a l t i m o r e
M a r y l a n d 21221), U . S . A . ( P a t r o c í n i o : E l i s a M a r u s i c ) .
The i n f l u e n c e p f hormones on t h e e l e c t r o c o n d u c t i v e
p r o p e r t i e s a n d Ca
m e t a b o l i s m o f bone has o n l y r e c e n t l y
r e c e i v e d a t t e n t i o n but the ion channels which a r e respons i b l e f o r c e l l c o n d u c t a n c e s r e m a i n t o be i n v e s t i g a t e d .
The patch-clamp technique was used t o c h a r a c t e r i z e t h e
channels present in an o s t e o b l a s t - l i k e c e l l c u l t u r e , the
c l o n a l r a t o s t e o s a r c o m a c e l l l i n e R ) S 1 7 / 2 . T h e most
f r e q u e n t l y o c c u r r i n g c h a n n e l i n e x c i s e d p a t c h e s f r o m R0S
c e l l s i s a Na c o n d u c t i n g c h a n n e l w i t h a s i n g l e c h a n n e l
c o n d u c t a n c e o f J 2 pS w h i c h d e c r e a s e s t o ^ p S i n t h e
p r e s e n c e o f Ca
a n d Mg , i o n s w h i c h a l s o a l t e r c h a n n e l
k i n e t i c s . D 8 8 8 - v e r a p a m i I , 1 uM, d e c r e a s e s t h e f r a c t i o n a l
o p e n t i m e . A l a r g e r c h a n n e l o f 30 pS c o n d u c t i n g N a a n d
K e q u a l l y well is observed less f r e q u e n t l y and probably
a c c o u n t s f o r t h e 35 pS i n w a r d c u r r e n t s o b s e r v e d i n c e l l a t t a c h e d patches w i t h K R i n g e r in t h e p i p e t t e . Under
t h e s e c o n d i t i o n s , a n d i n w a r d c u r r e n t o f 51 p S i s a l s o
observed. However, channels which a r e solely K s e l e c t i v e
are not observed in e x c i s e d patches suggesting i n a c t i v a t i o n u p o n e x c i s i o n . We c o n c l u d e t h a t R0S c e l l s d i s p l a y
channels w h i c h can c o n t r i b u t e t o monovalent c a t i o n conduç
t a n c e s . I n a d d i t i o n , R0S c e l l s p o s s e s s a s m a l l c h a n n e l
resembling the C a
channels found in e x c i t a b l e t i s s u e s .
Future studies w i l l determine if these channels are invo^
v e d i n h o r m o n a l l y r e g u l a t e d Ca
homeostasis.
+
2 +
+
+
+
+
+
2 +
FOSFOLÍPIDOS OEL SISTEMA RETINO-TECTAL DEL POLLO EN RELACIÔN A LA ESTIMULACION LUMINOSA.(Changes in chicken
retina and optic tectum phospholipids by light stimulation) . Guido.M.E. y Caputto.B.L.
Dto.Química Biológica, CIQUIBIC, Fac. de Ciências Químicas, CONICET, Universidad Nac. Cordoba, Cordoba, Arg.
La luz incrementa la sintesis in vivo de los gangliosidos del sistema retino-tectal del polio. Se estúdio la
marcación de fosfolípidos (FL) de dicho sistema en animales en luz (L) y oscuridad (0) luego de inyectar P
intraocularmente. Se encontraron los siguientes resultados 5 h posteriores a la inyección: FL de células ganglionares de retina (cpm/mg prot):L:6067(32) ; 0:4017
(34) , A%51,p <0,001.Frac. ácido soluble ( 32p- cursores)
(cpm/mg prot) L:594762(30) ; 0 : 6 1 2 5 9 9 ( 3 5 ) A n . s .
FL de tectum contralateral (cpm/tectum): L:1555(35); 0:
1005(32),A%55,p <0,001. No se encontraron diferencias
significativas en la marcación en L y 0 de los FL del
tectum ipsilateral al ojo inyectado ni en la fraccion
ãcido soluble del tectum de los 2 grupos de animales.
Para saber si las diferencias encontradas son debidas a
un aumento en la radiactividad específica de los precursores en las células ganglionares,se estúdio la captación
de los mismos a 30 min en L y 0. No se encontraron diferencias ni en los FL ni en los precursores (FL: L:858(3?)
0:834(29) ; fracción ácido soluble:L:176199(38);0:171480
(38). Las diferencias L-0 a 5 h no estarían determinadas
por câmbios tempranos en los precursores. Para saber si
la marcación de FL en tectum llega por transporte axonal
se determino la relaciôn: FL tectum contralateral - FL
tectum ipsilateral/FL tectum ipsilateral en animales en
L y 0 encontrãndose: L:5,l(33); 0:2,8(32),A 280,p <0,001
indicando que la marcación de los FL proviene fundamentalmente de la retina. Se está estudiando si todos los
FL son responsables de los câmbios observados o solo alguno de ellos.
3 2
pre
R211
ACERCA DE LAS RELACIONES ENTRE VELOCIDAD,
LONGITUD Y TIEMPO EN BIOLOGIA (On the relationships between velocity, length and
time in biology).GQnther. B. Departamento
de Ciências Fisiológicas, Facultad de
Ciências Biológicas y de Recursos Naturales, Universidad de Concepción.
El espacio y el tiempo "absolutos" (Newton). así como el espacio-tiempo
cuadridimensional (Einstein), se contraponen al
concepto de espacio y de tiempo "relacionales" (Leibniz). que es aplicable a los seres vivos.
En el presente análisis se postula, que
en Biologia la velocidad (v-L/T) es el parâmetro principal, y que longltud (L-vT) y
tiempo (T»L/v) son variables "relacionales" en función de la velocidad ( v ) . En la
selección natural priman las velocidades
relacionales -entre predador y presa- como
factor de supervivencia. El caracter "relacionai" de las tres variables (L,T,v)
también es aplicable a la métrica espaciotemporal de cada ser vivo, la que a su vez
es función de la nasa (M) o del peso (W)
corporal. El análisis empírico de estas relaciones se puede expresar por medio de la
ecuación alométrica de Huxley (Y»aW"),
siendo Y= variable espaclo-temporal; a» parâmetro empírico, b- exponente, que se
puede calcular a priori para cada función,
de acuerdo a tres teorias de similitud biológica (Arch. Biol. Med. Exper. 19: 67-75,
1986), siendo el exponente aloméTrico (b)
para un "período biológico" igual a 1/6
para la similitud gravitacional, t»l/4 para
la electrodinamica, y b-1/2 para la cuántica.
N U C L E O P A R T I C U I A S O B T E N I D A S POR L A A C C I O N DE N U C L E A S A S
SOBRE NÚCLEOS DE GAMETOS Y EMBRIONES DE E R I Z O DE MAR
Tz&tapjgu6
nígeA.
(Nucleoparticles
derived
from
nucleases digestion o f nuclei
from
gametes
and
e m b r y o s o f t h e s e a u r c h i n TztAapj QU& nígíi).
Gutier r e z , S . , I n o s t r o z a , P . , I m s c h e n e t z k y , M . , Departamen_
t o de B i o l o g i a M o l e c u l a r , F a c u l t a d de C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n , C h i l e .
E F E C T O S H E M 0 D I N A M I C 0 S DE L A I N F U S I O N R A P I O A DE SUERO F I S I O L Ó G I C O EN T A P 0 N A M I E N T 0 C A R D Í A C O E X P E R I M E N T A L . ( H e m o dynamic e f f e c t s o f r a p i d i n t r a v e n o u s s a l i n e i n f u s i o n on
experimental cardiac tamponade), G y h r a . A . ,
Torres,P.,
P r i e t o . L . , B r a v o , M . C . Departamento de C i r u g i a , F a c u l t a d
de M e d i c i n a y L a b o r a t ó r i o C i r u g i a E x p e r i m e n t a l , D e p a r t a mento de C i ê n c i a s F i s i o l ó g i c a s , F a c u l t a d de C i ê n c i a s B i o
l ó g i c a s y R e c u r s o s N a t u r a l e s . U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n .
D u r a n t e l o s p r i m e r o s e s t a d o s de e m b r i o g é n e s i s
de
e r i z o de m a r o c u r r e n câmbios e n l a p o b l a c i o n de n u c l e o s o m a s , q u e h a n s i d o p u e s t o s e n e v i d e n c i a p o r diges_
t i õ n con nucleasa micrccocal, observándose d i f e r e n t e s
t a m a n o s d e f r a g m e n t o s d e ADN c o m p r o m e t i d o s e n n u c l e o p a r t i c u l a s en l o s d i f e r e n t e s e s t a d o s de d e s a r r o l l ó .
Con e l o b j e t o d e e s t u d i a r l o s e f e c t o s h e m o d i n á m i c o s d e
la i n f u s i o n r á p i d a de s u e r o f i s i o l ó g i c o ( S F ) i n t r a v e n o s o
( I / V ) , s e i n y e c t a r o n 1500 c c d e S F e n 3 g r u p o s d e p e r r o s
( 2 0 - 3 0 k g s ) e n 40 m i n u t o s .
G r u p o A ( n = 4 ) p e r r o s n o r m a l e s , c o n t r o l ; G r u p o B ( n = 4 ) tapcj
n a d o s c o n S F i n t r a p e r i c á r d i c o a u n a p r e s i ó n d e 9 mmHg;
Grupo C(n=9) taponamiento producido p o r herida e s t a n d a H
zada e n v e n t r i c u l o d e r e c h o . Se m o n i t o r i z a r o n e n f o r m a
continua durante la infusion, los siguientes parâmetros:
P r e s i ó n venosa c e n t r a l ( P V T ) , P r e s i ó n a r t e r i a l media
(PAM), Presión pericárdica ( P P )y Débito Cardíaco ( D C ) .
En l o s G r u p o s A y B e l c o m p o r t a m i e n t o h e m o d i n á m i c o e s
r e l a t i v a m e n t e s i m i l a r , comprobándose un i n c r e m e n t o s i g n i f i c a t i v o d e l a P V C , PAM y DC ( p < 0 , 0 1 ) , l a P P n o v a r i o
s i g n i f i c a t i v a m e n t e de sus v a l o r e s i n i c i a l e s . En e l G r u po C e n c a m b i o , DC y PAM n o a u m e n t a n e n f o r m a s i g n i f i c a t i v a ( p > 0 , 0 5 ) y s o l o l o h a c e n l a P V C y PP d e 1 1 . 6 + 2 , 9 a
2 5 , 6 + 2 , 2 cmH20 ( p < 0 , 0 0 1 ) y d e 8 , 5 + 3 , 2 a 1 8 + 3 , 1 mmHg
( p < 0 , 0 1 ) r e s p e c t i v a m e n t e . Un p e r r o m u e r e d u r a n t e l a i n f u s i o n c o n 750 c c d e S F I / V a l o s 25 m i n u t o s .
La i n f u s i o n r á p i d a de volumen en t a p o n a m i e n t o c a r d í a c o
p r o d u c i d o p o r h e r i d a v e n t r i c u l a r no mejora
significativamente l a hemodinamia, pudiendo a g r a v a r e l c u a d r o de
t a p o n a m i e n t o , l o que puede t r a d u c i r s e en p a r o c a r d í a c o
por incremento exagerado de l a p r e s i ó n p e r i c á r d i c a .
Con e l o b j e t o d e o b t e n e r e v i d e n c i a s s o b r e I a s n u c l e o p a r t í c u l a s p r e s e n t e s e n l o s d i f e r e n t e s e s t a d o s em
b r i o n a r i o s , s e d i g i r i ó n ú c l e o s de e s p e r m a t o z o i d e s , o v o
citos y larvas pluteus con nucleasas micrococal y e n dóoena r e s p e c t i v a m e n t e , l o s p r o d u c t o s
de
digestion
f u e r o n a n a l i z a d o s en geles de a g a r o s a .
Se a i s l ó
Ias
p a r t í c u l a s n u c l e o p r o t e i c a s de o v o c i t o s y de e s p e r m a t o
z o i d e s i n v e s t i g á n d o s e I a s p r o t e í n a s que I a s conforman
por e l e c t r o f o r e s i s en g e l e s de p o l i a c r i l a m i d a / S D S .
Los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s i n d i c a n aue I a s n u c l e o p a r
t í c u l a s p r e s e n t e s en o v o c i t o s d i f i e r e n de I a s e x i s t e n _
tes en l a r v a s pluteus y espermatozoides, tanto en su
m i g r a c i ó n e l e c t r o f o r é t i c a como e n I a s p r o t e í n a s
que
Ias conforman.
En espermatozoides se observaron I a s
c i n c o h i s t o n a s fundamental es en cambio en o v o c i t o s se
d e t e c t o l a p r e s e n c i a de s i e t e f r a c c i o n e s
proteicas
que c o m i g r a n e n g e l e s PAG/SOS c o n l a s s i e t e v a r i a n t e s
t i p o CS o b t e n i d a s d e c r o m a t i n a p o r e x t r a c c i ó n d i r e c ta.
Proyectos:
20.31.06 D l U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n
1082/85 FONDECYT
F i n a n c i a m i e n t o P r o y e c t o N° 2 1 . 0 1 . 0 3 .
P r o y e c t o D i r e c c i ó n de I n v e s t i g a c i õ n . U n i v e r s i d a d de C .
R212
ACCION TERATOGENA DEL DDT EN EL DESARROLLO EMBRIONÁRIO
DE Caudlverbera caudlverbera (LINNE, 1758)(ANURA.LEPTODACTYLIDAE). (Teratogenic action of DDT on the develop
ment of C. caudiverbera (Linné*, 1758).(Anura, Leptodactylidae). Hermosilla, I,
Departamento de
Biologia Molecular. Facultad de Ciências Biológicas y
de Recursos Naturales. Universidad de Concepción.
El DDT es un insecticida organoclorado de metabolismo muy lento, de elevada liposolubilidad y alta persistência en el ambiente. Estas características lo con
vierten en un compuesto altamente tóxico. La propiedad
de evaporarse directamente desde la plantas o del suelo para ser transportado a grandes distancias, determina un radio de acci6n extraordinariamente amplio, que
puede contaminar el aire, el agua y los alimentos, razón por la cual la perturbación de ecosistemas puede
ser notablemente danina y perdurable.
A la vista de estos antecedentes y motivados por la
discusión mundial sobre la convivência o no dei uso dei
DDT y otros organoclorados, y dado que el DDT es el úni
co organoclorado que está prohibido en Chile a contar
de Enero de 1985, en el presente trabajo se evalüa el
efecto embriotõxico dei DDT en estados embrionales de
C_. caudiverbera, anfibio endêmico chileno. Los resulta
dos indican que el DDT en proporción a Ias concentrado
nes ensayadas de 0,1; 1; 5 y 10 ppm, es altamente em-~
briotóxico en estados de Placa Neural a CirculaciÓn Cau
dal.
Se analiza la modalidad de malformaciones aparecidas en el tiempo a Ias concentraciones de DDT ensayadas
y se establece el efecto del insecticida sobre el creci
miento promedio de los embriones respecto a los controles .
Proyecto 20.31,13
DirecciÓn de Investigación, Universidad de Concepción.
TOXICIDAD DEL ETIL-PARATICN Y CAiCARIL SOHE ESTÁDIOS TEUWHDS DEL
DESAHHÜLLO DEL ERT2D DE MAR. (Toxicity of etriil-paratrdon and carbaryl on early stages of the development of aea urchin). Hernandez,D.A,
Lcntxirtto.R.J., Ferrari,L. y Tortorelli.M.C. Departamento de Cb. Bási
cas, Universidad Nacicnal de Lujan y Departamento de Cs. Biológicas,
universidad de Buenos Aires.
La restriocion an el uso de ccnpuestos clorados para el control de
plagas ha conducido a la aplicación intensiva de fosforados y carbamatos, siendo el etíl-paration (ETP) y el carbaril (CARS) loa más
frecuentemente usados. Este trabajo forma parte de una serie de estu
dice de los efectos de insecticidas aobre los estádios mas sensibles
del desarrollo de crsBnismoa acuáticos de consumo humano, tales como
el erizo de mar Peeudechinue negellanicug (Philippi).
Los animales de prueba fueron oolectados en el canal Beagle (Argenti
na). Las gametas fueron obtenidas por el método del CLK. Se realizo
un emayo estático de toxicidad, hasta alcanzar el estádio pluteus
(1*1). SI; pixjburon 5 conccntruclonu do cuii plijguicldu puro {5.G, 10,
18, 32 y 56 ppb). Se efectuaron simultaheemente ensayos control con
acetcna (1-5 ppb). Todos loa ensayos se realizaron en ocndicicnes
controladas de temperatura, salinidad y pH y por duplicado. La CE50
su ck? termino por el método probit.
SE obutavó un murcudo efocto tóxico du usUw pluyulciduu. Pura el
ETP las CES0 de los estádios blastula (Bl) y gastrula (Gs) fueron
similares (38.8 y 34.6 ppb), mientras que para el estádio prion (Pr)
f\ie sljyiiricutlvanento manor (2.8 ppb). En el caso dal CARS los esij.línt hi y (1. lueron maa mtulbhti (6.3 y 10.6 ppb) quo Pr y PI ,
darti lu U-J'JD 1U) aL^üflcaLLvenânTâ heôt (h&Gta 15/ pub).Esta dite
rencia en la respuesta a los plaguicidas ensayados prcbablemente este oBociada a la penetración y los proceeos de blotrensformación ,
rcluciunudos con el sis tana da citocroir><>xidusas.
ECOTOXICOLOGIA DE HEHBICIDAS: TOXICIDAD AGUDA DE UN FOR
MULADO DE PARAQUAT SOBRE JUVENILES DE BAGRE SAPO. {Ecotaxi
cologyof herbicides: Acute toxicity of fontulated paraquat on Soutti
Anerican catfish). Hané»dBZ,D.A., Ferrari, L. TortorelliJI.C. y
r
Salibiéh, A. Departamento de Ciências Básicas, Ihiversidad Nacional
de Lujáh, Consejo Nacicnal de Investi^ciones Científicas y Técnicas
y Comisión de Investigaciones Científicas de la Prov. de Bs.As.
El paraquat (PQ) es uno de los herbicidas de amplio espectro que más
se utilizan, tanto en agroecosistemas como en ambientes
acuáticos.
El objetivo de este estúdio fue la evaluación de la toxicidad de un formulado líquido de PQ ("Osaquat") con
27.6% de principio activo sobre juveniles de 10 días
de bagre sapo (BS), teleósteo dulceacuícola cuyo cultivo semi-intensivo se propicia actualmente en la Argentina. Se realizo un ensayo semi-estático de toxicidad
aguda de 120 hs de duración, probando Ias siguientes
concentraciones: 2.2, 4.4, 8.8 y 11.0 ppm. Simultaneamente se realizaron ensayos control. Todos los ensayos
se efectuaron por duplicado a 17— 1 °C, en agua dulce
artificial. Los valores de CL50 fueron estimados con el
método probit. El formulado de PQ mostro ser tóxico para los juveniles de Bs en concentraciones entre 4.4 y
7.3 ppm. Los resultados mostraron que la toxicidad dei
PQ seguiria un modelo similar en el período 48-96 hs;
a Ias 120 hs se registro un descenso importante en la
CL50 (4.4 p p m ) . Considerando Ias dosis de aplicación
recomendadas para ambientes acuáticos, el tiempo de
disipación y las CL50 haliadas, se considera que Ias
aplicaciones intensivas dei PQ podrían constituir un
riesgo ecotoxicológico para poblaciones naturales no
destinatárias, tales como el bagre sapo.
C A R A C T E R IZ A C I O N P A R C I A L .DEL S I T I O ^ R E ^ . U N I O N
D E ADP DE LA PIRUVATO QUINASA DE LEVADURA.
(
Partial
characterization
of
the
ADP
binding
site
of
Yeast
piruvate
kinase> .
H i n r i c h « « n , P. y E y x a g u i r r » , J.
.Laboratório
de
Bioqulalca,
f-acultSd
de Ciências
Biológicas,
Universidad
Católica
de
Chile.
La
pi r u v a t o
qui n a s a
c a t a i í za
la
t r a n s f e r e n c i a d e un g r u p o f o s f a t o
desde
el
f o s f o - e n o i p i r u v a t o h a s t a el A D P ,
generando
A T P y p i r u v a t o , e t a p a r e g u l a t o r ia
clave
en
la v i a g l i c o l i t i c a .
E s t ú d i o s p r é v i o s en
nuestro
laboratório
h a n s u g e r i d o q u e el r e s i d u o d e L y s
d e la
enzima de levadura estaria
relacionado
çon
la u n i o n del A D P . E n e s t e t r a b a j o s e
amplia
el
análisis
de
este
tipo
de»
resíduos
m e d i a n t e el u s o d e un r e a c t i v o
bifuncional,
s i n t e t i z a d o en el l a b o r a t ó r i o
a
partir
de
fosfato
de
piridoxal
(PLP),
el
bis-PLP.
E s t o s c o m p u e s t o s p r e s e n t a n la v e n t a j a d e ser
capaces de generar reacciones
inter
o
in—
tramaieculares,
lo
que
puede
aportar
i m p o r t a n t e i rifar m a c i ó n e s t r u c t u r a l .
El P L P y
sus
derivados
produjeron
una
i n a c t i v a c i ó n r á p i d a y e s t a b l e , r e v e r t i b l e al
agregar l i s i n a - H C l al m e d i o ,
reversion
que
no se o b s e r v o
al
estabilizar
la
base
de
S c h i f f i n t e r m e d i á r i a c o n un a g e n t e r e d u c t p r ,
como
NaBr-U.
El
ADP-Mg"*"
protegi o
casi
t o t a l m e n t e a la e n z i m a a e
la
inactivación,
n o asi el P E P . L a e n c i m a ,
inactivada
hasta
un 1 5 % d e
actividad
residual,
mostro
una
esteguiometria de marcación de
2
moles
de
bi s-PLP/mol
de
tetrámero,
y
en
estas
c o n d i c i o n e s nu se observaron
reacciones
de
entrecruzamiento de subunidades. Además,
el
bi s-PLF
se
unió
sói o
por
uno
de
sus
extremos. Estos
datos,
mas
el
efecto
de
otros d e r i v a d o s de p i r i d o x a l , con
distintos
tamarío y carg^,
s u g i e r e n q u e la i n a c t i v a c i ó n
o b s e r v a d a s e d e b e a un " b l o q u e o "
dei
sitio
activo, dado conjuntamente
por
ímpedimento
estérico
y
repulsion
electrostática.
F i n a l m e n t e , la c a r a c t e r i z a c i ó n d e » u n p é p t i d o
p r o d u c t o dei d i g e r i d o t r í p t i c o d e la
enzima
modificada,
permi t i e r o n
concluir
que
el
residuo
Lys"
está
relacionado
con
el
s í t i o d e uni On del A D P .
Por
otra
parte,
se
determino
que
al
m o d i f i c a r un ú n i c o r e s i d u o d e
arginina,
la
e n z i ma
perdia
toda
capac i dad
catai111ca.
Esta
inactivación
se
previ n o
usando
A D P - H g * , por lo q u e s e r i a d e g r a n
interés
u b i c a r su p o s i c i ó n en la s e c u e n c i a , d e b i d o a
1 a n e c e s a r ia praxi mi dad e s p a c i al q u e deb i e r a
e x i s t i r c o n la Lys " '.
Fi n a n e i a d o por P r o y e c to D I U C 7 5 - 8 4 .
3 3 7
2
x
7 ,
2
3-3
7
R213
NIVELES TOTALES DE SUBCLASES DE IgG Y R E S I S T Ê N C I A A L A I N F B C C I O N P O R T. C R U Z I E N
EL
RATON.(IgG subclass serum level and resistance to T r y p a n o s o m a c r u z i i n f e c t i o n in m i c e ) .
H o e c k e r , G., J u r i , M . A . , A l o n s o , P. D e p a r t a mento de Biologia Celular y Genética, Fac.
Un
factor
mayor
de
resistência
contra
la i n f e c c i ó n a g u d a p o r T. c r u z i e n e l r a t ó n
e s t á l i g a d o a H-2
( T r i s c h m a n , et a l , 1 9 8 2 ;
G a j a r d o et a l . 1 9 8 3 ) . Los a n i m a l e s r e s i s t e n tes,
B10(H-2-)
y
A.SW
(H-2-),
sobreviven
60 d i a s o i n d e f i n i d a m e n t e a la
inoculación
i.p.
de
10
trypomastigotes
sanguineas.
Su
r e s p u e s t a e n a n t i c u e r p o s a n t i T. c r u z i a u m e n ta
continuamente
y
la
parasitemia
muestra
en forma concomitante una disminuciõn después
d e l p i k a los 8 d i a s p . i . E n i g u a l e s c o n d i c i o nes las c e p a s c o n g é n i c a s . s u s c e p t i b l e s c o r x e s pondientes,
BlO.Br
(H-2-) o A.CA
(H-2-)
y
los ^ r a t o n e s
susceptibles
no c o n g é n i c o s
C3H
( H - 2 — ) , muestran un nivel total de IgG menores
y a u m e n t o s c o n t í n u o s d e la p a r a s i t e m i a h a s t a
su m u e r t e e n t r e 14 y 20 d i a s p . i .
Los r a t o n e s
B 1 0 y A . SW t i e n e n c a n t i d a d e s
significativam e n t e m a y o r e s d e I g G 2 b que sus p a r e s c o n g é nicos
susceptibles
BlO.Br
y A.CA
respectivamente . C3H
también
tiene
un
nivel
bajo
de IgG2b.
Trabajo
apoyado
por
WHO/TDR ID 820599.
Grant
UNDP/World
Bank/
B a l a n c e de e n e r g i a de un b o s q u e a d u l t o de P l nus r a d i a t a . (The h e a t b a l a n c e of a a d u l t Pinus r a d i a t a f o r e s t ) . H u b e r , A . , O y a r z u n , C ,
I n s t i t u t o de G e o c i e n c i a s , F a c u l t a d de C i ê n c i a s , U n i v e r s i d a d A u s t r a l de C h i l e .
La m a y o r p a r t e de la e n e r g i a s o l a r que l l e ga y queda en un b o s q u e (balance de r a d i a c i ó n )
se u t i l i z a en la e v a p o r a c i Ó n (flujo c a l o r calor l a t e n t e ) y el c a l e n t a m i e n t o del a i r e (flujo del c a l o r s e n s i b l e ) . C a n t i d a d e s m e n o r e s son
u t i l i z a d a s para el c a l e n t a m i e n t o del suelo y
de la c u b i e r t a v e g e t a l .
Se d e t e r m i n a p a r a 2 dfas de v e r a n o , 19, 20
e n e r o 1986, el c u r s o d i á r i o de los d i f e r e n t e s
c o m p o n e n t e s del b a l a n c e de e n e r g i a p a r a un b o s
que a d u l t o de Pinus r a d i a t a . Para ello se u t i lizo el m é t o d o de S v e r d r u p y Bowen y disponien_
do de la i n f o r m a c i ó n dei p e r f i l v e r t i c a l de la
t e m p e r a t u r a y t e n s i o n de v a p o r de agua del a i r e , p e r f i l v e r t i c a l d e la t e m p e r a t u r a dei suelo, b a l a n c e de r a d i a c i ó n y v e n t i l a c i o n p o r h o ra .
La r a d i a c i ó n r e t e n i d a p o r el b o s q u e p a r a
los 2 dtaa e s t u d i a d o s fue de 4 8 6 , 3 y 4 8 9 , 7 cal
c m ~ d l a " 1 , u t i l i z í n d o s e 286,1 cal c m "
dia"
(59%) y 308 cal c m d i a 1 (63%) p a r a el flujo
de c a l o r l a t e n t e , 180,8 cal c r a " d l a (37%),
172,9 cal c m " d i a - 1 (35%) en el flujo d e c a l o r
s e n s i b l e r e s p e c t i v a m e n t e . Por los c â m b i o s de
t e m p e r a t u r a dei suelo y de la b i o m a a a se utili^
zaron 8,2 y 6,8 cal c m " d l a "
y 11,2 y 2,2
c m " d l a ~ 1 r e s p e c t i v a m e n t e , m o n t o s que no sobre
p a s a r o n el 4% de la e n e r g i a total d i s c i p a d a .
El b o s q u e d i s i p S la m a y o r c a n t i d a d de e n e r gia a t r a v é s de loa f e n ô m e n o s e v a p o t r a n s p i r a t i
vos con m o n t o s que a l c a n z a r o n los 4,8 y 5,3
m m / d l a p a r a los dos d i a s .
2
2
- 2
2
La estreptomicina es un amino-glicôsido
q u e se h a u s a d o e n la t e r a p ê u t i c a de i n f e c c i o nes p r o v o c a d a p o r d i f e r e n t e s a g e n t e s b a c t e r i a n o s . E n a l g u n o s c a s o s se h a d e s c r i o t o l e s i o n e s
l o c a l i z a d a s e n e l S N C (por e j e m p l o l e s i ó n del
nervio acústico y dei nervio ó p t i c o ) . Aunque
se c o n o c e su m e c a n i s m o de a c c i ó n e n p r o c a r i o t e s , a n i v e l m o l e c u l a r su e f e c t o e n e u c a r i o t e s
es h a s t a e l p r e s e n t e d e s c o n o c i d o .
P a r a e n c a r a r e s t e p r o b l e m a , se m i d i õ e l e fecto d e i a n t i b i ó t i c o en la v e l o c i d a d de g l i c o s i l a c i ó n de p r o t e í n a s en c o r t e z a c e r e b r a l de
r a t a s de d i s t i n t a s e d a d e s d e n t r o d e l p r i m e r m e s
dei d e s a r r o l l ó . Se u t i l i z o e l m i c r o m é t o d o de
i n c u b a c i ó n de p a r t í c u l a s , a n t e r i o r m e n t e d e s a rrolladas en e s t ^ laboratório (PAABS-1984), us a n d o m a n o s a ( 2 - H ) c o m o p r e c u r s o r . Se o b s e r v o
una m a r c a d a i n h i b i c i ó n , d o s i s d e o e n d i e n t e , e n
Ias p a r t í c u l a s de c o r t e z a c e r e b r a l p r o v e n i e n t e
de r a t a s de 0 y 5 d í a s . E s t e e f e c t o i n h i b i t o r i o
es m e n o r e n Ias ratas m a d u r a s (30 d í a s ) . A c o n t ^ n u a c i õ n se m i d i ó la i n c o r p o r a c i õ n de l e u c i n a
( H) a o r o t e í n a . Se o b s e r v a r o n r e s u l t a d o s s i m i l a r e s a los o b t e n i d o s e n el e s t ú d i o de la
g l i c o s i l a c i ó n . A d e m ã s se m i d i õ e n a n i m a l e s de
5 y 30 d í a s e l e f e c t o de e s t e a n t i b i ó t i c o e n la
s i n t e s i s de p r o t e í n a s e n p a r t í c u l a s de c o r t e z a
c e r e b r a l y de h i g a d o . A u n q u e en el h i g a d o de 5
d í a s se o b s e r v o una c i e r t a i n h i b i c i ó n , e n e l d e
30 d í a s la s i n t e s i s de p r o t e í n a n o se ve a f e c tada.
1
2
2
1
2
Proyecto RS-83-14 Dirección
y Desarrolló.
U.A.CH.
E F E C T O DE LA E S T R E P T O M I C I N A E N L A N - G L I C O S I L A C I O N DE P R O T E Í N A S EN E L S N C . (Effect of s t r e p t o m y c i n on p r o t e i n g l y c o s y l a t i o n in the S N C ) .
I d o y a g a - V a r g a s V . , A l p e r i n M . , R o s s i S. y C a r m i n a t t i H . I n s t i t u t o de I n v e s t i g a c i o n e s B i o químicas "Fundación Campomar" Antonio Machado
151, /1405 Buenos Aires, Argentina.
1
_
de
Invéstigaciõn
EFECTO DEL FOSFATO DE PIRIDOXAL SOBRE LA ACTIVIDAD DE
LA ALA-D DE HIGADO PORCINO.L.E.Iniqo,A.H.Ferramola de
Sancovich y H.A.Sancovich.
Laboratório de Porfirinas,Opto. de Oca. Biológica,Fac.
de Cs. Exactas y Nat. U.B.A. Argentina.
La enzima 5-amino levúlico dehidrasa (ALA-D) ( E . C 4 . 2 ,
1.24) cataliza la formación de porfobilinógeno (PBG)
primer intermediário pirrólico en la biosíntesis dei
hemo, clorofilas y otros tetrapirroles.
El estúdio de la ALA-D en diferentes tejidos ha demcs
trado la intervención de residuos de amino ácidos talescomo cisteina, histidina y lisina en su mecanismo
de reacción.
En esta investigación se muestran los efectos de la
presencia dei 5"Fosfato de Piridoxal (PPy) sobre la
actividad de la ALA-D de higado porcino. Se encontro
que concentraciones de PPy superiores a 1,5 mM producen un 100% de inhibición de la actividad de la en
zima tratándose esta de una inhibición competitiva
con un Ki: 0,01 mM.
Se encontro además que la inhibición por PPy es rever
tida por eliminación dei mismo por diálisis ó pasaje
a través de una columna de Sep.C—25. Pero esta inhibición resulta permanente si previa a la diálisis, en
presencia de PPy la ALA-D es tratada con NaBH « La
presencia de PPy^gisminuyó casi totalmente la unión
estable de ALA.
C a la ALA-D cuando está mezela fue
tratada con NaBH.. Todos estos datos proveen evidencias de la presencia esencial de un residuo lisina en
la actividad de la ALA-D de higado porcino y que estaria involucrado en la formación de una base Schiff
con el sustrato, ALA.
4
R214
SIOTESIS IN VTTRO DE XANTANO. AISLACION DE OLEOMEROS.
(Xanthan gum biosynthesis, Isolation of oligomers).
IHón
de
Iannlno,
N.
y
Dankert,
M.A.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas Fundaclón Cam
pomar, Facultad de Ciências Exactas y Naturales, UBA y
CONICET, Buenos Aires, ARGENTINA.
El xantano es un exopolisaeârido (EPS) de gran interés industrial producido por Xanthomonas campestrls.
La estructura de su unidad repetitiva es la slguiente
(Jansson et. al. (1975) Carbohydr. Res. 45, 275-282).
Pyr
-£*~inic
^
1
4Glc * -
4 6
- 3
Man-íL-4GlcA ^ — 2Man-5-0 Acet
En nuestro laboratório, utilizando los respectivos
nucleótido azúcares, se ha logrado la síntesis in vitro
de este EPS, y se ha demostrado que ocurre en dos etapas (Ielpl et al. (1981) PEES Lett 130, 253-256): en la
la. el pentasacárido que constituye la unldad repetitiva se forma secuencialmente, unido a un lípldo a
través de un puente difosfato. Los restos acetil piruvato y acetato provlenen de PEP y Ac-CoA respectivamen
te y también se incorporan a este nivel (Ielpi et al.
(1981) Biochlm. Blophys. Res. Ccmnun. 102, 1400-1408
y (1982) Blochem. Internat. 6, 323-333). Todos estos
compuestos son solubles en
cloroformo-metanol-agua
1:2:0,3 (extracto 1203). En una segunda etapa la unidad
repetitiva se pollmerlza para formar el EPS que libera
al medio acuoso. Se está estudlando ahora este 2° proceso. En I d s extractos 1203 se han detectado pequenas
cantidades de compuestos de mayor tamano, presumibleniente decasacáridos difosfato-lípido. Analogamente, en
la fracción soluble en agua, por filtración por geles
se han encontrado dos grupos de compuestos. Una de alto
PM que eomprende al xantano formado; y otra de bajo PM.
En esta última fracción por cromatografía, electroforesis, filtración por geles, eliminación de acetal plruvatos, etc. se han detectado oligosaoáridos similares a
los obtenidos dei extracto 1203: la unidad repetitiva y
decasacáridos con diferente grado de piruvilaclón.
CITOQUIMICA DEL ORGANQ SUBCOMISURAL DE PERRO. (Cito
chemistry of tha dog subcommissural organ).
Irlgoln, C ; Uellejoe. J.; Rodriguez. E. Instituto de
Histologic y Patologia, Facultad de Medicina, Univerelded Austral d e Chile.
Oebido a la presencia de células secretorias
que establecen contacto con vasos sangüíneos.
Se ha inferido que: en el firgano subcomisursl ( 0 B C )
de perro,además de la secreciõn el ventrlculo hay
secrecifin a la sangre.
Ss analizfi comparativamente si material que se llbe
r a al ventrlculo y el material en contacto con va-~
sós sangüíneos. Ss splicaron tècniceB de inmunocitoqulmlcae (utilizando anticuerpos anti-Flbre ds
Rslssnsr, AFRU) y diversas lsctinas.
Los granules secretarias ventriculsres mostraron
afinidad por AFRU concentrado y diluído y por Ias
lectinss WGA, y UGA, RCA y SBA después de hidrólisis ácida; e n cambia, el material secretario dei
pala vascular mostro afinidad por AFRU concantrado
y por
la lBctlna Con
A.
Loa resultados o b t e n i d O B sugieren q u e ; l a com
posiclon dei material sscretorio vascular es ds n a turalaza proteles, similar a la secrecifin ventricular, pero al grada d e moduraclôn es diferente, sien
do fundamentalmente material sscretorio inroaduro el
que contacts con las vasos sangüíneos.
Llama extraordinariamente la atencifin el hecho que
células en le comiaura posterior cercanss al DSC,
contengan un materiel eecretorlo con características citoquímicas a hlstoqulmlcas similares el contenido e n los granules vsntrlculeraa.
Financiado por : Proyecto 5-85-39, Dir. Investigación, U.A.CH. y Grant 1/38 259 Stlftung VolkBuagsnuierk.
ANTICUERPOS HONDCLONALES C0H0 REACTIVOS DE TIPIFICACI0N SANGÜÍNEA. (Monoclonal Antibodies as huean red
blood cells typing reagents) Macarena
Iriqoven.
Andro Voikovic v Alfredo É. De loannes. Laboratório
dê Ineunologia, Departaeento Je BTologia Celular,
Facultad de Ciências Biológicas, P. Universidad Católica de Chile. Instituto de Biotecnologia BIOS CHILE.
EFECTO INHIBIDOR OE COBRE Y ARSÊNICO SOBRE EL
TRANSPORTE INTESTINAL EN RATA Y PALOMA ( I nh 1
tory effect of copper and arsenic on Intestinal transport In rat and pigeon).
I tu rrI, S•
Perj» A. , I tu rr I , S . E . y Soto. R. Depto. Cs.
Eco log Icas~ Fac. Ciências, Univ. de Chile.
Las crecientes necesidades clinicas en la tipificación de grupos sangüíneos, justifican la aplicación de los anticuerpos eonoclonales en el Banco de
Sangre. Estos, por su fácil producción en escala
industrial, alta especificidad y hoeogeneidad, presentan ventajas sobre los reactivos convencionales. Estas
características, eás la disainución en el costo de
producción, pereitirán su uso coeo reactivos de rutina
en la tipificación sangüínea.
La aplicación de los anticuerpos eonoclonales ha
permitida esclarecer, en parte, la coeplejidad y variacion de los detereinantes ABH de grupo sangüíneo en
los eritrocitos huaanos, pereitiendo distinguir Ias
diferentes cadenas oligosacáridas según su longitud y
grados de raaificación. Esta variabilidad dentro de
los grupos sangüíneos, coaplica su tipificación M e diante los anticuerpos eonoclonales, ya que, una
pequena variacion en la cadena glicosilada, puede
afectar la reactividad con el anticuerpo aonoclonal,
lo cual puede inducir a errores en la tipificación.
Para solucionar este probleaa, nuestro enfoque
ha sido estudiar la utilización de coobinaciones de
anticuerpos eonoclonales dirigidos contra diferentes
detereinantes de los antígenos de grupos sangüíneos,
los cuales se potencian dando aayor seguridad en la
tipi ficación.
Con el fin de obtener una aayor diversidad de
anticuerpos eonoclonales, se innunizaron ratones de la
cepa Balb/c con eritrocitos pertenecientes a los
grupos sangüíneos A y B. La fusion de los linfocitos
esplenicos de estos aniaales con células eieloides de
la llnea NS0/2, pereitió seleccionar anticuerpos eonoclonales por su capacidad de aglutinar eritrocitos en
foraa especifica y con alta afinidad.
Heeos logrado producir una cantidad adecuada de
anticuerpos eonoclonales para seleccionar aquellos que
reaccionan contra distintas cadenas oligosacaridas,
requisito indispensable para ser usados coeo reactivos de rutina en la tipificación sangüínea.
Evidencias experimenta 1es demuestran que la
capacidad de absorcIÓn del Intestino se reslen
te en presencia de tones metálicos, dependlendo de la concentracI on de ellos. El presente
trabajo se reallz6 con el objeto de estudiar
el efecto de Cu (II) y As (ill) sobre el trans
porte de azúcares (glucose) y aminoãcidos (tlrostne) en el epftello Intestinal de rata y pa_
loma tanto in vitKO como in vivo.
Sacos de Intestino (yeyuno) evertido de rata
y paloma, sacrificados por decapItacI fin, se In
cubaron a 37°y 4l°C respectivamente en un baffo
con solución Krebs-HenseleIt (K-H). En experimentos in vivo, trozos de Intestino de animates anestesiados con nembutal (3,5mg/100g peso) se perfundleron (O.lmt/min) con sol. K-H.
En ambos casos la sol.K-H contenta D-glucosa
(5mM) y L-tlroslna (2mH). El transporte de estos dos compuestos se evaluó determinando el
aumento de ellos en el Interior del saco al ca
bo de 60 minutos o ia dlsmfnucfân de concentra
ciõn en el líquido de perfusion durante 1.5 ho_
ra por períodos de 30 minutos.
Los resultados demuestran que As y Cu (10~
10"*) Inhiben el transporte de glucosa y tirosins en experimentos in vitKO en rata y paloma,
aumentando el efecto Inhibidor con el aumento
de concentración de estos tones. En experimentos de perfusion se observa un efecto similar,
siendo el efecto de As mayor que el producfdo
por cobre.
Financiado por Proyecto DIB N-2447 u.de Chile
t
$
R215
FORMACIÓN Y REGEKERAGION D E ESFEROPLASTOS D E
C.THERMOCELLUM (SPHEROPLASTS FORMATION AND
REGENERATION O F C.THERMOCELLUM). IVANIER S. Y
MÉNDEZ B.
GENÉTICA BACTERIANA, FACULTAD DE CS.EXACTAA Y
NATURALES-UBA- CIUDAD UNIVERSITÁRIA PABI I ,
1428 BUENOS AIRES, ARGENTINA.
ROL
DE COMPONENTES
DE MEHBRANA C E L U L A R
EN E L
DESARROLLÓ
INICIAL
DE MAMÍFEROS ( R o l e
oi
cell
membrane
components
in
eariy
mammalian
deveiopment;.
Izquierdo,
L,;
Becier,
M . I . ; Fernandez, M.S.;
bepiiiveda,
M . S . ; Ahumada,
A . k F ' e y , R.
Fac.
C i ê n c i a s , U . de C h i l e .
CLOSTRIDIUM THERMOCELLUM ES U N MICROORGANISMO
ANAEROBIO CELULOLLTICO, FORMADOR DE ESPORAS Y
TERMÓFILO QUE DEGRADA CELULOSA A ETANOL, ÁCIDO
ACÉTICO, ÁCIDO LÁCTICO, C O P Y H P . DADO QUE L A
CELULOSA E S L A PRINCIPAL COMPONENTE DE l a B I O
M A S A S E C U N D A R I A , Y P O R V E N T A J A S Q U E D E R I V A N *"
DE su CARACTER TERMÓFILO, ESTOS MICROORGANISMOS PRESENTAN INTERÉS BIOTECNOLÓGICO. S U ACTI
VIDAD BIOLÓGICA PUEDE MEJORARSE MEDIANTE L A
APLICACIÓN DE TÉCNICAS GENÉTICAS.
EN CEPA C.THERMOCELLUM ATCC 27405 HEMOS DESARROLLADO CONDICIONES DE FORMACIÓN Y REGENERACIÓN DE ESFEROPLASTOS, HERRAMIENTAS
FUNDAMENTAL E S P A R A D E S A R R O L L A R S I S T E M A S D E R E C O M B I N A CIÓN MEDIANTE MANIPULACIONES GENÉTICAS.
CULTIVOS EXPONENCIALES DE C.THERMOCELLUM SE
TRATARON CON liSOZIMA Y GLICINA E N MEDIO HIPER
T Ô N I C O . E L C O N T R O L D E I a s C É L U L A S N O E S F E R O - ~*
PLASTIZADAS S E VERIFICO P O R RESISTÊNCIA AL
S H O C K OSRAÓTICO Y P O R O B S E R V A C I Ó N M I C R O S C Ó P I C A ,
SIENDO L A EFICIÊNCIA DE U N 9 9 .
L A REGENERACIÓN S E LLEVÓ A CABO E N MEDIO COMPLETO SUPLEMENTADO C O N DISTINTOS NUTRIENTES Y
RAFINOSA COMO ESTABILIZADOR. DIFERENTES EXPERIMENTOS INDICARON UNA FRECUENCIA DE REGENERA
CIÓN APROXIMADA AL 5 .
Hemos e s t u d i a d o e l r o l cie c o m p o n e n t e s de
lã
membrana
celular
en e l d e s a r r o l l ó d e i r a t D n
in
situ
e in
vitro,
desde
el
comienzo
de
la
s e g m e n t a c i ó n h a s t a l a i m p i a n t a c í ó n , por medio d e l
desordenõdii e n t e
de
los
bl a s t o m e r o s ,
la
d e m a s t r a c i e n c i t o q u í m i c a de a c t i v i d a d e n z i m á t i c a y
la
distribuciôn
de a n t i g e n o s
de
superfície
detectados
con a n t i c u e r p o s
monoc1onales.
E l d e s o r d e n de l o s b l a s t o m e r o s s e r e g u l a
sin
restablecimiento
dei orden o r i g i n a l
aunque
con
mantención
dei
tiempo
de
compactacion
y
b1astu1ación.
Este
p r o c e s o de r e g u l a c i ó n
depende
de c o n t a c t o s c e l u l a r e s q u e i n d u c e n
reg;onalíiacíOn
de l a membrana c o n a l g u n a s p r o p i e d a d e s de c a p p i n g .
Los
4 antigenos e s t u d i a d o s se observan
desde
el
oocito
preovu1 a t o r i o
hasta
el
blastocisto
i m p l a n t a d o i n v i t r a y n i n g u n o de l o s
monocionales
correspondientes
i n t e r t i e r e con í a compactacion o
b1astu1acion.
Tres
antigenos
se
encuentran
preferentemente
en masa c e l u l a r i n t e r n a y u n o s e
encuentra preferentemente
en t r o í o b l a s t o .
En
conclusion:
se r e c o n o c e n componentes
de
membrana,
cuvo
origen y distribuciôn
dependeria
dei
contacto
celular,
que s o n
agentes
o
i n d i c a d o r e s de r e g u l a c i ó n e m b r i O n i c a y a d e m a s ,
se
reconocen
componentes,
o r i g i n a d o s en e i
oocito,
que no s e m o d i í i c a n p a r e l c o n t a c t o c e l u l a r a u n q u e
se r e d i s t r i b u y e n en i ^ d i f e r e n c i a c i ó n c e l u l a r .
F i n a n c i a d o p o r U . de C h i l e \DlB'i y F o n d e c y t .
3E HAN ESTABLECIDO A S Í I A S BASES NECESARLAS
PARA LOGRAR EL DESARROLLÓ DE RECOMBINANTES G E NÉTICOS DE C.THERMOCELLUM MEDIANTE FUSION Y
TRANSFORMACIÓN P O R PLÁSMIDOS.
A N Á L O G O S F 0 S F 0 R 0 T I 0 A T 0 S D E L ATP EN EL E S T Ú D I O
D E L M E C A N I S M O D E A C C I O N DE LA D E S C A R B O X I L A S A
D I F O S F O M E V A L O N I C A . ( P h o 3 p h o r o t h i o a t e a n a l o g s of
ATP in the m e v a l o n a t e 5 - d i p h o s p h a t e
decarboxylase r e a c t i o n ) . J a b a l q u i n t o , A.M., C a r d e m i l . E .
E. I y e n g a r , R. y F r e y , P.A. D e p t o . Q u í m i c a , F a c u l t a d de C i ê n c i a , U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de
C h i l e y D e p a r t m e n t of B i o c h e m i s t r y , U n i v e r s i t y
of W i s c o n s i n , E E . U U .
L o s f o s f o r o t i o a t o s del A T P son a n á l o g o s d e l
A T P en los c u a l e s uno de l o s o x i g e n o s no p u e n t e
de un g r u p o f o s f a t o se ha r e e m p l a z a d o p o r un
ã t o m o de a z u f r e . Si e s t e r e e m p l a z o se e f e c t ú a
en el f o s f a t o a o £ d e l A T P se p r o d u c e q u i r a l i dad en el f ó s f o r o y se da o r i g e n a un par de
diasteroisómeros.
Se d e t e r m i n o el c u r s o e s t e r e o q u í m i c o de la
r e a c c i ó n c a t a l i z a d a por la d e s c a r b o x i l a s a d if o s_
f o m e v a l õ n i c a 1 l e v a n d o a cabo la r e a c c i ó n en pr e_
sencia dei i s ó m e r o ( S p ) a d e n o s i n a - 5 ' - 0 - ( 3 - 1 7 0 2 ,
1 8 o ) - t i o t r i f o s f a t o en lugar de A T P . El a n á l i s i s
d e i t í o f o s f a t o p r o d u c i d o en la r e a c c i ó n e n z i m á tica i n d i c o que e s t e t e n i a c o n f i g u r a c i õ n R p , c o n
lo que se d e m u e s t r a que la r e a c c i ó n o c u r r e con
i n v e r s i o n de la c o n f i g u r a c i õ n en el P.
Con el o b j e t o de d e t e r m i n a r la e s t r u c t u r a
d e i c o m p l e j o M g A T P c a t a l í t i c a m e n t e a c t i v o se
e f e c t u ó una c o m p a r a c i ó n de la p r e f e r e n c i a e s t e r e o q u í m i c a por los d i a s t e r õ m e r o s de A T P a S y
A T P 3 S al ser u t i l i z a d o s c o m o s u s t r a t o s en p r e s e n c i a de M g ( I I ) y de C d ( I I ) . L o s r e s u l t a d o s in
d i c a n que el m e t a l no se une al f o s t a t o a d e i
A T P y s u g i e r e n que el s u s t r a t o es el c o m p l e j o
6-Y
b i d e n t a d o dei A T P .
F i n a n c i a d o por D I C Y T , U S A C H ,
Ciência y P N U D - C H I - 8 4 / 0 0 6 .
Fondo
Nacional
de
E S T Ú D I O A N A T O M O - H I S T O L O G I C O DEL A P A R A T O REPRO
D U C T O R F E M E N I N O DE C H O R U S G I G A N T E U S . ( A n a t o m o
h i s t o l o g i c a l study of female g e n i t a l tract of
C h o r u s g i g a n t e u s ) . J a t a m i l l o , R. , J o r q u e r a , B.
I n s t i t u t o de E m b r i o l o g i a . U n i v e r s i d a d A u s t r a l
de C h i l e .
Se e s t ú d i o la a n a t o m i a e h i s t o l o g i a del
a p a r a t o r e p r o d u c t o r f e m e n i n o (ARF) de C h o r u s
g i g a n t e us. H e m b r a s m a d u r a s e i n m a d u r a s cole ctadas en P u e r t o C l a r o (Lat. 3 9 ° 5 3 ' S u r ; L o n g .
7 3 * 2 2 ' O e s t e ) , V a l d i v i a , fueron p r o c e s a d a s p a ra m i c r o s c o p i a o p t i c a .
El A R F p r e s e n t a un o v a r i o desde el cual
se o r i g i n a el o v i d u c t o renal ( O R ) , r e v e s t i d o
por un e p i t e l i o c o l u m n a r s i m p l e . Al a l c a n z a r
el techo del m a n t o el OR se e n s a n c h a y recibe
el n o m b r e de o v i d u c t o p a l e a l ( O P ) , el cual se
d i v i d e en una poreió*n g l a n d u l a r (PG) y o t r a
porcifin a g l a n d u l a r ( P A ) . La PG p r e s e n t a doa
r e g i o n e s : la g l â n d u l a de la alb umina (epi t e lio de c é l u l a s c o l u m n a r e s ) y la g l â n d u l a de
la c á p s u l a ( e p i t e l i o de c é l u l a s c u n e i f o r m e s y
cluster de células g l a n d u l a r e s ) . La PA e s t á
f o r m a d a por el r e c e p t á c u l o s e m i n a l ( e p i t e l i o
simple g l a n d u l a r ) , bolsa copulatriz (epitelio
c u b i c o s i m p l e ) y poro g e n i t a l ( e p i t e l i o cilin
drico c i l i a d o ) .
E s t o s r e s u l t a d o s son s i m i l a r e s
servados en: Colus stimpsoni, Colus
y N u c e l l a l a p i l l u s , con d i f e r e n c i a s
t r u c t u r a h i s t o l õ g i c a de la g l â n d u l a
bumins.
a los o b gracilis
en la e s de la a l -
Se d i s c u t e el lugar de f e r t i l i z a c i ó n en
r e l a c i ô n con la f o r m a c i ó n de las e n v o l t u r a s
del h u e v o .
Financiado
por
D.l.D. UACH. Proyecto
1-85-44.
R216
ESTÚDIO CIWETICO DEL CONTENIDO HEPATICO Y BILIAR DE
GLUTATIONA Y MALONILDIALDEIDO EN RATAS TRATADAS CON
LINDANO. (Time course study of hepatic and biliary
glutathione and malondialdehyde levels following ac^te
lindane administration to ra£s). Junqueira, V.B.C.,
Barros, S.B.M. , Simizu, K. , Van Halsema, L.
y
Videla, L.h.'"** Universidade de S. Paulo, Instituto de
Química* Faculdade de Ciências Farmacêuticas , S.£a_u_lo
Brasil. Universidad de Chile, Facultad de Medicina
,
Santiago, Chile.
Lindane, a pesticide metabolized in the liver endoplasmic reticulum, given ip to rats, increases the
level of hepatic lipid peroxidation (LP) which seems to
be dependent on O 2 formation-cy tochrome-P^Q linked.
An increase of hepatic and biliary GSSGcontent was also
observed. The aim of this work is to determine whether
early changes in the liver and biliary GSH/GSSG content
or other factors, as the induction of cytochrome-P^Q
and the related production of oxidative species, are
responsible for the high levels of LP. Fed rats
received a single ip dose of 60 mg of lindane/Kg b.w.
and were used from 1 to 24 h after injection. LP
indexes were measured as malondialdehyde (MDA) and
glutathione estimated by conventional methods. The main
results are: (i) 1iver cytochrome-P^Q levels increase
after 6 h, whether LP increases just after 1 h of
injection; Cii) liver GSSG increases 2 h after
injection, with consequent decrease in GSH/GSSG; (iii)
biliary content and release of GSSG are markedly
decreased after 4 h injection. The results obtained
are indicative that in the early lindane intoxication
of rats, liver glutathione changes contributes more to
the oxidative stress determined by lindane, than the
other factors mentioned.
GLICOPROTEÍNAS DEL LIQUIDO OVIDUCTAL Y DESARROLLO EMBRIO
NARIO TEMPRANO. (Oviductal fluid glycoprotein and early
stages of embryonic development).- Kaltwasser, G•,
Ortiz, M.E. Laboratório de Endocrinologia, Depto. Ciências Fisiológicas, Facultad Ciências Biológicas, Pontifícia Universidad Católica de Chile.
El oviducto es la estructura en la que tienen lugar
Ias primeras etapas dei desarrollo en mamíferos, sin embargo, no han sido descritas interacciones especificas
entre oviducto y gametos o embriones. Hemos identificado mediante PAGE/SDS proteínas específicas dei líquido
oviductal de coneja después de inducir ovulación con
GnRH. Al fraccionarlo con lectinas-concanavalina-A y
aglutinina de germen de trigo- se han identificado distintas glicoproteínas. Este mismo líquido ha sido incubado con blastocistos de ratón y se ha medido la incorporación de 3-H uridina en RNA. La incorporación es
entre un 50-60% mayor cuando se usa líquido oviductal
comparado con suero dei mismo animal del que se obtuvo
el líquido oviductal. Cuando el líquido oviductal es
denaturado (65° C/30 min) no hay estimulación en la incorporación a macromoléculas. La incorporación de uridina es lineal en concentraciones de 10 ®M - 10~^M y
también con respecto al número de huevos. En el tiempo
hay una incorporación lineal durante la primera hora,
luego se estabiliza entre 2-4 horas y luego un incremento en Ias 4-8 horas siguientes que se corresponde con un
aumento en el numero de células en los blastocistos.
En ensayos preliminares hemos visto que el incremento en
la incorporación de uridina es mayor cuando se utilizan
fracciones glicoprotéicas que cuando se utiliza líquido
oviductal sin fraccionar.
-
Estos resultados sugieren que existe una interacción
de algunas proteínas dei líquido oviductal con embriones en estados tempranos dei desarrollo que no es espécie específica.
Financiado por RF 86020
C A R A C T E R I Z A C I O N Y L O C A L I Z A C I O N S U B C E L U L A R DE
LA A R G I N A S A DE H I G A D 0 DE G E N Y P T E R U S M A C U L A T U S
(C0NGRI0 N E G R O ) . ( C h a r a c t e r i z a t i o n and subce
l l u l a r l o c a t i o n of a r g i n a s e from G e n y p t e r u s ma
culat us l i v e r ) . Keg s i , E_, , A i n o l , L ^ y C a r y a J a l , N. D e p t o . B i o l o g i a M o l e c u l a r . F a c . C s .
Biol y de R e c . N a t , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n
( P a t r o c í n i o : R, G o n z a l e z ) ,
EFECTO DEL URETANO EN LA MARCACION DE GANGLI0SID0S Y
GLICOPROTEÍNAS Y SU DISTRIBUCIÓN SUBSINAPT0S0MAL EN EL
TRACT0 0PTIC0 DE P0LL0. (Effect of urethane in the
labeling of gangliosides and glycoproteins of chicken
optic tract and their subsynaptosomal distribution in
optic tectum). Kivatinitz, S. y Domowicz, M.
CIQUIBIC-Dto. Química Biológica, Fac. C. Químicas. Universidad Nacional de Cordoba. Argentina.
Se p u r i f i c o p a r c i a l m e n t e la a r g i n a s a de h i gado de G e n y p t e r u s m a c u l a t u s . P a r a e l l o , un ho
m o g e n i z a d o de h í g a d o se s o m e t i ó a f r a c c i o n a niiento con s u l f a t o de a m o n i o (0-30$ saturación)
c a l e n t a m i e n t o a 60®C en p r e s e n c i a de o r n i t i n a
y M n C l 2 i f i l t r a c i ó n en S e p h a d e x G - 2 0 0 y c r o m a t o g r a f í a de i n t e r c â m b i o iónico en c o l u m n a s de
D E A E - c e l u l o s a . La p r e p a r a c i ó n enz i m á t i c a o b t e nida p r e s e n t a un pH ó p t i m o de 9.5 y un Km de
15-20 nM p a r a a r g i n i n a ; a d e m á s es i n h i b i d a en
forma no c o m p e t i t i v a por el p r o d u c t o o r n i t i n a
y por los a m i n o ã c i d o s p r o l i n a , l e u c i n a e i s o l e u c i n a . La e n z i m a p r e s e n t a un peso m o l e c u l a r
de 1 2 0 . 0 0 0 , y el t r a t a m i e n t o con EDTA se acompafla de p e r d i d a de a c t i v i d a d y d i s o c i a c i ó n de
la e n z i m a .
El f r a c c i o n a m i e n t o s u b c e l u l a r r e v e l o que la
e n z i m a se e n c u e n t r a l o c a l i z a d a e x c l u s i v a m e n t e
en la m i t o c o n d r i a dei h í g a d o de Genyjiterus ma—
c u l a t u s . En base a esta d i s t r i b u c i ó n y los b a jos n i v e l e s de u r e a e n d ó g e n a m e d i d o s en t e j i dos de e s t a e s p é c i e se s u g i e r e que la f u n c i ó n
de la a r g i n a s a es a p o r t a r la o r n i t i n a n e e e s a ria para la s í n t e s i s de p r o l i n a .
Se estúdio la marcacíon de gangliôsidos y glicoproteínas
en polios anestesiados una hora antes de una inyeccion
de 3H-NAcMan. Se midiõ 3H-gangliósidos y 3H-glicoproteínas en capa ganglionar de retina y tectum óptico. Cinco horas después de la inyeccion se encontro una disminución en la marcación de ambos compuestos tanto en retina como en tectum óptico de los animales anestesiados.
Sometidos los tectum ópticos a un fraccionamiento subsinaptosomal se encontro que tres horas después de la inyeccion la fracción que tiene mayor actividad especifica de ãcido siãlico de gangliôsidos (c.p.m. 3H-NANA gan
gliõsidos/ mol de NANA gangliôsidos) es la fracción enriquecida en vesículas sinãpticas tanto en animales cori
troles como en los anestesiados, siendo los valores de
todas Ias fracciones obtenidas de animales anestesiados
menores que Ias de los controles. Transcurridas cinco
horas de la ínyección Ias actividades específicas de Ias
fracciones enriquecidas en mielina, microsomas, membrana
plasmática, sinaptosomas y mitocondrias aumentan sobrepasando el valor de la fracción de vesículas sinãpticas
el cual permanece constante entre las tres y cinco horas
En Ias fracciones provenientes de los animales anestesia
dos los valores se mantienen siempre similares a los de
la fracción de vesículas sinãpticas y por debajo de los
controles correspondientes. Se discute la posibilidad de
que el anestesico interfiera tanto en la síntesis como
en la translocaciõn de estos glicocompuestos desde su
sitio de síntesis hacia la membrana plasmática y en el
reciclado de membranas.
(
AISLAMIENTG Y CULTIVD DE ISLGTES DE LANGERHANS
FUNCIONANTES. (Isolation and culture of f u n c t i o n a l
Langerhans Islets) Koppmann, A., Huerta.G..Salas K.,
Cavledes, R. Laboratório Cultivo de Tejidos Depto.
Fisiologia y Biofísica, Fac. de Medicina U.de Chile.
R217
BIOSINTESIS DEL GLUCOGENO EN CÉREBRO DE RATA (Rat brain
glycogen biosynthesis).
1
Una de las limitaciones del transplante de pancreas
endocrino radica en que las actuales técnicas de aisla
miento y cultivo no son eficientes.
Se trabajo con dos espécies animales.
El pancreas de rata es de fácil acceso y canulacián,
procediéndose luego a la disección, trituración, diges
tión enzimática y cultivo de los islotes obtenidos.
En el perro este procedimientD es basicamente el mis
mo, pero se dificulta por sus condiciones anatômicas.
En ratas el rendimiento es de 200-ltOO islotes, obteniéndose adherencia a la placa de cultivo (critério de
vitalidad en cultivo), microscopía electrónica e inmunacitoquímica de célula secretoria típica (RER, gránulos
de secreción, mitocondrias y complejo de Golgi), fluoresencia (+) con paraformaldehido-glioxilato, RIA de insulina en secreción basal y respuesta sobre carga de
glucosa (90-153uUI/ml respectivamente).
En perros se observa adherencia a la placa, RIA de
secreción basal de insulina (137ulll/ml en tres días)y
respuesta sobre carga de glucosa con mayor secreción de
hormona (de 3ZuUI/ml basal a 53uUI/ml post estímulo).
Se comprobó preservación en condiciones de cultivo
de propiedades morfofuncionales histioespecíficas de
pancreas endocrino por períodos prolongados de tiempo
(1 mes).
Financiamiento: DIB B 212it-B623
MECANISMO DE A C C I O N DE A N T I V I R A L E S L I S O S 0 M 0 T R O P I C 0 S : E S
T U D I O S CON V I R U S I P N . ( M e c h a n i s m o f a n t i v i r a l l y s o s o m o tropic agents: Studies in IPN v i r u s ) .
Kuznar, J . , F a r i a s , J . , K i s s , J .y Nayarrete, E.
Laboratório de B i o
química, Facultad de Medicina, Universidad de V a l p a r a i so.
La s e n s i b i l i d a d d e a l g u n o s v i r u s , a l a a c c i ó n de
l o s a g e n t e s l i s o s o m o t r ô p i c o s , h a s i d o e m p l e a d a como a r gumento para d e f i n i r s u v i a de p e n e t r a c i ó n a l a c é l u l a .
Estos inhibidores afectarlan l a i n t e r n a i i z a c i ó n del o s
v i r u s a t r a v é s d e l a n e u t r a l i z a c i ó n d e i pH d e endosomas
y lisosomas.
L a r e l a c i ô n e n t r e p e n e t r a c i ó n v i r a l y sen_
s i b i l i d a d a agentes lisosomotrôpicos está siendo cuest i o n a d a d e b i d o a q u e a l g u n o s v i r u s s o n a f e c t a d o s p o r es^
tas drogas i n c l u s o después de haber penetrado.
Con o b j e t o de a p o r t a r información respecto a l o que sucede
c o n v i r u s s i n m e m b r a n a , hemos e n s a y a d o e l e f e c t o d e l a
C l o r o q u i n a y e l NH.C1 s o b r e e l c i c l o i n f e c t i v o d e l v i rus de l a N e c r o s i s P a n c r e a t i c a I n f e c c i o s a ( I P N ) .
Ambos a g e n t e s i n h i b e n l a p r o d u c c i ó n d e v i r u s I P N ,
s i n e m b a r g o , e l N H . C 1 e s más e f e c t i v o .
Contrariamente
a l o e s p e r a d o , e l NH.C1 i n h i b e l a m u l t i p l i c a c i ó n v i r a l
i n c l u s o s i se agrega después ques e ha i n i c i a d o l a síji
t e s i s de nuevas p r o t e í n a s v i r a l e s . P a r a v i s u a l i z a r un po
s i b l e e f e c t o s o b r e l a r e p l i c a c i ó n , d e l genoma d e l v í r u s ,
se e s t ú d i o l a i n c o r p o r a c i õ n d e [ H J - u r i d i n a a c é l u l a s
infectadas.
E l NH.C1 r e d u c e e n un 4 3 Í l a s i n t e s i s de
RNA v i r a l .
En camBio, l a producción de v i r u s decae en
u n 95%. L a d i s m i n u c i õ n e n l a s i n t e s i s d e RNA v i r a l , d e
tectada en presencia.de NH.C1, e s , en p r i n c i p i o ,
insufi^
c i e n t e p a r a e x p l i c a r l a a c c i ó n d e i i n h i b i d o r , s i n embair
go, e s t ú d i o s p r e l i m i n a r e s de i n m u n o f l u o r e s c e n c i a , s u g i e
r e n q u e además e l NH.C1 i n h i b e l a p e n e t r a c i ó n d e i v i r u s .
P r o y e c t o UV 2 1 / 8 4 U n i v e r s i d a d d e V a l p a r a i s o
Clara R. Krlsman, Mareia Mendonça, Diana S. Tolmaaky.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Pundación
Canrpomar" y íacultad de Ciências Exactas y Naturales,
Antonio Machado 151, (1405) Buenos Aires, ARGENTINA
El glucógeno es un horoopolisacárido de glucosas altamente ramificado eon uniones glucosidicas
o< 1,1 y
<X1,6. Todas las enzimas glucógeno slntetasas lndependientemente de su origen, presentan un requerimlento
absoluto por un glucano del tipo o<l,4 como aceptor.
Los trabajos realizados en nuestro laboratório eon
higado y oorazón ae rata,así como tambien Each, coll
eonducen a proponer que el glucógeno se sintetiza "de
novo" sobre una proteína.
En este trabajo presentamos evidencias que
tambien en cérebro, el ^glucógeno se inicia via formación de una glueoproteína. La enzima que eatallza la
transferencia de glucosas del UDP-Glc a la proteína es
diferente de la enzima que transflere las glucosas al
glucógeno.
Esta afirmación se basa en que a través de las
distintas etapas de purlficación empleadas,se logro separar Ias enzimas: fosforilasa, ramificante y UDP-Glucosll transferasa a proteína y ÜTJP-Glucoslltransferasa
a glucógeno.
C A N A L E S I O N I C O S DE R E T Í C U L O
SARCOPLASMATICO
DE M U S C U L O E S Q U E L É T I C O DE RANA.
(Ionic
c h a n n e l s in s a r c o p l a s m i c r e t i c u l u m from frog
skeletal m u s c l e ) .
Ladrfin de G u e v a r a , R .
y
Bull, R. Depto. Fisiologia Normal y Patol.,
F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de V a l p a r a i
so y D e p t o . de F i s i o l o g i a y B i o f í s i c a , F a c u l ~
tad de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
Con el o b j e t o de e s t u d i a r los c a n a l e s i ó n i cos p r e s e n t e s en el r e t í c u l o s a r c o p l a s m ã t i c o
de C a u d i v e r b e r a c a u d i v e r b e r a , hemos f u s i o n a d o
dos p r e p a r a c i o n e s d i f e r e n t e s de f r a g m e n t o s
a i s l a d o s de 6 s t e , con m e m b r a n a s a r t í f i c i a l e s
p l a n a s de f o s f o l í p i d o s .
El c a n a l m á s f r e c u e n t e m e n t e e n c o n t r a d o con
una de las p r e p a r a c i o n e s es c a t i i n i c o , tiene
una c o n d u c t a n c i a de 574 p S en sulfato de p o t a s i o 1 0 0 mM y la p r o b a b i l i d a d de e s t a r
a b i e r t o crece al a u m e n t a r el p o t e n c i a l e l é c trico en el lado que se a g r e g a r o n l a s v e s i c u
las.
C o n la otra preparacifin d e t e c t a m o s d i versos
t i p o s de c a n a l e s , e n t r e e l l o s
uno
a n i S n i c o y o t r o catifinico.
El a n i ó n i c o es
p o c o d e p e n d i e n t e de p o t e n c i a l , y p r e s e n t a en
c l o r u r o de c o l i n a 2 5 0 / 5 0 mM una c o n d u c t a n c i a
de 100 p S . El c a n a l c a t i é n i c o p r e s e n t a
en
c l o r u r o de p o t a s i o 2 0 0 / 1 0 0 m M u n a c o n d u c t a n cia de 7t p S , y se abre p a r a p o t e n c i a l e s p o sitivos .
Estos c a n a l e s p o d r l a n p a r t i c i p a r en la pre
v e n c i ã n de la polarizacifin d e i r e t í c u l o s a r c o p l a a m á * i c o c u a n d o este libera c á l c i o .
F i n a n c i a d o p o r la U n i v e r s i d a d de Chile DIB
B.2123, Muscular Dystrophy Association
y
NIH GM 3 5 9 6 1 - 0 1 .
R218
GABA E N D Ó G E N O SE E N C U E N T R A P R E S E N T E EN V E S Í C U LAS S I N Ã P T I C A S DE CORTEZA C E R E B R A L DE RATA.
( E n d o g e n o u s GABA is p r e s e n t in rat b r a i n
cortex synaptic v e s i c l e s ) ,
Lagos N.
y
O r r e g o . F.
D e p t o . de F i s i o l o g l a y B i o f í s i c a ,
t
En la l i t e r a t u r a se e n c u e n t r a n d e s c r i t o s
intentos negativos para asociar aminoãcidos
(AA) a f r a c c i o n e s de v e s í c u l a s s i n ã p t i c a s ( V S )
aisladas.
Esto p o d r í a i n d i c a r que los AA pos
t u l a d o s como n e u r o t r a n s m i s o r e s , e n t r e e l l o s ê l
á c i d o g a m a - a m i n o b u t i r i c o ( G A B A ) , no se e n c u e n tran a l m a c e n a d o s en v e s í c u l a s s i n ã p t i c a s .
Una
e x p l i c a c i ô n a l t e r n a t i v a p u d i e r a ser que los AA
d i f u n d i e r a n desde el c o m p a r t i n i e n t o i n t r a v e s i c u l a r h a c i a el c i t o s o l d u r a n t e el p r o c e s o de
a i s l a m i e n t o , así la c o n c e n t r a c i ó n de AA d e n tro de la v e s í c u l a d e b e r i a ser d i r e c t a m e n t e
p r o p o r c i o n a l a la d u r a c i ó n y c o m p l e j i d a d del
p r o c e d i m i e n t o u t i l i z a d o en el a i s l a m i e n t o de
vesículas sinãpticas *
En e s t e trabajo se p r e s e n t a n e v i d e n c i a s
de c o n t e n i d o de GABA e n d ó g e n o en v e s í c u l a s
s i n ã p t i c a s de c o r t e z a c e r e b r a l de rata o b t e nidas por tres métodos diferentes.
Se c a r a c t e r i z a la f r a c c i ó n v e s i c u l a r u t i lizando marcadores bioquímicos y controles
de m i c r o s c o p í a e l e t r ô n i c a y se d e t e r m i n a el
c o n t e n i d o de GABA
intravesicular.
F i n a n c i a d o por DIB P r o y e c t o B . 1 5 9 0 U n i v e r s i dad de Chile y P r o y e c t o P N U D UNESCO C H I - 8 4 /
003,
a y u d a a T e s i s de D o c t o r a d o .
CÂMBIOS EN EL CONTENIDO DE r R N A EN HOJAS SENESCENTES DE TRIGO.
(Changes r R N A content i n senescing wheat leaves). L a m a t t i n a . L . . Pineda,
l i . . Pont Lezica. R. v Conde. R D . Instituto de Investigaciones Biológica»,
Facultad de Ciências Exactas y Naturales, Universidad Nacional de Mar dei
Plata, Argentina.
La p n m e r a hoje de t r i g o en su máxima expansion pierde velozmente
RNA cuando es cortada y colocada en la oscuridad. Esta investigación se
Ilevó a cabo con el objeto de evaluar Ias características <to la desaparictón
del RNA , c u y a mayor proporciõn es r R N A Se m i d i e r o n , inicialmente, Ias
velocidades de síntesis y degredación del r R N A total mediante
procedimlentos de marcación con [ H ] - o r o t a t o . Los resultados indicaron
que la síntesis se mantíene hasta 48 h s posteriores al corte. L a
OBO/edación se incrementa y es responsable da la perdida ds r R N A total.
3
Luego, a distintos tiempos de iniciado el proceso, se aislaron Ias
espécies moleculares de r R N A que componen los ribosomas de citoplasma y
cloroplastos mediante ultracentrifugación en gradientes exponenciales de
densidad de sacarosa. Se estimo así, el contenido neto de dichos
componentes. Los resultados indicaron que la hpja contiene incialmente
6 9 * y 2 I X de r R N A de citoplasma y cloroplastos respectivamente. L a
perdida ocurre preferentemente en e l r R N A de cloroplastos, y cee al 60S
de su valor inicial en 48 hs. A continueción se midió la capacidad de
t r a n s c r i p t i o n de Ias espécies moleculares mediante Ia incorporación ds
[ H j - é c i d o orótico. La dBgradBcion se evaluó marcando el r R N A al inicio
dei proceso con [ P ] y observando la desaparición de la m a r c a Los
resultados obtenidos indicaron que le caída de marca está incrementada en
el caso dei r R N A de cloroplastos y es de la misma magnitud que el cambio
de masa observado.
3
3 2
Financiado por CONICET, CIC y FIBA.
CARACTERIZACION DEL ESTADO DE PLASNIDIO DEL BACTERIOFAGO P4, Y SU USO COMO VECTOR DE CLONAHIENTO Y
EXPRESIÓN.
(Characterization
of phage P4 piasmid
state, and its use as a cloning and expression
vector). R. Lagos y R. Goldstein. Departamento de
Biologia, Facultad de Ciências, Universidad de Chile
y Boston University School of Medicine, Boston.
P4 es un bacteriófago defectivo que depende del
colifago P2 para su desarrollo lítico. En ausência
de P2, P4 puede propagarse como un plasmidio. Se
caracterizo la replicación, control de número de
copia, estabilidad y expresión del plasmidio P4 (pP4).
El número de copias (n), determinado por centrifugación en gradiente de cloruro de cesio-yoduro de
propidio, puede ser manipulado por alteraciones en
las condiciones de crecimiento, oxigenación y temperatura, permitiendo la inducción de estados con diferentes
número
de
copias: bajo
(n=l-3),
intermédio
(n=10-15) y alto (n=30-40). Este efecto es a nivel
de la replicación dei DNA. El estúdio de la estabilidad de pP4 se realizo con derivados de P4 que lie van
insertado un gen de resistência a kanamicina (Km),
deterrainándose que la estabilidad depende de la función int.
Mediante la adición de P2, se puede encapsidar el
genoma de pP4 en una partícula viral, y si se emplea
la mutante pP4sidl es posible encapsidar el genoma
de pP4 que contenga una insere ión de DNA foráneo de
hasta 25000 pares de bases.
Se ha construído un vector de expresión usando el
derivado pP4sidl, al cual se le ha insertado el
promotor híbrido tac y un gen de resistência a
ampicilina. Este vector cuenta con un sitio PstI
único que está distai al promotor y a la secuencia SD.
Se discuti ran las ventajas del uso de pP4 como
vector de clonamiento y expresión.
ASPECTOS BIOLÓGICOS Y CITOGENETICOS DE DOS GRILLOS ESCAMOSOS: Microgryllus pallipes (PHILIPPI) Y Hoplosphyrum
griseus (PHILIPPI) (GRYLLIDAE: MOGOPLISTINAE).
[Biological and Cytogenetic aspects of two scaly
crickets: Microgryllus pallipes (Phil.) and Hoplosphyrum
griseus (Phil.) (Gryllidae: Mogoplistinae J] .
Lamborot, M., Barrera, H. y Fan, C*. Departamento de
Ciências Ecológicas, Facultad de Ciências, Universidad
de Chile, *U. Metropolitana de Cs. de la Educación.
Microgryllus pallipes y Hoplosphyrum griseus grillos
escamosos, endêmicos, de amplia distribución geográfica,
son facilmente distinguibles por su morfología de huevo
a imago. Tienen importância econômica, ya que ambos
acompafian los productos vegetales que Chile exporta, figurando M. pallipes como plaga cuarentenaria. Este trabajo caracteriza: la historia estacionai de las espécies; la constitución cromosómica obtenida por suspension celular de tejido gonadal y tinción Giemsa para diversas localidades; y la conducta sexual determinada por
observación directa de machos y hembras virgenes.
Los resultados indican que ambas espécies presentan
un ciclo univoltino, pero con características propias.
Todas Ias poblaciones analizadas poseen un número cromosómico diploide 2n= 1 8 autosomas mas sistema sexual XO;
el cromosoma X es metacéntrico y grande. Algunas poblaciones de H. griseus presentan individuos con cromosomas
B.
Las pautas de conducta sexual, son en general coinci
dentes con otras espécies de Gryllidae, sin embargo,
existen diferencias notables: H. griseus da emisiones
sonoras {canto de llamada) en tanto que M. pallipes es
sordo y mudo; el tipo de espermatóforo es bipartito y
de gran tamafio en H. griseus, siendo de menor tamafio en
M. pallipes. La conducta de postcópula también es dife
rente.
Se discute la importância evolutiva de algunos de
los parâmetros presentados.
1
Financia Proyecto DIB 2 0 0 7 - 8 6 3 *
R219
LA PLACENTA EN MALNUTRICION MATERNA 1. ESTÚDIO ULTRAESTRUCTURAL DE LAS VELLOSIDADES CORIONICAS. (An ultras tructural study of the chorionic villi in Human Placentas in maternal malnutrition). Las Heras J., Ponce C.,
Gómez E -, y Renere R.
Departamento Ciências Médico Bio
lógicas y Básicas y Carrera de Obstetricia y Puericultu
ra. Facultad de Medicina. Universidad de Chile.
(Patrocinio : S. Gimpel F.)
Se analizaron ultraestructuralmente las características de las vellosidades coriõnicas en la placenta de 30
pacientes con malnutrición materna y se compararon con
un número similar de placentas de pacientes con embarazo normal.
El estúdio ultraestructural de las vellosidades coria
les terminales de las placentas de madres desnutridas de
mostro las siguientes alteraciones: excesiva dilata ciõn dei retículo endoplãsmico rugoso y vacuolas subnucleares con material electrodenso en el sincitiotrofo blasto; engrosamiento de la membrana basal, con interdi
gitación excesiva dei sincitiotrofoblasto; aumento dei
colágeno en el estrorna vellositario entre la membrana
basal y la pared capilar; vacuolizaciôn de pericitos;
moderada proliferación de células vellositarias y ede ma del estromã. ' '
Aunque Ias causas que pueden haber originado los câmbios estructurales, arriba mencionados, en Ias placen tas de madres desnutridas aún no estãn establecidas se
podría pensar en dos factores determinantes: insufi ~
ciente circulaciôn utero placentaria y/o maduraciôn vellositaria inadecuada.
PROYECTO : M2135 - 8622 DIB
UNIVERSIDAD DE CHILE
ANÁLISIS ISOENZIMATICO DE ALCOHOL Y ALDEHIDO DESHIDR0GENASAS Y ONTOGENESIS DE LAS ACTIVIDADES METABOLIZANTES
DEL ETANOL EN HIGADO DE HAMSTER. (Isoenzymatic analysis of Alcohol and Aldehyde Dehydrogenases and ontogeny
of ethanol metabolizing activities in hamster's liver)
L a 2 o , 0. y Jorquera R. Departamento de Biologia Molecular, Fac. de Ciências Biológicas y de Recursos Natura
les, Universidad de Concepción. (Patrocinio: G. Cea)
Las isoenzimas de Alcohol Deshidrogenasa (ADH) se
clasifican, según sus formas moleculares, en tipos I,
II ó If y III ó X y las de Aldehido Deshidrogenasa (ALDH)
según sus Km para acetaldehido, en I (uM) y II (mM),
siendo ADH I y ALDH I Ias principales isoenzimas involu
cradas en el metabolismo de etanol.
En este trabajo analizamos Ias actividades ADH y
ALDH, sus patrones isoenzimáticos y la ontogenesis post
natal de ADH I y ALDH I en hfgado de hamster.
Las actividades se midieron espectrofotométricamente, separadas y detectadas en geles de poliacrilamida y
analizadas por densitometría.
En hamster adulto se detectan tres ADH I, una ADH
III y tres ALDH II (dos NAD y una NADP dependientes).
En neonato sólo se detecta una isoenzima de ADH I y,
predominantemente, una de ALDH II. Las actividades ADH
I y ALDH I, al nacimiento, representan menos dei 20% de
la actividad máxima respectiva alcanzada al mes de edad,
decreciendo luego ALDH I hasta un 35%.
Estos resultados demuestran que en hígado de hamster las actividades ADH y ALDH están representadas por,
al menos, cuatro y tres isoenzimas, respectivamente.
Las isoenzimas que metabolizan el etanol, ADH I, ALDH I
presentan diferentes ontogenesis post-natal y el incremento de la actividad ADH I se correlaciona con una modification de su patrÓn isoenzimático.
ESTÚDIO GENÉTICO POBLACIONAL EN CHUQUICAMATA.
(Genetic
population study in Chuquicamata). Lazo, B., Velasco,
C., Campusano, C. y Figueroa, H. Laboratório de Genética, Facultad de Medicina, Universidad de Valparaiso.
Introducción: Estúdios poblacionales realizados en Chile, senalan diversidad de frecuencias en características
definidas como marcadores genéticos y variables antropológicas. Esto se ha explicado por la particular mixtura
étnico racial de cada poblacion, debido a flujos migra torios distintivos en cantidad y origen de los migrantes.
Como parte de un estúdio mãs amplio, relacionado con la
estructura genética de la poblacion de Chuquicamata, la
presente comunicación es un análisis preliminar que procura caracterizar dicha poblacion desde un punto de vista genético antropológico.
Metodologia: Se encuestaron 300 estudiantes de Ensenanza Media, en 1984, en proporción sexual 1:1, con prome dio de edad de 14,44 - 0,32 anos. De ellos se obtuvo:
su lugar de nacimiento, el de sus padres y abuelos, grupos sangüíneos de sistemas ABO y Rh, presencia de tubérculo de Carabelli y de diente en pala, gustación a la
feniltiocarbamida, etc.
+
Resultados: Se observa alta frecuencia de migrantes nacionales, principalmente de las regiones I, II, III y IV.
Pero el numero de abuelos extranjeros es de un 6%. En
los grupos sangüíneos ABO el valor de r = 0,7602 y el de
p = 0,1893. En Rh hay un 92,94% positivos. Presencia
de tubérculo de Carabelli es de 13,47% y de diente en
pala 25,35%.
Conclusiones: Los datos indican que la poblacion básica
es inmigrante (padres y abuelos). Los valores de Ias
frecuencias génicas senalan que se estã en presencia de
una poblacion mixta menos caucãsica que otras poblacio nes chilenas, lo que se explicaria, en parte, por la baja inmigración extranjera.
FACTOR HIPOTALÃMICO QUE INHIBE LA SECRECIÓN DE LH ESTIMULADA POR GnRH: RELACIÔN C0N EL FRAGMENTO GnRH (1-5).
(Hypothalamic factor that inhibits GnRH-stimulated LH
secretion: Relationship with GnRH (1-5). Leal, J., De la
Lastra, M.- Laboratório de Endocrinologla, Depto. de
Ciências Fisiológicas, Facultad de Ciências Biológicas,
Se ha obtenido de eminência media de vaca (EM) un material peptldico soluble en ácido acétíco 0.5M y en metanol, que inhibe la secreción de LH, pero no de FSH,
estimulada por 200 ng GnRH en ratas machos inmaduros.
El efecto inhibitorio fue observado con dosis equivalentes a 0.33-1 EM, pero no con dosis mayores. El material
inhibitorio tiene reacción cruzada con un anticuerpo
monoclonal anti-GnRH y tiene un peso molecular estimado
aproximadamente en 750 daltons.
Estas características sugieren que pudiese ser un
fragmento de la molécula de GnRH producido por acción
de endopeptidasas hipotalámicas, cuyo principal producto de hidrolisis es GnRH (1-5), con un peso molecular
de 739 daltons.
Basãndonos en estos hechos ensayamos la secuencia
GnRH (1-5) sobre la secreción de LH estimulada por 200
ng de GnRH en ratas machos inmaduros. La liberacion de
LH, pero no la de FSH, fue inhibida significativamente
con 50 y 100 ng de GnRH (1-5), pero no con dosis mayores. No se observo efecto sobre los niveles plasmáticos de LH en situación basal, no estimulada.
Sobre la base de estos resultados proponemos que el
péptido inhibidor de la secreción de LH, aislado de EM
de vaca, es el fragmento GnRH (1-5) y que este péptido
podría desempenar un rol regulador fisiológico en la
secreción de LH.
Investigaciõn financiada por Proyectos DIUC 69/86,
C0NICYT 1186/85 y Rockefeller 86020.
R220
CONSTRUCCION DE UNA GENOTECA DE Salmo galrdneri EN EL
BACTERIOPAGO LAMBDA CHARON 4A (Construction of a Salmo
gairdneri genomic library in bacteriophage Lambda
Charon 4A).
Leighton, V., Winkler, F..
Laboratório
de Genética, Departamento de Ciências Ecológicas, Facultad de Ciências, Universidad de Chile; Departamento de
Ciências Exactas y Naturales, Instituto Profesional de
Osorno.
La trucha arcoiris (Salmo gairdneri) se ha constituído como una de Ias espécies de gran relevância econômica
para el hombre, lo que explica el creciente interés por
conocer diversos aspectos relacionados con su crecimiento y desarrollo. Como una etapa inicial de un estúdio
molecular que hemos iniciado acerca de la fisiología génica de este organismo, hemos construído una genoteca en
el vector Lambda Charon HA a la cual recurriremoe para
desarrollar futuras investigaciones tanto básicas como
biotecnológicas.
El DNA cromosomal, obtenido de eritrocitos de trucha
proveniente de la piscicultura de Rupanco,fue digerido
parcialmente con la enzima de restricción Eco RI y fraccionado en gradientes de sacarosa. Los fragmentos de al^
rededor de 20 Kpb se ligaron a los "brazos" dei bacleriófago Lambda Charon 4A mediante la enzima T4 DNA ligasa.
Los productos del ligamiento se sometieron a empacamiento in vitro utilizando extractos preparados a partir
de ias cepas E. coli BHB 2 6 8 8 y E. coli BHB 2 6 9 0 . Los
fagos recombinantes se identificaron mediante la apariciôn de placas de lieis incoloras al ser propagados en
la cepa E. coli 1090 cultivada en médios sólidos que con
tenían isopropil -B-D tiogalactopiranósido (IPTG) y
5-bromo -4-cloro -3-indolil -B-D-galactopiranósido
(X - gal).
Financiado: Proyecto "Ingeniería Genética en Peces".
Centro de Biotecnologia Marina, Instituto Profesional
de Osorno., Laboratório de Genética, Departamento de
Ciências Ecológicas, Facultad de Ciências, Universidad
de Chile.
O V O G E N E S I S Y F 0 L I C U L O G E N E S 1 S EN E L OCTODON d e g u s ( O v o g e nesis and F o i í c u l o g e n e s i s in t h e Octodon d e g u s ) .
Leíva,
J ; y Ho r a l e s B . D e p t o d e F i s i o l o g f a U . M e t r o p o l i t a n a ; D e p T o . d e M o r f o l o g f a E x p , F a c . Med i c i n a , U . d e C h i l e .
La o v o g e n e s i s e s u n p r o c e s o c o n t f n u o q u e c o m i e n z a c o n
l a s c é l u l a s G e r m i n a l e s P r i m o r d i a l e s (CGP) e n I a v i d a embrionária y culmina con el óvulo durante la fecundacíón.
El i n g r e s o d e l a o v o g o n i a e n I a p r i m e r a d i v i s i o n m e i ó t i c a ,
la f a s e de m e i o s i s en que queda d e t e n i d o e l o v o c i t o I y
la o r g a n i z a c i ó n de l o s f o i f e u l o s p r i m o r d i a l e s es v a r i a b i e
de e s p é c i e e n e s p é c i e .
Nuestro objetivo fue estudiar la ovogenesis y f o i i c u l o g e n é s i s en e l Octodon degus p r e y p o s t n a t a l .
S e u t i 1 J_
z a r o n I a s g o n a d a s d e e m b r i o n e s d e 0 , 7 - 1 . 2 - 1 , 5 cm y f e t o s
1 , 8 - 2 , 0 - 2 , 9 - 3 , y *»,0 cm d e L A C . H e m b r a s d e 25-35-*tO y
90 d í a s d e e d a d y 1 0 h e m b r a s a d u l t a s e n p e r í o d o a c t í v o y
10 e n r e p o s o s e x u a l .
F u e r o n p r o c e s a d a s p a r a t é c n i c a his_
tológica corriente.
Se r e a l i z o un a n ã l t s i s e v o l u t i v o , m e
d í c i o n e s de Ias c é l u l a s de l a I ínea germinal y d e l o s d i s _
t i n t o s t i p o s d e f o l í c u l o s ( F ) n o r m a l e s y a t r é s i c o s y cuer_
p o s l u t e o s ( C L ) y a d e m á s u n r e c u e n t o d e e l l o s e n ambos pe_
ríodos de a c t i v i d a d s e x u a l .
EFECTO
DEL C O L E S T E R O L
DE L A DIETA
SOBRE
LA
ACTIVIDAD
DE
ENZIMAS
DESATURANTES
DE
ÁCIDOS
GRASOS
Y
LA
COMPOSICION
LIPIDICA
DE
RETICULO
ENDOPLASMICO
DE
HIGADO
DE
RATA(Effect
of dietary
cholesterol on f a t t y
acid
desaturase a c t i v i t i e s and lipid composition of rat liver
endoplasmic reticulum). Lei kin, A . L y Brenner, R . R .
Instituto de Investigaciones Bioquímicas de L a
Plata
(INIBIOLP), C O N I C E T - U N L P , F a c d e C s . M é d i c a s , Universidad Nac.de L a Plata, La Plata, A r g e n t i n a .
El
colesterol
posee
una
reconocida
capacidad
rigidizante.
Es de gran interés conocer c o m o a f e c t a
la actividad de enzimas de membrana
y su
entorno
lipídico. Con e s t e fin se midió su e f e c t o
sobre la
actividad e n z i m ã t i c a desaturante del retfculo endoplãsmico
hepStico por radiocromatografía gas-lTquido. La composlclón
liptdica y de ficidos grasos se estúdio por cromatografía
en c a p a fina y cromatografía gas-lfquido. Las propiedades
físico dinâmicas se estudiaron por mediciôn de anisotropía
de fluorescencia. Las
ratas
fueron alimentadas
con
dietas
suplementadas
con
5%
colesterol2%
ãcido
eólico y
1% colesterol-0,5% ficido e ó l i c o durante 6
y 21 días, r e s p e c t i v a m e n t e .
El r e t í c u l o
endoplãsmico
se enriquectó en c o l e s t e r o l . El contenido de fosfatidfl
colina y fosfatidil
etanolamina
aumento
y
disminuyó
el de esfingomiellna. Luego de 6 dias de dieta Á.5
y A 6 desaturasas no modificaron su actividad. Luego
de 21 días, A 5 y AI6 desaturasas disminuyeron su actividad,
la primera en forma más significativa que la segunda.
A9 Desaturasa
aumento
su actividad en
forma
muy
significativa. Estos câmbios se tradujeron en la composición
de
êcidos
grasos
totales
con
disminución
de
16:0
y 18:0 y 20:4 y aumento de
16:1 y 18:1. La anisotropía
de fluorescencia de l,6-difeniI-l,3,5-hexatrieno
aumento
así c o m o también
la dei Scido trans-parinSrico.
Los
resultados
revelan
una
rigidización de
la
membrana
c u y o e f e c t o sobre Ias actividades e n z i m § t l c a s depende
de la desaturasa en estúdio.
M A R C A J E DE A F I N I D A D D E M E T I O N I L - t R N A S I N T E T A S A
E. coli- (Affinity l a b e l i n g of E . coli m e ti on i 1-t RNA s i n t e t a s a ) . L e â n ^ 0_. y S c h u l m a n , L_
D e p t o . B i o l o g i a M o l e c u l a r . F a c . C s . B i o l . y de
Rec. N a t . U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n y D e p a r t ment of D e v e l o p m e n t a l B i o l o g y and C a n c e r . A l bert E i n s t e i n C o l l e g e o f M e d i c i n e .
D
E
La i n t e r a c c i ó n e s p e c í f i c a del t R N A con ami n o a c i l - t R N A s i n t e t a s a s es un m o d e l o a t r a c t i v o
p a r a el e s t ú d i o de l a s b a s e s m o l e c u l a r e s de re
c o n o c i m i e n t o p r o t e í n a - á c i d o s n u c l é i c o s . Las es
t r u c t u r a s p r i m a r i a y t e r c i a r i a de t-RNA
y
de un f r a g m e n t o de m e t i o n i l - t R N A s i n t e t a s a
( M e t R S ) de E_.. coli_ han sido r e s u e l t a s .
E x p e r i m e n t o s de e n t r e c r u z a m i e n t o u t i l i z a n d o
el c o m p u e s t o b i f u n c i o n a l d i t h i o b L s ( s u c c i n i m i d i l - p r o p i o n a t o ) ( D T S P ) unido a c u a t r o r e g i o n e s
de la e s t r u c t u r a de t R N A
, han sido l l e v a dos a cabo en este l a b o r a t ó r i o y c u a t r o p é p t i dos r e a c c i o n a n t e s fueron i d e n t i f i c a d o s .
En este t r a b a j o los p é p t i d o s i d e n t i f i c a d o s
han sido a s i g n a d o s a sus r e s p e c t i v o s sitios de
En e m b r i o n e s d e 0 , 7 cm I a s CGP s e e n c u e n t r a n e n m i g r a _
r e a c c i ó n en el t R N A . Los r e s u l t a d o s indican
c i ó n ; a l o s 1,2 cm s e r e c o n o c e l a g ó n a d a i n d í f e r e n c i a d a .
que Lys 61+ 0 r e a c c i o n a con el e x t r e m o 5 del
A l o s 1 , 5 e l o v a r i o p o r e l i n i c i o d e l a m e i o s i s . L o s pr_|_ t R N , Lys **02 y Lys 1*39 estan unidos al D-loop
meros F . p r i m o r d i a l e s ( c o n e l o v o c i t o e n P a q u i t e n o ) , s e
y el m á s i m p o r t a n t e Lys U 6 5 , r e a c c i o n a con la
observan en f e t o s de 2,9 cm. Los o v o c i t o s c r e c e n l e n t a region que c o n t i e n e el. a n t i c o d o n ,
mente h a s t a a l c a n z a r s u máximo tamano e n F . p r i m á r i o s d e
La e s t r u c t u r a del f r a g m e n t o de M e t R S e s t a
12 c a p a s de c é l u l a s f o l i c u l a r e s .
En e l p e r í o d o d e r e p o s o h a y u n a u m e n t o r e l a t i v o d e l o s F . a t r é s i c o s y u n a d i s _ siendo r e f i n a d a a 1.8 A de r e s o l u c i ó n . La c o m b
i
n
a
c i ó n de r e s u l t a d o s d i r e c t o s como son los
minución notable de los C L .
o b t e n i d o s p o r e n t r e c r u z a m i e n t o y la e s t r u c t u r a
La o v o g e n e s i s y F o i i c u l o g ê n e s i s s e i n i c í a n e n e l p e r í o _
de la e n z i m a p e r m i t i r á c o n s t r u i r el p r i m e r m o do p r e n a t a l .
A d i f e r e n c i a de o t r o s roedores el
ovocito
delo d e t a l l a d o de un c o m p l e j o p r o t e í n a - R N A .
detiene l a meiosis en l a etapa de Paquiteno al o r g a n i z a r
se e l F . p r i m o r d i a l . E l c r e c i m i e n t o d e i o v o c i t o y de l o s
F. s i g u e un p a t r ó n muy s i m i l a r a o t r o s r o e d o r e s . La d i s minución de l a a c t i v i d a d o v á r i c a en el p e r í o d o de reposo
puede s e r e x p l i c a d o p o r un d e s c e n s o de I a s g o n a d o t r o f i nas h i p o f i s i a r i a s .
R221
INTEKACCION RHIZOBIM MELILOTI-ALFALFA
Vivlana C. Lepek, Luis R. Marechal
Instituto de Investigaciones Bioquímica "Fundación
Carapomar", Antonio Machado 151, (1405) Buenos Aires
H1VR0L1S1S E N Z I M Á T I C A P E ESTERES POSfORKOS
EU TRVPAN0S0
HA C R U Z I . [Enzimatic
hydnolyiii
o{ phoipholic
eiteAei
-tn
Tiypanoioma
vuizi)
LetelieA,
U.E., tÁoiello,
A.
VepaKtamento
de Bioquímica,
facultad
de MeJd-icA.no.. UniveA
iidad
de. Chile.
Camilla.
10016 Santiago-1
Chile.
~
Resultados prévios de este laboratório demostraron
que la aglutinina de alfalfa a la que se adjudico un
papel importante en el reconoclmlento de R. mellloti,
era inespecíflco en cuanto a su interacción con esta
bacteria.
Ello llevó a que experimentáramos otro
ensayo para intentar dilucidar el problema relacionado con el reconoclmlento de R. melllotl-alfalfa.
Intentamos así desarrollar la técnica de obtenclón de
anticuerpos monoclonales contra la superfície de R.
mellloti para poder identificar y estudiar Ias estructuras responsables de tal Interacción.
Loi íoiíataiai
( E . C . 3 . I . 3 ) pueden nemoveA íoiíato
de impontantei
compueitoi
celulatei
y xenobiâticoi.
VaAíoi
de
loi
compueitoi-íoiíato
endâgenoi
eitín
involucAadoi
en
ptoceioi
de tAaniíeAencia
de enengia
bioquímica
(ATPI y
p/wceioi
legulatoiioi
[pnoteinai
íoiíoliladai).
Se ha iu
genido
tambiín
pana la íoiíataia
ácida
an >iol en la nu-~
tAiciõn
del T.
cAuzi.
Loi epimaitigotei
de T. CAUZÍ contienen
una
actividad
íoiíat&iica
liioiomal
[pH 4.0) y doi citoiâlicai
(pH 5.5
y S.O). Se han deiCAito
ademdi Vieí, ATPaiai
unida* a mem
bAana: doi Mg^*-ATPaia,
una oligomicina-ieniible
y la otAa ouabaína
u oligomicina
inieniible;
y una
Ca?*-ATPaia.
UayoK conocimiento
iobie
la hidAôliiii
de íiteAei
íoifato
en eite pxndiito
podnia
izA útil
paw. el deiafuvollo
de nue
vai dAogai fUpanoiomicidai.
En eite
tAabajo
ie
pieien-~
tan la hidAâtUii
de vatioi
compueitoi-íoiíato
íiiiolôgi
coi
y pwteXnai
íoi íoiiladai,
catatizada
pon loi
íoi&ata
iai
dcidai
y alcalinai
ptieientei
en ÍAaccionei
iubcelula
lei
de T. cAuzi.
Loi íiaccionei
iubcelulatiei
ie
obtuvie>wn pox centhiíugaciân
diíeAencial
de homogeneimdoi
de
T. cAuzi.
La actividad
íoiíat&iica
ie detenminõ
midiendo el íoiíato
inon.g6.nico
pnaducÁdo
en la neacciõn.
La
íoiíataia
liioiomal
pKeieAenciaJtmente
hidnotiza
ÍiteAei
íoiíato
de bajo peio moleculan;
Iai íoiíataiai
ciXoiõlicai alcalinai
actúan pivmaAiamente
iobue
pAoteinai
éoiío
niladai.
El paAéUito
tambiín
contiene
una
glucoia-6-íoi~
íataia
micAoiomal
y ATPaiai
actívadai
poi M g
y Ca deAivadai
de membhana. plaimStica
y
mitocondAial.
Se discute
en el texto
el poiible
loi que eitai
diíeAentei
actividadei
íoiíatóLiicai
podAian
teneA
en
piwceioi
legulatoAioi
u ot>wi pàoceioi
íiiiolõgicoi.
La fusion se realizo (según Milsteln) entre células de mieloma de ratón NSO y linfocitos de bazo de
ratones Balb/c inyectados 3 días antes intraesplenicamente (M. Spitz y E. Eugui) con una suspension de
bactérias enteras cosechadas en fase logarítlmlca a
una dlluclón de 2 x 10' bact/ml.
La presencia de anticuerpos en los sobrenadantes
de I D S hibrldomas se detecto con la aplicación dei
ensayo de inmunoabsorción ELISA con anticuerpo unido
a peroxidasa.
La selección de los anticuerpos de
realizo en base a su capacidad de unión a Ias bactérias enteras fijadas mediante poll-L-lisina y glutaraldehído à la superfície de lãs placas de "multiwell" de poliestireno.
Se obtuvieron así un 10? de
hibrldomas positivos.
Actualmente nos encontramos
en la etapa de clonado y caracterización de estos
anticuerpos.
z +
2
financiado
pon. COULCVT-CHILE,
UWP/WB/WHO/TVÍt,
departamento de VeiohAollo
de la Inveitigaciõn.
UniveAiidad
de
Chile.
Giant B-IS54.
ESTÚDIO DE LA FUNCIÓN Y LOCAL IZAC I ON HISTOLOBICA DE
ACROSINA POR ANTICUERPOS MONOCLONALES. (Functional and
histological
studies on acrosin by monoclonal antibodies) «Levton. L..«»Elce J.
«Laboratório de Innunologla. Departamento de Biologia
Celular, Facultad de Ciências Biológicas Pontifícia
Universidad
Católica de Chile y ttDepartnent
of
Biocheeistry, Queen's University, Ontario-Canada.
Anticuerpos eonoclonales dirigidos contra
acrosina
bovina fueron utilizados para estudiar
la participación de acrosina hunana en el proceso de fecundaciòn y su localización histologics.
Los anticuerpos
fueron obtenidos in«uni2ando ratones híbridos CBòFl/J
con acrosina bovina purificada y fusionando
los
linfocitos esplénicos con células de la linea sieloide
Sp2/0. Se seleccionó el hibridosa Acr-C2E5, secretor
de IgG, porque presenta reacción cruzada, por inaunof1uorescencia indirecta, con la region acrosoaal de
esperaatozoides huaanos, surinos y bovinos.
El análisis innunohistoquieico en cortes de epidldino y testículo de ratón indica que el antigeno se
expresa desde estados nuy teepranos de la esperaatogenesis. Para estudiar la participación de la enziaa
en la fecundaciòn, se investigo el efecto
inhibitorio
de Acr-C2E5 en bioensayos. La penetración de ovocitos
de haester sin zona pelúcida por espernatozoides huaanos no fue interferida por el anticuerpo Monoclonal.
La adeinistración
pasiva de Acr-C2E5
por via
intraperitoneal en henbras de ratón de la cepa CF1,
prévio al cruzaniento con aachos fèrtiles, no iepidiò
la fecundaciòn y desarrolló de los eebriones. Sin
enbargo, este anticuerpo Monoclonal
es capaz
de
inhibir especificaeente
la disolución
de la zona
pelucida de haaster por acrosina hunana purificada.
Este efecto ha deeostrado ser dependiente de la dosis
de anticuerpo enpleada en el ensayo.
La falta de inhibición de Acr-C2E5 en el ensayo de
ferti1ización in vivo podria explicarse ya sea porque
la enziea no es escencial para la fecundaciòn o porque
el epitope reconocido, no está expuesto
en
el
espereatozoide fertilizante.
Financiado por grant IDRC: 3-P-S3-1006-01.
LUMINISCENCIA VISIBLE ASOCIADA A LIPOPEROXIDACIÕN (Visible c h e m i l u m i n e s c e n c e from L i p o p e r o x i d a t i o n ) . L i s s i , E.A. y V i d e l a , L.A.
Depart a m e n t o de Q u í m i c a , U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de
C h i l e y U n i d a d de B i o q u í m i c a , F a c . de M e d i c i n a
O c c i d e n t e , U n i v e r s i d a d de C h i l e ( P a t r o c í n i o : E .
Cardemil).
L o s p r o c e s o s de l i p o p e r o x i d a c i õ n son
a c o m p a ü a d o s de l u m i n i s c e n e ia. El o r i g e n de e s te p r o c e s o no ha sido aun c l a r i f i c a d o , p e r o se
a c e p t a g e n e r a l m e n t e que una de sus p r i n c i p a l e s
f u e n t e s son r e a c c i o n e s e n t r e r a d i c a l e s p e r o x i dados que producirían carbonilos excitados. A
fin de c o n t r i b u i r a la d i l u c i d a c i ô n de este
p r o b l e m a , n o s o t r o s h e m o s r e a l i z a d o un e s t ú d i o
s i s t e m á t i c o d e i e f e c t o de a n t i o x i d a n t e s sobre
la l u m i n i s c e n c i a . El s i s t e m a s e l e c c i o n a d o fue
la a u t o o x i d a c i o n de h o m o g e n i z a d o de c é r e b r o .
L o s r e s u l t a d o s o b t e n i d o s m u e s t r a n que la l u m i n i s c e n c i a e m i t i d a c o r r e l a c i o n a con o t r o s i n d i c a d o r e s de l i p o p e r o x i d a c i õ n . S i n e m b a r g o c u a n do los a n t i o x i d a n t e s son a g r e g a d o s a m u e s t r a s
p r e - i n c u b a d a s a c o n c e n t r a c i o n e s t a l e s que el
p r o c e s o de l i p o p e r o x i d a c i õ n se d e t i e n e , se o b s e r v a solo u n a d i s m i n u c i õ n p a r c i a l de la l u m i n i s c e n c i a . A p a r t i r de los p e r f i l e s de d e c a i m i e n t o p u e d e c o n c l u i r s e que a p r o x i m a d a m e n t e el
5 0 % de la luz p r o v i e n e de un i n t e r m e d i á r i o que
decae con una c i n é t i c a de p r i m e r o r d e n y que
posee una v i d a m e d i a de a p r o x i m a d a m e n t e 40 seg
a 32°C y que p r o c e s o s b i m o l e c u l a r e s en r a d i c a les,
t a l e s como la r e c o m b i n a c i õ n de r a d i c a l e s
p e r o x i d a d o s , no c o n t r i b u y e n s i g n i f i c a t i v a m e n t e
a la 1 u m i n i s c e n c i a o b s e r v a d a .
R 222
PURIFICATION Y CARACTERIZACIÓN DE FERRO- Y COBALTCQUELATASA.(Purification and characterization of ferro— and
cobaltochelatase) .Llambias,E.B.C. y Cânepa,E.T.
Departamento de Química Biológica,Facultad de Ciências
Exactas y Naturales,Universidad de Buenos Aires,Argentina
Ferro- y cobaltoquelatasa catalizan la incorporaciõn de
Fe2+ y C C * en mesoporfirina,respectivamente.En Reunic—
nes anteriores,presentamos estúdios de purificación de
ambas actividades enzimáticas a partir de higado de cer
do.En el presente trabajo,se determinan Ias propiedades
de Ias fracciones purificadas aproximadamente 400 veces,
para determinar si una sola enzima está involucrada en
ambas catálisis.Se incuban los sustratos y la proteína
purificada en atmosfera de N2 por 90 min a 370C y se de
termina la metalporfirina formada por el complejo piridinico.El peso molecular de ambas actividades es 240000.
El pH y temperatura óptimos,y Ias energias de activación
son similares para ferro- y cobaltoquelatasa.Los valores
de Km son,para la inserción dei Fe2+, 23,3uM para el metal y 30,3 fM para mesoporflrinajpara la actividad de
cobaltoquelatasa son 27 uM y 45,5 juM,respectivamente.Cada metal protege contra la inactivación por calor.Pb *,
^ 2 + ^ 2 + y Hg
inhiben ambas actividades enzimáticas,
mientras que el Mn aetiva; M g
no tiene efecto en Ias
concentraciones probadas.Los grupos sulfhidrilo están
involucrados en la inserción dei metal.Los lípldos activan en correlación creciente con su grado de lnsatura
ción,mientras que distintos fosfolípidos tienen efectos
similares.Se concluye que una sola proteína cataliza la
inserción de F e
y Co
en mesoporfirina.
2
2
2 +
2+
2 +
2 +
2 +
A S 0 C I A C I 0 N ENTRE MARCADORES G E N É T I C O S Y C A R D I 0 PATIA CHAGASICA.
( C o r r e l a t i o n between
gene
m a r k e r s a n d c h a g a s i c c a r d i o p a t h y ) . E . L I o p ; M.
Acufla; F. Rothhammer y W. A p t .
D e p a r t a m e n t o de
Biologia
C e l u l a r y G e n é t i c a , F a c u l t a d de M e d i c i
n a , D i v . N o r t e y D e p t o . de P a r a s i t o l o g f a , F a c u T
tad de M e d i c i n a , D i v . S u r de
l a U n i v e r s i d a d de
Chile.
Con e l o b j e t o de e v a l u a r l a r e l a c i ô n e x i s t e n _
te e n t r e v á r i o s
s i s t e m a s de
marcadores genétj_
cos y l a s u s c e p t i b i 1 i d a d
a desarrollar
cardiop a t f a c h a g á s i c a , se e s t ú d i o
u n a m u e s t r a d e 104
individuos
serológicamente p o s i t i v o s para
enfer
medad de C h a g a s , r e s i d e n t e s
en I a s c i u d a d e s de
Combarbalá e
Illapel,
localizadas
en el
área
c h i l e n a más e n d ê m i c a .
Esta muestra se t i p i f i c o
p a r a u n a b a t e r i a de m a r c a d o r e s g e n é t i c o s q u e iri
cluyeron los sistemas ABO, Rh, Duffy y HLA.
Los r e s u l t a d o s r e v e l a r o n d i f e r e n c i a s
signify
c a t i v a s p a r a l o s a l e l o s c D E , A 3 , B 1 8 , B40 y Cw2
También se encontraron d i f e r e n c i a s
significati_
vas para los haplotipos
B40Cw3, A28Cw4 y A3B5.
Nuestros resultados
s o n de n a t u r a l e z a
preliminar, sin embargo,
dada l a a n t i g u e d a d
d e l a en_
f e r m e d a d en e l M o r t e de C h i l e , e s t o s
p u e d e n in_
d i c a r l a e x i s t ê n c i a de una
adaptación
genética
de I a s p o b l a c i o n e s a b o r í g e n e s
chilenas
a T .
cruzi .
(Financiado por
Proyecto
B-1891-8635,
D.I.B.
y G r a n t 8 2 5 9 9 / U N D P / W o r l d B a n k / Who s p e c i a l P r o
grame f o r Research and T r a i n i n g i n T r o p i c a l D i seases ) .
RELACIÔN ENTRE ENZIMAS ANTIOXIDANTES Y QUIMIOLUMINISCEN_
CIA EN RATAS HIPERTIROIDEAS ( Relation between antioxidant enzymes and chemiluminescence in hyperthyroid rats)
Llesuy, S., Solari, L., Gonzalez Flecha, B. y Boveris, A.
Instituto d e Química y Fisicoquímica Biológicas, Facultad de Farmácia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires.
El hipertiroidismo produce un aumento del metabolismo basal, con un aumento del consumo de oxigeno por parte del organismo. Este efecto está relacionado con la cji
lorigênesis característica de animales hipertiroideos,
la cual se asocia a un aumento de la respiraciõn celular
en corazón, higado, rinõn y otros tejidos. Se estúdio:
a) la quimioluminiscencia in vivo; b) la quimioluminiscencia iniciada por hidroperõxido de ter-butílo y c ) los
niveles de enzimas antíoxidantes en higado de ratas Long
Evans ( 140-200 g. de peso ) a la que se les administra
intraperitonealmente Na-L-triiodo tironina durante 1, 3,
5 y 7 días consecutivos. Los valores obtenidos muestran
un aumento de la quimioluminiscencia in vivo e in vitro,
hasta el 3°día de tratamiento, mostrando una saturación
para los demãs días. El incremento fue de un 150% en la
quimioluminiscencia in vivo para el dia 3 de tratamiento
y de un 60% para la quimioluminiscencia de homogeneizado
iniciada por hidroperõxido de ter-butilo 3 mM., respecto
de los valores controles. Se observo una disminuciõn de
los niveles de superõxido dismutasa, catalasa y glutatiõn peroxidasa para el mismo período. Aparentemente estos resultados índicarían que la triodo tironina produciría un incremento en la velocidad de producción de aniõn superõxido, con el consecuente aumento de la concen
traciõn en estado estacionario de dicha espécie en el ci_
tosol de la célula hepática de los animales hipertiroideos. Esto llevaría a un aumento de la lipoperoxidaciõn,
y el consumo celular extra de oxigeno, debido a dicho d£
sequilibrio, contribuiria a la elevaciõn dei consumo glo^
bal de oxigeno y dei metabolismo basal, característico
dei hipertiroidismo.
FITOl'LANCTON D E L R I O R E C O N Q U I S T A (PCIA BS . A S . ,
ARGENTINA): RESULTADOS PRELIMINARES.(Phytoplank
t o n o f t h e R e c o n q u i s t a R i v e r (Bs. A s . , A r g e n t i n a ) ;
preliminary resulta.) Loez.C.R.. Tell.H.G. y
Salibian,A. Univ.Nac.Lujan, Univ. Buenos Aires,
CIC y CONICET.
El R i o R e c o n q u i s t a n a c e e n u n a z o n a r u r a l al O
d e la P c i a d e B s . A s . y f l u y e al E a t r a v e s a n d o
centros urbanos muy industrializados, resultan
d o m u y c o n t a m i n a d o en s u s t r a m o s f i n a l e s , y d ê
s e m b o c a e n el e s t u á r i o d e l R i o d e la P l a t a . S u
r e c o r r i d o se e x t i e n d e u n o s 8 5 k m ; s u c a u d a l va
3
r i a d e 6 9 0 0 0 a 1 7 0 0 0 0 0 m / d i a el q u e s e i n c r e _
menta significativamente después de grandes
lluvias.
S n m u p K t r o a r o n m o n s u n l m o n t e , d u r a n t e un a n o ,
c u a t r o p u n t o s s e l e c c i o n a d o s s e g ú n el g r a d i e n t e
d e c o n t a m i n a c i ó n . Se e v a l u a r o n algunas d e sus
características abióticas, relacionándolas con
la e s t r u c t u r a y d i n â m i c a d e i f i t o p l a n c t o n s u _
perficial y c o n las fluctuaciones d e los pig_
mentos fotosintetizadores. Se contaron diato_
m e a s p e n n a d a s , d i a t o m e a s c é n t r i c a s , clorofitas,
cianofitas y euglenofitas.
Las primeras reve_
l a r o n ser el g r u p o d o m i n a n t e ( 3 0 - 7 0 % )
en to_
d o s los c a s o s y fueron seguidas por Ias cloro
f i t a s (21-33%)i su d e n s i d a d o s c i l o
entre
4
6
IO
y
I O ind/litro. La clorofila "a" vario
e n t r e 0,22 y 3 8 , 7 3 u g / 1 . L a s c o n d i c i o n e s fisi
co-químicas dei rio estudiado podrían conside
r a r s e extraordinárias por los v a l o r e s atípicos
que alcanzan algunos parâmetros(p.ej. pH,
10,lijSÓlidos totales,1200 mg/l;Oxígeno disuel
to,0,15 mg/ljConductividad,2000 S / c m ) ; no o b s "
t a n t e se e n c o n t r a r o n c o n r e g u l a r i d a d y a b u n _
danei a p o b l a c i o n e s d e M i c r a c t i n i u m p u s i l l u m ,
Actinastrum hantzchii, Closterium monilifRrum,
Eudorina eleqans,Scenedesmus quadricauda y
Melosira qranulata.
R223
7,5-DI0X0VALERIC0 TRANSAMINASA EN EuqtcnCL gKadtU:
CINETICA Y MECANISMO DE ACCION. (Euglcna
QMLOA&U
7,6dioxovaleric acid-transaminase: Kinetics and mechanism
of action) Lombardo, M. E, Araújo, L. S., Rossetti, M.
V. y Batlle, A. M. del C.
Centro de Investigaciones sobre Porfirinas y Porfirias
CIFYP- (FCEN,UBA y CONICET),
AUMENTO EN LA RESPUESTA DEL ENSAYO DE MICRONUCLEOS MEDIANTE FENOBARBITAL 0 CAFEÍNA.
(Enhancement of micronucleus test response
using phenobarbital or caffeine).Lopez,J.C.,
Inostroza.M.E.,Orellana,M.,Lafuente-Indo,N.,
Lab.Genética Toxicológica,Fac.de
Odontologia,Universidad de Chile.
Todas las porfirinas se caracterizan por comenzar su
síntesis a partir del ãcido 5-aminolevülico (ALA). En
la actualidad se acepta que este precursor específico
puede ser sintetizado por dos vias enzimãticas distintas. En una de ellas interviene como sustrato SuccinilCoA y Glicina (via dei ALA-Sintetasa); mientras que en
la otra, precursores de cinco átomos de carbono llegan
a ãcido Y,ô-dioxovalérico (DOVA) el cual es convertido
en ALA por una transaminasa (via de la DOVA-Transaminas_a) .
Para la DOVA-T de Euqlma.
QhJXCÂjUj,
caracterizamos
la forma enzimãtica presente y establecimos el aminoãci
do específico que participa en la reacción (L-glutamato)
Con DOVA y L-glutamato como sustratos realizamos estúdios de velocidades iniciales; definimos la afinidad de
la proteína por los distintos sustratos (K DOVA=0.99mM,
K Glutamato=12.60mM) y para concentraciones de DOVA mayores de 6mM encontramos que se produce una marcada i nhibición (K^ D0VA=14. 74raM) . También analizamos la posi^
ble inhibición por productos y sustratos análogos, tratando de justificar la forma de interactuar de cada uno
de ellos.
El ensayo de micronúcleos es uno de los
más usados para detectar sustancias químicas
potencialmente mutagénicas y/o carcinogénicas
Aunque este ensayo es bastante sensible, algu
nas sustancias tienen una baja acción mutagênica, que hace difícil su detección.
Como conclusion, en base a los resultados obtenidos
comfirmamos el mecanismo de acción (tipo ping-pong) característico de las transaminasas y en el mismo identificamos los puntos en los cuales interactüan los distin
tos componentes de la reacción.
En el presente trabajo, se estudia el p o sible efecto de fenobarbital y cafeina en el
aumento de la respuesta clastogénica inducida
por ciclofosfamida(CFA), un conocido agente
mutagénico que necesita ser activado enzimati
camente en el hígado para ejercer su acción.
Se someten ratones Mus muscuius a una inyección i.p.de 100 mg/Kg de CFA, õtros dos
grupos reciben un pre-tratamiento con fenobar
bital o cafeina. Los grupos controles reciben
un único tratamiento con euero fisiológico,fe_
nobarbital o cafeina.
Los resultados indican un aumento en la
respuesta positiva, tanto con fenobarbital
como con cafeina, lo que indicaria dos maneras de aumentar la genotoxicidad: una aumentando la metabolización dei compuesto mediante fenobarbital y otra inhibiendo la reparaciÓn dei dafío mediante cafeina.
Se discuten el método y los posibles mecanismos involucrados.
ESTABILIDAD DE MICR0TUBUL0S AS0CIAD0S A ESTRUCTUFAS MEMBRANOSAS(Stability of microtubule associate to membraneous structures)Lopez,L.A.;Ber6n,W.;Bertlni,F.
IHEM-CONICET,U.N.Cuyo.Mendoza,Argentina
Anteriormente separamos microtubules (MT)de un homogeneizado de cérebro de rata por centrifugación diferencial
en cuatro sedimentos(l).Los sedimentos de menor velocidad estén enriquecidos en microtübulos libres(MTL) y los
de mayor velocidad en microtübulos asociados a estrueturas membranosas(MTA).También vimos que en las fracciones
ricas en M T A la tubulina es más resistente a la depolimerización en médios pobres en glicerol que la de las
fracciones ricas en MTL.
Con el propósito de comprobar si esto se debe a que los
M T A son más estables que los MTL.desarrollamos estos experimrntos:a)depolimerizar en forma parcial los M T del
sedimento P3 por resuspención en médios deficientes en
glicerol(G),25%,10% y 0%.b)determinar el % de tubulina
depolimerizada.c)medir por morfometría la longitud media
y el % de MTU y MTL.
La tubulina se depolimerizó en los medios en la forma
siguiente:G25 (8,3%),G10 (40,5%) y GO (51,7%),mientras
que la longitud media de los microtubules decreció en
los siguientes porcentajes:G25:MTA 3% y MTL 7,5%;en G10:
MTA 10,3% y MTL 23%;en GO: MTA 20% y MTL 30,7%
Los resultados apoyan la interpretación de en medios
deficientes en glicerol los MTA son más estables que los
MTL.Por lo tanto ,1a labilidad está directamente relacionada al porcentaje de MTA en los sedimentos.
SITIOS LIGANTES TIPO II OCUPADOS Y DESOCUPADOS DE
ESTRÕGENO EN CANCER DE MAMA HUMANO.
unoccupied
breast c a n c e r ) . L o p e s , M . T . P . * , L i b e r a t e
M.H. **,
Widman, A.*** y Brentani, M.M.**
*
Fundação Centro de Pesquisa de Orcologia
**
Laboratório de Oncologia Experimental
***
Departamento de Cirurgia do H.C. da FMUSP
da FMUSP
Using a saturation analysis over a wide
3
range of ( H) estradiol at two temperatures
49C
and 229C we have determined unoccupied
and
total
(49C)
(229C) type II estrogen binding site
(EBS)
levels in individual cytosols of 100 patients with
breast cancer
(50 post and 50 p r e m e n o p a u s a l ) .
change w a s found to be complete after
18h at
and receptor degradation w a s negligible
this treatment. Steroid specificity
and
Ex229C
during
affinity
determined by Scatchard and Rosenthal plot
ana-
lysis were not altered at 229C. Carcinomas
present
ed a higher total type II EBS level as compared to
unfilled type II binding
independently
sites or th€: classical ER,
of menopause: status, phase of
the
menstrual cycle or positivity of ER. O n the
other
hand, unoccupied
correlated
(1) Separation of microtubule population in rat brain
homogenates by differential centrifugation.
Lopez,L.A.;Bertini,F.- BRAIN PES. (1986) in press.
(Occupied and
type II estrogen binding sites in human
type II EBS level w a s
higher on the post-menopausal
tients.
strongly
to the concentration of type I ER, being
group and older
pa
R224
VARIACIÕN ESTACIONAI. DE LA ZONACIÓN DE ESPÉCIES SESILES
EN EL INTERMAREAL ROCOSO DE VILLA COCHOLGÜE,BAHIA DE CON
CEPCION, CHILE. (Seasonal zonation changes of sessile
species in the rocky intertidal of Villa Cocholgüe. Concepción Bay. Chile). López,M.T.;G.Lara « A.Quezada.Depto
de Oceonología y Zoologia. Universidad de Concepción y
Depto.Biologia.Pontificia Universidad Católica - Temuco.
L o t u d i u s comunitários en el intermareal rocoso han
confirmado la existência de una estructura comunitária
tipo, que queda en evidencia por el esquema de zonación
en franjas de organismos. Investigaciones realizadas en
la zona litoral de la Bahia de Concepción han caracterizado este esquema fundamentalmente desde el punto de
vista faunístico (Alvarez,1964) notándose una falta de
estúdios integradores de los componentes faunístico y
florístico.
En el presente trabajo, se describen los câmbios estacionales en la abundância de Ias espécies intermareales sésiles (algas e invertebrados) de Villa Cocholgüe.
Para ello durante 1978 y 1979, se realizaron muestreos
mensuales en Ias franjas e interfranjas de la zona lito
ral rocosa en un ãrea de 6 x ^ m, extrayendo mensualmen
te al azar muestras de 100 cm mediante denudación de
ãrea.
El análisis de la abundância mediante índices de similitud, de la riqueza y de la diversidad específica
permiten concluir que existe un esquema de zonación característico conformado por 22 espécies sésiles así como una variaciõn estacionai, a pesar de observarse una
estructura aparentemente sin câmbios.
C0NTRIBUCI0N AL C0N0CIMIENT0 DE LA FLORA TERCIARIA EN
LA ZONA CARBONIFERA DE ARAUC0-CONCEPCI0N CHILE.
(Contribution to the knowledge of the Tertiary Flora
in the Carboniferous zone of Arauco-Concepción, Chile).
Lopez, P., Rondanelli, M. Departamento de Geociencias,
Facultad de Ciências, Universidad de Concepción. (patrocinio: 0. Matthei).
El presente estúdio, basado en el análisis palinológico y de improntas permite hacer consideraciones sobre
la paleoflora del Terciario Carbonífero de Arauco-Concepción.
Para el análisis de las muestras se utilizaron métodos
analíticos-experimentales, estadísticos, de correlaciôn
estratigráfica y estúdios comparativos con las espécies
vegetales actuales; determinando con ello, la afinidad
fitosistemãtica actual de palinomorfos e improntas.
En este estúdio, se han encontrado desde esporas de hon
gos hasta granos de polen de Gymnospermas y Angiospermas.
Las improntas determinadas corresponden a Ias
Magnoliatae. La tafoflora observada indica para el
Eoceno de Arauco-Concepción un ambiente subtropical a
templado y muy hümedo y para el Mioceno un ambiente tem
piado a frio, persistiendo Ias condiciones de alta humedad.
Este estúdio paleobotãnico forma parte de una serie de
investigaciones que se llevan a cabo actualmente en el
Departamento de Geociencias de la Universidad de Concepción y cuyo objetivo fundamental es contribuir al
conocimiento paleobotãnico de Chile y Sudamérica.
Financiado por Proyecto 2.08.69; Universidad de Concepción .
C0MPRESI0N D E NERVIO PERIFÉRICO: ASPECTOS M0RF0L0GIC0S. (Compression of peripheral n e r v e :
morphologic aspects).
L u t z , A. y F r i t s c h , R.
Lab. Neurocitología, Fac. Ciências B i o l ó g i c a s ,
Univ. Católica de Chile, Santiago, Chile.
(Patrocinio: V. Valdivieso. )
L a d e n s i d a d m i c r o t u b u l a r es u n a f u n c i ó n
inversa bastante rigida del calibre n>onal. Co
m o u n a c o m p r e s i ó n d e l n e r v i o d i s m i n u y e el c a l i
b r e a x o n a l , s e e s t u d i a r á , si l a c o r r e l a c i ó n
entre microtübulos y calibre se afectaSe u s o n e r v i o s u r a l d e g a t o s a d u l t o s . Se
c o l o c o a l r e d e d o r d e él u n t u b o d e s i l a s t i x c o n
una ligadura.
A los 4 5 t/ias se e x t r a j e r o n y
se usó los nervios c o n t r a l a t e r a l s como control.
Se p r o c e s o p a r a m i c r o s c o p i a e l e c t r ó n i c a .
Se midieron Ias áreas y se contaron los microt ü b u l o s d e a x o n e s a m i e l i n i c o s en z o n a s d i s t a i
y proximal del nervio.
En el c o n t r o l l a s
áreas de los axones en ambas zonas no difirieroíi 53 c;rificativãmente.
En la z o n a d i s t a l a l a
compresión, todos los axones amielinicos d e g e neraron.
En I a s z o n a s p r o x i m a l e s a l a c o m p r e s i ó n d i s m i n u y ó el á r e a d e los a x o n e s . El espec
t r o d e á r e a s es s e m e j a n t e al d e i l a d o c o n t r o l ,
pero con un desplazamiento hacia la izquierda.
El n ú m e r o d e m i c r o t ü b u l o s t a m b i é n d i s m i n u y ó p o r
e n c i m a d e l a c o m p r e s i ó n , sin e m b a r g o l a c o r r e lación entre densidad microtubular y calibre
se mantuvo normal.
Concluímos que número d e microtübulos,
d e n s i d a d y á r e a son v a r i a b l e s e s t r e c h a m e n t e
dependientes.
R E S Í D U O S DE A R G I N I N A C A T A L I T I C A M E N T E I M P O R T A N TES EN LA C A R B O X I Q U I N A S A F 0 S F 0 E N 0 L P I R U V I C A DE
L E V A D U R A S . ( E s s e n t i a l a r g i n y l r e s i d u e s in yeast
phosphoenolpyruvate carboxykinase). Malebrán,
L.P. y C a r d e m i 1 , E. D e p a r t a m e n t o de Q u í m i c a ,
U n i v e r s i d a d de S a n t i a g o de C h i l e . (P:S.Bazães).
f o sf oen o l p i r ú v i c a ( PEPCK) ,
La c a r b o x iquin
sibl
liza la re ac c ió
PEP + AD P + HCO
x a l a ceta t o + AT
obre la part ic ipac ión
Est ud los r eal i
de r e s iduos de a r g i
en di er sa s e n z i m a s ,
han esta blecid o que
o s tien en u n papel e s e n ciai en enz ima s cuy
us t rato s so n a n i ó n i c o s .
Dada la n a t u r a leza
os sus t rato s y produc tos,
se c ons I d eró in t er e
e e 1 es tudi ar la p r e s e n c ia de d icho s r e s id
en e 1 s Itio a c t i v o de la
re ac t i v o s , f eenz i:ma . P a r a e 11o s
aro n do
nilg liox al y 2 3-bu
dio n a . L o s re s u l t a d o s
on
uger
ir la p r e s e n
prel imln res n os pe
ier
c ia de r es iduo s de
nin a en el sitio a c t i v o
de 1 a en z ima.
En el pre sente t r a b a j o , se p r e s e n t a n resul
t ado s de la cu a n t i f i c a c i ó n q u í m i c a de e l l o s ,
dond e se da ev i d e n c i a de la p r e s e n c i a de un r e s idu
es ene ial de a r g i n i n a por s u b u n i d a d activa
de
n z ima.
ue el efecto p r o t e c t o r de los
El h e c h o
sea función de su c o n c e n t r a sus t rato s y Mn
pe rmitió d e t e r m i n a r Ias c o n s t a n t e s de d i ciôn
lgunos complejos enzima-1igando,
soei ac ió n de
enco ntrá n d o s e v a l o r e s de 168±44yM para E - A D P ,
244± 54yM para E-PEP y 23±3viM para E - M n . Se en
y ADP p r o t e g e n t o t a l m e n t e a la
c on tr ó q ue M n
la i n a c t i v a c i ó n en tanto que PEP solo
enzi a d
lo h ace en for ma pare i a l .
+
2 +
2
Financiado
por D I C Y T , U S A C H .
PURIFICACION DE UNA PROTEINA ACTIVADORA DE TÜBERCULO DE S. tuberosum. (Purification of activating protein from S. ""tuberosum tuber). Manci11a, M . , Valenzuela, M.A., Kettlun, A.M., Fanta, N., Traverso-Cori, A". Depto de Bioquímica y
Biologia Molecular, Fac. de Cs. Químicas y Farmacêuticas, Universidad de Chile.
La apirasa es una difosfohidrolasa que al pa
recer cumple un rol relevante durante el desarrollo del tubérculo. Esto se deduce por dos
razones: a) Se ha demostrado un aumento en masa
en un período determinado del desarrollo, b) Se
han identificado dos proteínas que regulan su
actividad (activador e inhibidor).
Se ha intentado purificar la proteina activa
dora a partir del tubêrculo de S. tuberosum tan
to de var. ultimus como var. Desiree, con el
fin de poder caracterizar algunos parâmetros.
El esquema de purificaciôn propuesto consiste
en una precipltaciôn 0-50% con (NH >2S04 en un
extracto de papas seguido de calentamiento y
concentración por liofilizaciôn. A partir de
esta fracción semipurifiçada se han intentado
diferentes tipos de columnas consistentes en se
paraciones por carga y por peso molecular, l a s
cuales no han dado resultados concluyentes por
la gran inestabilidad de Ias fracciones obtenidas.
Finalmente, se ha intentado una columna de
afinidad de CM-Celulosa a la cual se le ha unido covalentemente apirasa.
Se propone que esta proteína podría ser indu
cible ya que desaparece en tubérculos envejecidos o almacenados por un tiempo prolongado.
—
4
-
Proyecto B-2079-8624 D.I.B., Universidad
Chile.
de
PROTEÍNAS SERICAS EN LAS ENVOLTURAS VITELINAS DE 0V0CIT03
DE BUFO ARENARUM.(Serum proteins In the vitelline envelope of Bufo arenarum oocytes.) Mansilla, Z.C., Perdigõn,G.
Fernandez, S.N. y Miceli, D.C. Inst. Sup. de Inv. Biol(INSIBIO)- (CONICET_UNT)- S.M. de Tucumán-Argentlna.
Las secreciones oviducales en los anfíbios están directamente involucradas en el proceso de la fecundaciõn. Loa
ovocitos solo pueden ser fecundados después de atravesar
la primera porciõn dei oviducto denominada pars recta (PR)
Mediante técnicas inmunoquímicas y electroforéticas se
demuestra que el fluido de secreciõn de PR está constituído por una fracción considerable de proteínas de origen
plasmãtico.
Los anticuerpos contra Ias proteínas dei fluido de secreciõn de PR permitieron detectar mediante inmunofluorescencia indirecta proteínas de dicha secreciõn en Ias envolturas vitelinas de ovocitos que no han atravesado el
oviducto, lo que sugiere que las mismas son de origen
plasmãtico. Observamos que los anticuerpos contra Ias secreciones de PR purificados mediante inmunoadsorbentes
producen la disoluciõn total de la envoltura vitelina de
ovocitos de PR y que el suero de conejo normal inhibe el
efecto biológico de Ias proteínas dei fluido de secreciõn
de PR.
Dado que es conocido que: a) En Bufo arenarum no
existe la via clãsica dei complemento y en cambio se ha
demostrado la via alterna activable por enzimas proteolíticas similares a tripsina y plasmina. b) El fluído de secreciõn de PR posee actividad proteolitica sijnilar a tripsina y plasmina y al contacto con las envolturas <ívt>citarias produce la desorganizaciõn de la trama glicoproteica
de la misma. c) En suero de mamíferos se encuentran multiples inhibidores dei complemento, d) La envoltura vitelina posee proteínas séricas englobadas en su trama glicoproteica. Surge entonces como interrogante
si los factores del complemento estãn involucrados en el proceso
de Ias fecundaciõn.
R 225
EFECTO DE LA ADRENALINA SOBRE LA BIOSINTES1S
DEL ÁCIDO ARAQUIDÓNICO EN CÉLULAS AISLADAS
DE
CORTEZA
SUPRARRENAL
DE
RATA. (Effect
of epinephrine on arachidonic acid biosynthesis in
rat isolated adrenocortical cells). Mandon. E.C. y
G6mez Dumm. I.N.T.de.
(INIBIOLP), CONICET-UNLP, Facultad de Cs.Médicas,
Universidad Nac.de La Plata, La Plata, Argentina.
La actividad de las desaturasas hepãticas de los
mamíferos estã regulada por varias hormonas. Reclentemente nosotros hemos descripto la presencia de
A 6 y A 5 desaturasas activas en los microsomas
de glândula suprarrenal de rata que se inhiben cuando
se administra adrenalina In vivo. Tenlendo en cuenta
la diversidad de funciones de Ias distintas células
que componen la totalídad de la glândula suprarrenal
y las innumerables variables que intervienen en el
animal entero, en este trabajo hemos restringido el
estúdio a Ias células aisladas de la corteza suprarrenal
(zona fasciculata-retlcularis) y hemos estudiado el
efecto de la hormona in vivo e in vitro. Se trataron
ratas con adrenalina (1 mg/l kg peso corporal) y se
sacrificaron a diferentes tiempos. Se aislaron Ias células
de Ia corteza suprarrenal y se incubaron en presencia
del Scldo 1-14C eicosa-8,ll,14-trienoico (20:3n6). Se
observo que dichas células incorporan rapidamente
el ãcido 20:3n6 y lo desaturan a ãcido araquidónico.
La incorporación de este ãcido y su transformacíõn en ãcido
araquidónico disminuye en Ias células de animales tratados
con adrenalina. En cambio, el agregado de adrenalina al medio de incubación de células obtenidas de animales
no tratados no modifica significativamente la incorporación
y desaturaciõn dei ãcido 20:3n6. Se concluye que la
adrenalina administrada al animal entero deprime
la actividad de la A 5 desaturasa en la corteza suprarrenal
de rata. El hecho que este efecto no haya podido
ser reproducido in vitro hace presumir que la acciõn
hormonal se realizaria indírectamente.
H I S T O E S P E R M I O G E H E S I S T Í P I C A Y A T Í P I C A DE S a n t o c h o r u s
c a s s i d i f o r m e ( M U R I C I D A E : PR0S0BRANCH I A ) . ( T y p i c a l a n d
a t y p i c a l Spermiogenesis from Santochorus c a s s í d i f o r m e
[Muricidae: Prosobranchia]).
M a r f n , O . E . , Lépez
M , I . , Amfn, M.F. y P e l p t n , M.E. Dep a r t a m e n t o s de B i o t o g f a M o l e c u l a r y O c e a n o l o g T a , F a c u l tad de C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s y de R e c u r s o s N a t u r a l e s , U n ^
v e r s i d a d de Concepción.
En muchas e s p é c i e s de G a s t r ó p o d o s P r o s o b r a n q u i o s
se ha e n c o n t r a d o que e i t e s t T c u l o produce dos t i p o s de
espermatozoides durante la espermiogénesis: tTpicos y
atTpicos.
E s t a p a r t i c u l a r i d a d ha s i d o d e s c r i t a e n Meso
gastrópodos, Neogastrópodos y en algunos Arqueogastrópo
dos.
La f u n c i ó n p r o p i a de l o s e s p e r m a t o z o i d e s t í p i c o s
es l a f e c u n d a c i õ n d e i ó v u l o , p e r o l a f u n c i ó n de l o s e s p e r m a t o z o i d e s a t T p i c o s no ha s i d o c l a r a m e n t e e s t a b l e c i da.
El p r e s e n t e t r a b a j o informa s o b r e la o c u r r e n c i a de
e s p e r m i o g é n e s i s t T p i c a y a t T p i c a e n S . c a s s i d i f o r m e . Se
u t i l i z a r o n técnicas habituales para microscopia e l e c t r õ
n i c a de t r a n s m i s i ó n y de b a r r i d o .
Para la h i s t i o e s p e r m i o g é n e s i s t f p i c a se c a r a c t e r i zan Ias espermátidas en d i f e r e n t e s estados de madurado
mostrándose la gradual condensación de la cromatina y e
desarrollo dei acrosoma.
En la h i s t i o e s p e r m i o g é n e s i s
a t í p i c a se d e s c r i b e l a p r e s e n c i a de e s p e r m á t i d a s de diá^
metro uniforme en toda su l o n g i t u d y en c o r t e t r a n s v e r sal s e o b s e r v a n m u l t i p l e s axonemas ubicados de p r e f e r e n
c i a e n l a p e r i f e r i a de l a c é l u l a y g r â n u l o s e l e c t r o d e n sos en l a r e g i o n c e n t r a l .
Los e s p e r m a t o z o i d e s a t í p i c o s s o n de un tamano muy
superior a los tTpicos.
Se s u g i e r e q u e e n e s t a e s p é c i e
los e s p e r m a t o z o i d e s a t í p i c o s j u e g a n un r o l n u t r i c i o y
n o d e t r a n s p o r t e , como s e h a s u g e r i d o p a r a o t r a s e s p é c i e s de g a s t r ó p o d o s , ya que e s t a e s p é c i e t i e n e fecundación interna.
Proyecto 20.30.10 Direcciõn I n v e s t i g a c i ó n , U.Concepción
R 226
INDUCCION POR DEXAMETASONA D E U N MENSAJERO
SOLUBLE Q U E INHIBE DESATURASAS MICROSOMALES
HEPÃTICAS. (Dexamethasone induction of a soluble
messenger that Inhibits microsomal desaturases). Marra,
L A . y Alaniz. M-J.T.de,
(INIBIOLP), CONICET-UNLP, Facultad de Cs. Médicas,
Universidad Nac.de La Plata, La Plata, Argentina.
La inyecciõn de dexametasona (Dx) a ratas Wistar
(1 mg/rata, via intraperitoneal) produce al cabo de
12 hs una disminuciõn significativa de las actividades
A 6 y A 5 desaturantes, en microsomas hepâticos.
Estos efectos se correlacionan con determinaciones
cuantitativas del contenido de Scidos grasos microsomales.
La acciõn inhibitoria sobre ambas desaturasas pudo
ser reproducida agregando
a microsomas hepSticos
de ratas sin tratamiento hormonal, el sobrenadante
obtenido a 105.000 g por lavado de microsomas hepâticos
de animales inyectados con Dx. Esto probarfa la existência
de un factor inhibitorio inducido por la hormona, lSbilmente unido a la membrana microsomal, pues se lo
puede separar por lavado en frio con una soluciõn
de baja fuerza iõnlca. El tratamiento de la fracción
soluble que contiene dicho factor, con trlpsina, provoca
ia perdida de su actividad biolSgica. La Incubaciõn
de microsomas completos o lavados con diferentes
cantidades de citosol de higado de ratas inyectadas
con Dx, demostro que este factor modulador de la
actividad desaturante
tambiên estã presente en la
fracción citosõlica. Este trabajo sugiere que la inyecciõn
del glucocorticoide a ratas, induce la bloslntesls de
un factor de naturaleza proteica o peptldica capaz
de inhiblr a Ias actividades
46 y Â5 desaturantes
de microsomas hepSticos; actuando en forma directs
o a través de la activación de un factor preexistente.
E N A L A P R I L Y H E X A D I M E T R I N A : E F E C T O S SOBRE M E D I A D O R E S , L A
A L G E S I A Y E L EDEMA EN L A R E A C C I Ó N I N F L A M A T O R I A AGUDA
( E n a l a p r i l andhexadimethrine:Effects on mediators,
a l g e s i c a n d oedema i n t h e a c u t e i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n )
Martin,N.;Vargas,M.;Van Rysselberghe.J.;Echeverria,M.E.
Departamento de C i ê n c i a s F i s i o l ó g i c a s , r a c u l t a d de C i e n c i a s B i o l ó g i c a s y de Recursos N a t u r a l e s . U n i v e r s i d a d de
Concepción.
L a s c i n i n a s s o n p é p t i d o s q u e s e g e n e r a n d u r a n t e l a res^
puesta i n f l a m a t o r i a . L a b r a d i c i n i n a liberada en l a s prime
r a s h o r a s d e l edema i n d u c i d o p o r c a r r a g e n i n a e n l a r a t a ,
es potenciada p o r p r o s t a g l a n d i n a s ( F e r r e i r a y c o l s . ) . Sus
efectos favorecen l o s signos nociceptivos y el incremento de p e r m e a b i l i d a d . s i n embargo su c o r t a v i d a media hace
d i f í c i l el estúdio de estos parâmetros.
En e l p r e s e n t e t r a b a j o e s t u d i a m o s l a a c c i ó n d e u n i n i H
b i d o r de l a c i n i n a s a I I ( e n a l a p r i l 1 y 2 m g / K g ) , de h e x a d i m e t r i n a ( 2 5 mg/Kg)que reduce l a f o r m a c i ó n de c i n i n a s y
d e i n d o m e t a c i n a ( 3 m g / K g ) , s o b r e e l edema y l a r e s p u e s t a
n o c i c e p t i v a i n d u c i d a s p o r c a r r a g e n i n a s u b p l a n t a r a l 2%.
Paralelamente se determinaron l a s c o n c e n t r a c i o n e s de
histamina y s e r o t o n i n a ( 5 - H T ) e n e l exudado de l a s e x t r e midades p o r e s p e c t r o f l u o r i m e t r í a . T o d o s l o s c o n t r o l e s f u e
r o n r e a l i z a d o s a l o s 8 0 y 180 m i n . e n g r u p o s d e a l o me nos 6 r a t a s h e m b r a s , d e i mismo peso y o r i g e n .
E l e n a l a p r i l p r o d u j o u n i n c r e m e n t o d e i edema i n d u c i d o
por c a r r a g e n i n a y una r e d u c c i ó n de l a r e s p u e s t a n o c i c e p t i v a a l o s 80 m i n . m a n t e n i é n d o s e e s t e ú l t i m o e f e c t o a I a s
tres horas y reduciéndose l a histamina subplantar.La a d m i n i s t r a c i ó n p r e v i a de h e x a d i m e t r i n a . s i bien mantuvo e l
edema d e l a c a r r a g e n i n a , e s t e f u e s i g n i f i c a t i v a m e n t e me n o r q u e e l o b t e n i d o c o n e n a l a p r i l . s i e n d o l a r e s p u e s t a bi_
p o a l g é s i c a más s i g n i f i c a t i v a . E n e s t a e x p e r i ê n c i a l a 5 - H T
se i n c r e m e n t o . E l e n a l a p r i l y l a b r a d i c i n i n a 5 ug i n s i t u
p o t e n c i ó e l edema y r e d u j o r e l a t i v a m e n t e l a h i p o a l g e s i a .
En n u e s t r o s t i e m p o s d e c o n t r o l s i b i e n l a b r a d i c i n i n a
induce edema.presenta un e f e c t o h i p o a l g é s i c o que se d i s cute junto a l o s resultados obtenidos con indometacina.
Proyecto 20.33.20. Direc.de I n v e s t i g a c i ó n .
R E T R O V I R U S Y L A G E N E S I S D E L ADENOCARCINOMA G Á S T R I C O
HUMANO. ( R e t r o v i r u s a n d t h e g e n e s i s o f h u m a n g a s t r i c
a d e n o c a r c i n o m a ) . M a r s h a l l , S . , Mufjoz, G . , G o n z a l e z ,
F . , H o r v a t , A . L a b o r a t ó r i o de G e n é t i c a M o l e c u l a r .
T n s t i t u t o de b i o l o g i a . Universidad Católica de V a l paraiso.
Un a n á l i s i s u l t r a e s t r u c t u r a l d e t e j i d o s g á s t r i c o s n e o p l á s i c o s humanos e n e s t a d o t e r m i n a l , a s í como
e l de s u b f r a c c i o n e s e n r i q u e c i d a s d e l o s mismos t e j i dos, demuestran la presencia de e s t r u c t u r a s t i p o v i r a l , i d ê n t i c a s a l a s d e s c r i t a s como r e t r o v i r u s t i p o
D . Más a ú n , u l t i m a m e n t e hemos c o n f i r m a d o q u e e n I a s
f r a c c i o n e s enriquecidas c o np a r t í c u l a s , detectamos
a c t i v i d a d endfigena d e R N A - d e p e n d i e n t e - D N A p o l i m e r a s a , m e j o r c o n o c i d a como t r a n s c r i p t a s a i n v e r s a . L a e v j _
d e n c i a d e q u e n o s e t r a t a d e u n a DNA p o l i m e r a s a c o n taminante s e comprueba p o r I a s c a r a c t e r í s t i c a s de l a
reacción: Resistente a Actinomicina D, Sensible apre
tratamiento conRibonucleasas y , principalmente, p o r
q u e e l p r o d u c t o d e l a r e a c c i ó n s e d e t e c t a como u n h t
b r i d o RNA-DNA e n g r a d i e n t e s i s o p l c n i c a s d e S u l f a t o t e
Césio.
-
-
Gracias a I a s técnicas c l i n i c a s de detección tem
p r a n a d e l a e n f e r m e d a d , podemos o b t e n e r m u e s t r a s e n
d i f e r e n t e s grados de e v o l u c i ó n de l a misma. P o r e l l o ,
realizamos un estúdio comparativo e n t r e I a s muestras,
a n a l i z a n d o cada una d e e l l a s p o r a p a r i c i ó n d e p a r t í c u l a s t i p o v i r a l , y l a d e t e c c i ó n de a c t i v i d a d endóge
na d e t r a n s c r i p t a s a i n v e r s a . P r e t e n d e m o s c o r r e l a c i o n a r l a a p a r i c i ó n y a s o c i a c i ó n e n t r e e s t o s d o s parárre
tros moleculares e n la evolución de este t i p o de neo
p l a s i a . Nuestras evidencias nos hanpermitido elabor a r un modelo de h i p ó t e s i s de t r a b a j o , que p o d r í a e x
p l i c a r l a g e n e s i s d e l adenocarcinoma g á s t r i c o humano.
EL 1 , 2 5 - D I H I D R O X I - V I T A M I N A D3 A F E C T A L A D I S T R I B U C I Ô N I N T R A C E L U L A R DE CALM0DULTNA EN MUSCULO E S Q U E L É T I C O . (1,25(0H);>D3 a f f e c t s i n t r a c e l l u l a r c a l m o d u l i n d i s t r i b u t i o n i n
skeletal muscle). Massheimer. V . .Fernandez. L.M. y A . R .
de B o l a n d . D e p a r t a m e n t o d e B i o l o g i a . U n i v e r s i d a d N a c i o n a l d e l S u r , 8000 B a h i a B l a n c a . A r g e n t i n a .
Estúdios r e c i e n t e s han implicado a l 1 , 2 5 - d i h i d r o x i - v i t a m i n a D3 ( 1 , 2 5 ( 0 H ) 2 D 3 ) e n l a r e g u l a c i ó n d e l m e t a b o l i s m o d e
c á l c i o en músculo e s q u e l é t i c o . Se i n v e s t i g o l a p a r t i c i p a c i ó n de c a l m o d u l i n a (CAM) e n e l mecanismo de a c c i ó n de
a c c i õ n de l a hormona. Se u t i l i z a r o n c u l t i v o s
primários
de m i o b l a s t o s d e m ú s c u l o e s q u e l é t i c o d e e m b r i ó n d e p o l l o
y m ú s c u l o d i f e r e n c i a d o ( s o l e u s ) de p o l l o d e f i c i e n t e e n
v i t a m i n a D t r a t a d o s in vivo
o in vitro
con 1,25(0H)2D3.
E l t r a n s p o r t e de Ca e n m i o b l a s t o s y m ú s c u l o s o l e u s f u e
estimulado p o r el esterol e inhibido p o r flufenazina y
compuesto 4 8 / 8 0 . E n p r e s e n c i a de l o s a n t a g o n i s t a s de
CAM n o s e o b s e r v a r o n d i f e r e n c i a s e n t r e p r e p a r a c i o n e s
c o n t r o l y t r a t a d a s c o n 1,25(0H)2D3. Se e v a l u a r o n l o s e f e c t o s d e l a h o r m o n a s o b r e l o s n i v e l e s d e CAM e n h o m o g e nados y f r a c c i o n e s s u b c e l u l a r e s . S e o b s e r v o q u e e l 1,25(OHJ2D3 n o a f e c t a e l c o n t e n i d o c e l u l a r t o t a l d e CAM
m i e n t r a s que produce un aumento en m i t o c o n d r i a ,
fracción
microsomal ( r e t í c u l o sarcoplasmático y sarcolema) y m i o f i b r i l l a s (probablemente asociado con troponina c ) , y
una d i s m i n u c i õ n p r o p o r c i o n a l e n c i t o s o l . L a s v a r i a c i o n e s
f u e r o n dependi e n t e s d e i t i e m p o de t r a t a m i e n t o c o n e l met a b o l i t e L o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n que e l 1,25(0H)2D3 f a c i l i t a l a t r a n s f e r e n c i a d e CAM d e c i t o p l a s m a a m e m b r a n a s
i n t r a c e l u l a r e s y p l a s m á t i c a , l o cual podría r e s u l t a r en
câmbios e n l a a c t i v i d a d de sistemas t r a n s p o r t a d o r e s de
Ca q u e s o n m o d u l a d o s p o r CAM. S e e v a l u ó l a p o s i b i l i d a d
de q u e e l e s t e r o l a f e c t e e l l i g a d o d e CAM a p r o t e í n a s
de membrana m e d i a n t e a u t o r r a d i o g r a f í a d e g e l e s SDS-PAGE
i n c u b a d o s c o n 125i_cAM.
EL
CITOESQUELETD
DEL
EMBRIQN
DE
RATGN
DURANTE LA COMPACTACION.
(The C y t o s k e l e t o n
o-f m i c e e m b r y o s d u r i n g c o m p a c t i o n ) .
Mayor,
R. e I z q u i e r d o , L. D e p a r t a m e n t o d e B i o l o g i a ,
Facultad de Ciências, Universidad de Chile.
Hemos
estudiado
la
organizaciôn
del
ci t o e s q u e l e t o
del e m b r i o n prei m p l a n t a c i o n a l
de ratón;
especi a l m e n t e d u r a n t e el
proceso
de
compactacián
en el e s t a d o d e 8
células
cuando
estas
se
asoci an
en
un
conjunto
supracelular.
Después
de
extraer
embri o n e s
en
distintos
estados
con Triton
X-100
hemos
observado
s u ci t o e s q u e l e t o p o r
mi c r o s e o p i a
electrónica
d e barri d o y d e t r a n s m i si ón
en
diversas condiciones.
Cada
blastómero
presenta
un
citoesqueleto
cortical,
formado
por
una
mal 1 a
densa
de
f i 1 amen t o s
-f i n o s
que
probablemente
corresponde
a
acti n a
y
un
c i t o e s q u l e t o i n t e r i o r -formado p o r u n a
mal la
1ax a
de f i1amentos gruesos que corresponden
al
material identificado como
-fibrilar
el
cual
tiene
una
estructura
periódica
con
hileras
de
ribosamas.
A
partir
de
la
compactación
se
observan conexiones
entre
los
citoesqueletos de células
vecinas
que
probablemente
corresponden
a
largas
mi c r o v e i 1 o s i d a d e s a p a r e n t e m e n t e c o n t i n u a s .
Se
s u g i e r e q u e e s t a s conex i o n e s
entre
citoesqueletos
de
células
adyacentes
son
p a r t e d e la o r g a n i z a c i ô n s u p r a c e l u l a r q u e s e
expresa
en
los
-fenômenos
de
regulation
e m b r i ó n i c a y a c t i v i d a d g é n i c a di-f e r e n c i a l .
FARMACOS MACROMOLECULARES:
HEM I S U C C I N A T O
DE
ALMIDÓN - D I PI R I D A M O L . ( M o l e c u l a r d r u g s :
D i pyr i damole-starch-hemi suceÍ nate) Medina»
J»J«
Sosa^ B . y Munoz de l a P e n a , A* D e p a r t a m e n t o
de Q u í m i c a O r g a n i c a , F a c u l t a d de C i ê n c i a s Q u i
micas y Farmacêuticas.
U n i v e r s i d a d de C h i l e .
R227
D I S T R I B U C I Ó N S U B C E L U L A R Y A C T I V I D A D R E L A T I V A EN ORGANOS
DE L A C I P R O F I B R O I L - C O E N Z I M O A S I N T E T A S A . ( S u b c e l l u l a r
d i s t r i b u t i o n and r e l a t i v e organ a c t i v i t y o f c i p r o f i broy]_
CoA s y n t h e t a s e ) . Mc E l r o y , M. , M o r a l e s , M . N , y B r o n f m a n ,
M. D e p a r t a m e n t o de B i o l o g f a C e l u l a r , P . U n i v e r s i d a d C a t o
I i c a de C h i l e .
T r a b a j o s r e c i e n t e s de n u e s t r o l a b o r a t ó r i o d e m u e s t r a n l a
p r e s e n c i a e n h í g a d o de r a t a de una a c i 1 - C o e n z i m o A sinte_
t a s a c a p a z de a c t i v a r c i p r o f i b r a t o y o t r a s d r o g a s h i p o l j _
p í d e m i a n t e s a t í o é s t e r e s d e l C o e n z i m o A . En b a s e a e s o s
r e s u l t a d o s hemos p r o p u e s t o q u e e s t a a c t i v a c i õ n s e r f a l a
b a s e d e l a a c c i ó n f a r m a c o l ó g i c a d e e s t a s d r o g a s , q u e ade_
más d e s u e f e c t o h i p o l i p i d e m i a n t e p r o d u c e n d i v e r s o s e f e c
tos metaból i c o s .
E n t r e e s o s e f e c t o s , d e s t a c a u n a marca^
da p r o l í f e r a c i ó n d e l o s p e r o x i s o m a s h e p á t i c o s y d e o t r o s
tej idos.
Con e l f i n d e c a r a c t e r i z a r e s t a a c t i v i d a d e n z i m á t i c a , s e
e s t ú d i o su l o c a l í z a c i ó n s u b c e l u l a r en hFgado, encont r ã n d o s e q u e u n 65% d e l a a c t i v i d a d e n z i m á t i c a s e d i m e n t a e n
la f r a c c i ó n microsomal, siguiendo aproximadamente l a dis
t r i b u c i ó n s u b c e l u l a r d e i a p a l mi t o i 1 - C o e n z i m o A s í n t e t a sa. U t i l i z a n d o aci1-Coenzimo A sintetasa purificada a
p a r t i r d e m i c r o s o m a s , s e e n c o n t r o q u e e l Km d e l a e n z i ma p a r a c i p r o f i b r a t o e s d o s o r d e n e s d e m a g n i t u d m a y o r
q u e p a r a p a l m i t a t o como s u s t r a t o . E l f r a c c i o n a m i e n t o sub_
c e l u l a r p e r m i t i a además d e m o s t r a r l a p r e s e n c i a d e u n a a c
t i v a ciprofíbroí1-Coenzimo A h i d r o l a s a , presente en v a r i a s de I a s f r a c c i o n e s . L o s e s t ú d i o s e n o t r o s t e j i d o s r e
v e l a r o n q u e l a mayor a c t i v i d a d e s p e c f f í c a de l a c i p r o f i broÍ1-Coenzimo A s i n t e t a s a se e n c u e n t r a en h f g a d o , segui
do p o r m i o c a r d i o y g r a s a e p i d i d i m a r í a .
( F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o D I U C 82/86).
RBGULACION CE LA ACTIVIDAD ODNTRA.CTIL DEL MUSCULO UTERI
NO POR HISTAMINE Y SEROTONINA. (Regulations of smooth
nu sele contractile activity by histamine and serotonine).
Medina, J.L; Neumann,V; Depto. Cs. Fisiológicas, Facultad de Ciências Biológicas y de Recursos Naturales.
La bibliografia senala diferentes efectos de hista
mina (HIST) y serotonina (5-HT) sobre el musculo liso
El almidón es una macromolecula
naturalque
uterino en distintas espécies. Sin embargo, aúh no e s se puede m o d i f i c a r
para poder incorporar
un
f á r m a c o , a t r a v é s d e f o r m a c i o n d e e n l a c e s am_í tán bien dilucidadas ni la función ni los posibles m e d i c o s o e s t a r , p a r a l o g r a r u n e f e c t o de
l i b e - canismos involucrados en la acción de estos mediadores.
racion sostenida en e l organismo.
Se ha p r e Con el objeto de investigar un posible mecanismo
p a r a d o e l h e m i s u c e i n a t o de a l m i d ó n ( H S - A ) s o bre e l que se ha i n c o r p o r a d o e l fármaco
d i p i - regulatorio de estas aminas endógenas sobre la actividad
r i d a m o l ( D I P ) , e l c u a l , p o r s u a c c ió*n v a s o d i - uterina se procedió a determinar:
l a t a d o r c o r o n a r i a s e r í a de u t i l i d a d
m a n t e n e r , a) El efecto de HIST y 5-HT sobre la fuerza de contracen forma s o s t e n i d a , a n i v e l e s
t e r a p é u t i c o s . S e ciôn y sobre la liberacion de catecolaminas en cuernos
ha i n c o r p o r a d o GABA, p - a l a n i n a y g l i c í n a
c o m o uterinos de ratón y b) la caracterizacióh fármacológib r a z o s d e u n i ó n d e i f á r m a c o a l H S - A , a o b j e t o ca de dicha respuesta.
de f a v o r e c e r l a s e l e c t i v i d a d d e u n a t a q u e e n Tanto HIST como 5-HT aumentarem la respuesta conz i mát i c o *
En l a m e t ó d i c a de o b t e n c i o n de e s t o s
d e r i v a d o s tractu de los cuernos uterinos, efecto que se manifess e h a u t i l i z a d o a l m i d ó n p u r i f i c a d o y a n h f d r í d o to por un aumento tanto en el tono como en la altura,
s u c c f n i c o e n p i r i d i n a p a r a e l H S - A , y D C C y D M F la amplitud y la frecuencia de la contracciôn registraDicho efecto depend ió de la concentración de la
p a r a u n i r e l f á r m a c o a l H S - A , s e t r a b a j o a 6 0 ° da.
C.
Idéntida metódica se uso para unir
l o s amj_ amina en el bano de incubación y dei estado dei ciclo
estral (estro mayor que diestro).
noácidos.
R e n d i m i e n t o s : H S - A - D I P 81,4 .°/o
,
H S - A - G A B A 8 8 ° / o , H S - A - 0 - a l a n i n a 83 • / • » H S - A Clorprimetón, pirilamina y nifedipina bloquearon
g l i c i n a 9 3 , 5 °/o y H S - A - G A B A - D I P 80 ° / «
.
el efecto estimulador de HIST. 5-HT no modifica la libe
L a i n c o r p o r a c i ó n d e l a d r o g a y a m i n o ã c i d o s ración de K-NA previamente captada.
se c o n t r o l o m e d i a n t e a n á l í s i s de n í t r ó g e n o , y
Se concluye que la actividad dei útero es modificae s t ú d i o s de l i b e r a c i o n d e i f á r m a c o s e s i g u i e ron m e d i a n t e p o l a r o g r a f í a de p u l s o
d i f e r e n c i a da por una acción sobre la fibra muscular lisa, efecto
que podría jugar un rol importante en el aumento de Ias
do contracciones en el inicio dei trabajo de parto.
3
Proyecto
D I B Q, 1 6 6 6 - 8 6 3 4
Proyecto 20.33.28 Dirección de Investigación.
R228
D E T E C C I Ó N D E C O M P L E J O S I N M U N E S EN P A C I E N T E S
C A N C E R O S O S , ( D e t e c t i o n o f i n m u n e c o m p l e x e s in
p a t i e n t s v i t h c a n c e r ) . M e r c a d o , G , , S i l y a , V_,
D e p t o , B i o q u í m i c a A p l i c a d a , F a c u l t a d de F a r m á cia, U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n , V e g a , R, Lab .
Central, Hospital Higueras, Talcahuano
En m o d e l o s t u m o r a l e s a n i m a l e s se ha d e t e c t a
do la p r e s e n c i a de c o m p l e j o s i n m u n e s c i r c u l a n tes ( C . I . ) , d e m o s t r a n d o s e "in v i t r o " que e l l o s
disminuyen la citoxicidad natural contra células t u m o r a l e s . D a d a la i m p o r t â n c i a de la inrauni
dad c e l u l a r en la r e s p u e s t a a n t i - t u m o r , se h a
e s t i m a d o de i n t e r é s d e t e c t a r la p r e s e n c i a de C,
I, en s u j e t o s a p a r e n t e m e n t e s a n o s ( c o n t r o l e s )
y p a c i e n t e s c a n c e r o s o s y d e t e r m i n a r la c o m p o s i
ción p a r c i a l de l o s C . I , (clases de i n m u n o g l o b u l i n a s - I g s - y f r a c c i ó n C3 del c o m p l e m e n t o ) .
Se p r e c i p i t a C . I , de suero de p a c i e n t e s con
cancer y c o n t r o l e s , utilizando polietilenglicol al 3.5%
s e g ú n C h i a y c o l . Se d e t e r m i n a e l
p o r c e n t a j e de Igs y C3 en los p r e c i p i t a d o s , Pa
r a l e l a m e n t e , se r e a l i z a la s e p a r a c i ó n de C . I ,
de c a d a uno de los p a c i e n t e s , p o r c r o m a t o g r a fía en S e p h a d e x G - 2 0 0 a p H á c i d o y se d e t e r m i na a c a d a f r a c c i ó n el c o n t e n i d o de p r o t e í n a ,
c l a s e s de Igs y C 3 .
En los c o n t r o l e s se o b s e r v a d i f e r e n c i a cuan
t i t a t i v a en el p e r f i l de e l u c i ó n s e g ú n la edad
No se e n c u e n t r a C . I . c i r c u l a n t e s en p a c i e n t e s
c a n c e r o s o s s e g ú n c r i t é r i o de C h i a y c o l . Sin
e m b a r g o , se o b s e r v a d i f e r e n c i a c u a l i t a t i t a t i v a
en los p a t r o n e s de e l u c i ó n de los c a n c e r o s o s
con r e s p e c t o a los c o n t r o l e s .
Se d i s c u t e n los r e s u l t a d o s en r e l a c i ô n a u n a
p o s i b l e d i f e r e n c i a c u a l i t a t i v a en la n a t u r a l e z a
de los C . I . de los p a c i e n t e s c a n c e r o s o s y su po
sible r e l a c i ô n con el e f e c t o i n m u n o s u p r e s o r en
la r e s p u e s t a i n m u n e a n t i t u m o r a l .
SINTESIS Y SECRECIÓN DE PROTEÍNAS EN EL OVIDUCTO DE BUFO
ARENARUM.EFECTO DE 17-B ESTRADIOL.(Protein synthesis and
secretion in B. arenarum oviduct.Estradiol 17-B effect).
Miceli,D.C.,Mansilla,C.y Fernandez,S.N.
Depart.de Biologia del Desarrolló,Instituto Superior de
Invest.Biológicas,CONICET-Univ.Nacional de Tucumán.R.A.
Se demostro que la función de la porcion anterior del
oviducto de anfíbios(pars recta,PR),cuya secreción estã
directamente involucrada en la fecundacion.es regulada
por esteroides sexuales.Asimismo,el estúdio de la ultraestructura del epitelio de la PR demostro que existe correlación entre el efecto hormonal,la actividad biológica
y el grado de desarrolló de las células secretoras.A pesar
de que el estrógeno induce la proliferación celular,el
análisis de la fracción citosólica y nuclear indica ausen_
cia de receptor típico.Sin embargo en este trabajo se demuestra que existe incremento de la sintesis proteica al
cabo de lh de tratamiento hormonal.Los experimentos de
incorporaciõn de aminoácidos radioactivos in vivo indican
que la actividad especifica de Ias proteínas dei fluido
de secreción es superior a la dei tejido.El análisis mediante electroforesis y posterior fluorografia indica que
la sintesis y secreción por efecto estrogénico es especí
fico para determinadas proteínas.El posterior estúdio in
vitro confirma dichos resultados.Se detecta principalmen
te una proteína con alta incorporaciõn específica(masa
mol.relat.:66 Kd)y otras (220Kd,170Kd,150Kd)que están ausentes en muestras controles.Estas son sintetizadas por
el tejido y secretadas en forma preferencial al medio de
cultivo por efecto de 17-B estradiol.El efecto de DHT es
mas evidente coincidiendo estos resultados con las observaciones al M.E. que demuestran la aparición de células
repletas de granulos y mayor diferenciación dei epitelio
por efecto de esta hormona.El análisis dei tejido indica
que no todas Ias proteínas sintetizadas son secretadas
al medio de cultivo .
Estos resultados nos llevan apostular nuevamente que la
proteína ligante de esteroides puede cumplir en este caso,funciones de receptor citosólico.
CÂMBIOS EN LA BIOSINTESIS PROTEICA EN RAPS MEDIADOS
POR TEMPERATURAS BAJAS. (Changes in Protein Synthesis
in
rapeseed
seedlings
during
a low
temperature
treatment) Meza-Basso, L., Berger, M.E., Raynal, M.,
Ferrero-Cadinanos, M.L., Delseny, M. Instituto de
Bioquímica, Facultad de Ciências, Universidad Austral
de Chile. Laboratório de Physiologic Végétale, Universidad de Perpignan, Francia.
Se ha observado que en algunos vegetales resistentes al frio, se induce como respuesta compensatória,
la sintesis de proteína especificas. Se entregan antecedentes que apoyan la hipÓtesis que estos vegetales
contendrian genes responsables de la tolerância al
frio y que los ajustes metabÓlicos observados configuran una serie de estratégias adaptatlvas diversas.
Para el análisis de la sintesis proteica se germinaron semillas de raps de una variedad de invierno.
Las plántulas fueron crecidas por tiempos variables
a 18° o a 0°C, incubándolas con
metionina durante
las 2 últimaB horas. El análisis de sintesis proteica
in vitro se realizo extrayendo poli A+RNA total. Los
poli A RNA fueron traducidos en un sistema libre de
células. Los productos sintetizados in vivo e in vitro
fueron analizados por electroforesis bidimencional.
La sintesis proteica continua a 0°C y ciertos polipéptidos se acumulan preferencialmente a esa temperatura. Por otra parte, la sintesis de otros polipéptidos se reprime, mientras que algunos son insensibles
al tratamiento. Câmbios similares se observan en la
sintesis proteica in vitro a 0°C en comparación a los
controles. Entre los genes que son reprimidos se encuentra la SP de la RuBisCo. La respuesta compensatória se detecta luego de cortos períodos a 0°C.
Se trabaja en la identificación de algunos de estos
productos inducibles y se discute la relevância de los
câmbios en la expresión genética y su asociaciÓn al
desarrolló de la tolerância al frio.
+
Financiado
por
DID, UACH S-84-29 CNRS
95 31 6 7 ) .
(UA 565, AIP
C A R A C T E R I Z A C I Ó N P A R C I A L DE P R O T E O G L U C A N O DE R E T I N A
I N S O L U B L E EN Á C I D O T R I C L O R O A C E T I C O . ( P a r t i a l c h a r a c t e r ization of trichloroacetic acid-insoluble
proteoglucan
of r e t i n a ) . M i o z z o , M . C . , Aon,M.A. y Curtino, J . A .
Departamento de Química B i o l õ g i c a - C I Q U I B I C . F a c . C s . Q u i micas-CONICET y F a c . C s . A g r o p e c u á r i a s , U.N.C.,Sue.16,
c c 6 1 , 5016 C o r d o b a . A r g e n t i n a .
Hemos d e s c r i p t o l a u n i ó n d e p r o t e i n a a g l u c ó g e n o d e r e tina (Aony Curtino,Eur.J.Biochem.,140,557,1984)
a trav e s de r e s f d u o t i r o s i n a e n u n i o n 0 - g l i c o s i d i c a ( A o n y
C u r t i n o . B i o c h e m . J . , 2 2 9 , 2 6 9 , 1 9 8 5 ) . E l p r o t e o g l u c ó g e n o es
s o l u b l e en ãcido t r i c l o r o a c é t i c o ( T C A ) mientras que
o t r a f r a c c i ó n de o f - 1 , 4 glucano i n s o l u b l e ( G P I )es r e c u p e r a d a j u n t o a l a s membranas de r e t i n a
precipitadas
por T C A .
G P I , a l i g u a l q u e e l t o t a l de l a p r o t e i n a de l a s membra
nas p r e c i p i t a d a s p o r T C A , s e s o l u b i l i z õ en c l o r o f o r m o metanol-TCA en p r e s e n c i a de glucógeno c a r r i e r que es
i n s o l u b l e en ese medio.La n e u t r a l i z a c i ó n con metilamina
p r e c i p i t o GPI y I a s p r o t e i n a s de memhrana.La s o l u b i l i z a c i f l n e n d e t e r g e n t e de G P I p r e c i p i t a d a j u n t o c o n l a s
membranas, f u e dependiente dei d e t e r g e n t e y su concent r a c i o n . A s í , 35% y 53% d e G P I y 15% y 24% d e i t o t a l d e
p r o t e i n a de membrana ( P r o t ) f u e s o l u b i l i z a d a c o n d e o x i c o l a t o d e s ó d i o a l 0 , 5 % y 1 % , r e s p e c t i v a m e n t e . E l 70% y
100% d e G P I y 67% y 77% d e P r o t f u e s o l u b i l i z a d a c o n
d o d e c i l s u l f a t o d e s ó d i o ( S D S ) a l 0 , 5 % y 2%, r e s p e c t i v a m e n t e . L a f r a c c i ó n G P I s o l u b i l i z a d a e n SDS y p a s a d a p o r
c o l u m n a d e S e p h a r o s a 6B c o e l u y ó , c o n u n K a v = 0 , 3 3 ( P . M .
a p r o x . 4 5 0 . 0 0 0 ) , j u n t o a una c a n t i d a d de c a r b o h i d r a t o
e q u i v a l e n t e a 1/3 d e i p o l i s a c á r i d o p r e s e n t e e n l a f r a c c i ó n p r o t e o g l u c õ g e n o . S o m e t i d a a e l e c t r o f o r e s i s en medio
d i s o c i a n t e en g e l de p o l i a c r i l a m i d a , GPI se c o n c e n t r o en
l a z o n a l i m i t e e n t r e 3% y 10% a c r i l a m i d a . A l i n c u b a r I a s
membranas de r e t i n a c o n U D P - 1 4 C - g l u c o s a , G P I i n c o r p o r o
14C-glucosa con una a c t i v i d a d e s p e c i f i c a (cpm/nmol G l c )
s i e t e v e c e s mayor que l a f r a c c i ó n p r o t e o g l u c ó g e n o , que
e s t a b a p r e s e n t e a u n a c o n c e n t r a c i o n d e 0 , 7 7 mg p o r m i l i l i t r o de i n c u b a d o . ( S u b s i d i o s : C0NICET y C0NIC0R)
R229
ESTÚDIOS METABOLICOS EN UNA CEPA DE
S.CEREVISIAE AUXOTROFICA PARA POLIAMIMAS (Met a b o l i c s t u d i e s in a S . c e r e v i s i a e p o l y a m i n e
auxotrophic strain). Mlret,J.J. y Goldemberg,
S.H.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Fundaciõn Campomar", Buenos Aires, Argentina.
ANALISIS DE LA RESPUESTA INMUNE HETEROCLITICA A HORMONAS
DE CRECIMIENTO. (Analysis of the heteroclitic immune
response to growth hormones). Mollerach-Gobbi, B., Retegui, L., y Pena, C.
Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (UBACONICET). Facultad de Farmácia y Bioquímica, Buenos Aires,
Argentina.
En l o s ú l t i m o s a n o s s e h a n a i s l a d o c e p a s d e
levaduras auxotróficas para poliaminas, c o n ca
racterísticas de crecimiento similares a las
de las mutantes bacterianas, q u e pueden servir
como modelo para estudiar el metabolismo y fun
ción de Ias poliaminas en eucariotes i n f e r i o res.
La heteroclicidad, propiedad característica de anticuerpos que-reconocen con mayor afinidad a un antigeno re_
lacionado al inmunógeno que al inmunógeno mismo, fue observada en anticuerpos desarróllados por pacientes hipop_i
tuitarios tratados con hormona de crecimiento humana (hGH)
que están dirigidos hacia las hormonas heterólogas bovina
(bGH) y equina (eGH) y en monoclonales anti-bGH que fijan
preferentemente eGH.
—
-
U t i l i z a n d o la m u t a n t e d e S . c e r e v i s i a e 179-5,
aislada por Hosaka y Yamashita, se efectuaron
algunos estúdios metabólicos. Establecidas Ias
condiciones para deprimir el contenido endógeno d e p o l i a m i n a s , s e a n a l i z ó e l e f e c t o d e e s t o s p o l i c a t i o n e s s o b r e la v e l o c i d a d d e c r e c i miento y síntesis de algunas macromoléculas,
como RNA y proteínas. La disminución de todos
estos procesos en células sometidas a ayuno se
revierte por reagregado de poliaminas, siendo
la s í n t e s i s d e p r o t e í n a l a p r i m e r a e n r e c u p e r a r s e y l l e g a r a l o s v a l o r e s d e la c e p a p a r e n tal.
Se e s t ú d i o t a m b i é n l a c o r r e l a c i ò n e n t r e
contenido endógeno de poliaminas y velocidad
d e c r e c i m i e n t o , la c a p t a c i ó n d e p u t r e s c i n a y
e s p e r m i d i n a y se m i d i e r o n a l g u n a s e n z i m a s r e lacionadas con el metabolismo d e poliaminas,
como ornitina decarboxilasa y arginasa.
EFECTO DEL COMPLEJO METAL-ATP SOBRE EL MECANISMO
CINETICO DE HEXOQUINASA D (GLUCOQUINASA). (Effect of
ATP-metal complex on the kinetic mechanism of hexokinase D (glucokinaae). 0. Monasterio. Departamento
de Biologia, Facultad de Ciências, Universidad de
Chile.
Hexoquinasa D (ATP: D-glucosa 6-fosfotranaferasa,
EC 2.7.1.1) (glucoquinasa) exhibe una cinética de
saturación hiperbólica entre amplios margenes de concentraciones de 2-desoxiglucosa (0,1 a 9 veces Km) y
de MgATP (0,5 a 40 veces Km). Estúdios de velocidad
inicial con estos sustratos y de inhibición de punto
muerto con N-acetilglucosamina y AMP mostraron un
mecanismo de adición de los sustratos en secuencia.
Los resultados de la inhibición por AMP fueron coapatibles tanto con un mecanismo ordenado, con 2-deaoxiglucoBa como primer sustrato, como con uno al azar
con unión preferente de este sustrato. Para dilucidar
esta ambiguedad en la interpretación de los resultados se estúdio la inhibición por el complejo inerte
de coordinación, Cr(IIl)ATP. Al medir la velocidad
inicial de hexoquinasa D a pH 6,9, Cr(III)ATP mostro
inhibición competitiva con respecto a MgATP e inhibición mayormente incompetitiva con respecto a 2-desoxiglucosa, con una constante de disociaciõn de 4,5 uM.
Estos resultados confirman que el mecanismo cinético
de adición de los sustratos es principalmente ordenado y 2-desoxiglucosa es el primer sustrato. La inhibición de la enzima por el complejo Mn(II)ATP fue
competitiva con respecto a glucosa-6-fosfato a 100
mM glucosa y 5 mM ATP. Este resultado es similar al
obtenido con magnesio, excepto que las lineas dei
gráfico de dobles recíprocos (l/v vs 1/[MgATP] a
diferentes concentraciones de glucosa-6-fosfato) se
curvan hacia arriba, lo que sugiere que existiria
más de un sitio de interacción con el nucleótido,
que se hace observable en presencia de glucosa-6-fosfato.
Financiado por el proyecto DIB 2066-8633.
Se analizó la especificidad de estos anticuerpos en en
sayos de competición utilizando fragmentos de bGH y eGH
altamente purificados por cromatografía líquida de alta
eficiência y se estimo su capacidad de detectar perturbaciones conformacionales del antígeno por reacción con las
hormonas reducidas y carbamidometiladas. Los anticuerpos
inducidos en los pacientes reconocieron esencialmente una
conformación proteica destruída por la apertura de los
puentes disulfuro y se unieron con baja afinidad a algunos de los péptidos ensayados. Los monoclonales que también detectaron el cambio conformacional proteico reaccio_
naron con mayor afinidad con péptidos de la region aminoterminal de ambas hormonas.
El mapeo antigénico de dos antisueros convencionales,
provenientes de conejos inoculados con bGH o eGH indico
la inmunodominancia de un área común localizada hacia el
extremo N-terminal de estas proteínas.
Se concluye que la respuesta homo o heteroclítica
hacia bGH y eGH está dirigida hacia la misma region pred£
minante y que la elevada especificidad conformacional de
los anticuerpos heteroclíticos humanos refleja una probable alteración dei inmunógeno durante su procesamiento
por Ias células inmunocompetentes.
I N H I B I C I Ó N DE L A MUERTE C E L U L A R PROGRAMADA D E L P A L A D A R
E M B R I O N Á R I O POR D E X A M E T A S O N A W V I T R O , E N DOS C E P A S DE
RATON. ( I n h i b i t i o n o f programmed c e l l death i n e m b r y o nic patale by Dexamethasone i n v i t r o , i n t w o s t r a i n s o f
mice).Montenegro,M.A., J e r i a . M . y Palomino.H. Depto.
M o r f o l o g i a E x p . y Depto. de B i o l o g i a C e l u l a r y G e n é t i c a . F a c . de M e d i c i n a , U . de C h i l e .
T r a b a j o s p r é v i o s handemostrado que l o s glucocortj^
coides
(G. C.)
producer f i s u r a palatina en animal e s de l a b o r a t ó r i o debido a que r e t r a s a n l a h o r i z o n t a l !
zación de l o s procesos palatinos e inhiben l a muerte
del e p i t e l i o p a l a t i n o medio q u e o c u r r e normalmente.Además, s e ha v i s t o q u e a l i g u a l q u e e n l a e s p é c i e humana,
en e l r a t ó n s e p r e s e n t a d i s t i n t a s u s c e p t i b i l i d a d a l a
producción de esta anomalia.En este trabajo analizamos
el e f e c t o de l a dexametasona en l a f u s i o n de l o s procesos p a l a t i n o s i n v i t r o e n d o s cepas d e r a t ó n d e d i f e r e n
te susceptibilidad.
Se u t i l i z a r o n h e m b r a s g r á v i d a s d e r a t ó n d e l o s c e pas A / S n y B / 1 0 . S e d i s e c a r o n l o s p r o c e s o s p a l a t i n o s d e
e m b r i o n e s d e 13 d í a s d e g e s t a c i ó n y s e c u l t i v a r o n 72 h
a 38°C e n m e d i o d e c u l t i v o n o r m a l o c o n t e n i e n d o l a d r o
ga ( 1 0 0 u g ) . E l m a t e r i a l f u e p r o c e s a d o p a r a M . O . y M . E .
La d e x a m e t a s o n a i n h i b e l a f u s i o n d e l o s p r o c e s o s
p a l a t i n o s i n v i t r o e n ambas c e p a s d e r a t ó n , p e r o e n u n
p o r c e n t a j e m a y o r e n l a c e p a A / S n . E n ambas c e p a s s e p r o
duce l a i n h i b i c i ó n de l a muerte c e l u l a r programada que
o c u r r e normalmente y a q u ee l e p i t e l i o p a l a t i n o medio
persiste intacto.
Si b i e n l o s e s t ú d i o s i n v i v o i n d i c a n q u e l a cepa
A/Sn e s medianamente s u s c e p t i b l e y l a cepa B/10 e s r e sistente,los estúdios i n v i t r o
no demuestran grandes
diferencias entre l a s cepas,lo que estaria indicando
que l a m u e r t e c e l u l a r programada no s e r i a e l ú n i c o f a c tor determinante de l a d i f e r e n t e
susceptibilidad,sino
que e x i s t i r i a n o t r o s mecanismos i n v o l u c r a d o s .
P r o y e c t o DIB-2368-8615. U . de C h i l e .
R230
FENÔMENOS P O S T - T E T A N I C O S E N L A N E U K O T R A N S M I S I O N D E L
CONDUCTO D E F E R E N T E . ( P o s t - t e t a n i c e v e n t s i n t h e r a t
vas deferens neurotransmission).
M o n t i e l , J., C a m p o s , H . M . y H u i d o b r o - T o r o , J.P. , L a b o r a t ó r i o d e F a r m a c o l o g i a , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e .
TRANSPORTE DE MICROESFERAS POR EL OVIDUCTO DE LA RATA.
(Transport of microspheres by the rat oviduct). Moore,
G., Croxatto, H.B.- Laboratório de Endocrinologia, Facultad de Ciências Biológicas, Pontificia Universidad
Católica de Chile.
La p o t e n c i a c i ó n p o s t - t e t á n i c a ( P P T ) e s u n h e c h o
r e l a t i v a m e n t e c o n o c i d o de l a p l a c a n e u r o m u s c u l a r .
Para i n v e s t i g a r s i este fenômeno se produce e n s i s temas a d r e n é r g i c o s , se u t i l i z o l a u n i ó n ueuroe fee t o ra d e i c o n d u c t o d e f e r e n t e d e r a t a . S e a i s l a r o n m i t a des e p i d i d i m a r i a s y p r o s t á t i c a s d e i c o n d u c t o que s e
p e r f u n d e n c o n T y r o d e a 37°C; se r e g i s t r a c o n t r a c c i ó n
m u s c u l a r i s o m é t r i c a . Se e s t i m u l a e l é c t r i c a m e n t e f i b r a s n e r v i o s a s (70 v , 1 m s ) c o n p u l s o s de 0 . 1 5
ó
15 H z . D e s p u é s de u n t r e n de e s t í m u l o s de 15 H z x
30 s , l o s p u l s o s d e 0 . 1 5 H z e n l a m i t a d e p i d i d i m a r i a
muestran P P T , m i e n t r a s que e n e l segmento p r o s t á t i oo se e v i d e n c i o i n h i b i c i ó n p o s t - t e t á n i c a ( I P T ) . T a n t o l a PPT e IPT s o n f r e c u e n c i a - t i e m p o d e p e n d i e n t e y
desaparecen con tetrodotoxina, guanetidina 6 6 - h i d r o x i d o p a m i n a . L a PPT s e a t e n u a
e n c o n d u o t o s de r a tas reserpinizadas o tejidos tratados con prazosina.
E n c a m b i o , l a IPT a u m e n t a c o n r e s e r p i n a o b l o q u e o
a l f a - a d r e n é r g i c o . S ó l o l a IPT s e r e d u c e c o n b i c u c u l i
na o e s t r i e n i n a , p e r o n i l a P P T o I P T se m o d i f i c a n
con n a l o x o n a , p r o p r a n o l o l , yohimbine, t e o f i l i n a o
i n d o m e t a c i n a . E s t a c o l e c c i ó n de e x p e r i m e n t o s p e r m i te d e s c a r t a r e f e c t o s mediados p o r o p i o i d e s e n d ó g e nos, receptores presinápticos adrenérgicos o p u r i nérgicos y prostaglandinas en Ias respuestas postt e t á n i c a s d e s c r i t a s . Se c o n c l u y e que l a P P Ts e r e l a c i o n a c o n c a t e c o l a m i n a s m i e n t r a s que l a I P T s e p o d r í a e x p l i c a r p o r a c c i ó n de G A B A o g l i c i n a . Q u e d a
de m a n i f i e s t o l a e x i s t ê n c i a d e P P T e I P T e n e s t a
u n i ó n n e u r o e f e c t o r a y l a c o m p l e x i d a d de l a n e u r o transmisión en este tejido.
Experimentos en curso
e s t á . i d i l u c i d a n d o e l m e c a n i s m o d e l a PPT e I P T .
Microesferas de almidõn, dextrano o poli (DL-láctidoco-glicolido) de 80-140 um de diâmetro fueron transferidas al infundlbulo dei oviducto de ratas por medio de
una técnica microquirúrgica con el objeto de evaluar si
la técnica altera el transporte y viabilidad de los huevos nativos, si Ias microesferas remedan el transporte
normal y acelerado de huevos nativos, si su velocidad de
transporte guarda relaciôn con sus propiedades físicoquimicas y con el estado reproductive de la hembra receptora. La técnica de transferencia aplicada en los
dias 1-3 de prenez (P1-P3) no altera el transporte de
huevos al útero ni la viabilidad de los embriones nativos evaluada en P11-P12.
Las tres clases de microesferas se transportan a
igual velocidad entre sí y llegan al útero con un leve
retraso con respecto a los huevos nativos. Las microesferas transferidas en P2 o P3 son retenidas en el oviducto por lo menos hasta Pll observãndose bloqueo parcial de su transporte a nivel de unión istmo-ampular y/o
istmo-uterina en P4, P5 y P7.
Las microesferas transferidas en PI y los huevos se
transportan prematuramente al útero si se administra
estradiol (lug s.c.) en P I , P2 o P3 mientras que Ias
transferidas en P3 no se aceleran cuando se administra
estradiol en P3. Esto indica que la union istmo-ampular
funciona de distinto modo y su respuesta al estradiol es
diferente en PI que en P3. Se concluye que microesferas de estos materiales pueden servir como sustitutos
dei huevo para evaluar la función de transporte dei oviducto y esclarecer el programa operacional dei ôrgano en
diversas fases dei ciclo reproduetivo.
Financiado por RF 86020
Financiada en parte
p o r p r o y e c t o DIUC
?k/86.
Salmonella
t y p h i (OmpF") RESISTENTE AL CLORANFENICOL.
TRèsistance to Chloramphenicol in Salmonella typhi(OmpF")
Mora, G . C . , C a l d e r ó n . I . Lobos,S. y A l v a r a d o . C . : L a b o r a t o r i o de M i c r o b i o l o g í a . Departamento de B i o l o g i a C e l u l a r
Facultad de Ciências Biológicas. P o n t i f i c i a Universidad
C a t ó l i c a de C h i l e .
Es u n h e c h o c o m p r o b a d o , q u e m o l é c u l a s h i d r õ f i l i c a s
de b a j o p e s o m o l e c u l a r , p u e d e n a t r a v e z a r l a Membrana E x t e r n a de b a c t é r i a s Gram(-) a t r a v é s de poros o canales
acuosos e x i s t e n t e s en e s t a .
L a s p o r i n a s , u n g r u p o e s p e c i a l i z a d o d e p r o t e í n a s for
man e s t o s p o r o s y a t r a v é s d e e l l a s s e e s t a b l e c e l a d i f u
s i õ n r á p i d a d e m o l é c u l a s t a l e s como a z ú c a r e s , a m i n o á c i d o s , iones i n o r g â n i c o s que posean un peso m o l e c u l a r men o r de 600-700 d a l t o n s . E s t ú d i o s r e a l i z a d o s c o n mutantes
de E . c o l i
d e f i c i e n t e s e n 1 o más p o r i n a s h a n d e m o s t r a do q u e l a p e r m e a b i l i d a d de l a membrana e x t e r n a a l o s a n t i b i ó t i c o s depende de l a p r e s e n c i a de e s t o s c a n a l e s . La
r e s i s t ê n c i a comprobada en e s t o s caso ha s i d o t a n t o h a c i a
t e t r a c i c l i n a . c l o r a m f e n i o o l como h a c i a a l g u n o s b e t a l a c t á m i .
c o s . A s í , s e ha e n c o n t r a d o una g r a n v a r i e d a d de E n t e r o bacteriáceas cuya r e s i s t ê n c i a a a n t i b i ó t i c o s está r e l a cionada con l a ausência de p o r i n a s .
En e s t e t r a b a j o p r e s e n t a m o s e l p r i m e r c a s o d e s c r i t o
de r e s i s t ê n c i a a c l o r a m f e n i c o l e n un a i s l a d o c l í n i c o de
S. t y p h i .
Se t r a t a d e u n a c e p a c a r e n t e d e p l a s m i d i o s , y d e a c tividad cloramfenicol-acetil
t r a n s f e r a s a ; que no posee
ribosomas mutados r e s p o n s a b l e s de l a r e s i s t ê n c i a a e s t e
a n t i b i ó t i c o , comprobado mediante e s f e r o p l a s t o s p r o d u c i dos en e s t a c e p a , l o s que son i n c a p a c e s de r e c u p e r a r s e
después dei t r a t a m i e n t o con c l o r a m f e n i c o l .
El análisis
de p r o t e í n a s de l a Membrana E x t e r n a de e s t a s b a c t é r i a s
en PAGE-SDS r e v e l a c l a r a m e n t e l a a u s ê n c i a de l a p o r i n a
OmpF, l o c u a l e s t a r i a s u g i r i e n d o que s e t r a t a d e u n a m u t a c i õ n q u e a f e c t a l a p e r m e a b i l i d a d d e l a Membrana E x t e r na d e e l I a s . ( F i n a n c i a d o p a r c i a l m e n t e p o r DIUC 7 4 / 8 5 ) .
E F E C T O S DE L A I N Y E C C I Õ N I N T R A C A U D A D O DE L H R H Y D - A L A - 6 L H R H SOBRE L A A D Q U I S I C I O N DE R E S P U E S T A S C O N D I C I O N A D A S .
(Effects of the intracaudate
i n j e c t i o n o f LHRH a n d
D-ALA-6-LHRH
on
the
acquisition
of
conditioned
responses).
Mora, S . , A f a n i , A . , K u s a n o v i c , R. y
D l a z - V é l i z , G. Departamento
fle
Precllnicas,
Division
C i ê n c i a s Médicas O r i e n t e , F a c u l t a d de M e d i c i n a , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
L a i n y e c c i ó n d e 1 ug d e L H R H e n e l N . C a u d a d o d e
r a t a s produce una inmediata i n h i b i c i ó n de l a capacidad
de a d q u i s i c i ó n d e r e s p u e s t a s c o n d i c i o n a d a s d e e v i t a c i ô n
a c t i v a , l o c u a l no o c u r r e s i se i n y e c t a l a hormona a
través
dei ventrlculo
lateral,
en hipocampo
o N.
aceumbens.
El presente
trabajo
tiene
por
objeto
e s t a b l e c e r u n a r e l a c i ô n d o s i s - e f e c t o p a r a LHRH e n e l
N. Caudado y , además, e s t u d i a r l o s e f e c t o s d e i a n á l o g o
D-ALA-6-LHRH.
Se u t i l i z a r o n r a t a s S p r a g u e - D a w l e y m a c h o s d e a p r o x i m a d a m e n t e 200 g , I a s c u a l e s f u e r o n i m p l a n t a d a s e s t e r e o t á x i c a m e n t e con c a n u l a s en uno de l o s N . Caudados.
Una s e m a n a más t a r d e e r a n s o m e t i d a s a l a s e s i ó n d e
a d q u i s i c i ó n , inmediatamente después de l a i n y e c c i ó n de
LHRH o D - A L A - 6 - L H R H o s a l i n a , l a c u a l c o n s i s t i a e n l a
p r e s e n t a c i ó n de t o n o s y choques e l é c t r i c o s a i n t e r v a l o s
d e 30 s e g e n t r e l o s t o n o s .
Los r e s u l t a d o s demuestran que e x i s t e una r e l a c i ô n
e n t r e l a d o s i s d e LHRH i n y e c t a d a e n e l N . C a u d a d o y l a
inhibición dei condicionamiento.
Además, s u g i e r e n que
e s t a e s t r u c t u r a p o d r i a c o n s i d e r a r s e uno de l o s s i t i o s
e n q u e s e e j e r c e r í a l a a c c i ó n c o n d u c t u a l d e LHRH e n l a
rata.
E l a n á l o g o s i n t é t i c o d e LHRH n o m o d i f i c o
significativamente la condueta estudiada, 1levando a pensar
que
los efectos
conductuales
d e LHRH p o d r í a n
ser
i n d e p e n d i e n t e s de s u s p r o p i e d a d e s n e u r o e n d o c r i n a s .
Departamento de I n v e s t i g a c i ó n y B i b l i o t e c a s
de l a
U n i v e r s i d a d de C h i l e , ( D I B ) .
( P r o y e c t o B-1633-8644).
R 231
MICROCIRUGIA EXPERIMENTAL: COLGAJOS CUTÂNEOS LIBRES VASCULAR IZADOS
EN RATAS. (Experimental microsurgery: Vascularized free flap islands in rats). Moreira, A., Kinast, C., Mercado, 0. Instituto
Cirugla. Universidad Austral de Chile. (Patrocínio: R. Yulis).
La literatura sobre esta nueva y proietedora proyección de la cirugfa
comienza con Jacobson (I960) que sutura vasos cuyo calibre oscila
entre dos o tres •• de diâmetro externo. Las técnicas están ya descritas pero la aplicación de ellas y la adquisición de destreza manual, así coio el manejo de Ias couplicaciones propias de la
te'cnica exige un largo período de entrenamiento con el microscópio.
En el presente trabajo se realizan quince colgajos cutâneos vascularizados epigástricos llevándolos al cuello de Ias ratas. Anastomosándose vasos arteriales términolateral de 0,8 mm de diâmetro externo y vasos venosos de 0,9 •• de diâmetro externo teruínoterminal.
Los materiales usados fueron quince ratas cepa Holzman 300 gramos,
anestesia nembutal 40 milígramos por kilo intraperitoneal, microscópio qui rúrgico, licropinzas, microporta agujas, microclamps Ac land,
• icrosutura 10.0 (22 p diâmetro y agu ja de 3 • • y 70 JJ de diâmetro).
Se disefla colgajo epigástrico de 5 x 5 centímetros zona inguinal,
se abordan los vasos femorales los cuales se disecan con licropinzas
procediendo luego a ligar y seccionar los vasos femorales distal y
proximal, procediendo a la irrigación de los vasos con suero heparinizado y 1idocaina al dos por ciento para prevenir el vasoespasmo.
La zona de 1 cuel1 o es tá preparada,ar teri a cardtida y vena yugular
disecada. Se procede a anastomosis terminolateral de la artéria y
terminoterminal de la vena con la técnica de Serra. Se comprueba permeabilidad completa en el postoperatorio inmediato en venas y artérias; la sutura arterial se evalúa por su pulsatibilidad, temperatura y coloración, la sutura venosa por la coloración y por el flujo
hacia la vena yugular. El estúdio histolágico de los sitios de anastomosis mostraron reacción inflamatoria neutra con la sutura. El
estúdio con microscopfa electnínica de barrido mestra reconstitución
ad integrum de la intima. Los colgajos cutâneos libres abren un
gran mundo a la cirugía reparadora, reimplantacián de miembros y
transplantes.
(Financiado por Proyecto RS-85-23 Oirección de Investigación de la
Universidad Austral de Chile).
EFECTOS DE LA TEMPERATURA, LUZ Y SALINIDAD EN LA CAPACI
DAD GERMINATIVA EN POBLACIONES DE Atriplex repanda.(The
effects of temperature, light and salinity on seed ge£
mination capacity in Atriplex repanda populations).
Moreno, R.J., Gutierrez, J.R. y Aguilera, L.E. Departamento de Biologia, Facultad de Ciências, Universidad de
La Serena.
A. repanda es un arbusto forrajero, nativo del
norte chileno cuya área de distribución se encuentra en
tre
Ias
latitudes 28° 34' y 32° 07' Sur, formando poblaciones pequenas y aisladas territorialmente lo que
impediria el flujo genético entre ellas.
La germinación de Ias semi lias bajo condiciones
naturales no supera el 17a. Sin embargo, se ha encontrado que la escarificación y longevidad lncrementan la ger
minación en.las semilias de esta espécie, notándose una
considerable variacion según la procedência de ellas.
El objetivo de este trabajo es determinar el e
fecto de la luz (fotoperíodo versus oscuridad)y tempera
tura) (T° constante versus To variable) en la germina ción de A. repanda y establecer si existen diferencias
significativas en la germinación de once poblaciones so
metidas a 7 niveles de salinldad (0 a 684.5 Mosmol NaCl)
que permitan concebir una idea de diferenciación ecotípi
ca.
Se encontro procentajes de germinación más altos
en semillas iluminadas y con temperatura variable que en
aquéllas germinadas en la oscuridad y con temperatura
constante respectivamente. Las semillas de Ias distintas
poblaciones, muestran diferencias en su capacidad germi
nativa en los diversos niveles de NaCl utilizados.
Se discute la diferenciación de Ias poblaciones
para el caracter capacidad germinatlva de Ias semillas,
en relación a Ias condiciones del habitat existente en
Ias diferentes áreas de colecta.
PROYECTO 1092/85. FONDECYT; Dir. Inv. de La Serena.
FOSFATASA ALCALINA EN CÉLULAS DUODENALES AISLADAS:
CÂMBIOS CUALITATIVOS POR LA ADMINISTRACION OE
CQLECALCIFEROL.("Alkaline phosphatase in isolated
duodenal epithelial eel Is:cualitatives changes
produced by cholecalcipherol administration ).
Horeno,J; Pereira,fi ; Tolosa de Ta 1 anion i , N y Canas.F.
Química biolúgica,F.CM. ,U.N~de Cordoba., ARGENTINA .
Con el objeto de dilucidar si las modificaciones
electroforeticas observadas por nosotros en la fosfàtasa alcalina (FA) duodenal de polios,tratados con
vit.D (Arch Biochem Biophys 240:201;1985) se deben al
aporte de distintas células con diferente grado de
fíiadurac ión, se aislaron células duodenal es eluídas de
acuerdo al método de Weiser.Se obtuvieron secuencialmente. 6 fracciones. Consideramos Ias dos priríteras como dei ápice, 3§ y 4â intermedia y Ias dos últimas
rovenientes de la cripta.La FA presenta su mayor acividad en la zona superior de la vellosidad y esta
casi ausente en la cripta.Electroforesis sobre gel de
poliacrilamida realizada con la FA de Ias distintas
fracciones celulares extraída a pH 7,5 durante 1 h
con butanol al 33%, muestra en Ias células aisladas
de raquíticos tres zonas de tinción, identificãndose
dos a tres bandas en cada una de ellas, sin diferencia en los tres tipos celulares. La administración de
colecalciferol 24 n antes de la obtencion de Ias células produce la desaparición de los componentes más
rápidos de Ias tres zonas. En homogenatos dejados a
4*C durante 72 h pH 7,5 desaparece la heterogeneidad
molecular de la enzima de los tratados con colecalciferol, sin modificaciones aparentes en la de raquíticos.La incubación a 30*C,12 h,pH._5 de cel. recien
asisladas,no produce solubilización significativa de
la FA (2-4%).La extracción butanólica posterior a pH
5,iiiuestra idêntico perfil electroforet-ico al obtenido
por la incubación con sialidasa exógena. Al incubar
las cel. a pH 7,5,12 h 30*C se recupera dei sobrenadante un alto porcentaje de la FA.siendo mayor en los
ollos tratados con colecalc1 farol.El tragado elecroforetico muestra una sola band** en todos los casos, semejante a la que se out iene por incubación de
cel.de animales tratados,incubadas a 4°C,72 h,pH 7,5.
La FA solubilizada con butanol a pH 7,5, incubada a
3Ç>*C,3 h pH 5,5 en presencia de membranas lisosomales
aisladas,modifica su perfil electroforetico.que se
hace idêntico al de la enzima solubilizada a pH 7,5
sin extracción butanólica, tanto en raquíticos como
en tratados. Se concluye: A)La desialización de todas Ias formas moleculares de la FA se realiza tanto
en células diferenciadas como inmaduras. Su actividad
se incrementa por efecto del colecalciferol. B) La
desaparición de la heterogeneidad molecular de la
enzima de polios tratados,incubada a 4°C indicaria Ia
presencia de un factor/es de conversion,cuya actividad o propiedades catalíticas estarían modificadas
por el colecalciferol.
Ç
?
PROTEÍNA QUINASA DEPENDIENTE DE AMP CÍCLICO DEL HONGO
DIMORFICO M.rouxii COMO MODELO PARA EL ESTÚDIO DEL MECANISMO DE ACTIVACIÕN (Cyclic AMP-dependent protein kinase from the dimorphic fungus M.rouxii as a model for the
study of the mechanism of activation).Moreno,S. Pave to,
_C. ,Passeron,S.
Dto. Química Biológica.Programa de Regulaciõn Hormonal
y Metabólica,Fac.Cs.Exactas y Naturales,Univ.de Bs.As.
t
La proteína quinasa dependiente de AMP cíclico (cAMP)de
M.rouxii no se disocia por cAMP y sí lo hace en presencia dei nucleótido y NaCl 0.5 M.Con el objeto de estudiar el mecanismo de activaciõn de la enzima se investigo en primer lugar el número y calidad de sitios para el
cAMP. Mediante el estúdio de la cinética de disociación
por diluciõn isotópica dei cAMP-^H unido a la enzima se
pudo llegar a dos conclusiones:1)la velocidad de disociación dei cAMP unido a la holoenzima es muy rápida,
(50% en 2' a 4°C) y dei cAMP unido a la subunidad regulatoria es muy lenta (25% en 10' a 4°C); 2)en la holoenzima se ocupa un solo tipo de sitio y en la subunidad
regulatoria dos, midiendo ambas cinéticas de disociación
a 30°C y en presencia de NaCl.
e
Por proteólisis controlada de la holoenzima R 2 C 2 s °btuvo una espécie RC, evidenciada en gradientes de sacarosa, que aun presenta dos calidades de sitios para el
cAMP y muestra cooperatividad positiva en la reacción
de fosforilación.Esto indica que el numero de sitios para el cAMP en la holoenzima es 4. Se demostro que los
análogos dei cAMP sustituídos en C-8 tienen preferencia
por un sitio de unión y los sustituídos en N$ por el otro. Usando estos análogos en combinación, se demostro
que tienen efecto sinérgico en la reacción de fosforilaciõn de un heptapéptido (kemptido) usado como sustrato. Se concluye que la proteína quinasa de Mucor no difiere de Ias de eucariontes superiores en cuanto al numere y calidad de sitios para el cAMP y que puede servir como modelo para estudiar si la activaciõn implica
obligatoriamente disociación de la holoenzima y necesita de la ocupancia de los dos sitios.
R 232
rOLISQMAS Y TRADUCCION "IN VITRO" EN CULTIVO EE TEJIDOS
DE TUBÉRCULO DE PAPA. (Polysomes and "in vitro" translation in potato tuber tissue cultures) . ^reno, S. y
Tandecarz, J.S.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Fundacifin
Campomar" y Facultad de Ciências Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires.
En una comunicaci6n previa (SATB, 1985), mostramos que
en cultivo de tejidos de tubérculo de papa se encuentra
solamente una de las tres isoenzimas de fosforilasa presentes normalmente en preparaciones soluble del explanto original, con una actividad específica de 10 a 12
veces mayor que la correspondiente en el tubérculo. La
represiõn y desrepresión de genes en las células se puede estudiar a través del análisis de la capacidad de tra
ducciõn de polisomas. Se procediõ entonces al aislamiento de polisomas a distintos tiempos de desarrolló delcallo (cultivo y subcultivo) . Se presentan los perfiles
polisomales obtenidos y la capacidad de traducciõn de
los mismos a distintos tiempos del desarrolló del callo.
Se encontro que el contenido de polisonas se incrementa
rapidamente con el cultivo del tejido quiescente (tubérculo) , el cual contiene riboscmas principalmente en
la forma de monoscmas. la capacidad de traducciõn de
los polisomas durante el cultivo^ subcultivo se midió
a través de la incorporaciõn de
S metionina en un sistema de traducción de germen de trigo. Los polipêtidos
traducidos "in vitro" se identificaron por fluorografía
después de electroforesis en geles de poliacrilamida
desnaturalizantes. Los resultados obtenidos indican que
el sistema de germen de trigo traduce eficientemente polipêtidos mayores de 70 Kd en Ias condiciones ensayadas.
Además se observa en Ias fluorografias una banda cuyo
peso molecular coincide con el de la subunidad de la
fosforilasa de callo (67 Kd).
INHIBICIÓN DE LOS EFECTOS DE NORADPENAL1NA, HORMONA ANTIDIURETICA, ANGIOTENSINA II Y. ALDOSTERONA POR
FACTOR
AURICULAR DE BOVINO EN PIEL AISLADA DE SAPO.
(Inhibition of the effects of noradrenaline, antidiuretic hormone, angiotensin II and aldosterone by bovine
atrial
factor). Norris, B., Concha, J., Pantoja, C.,Chiang,L.
Depto. Cs. Fisiol., Fac. Cs. Biol, y R.N., Universidad
de Concepcicin.
Este trabajo presenta evidencia que un factor auricular de bovino (FAB) bloquea el aumento de transporte
de N a inducido por noradrenalina (NA), hormona antidiu
rética (AEH), angiotensina II (Agt II) y aldosterona(AT
en piei de sapo.
En piel abdominal de Pleurcdema thaul, colocada en
câmara mod]ficada de Ussing, se registfõ diferencia de
potencial (DP) y oorriente de corto-circuito (CCC). El
preparado usado fuê un extracto acuoso concentrado
y
dializado según trabajos anteriores de este laboratório
en concentracion aproximada de 0.08
por el lado serosal. La prueba de amiloride de Isaacson, antes y después de la acciõn de FAB, permitió medir el
potencial
de N a ( E ^ ) , conductancia activa de N a (G^ ) y conduc
tancia pasiva (Ggh). Todas Ias drogas, exceptò amiloride, se aplicarem en el lado serosal.
FAB disminuyó parâmetros elêctricos de la piei : DP
bajó en 57.7*2.7%, CCC 66.5*3.3%, E ^ 51.0*11.1%, G ^
36.4*1.7% y
20.8-1.9%. Las 4 hormonas presentaron
efectos ótosis-dependientes; las concentraciones máximas
empleadas (1 imol ADH, Agt II y NA, y 50 ysxsL A) aunentaron CCC 83.7*14.2%, 54.4*11.9%, 86.3*8.8% y 90.0^4.0%
respectivamente• FAB inhibió estos efectos en 63.0-3.0%,
51.5*11.6%, 55.7*12.1% y 47.3*6.2% respectivamente.
Estos resultados sugieren que el efecto inhibidor
de FAB se debería a disminuciõn de permeabilidad de la
membrana apical al Na en piei de sapo, lo que se desprende de los valores arriba senalados. Se discute esta
evidencia en relaciôn a la función tubular renal.
+
+
+
Proyectos 20.33.18 y 20.33.10, U. de Concepción.
FIDELIDAD DE LA TRADUCCIÓN EN BACTÉRIAS DEFICIENTES EN POLIAMINAS. (Translation fidelity
in polyamine-deficient bacteria). Nastri,H•G.
y Algranati,I.D.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Fundaciõn Campomar" y Facultad de Ciências Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires.
Se ha investigado la precision de la sintesis proteica en bactérias auxõtrofas para poliaminas cultivadas en ausência o presencia de
estas sustancias y sometidas al mismo tiempo
al ayuno de un aminoãcido. En estas condiciones, que normalmente inducen un aumento en la
frecuencia de errores de la traducción, la velocidad de la sintesis proteica practicamente
no se modifico en bactérias cultivadas sin poliaminas, pero se redujo notablemente en células suplementadas con estas sustancias. El
análisis por electroforesis en gel de poliacrilamida de los polipêptidos sintetizados durante períodos de ayuno de un aminoãcido, indicaron que sólo en Ias bactérias con niveles
endõgenos normales de poliaminas se produjo
una disminuciõn relativa de la sintesis de polipêptidos de alto peso molecular con una acumulaciõn simultânea de péptidos pequenos.
Estos resultados parecen indicar que en ausência de poliaminas se produce un aumento más o
menos generalizado en la frecuencia de errores
de traducciõn. Por otro lado en bactérias cultivadas con poliaminas, el ayuno de un aminoãcido provoco un marcado aumento en la sintesis
de algunos polipêptidos que podrían estar relacionados con proteínas que aparecen en condiciones de "stress".
RESPUESTA METAB0LI CA Y TEMPERATURA
CORPORAL
D E L C H I N C 0 L (Zonotlichia
capentii)
EN A L T I T U DES S I M U L A D A S . ( M e t a b o l i c r e s p o n s e a n d body
temperature of the chincol
(lonotKichitx capznIn s i m u l a t e d a l t i t u d e s ) . N o v o * . F . , B o z I nov I c , F . y R o s e n m a n n , M . D e p t o . C s . E c o l â g i c a s ,
F a c u l t a d d e C ienc fas , ÜrTlvers Idad d e C h i l e .
Una c a T d a e n el p 0 2 I n s p i r a d o q u e e x c e d e el
limite de regulación, provoci en los mamíferos
una disminuciõn del metabolismo ( M ) , proporcfo
nal al g r a d o d e h i p o x i a e x p e r i m e n t a d o .
La sin
guiar característica del pulmôn de las eves y ~
su a m p l i a d i s t r i b u c i ô n a l t l t u d i n a l h a c e n e s p e rar q u e ellas d e m u e s t r e n u n a m a y o r
resistência
a la d i s m i n u c i õ n del p 0 2 ambiental q u e la d e s crita en mamíferos.
El o b j e t i v o d e e s t e t r a b a j o e s e v a l u a r l a
respuesta del chincol a un gradiente
altitudl
nal
simulado.
Las medlclones de M se reellzaron e n 5 Indiv í d u o s d e 20,311,9 g ( x t 5 0 ) , s o m e t l d o s a d l i
t i n t o s g r a d o s d e h i p o x i a (p0
1 0 0 a <t0 T o r r ) y
a t e m p e r a t u r a s d e -5°C a 25°C.
L a r e s p u e s t a a g u d a d e Z . captn&ii
a la hipoxia experimental demuestra que M se mantiene
c o n s t a n t e t a n t o e n t e r m o n e u t r a I I d a d c o m o e n el
frio y en atmosferas de tan bajo pOj como las
e x i s t e n t e s s o b r e 1 0 . 0 0 0 m (2,9510,52 y 6,721
0,66 m l 0 2 / g . h a 2 5 ° C y -5"C r e s p e c t i v a m e n t e ) .
A pesar de la mantenclón de M , se observo
una
marcada hlpotermla que no es causada por una
disminuciõn e n la producción d e calor.
La I n d i f e r e n c l a m e t a b õ l l c a a la h i p o x i a
en
esta espécie puede ser explicada por dos hlpát e s l s : 1. A u m e n t o d e l a v e n t i l a c l ó n y , 2. A u m e n t o en la a f l n i d a d d e la h e m o g l o b i n a p o r O2
d u r a n t e la h l p o t e r m l a .
F i n a n c i a d o e n p a r t e p o r p r o y e c t o D I B NI 75386*'i, U n i v e r s i d a d d e C h i l e .
2
R233
UNIDAD ORGANO SUBCOMISURAL - FIBRA DE REISSNER EN
EL MURCIELAGO. (Subcommissural organ-Reissner s fiber unit in the bat). Nualart,F.J. Instituto de Histología y Patologia, Facultad de Medicina, Universidad Austral de Chile. (Patrocinio: S.Hein)
D I F E R E N T E S M É T O D O S PARA LA D E T E R M I N A C I O N DEL
AREA M I N I M A EN N O T H O F A G O - P E R S E E T U M B O L D E T O S UM.
(Different m e t h o d s to D e t e r m i n a t i o n of M i n i m a l
Area in N o t h o f a g o - P e r s e e t u m B o l d e t o s u m ) .
Nunez , L. L a b o r a t ó r i o de G e o b o t ã n i c a , I n s t i t u t o
de B o t â n i c a , U n i v e r s i d a d A u s t r a l de C h i l e .
(Patrocinio: M. R o m e r o ) .
Se investigo la unidad órgano subcomisural-fibra
de Reissner (OSC-FR) de tres espécies de murciélagos aplicando métodos convencionales para microscopía óptica e inmunocitoquímica usando un anticuerpo
especifico contra el material secretorio del OSC.
También se realizo un estúdio ultraestructural.
El o b j e t i v o dei p r e s e n t e t r a b a j o es la d e s c r i p c i o n de d i f e r e n t e s m é t o d o s e m p l e a d o s en la
d e t e r m i n a c i ó n dei área m í n i m a .
Se r e a l i z a r o n i n v e n t á r i o s en t e r r e n o en la
a s o c i a c i ó n N o t h o f a g o - P e r s e e t u m B o l d e t o a u m , en
Ias c e r c a n i a s dei rio B u e n o , p r ó x i m o a l a Car r e t a r a P a n a m e r i c a n a Sur, p r o v i n c i a de V a l d i via, Décima R e g i o n .
M e d i a n t e la i n f o r m a c i ó n r e c o g i d a en t e r r e n o
se p r o c e d i ó a la c o n f e c c i ó n de las t a b I a s r e s p e c t i v a s , luego se d i b u j a r o n Ias c u r v a s c o r r e s
pondientes.
Se r e c o l e c t ó i n f o r m a c i ó n b i b l i o g r á f i c a rela
c i o n a d a con las d i f e r e n t e s m e t o d o l o g i a s u t i l i z a d a s en la d e t e r m i n a c i õ n del area m í n i m a .
Se s e l e c c i o n a r o n a l g u n a s m e t o d o l o g i a s , apli^
cando a l g u n a s de e l l a s a la v e g e t a c i õ n r e g i o nal, de Ias c u a l e s se dan a c o n o c e r los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s en el b o s q u e de P e u m u s b o l d u s .
Se c o m p a r a n los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s en el
bosque analizado.
Se c o n c l u y e que la m e t o d o l o g i a t r a d i c i o n a l
de B r a u n - B l a n q u e t , es la m â s simple y r á p i d a ,
no d e s c a r t á n d o s e el uso de o t r a s que p u e d e n
ser e m p l e a d a s en la v e g e t a c i õ n n a t i v a .
1
El OSC fue gomori-negativo, carecia de material inmunoreactivo y a nivel ultraestructural no se encontro signos de actividad secretora.
No se observo
FR y el canal central de la medula espinal estaba
obliterado o ausente.
Estos resultados muestran que el OSC de murciélago
a diferencia de la mayoría de Ias espécies de vertebrados, carece de una actividad secretora, lo que
a su vez resultaria en la ausência de la FR.
Se
sugiere que la FR jugaría un rol en mantener el canal central de la medula espinal abierto y permeable a la circulación dei líquido cefalorraquideo.
Financiado Proyecto S-85-39 Dir. Investigación,
U.A.Ch. y Grant 1/38 259 Stiftung Volkswagenwerk.
C A R A C T E R I Z A C I Ó N D E L S I T I O DE U N I O N D E Ca»* D E L
CANAL
DE
K*
A C T I V A D O POR
Ca* *
DE
MUSCULO
E S Q U E L É T I C O D E RATA.
( C h a r a c t e r i z a t i o n of t h e
Ca**
binding
s i t e of t h e
Ca**-activated
K*
channel
from
rat
skeletal
muscle).
Oberhauser.A. Departamento de Biologia, Facultad
de
Ciências,
Universidad
de
Chile.
(Patrocinio:
Wolff)
El
canal
d e K* a c t i v a d a
por
Ca**
del
t ú b u l o t r a n s v e r s o d e la rata e s un c a n a l i ó n i co, c u y a a c t i v i d a d d e p e n d e d e la ICa** 1 i n t r a celular
y del potencial e l é c t r i c o a t r a v é s de
la m e m b r a n a . C o n el o b j e t i v o d e d e t e r m i n a r l a s
características
f i s i c o q u i m i c a s dei sitio
que
liga Ca* *,
s e e s t ú d i o el c a n a l i n c o r p o r a d o en
bicapas artificiales de
fosfolipidos.
Usando
esta
técnica
se
d e t e r m i n a la
secuencia
de
a f i n i d a d d e i c a n a l p a r a una s e r i e d e
cationea
divalentes,
mediante
la
capacidad de
estos
i o n e s d e a c t i v a r el c a n a l .
S e e n c o n t r a q u e la
secuencia
relativa de afinidad dei sitio
que
une
Ca* *
es.
Ca* M l )
>
Cd* * (1x10" * )
>
Sr**(2xl0~ )
> Mn«*(lxlO- ) > Fe**(3xl0"*)
>
Co**<2x10"*).
S o b r e la b a s e d e e s t o s r e s u l t a dos
s e c o n t r u y ó un m o d e l o p a r a el
sitio
que
une
Ca* *,
b a s a d o solasiente en
interaccianes
electrostáticaB
entre los cationes divalentes
y grupos de unión aniónicos.
Se encontro
que
el
modelo que mejor describe los
resultados,
contiene
dos grupos de ligamen (probablemente
c a r b o x i l i c o s ) d e r a d i o 0,06 nm y e s p a d a d o s en
O,20
nm.
Los
resultados obtenidos
para
la
activación
d e i c a n a l p o r Mg* * y Ni* * en
presencia
de Ca*,
s u g i e r e n la e x i s t ê n c i a d e
un
sitio
a l o s t é r i c o a c c e s i b l e p o r el l a d o
citoplasma tico.
La
unión de estos iones
a
este
sitio
producirla
el
deseninascaramiento
de
n u e v o s s i t i o s e s p e c í f i c o s p a r a Ca* *.
F i n a n c i a d o p o r el DIB,
Proyecto N*-1984-8523
y Fundación Tinker.
9
s
MORFOMETRIA T R I D I M E N S I O N A L DE C É L U L A S DE MAMÍFEROS EN
F U N C I Ó N D E L PESO
CORPORAL.
( T h r e e - d i m e n s i o n a l morp h o m e t r y o f mammalian c e l l s
as a
function of
body
weight).
Ocqueteau, C ,
C Yr M . ,
Morgado,
E.,
B e c k e r , L . , M u j i c a , L . y G o n z a l e z , 07
D e p a r t a m e n t o de
P r e c l i n i c a s , F a c u l t a d de Medicina ( O r i e n t e ) , U n i v e r s i dad de C h i l e , y D e p a r t a m e n t o de M a t e m á t i c a , U n i v e r s i d a d
de C o n c e p c i ó n .
(Patrocinio:
M. C u r y ) .
ur
El p r o p ó s i t o d e l p r e s e n t e t r a b a j o e s e s t a b l e c e r en
forma c u a n t i t a t i v a
la r e l a c i ó n entre las dimensiones
celulares
(en micrometros)
y l a masa c o r p o r a l
(en
gramos).
La m o r f o m e t r í a c e l u l a r comprende e l e s t ú d i o
h i s t o l ó g i c o de c i n c o ó r g a n o s en n u e v e e s p é c i e s de
mamíferos de d i v e r s o
t a m a n o , d e s d e e l r a t ó n d e 40 g
h a s t a l a v a c a d e 450 k g . L o s m é t o d o s d e f i j a c i ó n y d e
t i n c i ó n f u e r o n e s t a n d a r i z a d o s y l o s c o r t e s s e r i a d o s de
7 um d e e s p e s o r s e p r a c t i c a r o n e n d o s d i m e n s i o n e s d e i
e s p a c i o q u e s o n o r t o g o n a l e s e n t r e s í ; d e modo q u e e n
cada t i p o c e l u l a r se p u d i e r o n medir l o s t r e s d i â m e t r o s
(ancho, alto y profundidad).
Los promedios
d e 30
m e d i c i o n e s f u e r o n a n a l i z a d o s mediante dos programas de
computación, a saber:
1) a n á l i s i s d e
conglomerados;
y
2) a n á l i s i s e s t a d í s t i c o d e s c r i p t i v e
De l o s d e n d o g r a m a s d e l o s d i v e r s o s t i p o s
celulares
se d e s p r e n d e que l a m a y o r í a de I a s c é l u l a s de m a m í f e r o
tienen dimensiones semejantes y unicamente los a d i p o c i tos
se c a r a c t e r i z a n
p o r una gran
variabilidad
en
cuanto a diâmetro, s u p e r f i c i e s y volúmenes.
R234
LIPIDOe DE PULMON Y CORAZON DE RATAS MACHOS
CASTRADAS. (Lipids of lung and heart of castrated male r a t ) .
Ojeda M.S. y Gimjênez M.S.
Cátedras de Química Biológica II y Anatomia y
Fisiologia de la Facultad de Química,Bioquímica
y Farmácia de la Universidad Nacional de San
Luis. Chacabuco y Pedernera - 5.700 - San Luis
Argentina.
Se está estudiando la regulación de la lipogénesis en animales castrados a fin de determinar el grado de participación de los andrÓgenos en la sintesis de lípidos. Se determino el
contenido de lípidos totales y de fosfolípidos
en pulmõn y corazÓn de ratas machos adultos a
los 2 2 días de castración. Los lípidos fueron
extraídos por el método clásico de Folch-Pi.
Los fosfolípidos se cuantificaron determinando
fósforo.El cálculo estadístico se realizo aplicando el test de Student para datos correlacio
nados, Se encontro que el contenido de lípidos
totales es significativamente mayor en pulmÕn
y corazíSn de ratas castradas. P<0.01 y P < 0 . 0 2
respectivamente. Los umol de f6sforo/mg lípidos
son 1 H menores en animales castrados que en
los controles en los dos órganos estudiados.
P < 0 . C 5 . Los resultados obtenidos sugieren que
la supresiÓn de los.testículos en rata macho
determina acumulación de lípidos en pulmón y
corazón.
PRESENCIA DE L E C T I N A EN EL EXUDAD0 RADICULAR DE S O M ( P r e s e n c e
of lectin i n soybean root exudate). O l i v a . C. v Daleo. 3. Instituto da
Investigaciones Biológicas y Dpto de Biologia, Facultad de Ciências Exactas
Universidad Nacional de M a r del Plata.
Se ha postulado que las lectinas tendrian u n papel como determinantes
de la especificidad en e l establecimiento de la relaciôn símbiótica e n t r e
legumtnoses y Rhizobium.
E n soja han sido caracterizadas la lectina de
sem i l i a y r a d i c u l e ; se ha demostrado tambien une modulación e n los
n i v e l e s y actividad de la lectina de radícula en condiciones que regutan at
d e s a r r o l l ó nodular. E n este trabajo se demuestre le presencie de lectina en
N O V I M I E N T O S D E D E F O R M A C I O N M E I O T I C A E N E L H ü E V O DE SAN
GUIJUELA: CARACTERÍSTICAS y RESPUESTA A DROGAS.(Meiotic
d e f o r m a t i o n m o v e m e n t s in the leech e o q : c h a r a c t e r i s t i c s
and r e s p o n s e to d r u g s ) . O l e a . N . M a t t e , C . y F e r n a n d e z ,
J. D e p t . Biolocfía. F a c . C i ê n c i a s , U n i v . d e C h i l e .
f
El h u e v o d e T . r u d e e x h i b e u n a sucesiõn e s t e r e o t i p a d a
de e p i s ó d i o s d e d e f o r m a c i o n a s o c i a d o s con la t e r m i n a c i ó n
de la m e i o s i s , e l e s t a b l e c i m i e n t o de d o m i n i o s
oonlãsmi
cos y la c i t o q u i n e s i s .
H a y e v i d e n c i a q u e la m o t r i c i d a d
d e l h u e v o r e s u l t a d e la c o n t r a c c i ó n d e u n a red e c t o p i a s
mica d e filamentos de actina.
Sin embargo, distintos e
pisodios de deformacion difieren marcadamente
entre s i .
Por tanto, parece razonable sospechar que el citoesnuele
t o de a c t i n a d e l h u e v o i n d i v i s o s u f r e câmbios r í t m i c o s
de o r g a n i z a c i ó n .
E n esta p r e s e n t a c i õ n s e comparan los
m o v i m i e n t o s d e d e f o r m a c i o n a s o c i a d o s c o n la d e s c a r a a de
los p o l o c i t o s ( P o l . ) , s e d e t e r m i n a l a s e n s i b i l i d a d d e es_
tos p r o c e s o s a la c i t o c h a l a s i n a B ( C I T - E ) y c o l c h i c i n a y
se e x p l o r a la e s t r u c t u r a f i n a
del ectoplasma ovular.La
emisión del P o l . I es precedida p o r u n a onda de contra£
ciõn q u e se d e s p l a z a e n t r e e l e c u a d o r y e l p o l o aniiral.
D o s i s a l t a s d e C I T - B (40-75 ^ g / m l ) b l o q u e a n e s t a onda y
la e m i s i ó n d e l P o l . , d o s i s i n t e r m e d i a s (30-40 ,ug/ml) in
ducen r e a b s o r c i ó n d e l P o l . (polocito f a n t a s m a ) y d o s i s
b a j a s (10-30 ,ug/ml) p r o d u c e n P o l . i n t a c t o s p e r o p r e v i e
n e n l a c i t o q u i n e s i s I . La e m i s i ó n d e l P o l . II e s p r e c e
d i d a p o r la d e f o r m a c i o n d e l h e m i s f é r i o a n i m a l , q u e adop
ta la f o r m a d e c o n o .
Este proceso es bloqueado p o r d o
sis a l t a s e i n t e r m e d i a s d e C I T - B y un P o l . f a n t a s m a II
n o p a r e c e f o r m a r s e . D o s i s a l t a s d e c o l c h i c i n a (10~2 M )
destruyen el núcleo meiõtico, n o afectanlos movimient o s d e d e f o r m a c i o n v forman P o l . f a n t a s m a s I y I I . S e
p r o p o n e un m o d e l o d e o r g a n i z a c i ó n d e i h u e v o m e i ó t i c o
q u e i n c l u y e : a ) u n a region d i s c r e t a , d i f e r e n c i a d a y pre_
d e t e r m i n a d a d e e c t o p l a s m a q u e c o n s t i t u y e e l p o l o ani_
mal y b ) una red de actina probablemente sometida a os
c i l a c i o n e s de e q u i l í b r i o m o n ó m e r o - p o l í m e r o y c a p a z d e
efectuar contracciones de tipo isotónico e isodiamétri
c o (Proyecto B - 1 9 8 7 / 8 6 3 5 D I E , U n i v e r s i d a d d e Chile).
FUNCIÓN ENDOCRINA EN RATAS TRATADAS C O N MELATONINA
(Endocrine f u n c t i o n in t r e a t e d r a t s
with melatonin).
Olivares, A . y Nunez, S . Unidad de Biologia
d e la
P r o d u c c i ó n . INTA, U n i v e r s i d a d d e C h i l e .
R a t a s i n m a d u r a s d e 2 0 d í a s d e edad i n y e c t a d a s d u r a n
te 20 d í a s c o n m e l a t o n i n a
presentan disminuciõn en el
peso del testículo, epidídimo, vesiculas
seminales
y
próstata.
E n e s t e t r a b a j o se a n a l i z a n
parâmetros
endocrinos
a f i n d e c o n o c e r e l g r a d o d e c o m p r o m i s o de la f u n c i ó n
hormonal testicular.
el exudado r a d i c u l a r de soja y se la c a r a c t e r i z a parcialmente.
Se ha detectado lectina en e) exudado de radfculas de soja de dos dtas de
crecimiento. Esta lectina m u e s t r a actividad eglutinente sobre
japonicum
Rhüobhm
y e r i t r o e i tos, actividad que es inhibida s i el haptene, galactose
C o n este p r o p ó s i t o r a t a s W i s t a r d e 2 0 d í a s se i n y e £
taron c o n 100 u g d e m e l a t o n i n a h a s t a l o s 4 0 d í a s d e
edad. A l d i a s i g u i e n t e d e la u l t i m a i n y e c c i ó n s e sacri
f i c a r o n ; se d e t e r m i n o LH y t e s t o s t e r o n a c i r c u l a n t e p o r
RIA y n ú m e r o d e r e c e p t o r e s e n c é l u l a s d e L e y d i g .
es agregado a l medio. Se cuentificó p o r medio de actividad aglutinante e
inmunodifusion
radial,
lo que p e r m i t i a
determinar
u n aumento
importante en los n i v e l e s de lectina en el exudado de rodicuias de 48 hs de
crecimiento.
Este
lectina
f u e purificado e n columnas
de afinidad
S e p h a r o s e - r a f i n o s a . L a lectina así purificada demostro tener e l m i s m o
patrón de bandas que l e lectina de s e m i l l a e n O u c h t e r k m y e Idêntica
movilidad e l e c t r o f o r é t i c a en geles de S D S - P o l i a c r i l a m i o a . E x p e r i m e n t o s
p r e l i m i n a r e s indicarian que la presencia de n i t r a t o o omonio en el medio
modularian los n i v e l e s de lectina e n e l exudado, de monera s i m i l a r e la
lectins de s u p e r f í c i e r a d i c u l a r . E l estúdio de los f e d o r e s que regulan l a
acumulación de le lectina e n e l exudado p e r m i t i r á a p o r t a r evidencias
ex per i men tales en f a v o r dei verdadero r o l de la lectina en e l exudado
r a d i c u l a r . La presencia de lectina en e l exudado r a d i c u l a r podría indicar
que e l proceso de reconoclmlento se Inicie e n l a r l z o s f e r e , antes de l a
unión de le bacteria e la planta huésped
Subsídios de C I C , SUBCYT y CONICET.
Células intersticiales
se i n c u b a r o n s i n o c o n 5 UI
de H C G p o r 3 h o r a s y s e d e t e r m i n o
testosterona
produ
cida p o r m é t o d o d e R I A .
Los resultados
o b t e n i d o s i n d i c a n q u e los a n i m a l e s
tratados presentan bajos
niveles de LH cuando
se l o s
c o m p a r a c o n los a n i m a l e s c o n t r o l e s , (5ng/ml y 3 3 n g / m l
respectivamente).
A l a n a l i z a r la c a p a c i d a d e s t e r o i d o g é n i c a
de I a s cé
lulas d e L e y d i g "in v i t r o "
se e n c o n t r o q u e la testos_
t e r o n a s i n t e t i z a d a p o r i n d u e c i ó n de H C G está disminui_
da e n los animales tratados
a pesar que Ias células
de L e y d i g p r e s e n t a n u n m a y o r n ú m e r o d e r e c e p t o r e s pa_
ra L H / H C G .
Se p u e d e i n f e r i r q u e en r a t a s i n m a d u r a s m e l a t o n i n a
exógena no sólo afectaría al hipotálamo y/o hipõfisis
s i n o q u e a d e m á s la función e n d o c r i n a d e i t e s t í c u l o .
F u t u r o s t r a b a j o s p e r m i t i r á n e v a l u a r ias a l t e r a c i o n e s
de la v i a e s t e r o i d o g é n i c a
de Ias células de Leydig.
F i n a n c i a d o p o r DIB. U. d e C h i l e . P r o y . N°2020-8633.
R235
ACCION
INHIBITORIA
COMPETITIVA
DE
PROGESTERONA
(P A
) SOBRE LA 3 Ò • HIDROXIESTEROIDE DEHIDROGENASA
A - A , ISOMER AS A (3 p SDH) EN MICROSOMAS Y TEJIDO PLACENTAL. (Competitive inhibitory action of Progesterone
(P A
) on
3ft -Hydroxysteroid
dehydrogenase
A,-- A , isomerase (3 p SDH) enzyme of microsomal and
placental tissue) Olivier,N.S.; Genti-Raimondi, S.;
Patrito L.C.; Flurv. A.
Departamento de Bioquímica Clinica. Facultad de Ciências
Químicas.
Universidad
Nacional
de
Córdoba.
Argentina.
Comunicaciones previas senalan que algunos esteroi
des (androstenediona,testosterona y dehidroepiandrosêrona^) suprimen la conversion Pregnenolona (P L\ ) P A
tanto en cisterna celular como acelular. En tanto
otros como P A .Estrona y Estradiol solo inhiben en
este último caso (PABS 1984). La falta^de efecto inhibi
torio de P A
en la conversion P A - P ^
en tejido
respecto a microsomas fue examinada midiendo las propie
dades cinéticas de la enzima (3^SDH) en sisi,emag optima
zados de trozos de^ tejido y microsomas. La HP£* formada , así como la HPÃ
remanente, fueron aisladas del
sistema de incubación por procedimientos cromatograficos y llevados a actividad específica constante. Los
resultados indican un Km de 0,55 uM en microsomas
y 2,1 uM en tejido^. El análisis cinético dei efecto
inhibitorio de P u ,
sobre la actividad de la 3^SDH
revela que este esteroide, actúa como un inhibidor
competitivo de la enzima, con un Ki de 0,6 y 1,8 uM
para microsomas y tejido respectivamente. Se concluye
que la P A
actuaría "in vivo" regulando sus propia
formacion y que Ias diferencias observadas en los
sistemas de conversion son justificadas por Ias diferen^
tes constantes de inhibición halladas.
E S T Ú D I O DE LOS A N T I G E N O S P R 0 T E I C 0 S DE B R U C E L L A .
(Study of the B r u c e l l a p r o t e i n a n t i g e n s ) . A n g e l
O n a t e y Cise la E1 le r . I n s t i t u t o de M e d i c i na E jc
p e r i m e n t a l , U n i v e r s i d a d A u s t r a l de C h i l e .
Los a n t í g e n o s p r o t e í c o s j u e g a n un rol p r e p o n d e r a n t e en la i n d u c c i ó n de la r e s p u e s t a i n m u n e celular contra B r u c e l l a , en c o n t r a s t e con
los l i p o p o 1 i s a c ã r i d o s que p o r t a n los a n t í g e n o s
i n m u n o d o m i n a n t e s oara la r e s p u e s t a i n m u n e humo_
ral.
En el p r e s e n t e trabajo se e x t r a j e r o n las
p r o t e í n a s de Bruce 11a s p . y se e s t u d i a r o n m e d i a n t e e l e c t r o f o r e s i s en g e l e s de p o l i a c r i l a m i d a S D S . Los g e l e s fueron s o m e t i d o s a t i n c i ó n
d i f e r e n c i a l para p r o t e í n a s , l í p i d o s y p o l i s a c a
ridos o usados p a r a t r a n s f e r i r Ias p r o t e í n a s
b a n d e a d a s a m e m b r a n a s de n i t r o c e l u l o s a con el
fin de r e a l i z a r un e s t ú d i o m a s c o m p l e t o de
ellas.
Los r e s u l t a d o s mu es tran que es p o s i b l e di s_
tinguir mediante esta técnica aproximadamente
45 b a n d a s d i f e r e n t e s , la m a y o r í a de Ias c u a l e s
c o n t i e n e a d e m ã s de p r o t e í n a s , l í p i d o s y carbo
h i d r a t o s en c a n t i d a d e s i m p o r t a n t e s . A d e m á s re
s u l t a d o s p r e l i m i n a r e s p e r m i t e n a f i r m a r que Ias
p r o t e í n a s de b a j o peso m o l e c u l a r (entre 1 4 , 5 0 0
y 1 0 . 0 0 0 ) son las m á s i m p o r t a n t e s desde un pun
to de v i s t a i n m u n o g é n i c o .
F i n a n c i a d o por U n i t e d N a t i o n s U n i v e r s i t y
Contract 85-111 e International Foundation
S c i e n c e Grant B/94 7-1.
(Patrocinio:
Dr. Hugo
for
Folch).
DISTRIBUCIÓN NUCLEAR DEL ANTIGEN0 T EN CÉLULAS
T R A N S F O R M A D A S POR S V ^ O . C O R R E L A C I Ò N C O N L A A C T I _
V I D A D P R O L I F E R A T I V A . ( N u c l e a r d i s t r i b u t i o n o f Ta n t i g e n in S V 4 0 - t r a n s f o r m e d c e l l s . C o r r e l a t i o n
with cell growth r a t e ) . O r d e n e s , E . y Santos,M.
Depto.Biologia Celular y Genética.Fac.Medicina,
D i v . N o r t e . U n i v e r s i d a d de C h i l e .
FLUJOS HETAB0LIC0S DE ÁCIDOS
GRASOS
EN HEPATOCITOS
AISLAD0S.
EVALUACI0N DE LA CONTRIBUTION PER0XISOHAL.
(Metabolic
f l u x e s of
fatty
acids
in
isolated
hepatocytes*
Evaluation of peroxisomal contribution)*
Orellana»A.>
y Bronfman»H*
Lab.
de
Citolodla
fiioauimica»
Dpto*
de
DiolosJa
Celular»
P.
Universidad Católica de Chile*
Las células transformadas por SV40 sintet i z a n el a n t i g e n o t u m o r a l m a y o r ( a g - T ) , d e o r i g e n v i r a l , q u e se l o c a l i z a en el n ú c l e o y en l a
s u p e r f i c i e c e l u l a r . E n t r e o t r a s f u n c i o n e s , el a g
T es c a p a z de u n i r s e al D N A c e l u l a r e i n d u c i r
s u r e p l i c a c i ó n , lo que s u g i e r e que p o d r í a p a r t i c i p a r en el c o n t r o l de l a p r o l i f e r a c i o n de es
tas c é l u l a s . U n a f o r m a de a b o r d a r e s t e p r o b l e m a
c o n s i s t e e n d e f i n i r l a d i n â m i c a de l a s i n t e r a c c i o n e s del a g - T c o n d e t e r m i n a d a s e s t r u e t u r a s
s u b c e l u l a r e s , e n r e l a c i ó n c o n la a c t i v i d a d p r o l i f e r a t i v a . E l o b j e t i v o de este t r a b a j o fue de t e r m i n a r el p a t r ó n de d i s t r i b u c i ó n n u c l e a r dei
a g - T tanto e n p o b l a c i o n e s con d i s t i n t a a c t i v i dad p r o l i f e r a t i v a , como en c é l u l a s en G ,S o G^.
C o n e s t e o b j e t o , se s i n c r o n i z o c é l u l a s ítiKSA-Asc
m e d i a n t e t r a t a m i e n t o c o n H i d r o x i u r e a , y se o b t u
vo p o b l a c i o n e s c e l u l a r e s c o n d i s t i n t a f r a c c i ó n
p r o l i f e r a t i v a , variajido I a s c o n d i c i o n e s de c u l t i v o . E l a g - T se d e t e c t o m e d i a n t e l a r e a c c i ó n
de i n m u n o p e r o x i d a s a ( P A P ) .
L o s r e s u l t a d o s m o s t r a r o n que el p a t r ó n de
d i s t r i b u c i ó n n u c l e a r dei a g - T v a r i a de a c u e r d o
al e s t a d o p r o l i f e r a t i v e de ias c é l u l a s y se m o d i f i c a a lo l a r g o de G.,S y G 2 . E I a g - T p r e s e n t a
u n a d i s t r i b u c i ó n s i m i l a r a la d e i D N A d u r a n t e
l a i n t e r f a s e , es e x c l u i d o de los c r o m o s o m a s en
l a m i t o s i s y de n u e v o es n u c l e a r al i n i c i o de
otro c i c l o . E s t a s v a r i a c i o n e s c í c l i c a s p o d r i a n
e s t a r r e l a c i o n a d a s c o n l a raantención de I a s c é l u l a s t r a n s f o r m a d a s p o r SV^J-O e n c o n s t a n t e p r o l i f e r a c i o n . P r o y e c t o 1137 F o n d e c y t , B 2 3 6 6 - 8 6 l 3 D I B
La beta o x i d a e i o n de ácidos 4rasos e n el hifado se
puede realizar en mitocondrias y peroxisomes*
No esta
c l a r o a á n c o a l e s el a p o r t e a u e r e a l i z e
cade u n a de
estas vias
a le o x i d a e i o n
total
de ácidos 4resos
hepatice*
Se h a postulado
aue la acetil-cernitina
serie u n producto de oxidaeion peroxisomal*
En este
trabajo
se realizó u n análisis
cuanti tetivo
del
campartimiento
de
aceti1-carnitine
celular
en
hepatocitos aislados» provenientes d e ratas normales a
tratadas c o n Ciprofibratot u n a drama hipolípidemiante
aue a u m e n t a e n u n o r d e n d e a a d n i t u d
la oxidaeion
peroxisomal.
los
resultados
euestran
aue en
hepatocitos provenientes de ratas tratadas
el temafto
del
compartimiento
de a c e t i l - c a r n i t i n a e s mayor w la
velocidad d e recambio aumenta aproximadamente u n orden
d e marinitud»
c o n respecto a los hepatocitos de rata
control *
La
clorpromazina*
droda
aue
inhibe
selectivãmente la beta oxidaeion peroxisomal hace caer
el n i v e l d e a c e t i l - c a r n i t i n a e n u n 3 5 % T e n h e p a t o c i t o s
aislados
de rata tratada* C o n s i d e r a n d o l a h i p ó t e s i s
aue
la
beta
oxidaeion
peroxisomal
produce
aceti1-carnitina»
se diseno
un modelo
de fluJo de
á c i d o s S r a s o s * El a j u s t e d e l o s d a t o s
experimentales
al m o d e l o
i n d i c a n a u e e s t e e s u n e b u e n a e-proxieeción
p a r a r e s o l v e r el p r o b l e m a d e f l u J o d e á c i d o s
Srasos
por
ambas vias de beta oxidaeion*
S e c o n c l u d e a u e al
oxidarse
ácido
láurico
los
peroxisomal
producen
aceti1-carnitina
a
aue
el
fluJo
a traves de
peroxisomes
no e s mayor
a un 102*
incluso
en
hepatocitos d e retas tratadas c o n ciprofibrato*
(Financiado por proyecto DIUC
B2/B6)
R236
CARACTER IZAC1 ON D E L SISTEMA D E M O N O X I G E N A S A S RENAL Q U E
CATALIZA LA OX IDACION A N D R O G E N O S , ( C h a r a c t e r i z a t i o n o f renal m o n o o x y g e n a s e s system that catalized a n d r o g e n s
o x i d a t i o n ) . O r e l l a n a M . ; W e i n b e r g e r J . ; Vasquez,HJ)epartam e n t o s d e B i o q u T m i c a , D i v i s i ó n Norte y D e p a r t a m e n t o d e M e dicina E x p e r i m e n t a 1 , D I v i s i ó n S u r , F a c u l t a d de M e d i c i n a
C i t o c r o m o P-450 es la o x i d a s a terminal en el sistema de
m o n o x i g e n a s a s m i c r o s o m a 1 e s q u e m e t a b o l i z a c o m p u e s t o s I ip o f M i c o s e x ó g e n o s y e n d ó g e n o s . E s t a h e m o p r o t e i n a se e n cuentra p r i n c i p a l m e n t e en el h T g a d o , pero también está
p r e s e n t e en ó r g a n o s e x t r a h e p á t i c o s , tales como rinón y
p u l m ó n . El sistema de m o n o x i g e n a s a s h e p á t i c o ha sido bien
c a r a c t e r i z a d o , pero no o c u r r e lo m i s m o c o n el sistema re
na 1 .
En e s t e trabajo se e s t ú d i o el m e t a b o l i s m o renal d e a l g u nas h o r m o n a s e s t e r o i d a l e s e n ratas m a c h o s a d u l t a s d e 210
g r s . d e p e s o d e la cepa W i s t a r . La c a p a c i d a d o x i d a t i v a
dei sistema de m o n o o x i g e n a s a s en el rinón se m i d i ó utilt
z a n d o c o m o s u s t r a t o s , T e s t o s t e r o n a (T) y A n d r o s t e n e d í o n a
( A ) . L o s p r o d u c t o s d e o x i d a c i ó n se a n a l i z a r o n p o r HPLC
según la técnica d e M a n c i l l a y Gil (Analytical Letters
1 7,873 - 3 8 6 , 1984).
El rinón d e rata c o n t i e n e
un q u i n t o (0.12 n m o l / m g . p r o t e i n a ) dei c o n t e n i d o de c i t o c r o m o P-450 del h i g a d o , sin
e m b a r g o , c a t a i Í z ó en forma m u y e f i c i e n t e Ia o x i d a c i ó n d e
(A) y ( T ) . L o s p r i n c i p a l e s m e t a b o l i t o s de (A) fueron :
(T) y 6 B-OHA. C u a n d o se u t i l i z o (T) c o m o s u s t r a t o . s e ob
tuvo p r i n c i p a l m e n t e ( A ) . La f o r m a c i ó n d e los p r o d u c t o s ,
fue inhibida por la p r e s e n c i a d e CO indicando q u e el
P-450 p a r t i c i p a en la o x i d a c i ó n d e estos s u s t r a t o s . Estúdios c o m p a r a t i v o s de rinón e h i g a d o , s u g i e r e n q u e Ias
isoenzimas da c i t o c r o m o P-450 p r e s e n t e s en el rinón po drtan ser d i f e r e n t e s (en p r o p o r c i ó n y / o n a t u r a l e z a ) a
Ias dei hrg<-ido.
F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o B : 1970-8635 dei D I B , Universi dad d e C h i l e y 8025 dei F O N D E C Y T .
EFECTO
DESACOPLANTE
DE
IONOMICINA
SOBRE
MEMBRANAS
TILACOIDES D E ESPINACA (Uncoupling
effect of spinach thylakoids by lonomycin). Orel lano. E X . ,
Wagner. R. y Andreo. O S .
Centro de Estúdios Fotosintéticos y Bioquímicos (CONICET, Fund. M. Liilo, Universidad Nacional de Rosário).
Suipacha 531, 2000 Rosário. ARGENTINA.
La ionomicina es un antibiótico producído por Streptomyces conglobatus A T C C 31005. La mayoría de los antibióticos de este tipo son altamente específicos para
catfones monovalentes, mientras que ionomicina lo es para
catlones diva lentes, especialmente Ca . En este trabajo
se informan los efectos que este antibiótico posee sobre
reacciones dependientes de luz de Ias membranas tílacoides.
ionomicina en una concentracion 3 uM desacopló el
transporte fotosintétíco de electrones entre agua y metilviológeno, siendo mãs efectiva su acciõn en^presencia
de cationes divalentes tales como Mg
o Ca
.El gradiente protónico que se establece al iluminar una suspension de membranas tilacoides fue colapsado por la adición
de ionomicina. El efecto dei antibiótico fue drasticamente
incrementado cuando se agrego Ca
al medio de reacción. La dependência por cationes divalentes fue claramente mani fiesta a bajas concentraciones dei í o nó foro,
ocasionando Ca * un estimulo preferencial comparado
con Mg . La fotofosforilaciÓn fotosintética fue completamente inhibida por 8 uM ionomicina. El I Q (concentracion de ionomicina que produce el 50 % de inhibición)
fue de 2-3 uM tanto para la fotofosforilaciÓn cíclica
como para la no cíclica. Con estos resultados podemos
concluir que ionomicina actúa desacoplando la sintesis
de ATP dei transporte de electrones presumiblemente
at colapsar el gradiente protónico, catatlzando un intercâmbio de protones por cationes divalentes.
+
+
5
MECANISMOS DIFERENTES EN EL
PROCESAMIENTO
DEL
E X T R E M O 5'
DE
LOS PRECURSORES
DEL
tRNA
DE
HISTIDINA
EN
E.
coli
Y
D.
melanogaster.
(Di f f e r e n t m e c h a n i s m s -for p r o c e s s i n g at t h e 5*
end of t R N A H i s p r e c u r s o r s in E .
col i
and
D.
mel a n o g a s t e r . )
Orellana-. O. , C o o l e y . L , y
S o i l , D.
Department
of
Molecular
Biophysics
and
Biochemistry. Yale U n i v e r s i t y , U.S.A. y
Depto.
d e B i o q u í m i c a , F a c . Medi ci n a , U. d e Chi 1 e .
Los tRNA d e Histidina poseen un
nucleótido
de
guanosina extra
en
el
extremo
5*
terminal,
comparados con 1 as otras espec i es d e
tRNA.
En
D.
melanogaster
y
S.
pombe
1os genes
que
codi fi c a n p a r a e s t e
tRNA
no
poseen
la
base
e x t r a c o d i f i c a d a e n s u s e c u e n c i a , en c a m b i o l o s
d e E . coli y B. s u b t i l is p r e s e n t a n u n a
guamna
en l a p o s i ci on -1 (numeraci an e s t a n d a r
de
1os
t R N A ) . E s t ú d i o s previ o s h a n d e m o s t r a d a
q u e el
n u c l e ó t i d o d e g u a n i n a e x t r a e n el t R N A
His de
D.
mel a n o g a s t e r
es
adicionado
post
t r a n s c r i pci o n a l m e n t e
por
una
a c t i vi d a d
e n z i m á t i c a p r e s e n t e en un e x t r a c t o
de
células
en c u l t i v o d e e s e o r g a n i s m o <Cooley e t . a l . P N A S
79:6475(1982). La
enzima ha sido purificada
y
presenta un peso molecular d e
32000
en
geles
c o n S D S . M e d i a n t e la utilizacio'n d e p r e c u r s o r e s
del t R N A s i n t e t i z a d o s in v i t r o , s e h a o b s e r v a d o
la f o r m a c i ó n d e u n
posible
intermediário
que
s u g i e r e q u e la
activacidn
del
precursor
del
tRNA e s una etapa
previ a
en
1a
reacci o n
de
adición.
El
procesamiento
in
vitro
de
p r e c u r s o r e s del t R N A H i s d e
E.
coli,
p o r un
extracto
de
las células
y
por
el
Ml R N A
( c o m p o n e n t e c a t a l í t i c o d e la R N a s a
P>,demostro
q u e el n u c l e o t i d o e x t r a e s
codificado
p o r el
DNA
en
esta
bacteria.
La
presencia
del
n u c l e ó t i d o e x t r a en el t R N A Hi s d e E .
coli
se
d e b e a un p r o c e s a m i e n t o a n o r m a l p o r la R N a s a P.
F i n a n c i a d o p o r N I H y U. d e C h i l e .
P 0 L I M 0 R F I S M 0 G E N É T I C O EN VlojJJiodma.
tkaul
(ANURA: L E P T 0 D A C T Y L I D A E ) . (Genetic pol ímorphysm in Plzu/iodoma
tkaut
(Anura: L e p t o d a c t y l i d a e ) ) . Ort i z, J . C . , T r o n c o s o , L. y
Ga11egu M tos, R. D e p a r t a m e n t o de Z o o l o g f a , Facultad de
C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s y de Recursos Na tura1 e s , Un i vers i dad
de Concepción y D e p a r t a m e n t o d e Biologia y T e c n o l o g i a
dei M a r , P o n t i f í c i a U n i v e r s i d a d Católica de C h i l e , Sede
Ta Icahuano.
VtzuAodoma
tkaut
es c o n s i d e r a d a una e s p é c i e de amplio rango de d i s t r i b u c i ô n q u e se e x t í e n d e d e s d e C o p i a p ó
( 2 7 ° 2 2 S - 7 0 ° 2 0 W ) hasta Aisén ( 4 5 ° 2 4 ' S - 7 2 ° 4 2 W ) en terri
torio c h i l e n o , y en la region de Nahuel Huapi en Argentí
na.
Observacíones cariológicas y de comportamiento rep r o d u c t i v e c o m o a m p l e x u s y c a n t o h a n s u g e r i d o q u e bajo
el nombre d e P. thaa-t
están c o n s i d e r a d a s varias e n t i d a des taxonómi cas d i f e r e n t e s .
,
I
1
El p r e s e n t e trabajo se realiza sobre c i n c o p o b l a c i o
nes (Copiapó, P a j o n a l e s , V a l p a r a i s o , C o n c e p c i ó n y O s o r n o ) en base a d a t o s o b t e n i d o s p o r e l e c t r o f o r e s i s h o r i z o n
tal en gel de a l m í d ó n , en Ias c u a l e s se a n a l i z a n 18 loci
enz ímát i c o s .
De e s t o s , s iete resu1taron p o 1 i m ó r f i c o s .
El m a y o r p o r c e n t a j e de p o l i m o r f i s m o se e n c u e n t r a en la
p o b l a c i o n d e V a l p a r a i s o y el m e n o r en la p o b l a c i o n de Co
p i a pó.
De los d a t o s o b t e n i d o s , la p o b l a c i o n de Osorno se
c a r a c t e r i z a e s p e c i a l m e n t e por la p r e s e n c i a del locu Est
2, el cual no se o b s e r v a en Ias o t r a s p o b l a c i o n e s . F i n a l m e n t e se d i s c u t e el e s t a t u s taxonómico de Ias poblac i o n e s e s t u d i a d a s y sus re 1ac Íones c o n taxas d e s c r i t a s .
FEnaneiamiento:
ción.
Proyecto
20.38.04
Universidad
de Concep-
R 237
S Í N T E S I S DE V A R I A N T E S DE H I S T O N A S DURANTE E L PRIMER
C I C L O DE SEGMENTACION D E L E R I Z O DE MAR.
(Synthesis
of histone variants during the f i r s t cell cycle o f
sea u r c h i n e m b r y o s ) .
O y a r c e , A . M . ,M e r i n o , V . , Mas s o n e , R. Departamento de B i o l o g i a M o l e c u l a r , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n , C h i l e .
Los e s t a d o s tempranos d e l d e s a r r o l l o e m b r i o n á r i o
de e r i z o d e m a r s e c a r a c t e r i z a n p o r c i c l o s c é l u l a r e s c o r t o s y u n a r á p i d a d u p l i c a c i ó n d e DNA q u e p r e v a l e c e h a s t a e l e s t a d o de m o r u l a , l o que i m p l i c a l a
n e c e s i d a d de una d i s p o n i b i l i d a d de p r o t e í n a s cromos a l e s t i p o CS p a r a s e r e n s a m b l a d a s a l DNA n e o s i n t e tizado.
Con e l o b j e t o d e e s t u d i a r l a s í n t e s i s y e n s a m b l a _
j e a c r o m a t i n a d e I a s v a r i a n t e s h i s t ó n i c a s t i p o CS
d u r a n t e e l p r i m e r c i c l o de s e g m e n t a c i ó n de e m b r i o n e s d e T e X i a p y g i a tu-gox,
se a n a l i z ó l a
incorporac i ó n de H - L a m i n o ã c i d o s a p r o t e í n a s á c i d o
solub l e s , t a n t o n u c l e a r e s como c i t o p l a s m á t i c a s
mediante
método f l u o r o g r á f i c o .
3
N u e s t r o s r e s u l t a d o s o b t e n i d o s e n e m b r i o n e s d e Tç_
tAapigui
nigeA d e m u e s t r a n q u e d u r a n t e l a f a s e p r e r e p l i c a t i v a se s i n t e t i z a n fundamentalmente dos p r o t e í n a s b á s i c a s , I a s c u a l e s no s e ensamblan a l a c r o
matina durante este período.
En l a f a s e r e p l i c a t i v a s e o b s e r v a q u e e x i s t e u n a p r o t e í n a t i p o HMG
y
p r o t e í n a s d e I a s v a r i a n t e s CS q u e s o n s i n t e t i z a d a s
y ensambladas a l a c r o m a t i n a de c i q o t o e n e s t a f a se.
Estos
entre la
cas t i p o
tAapygui
lógicos.
resultados sugieren unar e l a c i ó n
temporal
s í n t e s i s y ensamblaje de v a r i a n t e s históni^
CS c o n l a f a s e S d e i c i c l o c e l u l a r e n T e vUgtn
a l igual que en o t r o s sistemas b i o -
Proyectos:
BIOSINTESIS Y EXPRESIÓN DE GANGLIÔSIDOS COMPLEJOS DURANTE LA DIFERENCIACION IN VITRO DE CÉLULAS DE RETINA
DE EMBRION DE POLLO. (Biosynthesis and expression of
complex gangliosides during differentiation of chick
embryo retina cells in vitro).
Panzetta, P., Gravotta, D. y Maccioni, H.J.F.
Centro de Investigaciones en Química Biológica de Cordoba (CIQUIBIC-UNC-CONICET). Dpto. Química Biológica,
Fac. de C. Químicas.C.C:61;5016-C5rdoba, Argentina.
Se cultivaron células disociadas de retina de embrión de polio de 7 días de edad en cubreobjetos cubiertos con polilisina. Al momento de la siembra las
células son redondas y nequenas, diferenciãndose a
medida que progresa el cultivo. La mayoría de las células incrementaron su diâmetro y emitieron procesos.
Se observaron escasas células anlanadas (nrobablemente
células gliales de Miiller). El contenido de proteína
y de DNA se mantuvo esencialmente constante hasta 7
días in vitro (7 DIV) . La incomoracion de radiactividad en gangliôsidos a partir de %-glucosamina a 7
DIV fué un 65% resnecto al valor inicial (1 DIV). La
incornoración de %-timidina, en DNA, como medida de
la actividad proliferativa, disminuyó a un 10% a nartir de 3 DIV. Al mismo tiemno cronológico que "in ovo''
la síntesis de GD3 disminuyó de un 70% a 1 DIV a un 7%
a 7 DIV, mientras que la síntesis de GDla incremento
de un 6% a 1 DIV a un 70% a 7 DIV. Estúdios inmunocitoquímicos evidenciaron la presencia de gangliôsidos
complejos en el cuerpo celular y en los nrocesos de las
células neuronales. Con esta metodologia se observo que
los gangliôsidos complejos estarían ausentes (o al limite de su detección) en Ias células gliales.
Se concluye que el cambio en la modalidad de síntesis de gangliôsidos, de simnles (GD3) a complejos
(GDla) ocurre en neuronas y es contemporâneo con la diferenciación morfológica de Ias mismas.
20.31.06 D I U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n
1082/85 FONDECYT
CARACTERIZACIflN DE CASEÍNAS QUINASAS EN Mucor rouxii
(Characterization of casein kinases in Mucor rouxii).
Pardo,P., Passeron,S., Moreno,S.
Departamento de Química Biológica, Programa de Regulacíón Hormonal y Metabólica, Facultad de Ciências Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires.
Las caseínas quinasas son proteínas ubicuas que se caracterizan por su insensibilidad a cualquiera de los efectores conocidos para otras proteínas quinasas, como
cAMP, cGMP y Ca"**" y por preferir caseina y fosvitina
como sustratos artificiales. El objeto de este trabajo
es la caracterización de estas enzimas en el hongo M.
rouxii. Hemos encontrado dos caseínas quinasas separables por DEAE-Sepharosa a las que llamamos CK I y CK II
según su orden de elucion. En fosfocelulosa la CK I eluye a 0,4 M NaCl mientras que la CK II sólo se retiene
parcialmente a baja fuerza iónica mientras que a alta
queda fuertemente retenida en la resina y eluye entre
0,6-0,7 M NaCl.Los coeficientes de sedimentación determinados en gradientes de sacarosa resultaron ser 3,5 S
para la CK I y 7,4 S para la CK II, de los cuales se
deducen pesos moleculares de 40 K y 12 7 K respectivamente. Ambas enzimas utilízan ATP como dador de fosfato con
1^ ap. de 40 uM para la CK I v 10 uM para la CK II y son
totalmente dependientes de Mg ; alcanzan el máximo de
velocidad con 2.5 mg/ml de caseina. Se encontro que ambas enzimas prefieren como sustratos proteínas ácidas como caseina y fosvitina. La CK I es fuertemente inhibida
por KC1, mientras que la CK II es levemente estimulada
por KC1, con un óptimo entre 200-250 mM. La CK II resulta inhibida por heparina con una I50 de 35 nM y presenta
una importante estimulaciõn por espermidina y espermina.
La CK I, en cambio, es inhibida por poliaminas. De acuedo a su comportamiento en DEAE-Sepharosa y fosfocelulosa,
a sus pesos moleculares y a su sensibilidad a la heparina
y poliaminas podemos homologar la CK I con las caseínas
quinasas de tipo 1 y la CK II con las caseínas quinasas
de tipo 2 encontradas en otros organismos.
-
EFECTO DEL SODIO EXTRACELUI.AR EN LA PRODUCCIÓN
DE ALDOSTERONA. P0SIBLE ROL DEL INTERCAMBIADOR
Na/Ca. (Effect of Extracellular Sodium on aldosterone production. Na* - C a 2 exchange as a
mediator).
Parra, C. y Marusic. E.T.
Depto.
Fisiol. y BiofIs., Fac. Medicina, U. de Chile.
La secreciõn de Aldosterona por células de la
zona glomerulosa de la glândula adrenal es regu
lada por diferentes estímulos como el i6n potasio, angiotensina II y ACTH.
Existen e v i d e n cias en la literatura que senalan que estos estímulos inducen un aumento dei cálcio citosôlico.
Este aumento dei cálcio citosfilico se debe
a la liberacifln de cálcio desde compartimentos
intracelulares como a influjos desde el e x t e rior.
En la remoci6n dei cálcio citosôlico podrían participar Ca-ATPasa y/o intercambiador
Na/Ca, entidades aun no identificadas en Ias cê
lulas de glomerulosa.
Con el fin de estudiar
la existência de un intercambiador Na/Ca en la
membrana plasmática de estas células,
se anali^
zó el efecto de Na en la esteroidogénesis.
Los
experimentos se realizaron en un sistema de perifusién de células de glomerulosa de adrenal
de bovino. Variando la concentraci6n de Na ex
terno y reemplazándolo isoosmBticamente por cio
ruro de colina.
Se encontro un aumento signifT
cativo de la esteroidogénesis, de 3 a 5 veces
los valores basales al bajar el Na 140 mM a 24
mM en el perifusado.
Este estímulo fue dependiente de la presencia de Ca extracelular.
Al
medir el eflujo fraccional de células previamen
te cargadas con Ca-45 se encontro" una disminución del 20t dei eflujo concomitante con la baja en el Na externo que se correlaciona temporalmente con un aumento de la Aldosterogénesis.
Sugiriendo la posible participacifin dei intercambiador Na/Ca en el fenfimeno descrito.
+
R238
IDENTIFICACIÓN DE UNA PROTEÍNA SINAPTOSOMAL QUE INMUNOREACCIONA CON SUEROS ANTI-PROTEINA BÁSICA DE MIELINA.
(Identification of a synaptosomal protein immunoreacting with anti-myelin basic protein antisera).
Pedraza, L.T., Roth, G.A. y Cumar, F.A.
Departamento de Química Biológica. Facultad de Ciências
Químicas. Universidad Nacional de Cõrdoba. Argentina.
La encefalomielitis alérgica experimental (EAE) es
una enfermedad autoinmune demielinizante con sintomas
de parãlisis que puede ser inducida por inyecciõn de
mielina de SNC en adyuvante de Freund complete La proteína básica de mielina (PBM) es el principal antigeno
responsable de la aparición de los sintomas clínicos.
Algunos roedores tienen 2 5 mãs PBM de PM entre 14 y
21.5 K. Ad emas, en cérebro de raton se han descripto va
rios polipêptidos de PM entre 25 y 100 K que son capja
ces de reaccionar inmunolõgicamente con anticuerpos anti-PBM. A la fecha ninguna de estas ultimas proteínas
ha sido identificada. En este contexto, usando una técnica de inmunodetecciõn de proteínas de fracciones subcelulares purificadas, transferidas a lâminas de nitrocelulosa después de separaciõn electroforética, observa,
mos que esas proteínas de alto PM se encontraban concen
tradas en la fracción sinaptosomal con respecto a la
fracción de mielina. Las principales proteínas relacionadas inmunologicamente con PBM corren en geles como un
doblete de PM aparente de 80-86 K y fueron tentativamen
te identificadas como sinapsina Ia y Ib, proteínas de
naturaleza básica específicas de vesiculas sinãpticas.
Una preparaciôn de sinapsina purificada tambíén inmunoreaccionS con sueros anti-PBM. Ademãs, un suero antisinapsina fue capaz de reconocer Ias PBM. Teniendo en
cuenta que PBM es el principal antigeno encefalitogénico se concluye que agentes inmunologicos producidos en
el animal sensibilizado con PBM son capaces de reconocer proteínas extramielínicas, lo cual podría tener implicância en el proceso de EAE.
ULTRAESTRUCTURA DEL ESPERMATOZOIDE DE Diplodon chilensis
chilensis (MOLLUSCA: BIVALVIA). (Ultrastructure of the
spermatozoon in D. ch. chilensis). Peredo, S., Garrido,
0. y Parada, E. Departamento de Biologia, P. Universidad
Católica de Chile-Temuco e Instituto de Embriologia.Universidad Austral de Chile.
Con el objeto de establecer la existência de alguna
relaciôn entre las características de la reprodueciõn de
p_. ch. chilensis y la morfología dei espermatozoide de
esta espécie, se fijaron pequenos trozos de gõnada de ma
chos y espermatozoides obtenidos por punción en TAM para
MET y MEB respectivamente.
Se pudo establecer que el espermatozoide está formado por una cabeza ligeramente alargada de 8 um de lon
gitud y 2 um de diâmetro,pieza intermedia formada por un
anillo de 5 mitocondrias y un flagelo simple de 28 um
de longitud y 0.3 um de diâmetro.
A nivel de la cabeza se encuentra un núcleo granular en cuya base existe una fosa de implantación donde
se articula la pieza conectante. No existe acrosoma. En
region central de la pieza intermedia se observa una
estructura fibrosa densa que conecta el núcleo con el
flagelo. Ademãs existen algunos granules de aspecto de
glicógeno distribuídos tanto en la cabeza como en la
pieza intermedia.
Diplodon chilensis chilensis tiene un espermatozo^
de dei tipo primitivo según la clasificaciõn de Franzên
(1969), aún cuando la fertilización se realiza en el in
teríor de la hembra.
Financiado por Proyecto 2-86-2 CIPUCT.
CÂMBIOS EN LA CONCENTRACION DE n-butil-^-carbolina-3-ca£
boxilato ((SCCB) EN LA CORTEZA CEREBRAL DE RATAS S0METIDAS A UN STRESS AGUDO. (Concentration changes of
n-butyl-/£-carboline-3-carboxylate (^CCB) in the cerebral cortex of rats submitted to an acute stress). Pena
Ç^*, Medina, J.M.**, Novas, M.L.**, De Robertis, E.**
and Paladini, A.C.*.
*Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (UBACONICET), Facultad de Farmácia y Bioquímica.
** Instituto de Biologia Celular, Facultad de Medicina
Universidad de Buenos Aires, Argentina.
^ C C B es un inhibidor competitivo de la unión de benzodiazepines a receptores presentes en el sistema nervio
so central. Fue aislado recientemente de corteza cerebral bovina y su purificación incluyó etapas de filtración por tamices moleculares de Sephadex G-25, distribuciôn en contracorriente y varias cromatografias en colum
nas de alta eficiência con fases reversas de C^g y C^.
En el estúdio de la naturaleza química de este ligando endógeno se identifico por espectrometría de masa al
butil ester del ácido^-carbolina-3-carboxílico. Esta
identificación fue confirmada por espectroscopía UV, y
HPLC en comparación con el compuesto sintético.
Ratas sometidas a un stress agudo presentaron un
gran aumento de los niveles cerebrales normales de /^CCB
y esta variaciõn fue bloqueada por una inyección previa
de diazepam. Por el contrario, en el cerebelo no se detectaron câmbios en situaciones de stress agudo.
La correlación de estos resultados con otros prévios
en los que la unión de benzodiazepina marcada disminuyó
en cérebro, pero no en cerebelo, en casos de stress agudo, permite postular una posible relaciôn entre el ligan_
do endógeno aislado y los estados de ansiedad.
INACTIVACIÓN DE LA PAPAINA POR 1.4-BENZ0XAZIN0NAS.
(Inactivation
of
papain
by 1,4-benzoxazinones).
Pérez, F.J, y Niemeyer, H.M. Facultad de Ciências,
La
2,4-dihidroxi-7-metoxi-l,4-benzoxazin-3-ona
(DIMBOA), el principal ácido hidroxámico de extractos
de maiz y trigo, es tóxico hacia una amplia gama de
organismos. Esta toxicidad ha sido atribuida a la
inhibición de sistemas enzimáticos relacionados con
el metabolismo energético, mediada por su reacción
con grupos sulfhidrilo de Ias enzimas. En este trabajo se describe la reacción dei DIMBOA con la papaína,
una tiol-proteasa que posee un único grupo SH en la
molécula, ubicado en el sitio activo.
El DIMBOA inactivó la papaína por reacción con
el grupo SH de esta. Estúdios cinéticos indicaron la
formación de un complejo reversible entre el DIMBOA
y la papaína que posteriormente genera la enzima
inactiva. Estúdios de pH indicaron la participación
de dos grupos disociables en la enzima con pKa de
4,5 y 8,4.
En estúdios con sustratos de la enzima, el éster
etílico de la benzoiloxiglicina (BGEE) protegió a la
enzima contra la inactivación por el DIMBOA, mientras
que el éster etílico de la benzoiloxiarginina (BAEE)
no tuvo efecto. El análisis de los productos de la
reacción por cromatografía líquida de alta presión
sugirió que el DIMBOA se une covalen temente a la
enzima. Un análogo dei DIMBOA, la 4-hidroxi-l,4-benzoxazin-3-ona, no reaccionõ con la papaína. Se propone
un mecanismo consistente con estos datos.
Este trabajo fué financiado por la AID, FONDECYT
y la Universidad de Chile.
R 239
E S T Ú D I O INMUNOLOGICO DE MEMBRANAS DE S U P E R F Í C I E Y T U B U LOS T R A N S V E R S O S A I S L A D O S DE MUSCULO E S Q U E L É T I C O DE RANA
( I m m u n o l o g i c a l s t u d i e s o n s u r f a c e membranes a n d t r a n s verse tubules isolated from frog skeletic
muscle).
P é r e z G . y R o s e m b l a t t M. U n i d a d d e I n m u n o l o g í a C e l u l a r .
I N T A . U n i v e r s i d a d de C h i l e .
L o s c o m p o n e n t e s m o l e c u l a r e s i n v o l u c r a d o s e n e l meca_
n i s m o de a c o p l a m i e n t o e x c i t a c i ó n - c o n t r a c c i ó n d e m ú s c u l o
e s t r i a d o , se ubican p r e f e r e n c i a l m e n t e en t ú b u l o s t r a n s v e r s o s ( t - T ) , r e t í c u l o s a r c o p l a s m i c o ( R S ) y membrana de
s u p e r f í c i e ( M S ) . E s t o s componentes parecen c o n s t i t u i r
s i s t e m a s de m e m b r a n a s f u n c i o n a l y e s t r u c t u r a l m e n t e d i s tintos .
Con e l f i n de c o m p r o b a r l o a n t e r i o r , e n e s t e t r a b a j o s e d e t e r m i n a e l o r i g e n y p u r e z a de e s t a s p r e p a r a c i o n e s de m e m b r a n a , u s a n d o u n e n f o q u e i n m u n o l ó g i c o . P a r a
e s t o se p r e p a r a r o n a n t i c u e r p o s c o n v e n c i o n a l e s y monoclo
n a l e s c o n t r a m e m b r a n a s de m ú s c u l o e s t r i a d o d e r a n a ( C A U DIVERBERA CAUDIVERBERA), p r e p a r a d a s p o r métodos b i o q u í micos c o n v e n c i o n a l e s .
E l a n t i s u e r o o b t e n i d o de c o n e j o s
i n m u n i z a d o s c o n u n a p r e p a r a c i ó n de t - T ( 0 . 8 mg t - T e n
i g u a l v o l u m e n c o n a d y u v a n t e c o m p l e t o de F r e u n d , i n y e c ción i n t r a d é r m i c a ) presenta una r e a c t i v i d a d , comparando I a s p r e p a r a c i o n e s de m e m b r a n a s m e d i a n t e E L I S A , d e
c u a t r o v e c e s m a y o r c o n l a p r e D a r a c i ó n de t ú b u l o - T que
c o n l a de R s , y s o l o
dos
v e c e s mayor que l a
prepa^
r a c i õ n de M S . Se h a n a i s l a d o t a m b i é n h í b r i d o s p r o d u c t o
r e s de t r e s c l a s e s de a n t i c u e r p o s m o n o c l o n a l e s e s p e c í f i c o s , que p r e s e n t a n r e a c t i v i d a d i n m u n o l õ g i c a p a r a c a da t i p o de m e m b r a n a .
E s t o s r e s u l t a d o s , i n d i c a r í a n q u e l a p r e p a r a c i ó n de
t - T e s c l a r a m e n t e d i f e r e n c i a b l e i n m u n o l ó g i c a m e n t e de l a
p r e p a r a c i ó n de R S . E n e l c a s o de l a M S , t o d o p a r e c e i n d i c a r que e x i s t e una a l t a c o n t a m i n a c i ó n con t - T .
E s t o s r e s u l t a d o s apoyan l o s obtenidos por medición
de p a r â m e t r o s b i o q u í m i c o s t a l e s como l i g a m e n de n i t r a n d i p i n a y c o n t e n i d o de c o l e s t e r o l .
Financiamiento:
DIB. Proy.
N£ B 2 3 9 7 - 8 6 1 2 .
R E G U L A C I Ó N D E LA E R I T R O P O Y E S I S : TRES M E T O D O L O G I A S E X P E R I M E N T A L E S PARA UN M I S M O O B J E T I V O . (Hormonal R e g u l a t i o n of
E r y t h r o p o i e s i s : T h r e e E x p e r i m e n t a l M e t h o d o l o g i e s for a
same o b j e c t i v e ) . M . P e r r e t t a , G. C a r r a s c o y M . T i j m e s . Ins_
tituto de N u t r i c i õ n y T e c n o l o g i a de los A l i m e n t o s ( I N T A ) ,
La e r i t r o p o y e s i s está r e g u l a d a p o r su m i c r o a m b i e n t e ce_
l u l a r , p o r f a c t o r e s p r o t e i c o s y p o r h o r m o n a s . Entre estas
la e r i t r o p o y e t i n a (Epo) e s la p r i n c i p a l , junto c o n la tes_
t o s t e r o n a ( T a ) . La h i p ó t e s i s de t r a b a j o e s q u e la a c c i ó n
c o n j u n t a de a m b a s h o r m o n a s induce y a u m e n t a la sintesis
de RNAs q u e p a r t i c i p a n e n la s i n t e s i s de g l o b i n a s . Para
d e m o s t r a r i a se u t i l i z a r o n tres e s t r a t é g i a s e x p e r i m e n t a l e s : s i n t e s i s de R N A IN V I T R O , s i n t e s i s de RNA IN V I V O y
s i n t e s i s de un p r e RNAm (RNAhn) y estimula la s i n t e s i s de
p r e R N A r . La Ta p a r t i c i p a tanto en e l p r o c e s a m i e n t o d e i
p r e RNAm c o m o d e l p r e RNAr en Ias e t a p a s de RNAr 22 s a
18 s y p r e RNAm 13 s a 9 s. El RNAhn u n a v e z inducido p o r
la E p o se u n e a p r o t e í n a s e s p e c i f i c a s formando u n a R N P ,
en la q u e cada p r o t e í n a cumple un rol en e l p r o c e s a m i e n to de este RNAhn. Esto s i g n i f i c a q u e el RNAhn inducido
p o r la E p o es p r o c e s a d o h a s t a su forma funcional b a j o la
forma de RNP p o r o t r a s R N P cuyos RNA son e s t i m u l a d o s p o r
la T a . Se d e m u e s t r a q u e a l u t i l i z a r tres e s t r a t é g i a s o p e r a c i o n a l e s se o b t i e n e n r e s u l t a d o s s i m i l a r e s lo q u e p e r m i te p r o p o n e r un m e c a n i s m o de a c c i õ n de ambas h o r m o n a s , lo
q u e a su v e z a p o y a el concepto g e n e r a l q u e la e r i t r o p o y e sis es un p r o c e s o h o r m o n a - d e p e n d i e n t e . Se p o s t u l a q u e la
r e g u l a c i ó n d e i p r o c e s a m i e n t o de p r e RNAm se r e a l i z a en
forma de p a r t í c u l a s m a c r o m o l e c u l a r e s (RNP) siguiendo u n a
t r a y e c t o r i a v e c t o r i a l d e n t r o d e la c é l u l a . Se p r e s e n t a n
los m o d e l o s m o l e c u l a r e s q u e e x p l i c a n esta i d e a .
(Financiado p o r DIB,u.de C h i l e . P r o y e c t o B - 2 0 1 7 - 8 6 3 3 ) .
C A R A C T E R I Z A C I Ó N DE L O S COMPONENTES DE L A R E S P U E S T A E V O CADA EN L A C O R T E Z A P R E F R O N T A L DE L A R A T A POR E S T I M U L A CION DEL LOCUS C O E R U L E U S . ( C h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e
components o f p r e f r o n t a l c o r t e x responses evoked i n the
r a t by s t i m u l a t i o n o f the locus c o e r u l e u s ) . P é r e z , H . ,
R u i z , S . , H e r n a n d e z , A . y S o t o - M o y a n o . R . U n i d a d de N e u r o f i s i o l o g i a y B i o f í s i c a , I n s t i t u t o de N u t r i c i õ n y T e c n o
l o g í a de l o s A l i m e n t o s ( I N T A ) .
Se s a b e q u e e l s i s t e m a n e u r o n a l n o r a d r e n é r g i c o q u e t o
ma s u a s i e n t o e n e l l o c u s c o e r u l e u s ( L C ) e n v i a i m p u l s o s
d i r e c t a m e n t e a l a c o r t e z a c e r e b r a l y que l a e s t i m u l a c i õ n
e l é c t r i c a de e s t e s i s t e m a de p r o y e c c i ó n c o r t i c a l m o d u l a
l a a c t i v i d a d n e u r o n a l de l a n e o c o r t e z a .
Se i n t e n t a i n d i v i d u a l i z a r y c a r a c t e r i z a r l o s d i f e r e n t e s c o m p o n e n t e s de l a r e s p u e s t a e v o c a d a e n l a
corteza
p r e f r o n t a l ( C P F ) de l a r a t a p o r e s t i m u l a c i õ n
eléctrica
d e l L C . Se e m p l e ó t é c n i c a s de e s t i m u l a c i õ n s i m p l e r e p e t i t i v a y de t r e n e s de p u l s o s . Se u t i l i z o r a t a s d e 45
d í a s de e d a d . L a e s t i m u l a c i õ n s i m p l e r e p e t i t i v a f p u l s o s
de 0 . 3 mseg y de 1.15 mA) s e l l e v õ a c a b o a u m e n t a n d o l a
f r e c u e n c i a de e s t i m u l a c i õ n de modo t a l de r e d u c i r a l a
m i t a d l a a m p l i t u d de l o s c o m p o n e n t e s de l a r e s p u e s t a . L a
e s t i m u l a c i õ n e l é c t r i c a p o r t r e n e s c o n s i s t i ó e n 1 a 5 pul_
s o s de 0 . 3 mseg de d u r a c i ó n c a d a u n o y de i n t e n s i d a d s u
f i c i e n t e p a r a e v o c a r r e s p u e s t a s umbral e s . P a r a comprobar
l a n a t u r a l e z a n o r a d r e n é r g i c a de l o s d i s t i n t o s c o m p o n e n t e s de e s t a r e s p u e s t a s e m i c r o i n y e c t ó p r o p a n o l o l
(2ug/ul)
en C P F . L o s r e s u l t a d o s m u e s t r a n q u e : a ) l a r e s p u e s t a e v o
c a d a e n C P F p o r e s t i m u l a c i õ n d e i L C c o n s t a de d o s c o m p o n e n t e s , t e m p r a n o y t a r d i o , b ) ambos c o m p o n e n t e s s o n i n h i
bidos p o r propanolol m i c r o i n y e c t a d o , c ) f r e n t e a l a estj_
m u l a c i ó n s i m p l e r e p e t i t i v a , e l c o m p o n e n t e t e m p r a n o e s me
nos f a t i g a b l e que e l componente t a r d i o , d ) f r e n t e a l a
e s t i m u l a c i õ n p o r t r e n e s de p u l s o s e l c o m p o n e n t e t e m p r a n o
m o s t r o c a p a c i d a d de s u m a c i ó n t e m p o r a l . L o s r e s u l t a d o s su
g i e r e n que I a s r e s p u e s t a s e v o c a d a s e n CPF p o r e s t i m u l a c i õ n d e i L C p o s e e n un c o m p o n e n t e t e m p r a n o de c a r a c t e r í s ticas monosinápticas .
F i n a n c i a FONDECYT, P r o y e c t o 1059/1985.
E F E C T O E S T I M U L A D O R . D E LA G L U C O S A SOBRE LA
INC O R P O R A C I Õ N DE
1C
LEUCINA A PROTEÍNAS
EN
C O R T E Z A C E R E B R A L ^ E R A T A S . (Glucose s t i m u l a t o ry a c t i o n on
1C leucina
i n c o r p o r a t i o n into p r o t e i n s by rat c e r e b r a l c o r t e x ) . P e r r y , V.
L • T • , P e r r y , M . L . S . , P e r e i r a , I.R.G. y Bernard,
E • A.
D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a , I n s t i t u t o
de B í o c i e n c i a s , U n i v e r s i d a d e F e d e r a l do Rio
Grande
do S u l , P o r t o A l e g r e , R S , B r a s i l .
u
En un trabajo anterior demostramos 1 e ^ la glucosa lOmM estimula la incorporaciõn de £(U)leucina
a proteínas dei SNC, este efecto no fue observado cuan
do se utilizo lactato o piruvato. En el presente traba
jo investigamos mãs ampliamente este efecto, utilizando varias concentraciones de glucosa, de intermediários
glicolíticos y dei ciclo de Krebs. También estudiamos
el efecto dei agregado de glutamina y de cuerpos cetõ
nicos al medio de incubaciõn^ Como precursor de sintesis proteica se utilizo Ql- cj leucina la que no es
transformada a ningum otro aminoacido radioactive
Slices de corteza cerebral de ratas de 10 dias de
edad se incubaron 1 hora a 35 C en KRB, conteniendo separadamente los diferentes nutrientes que fueron ensayadps.jâra medir sintesis proteica se utilizo 0,25 uCi
de [_1- C J leucina, la reacción se detuvo por agregado
de TCA y se midiõ la radioactividad presente em protei
nas. La glucosa mostro un acentuado efecto estimulador
sobre la sintesis proteica a una concentracion de
0,625mM y alcanzõ el máximo de estimulaciõn com 2,5mM.
De todos los demas nutrientes ensayados solamente
el
lactato 15mM y cuerpos cetonicos mostraron algum efecto estimulador pero de una magnitud muy inferior a la
demostrada por la glucosa. La glucosa también mostro
un efecto estimulador sobre la entrada de leucina
al
tejido, pero este estimulaciõn fue mucho menor que la
producida sobre la sintesis proteica.
Auxilio Financeiro: CNPq, FINEP, PROPESP/UFRGS.
R 240
ESTEROIDOGÉNESIS Y SÍNTESIS PROTEICA EN OVARIO DE ANFÍBIOS (protein synthesis and steroidogenesis in amphibian)
ovarian follicles). Petrino.T.y Schuetz.A.W.,Dtp.Biol,
del Desarrollo.INSIBIO-CONICET-UNT.Tucumán.Argentina
Experimentos prévios mostraron que la estimulaciõn
pituitaria de la producción de progesterona(P) y la acción de la misma en los folículos ováricos de anfíbios,
son dependientes de la síntesis proteica tanto en las
células foliculares como en el ovocito.En este estúdio
se investigo la conversion de pregnenolona a P en el
ovario de Rana, y si esta etapa especifica de la ruta
sintética de progesterona requiere de la mencionada sín
tesis proteica.Folículos en distintos estádios de la
ovogenesis fueron cultivados con pregnenolona exógena
y el contenido de P del medio y de los extractos foliculares fueron determinados por RIA.La concentración
folicular de P acumulada después de 4 hrs.de cultivo,
incremento proporcionalmente con el tamano dei folícula
Los niveles intrafoliculares de P fueron consistentemente mãs altos que los niveles detectados en el medio.
Cuando folículos totalmente crecidos fueron cultivados
en la presencia de pregnenolona o pituitaria y/o cicloheximida,el inhibidor de la síntesis proteica bloqueõ
completamente la acumulación de P inducida por pituitaria,pero no la conversion de pregnenolona a P.Por el
contrario,la cianocetona(CK),un inhibidor irreversible
de la 30-esteroide deshidrogenasa(30-HSD),bloqueõ la
acumulación de P inducida por pituitaria o pregnenolona
La adición de pituitaria a folículos prefcratados con CK
no restauro la capacidad de los folículos para convertir pregnenolona a P.Estos resultados sugieren que la
conversion de pregnenolona a P ocurre eficientemente
aún en ausência de pituitaria durante el crecimiento
dei folículo(ovogénesis) y que la actividad de la 3pHSD es independiente de la síntesis de proteínas en
folículos totalmente crecidos.El requerimiento proteico,
durante la inducción pituitaria, para el incremento
rápido de P,parece ser anterior a la conversion de pregnenolona a P y no involucra la síntesis de novo d e 3 ^ S D
E S T Ú D I O DE CEPAS A U T 0 C T 0 N A S DE T h i o b a c i l l u s f e r r o o x i d a n s .
(Studies on native strains o f Ihiobacillus ferrooxidans).
P i c h u a n t e s , S. L a b o r a t ó r i o de M i c r o b i o l o g f a , Departanento
de B i o l o g i a C e l u l a r ,
Facultad de Ciências B i o l ó g i c a s ,
P o n t i f i c i a U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a de C h i l e .
Se s a b e q u e c i e r t o s m i c r o o r g a n i s m o s e s t á n i n v o l u c r a
d o s e n l a l i x i v i a c i ó n d e m i n e r a l e s s u l f u r a d o s , t a l e s como
c a l c o p i r i t a y p i r i t a , propiedad quepromete s e r de gran
u t i l i d a d e n p r o c e s o s b i o e x t r a c t i v o s . Una d e l a s e s p é c i e s
más e s t u d i a d a s e n e s t e s e n t i d o , l a c o n s t i t u y e e l g e r m e n
q u i m i o l i t o t r ó f i c o T h i o b a c i l l u s f e r r o o x i d a n s , ques e c a r a c t e r i z a p o r d e s a r r o l l a r s e en medios ácidos y p o r s e r
c a p a z d e f i j a r C O , u t i l i z a n d o como f u e n t e d e e n e r g i a , l a
oxidaeion
de i o n f e r r o s o o de compuestos de a z u f r e r e ducido.
Con e l o b j e t o d e s e l e c c i o n a r c e p a s c o n a l t a c a p a c i dad l i x i v i a n t e s o b r e m i n e r a l e s c h i l e n o s y q u e s e a n
poten
cialmente susceptibles a manipulación
g é n i c a , hemos e fectuado una c a r a c t e r i z a c i ó n f i s i o l ó g i c a , genética y u l t r a e s t r u c t u r a l de c i n c o cepas n a t i v a s de T . f e r r o o x i d a n s ,
provenientes de minerales dei norte chico y centro dei
país.
En e s t e t r a b a j o s e h a i n v e s t i g a d o : a ) l a c i n é t i c a
de c r e c i m i e n t o b a c t e r i a n o e n m e d i o s de c u l t i v o s i n t é t i c o s , b ) l a capacidad l i x i v i a n t e de algunas de I a s cepas
en e x p e r i m e n t o s d e l a b o r a t ó r i o b a j o c o n d i c i o n e s b i e n d e finidas, c ) la susceptibilidad a diversos antibióticos y
d ) u n e s t ú d i o u l t r a e s t r u c t u r a l c o m p a r a t i v o u t i 1 i z a n d o téç_
nicas de t i n c i ó n n e g a t i v a y c o r t e s u l t r a f i n o s .
Finalmente, se presentan
l o s resultados de l o s e x perimentos de t r a n s f e r e n c i a de m a t e r i a l g é n i c o , mediante
transformación y conjugaciôn, efectuadas en estos microorganismos.
Financiado parcialmente
p o r D I U C 89/85.
C A R A C T E R Í S T I C A S E N Z I M A T I C A S Y G E N É T I C A S DE R I B U L O S A
B I S F O S F A T O C A R B O X I L A S A DE T h i o b a c l l l u s
ferrooxidans.
01 g a P h i 1 H p s , L u i s a H e r r e r a v_ L o r e t o H o l u i g u e .
Departamento
de Bioqufmica,
Facultad
de Medicina,
La u t l l i z a c i d n de b a c t é r i a s en e l p r o c e s o de l i x i v i a cio'n de m i n e r a l e s , p r e s e n t a v e n t a j a s econômicas para l a
e x t r a c c i o ' n de c o b r e y o t r o s m e t a l e s desde m i n e r a l e s de
baja l e y . Dentro de l o s microorganismos
lixiviantes,
e l ma"s i m p o r t a n t e e s e l T h i o b a c i l l u s f e r r o o x i d a n s . E s t a
b a c t e r i a e s un a u t o ' t r o f o e s t r l c t o q u e o b t i e n e e l c a r b o no c e l u l a r p o r f i j a c i d h de C O j . E s t e p r o c e s o r e s u l t a
i n t e r e s a n t e de e s t u d i a r , puesto que es l i m l t a n t e para
e l c r e c i m i e n t o c e l u l a r . E n e s t e s e n t i d o , hemos a b o r d a d o
e l e s t ú d i o d e l a s c a r a c t e r f s t i c a s enz1ma"t1cas y g e n é t i cas de l a r i b u l o s a b i s f o s f a t o c a r b o x i l a s a ( R u b i s c o ) ,
enzima que c a t a i i z a l a p r i m e r a reaccio'n d e l c i c l o de
Calvin.
E s t a e n z i m a ha s i d o p u r i f i c a d a t a n t o de l a
f r a c d d h s o l u b l e como d e c a r b o x i s o m a s d e T . f e r r o o x i dans.
Su p e s o m o l e c u l a r n a t i v o e s d e 500 k D y p o s e e 2
t i p o s d e s u b u n l d a d e s d e p e s o s m o l e c u l a r e s 54 k D ( A ) y
14,5 kD ( B ) . E s t a s e v i d e n c i a s , j u n t o c o n e l e f e c t o 1 n h i b i t o r i o de 6 - f o s f o g l u c o n a t o ,
I n d i c a n que l a enzima
posee una e s t r u c t u r a hexadecamérlca ( A g B g ) .
Se han d e terminado algunas c a r a c t e r f s t i c a s c a t a l f t f c a s de esta
enzima.
A p a r t i r d e u n a g e n o t e c a d e DNA c r o m o s o m a l d e
T . f e r r o o x i d a n s , c o n t r u i d a e n p B R 3 2 2 , hemos p u r i f i c a d o
c i c l o n e s que probabl emente c o n t i e n e n s e c u e n d a s d e l gen
d e R u b i s c o , p o r h i b r i d i z a d o ' n c o n un o l I g o d e o x i n u c l e d " t i d o d e 21 b a s e s , q u e c o r r e s p o n d e a u n a s e c u e n c i a d e l a
protefna altamente conservada. Los plasmidios recombln a n t e s a i s l a d o s de e s t o s c l o n e s poseen I n s e r t o s de 3 , 5 ;
1,4 y 0 , 7 k b , e h l b r i d i z a n c o n e l o l 1 g o n u c l e ô * t i d o e n
análisis tipo "dotblot".
La p r e s e n c i a de l o s genes de
R u b i s c o en e s t o s c l o n e s esta' s i e n d o c o r r o b o r a d a mediant e e l u s o de una segunda sonda que c o n t i e n e e l g e n de
Rubisco de Chromatium v i n o s u m .
( P a t r o c i n a d o p o r p r o y e c t o PNUD/ONUDI
U n i v e r s i d a d de C h i l e y F0NDECYT.)
CHI/85/002, D I B ,
TRANSFERENCIA D E ENERGIA EN RELACIÓN
CON
LA ESTRUCTURA CUATERNARIA D E LA PEP CARBOXILASA D E MAIZ. (Energy transfer in relation to the quaternary structure of maize PEP carboxylase). Podesta,F.E.
Wagner. R„ Gonzalez, D.H. y Andreo. C.S.
Centro de Estúdios Fotosintéticos y Bioquímicos (CONICET, F.M. Lillo, Universidad Nacional de Rosário) Suipacha 531, Rosário, Argentina.
Se llev6 a cabo un estúdio de transferencia de energia
de resonancia en la fosfoenolpiruvato (PEP) carboxilasa
de hojas de malz. Se utilizaron para ello dos reactivos
fluorescentes: cloruro de dansilo (DNS-CI) e i sot I ocianato de eosina (ENCS). Ambos compuestos produjeron la
inactivación total de la enzima cuando la incorporación
fue de 4 moles de modificador por mol de carboxilasa.
PEP y MgCl2 protegieron contra la inactivación por cualquíera de los dos compuestos.
Para los estúdios de transferencia de energia se utilizaron muestras marcadas con 1 mol de DNS-CI (dador)
y 1-3 moles de ENCS (aceptor) por mol de enzima. En
la PEP carboxilasa así marcada se observo una disminución en la Intensidad de la emisión del dador y un aumento en la intensidad de la fluorescencia del aceptor.
Esto se incremento con el aumento del numero de aceptores.
El cálculo de las distancias entre el dador y los aceptores revelo que dos de estos se encuentran a 50 A del
dador, mientras que un tercero dista 64 Â La disociación
de la enzima en condiciones de elevada fuerza iõnica
redujo drasticamente la eficiência de la transferencia
de energia, indicando que los sitios modificados se encuentran en distintas subunidades.
EFECTO DE MERCÚRIO SOBRE F E C U N D A C I Ò N , DESARROLLÓ E M B R I O N Á R I O Y UN S I S T E M A P R O T E O L I T I C O EN E
Q U I N O D E R M O S . (Effect of m e r c u r y on f e r t i l i z a t i o n , embrionic development and a proteolytic
s y s t e m in e q u i n o d e r m s ) , P o n c e , 0_, , E n r i q u e z , S
y £ ^ A » àj D e p t o . B i o l o g i a M O l e c u l a r . F a c .
C s . B i o l , y de R e c . N a t . U n i v e r s i d a d de Concep_
c i ó n . C h i l e . (Patrocinio: V. Silva).
M a
f i
E s t ú d i o s r e a l i z a d o s en n u e s t r a s c o s t a s de
la V I I I R e g i o n r e v e l a n a l t o s n i v e l e s de c o n t a m i n a n t e s e n t r e los que se d e s t a c a n m e t a l e s p e s a d o s como m e r c ú r i o , c a d m i o , plorno y o t r o s .
El o b j e t i v o de e s t a c o m u n i c a c i ó n es p r e s e n
t a r los e f e c t o s dei m e r c ú r i o s o b r e el p r o c e s o
de f e c u n d a c i ò n y d e s a r r o l l ó e m b r i o n á r i o u t i l i zando el e r i z o n e g r o T. n i g e r y su a c c i ó n a ni^
vel m o l e c u l a r s o b r e e n z i m a s p r o t e o l i t i c a s a c í d i c a s t i p o c a t e p s i n a s D.
Se d e m u e s t r a que h u e v o s no f e c u n d a d o s de e
rizo n e g r o p r e t r a t a d o s con u n a s o l u c i ã n 25 uM
de m e r c ú r i o y l a v a d o s p o s t e r i o r m e n t e , i n c o r p o rai! m e t a l l o g r á n d o s e s a t u r a b i l i d a d con U uM a
los 60 m i n u t o s y que la a c t i v i d a d p r o t e o l i t i c a
m e d i d a en el b o m o g e n i z a d o o b t e n i d o de e s t o s
h u e v o s se r e d u c e en un 50% a p r o x i m a d a m e n t e en
r e l a c i ô n al c o n t r o l . Al p r e t r a t a r l o s h u e v o s
con m e r c ú r i o 25 uM d u r a n t e 60 m i n u t o s , l a v a r los y f e c u n d a r l o s p o s t e r i o r m e n t e , no se o b s e r va d e s a r r o l l ó e m b r i o n á r i o , sino s o l a m e n t e m e m b r a n a de f e c u n d a c i ò n . A l c o l o c a r l o s e s p e r m a t o
z o i d e s en u n a s o l u c i ô n con m e r c ú r i o 1.5 uM se
o b s e r v a d e t e n c i ô n de su m o v i l i d a d a l o s 2 m i n u
tos ,
De e s t o s r e s u l t a d o s se c o n c l u y e que el m e r
c u r i ó , a f e c t a el d e s a r r o l l ó e m b r i o n á r i o , la mp_
v i l i d a d de l o s e s p e r m a t o z o i d e s y un s i s t e m a en
z imát ico que se h a d e s c r i t o como i m p o r t a n t e en
el p r o c e s o de d i v i s i o n c e l u l a r .
F i n a n c i a d o por p r o y e c t o 2 0 3 1 0 8 . U. de C,
BIOACTIVIDAD OE PROLACTINA HIPOFISIARIA DE RATA: EFECTO OEL TRATAMIENTO
CON UREA 2.5N pH:10,0. (Rat pituitary prolactin bioactivity: effect of
2,5H urea pH:I0,0). Prada, H.I., Torres, A.I, y Aoki, A.
Centra
de
Microscopia
Electr6nica,Facultad
de
Ciências
Nédicas,Universidad Nacional de Córdoba.
La heterogeneidad aolecular y coapaptaaentalizacion swbcelular de
prolactina hipofisiaria (PRLh) de rata han sido demostradas
anteriormente en nuestro laboratório, ta foraa aonoafrica, de bajo
peso molecular, altaeente soluble en soluciãn salina de Fosfato (PSS)
y
biológicaaente
activa está asociada a Ias organelas
proteinopoyóticas. La fona poliaéYica, de aayor peso aolecular,
insoluble en PBS y de aenor actividad biológica se encuentra
alaacenada en los grínulos secretorios de Ias células lactotropas.
El eipleo de urea 2,5", pH:10,0 ha deaostrado ser un aétodo efectivo
para converter Ia horaona poliaérica en aonoaírica, to cual se
traduce en un auaento de la actividad inaunológica detectada. Este
trabajo fue realizado para deterainar el efecto de urea 2,5H pH:10,0
sobre la bioactividad de PRLh. HipóFisis anteriores provenientes de
ratas heabras previaaente estrogenízadas fueron homogeneizadas en PBS
pH:7.0. El hoaogenato obtenido Fue dividido en dos fracciones: 1)
hoaogenato total centrifugado a 10.000 x g. y 2) hoaogenato total •
urea 2.5N pH:10,0. Estas auestras Fueron incubadas a 4°C durante 3 h.
La actividad biológica Fue deterainada aediante un ensayo en buche de
Zenaida auriculada. Los aníaales recibieron dosis equivalentes de
tejido Fresco repartílndose la dosis total en cuatro días. Al quinto
dia se los decapito y se reaovíeron los buches, los cuales fueron
procesados para su posterior observación aicroscóplca. El recuento
dei núaero de capas celulares proliferadas en el epitelio Fue el
parâmetro de coaparación de la bioactividad resultante en cada grupo
de aníaales. La actividad biológica de un hoaogenato tratado con urea
2,SN pH:10,0 es aayor en coaparación a la observada en un hoaogenato
realizado en PBS pH:7,0. Se deauestra así que el efecto disociante de
la urea sobre PRLh no deteriora la actividad biológica de los
aonóaeros resultantes.
R241
DESARROLLÓ DE UN MÉTODO PARA ESTUDIAR LA HISTOPATOLOGIA
Y LA ULTRAESTRUCTURA DEL 0IDO HUMANO. (Development of a
method to study the histopathology and the ultrastructu
re of the human ear). Posada, J. y Otte,J.
Depto. Ciências Básicas y Depto. de Cirugia, Traumatolo
gía y Anestesia, Fac. de Medicina, Div. Sur. U. de Chile
(Patrocinio: J. Pereda)
El estúdio histopatológico del oido humano requiere
una técnica que demora vários meses y que, por razones
diversas, no era realizada en el país. Por otra parte,
por la dificultad de obtener material fresco y adecuado,
la ultraestructura del oído humano normal no es bien co
nocida y las alteraciones ultraestructurales en la pato
logia cocleo-vestibular son aCin menos conocidas.
De 11 pacientes que fallecieron y que tenían docümen
taciôn clínica concerniente a este estúdio, se obtuvieron 22 huesos temporales. El oido más afectado se proceso para su estúdio al microscópio óptico. Del oido sa
no, o menos afectado,se obtuvieron muestraeque se proce
saron para microscopía electrônica. En 4 de estos hue
sos se termino su procesamiento, lo que permitió ini ciar el estúdio en ambos niveles.
Los resultados de ambas técnicas fueron concordantes
y demuestran que este método puede ser aplicado exitosa
mente en el estúdio dei oído humano. Se obtuvo información de la ultraestructura del oido y de algunas altera
ciones post-mortem.
En los casos clínicos se encontro:
una relaciôn entre la audición y el ôrgano de Corti, no
así con el numero de células ganglionares (que fuê me nor); una explicaciôn anatômica (cúpulolitiasls dei canal posterior) de las crisis vertiginosas posturales
post TEC y una variaciõn anatômica rara dei conducto au
ditivo interno.
Los resultados obtenidos son más confiables mientras
menor sea el lapso entre los exãmenes clínicos y la obtención dei hueso temporal. En algunas estructuras pue
de perderse el patrôn de comparación al destinarse los
oídos a 2 técnicas diferentes.
PROYECTO DIB M2156-8625.
L A R E T E T E S T I S D E L OCTODON d e g u s . ( T h e R e t e t e s t i s i n
t h e Octodon d e g u s ) . P r a d o , F. D e p t o . de M o r f o l o g í a E x p .
F a c u l t a d de M e d i c i n a . U . de C h i l e . ( P a t r o c i n i o : B. Morales)
La r e t e t e s t i s e s t á c o n s t i t u í d a p o r numerosas cavj^
dades i r r e g u l a r e s a n a s t o m o s a d a s , t i p o l a b e r i n t o , q u e c o necta al túbulo seminífero con l o s conductos e f e r e n t e s .
Su o r g a n i z a c i ó n y u b i c a c i ó n p r e s e n t a v a r i a c i o n e s e n I a s
d i s t i n t a s espécies de mamíferos.
Nuestro objetivo fue estudiar la Rete T e s t i s del
Octodon degus a d u l t o , en p e r í o d o s de r e p o s o y a c t i v i d a d
s e x u a l . S e u t i l i z a r o n l o s t e s t í c u l o s d e 20 m a c h o s , 1 0 e n
a c t i v i d a d y 10 e n r e p o s o s e x u a l , l o s c u a l e s f u e r o n d i s e
cados s o l o s o con sus e p i d í d i m o s . F u e r o n f i j a d o s en D u b o s c q - B r a s i l , i n c l u í d o en p a r a f i n a y cortados en forma
seriada por el e j e l o n g i t u d i n a l , transversal y s a g i t a l .
Los c o r t e s f u e r o n t e n i d o s con H-E,PAS y t r i c r ó m i c o . S e
r e a l i z a r o n mediciones d e i área ocupada p o r l a r e t e u t i l i z a n d o un O c u l a r m i l i m e t r a d o OLYMPUS.
La r e t e t e s t i s d e l Octodon degus p r e s e n t a una p o r c i ó n I n t r a t e s t i c u l a r , una I n t r a t u n i c a l y o t r a E x t r a t e s t i c u l a r . La I n t r a t e s t i c u l a r es de mayor tamano, t i e n e
f o r m a de un tubo a p l a n a d o en e l e j e a n t e r o - p o s t e r i o r . L a
porción Intratunical está representada por tübulos
irre
gulares que a t r a v i e s a n l a túnica albugínea y l a Extrates^
t i c u l a r c o r r e s p o n d e a una c ó p u l a s o l e v a n t a d a de donde
e m e r g e n l o s c o n d u c t o s e f e r e n t e s . D u r a n t e e l p e r í o d o de
reposo gonadal se produce una disminuciõn en I a s dimensiones de l a r e t e en sus t r e s e j e s . El t ú b u l o s e m i n í f e r o se c o n e c t a c o n l a r e t e a t r a v é s de una Zona de T r a n s i c i ó n , que p r e s e n t a un e p i t e l i o c i t í n d r i c o a l t o , c u y o
c i t o p l a s m a p r o t u y e h a c i a el lumen d e l t ú b u l o r e c t o . E s t e
ú l t i m o t i e n e una l o n g i t u d muy v a r i a b l e y e s t á r e v e s t i d o
por un e p i t e l i o plano o cúbico b a j o .
La o r g a n i z a c i ó n y c a r a c t e r í s t i c a s h i s t o l ó g i c a de l a
r e t e t e s t i s son similares a I a s d e s c r i t a s para l o s roedo
r e s , p r e s e n t a n d o una d i s m i n u c i õ n de s u s d i â m e t r o s p r o p o r c i o n a l e s a l a r e d u c c i ó n de tamafío q u e e x p e r i m e n t a e l tes^
t í c u l o a l p a s a r d e i p e r í o d o a c t i v o a l de r e p o s o s e x u a l .
R242
LOCALIZACION SUBCELULAR DE LAS ATPasas Y OTRAS ENZIMAS RE
LACIONADAS A LA MEMBRANA PLASMÁTICA DE LAS CÉLULAS HEPATI
CAS DE LA RATA.(Subcellular localization of ATPases and
other enzymes related to the plasma membrane of rat liver
cells). PRADO FIGUEROA.M* F. PECKER y A.AMAR-COSTESEC°
*INIBIBB-UNS-Argentina, INSERM U99-Creteil-Francia y
°Int. Inst, of Cellular and Molecular Pathology-Bélgica.
C0MPARACI0N
DE
LAS CINÉTICAS
DE
PRODUCTION
DE
ATP POR
T R A N S P O R T E F0T0SIÍ4TETICO Y 0X1 CATIVO Y DESCRIPCIOK DE A L G U N O S
P A R Â M E T R O S EX00EN0S Q U E LOS MODIFICAN
(Comparison between the
kinetics preduction of A T P by photosynlhslic and oxidative transport and
description of seme
exoçpnous
modifying
parameters). Pucheu, N.,
Hsssuco. S.V. y 6arci8. A T . Instituto de Investigaciones Biológicas.
Fòculíôd efe Ciências Exaclas y Naturales, Universidad Nacional de M a r cfcl
El análisis de los microsomas de hígado de rata distingue
un grupo de enzimas, llamado a^, de las otras enzimas m i crosomales. La diferencia se basa en las particularidades
de comportamiento en centrifugacion diferencial e isopicnica. El componente subcelular portando este grupo fue identificado a la membrana plasmática (MP) y estrueturas
asociadas. (Amar-Costesec y cols., 1974a, J.Cell Bio1.61,
201-212).
En el presente trabajo se han diversificado las condiciones de fraccionamiento y estudiado en cada caso un gran
numero de enzimas con el fin de formar subcategorías e identificar la naturaleza de las membranas subyacentes.
Nuestros resultados permiten de asociar indiscutiblemente
al grupo aî la adenilato ciclasa estimulada por el fluoruro, glucagon, adrenalina, leucil |S-naf tilamidasa, y-glu.
tamiltransferasa, Na K ATPasa y Mg ATPasa.
Luego de la centrifugacion diferencial, todos los perfiles de distribución son bimodales y muestran su mãximo de
ASR en Ias fracciones nuclear y microsomal. La relación
entre ambas fracciones varia para cada enzima. La adenila
to ciclasa (adrenalina) es la mãs nuclear: 1.85 y la mas
microsomal la NAD glicohidrolasa: 0,2. Esta heterogeneidad refleja probablemente diferencias cualitativas a lo
largo de la MP. Esto refleja también la heterogeneidad ce
lular dei hígado como lo demostrado para la NAD glicohidrolasa, enzima de la MP de Ias células de Kupffer (AmarCostesec y cols.,1985). La centrifugacion isopícnica nos
permitia de asociar la Mg ATPasa, y-glutarailtransferasa
y la leucil 8-naftilamidasa a la zona canalicular.
Plata.
Hemos mostrado previamente que la fotofosforilación catalizada por
n-^Tibrci&s üe R.ruSrum pressnta uró cinétice no lineal. Mostramos aqut
que el transporte cte el&ctrones oxidaiivo catatizado por membranas
producidas a partir ds células fototrófitas resulta en una síntesis de A T P
con características similares.
En ambos casos modific^-iones en el transporte e inhibición de lo H*
ATPasa o presencia de desacoplantes, pi; miltn i-fcntifice- dos rexciones
que sintetizar) ATP. Una (te ellas (RI) produce ccurr.ulsctón neta ck? este
nucleótido, mientr&s que la otra (Rll) solo alte-na p^íc J:-s tfe sínU-sis e
hidrólisis.
(
Las características de ta Rll no se alcctan p x URIR UODIFII^-JÓRI N> le
actividad especifica del A 1 P producido por la RI (ATP "exógeno") Esto
indica que el A T P ínvolucrado en embas reacciones no se encuentra en
rápido equilíbrio.
Financiado por CONICET y CIC.
t
Trabajo realizado en el ICP de Bruselas.
IPP ISOMERASA Y PRENILTRANSFERASAS: PARTICIPACION EN LA RESPUESTA A INFECCIÓN POR HONGOS.
(IPP isornerase and prenyltransferases: partici
pation in fungal infection response) Quaas,A.
y Pérez,L.M. Dep.Bioq. y Biol.Mol., Fac. Cs.
Quim. y Farm. Univ. de Chile.
En los mecanismos de defensa de los vegetales
se forman compuestos que actúan como fitotoxinas o fitoalexinas, a través de vias metabólicas como la de los isoprenoides.
Se estúdio el efecto de la infección por hongos de la fumagina en frutos y plãntulas de dis
tintos cítricos, midiendo las actividades de
IPP isomerasa y de C J Q
C 1 5 preniltransferasas
Estas actxvidades se modificaron dependiendo
de la espécie de hongo y de la variedad de citricoi Trieoderma sp. produjo un aumento de la
actividad de IPP isomerasa en naranjas;mientras
que la misma espécie no produjo modificaciones
en pomelo. Penicillium digitatum produjo
una
disminución de las tres actividades en frutos.
Estas se redujeron a cero en el curso de la infección. En plántulas de naranjo, solamente se
redujo la actividad de IPP isomerasa.
V
Los resultados indican que no existe un patron general de respuesta de las actividades
enzimáticas medidas, frente a la infección por
hongos de diferentes espécies. Se discute la
importância de los câmbios observados en los
mecanismos de defensa de los cítricos.
Proyectos
5OOI/85
FONDECYT y B 2 0 7 8 - 8 6 2 2
DIB.
PURIFICACION Y PROPIEDADES DE UN INHIBIDOR DE LA UDPGALNAC:GM H-ACETILGALACTOSAMINIL TRANSFERASA PRESENTE
EN SUERO SANGÜÍNEO DE P0LL0. (Purification and properti
es of a chicken blood serum inhibitor of the UDP-GalNAc
GM„ N-Acetilgalactosaminil transferasa). QUIROGA, S. y
CAPUTTO, R.
Dpto. de Química Biol6gica-CIQUIBIC-Fac. de Ciências
Químicas-Universidad Nacional de Cõrdoba-CONICET.
3
En extractos de glândula pineal y suero sanguineo de
polios, se ha descripto la presencia de un inhibidor de
la actividad UDP-GalNAc:GM^ N-Acetilgalactosaminil
transferasa de retina de pollo. La actividad inhibitoria aumenta en glândula pineal y disminuye en suero san
guineo en animales expuestos a luz con respecto a otros
mantenidos en oscuridad. La inhibición mostro ser de ti
po competitiva con respecto al sustrato dador(UDP-GalNAc) . (Quiroga, S. y Col.-J. Neurosci Res, 12, 269-276)
El inhibidor fue purificado a partir de suero sanguineo
de polios de acuerdo a los siguientes procedimientos:
calentamiento, centrifugación a 100000 x g, ultrafiltra
ciõn, cromatografía de intercâmbio iSnico, diãlisis y
cromatografía de filtración molecular. Se obtuvo un pre_
parado con una actividad específica aproximadamente 50
veces mayor a la de partida. Este material, corrido en
electroforesis en poliacrilamida en presencia de SDS
presenta enriquecimiento en una banda con un peso molecular aparente de 70 Kd. En estúdios con enzimas prote£
líticas se encontro que pronasa y tripsina eliminaron
la actividad inhibitoria, a diferencia de quimiotripsina que no la afectó. En estúdios de especificidad frente a otras enzimas de la misma via biosíntetica se encontro que el extracto purificado inhibiõ también la ac_
tividad de la UDP-GalrGM- Galactosil transferasa de retina de pollo pero no a ía CMP-NeuNac:LacCer N-Acetilneuraminil transferasa dei mismo origen. Las dos reacciones que fueron inhibidas tienen la similitud de que
el sustrato dador es un derivado de uridina di fosfato.
INDUCCION DE GLICOGENO FOSFORILASA MUSCULAE POE
ATROPINA, (Induction of muscle glycogen phosphorylase by a t r o p i n e ) . Eamírez, B.U. Laboratório de
Neurofisiologia, F a c . Ciências Biológicas, P. Universidad Católica de Chile.
La fibra muscular rápida obtiene energia para la
contracción de su glicógeno endógeno. La glicógeno
fosforilasa (Ph) es la enzima que inicia el metabolismo del glicógeno. Se ha descrito que la atropi na (i.v.) activa en poços minutos la Ph b de musculo esquelético, sin alterar la actividad total (a+b)
de la enzima. Nosotros estudiamos el efecto de atro
pina aplicada por u n período más prolongado sobre
la Ph muscular.
Se inyectó atropina (1 mg/kg; i.v.) en gatos adul
tos. El músculo Tibialis anterior se extrajo 2k h
después. El músculo contralateral, extraído antes
de inyectar la droga, se usó como control. Se midió
la actividad y la distribuciôn subcelular de la P h .
La actividad Ca+b) se determino midiendo la li beración de Pi a partir de G-1-P, en presencia de
AMP. La masa de enzima se determino mediante elec troforesis en geles de poliacrilamida con S D S .
En músculo normal observamos que la actividad
específica de la enzima soluble era mayor que la
de la enzima microsomal. La atropina indujo un a u mento significativo en la actividad total de la Ph
medida en el sobrenadante post-mitocondrial. Este
aumento no se debió a una solubilización de la en zima microsomal, ya que se observo también u n aumen
to significativo en la masa de enzima, tanto en la
fracción soluble como microsomal.
Concluímos que la atropina puede inducir un au mento neto de actividad en la Ph muscular mediante
un incremento en la masa de enzima. Esto podría t e ner u n efecto fisiológico sobre la producción de
energia de la fibra muscular.
REGULACIÓN DE CORTISOL EN UTERO. PURIFICACION DE LA
ENZIMA 11,B-HIDR0XIESTER0IDE DESHIDROGENASA (11-HSD)
DE PLACENTA HUMANA. (Cortisol regulation in utero.
Purification of 11-hidroxysteroid dehydrogenase from
h u m a n p l a c e n t a ) . R a v a n a l , M . , Ve rga ra . M . .
S e r S n - F e r r t , M . — Laboratório de Endocrinologia,
Facultad de C i ê n c i a s B i o l ó g i c a s , P. Universidad
Católica de Chile.
El paso de C o r t i s o l entre m a d r e y feto está
l i m i t a d o en la p l a c e n t a por la inactivación de
cortisol(F) a cortisona(E), catalizada por 11-HSD.
Nuestro objetivo fue aislar esta enzima. Para ello
investigamos su distribuciôn subcelular en placenta
humana, y su solubilización. 25-50g de placenta normal
(n-5) se homogenlzaron en 0.05M Tris-0.25M Sacarosa,
pH 7.5 y centrifugaron a 700g x 5min, lOOOOg x 20min y
H O O O O g x 60min (microsomas). La actividad especifica
(A.E.-ngE/20min/mg prot.) se determino incubando cada
fracción, con 500ng F, 2 mM NADP" ", en 0.1M fosfato pH
7.4, a 37°C x 20min y midiendo formación de E por
HPLC.
Distribuciôn subcelular de la 11-HSD. (X ± S.E.)
homogenizado
700g
lOOOOg
microsomas
A.E.
86.6±10.3
19.6±7.1
146.5±34.4
175.3±17.9
X Actividad 11-HSD soluble en detergentes.
Fracción
X-100 (0.5%)
DF-18(0.5%)
lOOOOg
34
55.5
microsomas
12
5.6
El extracto de la fracción lOOOOg, en DF-18, se
centrifuga
a 1 2 0 0 0 0 g , y e l s o b r e n a d a n t e se
cromatografía en Sephadex G-200 (1.6x75cm), eluyendo
con 0.1M fosfato pH 7.4, 0.5*1 DF-18, 0.01% NaN . La
enzima eluyõ en la fracción de PM 345 Kd y la A.E.
au menti tres veces. Estos datos muestran que la 11-HSD
se localiza en la fracción subcelular de lOOOOg y en
microsomas, que su solubilidad en detergentes difiere
segfin la ubicación y que en la fracción lOOOOg su PM
es de 345 Kd.
Financiado por DIUC 56/84 y 73/86.
1
3
R243
EFECTO DE GnRH-(l-5) SOBRE LA UNION DE 1251-GnRH A MEMBRANAS DE ADENOHIPOFISIS. (Effect of GnRH-(l-5) on the
binding of 1251-GnRH by adenohypophysea1 membranes).
Ramirez, S., Leiva, L.- Laboratório de Endocrinologia,
Depto. Ciências Fisiológicas, Facultad de Ciências Biológicas, Pontifícia Universidad Católica de Chile.
(Patrocinio: M. De la Lastra).
En comunicaciones anteriores hemos presentado evidencias sobre le acción ínhibitoria aguda dei fragmento
GnRH-(t-5) sobre la secreción de LH estimulada por GnRH
en ratas. El efecto inhibitorio se observa con dosis
de 5 0 - 1 0 0 n g y carece de una re)aciôr\ lineal dosis efecto, ya que no se observa con dosis mayores a Ias
senaladas. Con el fin de estudiar el mecanismo de la
acciõn ínhibitoria dei fragmento GnRH-(1-5) se realizaron experimentos con membranas semi purificadas de adenohipófisis, destinados a investigar una posible competência dei fragmento con GnRH a nivel de receptores
a esta hormona. Se estúdio el desplazamiento de 1 2 5 1 GnRH por GnRH frio y por fragmento 1 - 5 , tratando de cubrir el rango de concentraciones necesario para activar
tanto los receptores de alta como de baja afinidad: ka=
10^M y ka= 10°M respectivamente. Las condiciones experimentales se establecieron según técnicas descritas
por otros autores.
Resultados preliminares mostraron curvas de desplazamiento muy similares para GnRH frio y para GnRN( 1 - 5 ) cuando se utilizaron concentraciones dei orden de
10"5 10~?M. A concentraciones de GnRH-(l-5) de 1 0 " ° a
10~^M no se observo desplazamiento y, al contrario, pareae favorecerse la unión dei 125l"GnRH al receptor de
membrana.
Estos resultados indican que el fragmento GnRH( 1 - 5 ) es capaz de unirse al receptor de GnRH, lo que po
dría explicar su acciõn ínhibitoria sobre la secreción
de LH, así como su peculiar relaciôn dosis-efecto.
a
Investigaciõn financiada por Proyecto DIUC 6 9 / 8 6 ,
CONICYT 1 1 8 6 / 8 5 y Rockefeller 86020.
CONCENTRACION P L A S M A T I C A DE L H EN RESPUESTA
A
PULSOS DE LHRH EN O V E J A S PREPUBERES P R E T R A T A D A S
CON N A L 0 X 0 N A S O L A 0 CON C L O N I D I N A 0 Y 0 H I M B I N A .
(Plasma LH concentration
in response t o
LHRH
pulses in prepuberal sheeps pretreated
with
naloxone alone or with clonidine o r yohimbine).
R e c a b a r r e n , S . E . C o n e j e r o s . E . , M e 11 a d o V y M i r a n da G • L a b . d e F i s i o l o g i a A n i m a l . D p t o
Medicina
V e t e r i n á r i a , U. de Concepción, C h i l i a n .
Con e l f i n d e e s t u d i a r
la relaciôn entre la actividad opiopeptidérgica y catecolaminérgica en
los n i v e l e s plasmáticos de LH en ovejas
prepube
res,
se administro a ovejas inmaduras
mediante
un c a t e t e r i m p l a n t a d o e n l a a r t é r i a c a r ó t i d a
3
pulsos de naloxona (NAL,1mg/kg) a i n t e r v a l o s de
60 m i n . s e g u i d o s d e 4 p u l s o s d e L H R H ( 1 u g ) c o n
el mismo i n t e r v a l o . L o s animales c o n t r o l e s r e c ^
b i e r o n s u e r o s a l i n o e n r e e m p l a z o de N A L . Ung r £
po d e l o s a n i m a l e s t r a t a d o s c o n N A Lr e c i b i ó c i o
n i d i n a ( C L 0 N ) y o t r o g r u p o y o h i m b i n a ( Y 0 H ) 60
minutos antes d e l primer pulso de N A L . La conc e n t r a c i o n plasmática de LH se midió p o r r a d i o i n m u n o a n á l i s i s e n m u e s t r a s de s a n g r e
obtenidas
c a d a 15 o 2 0 m i n . d e s d e u n a h o r a a n t e s d e
la
administraciõn
de I a s drogas y hasta una hora
después de l o s pulsos de LHRH.
La concentracion plasmática de LH en r e s p u e s t a a l o s pulsos
de LHRH m e d i d a como á r e a b a j o l a c u r v a f u e m a y o r e n I a s o v e j a s p r e t r a t a d a s c o n N A Lo NAL más
C L 0 N , c o n r e s p e c t o a I a s c o n t r o l e s ( P <c 0 . 0 1 ) .
Se c o n c l u y e q u e l a LHRH l i b e r a d a p o r
disminuciõn d e i tono opioide actúa
condicionando
la
hipôfisis
a l o s pulsos exógenos de LHRH.
Financiado por Proyecto 20.24.05. Dirección
I n v e s t i g a c i ó n , U n i v e r s i d a d de Concepción.
de
R 244
LA CISTEÍNA R K A C n V A DE ITtUCT0SA-l,6-BISF0SrATASA SE
ENCUENTRA EH UH SITIO ALOSTÉRICO PARA FRUCTOSA-2,6-BISFOSFATO (The reactive cysteine of fructose 1,6-bisphosphatase is located in a fructose 2,6-bisphosphate allosteric site). Reyes, A. y Slebe, J.C. Instituto de Bioquímica. Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile.
El mecanismo de la inhibición de fructosa-1,6-bisfosfatasa (FBPasa) por fructosa-2,6-bisfosfato (Fru-2,6P ) es controvertido. Algunos autores han propuesto la
existência de un sitio alostérico para este inhibidor,
pero otros han sugerido su interacciôn con el sitio activo de la enzima. Al analizar la activación por K de
la enzima de rifión de cerdo encontramos que existian resíduos cisteína esenciales para esta propiedad y postulamos que K
disminuía la afinidad de FBPasa por Fru1,6-P en un segundo sitio (inhibitorio) para el sustrato. La posibilidad que este último sitio corresponda
mas bien a un sitio de unión para Fru-2,6-P nos impulso
a estudiar el efecto de diferentes ligandos de la FBPasa
sobre la modificación de los grupos SH esenciales para
su activación por K .
FBPasa (12,5 uM) se trato con N-etilmaleimida (200
uM) a 4 C , pH 7,5, en presencia de diferentes adiciones.
Se estudiaron la estequiometrla de la reacción y algunas
propiedades cinéticas de la enzima modificada.
La perdida de la activación por K se correlaciono
con la modificación de un SH hiperreactivo por subunidad
de enzima. Fru-2,6-P
(100 uM) o concentraciones altas
de Fru-l.ô-Pg (25 mH) protegieron contra esta alteración; una protección parcial se observo con niveles no
inhibitorios de sustrato. Estos resultados, junto con
estúdios cinéticoB de la enzima modificada, sugieren que
la cisteína altamente reactiva se ubica en un sitio
alostérico para Fru-2,6-P en la enzima, el cual también
puede unir Fru-1,6-P
con menor afinidad. Este sitio
alostérico seria responsable de la conocida inhibición
de Ias FBPasas por exceso de sustrato.
(Financiado por: DID-UACH, S-85-26, FONDECYT, 1243).
2
B
2
2
E S T Ú D I O S SOBRE LA R E G U L A C I Ô N DE LA S Í N T E S I S DE R U S T I C I A N I N A EN T h i o b a c i l l u s f e r r o o x i d a n s .
( S t u d i e s on t h e r e gulation of the synthesis of Rusticyanin in Thiobacillus ferrooxidans.)
Reyes, R . , Jordana, X . y Jedllcki7
E.
D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i c a , F a c u l t a d de M e d i c i n a ,
Una d e l a s r e a c c i o n e s ma's i m p o r t a n t e s e n e l p r o c e s o d e
b i o l i x i v i a c i o ' n en e l c u a l p a r t i c i p a una b a c t e r i a q u i miol i t o t r o ' f i c a llantada T h i o b a c i l l u s f e r r o o x i d a n s , es l a
o x i d a c i o ' n d e l i o n f e r r o s o a i o n f e ' r r i c o , p u e s t o que
e l l a c o n s t i t u y e una f u e n t e de e n e r g i a p a r a e s t a b a c t e ria.
Se ha p o s t u l a d o q u e u n a p r o t e f n a 11 amada R u s t i c i a n i n a , q u e c o n t i e n e un á t o m o d e c o b r e p o r m o l é c u l a ,
e s t a r i a i n v o l u c r a d a en e s t a v f a de o x i d a c i o ' n en T . f e rrooxidans.
E n u n a p r i m e r a e t a p a hemos p u r i f i c a d o e s t a
p r o t e f n a c a s l a h o m o g e n e i d a d , u t i l i z á n d o l a como a n t f g e no en l a i n d u c c i o ' n de a n t i c u e r p o s c o n t r a R u s t i c i a n i n a
en c o n e j o s .
La a c t i v i d a d y e s p e c i f i c i d a d de e s t o s
a n t i c u e r p o s ha s i d o v e r i f i c a d a p o r s u c a p a c i d a d d e i n m u n o r e a c c i o n a r s e i e c t i v ã m e n t e c o n una p r o t e f n a de un
e x t r a c t o de T . f e r r o o x i d a n s que posee i g u a l migracio'n
q u e un p a t r o n " d e R u s t i c i a n i n a e n u n a e l e c t r o f o r e s i s
d e s n a t u r a n t e y p o s t e r i o r t r a n s f e r e n c i a a una membrana
de n i t r o c e l u l o s a .
Hemos c r e c i d o Tj_ f e r r o o x i d a n s e n
c u l t i v o s que c o n t i e n e n s u l f a t o f e r r o s o o a z u f r e e l e m e n tal
( S ° ) como f u e n t e d e e n e r g f a y b i c a r b o n a t o
C^cj
para marcar I a s protefnas b a c t e r i a n a s .
La a u t o r a d i o g r a f f a de una e l e c t r o f o r e s i s de e s t o s e x t r a c t o s m u e s t r a
una d i s m i n u c i ó n de l a r a d i a c t i v i d a d a s o c i a d a a l a banda
de R u s t i c i a n i n a en a q u e l l a s c é l u l a s c r e c i d a s en p r e s e n c i a d e S° c o n r e s p e c t o a I a s c r e c i d a s e n s u l f a t o f e r r o so.
Los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s a p l i c a n d o t é c n i c a s de
i n m u n o p r e c i p i t a c i d n de e x t r a c t o s r a d i a c t i v o s p r o v e n i e n t e s de c é l u l a s c r e c i d a s e n d i f e r e n t e s m e d i o s , c o n e l
a n t i c u e r p o e s p e c f f l c o p a r a R u s t i c i a n i n a , s u g i e r e n que
l a p r e s e n c i a d e S° e n l o s c u l t i v o s
podrfa estar i n h i b i e n d o l a s f n t e s i s de R u s t i c i a n i n a en l a b a c t e r i a .
( P a t r o c i n a d o p o r p r o y e c t o PNUD/ONUDI C H I / 8 5 / 0 0 2 , D I B ,
U n i v e r s i d a d de C h i l e y FONDECYT.)
+
TRANSPORTE DE H EN CÉLULAS DE TUBULO SEMINIFERO DE RATA (Proton transport in rat seminiferous tubule cells). Reyes J.. Bitrân J. y Be nos D.J. , Instituto de Química, P. Univ. CatfTli_
ca de Valparaiso; Depto. Fisiologia/BiofIsica,
Fac. Medicina, U. de Chile y Dept. Physiology/
Biophysics, University of Alabama at Birmingham
El pH interno es uno de los parâmetros celulares sujetos a regulaciôn homeostática y proba
blemente responsable de la modulación de eventos celulares como síntesis de DNA y prol iferación celular. La actividad glicolltica de cêlu
Ias transformadas de Sertoli y células espermatogénicas produce câmbios internos que estimulan la secreciõn de protones. Esto se eviden cia como una dependência de glucosa de la apari
cifin de equivalentes ácidos en el medio extrace
lular (200 nmoles/h. mg protein en 5 mM de glucosa) , en una relación H /lactato producidos en
tre 1 y 2. El metabolismo de glucosa es necesa
rio ya que 2-deoxyglucosa no estimula la produc
ci6n de equivalentes ácidos. Este efecto de
glucosa podría en principio explicarse por la
producción metabólica de protones en la via gli_
colítica y/o la producción de NADH glicolltico
y la estimulación de una dehidrogenasa de membrana que transportaria protones y electrones
hacia el exterior de la célula. La producción
de equivalentes reductores (e" o 0j) por células espermatogênicas es <S0 n moles/h. mg protein, descartando la posible importância cuantitativa de este mecanismo de cotransporte. El
transporte de protones metabólicos es también
insensible a amiloride, un inhibidor dei intercâmbio N a / H . Financiado Rockefeller Foundation RF 83002 y NIH AM-25886.
+
+ +
+
+
Ca
y K . UNA F U N C I Ó N C R U C I A L EN L A R E A C C I Ó N A C R 0 S 0 M I C A
DE E S P E R M A T O Z O I D E DE HAMSTER " I N V I T R O " . [ C a + + a n d K + . A
key r o l e i n t h e hamster
sperm acrosome r e a c t i o n " i n v i t r o " ] . R i f f o , M. D e p t o . C i ê n c i a s B á s i c a s . D i v . C s . M e d .
Sur. F a c . Medicina y D i v . Cs.Básicas. INTA. U.de C h i l e .
Para l a i n d u c c i ó n de c a p a c i t a c i ó n (CAP) y r e a c c i ó n a c r o s ó m i c a ( R A ) " i n v i t r o " e n e s p e r m a t o z o i d e de m a m í f e r o ,
se u t i l i z a n m e d i o s q u í m i c o s d e f i n i d o s q u e t r a t a n de i m i t a r l a s c o n d i c i o n e s " i n v i v o " . En e x p e r i m e n t o s r e a l i z a d o s " i n v i t r o " l a i n d u c c i ó n d e l a RA e s d e p e n d i e n t e d e
l a s c o n d i c i o n e s de i n c u b a c i ó n . E s t ú d i o s r e a l i z a d o s en
n u e s t r o l a b o r a t ó r i o han c o n t r i b u i d o a demostrar que l a
a d i c i ó n de 1 i s o f o s f a t i d i l c o l i n a ( L F C ) a l m e d i o de i n c u bación
a c e l e r a l a i n d u c c i ó n de l a R A , p u d i e n d o s e r u t i l i z a d a como m a r c a d o r d e l p r o c e s o d e C A P y q u e I a s v a r i a c i o n e s en e l medio de i n c u b a c i ó n i n f l u y e n s o b r e l a c a p a c i d a d e s t i m u l a d o r a d e l a RA p o r p a r t e d e L F C . A l r e s p e c t o , e l o b j e t i v o de e s t e t r a b a j o e s p r o p o r c i o n a r e v i d e n c i a s a c e r c a de l a s e c u e n c i a de e v e n t o s q u e i n v o l u c r a n
a l g u n o s i o n e s p a r t i c i p a n t e s e n e l d e s a r r o l l o d e l a RA
" i n v i t r o " . E s p e r m a t o z o i d e s e p i d i d i m a r i o s de hamster f u e
r o n l a v a d o s y s e p a r a d o s e n una c o l u m n a de p e r l a s de v i d r i o e i n c u b a d o s p o r d i f e r e n t e s t i e m p o s a 37°C e n u n m e d i o c o n t e n i e n d o b a j a s c o n c e n t r a c i o n e s de Ca++ o K y / o
LFC. En e s p e r m a t o z o i d e s incubados bajo e s t a s c o n d i c i o n e s
LFC no e s t i m u l a l a R A . L a a d i c i ó n t a r d i a de t a l e s i o n e s
i n d i c a q u e s o n n e c e s a r i o s p a r a l o s e v e n t o s d e l a CAP y / o
R A , e s p e c u l á n d o s e q u e l a e n t r a d a de K e s p o s t e r i o r y
d e p e n d i e n t e d e i aumento de C a
i n t r a a c r o s õ m i c o . La a d i c i ó n de b l o q u e a d o r e s de c a n a l e s
de K y C a
( t o x i n a de
escorpión y C o
r e s p e c t i v a m e n t e ) i n h i b e l a RA y e s t e e f e c t o no e s r e v e r t i d o p o r l a a d i c i ó n de L F C . Se c o n c l u y e
que l o s i o n e s C a
y K son n e c e s a r i o s para l o s eventos
p r o p i o s d e l a RA " i n v i t r o " , t a l v e z c o n t r i b u y e n d o a l o s
p r o c e s o s m o l e c u l a r e s que l l e v a n a una e s t e r c h a a p o s i c i ó n
e n t r e I a s membranas a c r o s ó m i c a e x t e r n a y l a p l a s m á t i c a
que l a r e c u b r e .
+
+
+ +
+
+ +
+ +
+ +
+
F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o B-2396-8613 D . I . B .
y G r a n t 83010 O . M . S .
U . de C h i l e
RESPUESTA DE LA H"*"-ATPasa DE TRIPANOSOMATIDEOS AL INHIBIDOR PEPTIDICO DE LA ENZIMA DE HIGADO DE RATA. (Response of trypanosma H^-ATPase to the peptide inhibitor of
the liver H^-ATPase). Rilo. M.C.. Cataldi de Flombaum.
M.A. y Stoppani. A.P.M.
Centro de Investigaciones Bioenergéticas y Cátedra de
Química Biológica, Facultad de Medicina, Universidad de
Buenos Aires,
+
La H -ATPasa de mitocondrias de higado de rata y músculo cardíaco bovino, coao así tambien la de levadura y
cloroplastos, posee un péptido de bajo peso molecular
que inhibe la actividad hidrolítica de la enzima, denominado "inhibidor peptídico natural de la ATPasa".
El objetivo de la presente comunicaciõn fuá demostrar
la presencia del inhibidor en la ff^-ATPasa de tripanosomatideos,
Se utilizaron células de Trypanosoma cruzi y Crithidia
fasciculata para la obtencion de mitocondrias, a partir
de las cuales, por sonicaciõn se obtuvieron partículas
submitocondrialesi estas ultimas se filtraron por columna de Sephadex G-50 logrãndose un aumento de la actividad enzimática de 0.2 umol/mg a 0.7 umol/mg y de 0,164
umol/mg a 2.1uraol/mg para T. cruzi y C.fasciculata, respectivamente. Estos datos demuestran la presencia del
inhibidor asociado a la enzima y la retenciõn del mismo
en la columna.
Las partículas activadas fueron incubadas a distintos
tiempos con concentraciones variables de inhibidor peptídico hepãtico obtenido por el mátodo de Racker (Proc,
Natl.Acad.Sci, 1962, 48, 1659-1663).
La máxima inhibición cruzada se obtuvo entre 10-15 minutos de incubaciõn; para T. cruzi se logro inactivaciõn
total, con C.fasciculata la inhibiciõn fue dei 50-75%,
Los resultados obtenidos de activacíõn de la ATPasa
de T.cruzi y C.fasciculata por filtraciõn en Sephadex y
la inhibiciõn por reacción cruzada con inhibidor hepãtico, sugieren la existência de un inhibidor natural de
la ATPasa en dichos tripanosomatídeos.
R E G U L A C I Ó N N E U R O E N D O C R I N A DE LA D I F E R E N C I A C I Õ N
DE C É L U L A S DE M E D U L A O S E A A L I N F O C I T O S T h y - 1
P O S I T I V O S . ( N e u r o e n d o c r i n e r e g u l a t i o n of b o n e
m a r r o w cells d i f f e r e n t i a t i o n to T h y - 1 p o s i t i v e
lymphocytes). Rivas. C.(Patrocinio: Esquivei.
P_.)Inst. de M e d i c i n a E x p e r i m e n t a l , U n i v e r s i d a d
A u s t r a l de C h i l e .
R e c i e n t e m e n t e h e m o s d e m o s t r a d o que f a c t o r e s
h i p o t a l ã m i c o s son e f i c e c e s en r e s t a u r a r la res_
puesta inmune a tiroglobulina, profundamente
d e p r i m i d a en a n i m a l e s v i e j o s .
Experimentos
p r e l i m i n a r e s i n d i c a n que e s t o s f a c t o r e s a c t u a rían a través del t i m o .
Con e l fin de d i l u c i dar este p u n t o y d e t e r m i n a r si el n í v e l de e s tes f a c t o r e s h i p o t a l ã m i c o s se a f e c t a con la
e d a d , ae d e s a r r o l l ó un s i s t e m a de c u l t i v o in
vitro de c o r t a d u r a c i ó n . T i m o e h i p õ f i s i s p r o
v e n i e n t e s de r a t o n e s RK v i e j o s se i n c u b a r o n en
p r e s e n c i a de un e x t r a c t o h i p o t a l ã m i c o de d a d o res de edad v a r i a b l e (24 h r s a 14 m e s e s ) .
El
s o b r e n a d a n t e de este c u l t i v o fue a g r e g a d o a c £
lulas de m e d u l a õ s e a en las c u a l e s se d e t e r m i no e.l p o r c e n t a j e de c é l u l a s T h y - 1 p o s i t i v a s ,
lo que se i n t e r p r e t a como d i f e r e n c i a c i õ n a lin_
focitos T.
Los r e s u l t a d o s d e m u e s t r a n q u e : a) el extra_c
to h i p o t a l ã m i c o p r o v e n i e n t e de d a d o r e s h a s t a 9
m e s e s de edad es un e f i c i e n t e d i f e r e n c i a d o r ;
b ) tal e f e c t o cae b r u s c a m e n t e e n t r e los 9-10
m e s e s de edad en que la c a p a c i d a d de d i f e r e n ciaciõn dei e x t r a c t o es n u l a ; c) el e x t r a c t o
de r a t o n e s t i m e c t o m i z a d o s o b t e n i d o a los 12
m e s e s de edad d e m u e s t r a c a p a c i d a d de d i f e r e n c i a c i õ n , a d i f e r e n c i a de los c o n t r o l e s v i e j o s
no t i m e c t o m i z a d o s , i n d i c a n d o un m e c a n i s m o de
feed-back.
( P a r c i a l m e n t e f i n a n c i a d o por P r o y e c t o D I D - U A C H
S-84-08 y F O N D E C Y T N* 1 0 7 0 / 8 5 ) .
R245
REGULACIÓN HORMONAL HETER0L0GA IE LA ACCION DE PROLACTTNA EN GLÂNDULA MAMARIA. (Heterologous hormonal regu
latian of prolactin action in mammary gland).
Rios, M. y Puente, J. Departamento de Bioquímica y Bio
logia Molecular, Facultad de Ciências Químicas y Farma
céuticas, Universidad de Chile.
Numerosos estúdios, han permitido constatar que
la enzima o*-glutamiltranspeptidasa de la glândula mama
ria está sujeta a regulación por prolactina y que deal^
guna forma participaria en el mecanismo de transporte
de aminoácidos a Ias células secretoras.
En este trabajo, se estúdio la participación
que tienen Ias hormonas esteroidales, glucocorticoides
y estrógenos, en la regulación de la actividad transpeptidãsica de la glândula mamaria de rata.
Los estúdios se realizaron in vivo, utilizando
ratas ovariectomizadas, adrenalectomizadas, ovariectomizadas-adrenalectomizadas y seudooperadas, las que se
trataron con estradiol, hidrocortisona y domperidona
(fãrmaco que estimula la secreción hipofisiaria de pro
lactina); en la mayoría de los casos se utilizo ccmo
control de la acción de prolactina, la actividad de la
enzima lactosa sintetasa.
Los resultados confirman que la actividad trars
peptidâsica es regulada por la prolactina, e indican
que tanto los glucocorticoides como los estrógenos modulan positivamente la acción de la hormona hipofisiaria sobre el tejido mamario.
El efecto de los glucocorticoides se manifiesta principalmente durante la lactancia. Los estrógenos
parecen ser necesarios en la preparación de Ias células
mamarias durante la virginidad, posibilitando así la ca
pacidad de responder a la prolactina en la lactancia
así como en la acciõn que esta desarrolla en el proceso
de diferenciaciõn de la glândula mamaria.
Financiado por Proyecto DIB 2116-8623 U. de Chile.
DETERMINACION
DEL
ESPESOR
D E BICAPAS
DE
LÍPIDOS
TOTALMENTE
HIDRATADAS
MEDIANTE
DISPERSION DE NEUTRONES.(Thlckness measurements
of fully hydrated bllayers by neutron scattering). Rivas.
Relas-Husson. F. y Sadler. P.M.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata,
(CONICET), La Plata, Argentina; Laboratolre de Photosynthese (CNRS), Gif-sur-Yvette, Francia y H.H.Wlils
Physics Laboratory, University
of Bristol, Bristol,
Inglaterra.
Se ha conseguido información sobre el espesor
de la doble capa Upldica en disperslones unllamelares
de lípidos totalmente hidratados, utilizando la técnica
de dispersion de neutrones a pequeno ângulo. Se prepararon
vesiculas unllamelares grandes
de dlmiristoll Iecitina
con cadenas paraflnicas totalmente hldrogenadas o
perdeuteradas, mediante el método de evaporaclón
en fase invertida y selection de tamano por cromatografía sobre tamlces moleculares. Se anallzó directamente
la variation de la densidad de dispersion a través
de la membrana dei liposoma utilizando el formallsmo
de la variaclón de contraste y el empleo de mezclas
de Isãtopos (H.O/DjO), que permite calcular espesores
para Ias distintas regiones de la bicapa excluyendo
el medio exterior. Los resultados se expresan en términos
de: a) un parâmetro de espesor a contraste Infinito,
Dw, el cual está directamente relacionado al espesor
de la membrana. Para los liposomes de dlmiristoll
Iecitina, D w - 10.75 A lo que corresponde a un espesor
de 37.3 A, st se asume que la superfície dei liposoma
es plana y anhidra. b) Un parâmetro c<, relacionado
a Ia variaclón de la densidad de dl fusion a través
de la membrana. El resultado experimental acuerda
estrechamente con los valores calculados previamente
para la estructura cristalina de la DMPC. Un resultado
de sumo interês es el que muestra que la inclination
de Ias cadenas paraftnicas en la fase a baja temperatura,
es de una magnltud tal que no provoca câmbios de
espesor con respecto a la doble capa en la fase liquida.
R246
ESTÚDIO DE L A O U COP ROT El NA INICIADORA DE L A SÍNTESIS DE
B-1.4-0LUCAN0
DEL ALGA Protothecozopfii
( S t u d y on the glycoprotein
p r i m e r of a 13-1,4-glucan i n the algae Protothccozopfíh
Rivas. L A v
Pont Lezica. R Instituto de Investigaciones Biológicas, F C E y N , Universidad
Nacional de Mar del Plata y Centro de Investigaciones Biológicas, F I B A
En trabajos anteriores sobre la síntesis de fi-glucanos de pared en la
clorofita Protothccazopfii
encontramos que hay dos sitemas paralelos que
sintetizen 0 - 1 , 4 - ( f l - 1 , 3 ) - g l u c a n o s ( t i p o m i x t o ) a p a r t i r oe UDPO, y
fi-1,4-glucanos
( t i p o celulose) a p a r t i r de OOPO. En estos dos sitemas
parece heber reecciones s i m i l a r e s en las que están involucredDs
glicoproteínas como m i e i adoras. Los estúdios cinéticos indican que no hay
interferência e n t r e ellos y tienen requerimientos de metales diferentes.
En este trabajo se describe la pur ificación y caracter ización de la
glycoproteins iniciadora de la síntesis de glucano tipo celulose y s u
compereción con le involucredo en el alucano tipo m i x t o .
Las células se marcan con P H ] leucine i n v i v o , se praparan
membranas y se incuban con U D P - t C ] 0 1 c La fracción TCA Insoluble se
p u r i f i c a y la glicoproteíne doblemente mercada se u t i l i z a p a r a los estúdios
de ceracterizeeión. Se estudia el peso molecular aparente de la
gllcoprotefna, tipo de enlace péptido-açúcar, tamano y compostciòn dei
olignsecórido, tipo de enlaces glicosídicos y configureción anomérice, Del
estúdio comparativo con la glicoproteina iniciadora de fi-glucanos m i x t o s
se concluye que estos ceminos son paralelos a pesar de tener secuenciasde
reacciones s i m i l a r e s .
1 4
Subsídios de CONICET, CIC y SUBCYT.
B A S E S I D N I C A S D E LA R E S O N A N C I A E L E C T R I C A EN
C É L U L A S C I L I A D A S A I S L A D A S D E R A N A . (Ionic
b a s i s for e l e c t r i c a l r e s o n a n c e in i s o l a t e d
hair c e l l s f r o m t h e B u l l f r o g ) . R o b l e s . L..
Roberts,
w.M. v H u d s p e t h , A.J.
D e p i o . ffe
F T s T õ T õ a T ã y Bi of í si c a , Fãc~. cTe Med i c m a ,
U n i v . d ê C h i l e y D e p t . of F h v s i o l o q y , School
of hed i c i n e , U n i v . of C a l l f o r n i a, San
F r a n c i s c o , CA, U.S.A.
En la c o c l e a d e m a m í f e r o s d o n d e e x i s t e u n a
m e m b r a n a b a s i l a r la s e l e c t i v i d a d d e f r e c u e n c i a
s e obt i e n e por si ntoni saci ón d e e s t a e s t r u c t u r a . En o t r a s especi e s ex i s t e n m e c a n i s m o s d e
s i n t o n i z a ç i ó n intrí n s e c o s a 1 a s c é l u l a s c i l i a d a s dei o í d o i n t e r n o . En la t o r t u g a y en la
r a n a s e ha e n c o n t r a d o que Ias c é l u l a s c i l i a d a s
e s t á n s i n t o n i z a d a s por r e s o n a n c i a e l é c t r i c a .
En e l l a s s e han i d e n t i f i c a d o c a n a l e s
volta_je
d e p e n d i e n t e s d e C a + + y canales^ d e K + a c t i v a d o s
por C a + + ,
que p o d r í an i n t e r a c t u a r p r o d u c i e n d o
la r e s o n a n c i a dei p o t e n c i a l d e m e m b r a n a . En
e s t e t r a b a j o s e e s t u d i a la r e l a c i ó n e n t r e - l a
frecuencia de oscilación y p a r â m e t r o s c i n é t i c o s d e 1 o s canal e s i óni c o s medi d o s en 1 a m i s m a
c é l u l a . L a s c é l u l a s c i l i a d a s son d i s o c i a d a s
m e c a n i c a m e n t e dei s á c u l o y d e la p a p i l a amf i bia d e la r a n a y s e r e g i s t r a u s a n d o la t é c n i c a
de " p a t c h - c l a m p " en c é l u l a c o m p l e t a . C u a n d o
Ias c é l u l a s se e s t i m u l a n c a n p u l s o s d e c o rri e n t e d e p o l a r i z a n t e m u e s t r a n o s c i 1 a c i o n e s
a m o r t i g u a d a s dei p o t e n c i a l d e m e m b r a n a c o n
f r e c u e n c i a s d e r e s o n a n c i a d e 1 2 5 Hz en el s a c u l o y e n t r e 1 6 0 y 2 5 0 Hz en la p a p i l a . C u a n d o
se d e p o l a r i z an en condi c i o n e s d e v o l t a j e f i ,i o
producen una c o m e n t e iónica b i f á s i c a . B I o q u e o
con TEA p e r m i t e a i s l a r u n a c o r r i e n t e d e Ca++
de activación rápida y otra mas 1enta de K +
a c t i v a d a por C a + + .
Se observan diferencias
entre 1 os parâmetros cinéticos de Ias células
dei s á c u l o y d e la p a p i l a ,
t a n t o p a r a los
canal e s d e C a + + c o m o p a r a 1 o s d e K + .
Estas
d i f e r e n c i a s en c i n é t i c a e s t á n c o r r e l a c i o n a d a s
con l a s d i f e r e n c i a s en f r e c u e n c i a d e r e s o n a n cia de los dos grupos de células.
t
A N Á L I S I S DE L A S P R O T E Í N A S CROMOSOMALES NO H I S T O N I C A S
DEL E S P E R M A T O Z O I D E EN EMBRIONES DEL E R I Z O DE MAR T e tAapjQL& nÍQzn.
{ A n a l y s i s o f t h e non h i s t o n e chromos o m a l p r o t e i n s o f TeÁAapygit,
VUQZH e m b r y o s ) .
Roco,
M^_, G o n z a l e z , M . , G a m b o a , S . , P u c h i , M . , D e p a r t a m e n t o de B i o l o g i a M o l e c u l a r y D e p a r t a m e n t o de B i o q u í m i ca C l í n i c a , U n i v e r s i d a d de C o n c e p c i ó n ,
Chile.
ESTÚDIO QONK) RMACIONAL DE NUETOS ANÁLOGOS AC TI VOS EN
RECEPXRES DE AMINOÃCIDOS EXCITAI RIOS. (Conformational Analysis on new analogs in excitatory amino acid
receptors ) . Rodriguez,A.M. Ciuffo,G.M., Estrada M.R.
y Jãuregui, E.A.
Cátedra de Química General II. Fac- de Química, Bioquímica y Farmácia. Universidad Nacional de San Luis.
5700 San Luis. Argentina.
Post f e c u n d a c i õ n del o v o c i t o se produce l a f u s i o n
del p r o n ü c l e o femenino y m a s c u l i n o .
Resultados prév i o s han d e m o s t r a d o q u e a n t e s d e l a f u s i o n , s e produ^
ce l a d e c o n d e n s a c i ó n d e l n ú c l e o d e l e s p e r m a t o z o i d e ,
p r o d u c i é n d o s e además p e r d i d a d e p r o t e í n a s
cromosomales no h i s t ó n i c a s e h i s t ó n i c a s .
C o n e l o b j e t o de ob
t e n e r i n f o r m a c i ó n p r e c i s a s o b r e l a c i n é t i c a de l i b e r a c i o n de I a s p r o t e í n a s n o h i s t ó n i c a s , s e a n a l i z a r o n
estas p r o t e í n a s cromosomales p o r ensayos i n m u n o l ó g i cos a d i f e r e n t e s t i e m p o s p o s t f e c u n d a c i ó n .
Actualmente se acepta que los receptores de aminoãcidos excitatorios estarían involucrados en desordenes
neurológicos, por lo cual ha cobrado gran importância
la busqueda de los requerimientos conformacionales en
dicho receptor. En el presente trabajo se realiza un
estúdio conformacional teórico, utilizando un potencial
ãtomo-ãtomo empírico, donde se supuso que la hidrataciõn eliminaria Ias interacciones electrostãticas.
Los compuestos estudiados resultan de la modificación dei ãcido ibotênico ( IBO) por distintos mecanismos: elongación de la cadena lateral ( 2-homoIBO, 3-ho
moIBO), sustitución en el anillo (ATPA, 4-metilIBO )
y ciclizaciõn de la cadena lateral en un segundo anillo (7-HPCA ) - Se analiza el efecto conformacional de
estas modificaciones dei compuesto base. Se obtiene
que, cuando hay elongación de la cadena lateral (2-homoIBO y 3-homoIBO) aumenta la flexibilidad y el numero
de conformaciones. La sustitución en el anillo (4-Me
IB0 y ATPA ) limita la posibilidad, por impedimento
estérico, de acceder a conformaciones permitidas a IBO.
7-HPCA, compuesto totalmente rígido, adopta Ias dos
posiciones de semisílla que fueran encontradas experimentalmente (#)•
Comparando con resultados obtenidos previamente para otros compuestos, se proponen los requerimientos
estructurales en los distintos tipos de receptores de
aminoãcidos excitatorios.
Las p r o t e í n a s cromosomales no h i s t ó n i c a s a i s l a d a s
de c i g o t o s o b t e n i d o s a l o s 3 , 5 , 7 , 2 0 , 3 0 y 60 m i n u t o s
postfecundación fueron analizados por e l e c t r o f o r e s i s
en g e l e s d e p o l i a c r i l a m i d a - S D S y t r a n s f e r i d a s a p a pel de n i t r o c e l u l o s a .
Este se incubo con el a n t i —
c u e r p o a n t i n o h i s t o n a s de e s p e r m a t o z o i d e s de c o n e j o ,
p o s t e r i o r m e n t e con el a n t i c u e r p o a n t i i n m u n o g l o b u l i n a
G de c o n e j o b i o t i n i l a d o y r e v e l a d o con e l
sistema
dei c o m p l e j o s t r e p t a v i d i n a - p e r o x i d a s a b i o t i n i l a d a .
Los r e s u l t a d o s o b t e n i d o s i n d i c a n que e n t r e 2 y 5
min p o s t f e c u n d a c i ó n h a y p e r d i d a de I a s p r o t e í n a s
no
h i s t ó n i c a s dei espermatozoides conservándose
tres
p r o t e í n a s q u e p o d r í a n p r o c e d e r d e i genoma
paterno,
m a t e r n o o ambos» y a q u e e s t a s p r o t e í n a s p r e s e n t a n r e
acción cruzada.
( F i n a n c i a d o p o r p r o y e c t o 20.31.11 de l a U n i v e r s i d a d
de C o n c e p c i ó n y P r o y e c t o 1 0 8 2 / 8 5 d e l F 0 N D E C Y T ) .
& P. Krogsgaard-Larsen et. al. In: Natural Products
and Drug Development.
ESTÚDIO OE LA VELOCIDAD ESPERMATICA EN EYACULADOS FRESCOS Y CONGELADOS, POR EL METOOO FOTOGRÁFICO DE EXPOSICION MULTIPLE, EN POTRO. (Study of the velocity in
fresh and frozen semen, by multiple exposure photogra_
phic method, in stallion). Rodriguez, H., Von Frey, W.
Depto. de Biologia Celular y Genética, Facultad de Medicina y Depto. de Reproducciõn An_i_
mal, Facultad de Cs. Veterinárias, Universidad de Chile.
Para conocer la potencia Iidad fecundante de un eyacu
lado, se ha ideado una serie de métodos tendientes a una evaluación objetiva. Se plantea estudiar la velocidad de los espermatozoides eyaculados, a través del Método Fotográfico de Exposición Multiple (Makler, 1980),
en los períodos de Junio-Julio y 0ctubre-Noviembre, tan^
to en semen fresco como luego de la congelaciõn. Se tra_
bajó con un total de 30 eyaculados en los que se evaluó
el espermiograma convenciona] y la velocidad espermática (um/seg). El periodo de congelaciõn fue de un mes.
Los valores de la velocidad espermática mostraron un
rango promedio de 10 a 12 um/seg. Al estudiar su relación con las características evaluadas en el espermiograma convencional, se encontraron coeficientes de correlaciòn positivos y significativos con la motilidad
subjetiva y la vitalidad espermática, pero negativos
con la morfología espermática. Estas correlaciones resultaron semejantes para ambos períodos estudiados y
tanto para semen fresco como congelado, sin presentar
diferencias estadísticas entre ellos.
Se concluye que la velocidad espermática es una característica que permite evaluar la potencialidad fecun
dante de los espermatozoides eyaculados y que no se afecta por el período de estúdio o el proceso de congela_
ción.
(Financiado por Proyecto DIB N° B
1
.
ESTÚDIO HISTOqUIMICO E INMUNDCITDQUIMICO DEL DRGANO
SUBC0MI5URAL, FIBRA DE REIBBNER Y MASSA CAUDALIS EN
LARUAS DE LAMPREAS (Geotria BUBtrolis).(HistQchemlcal and inraunocytocheiilCBl study Df the Subcommissu-
ral Organ, Relssner'B fiber and Massa Caudalls In
lamprea larvas CGeotria austrália). Rodriguez S . .
Rodriguez P..Banse C..Instituto da Histologia y Pata
Facultad da Medicina. Universidad Austral de
ChilB. (Patrocinio: h Schoebitz).
El organo aubcomiaural (OB), BBtructura circunventricular ubicada bajo la comisura blanca posterior,
secret* material glicoprotaico hacia el tercer ventrlculo cerebral, formando la fibrB de Raiaaner (FR)
estructura filamentoae que Bigua al canal ependimario y an su pcrclân terminal forma la Maaaa Caudalis
(MC).
El OS. FR y MC de larvaa de lampreaa fueron investigada 1: histoquímicamente mediante Lactinas: aglu
tinina de Recinua comunia (RCA), Concanavalina A
(Con A ) , aolutlnlne de germen da trigo (blGA); 2:inmunocltaquimicamente utilizando anticuerpos Anti FR
de bovino.
El OS y la MC fueron fuertemente inrnunoreactivaa.
en cambio la FR fue inmunonegativa. Le FR no reac-
ciono ni con Con A ni RCA. Solo la periferia de la
FR fuB UIGA (+). La RCA mastro afinidad por la FR des
pu6fl da hidréliais ácida. El CBntro de la MC fue
fuertemente UGA positiva.
EatDB rBBultadoa sugieren qua: a) a nivel da la FR
hay una altereclán conformacional que esconde loa
altioa inmunoreactivoa. hecho que ea revertido en la
MC; b) la FR tlene una cubierta de glicoprotBÍnas
que contienen Ácido Slélico como residuo terminal,
mientras que la MC poaee una cubierta da gllcoprotei
nas con Galactoaa como residua terminal; c)en la FR~
y MC la dispooición espacial de las glicoproteínas
ea diferente.
Financiado Proyecto S-85-39 Dir. Investigación UACH
y Grant 1/38259 Stiftung Uolkaiüageniiterk.
R247
S Í N T E S I S Y C A R A C T E R I Z A C I O N DE GAGs EN C É L U L A S DE ESTRCMA
DE T E S T Í C U L O EN C U L T I V O . ( G A G s s y n t h e s i s b y t e s t i c u l a r
s t r o m a l c e l l s ) . R o d r i g u e z , J . P . y M i n g u e i ' I , J . J . U n i d a d de
B i o l o g i a C e l u l a r , I N T A , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
L o s c o m p o n e n t e s de l a m a t r i z e x t r a c e l u l a r ( M E ) r e g u l a n
la adhesion, los patrones b i o s í n t é t i c o s , l a migración y
la p r o l i f e r a c i õ n c e l u l a r . Esto s u g i e r e que l a o r g a n i z a c i ô n d e l a M E , t a m b i é n p u d i e r a j u g a r un r o l i m p o r t a n t e
durante l a a c t i v a p r o l i f e r a c i 5 n y diferenciación
celular
e n l a e s p e r m a t o g é n e s i s . E n e s t e s i s t e m a l a g e n e s i s de m a
ME f u n c i o n a l r a d i c a e n l a s c é l u l a s de e s t r o m a t e s t i c u l a r .
En e s t e t r a b a j o s e p r e s e n t a n r e s u l t a d o s s o b r e e s t ú d i o s
de s í n t e s i s y c a r a c t e r i z a c i ó n de g l i c o s i l a m i n o g l i c a n o s
( G A G s ) p r o d u c i d o s p o r c é l u l a s de e s t r o m a t e s t i c u l a r de
r a t a , c u l t i v a d a s e n un s i s t e m a e n e l c u a l c o e x i s t e n t o dos l o s f e n o t i p o s d e e s t r o m a ( S e r t o l i , L e y d i g , p e r i t u b u
l a r e s , f i b r o b l a s t o i d e s y o t r o s ) . Las células se cultivan
en m e d i o 199 s u p l e m e n t a d o c o n s u e r o f e t a l ( 1 2 % ) y de c a b a l l o ( 1 2 % ) e h i d r o c o r t i s o n a (10-7M) a 3 3 ^ e n 5% C 0 2 . E n
Ias células adherentes (estroma) se determina:
prolifer a c i ó n c e l u l a r y p r o d u c c i ó n de t e s t o s t e r o n a , A B P , c o l á geno y GAGs.
L a s í n t e s i s d e GAGs t o t a l e s s e d e t e r m i n a u s a n d o g l u c o
samina t r i t i a d a y p r e c i p i t a c i ô n d i f e r e n c i a l con c e t i l t r i m e t i l - a m o n i o ( C T A ) a l 1%. L o s d i s t i n t o s t i p o s de GAGs
(dermatan s u l f a t o , D S ; Heparan s u l f a t o , H S ; á c . h i a l u r ó n i co,HA; c o n d r o i t i n s u l f a t o . C S ) se c u a n t i f i c a n p o r t r a t a miento con enzimas s e l e c t a s y p r e c i p i t a c i ô n p o s t e r i o r con
CTA.
En e s t e s i s t e m a o c u r r e p r o l i f e r a c i õ n , p r o d u c c i ó n de
A B P , t e s t o s t e r o n a como t a m b i é n d e c o l á g e n o y G A G s . L a
s í n t e s i s de GAGs s e c o r r e l a c i o n a c o n p r o l i f e r a c i õ n
celul a r , a l c a n z a n d o un m á x i m o a l m o m e n t o d e c o n f l u ê n c i a . S e
o b s e r v a u n a m a r c a d a d i f e r e n c i a e n t r e e l p o r c e n t a j e de
GAGs e n m e d i o d e i n c u b a c i ó n v s . c é l u l a s ( D S : 19 v s . 0 ;
H S : 17 v s 7 9 ; C S : 50 v s 1 5 ; H A : 14 v s 6 ) . L a p r o d u c c i ó n
de c o l á g e n o y GAGs p o r u n s i s t e m a de c u l t i v o d o n d e e s t a n
p r e s e n t e s t o d a s I a s c é l u l a s de t e s t í c u l o , p e r m i t i r á c o n o c e r e l r o l de ME e n l a e s p e r m a t o g é n e s i s .
( F i n a n c i a d o p o r D I B . B-2173 y PNUD-CHI 8 4 / 0 0 3 ) .
REGÜLACION D E R E C E P T O R E S A D R E N E R G I C O S Y P U R I N E R G I C O S EN
EL C O N D U C T O D E F E R E N T E D E L A RATA (Adrenergic and p u r i nergic receptor r e g u l a t i o n in t h e r a t v a s d e f e r e n s ) .
Rohde, G . C . L a b . d e F a r m a c o l o g i a , F a c . C s . B i o l ó g i c a s ,
P. U n i v e r s i d a d Católica d e C h i l e . (Patrocinio: R e n a t o
Albertini).
En los ú l t i m o s afios se h a n p r e s e n t a d o e v i d e n c i a s
que apoyan la idea d e u n a c o - t r a n s m i s i ó n a d r e n é r g i c o p u r i n i r g i c a en el c o n d u c t o d e f e r e n t e d e v a r i o s r o e d o r e s .
Entre las i n t e r r o g a n t e s q u e p l a n t e a d i c h o m o d e l o n o s in
t e r e s õ estudiar las m o d i f i c a c i o n e s q u e p r o v o c a la dener
v a c i ó n en l a s r e s p u e s t a s a d r e n ê r g i c a y p u r i n i r g i c a . P a ra ello se usaron ratas S p r a g u e - D a w l e y c o n t r o l e s y d e n e r v a d a s q u i r u r g i c a m e n t e o c o n 6-OHDA. L o s segmentos
p r o s t ã t i c o s y e p i d i d i m a r i o s s e incubaron en un b a n o d e
superfusión a 37°C c o n tension basal d e 1 g r . S e e s t ú dio la a f i n i d a d ( E C ^ ) y efecto m á x i m o d e a g o n i s t a s
adrenérgicos y purinergicos en controles y denervados,
antes y d e s p u é s d e incubar c o n a n t a g o n i s t a s e s p e c í f i c o s .
Los r e s u l t a d o s d e m o s t r a r o n u n a d i s m i n u c i ó n d e l a E C ^ ^
p a r a n o r a d r e n a l i n a e n ambos s e g m e n t o s y u n a u m e n t o
de
4x el efecto m á x i m o sólo en el p r o s t ã t i c o d e s p u é s d e la
d e n e r v a c i ó n q u i r ü r g i c a . R e s u l t a d o s s i m i l a r e s se o b t i e nen c o n la d e n e r v a c i ó n q u í m i c a . L a p o t ê n c i a d e a n t a g o n i s t a s (pAj) n o se m o d i f i c o p o r la d e n e r v a c i ó n
en el
segmento e p i d i d i m a r i o p e r o a u m e n t o en forma s i g n i f i c a t i
va e n e l p r o s t ã t i c o . El e s t ú d i o d e a g o n i s t a s p u r i n e r g i cos n o d e m o s t r o câmbios s i g n i f i c a t i v o s en l a r e s p u e s t a
m á x i m a n i en la afinidad. L a e v i d e n c i a sugiere u n aumen
to en e l n u m e r o d e r e c e p t o r e s a d r e n é r g i c o s en e l segmen
to p r o s t ã t i c o c o n câmbios d e a f i n i d a d a d i f e r e n c i a d e
lo q u e o c u r r e en el segmento e p i d i d i m a r i o . L a ausência
d e m o d i f i c a c i ó n en l a respuesta p u r i n ê r g i c a s u g i e r e as_i
mismo una regulaciõn distinta de estos receptores.
F i n a n c i a d o p o r P r o y e c t o 0 3 / 8 6 E s c u e l a M e d i c i n a , Pont if _i
cia U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e .
R248
CARACTERIZACIÓN DE LAS DNA POLIMERASAS DNA-DEPENDIENTES
DE T'typanoooma
CAuzíA
Characterization of DNA dependent DNA polymerases from Tiypa.noòorna
cAuz-i ). Rojas, C.V..Solari, A.
Departamento de Bioquímica, Facultad de Medicina, Uni versidad de Chile.
PARTICIPACION DE UN INTERMEDIÁRIO MONOCICLIC0
EN LA BIOSINTESIS DE M0N0TERPEN0S•(Participation of a Monocyclic Intermediate in Monoterpene Biosynthesis). Rojas,M.C., Avalos, V. y
Cori,0. Dep.Química,Fac.Ciências, U. de Chile.
Las diferentes etapas de) ciclo de vida dei protozoo
Trypanosoma
CJLUZA., agente causai de la enfermedad de Chagas, se encuentran representadas por formas célula res que son dístínguíbles mediante diversos parâmetros,
uno de los cuales es la proliferaciôn celular.
Con el propósito de comprender los mecanismos invol^
crados en la regulación de la replication del DNA en
este parasito, se ha abordado el estúdio de Ias enzimas
que participan en este proceso, en una primera instan cia, Ias DNA polimerasas.
Se ha establecido un esquema de purificación que ha
permitido separar dos fracciones con actividad DNA pol_j_
merásica, a partir de los extractos de la forma epimastigote dei parasito. Estas dos actividades parcialmente purificadas, han sido caracterizadas según : a) la
capacidad para utilizar diferentes tipos de complejos
matriz - partídor como sustrato, b) la sensibilidad a
inhibidores específicos y selectivos y c) a sus propie_
dades físico - químicas.
Resulta de interés senalar que de acuerdo a Ias características determinadas, ambas actividades enzimáticas difieren de Ias DNA polimerasas de Ias células humanas, que son infectadas por este parasito intracelu lar.
Se ha propuesto que en la ciclación enzimáti
ca de neril y geranil bifosfato (NPP y GPP) a
monoterpenos cíclicos, participaria un interme
diário monocíclico dei tipo terpinilo.
Datos
termodinâmicos y cinéticos en reacciones modelo, ponen en duda la participación de este intermediário en la biosíntesis de monoterpenos
bicíclicos.
Se sintetizo terpinilbifosfato
tritiado
(TPP-3H) y se ensayo su utilización por un sis
tema enzimático que forma Ç> -pineno y limoneno
a partir de GPP y NPP. TPP-3h* fue transformado
eficientemente al hidrocarburo monocíclico limoneno. No se obtuvieron hidrocarburos
biciclicos. La eficiência catalítica de la limoneno sintetasa fue 3 5 veces mayor con TPP que con
GPP y NPP como sustratos.
Los datos sugieren la participación
de un
intermediário terpinilo
en la biosíntesis de
limoneno, en tanto |3-pineno se formaria en un
proceso concertado a partir de los precursores
Financiado por : Universidad de Chile. Proyecto
B-2130-8622 y UNDP/World Bank/WHO/TDR.
SüEHO ÜESINCfiONIZADO Y CICLO DE TEMPERATURA.
Honcaqlipio H. . lwyneken U. y Vivaldi £. A. vpto.
de Fisiologia, U. de Valparaiso; Instituto de
Neurociruqia: y Dpto. de Fisioloaia. Facuitaa ae
Medicina. Universidad cie Chile.
Los elementos relevantes dei ciclo sueno
vigilia en ratas iondas delta y husos dei
elêctrocorticograma, actividad theta hipocampal y
electromiograma), son detectados ininterrumpidamente
por un microcomputador conectado directamente a un
poligrafo, y sus incidências son cuantiíicadas en
intervalos de 15 segundos. Esto permite diagnosticar
vigilia (Ví,flueftode ondas lentas o sincronizado vSS)
v suefto activo o desincronizado <SD). Se estudiaron
tres ratas, por cuatro a siete dias. baio ciclo luz
oscuridad 12:12. Además en dos ratas se tonaron
muestras cada 15 segundos de la temperatura corporal.
La curva de temperatura presenta un ausento
sostenido que comienza 2 horas después dei comienzo de
la fase de luz y hasta unas 3 horas antes del fin de la
fase de oscuridad. Sobre esta linea se superponen
aumentos transitórios correspondientes a los episódios
de actividad.
Se defimeron indices para evaluar propension
al SD. Para estimar el curso temporal durante Ias 24
horas, cada dia se dividiò en 6 intervalos de 4 horas,
se caleularon los indices para cada intervalo y se
promediaron luego los intervalos correspondientes. Los
siguientes son los indices y Iss secuencias de 6
valores que resumen sus cursos tesporales promedios en
24 horas, correspondiendo los 3 primeros a la fase de
luz. Cantidad de SD: 21. 30, 29, 9, 11. 4 minutos.
Porcentaie dei suefto total ocupado por SD: 13. 17, 18.
13, 14, S. Latencia mayor al SD (duración dei episódio
de SS más prolongado interpuesto entre V y S D ) : 19, 17,
12, â, â. 7 minutos. Latencia mayor al SD como
porcentaje del SS: 13. 10, 9. 14, 11. 16.
El que la mayor propension al SD coincida con
la parte inicial de ia fase ascendente de la curva de
temperatura es análogo a lo observada en el humano, y
podria permitir modelar en la rata Ias alteraciones de
la interacción entre SD y ciclo de temperatura
características de patologias neuropsiquiátricas que
involucran a los ritmos biológicos.
Proyecto D.I.B., U. de Chile H-2406.
Proyecto FONDECYT 1221.
P60Nc y CLÀflEENA DE N. crassa: CARACTERIZACIÓN
MOLECULAR (P6GNc and clathrin from N,crassa:
molecular
characterization).Rosa.A.L..Alvarez^
M.E.,Bocco,J.L. y Maccioni,H.J,F..
EL"C CUHCÔONICET; FacuTtad ce Ciências
Químicas, UNC, 5016-Cordoba, Argentina.
Clatrina de N. crassa ha sido caracterizada en nuestro laboratório (ftosa,A.L.,
Gravotta,D. y Maccioni,H.J.F„,esta Reunion).
P60Nc (PM 60000) copurifica con clatrina y posee propiedades físico-químicas semejantes.Segiin microscopía e l e c t r 6 n i c a , l a proteina forma
filamentos que pueden desensamblarse y re-ensamblarse en estructuras semejantes a "canastos" vacíos de clatrina.
Una preparación altamente enriquecida en PGONo
(segun SD&-PAGE y t i n c i 6 n con AgN0~) nos permiti? obtener anticuerpos que,luego de purificados por afinidad,fueron caracterizados en "Wes
tern blots".
Como aproximación a estúdios moleculares de lá
expresión genética de clatrina y P60Nc,mRNApoli-A de N.crassa fue purificado por cromatografía en oligo(dT)-celulosa de RNA total
obtenido de micelio vegetativo (cepa St.Lawrence 74- A) .La integridaà dei RNA se estúdio
por electroforesis en geles de agarosa (RNAglioxal-DMSO) y tinción con plata.El mRNA-poli-A obtenido (aprox. 0.8 % dei RNA total)
fue traducido in vitro en presencia de ( H ) leucina o ( ^sjînetionina en extractos de germen de trigo y los productos radioactivos identificados luego de SDS-PAGE y fluorografíaSe presentan'resultados sobre experimentos de
inmuno-precipitación de los productos de traducciõn in vitro.
J
R249
CLATRINA Y VESÍCULAS CUBIEHTAS EN N. crassa.
(Clathrin coated vesicles in N. crassa).Rosa,
A.L..Gravotta.D. y Maccioni,H.J.F.
CIOUBIC (UNC-CONICET) Facultad de Ciências
Químicas,UNC,5016-Córdoba,Argentina.
Hemos encontrado y caracterizado
clatrina y vesículas cubiertas en el hongo filamentoso N. crassa.
Las vesículas cubiertas fueron obtenidas a
partir de cultivos vegetativos de cepas salvage y mutantes morfológicas.Las células cocechadas y lavadas,pulverizadas en aire líquido
y homogeneizadas porrruptura mecânica y sonicación se sometieron a centrifugaciones diferenciales para obtener una fracción microsomal cruda.La misma fue cromatografiada en columna de perlas de vidrio obteniendo fracciones con vesículas cubiertas distinguibles según tinción negativa y microscopía electrónica. Según SDS-PAGE estas fracciones estaban enriquecidas en un polipéptido de movilidad electroforética similar a clatrina bovina ( 1 7 2
Kd).Por estúdios de microscopía electrénica y
SDS-PAGE se logro estudiar el ensanblado-desensamblado de "canastos" vacios formados por
clatrina de N.crassa.
Anticuerpos obtenidos contra clatrinas de vaca y N. crassa no dieron reacción cruzada en
"Western blots".
CÂMBIOS DEL ESPERMATOZOIDE EN EL TRACTO EPIDIDIMARIO
(Capra hi reus). (Spermatozoal changes in the epidydimal
tract of Capra hi reus). Rubio, M. , Bustos-0breg6n, E.
Depto. Biologia Celular y Genética, Facultad
Medicina y Depto. Zootecnia, Facultad Cs. Veterinárias,
Se ha realizado un estúdio preliminar de la maduración espermática del chivo. Una característica importante de dichos câmbios es la motilidad prog resíva.Además,
se han detectado variaciones morfológicas y en la composición química de los núcleos de los espermatozoides que
ocurren durante su pasaje por el epidídimo.
Se obtuvo por castración quirürgica epidldimos de cin
co chivos en período reproducttvo, realizándose test de
decondensación (DC) con tioglicolato en espermatozoides
de cabeza, cuerpo y cola de los epidídimos. Además, se
midió motilidad objetiva y velocidad espermática por Fotografia de Exposición Multiple (MEP) en los tres segmen_
tos epididimarios, así como motilidad subjetiva.
Por M.E.P. se ha encontrado que la motilidad espermática en los distintos segmentos del epidídimo {cabeza:
11,73%; cuerpo: 29,49% y cola: 66,7%), difiere entre ellos significativamente (p 0,05), no concordando esto
con los valores de motilidad subjetiva. La velocidad espermática (u/seg) es homogênea en eJ tracto epididimario.
Por otro lado se observo una progresiva disminución dei
% de DC nuclear a lo largo dei epidídimo (cabeza:18,30%;
cuerpo: 16,73% y cola: 3,92%). Se detecta la inadecuada
estabi1ización de la cromatina, dependientes de enlaces
S-S, cuando el espermatozoide no ha alcanzado su madurez
optima en el epidídimo.
Los câmbios del espermatozoide que se relacionan con
la capacidad para fertilizar y que se reflejan en el desarrollo creciente de la motilidad progresiva y modifica
clones dei estado estructural de la cromatina espermáti"
ca a través dei tracto epididimario, son los indicadores
de maduración espermática, la cual se completaria en el
segmento terminal (cola dei epidídimo).
(Financiado por Proyecto DIB N°B 1^6^-8655)
EFECTO DEL 48/30 SOBRE LI. Ca^ -ATPasa LUEGO DE TRATAMIENTOS QUE IHPIDEN SU C0MBINACI0N CON LA CALMODULIN A.
(Effects of 48/80 on the Ca -ATPase after treatments
that impede its combination with calmodulin). Rossi,
J.P.F.C.. Rega, A.F. y Garrahan. P.J.
Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (UBACONICET), Facultad de Farmácia y Bioquímica, Junín 956,
1113 Buenos Aires.
+
2+
2+
La Ca -ATPasa de membranas de eritrocitos humanos
es modulada por la calmodulina (CaM). Hemos demostrado
(B.B.Acta 816, 379) que el compuesto 48/80 (inhibidor
altamente específico de los efectos de la CaM sobre la
Ca -ATPasa) inhibe con alta afinidad (Ki = 3,3/tg/ml)
en forma parcial y no competitiva al componente de alta
afinidad y en forma competitiva al componente de baja
afinidad de la curva de sustrato de la Ca -ATPasa. El
efecto dei 48/80 sobre los componentes de alta y baja
afinidad al ATP son atribuibles a su acción sobre la
CaM. La proteólisis controlada de la Ca -ATPasa impide la unión de la CaM con la enzima (Zurini et al., J.
Biol. Chem. 259, 618). En estas condiciones el compues^
to 48/80 inhibe en forma no competitiva y total la acti
vidad de Ca -ATPasa, con alta afinidad (Ki = 8,lyttg/ml).
Este efecto dei 48/80 debe atribuirse a la combinación
dei inhibidor con la Ca -ATPasa y no con la CaM. Estos
resultados permiten concluir que: a) El 48/80 es capaz
de combinarse con la Ca -AT?asa inhibiéndola en forma
completa, b) Los efectos de compuestos inhibidores de la
CaM no son necesariaraente atribuibles a su acción sobre
la CaM puesto que esos compuestos pueden también actuar
en forma directa sobre la enzima.
Con subsidios del CONICET y de la Universidad de Bue_
nos Aires.
2+
2+
2+
2+
2+
2+
DISTRIBUCIÓN ESPACIAL EN ADULTOS DE DROSOPHILA MELAN0GASTER SELECCI0NAD0S PARA ALTA Y BAJA AGREGACION DÉ
HUEVOS. (Spatial distribution in adults of Drosophila
melanogaster selected for high and low egg agregation
rate)."Ruiz. G.
Inst. Ecologia y
Evolución, Fac. Ciências, U.Austral de Chile
Este trabajo pone a prueba la hipótesis que la eleç
ción del sitio de oviposición en Drosophila melanogaster, es una forma de expresión de la conducta gregaria
que poseen los adultos.
Con este objeto, a grupos de indivíduos seleccionados para alta y baja agregación de postura de huevos,
se les registro la distribución espacial. La estadísti
ca usada fue la distancia al vecino más cercano (Clark
y Evans, 1954).
Los resultados indican que: -no existe diferencia
sexual para la distribución espacial de los indivíduos
-la distribución espacial de los adultos seleccionados
para alta concentración de huevos es significativamente diferente de los seleccionados para baja concentración de huevos (R*0.46 y R 0.96 respectivamente;
F=78.04; P 0.01); -indivíduos sin experiência sexual
y seleccionados para alta o baja concentración de huevos poseen una distribución espacial similar; R- 0.74
y R«= 0.87 respectivamente.
Estos resultados aprobarían la hipótesis propuesta.
Sin embargo para la distribución espacial de los adultos debería considerarse su estado fisiológico.
K
(Financiado por Proyecto RS-83-15 D.I.D., U.A.Ch.)
R250
ESTÚDIO DE LAS PROYECCIONES INTERHEMISFERICAS VISUALES
EN RATAS ANOFTALHICAS CONGÊNITAS ( S t u d y o f t h e v i s u a l
interhemispheric projections i n anophtalmic r a t s ) Ruiz,
G . ; B r a v o , H . y O l a v a r r i a , J . L a b o r a t ó r i o de N e u r o f i s i o l o g t a , Facultad de Ciências B i o l ó g i c a s y Departament o de Anatomia, Escuela de Medicina, P o n t i f í c i a U n i v e r sidad C a t ó l i c a de C h i l e .
La c o r t e z a c e r e b r a l v i s u a l d e l a r a t a e n v i a y r e c i b e c o
nexiones interhemisféricas a través dei esplenio d e í
cuerpo c a l l o s o , estableciéndose estas entre l o s l i m i t e s
de I a s d i f e r e n t e s á r e a s v i s u a l e s .
Existen antecedentes
que i n d i c a n q u e e s t a s p r o y e c c i o n e s s e r e m o d e l a n c u a n d o
el sistema v i s u a l es manipulado e x t e r n a m e n t e , p o r ejem
pio en enucleación postnatal.
En e l p r e s e n t e t r a b a j o e s t u d i a m o s l o q u e s u c e d e c u a n d o
la deprivaciõn se r e a l i z a en períodos prenatales, u t i l i
zando para e l l o una cepa de r a t a s a n o f t á l m i c a s congénT
t a s . M u l t i p l e s m i c r o i n y e c c i o n e s d e HRP d i s u e l t a e n DMSO
a l \% s e p r a c t i c a r o n e n l a c o r t e z a d e u n h e m i s f é r i o ;
d e s p u é s d e 24 a 48 h o r a s d e s o b r e v i d a s e p e r f u n d i e r o n y
f i j a r o n l o s cérebros para luego r e a l i z a r secciones seria^
das.
U t i l i z a n d o l a t é c n i c a de c o r t e z a aplanada e h i s t o
química c o r r e s p o n d i e n t e se v i s u a l i z o todo e l patrón de
conexiones interhemisféricas.
E l a n á l i s i s e n campo c U
r o y o b s c u r o r e v e l o q u e l a d i s t r i b u c i ô n g e n e r a l d e cone^
x i o n e s , d e s c r i t o anteriormente, se mantiene.
Esto ú l t i m o i n d i c a que l a ausência de input v i s u a l desde
períodos p r e n a t a l e s no a l t e r a e l e s t a b l e c i m i e n t o de I a s
conexiones interhemisféricas.
S i n e m b a r g o a l g u n o s detai
l i e s como e l a n c h o d e l a b a n d a e x i s t e n t e e n t r e e l á r e a
e s t r i a d a y p e r i e s t r i a d a l a t e r a l e s mayor. E s t e hecho s e
p o d r í a i n t e r p r e t a r como l a p e r s i s t ê n c i a e n e s t a s r a t a s
anoftálmicas de grupos neuronales
que en condiciones
normales remodelan s u s conexiones i n t e r h e m i s f é r i c a s p o r
el i n p u t que v i ene de l a r e t i n a .
ACTIVIDAD TRANSPORTADORA DE FOSFOLÍPIDOS EN OVOCITOS Y
EMBRIONES DE ANFÍBIOS. Phospholipid transfer activity in
amphibian oocytes and embryos .Rusifiol,A. y Bloj ,B.
Dpto.Bioq.Nutricional INSIBIO (CONICET-UNT).Instituto de
Qca.Biológica - Fac.Bioq.Qca.y Farmácia. UNT. Chacabuco
461 - 4.000 - Tucumán.
Se estúdio el rol de las proteínas transportadoras de
fosfolípidos durante la biogenesis de membrana plasmática que ocurre durante el desarrolló embrionário de Bufo
arenarum.Se midió la actividad transportadora en sobrena
dante de pH 5,1 de ovocitos y de embriones utilizando ve_
sículas sonicadas que contenían fosfolípidos marcados
con 14C y trioleina 3H(como marcador no intercambiable)
como partículas donoras y membranas de eritrocitos trata
das con glutaraldehido como partículas aceptoras.Las mediciones se efectuaron a 37°C y los resultados se expresaron en % de trasnferencia por hora y por mg de proteína.La actividad transportadora de fosfatidilcolina (PC)
en sobrenadante de ovocitos sin fecundar es de 12, ocho
veces mas alta que en sobrenadante de higado de sapo hem
bra.Después de 20 hs de desarrolló, en el estádio de
blãstula tardia,esta actividad es solamente de 2,3. Un
descenso de 4 veces en la actividad transportadora se ob^
tiene también si la actividad se expresa por embrión.Las
actividades transportadoras de fosfatidilinositol (PI) y
fosfatidiletanolamina (PE) en el sobrenadante de ovocitos (expresadas como % de transferencia por hora y por
100 ovocitos) es de 11,1 y 5,6 respectivamente.En el estádio de blãstula tardia la primera es solo de 0,6 y la
segunda no se detecta bajo Ias condiciones experimentales usadas.Estos resultados sugieren que mas dei 95 % de
Ias actividades transportadoras de PE y PI y el 75 % de
la de PC presentes en el sobrenadante de ovocitos no son
esenciales para el posterior desarrolló dei embrión. No
se descarta sin embargo que una proteína transportadora
específica para fosfatidilcolina sea requerida para este
proceso.
E V I D E N C I A S H I S T O L O G I C A S Y H E M A T O L O G I CAS DE CAMBIOS C I R C A O I A N O S DEL BAZO A S O C I A D O S AL SOPOR DE
Haimoia
elegant .
(Histologic
and h e m a t o l o g i c
e v i d e n c e s of dally c h a n g e s
In the spleen
of
UcLKmOta tligart a s s o c lated w i t h t o r p o r ) .
R u i z , G• y V a l e n z u e l a , C• D e p t o . de B i o l o g i a
U n i v e r s i d a d M e t r o p o l i t a n a de C s . d e la Educación.
D i v e r s o s e s t ú d i o s Indican q u e los e s t a d o s de
sopor en m a m í f e r o s están
frecuentemente relac i o n a d o s con c â m b i o s
h e m a t o 16g I cos cuya magnj_
tud y d l r e c c l ó n ( h e m o d I l u c i õ n o h e m o c o n c e n t r a c i õ n ) a p a r e n t a n ser c a r a c t e r í s t i c o s de los gru_
pos o de Ias e s p a d e s e s t u d l a d a s .
Se ha s u g e rido a d e m á s q u e la h a b l l l d a d para e n t r a r y s a lir r a p i d a m e n t e del s o p o r e s t í a s o c l a d a con el
a I m a c e n a m I e n t o de e r l t r o c l t o s en el b a z o .
El o b j e t i v o dei p r e s e n t e t r a b a j o es d e t e r m i nar la d l r e c c l ó n de los p o s l b l e s c â m b i o s h e m a t o l ó g l c o s d u r a n t e el s o p o r de un m a r s u p i a l , g ru_
po no e s t u d i a d o en e s t e c o n t e x t o , y paralelamen_
te b u s c a r e v i d e n c i a s de a I m a c e n a m I en to y deple_
clón e s p l é n l c a de e r l t r o c l t o s .
Con e s t e p r o p ó s i t o se o b t u v o por p u n c l ó n car_
d f a c a s a n g r e de m a r m o s i i tanto en e s t a d o de so
por c o m o en a c t i v i d a d n o r m a l . En a l g u n o s ejem
p l a r e s se e x t i r p o el bazo d u r a n t e el s o p o r y
en o t r o s d u r a n t e la fase a c t l v a .
L u e g o del re
g f s t r o de los p e s o s r e l a t i v o s de los b a z o s , se
p r o c e s a r o n para m l c r o s c o p f a ó p t i c a .
Los r e s u l t a d o s Indican q u e el e s t a d o de s o por de UaKmoia
tligani
esta asoclado
con una
h e m o d 1 1 u c l ó n s i s t ê m i c a d e r i v a d a dei s e c u e s t r o
e s p l é n l c o de e r l t r o c l t o s , lo q u e se e v i d e n c i a
por:
1) d i s m i n u c i õ n dei h e m a t o c r l t o , 2) Incre
m e n t o en el peso r e l a t i v o del bazo y 3) m a r c a do I n c r e m e n t o dei n ú m e r o de e r l t r o c l t o s almace_
n a d o s en el b a z o .
P r o y e c t o DIB N 1753-86AÍ4 U n i v . de C h i l e .
T E L A DE ALG0D0N D E R I V A T I Z A D A COMO M A T R I Z PARA I N M O V I L I Z A C I 0 N DE ( J - G A L A C T O S I D A S A . ( D e r i v a t i z e d c o t t o n c l o t h a s
m a t r i x f o r t h e i m m o b i l i z a t i o n o f ( 4 - G a l a c t o s i d a s e ) . Sal dana R . , H e r l i t z E . Departamento de B r o m a t o l o g i a ,
TOutrj^
c i ó n y D i e t é t i c a , Facultad de Farmácia, U n i v e r s i d a d de
C o n c e p c i ó n . ( P a t r o c i n i o M. B u n s t e r ) .
E x i s t e g r a n i n t e r é s p o r d i s p o n e r de una ^ - G a l a c t o s i d a s a i n m o v i l i z a d a que posea e s t a b i l i d a d , a c t i v i d a d a d e c u a d a , buenas p r o p i e d a d e s mecânicas y un c o s t o razona_
ble.
La a p l i c a c i ó n p r á c t i c a de un preparado que cumpla
tales condiciones permite l a h i d r o l i s i s enzimática de
lactosa en d i f e r e n t e s productos de i n t e r é s en tecnolo gia de alimentos.
En e l p r e s e n t e t r a b a j o s e h a o p t i m i z a d o l a o b t e n c i ó n de un d e r i v a d o h i d r o f ó b i c o de t e l a de algodón ca paz d e i n m o v i l i z a r [ J - G a l a c t o s i d a s a a t r a v é s d e a d s o r c i ó n
hidrofóbica.
La obtención de un d e r i v a d o h i d r o f ó b i c o de
t e l a se logra mediante el acoplamiento de f e n i l g l i c i d i l é t e r a l o s g r u p o s 0H d e l a t e l a , e l c u a l p r o p o r c i o n a a
t r a v é s de l o s grupos f e n i l o I a s c a r a c t e r í s t i c a s h i d r o f ô
bicas n e c e s a r i a s para l a a d s o r c i ó n de l a enzima.
Varian_
do I a s c o n d i c i o n e s d e r e a c c i ó n e n t r e l a t e l a y e l f e n i l
g l i c i d i l é t e r s e ha l o g r a d o a u m e n t a r l a a d s o r c i ó n d e l a
enzima a l a t e l a . L a enzima i n m o v i l i z a d a de e s t a manera
ha s i d o c a r a c t e r i z a d a y s e h a e v a l u a d o s u c a p a c i d a d p a ra h i d r o l i z a r lactosa a escala de laboratório.
Financiamiento
: P r o y e c t o FONDECYT
0520/85.
R 251
RELACIÓN SACAROSA-ALMIDÓN: UDP-Glc FOSFORILASA, SU DISTRIBUCIÓN Y LOCALIZACION. (Relationship between sucrose
and starch: UDP-Glc Phosphorylase, its distribution and
localization).
Salerno, G.L.
Instituto de Investigaciones Biológicas, Facultad de
Ciências Exactas, Universidad Nac. de Mar del Plata y
Centro de Investigaciones Biológicas, FIBA, Casilla de
Correo 1348, 7600 Mar del Plata, Argentina.
ANÁLISIS MOLECULAR D E PLASM IDOS
E N CEPAS
DE
T.
ferrooxidans
AISLADAS
DE
MINERALES
CHILENOS.(halecular
analysis
o+
T.
terrooxidans
plasmids isolated
from
strains
of C h i l e a n m i n e r a l s ) .
Sanchez, H.,
Cáceres, B . ,
S a n c h e z , J. P . ,
Droyuett, 6. y
Hevia, E.
Labor ator j. o
de
Bioquímica, Facultad de Liencias
Biológicas,
Universidad
Católica,
Casilla
114-D,
S a n t i a g o , C h i l e . (Pdtr u c i r ú Q : F. Bul 1 > •
E] mecanismo por el cual los productos de la reacción
catalizada por sacarosa sintasa (SS) en el sentido de
clivaje de sacarosa, participan en la síntesis de almidón, permaneció sin definirse hasta la demostración
de la enzima UDP-Glc fosforilasa en endospermas de maíz
en desarrollo (Salerno, 1985). Dicha enzima, que catali_
za la fosforólisis del UDP-Glc con la concomitante formacion de UDP y Glc-lP, permite explicar la relación en
tre SS y la síntesis de almidón, al facilitar Glc-lP,
necesaria para su sintetasa. Se considero importante
conocer la presencia de la enzima en otras fuentes vegetales, así como también en distintos tejídos. Se compro
bó la actividad UDP-Glc fosforilasa en otros granos en
formación (trigo y cebada) así como en semillas maduras
de dichas plantas. Por otra parte, en tejidos fotosintéticos, hojas de cereales y en un alga unicelular,
Chlorella vulgaris, la enzima se halla siempre presente.
Dado el rol fundamental que esta enzima tiene en granos
en desarrollo, se procedió a determinar la localizacion
de la enzima en endospermas de maíz en desarrollo, con
lo cual se tendría un esquema más claro de la via que
sigue el UDP-Glc hasta el almidón. Para ello se prepara
ron protoplastos de endospermas de maíz y a partir de
ellos se aislaron los amiloplastos. La actividad enzima
tica apareció vinculada a la fracción de amiloplastos y
queda por determinar su vinculación con el pasaje a tra
vês de la membrana de los plãstidos.
La
1 1 :< i vi aci ón
bacteriana
es
un
p r o c e d i mi e n t o a l t e r n a t i v o i n t e r e s a n t e p a r a la
s o l u b i 1 i z a c i ó n d e c i e r t o s m e t a l e s a partir d e
minerales d e baja ley. Este proceso m v o l u c r a
la p a r t i r_i pac i ón d e u n a b a c t e r i a
acidófila,
7.
ferrooxidans.
Con
el
propósito
de
iniciar
estúdios
d i r i g i d o s h a c i a la m a n i p u l a c i o n
del
D!<Jh d e
este microorganismo,
hemos
caracterizado
y
c l o n a d o en £". c o i i , s e g u n
técnicas
usuales,
elementos
extracromosomales
aislados
de
d i v e r s a s c e p a s a u t ó c t o n a s d e f. ft-t t ouxi dans .
De Ias c e p a s A - 4 , A-ò y R - 2 , se aisló
un
plasmido
de
características
moleculares
similares, en
base
a
critérios
de
tamano
(10 k b )
y
mapas
de
restriccion.
Be
caracterizo e n más detaile
el
plasmido
de
A-4,
por' c l o n a m i e n t o
parcial
de
vários
sub-f r agmerrtos d e e s t e e n pUCi -i / Jlll 0 1 .
Hemos
e n c o n t r a d a en e s t e , u n a r e g i o n r e f r a c t a r i a al
c l o n a m i e n t o en e l s i s t e m a d e s c r i t o .
La
cepa
D-2 c a r e c e d e p l a s m i d o s y
la c e p a
í-tACS-100
tiene
uno diferente,
segun
critérios
ya
mencionados.
lnteutos
reiter a d o s
de
t r a n s f o r m a c i ó n d e E.
coli
c o n el
plasmido
nativo
o
incorporandu
el
geri
CAF
han
resultado infructuosos.
Este
estúdio
tiene
corno
f i n , ia
const r u c c i ú n d e plasrrddos
hibr i d o s ,
que puedan
ser'
usados
como
vehiculos
de
clonamiento
molecular e n e s t e aci dó-f i 1 o , 1 o q u e p e r m i t i r a
mejorar algunas propiedades bacterianas, para
o b t e n e r u n a mayor' e f i c i ê n c i a en ei p r o c e s o d e
biolixiviaci ó n .
Apoyado por CONICET y CIC.
A C T I V I D A D DE L A ATPasa LIS0S0MA1 DE HI0AD0S CON D I F E R E N T E
CAPACIDAD PARA DEGRADAR PROTEÍNAS. ( L y s o s o m a l ATPasa a c t i v i t y I n
l i v e r s w i t h different p r o t e i n breakdown a b i l i t y ) . S a n l l o r a n t l . P . M . .
Cassia. R . O . . B u r . J A . v Conde. R.D. Instituto de Investigaciones
Biológicas, Facultad de Ciências Exactas y Naturales. Universidad Nacional
de Mar del Plata, Argentina.
Cuando se administra a ratones adultos una dieta s i n proteínas, e l
contenido de proteínas hepettces se reduce a la mltad en 5 dias. L a masa
perdida se r e c u p e r a rapidamente al realtmentar a los animales con una
dieta completa. Esto se deoe a que la degradación proteica se Inhibe.
E x i s t e n evidencias sobre la participación de los llsosomas en dicha
degradación. La regulation de la actividad lisosomal podria estar a n i v e l de
la ATPasa presente en la membrana de dichas organelas. Su función s e r i a
mantener laacldez Intrallsosomal.
El presente trabajo se oriento a la mediclón de la actividad de ATPasa
en membranas lisosomales aisladas de higedos de animales en dieta s i n
proteínas (degradación aumentada) y reallmentados (degradación
Inhibida). Las membranas se aislaron a p a r t i r de llsosomas cor gados con
T r i t o n W R 1339 ( T r i t o s o m a s ) . Además de la actividad de A T P a s a , se
midieron los contenldos de f o s f o l i p i d o s y proteínas.
Los resultados Indicaron que l a actividad de ATPasa p o r p.mol de
fosfolípldo es Indepsndlente de l a capacidad degradativa del tejido. S i n
embargo, e l contenido de proteina por umol de fosfolípldo es m a y o r en Ias
membranas provenientes de tejido con baja actividad degradativa. L a
relación e n t r e este hecho y la actividad proteolitica de los llsosomas es
desconoclda.
Financiado por CONICET, C I C y F I B A
Financiado
p u r PNUD-QI-iUD1
iCHI
8S/002).
COMPOSICION Q U Í M I C A D E A P O N O G E T O N
DISTACHYON.
(Chemical content of
Aponogeton distachyon).
San Martin, J., Barrera. J.
y Hauensteln. £ .
Sedes Maule y Temuco, Universidad Católica de
Chile e
Instituto de
BotSnlca,
Universidad
Austral de Chile.
Aponogeton distachyon L.f.
(Aponoqetona ceae, Llílatael
es una planta acuitica de origen sudafrlcano,
asilvestrada en los bafiados
de Santo
Domingo, al
Sur de
Valdivia,
Chile. Esta espécie
es un recurso natural de
multiples aplicaciones.
Se estúdio la composiciôn química
de los diferentes
órganos de
esta planta
con miras a
orientar
su futuro
aprovechamiento.
El material se colectó en primavera, separando rlzomas, raíces,
pecíolos, hojas, flores,
brácteas,
frutos y
semillas,
los que
luego de lavados
y secados,
se pulverizaron
para realizar análisis químicos por los métodos tradicionales. El contenido energético se
determina en un calorímetro adiabático.
El mayor
contenido de aeniza
se presentô
en la raiz. El extracto no nltrogenado es alto en el rizoma y aumenta mis aún en la semilla.
La fibra cruda es baja en rlzomas,
hojas y semillas,
aumentando en raíces, pecíolos,
flores y frutos.
La curva de
proteína
tiene un recorrido inverso, siendo alta en la
hoja.
Cálcio y fósforo presentaron comportamientos opuestos en
los órganos aéreos y similar en los subterrâneos.
Los valores calóricos son altos en rlzomas,
hojas y semillas
y bajos en raíces y pecíolos.
Los resultados
confirman la
utilidad de los rlzomas como alimento y de Ias hojas como
fuente proteica.
Proyectos: D I D - U A C H
NO
RSM-80-30 y
FONDECYT
R 252
E S T I M U L A C I O N DEL T R A N S P O R T E DE C A L C I O EN MICROSOMAS DE
R A I Z DE PHASEOLUS VULGARIS POR V I T A M I N A D3 ( S t i m u l a t i o n
o f c a l c i u m t r a n s p o r t i n m i c r o s o m e s o f Phaseolus
vulgaris
roots by v i t a m i n D3). Santamaria, E. y Boland, R. Departamento de B i o l o g i a , U n i v e r s i d a d N a c i o n a l d e l S u r , 8000
Bahia Blanca.
MODELOS
CIRCADIANOS D E SUESO-VIGILIA EN UNA
P O B L A C I O N D E E S T U D I A N T E S U N I V E R S I T Á R I O S (Circadlan Sleep-Wakefulness Patterns in Universltary Students)
§iuU!iis§ZiI;i-f.fl242d«:!osIi!iii-i9tfiiU_ ,Sanchez, M.
Depto. de Fisiología y Biofísica. Fac. de Medicina.universidad de Chile.
La literatura de Sueio/Vigiliâ(S/V) de huaanos, plantea la existência de diversos
lodelos distribuídos en las 24 hrs. Por ej., el "Habito Buho : eodelo de S/v
caracterizado por despertar eatinal tardio (después de B hrs)coiienzo
tardio dei SueSo nocturno (Sn! y eayor eficiência de rendimento (real y/o
subjetiva) en el crepúsculo. Los sujetos con un horário ias teaprano de
despertar «atinai y coiienzo de Sn, tendrlan el "Habito Alondra", No hay
cotproeacion de estos ndelos en poblaciones.
1
L a v i t a m i n a D3 a b a j a s c o n c e n t r a c i o n e s a f e c t a e l c r e c i m i e n t o y l a c a p t a c i ó n d e Ca e n s e g m e n t o s d e r a i z d e
Phaseolus
vulgaris
c u l t i v a d o s in vitro.
Se r e a l i z a r o n
e x p e r i m e n t o s para i d e n t i f i c a r e l s i s t e m a ( s ) de t r a n s p o r t e d e Ca a f e c t a d o p o r e l e s t e r o l . R a í c e s o b t e n i d a s d e s e
mi 1 l a s d e P.vulgaris
g e r m i n a d a s 4-5 d í a s e n l a o s c u r i d a d "
f u e r o n c u l t i v a d a s 2 h e n m e d i o de S h e n k - H i l d e b r a n d t e n
a u s ê n c i a y p r e s e n c i a d e v i t a m i n a D3 ( 1 0 - 9 M ) , S e a i s l a ron f r a c c i o n e s s u b c e l u l a r e s p o r u l t r a c e n t r i f u g a c i ó n d i f e
r e n c i a l de homogenados d e l t e j i d o . Se e f e c t u ó l a c a r a c t e r i z a c i ó n p a r c i a l de v á r i o s s i s t e m a s t r a n s p o r t a d o r e s
de C a 2 + . E n l a f r a c c i ó n m i t o c o n d r i a l , u n o e n e l q u e p a r t i c i p a l a cadena r e s p i r a t ó r i a y e l o t r o a s o c i a d o a una
H+-ATPasa. En microsomas s e i d e n t i f i c a r o n una C a ' + - A T P a s a d e p e n d i e n t e d e c a l m o d u l i na y u n a H - A T P a s a q u e g e n e r a un g r a d i e n t e de H p a r a e l i n t e r c â m b i o C a 2 / H . E l
t r a t a m i e n t o c o n v i t a m i n a D3 n o p r o d u j o c â m b i o s a p r e c i a b l e s e n l a a c t i v i d a d de l o s s i s t e m a s de t r a n s p o r t e de
Ca?+ l o c a l i z a d o s e n m i t o c o n d r i a . S i n e m b a r g o e l e s t e r o l
aumento s i g n i f i c a t i v a m e n t e e l t r a n s p o r t e d e l c a t i ó n en
m e m b r a n a s m i c r o s o m a l e s . Como l a v i t a m i n a D3 i n c r e m e n t a
l o s n i v e l e s e n d ó g e n o s d e c a l m o d u l i na e n I a s r a í c e s e s
posible que l o s efectos observados estén relacionados
con una e s t i m u l a c i ó n de l a C a ^ - A T P a s a d e p e n d i e n t e de
CAM. L o s e f e c t o s d e h o r m o n a s d e c r e c i m i e n t o v e g e t a l e s
( a u x i n a , c i t o c i n i n a ) e s t á n mediados p o r câmbios en l o s
n i v e l e s c i t o p l a s m á t i c o s de Ca2+. Es p r o b a b l e que l a v i t a m i n a D3 a f e c t e e l c r e c i m i e n t o d e r a i z m e d i a n t e u n m e c a n i s m o q u e i n v o l u c r e t a m b i é n a l Ca + como m e n s a j e r o s e cundário.
+
+
+
+
+
OBTENCION DE 3-CETO tt ' ESTEROIDES.POR VIA MICROBIANA.
(Microbiane obtention of 3-ceto ar asteroids)
Sanz de TOsetti.M.I. ;Segovia,R.F.
Cátedra de Microbiologia General e industrial
Facultad de Química,Bioquímica y Farmácia
Universidad Nacional de San Laís
5700 San Luis,Argentina.
INTRODUCCION:En la obtencion de compuestos esteroidales con actividad farmacol€gica,una de Ias reacciones
de importância industrial,que puede llevarse a cabo//
gor via micTobiana,es la l-deshidrogenación.Tradicionalmente se recurre al: ueo de un aceptor artificial//
de electrones,que permita la remoción de los electrones desde el sustrato,encareciendose de esta forma///
el proceso.En el presente trabajo,nosotros describi-/
mo8 la conversion de progesterona en su derivado deshidrogenado,por cãlulas de Nocardia rhodocrous en dos
fases líquidas inmiscibles,sin agregado de aceptor artificial de electrones.
MÉTODOS:Células de Nocardia rhodocrous que crecieron/
en medios conteniendo lact«to,glicerol ó glucosa,se//
colocaron en una solución de progesterona en gasoil/
(100 mg/50 ml),y luego de dos horas de agitaciõn,se//
separaron por centrifugacion y el sobrenadante aome-/
tió a pruebas de TLC-Las placas de silica gel F 254//
se observaron bajo lãmpara UV.
RESULTADOS:Las células cultivadas en medios conteniendo lactato,llevaron a cabo la biooconversiõn en mas//
dei 501,en Ias dos horas de reacciSn.no así Ias cul-/
tivadas en medios con glicerol õ glucosa.
DISCUSION:La presencia de lactato.induciría la D-lactato deshidrogenasa de membrana,ligada al transporte
de aminoãcidos y azúcares.Las células contienen áci-/
do láctico en su película acuosa,que posibilitaría///
1 8 regeneración del cofactor necesario (NAD.NADP),///
para la reacción de deshidrogenación.
t
t
La coiprobacibn de ellos en una poblacion noraal, es de gran nportancia para
la organizaciôn y prograaaciòn de la vida y rendiaiento personal y
profesional de cada sujeto. Por ej., para la elecciòn y distribution de sus
turnos laborales. Adeias, estos datos nos inforiarian, sobre fonas de
organizaciôn de los earcapasos circadianos hipotalàeicos.
En la poblacion de 500 estudiantes de Medicina de 1 a 6 ano de Medicina de la
Sede Norte de la Facultad de Medicina, adultos jOvenes, sanos, se hizo
conteiporaneaaente, una encuesta de 62 Índices sobre hábitos de S/V) en
dias laborables, fines de seaana y vacaciones. Se estúdio la prevalência de
los hábitos "Buho'-'Alondra" y su relation con presencia/ausencu de
patologia dei ciclo S/V.
Los resultados euestran la existência clara de los aodelos "BuhoVAlondra", con
fuerte dounancia dei habito "Buho" (92 X). Aibos hábitos fueron
'contrariados' por los horários habituates de trabajo en la Facultad y la
necesidad de tieapo de estúdio, lo que se tradujo la existência dé Hipersolnia y
sosnolertcia diurnas en el 96 X de toda la poblacion.
Los períodos escogidos colo de aayor alerta y rendinento intelectual para los
"Buhos" estaban localizados: después dei «diodia en dos ciclos ultradianos:
entre 15-17 hrs y entre 18 y 24 I7B X)y un ciclo latinal tardio entre 11 a 13
hrs (32! de los Buhos).
Excluída la soinolencia, es llaeativo un 57,21 de patologia dei S/V
i.e.ronguidos, bruxiseo, priapisio, sonaibuhsio, etc.
Estos resultados, luestran la existência de 2 lodelos circadianos de S/V y auchas
interrogantes: £.son genéticos? cplantean la necesidad de considerar el hábito
circadiano de rendiliento de una poblacion ante la necesidad de obtener sus
•axieos renduientos laborales e intelectuales?ÍSe repetirân en otras
poblacion conteaporaneat''
ESTÚDIO DE UNA ACTIVIDAD DE B - N - A C E T I L aUCOSAJIINIDASA
ASOCIADA A L E C T I N A DE PAPA. ( S t u d / on B - N - a c e t y l glucosaminidase
a c t i v i t y asociated to potato lectin) Scherxia. C . . Daleo. 0. v Pont Lezica.R.
Instituto de Investigaciones Biológicas y Departamento de Biologia, F C E y N ,
Universidad Nacional de Mar del P l a t a
En trabajos p r é v i o s sobre lectina de papa (Solanum tuberosim.
aglutinina: S T A ) se habia observado que las preparaciones presentation
actividad glicosidasica. Existen antecedentes con respecto a otras lectlnas,
especialmente de la família de las Leguminosas, que se unen
especificamente a galactose, y a s u v e z presentan actividad de
x-oalactosidasa. No se ha encontrado hasta el presente que lectlnas de
otras families tengen esta propiedad. E l objetivo del presente trabajo fué
estudiar algunas propiededes de la actividad glicosidasica presente e n
prepar aciones de S T A para determinar s i está asociada a la misma
molecule o se trata de una enzima que c o p u r i f i c a con la lectins.
Las preperactones de S T A se o b t u v i e r o n a p a r t i r de tuberculos de la
variedad H u i n k u l , y se p u r i f i c a r o n p o r cromatografía de afinidad e n
columnas de quitina. L a actividad glicosidasica se midió utilizando
p a r a - n i t r o fentl-glicosldos. Inmunoglobullna a n t l - S T A s e p r e p a r o
inmunizando conejos p o r v i a i n t r a m u s c u l a r con S T A purificada y
posterior purificación del suero. Se estúdio la actividad glicosidasica
frente
a vários
sustratos
(pNF-glicósidos)
resultando s e r
8-N-arjetilglucosaminidBsa. Esta tiene u n p H Optimo de 6.6 y una K m
aparente de 0.25 mM. Se estudia la especificidad de sustratos f r e n t e a
oligómeros de N-acetil glucosamine y otras oliopsacéridos. E n geles de
poliacrilamida en presencia de SOS se observan sólo los polipeptidos
correspondtentes a S T A , que dan el mismo patron de tnmunoprecipttacton
en Ouchterlony. No hemos logrado disociar hasta el presente le actividad
enzimática de la lectina, p a r lo que se sugiere que c o r r e s p o n d s ) a la
misma molécula Se discute el posible r o l de esta actividad enzimática que
es r a r a en plantas s u p e r i o r e s , esí como las similitudes de esta actividad
enzimática asociada a S T A , con la presente e n algunas lectinas de
Leguminosas.
Subsídios de CIC. SUBCYT y CONICET.
MÉTODO RÁPIDO DE DETECCIÓN DE ADN PLASMIDICO EN CEPAS
DE Clostridium acetobutylicum.( Quick method to visualize plasmid DNA from strains of C. acetobutylicum)
Schijman,A.G..Floccari,M.,Mendez,B.
Lab. de Genética Bacteriana,Depto de Qca Biológica, Facultad de Cs Exactas y Naturales, Universidad de Bs.As.
C.acetobutylicum es un microorganismo anaerôbico.Gram +,
que produce acetona,butanol y etanol a partir de almidón como fte. de C.La fermentaciõn acetobutT1íca presenta un interés biotecnológíco doble:1.producir a escala
industrial solventes orgânicos y 2.degradar la biornasa
residual renovable utilizándola como sustrato fermentative De ahí la importância de conocer y mejorar la genética de este microorganismo.Cualquier manipulación genética requiere de sistemas de transferencia génica eficientes,como por e j . la introdueción de vectores de clonado.En este lab. se obtuvieron cepas portadoras de
plásmidos,según evidencias fenotíptcas.A partir de este
material biológico es necesario detectar fisicamente dichos plásmidos.El objetivo de este trabajo fue desarrollar un procedímíento rápido y en pequena escala (cultivos de 5 ml)para visualizar ADN plãsmidico por electroforesis en geles de agarosa.Este método se basa en:
l.fragilizar la pared bscteriana con Usozima,en presencia de Arnasa y de una alta concentracion de EDTA(lOOmM)
para inhibir la fuerte actividad de Adnasa presente en
estas cepas; 2.1ísar los protoplastos con una alta concentracion de SDS (\%) en presencia de proteinasa K;3.
desprotginízar con fenol-cloroformo y A. sembrar una aITcuota en geles de agarosa.Mediante este procedÍmíento
se detectaron bandas correspondientes a moléculas CCC
oligoméricas. El método es sencillo , rápido ( 1 hora ) ,
por lo que resulta adecuado a los efectos de ser empleado rutinariamente para rastrear un número considerable
de muestras en una jornada de trabajo.
R253
DEL ORGANO SUBCCMISURAL DE LA, RATA CON EL LI_
QUIDO CEFALOFFAQUIDED Y LA SANGRE. (Blood and cerebrospinal fluid-subcomtissural organ barrier). Schoebitz,K.
Instituto de Histología y Patologia, Universidad Austral de Chile.
El ôrgano subcomisural (OS) es una estructura circunventricular ubicado en la pared del 3er ventrículo (V)
bajo la cemisura posterior. Las células ependimarias
(CE) y subeperidimarias (SE) envían prolongaciones que
contactan oon los vasos sangüíneos (vs) de la region SE
o al espacio leptomeníngeo.
Se utilizaron 16 ratas, de Ias cuales 8 fueron inyectadas en la cisterna magna (CM) con 100 ul de peroxidasa (P) al 3% y Ias restantes fueron inyectadas en el
3er V. A los 2 y 15 minutos postinyección se fijaron
por perfusion vascular con glutaraldehído al 2%. Se e x tra jo el cérebro, se disecô* el OS y la eminência media
y se siguieron fijando por inmersión 4 horas. Al día si
guiente se procesaron para el revelado de la P según e T
método de Granam y Karnovsky (1966). Los cortes para mi
croscopla electronica se procesaron en forma habitual.
Los resultados nos indican que: 1) El endotelio de
los vs del OS es contínuo; 2) Poseen un espacio perivas
cular que contiene colágeno largo espaciado; 3) En el
citoplasma de los vs del OS se observan escasas vacuolas de pinocitosis con P. Cuando se inyecta el marcador
en la CM no hay P en el espacio intercelular de CE y
hay P en el espacio subaracnoídeo y SE. Cuando se inyec
ta en el 3er V el espacio intercelular de la region ba
sal de Ias CE y el de Ias células SE presente el marca
dor, en cambio el espacio intercelular de la region
apical de las CE no lo presento.
Esto indicaria que existe una barrera efectiva OS-san
gre y una probable barrera C6C-líquido cefalorraquídeo.
Esto ubicaría al OS en una situaci6n excepcional cuyo
significado funcional es aú*n de sconce ido.
BAKRERAS
Financiado por Proyecto S-85-39, Direccion de Investigación, Universidad Austral de Chile, Valdivia.
METABOLIZACION DE COMPUESTOS RELACIONADOS CON LIGNINA
POR STREPTQMYCES VIRIDOSPORUS T7A (Metabolism of lignin
model compounds !by Streptomyces viridosporus T7A. D.See
lenfreund, C.Rüttijnann, R.Vicuna. Lab. Bioquímica, Fa cultad de Ciências Biológicas, U. Católica de Chile.
A C T I V I D A D E N Z I M Á T I C A EN E S P E R M A T O Z O I D E DE D I F E R E N T E S E S P É C I E S D U R A N T E EL T R A N S I T O EPIDIDI_
MAL. ( S p e r m a t o z o a l enzymic activity in d i f f e rent s p e c i e s during e p i d i d y m a l t r a n s i t ) .
S e m b a j , A., P o n c e , R.H. y V e r m o u t h , N . T .
En la naturaleza la biodegradación de la lignina es
1levada a cabo por la acción integrada de bongos, bactérias filamentosas (Actinomyoetes) y eubacterias, atribuyéndose en general un rol preponderante a los bongos.
Ultimamente se ha postulado que ciertos actinomicetes
tendrían también una participación importante en este
proceso catabólico.
La bacteria filamentosa ligninolítica más conocida es
Streptomyces yiridpsporus T7A. Nosotros hemos estudiado
su versatilidad metabólica utilizando diversos tipos de
compuestos modelo de lignina y preparaciones purificadas
de lignocelulosa.
Se estúdio la metabolizacioh de compuestos modelo de
bajo PM tales como ácidos aromâticos monomêricos y diméricos por métodos espectroscópicos. Se observo que algu
nos compuestos son metabolizados (Sc. benzoico y ãc. pro
tocatecuico), otros no son modificados y ác. vaníllico
es inhibitorio para el crecimiento dei microorganismo.
Utilizando fracciones purificadas de lignina Kraft se
observo crecindento de Stêptornyces en la fracción de PM
mayor de 3000 e inhibición dei crecimiento en la frac ción de PM menor de 3000 rica en ãc. vaníllico. Al sustraer selectivãmente el ác. vaníllico de la fracción de
menor PM mediante un pretratamiento con bactérias que me
tabolizan este compuesto, se obtuvo un crecimiento compa
rable al encontrado en la fracción de mayor PM.
Por último, se estúdio la producción por cuenta de es
ta bacteria del intermediário polimérico precipitable
con ácido (APPL) utilizando lignocelulosa de distintas
fuentes (paja de trigo, aserrín de pino), en diversas
condiciones de cultivo. Estos APPL son un sustrato ligninoso natural y hemos descubierto que existen bactérias
que son capaces de utilizarlos como única fuente de carbono. Financiado por DIUC, Celulosa Arauco, FONDECYT.
C á t e d r a de Q u í m i c a B i o l ó g i c a , F a c u l t a d de C.
M é d i c a s , U n i v e r s i d a d N a c i o n a l de C o r d o b a ,
Cordoba, Argentina.
-
Los e s p e r m a t o z o i d e s de m a m í f e r o s a d q u i e r e n
su c a p a c i d a d f e r t i l i z a n t e d u r a n t e su pasaje a
t r a v é s del e p i d í d i m o . Este proceso de m a d u r a ción está a s o c i a d o a c â m b i o s m o r f o l ó g i c o s y
b i o q u í m i c o s . H e m o s r e a l i z a d o un e s t ú d i o compa_
rativo de las a c t i v i d a d e s de l a c t a t o d e h i d r o genasa ( L D H ) , malato dehidrogenasa ( M D H ) , a s partato aminotransferase ( A A T ) , glutamato dehidrogenasa (GlutDH), glucosa-6-fosfato dehid r o g e n a s a ( G 6 P D H ) y p r o t e í n a s t o t a l e s (PT) en
e x t r a c t o s a c u o s o s de e s p e r m a t o z o i d e s a i s l a d o s
de caput y cauda de e p i d í d i m o de r a t a , r a t ó n ,
c o n e j o , c o b a y o y c e r d o . La actividad se e x p r e
sa en u n i d a d e s por c é l u l a . El t r a n s i t o e p i d i d i m a r i o se a c o m p a n a de una r e d u c e i ó n en la ma
yoría de lajs a c t i v i d a d e s e n z i m á t i c a s y en el
c o n t e n i d o de p r o t e í n a s , e x c e p t o para LDH en
c o b a y o que p r e s e n t a un i n c r e m e n t o significati^
v o . G l u t D H en ratón y L D H , A A T y PT en c e r d o ,
no m o s t r a r o n v a r i a c i o n e s .
Las m o d i f i c a c i o n e s que e x p e r i m e n t a n Ias en
z i m a s en e s p e r m a t o z o i d e s d u r a n t e la m a d u r a c i ó n
d i f i e r e n en Ias d i s t i n t a s e s p é c i e s , lo cual
s u g i e r e que dicho p r o c e s o no se e x p r e s a , en
todas e l l a s , por un patrón m e t a b ó l i c o u n i f o r me .
R254
M O R F O L O G I A D E F I B R A S D E L V A G O R E G E N E R A D A S EN
GLIA DEL HIPOGLOSO. (Morphology of regenerated
fibers of the vagus on hypoglossal n e r v e ) .
M . Serra. L a b . Neurocitología, Depto- Biologia
C e l u l a r , P. U n i v e r s i d a d C a t ó l i c a d e C h i l e .
S a n t i a g o , C h i l e . ( P a t r o c i n i o : J. A l v a r e z . ^
En n e u r o n a s a m i e l i n i c a s d e l v a g o , el c a l i b r e d e l a p r o l o n g a c i ó n i n f r a n o d o s a ( I N ) es d e
1 .1 u m , y el n ú m e r o d e m i c r o t u b u l e s ( M T s ) p o r
a x o n es d e 5 6 .
En l a p r o l o n g a c i ó n s u p r a n o d o s a
(SN),
en su trayecto periférico e intracraneal
t i e n e v a l o r e s d e 0.36 u m
y 10 MTs por axon.
Esto s e p o d r í a d e b e r a d o s p r o g r a m a s g e n e
ticos, uno p a r a cada prolongación, o a que la
glía central o periférica, que rodea a los
axones, difiera y module un solo programa. Para
discriminar entre estas posibilidades hicimos
r e g e n e r a r e n g a t o s , f i b r a s SN d e i v a g o e n el
nervio hipogloso que aporta la glía p e r i f é r i c a ,
y cuyos axones tienen características similares a los IN.
A los 6 m e s e s reoperamos y estu
d i a m o s l o s n e r v i o s c o n el m i c r o s c ó p i o e l e c t r ó nico.
S e a n a l i z a r o n f i b r a s SN e n s u g l í a o r i g i n a l (0.31 u m
y 15.3 M T s por axón) y en glía
d e i h i p o g l o s o (0.31 u m
y 17.2 M T s por axón;
estos valores se asemejan a los d e Ias prolong a c i o n e s SN d e i v a g o n o r m a l .
Se c o n c l u y e q u e
l a g l í a p o r l a q u e d i s c u r r e el a x ó n n o p a r t i c i pa en la especificación d e su calibre o dei
contenido microtubular dei axón.
Seria la c o n d i c i ó n d e s e r SN o I N lo q u e d e t e r m i n a I a s d i f e
rencias morfológicas encontradas en Ias fibras
amielinicas central o periférica dei vago.
2
2
2
2
MORFOLOGIA BUCOFARINGEA Y ALIMENTACION D E ODONTESTHFS
BONARIENSIS y ODONTESTHES MAULEANUM D E L EMBALSE RAPEL.
(Morphology o f the Oropharynx a n d feeding o f Odontesthes bonariensis y Qdontesthes m a u l e a n u m a t Rapel R e s
ervoir.
Silva, E . , Comte, Sh., Contreras, M . y Vila,
I. D e p t o . C s . E c o l ó g i c a s , U n i v . d e C h i l e .
El Embalse Rapel exhibe marcada heterogeneidad ambien
tal. Sin embargo, s u creación reciente y altas fluctua
ciones d e nivel influirian en u n a fauna bentõnica pobre
en diversidad y a b u n d â n c i a . L a fauna í c t i c a , e n cambio,
es a b u n d a n t e y v a r i a d a . E s t e t r a b a j o c o m p a r a e l n i c h o
trófico de d o s espécies congeneticas de Atherinidae d e i
Embalse y estima e l grado de sobreposición alimentaria.
Se c a p t u r a r o n p e c e s c o n redes a g a l l e r a s p a r e s d e 1 . 5 ,
3.5 y 5.0 c m , c o l o c a d o s p o r 2 4 h e n e s t a c i o n e s
litora
les. Se analizó la morfología bucobranquial de los e
j e m p l a r e s y s e d e t e r m i n o e l c o n t e n i d o e s t o m a c a l comparSn
dolo con la oferta ambiental.
A m b a s e s p é c i e s p r e s e n t a n a d a p t a c i o n e s d i f e r e n t e s : O.
bonariensis es la espécie dominante en este ecosistema,
su conducta alimentaria como depredador carnívoro es o
portunista y consume u n a amplia gama de items. O. mauleanum, de distribución preferentemente lõtica, solo se
encuentra e n águas d e b a j a profundidad en e l Embalse,
es p o c o a b u n d a n t e e n l a z o n a d e m u e s t r e o y e l r a n g o d e
tallas c a p t u r a d a s es l i m i t a d a (14-20 c m ) . E l c o n t e n i d o
estomacal incluye organismos bentõnicos como larvas d e
i n s e c t o s y o s t r ã e o d o s , c o n u n p o r c e n t a j e a l t o d e estorna
gos vacios o llenos d e sedimento y ocasionalmente restos vegetales. Ambas espécies tienen b o c a protráctil,
p e r o O. b o n a r i e n s i s la e x t i e n d e e n l í n e a r e c t a y O. m a u leanum lo hace oblicuamente.
H a y d i f e r e n c i a s e n el n u
m e r o d e b r a n q u i s p i n a s de l o s a r c o s b r a n q u i a l e s y en el
s i s t e m a d e n t á r i o : e s t o p e r m i t e p o s t u l a r m o d a l i d a d e s de
capturas diferentes, hecho corroborado en observaciones
preliminares de alimentaciõn experimental.
Es posible
p r e d e c i r q u e 0. m a u l e a n u m s e d e s p l a z a r í a e n t r e l o s a f l u e n t e s y e l e m b a l s e . P r o y e c t o DIB N - 2 4 5 0 / 8 6 1 3 . MAB/5
UNESCO.
EFECTO DEL LIT 10 SOBRE LA LIBERACION DE OOLECISTOQUININA DESDE CORTES DE CUERPO ESTRIADO DE ROTA* {Effect of
lithium on the release of colecystokinin from rat stria
tal slices). Sierralta, J., Beinfeld, M.C. y Gysling,
K. Laboratório de Farnacología-Bioquímica, Facultad de
Ciências Biológicas, P. Universidad Católica d e Chile,
y Dept. of Pharmacology, St. Louis University, St.
Louis, MO, U.S.A. (Patrocinio: B. Ramirez).
El litio es uno d e los fârmacos mâs usados en el tra
tamiento d e la sicosis maniaco-depresiva, sin embargo,
se desconoce su mecanismo de acción. El propósito de
este trabajo es estudiar el efecto del litio sobre la
liberacion de colecistoguinina (CCK) un neurotransmisor
putativo.
Cortes d e cuerpo estriado (200 u)se incubaran en
Krebs-Ringer-Fosfato pH 7.4 continuamente oxigenado. La
liberacióh fue inducida por K*~ 40mM. El litio se intercambia equimolaimente con NaCl. La CCK liberada fue d e terminada por radioinmunoensayo usando un anticuerpo
anti CCK (R5) (Beinfeld y cols. Brain Res. 213, 51,
1981). La adición d e LiCl 10 m M al medio rico en K"*" no
afectó la liberacion de CCK. Sin embargo, la preincubación de cortes de cuerpo estriado por 50 min en la
liberacióh d e CCK por exposición subs ecuente a K " 40mM.
Es importante destacar que LiCl 10 m M est aba presente
en el medio d e estimulaciôn d e los cortes controles así
cemo en los preincubados con L i . Este efecto también
se observo cuando los cortes fueron seme tidos a dos
períodos de estimulaciôn Si y S2 y prévio a la segunda
estimulaciôn los cortes eran preincubados por 40 min.
en presencia d e L i ; S2/S1 control = 0.78 * 0.05;
S2/S1 experimental = 1.62 * 0.21.
4
+
+
Se discuten posibles mecanismos de este efecto de
litio sobre la liberacion d e CCK.
Financiado parcialmente por proyecto DIUC 203/86.
PRODUCCIÓN DE LI6NINASAS POR HONSOS NATIVOS CHILENOS.(Production of ligninases
by natives unite-rot fungi). 'Silva.H.. "Herino.A. 'Agosin.E. y
MPincheira.5. 'Laboratório de Biotecnologia, INTA, Universidad de Chile.
"Laboratório de Genética, Facultad de Ciências, Universidad de Chile.
La celulosa junto a las heiicelulosas y lignina, suian lis del 851 del
peso seca de los tejidos leSosos.
La lignina es un hetero-polliero aroiatico, tridimensional y atorfo, cuya
recalcitrancia dificulta tanto su aprovechaiiento, con el de los
pohsac áridos asociados a ella (celulosa y heiicelulosa).
En la naturaleza, la biodegradacion de la lignina se lleva a cabo
principalmente por bongos Basidioaycete llaudos de pudricion blanca, en un
proceso lento y altaiente oxidativo. Un representante euy estudiado de esta
clase es fhnerochaete cbrjíasporia» del cual se pudo aislar en el aSo 1983,
la priiera enziea con actividad ligninolítica.
En Chile se han encontrado distintos tipos de bongos asociados a la
descoiposicion de la ladera nativa. Estas fueron recolectados bajo la fona de
carpoforos, cuyas características aacroscbpicas han periitido en algunas casas
una caracterizacion parcial. Otra prueba de caracterizacion lo constituyà el
test de 8avendai, que indica la producción de fenoles oxidasas extracelulares
que persi te distinguir los llaiados bongos de pudricion blanca de los de
pudricion parda. De esta eanera se identificaron algunos hongos entre los
cuales están el Tntetes versicolor,fianoderiaaaalanaíu, 61oesson
vitellinai f Phltbii chrfsocra; estos das altitos son responsables de la
producción del 1 laudo 'paio podrido".
Los creciiientos liceliares en aedio ealta perai tieron deterainar las
tetperaturas bpti ias de crecieiento de los hongos. Teniendo esto en cuenta y
usando coio indicador dei letabalisio secundário la decoloraciôn dei azul de
Reiazol-B se toiaron los sobrenadantes de Ias eedios de cultivo y se proba su
actividad ligninasa con la ietódica descrita para la ligninasa dei
Phioerachftt? chrysosforití», Se estudia el efecto dei nitrogeno, oxigeno y
agitaciõn sobre la producción de ligninasas en cultivo liquido para Ias cepas
que eostraron la actividad ligninasa ais elevada.
Aquellos hongos ias proiisorios en cuanto a actividad especifica, fueron
soaetidos a análisis enziiaticos preliminares, adeias de dar los pnieros
pasos en los estúdios genéticos.
Financiado por: Fonío de Desarrollo Universidad de Chile.
Proyecto: Biodegradacion y aprovechaiiento de recursos lignocelulõsicos.
ANTICUERPOS MGNOCLGNALES DIRIGIDOS CONTRA CALICREÍNA
URINARIA HUMANA
(Monoclonal antibodies directed to
human urinary kallikrein) Macarena Silva Laboratório
de Inrounologia, Departamento de Biologia Celular,
Facultad de Ciências Biológicas, Pontifícia Universidad Católica de Chile.
(Patrocínio: Alfredo E. De Ioannes)
Para el estúdio de la calicreína tisular y especialmente para su cuantificación en el plasna, los anticuerpos monoclonales presentan ventajas sobre los anticuerpos policlonales usados hasta ahora.
La i fimuni zaci ón de ratones hembras CBI0F1 con calicreína urinaria humana purificada, indujo una respuesta humoral compatible con la producción de anticuerpos monoclonales.
R 255
ESTÚDIO DE LA RECUPERACIÓN DE LOS MARCADORES DE DIFERENCIACIÕN TIMICA, POR ADMINISTRACIÕN DE CASEINA EN ANIMALES SOMETIDOS A DEFICIÊNCIA PROTEICA SEVERA. (Thymus repopulation by casein feeding after a severe protein defi
ciency). Slobodianik. N.H., Lopez, M.C*, Melton, E., &
Roux, M.E* (*C0NICET). Dpto. Bromatología y Nutriciõn Ex
perimental, Fac. Farmácia y Bioquímica, Univ. Buenos Aires .
La cinética de recuperación del timo fue estudiada
luego de la administraciõn de caseina al 20%, durante 5,
9, 21, o 40 días, en ratas Wistar que al deetete sufrieron déficit severo de proteínas. Se determino el peso (X
+ES) y el número de células dei timo <N« cêl x 10 +ES)
en cada uno de los tiempos mencionados. La curva de invo
lución tímica observada en los controles de 80 días de e
dad (C), no se obtuvo en Ias ratas de nuestro modelo experimental que recibieron caseína durante 40 días (peso:
357.0+39.0 vs C: 287.9+23.2* N* cél: 53.4+5.0 vs 35.8+
7.9* *P/ 0.05). La poblacion T madura y sus subpoblaciones fueron caracterizadas por inmunofluorescencia indirecta mediante el empleo de los anticuerpos monoclonales
W3/13, W3/25 y MRC 0X8. Resultados: W3/13: (5: 37.9+3.7?
9: 93.1+2.4) vs C: 87.6+3.2; 21: 80.1+3.4 vs 90.9+0.6;
40: 81.1+2.5 vs 68.7+2.3. W3/25: (5: 32.4+6.5* 9: 61.2+
4.1) vs 65.9+3.3; 21: 59.4+5.7 vs 82.4+1.7; 40: 50.8+5.7
vs 63.9+2.6. MRC 0X8: (5: 54.5+4.9, 9: 65.5+2.9) vs 69.2
3^6; 21: 69.7+2.9 vs 77.6+0.2; 40: 65.9+5.0 vs 65.0+1.6
(X+ES, *P/ 0.01). Estos datos indican que los porcentaj
de células T de Ias distintas subpoblaciones han alcanza
do el valor de los controles de igual edad; aún cuando 1
fase de regresión gradual dei timo está retrasada.
7
Se hicieron dos fusiones somáticas con linfocitos esplenicos provenientes de ratones inmunizados in
vivo^
con calicreína urinaria humana. Los animales, prévio a
la fusion, recibieron la inyección de refuerza por via
intravenosa. Estas fusiones somáticas dieron origen al
hibridoma HUK VD6 que secreta un anticuerpo monoclonal
específico de calicreína urinaria humana por el ensayo
ELISA (enzima inmunoensayo en fase sólida) usado en la
selección de hibrídomas. Además, se realizo una fusion somática de linfocitos esplénicos provenientes de
un ratón inmunizado in vivo que recibió la dosis de
refuerzo in vitro.
Esta fusion generó dos hibrldomas
-HUK 1E11 de la clase IgG, y HUK 2B5 de la clase IgHprDductores de anticuerpos monoclonales dirigidos contra calicreína urinaria humana.
La caracterización inmunoquímica de los anticuerpos
monoclonales obtenidos, indico que estos no se unen a
la enzima en soluciôn bajo Ias condiciones en que fueron ensayados.
El anticuerpo monoclonal HUK 1E11 puede ser empleado
en el estúdio, por western
blottinq,
de calicrelnas
tisulares provenientes de distintos órganos humanos y
de rata, y en el estúdio de los fragmentos de degradación proteolitica fisiológica de la enzima.
Proyecto DIUC 303/81.
E S T Ú D I O D E L E F E C T O H I P O T E N S O R EN P E R R O S A L A D M I N I S T R A R
D I F E R E N T E S F R A C C I O N E S DE S o l a n u m c r i s p u m R . ( S t u d y of
h y p o t e n s o r e f f e c t u p o n d o g s t h r o u g h t h e a p l i c a t i o n of
d i f f e r e n t p a r t s of S o l a n u m c r i s p u m R . ) . S o b r e v i a , L . ,
Alarcón,J. Departamento Ciências Básicas, Instituto
P r o f e s i o n a l de C h i l i a n . ( P a t r o c i n i o : S . R e c a b a r r e n ) .
E x i s t e u n a g r a n c a n t i d a d de i n f o r m a c i ó n s o b r e el
c o n t e n i d o de s u s t a n c i a s q u í m i c a s p r e s e n t e s en p l a n t a s ,
a d e m ã s s o b r e el e f e c t o b i o l ó g i c o q u e e s t a s e j e r c e n al
ser a p l i c a d a s en a n i m a l e s , c o m o t a m b i é n e n ó r g a n o s y
tejidos aislados.
No se c o n o c e c l a r a m e n t e la r e l a c i ô n q u e e x i s t e e n t r e s u s t a n c i a s e x t r a i d a s de p l a n t a s de n u e s t r o m e d i o
y e l e f e c t o q u e p r o d u c e n al ser a p l i c a d a s a u n a n i m a l
de experimentación.
Se r e a l i z o el p r e s e n t e t r a b a j o c o n el o b j e t o de
d e t e r m i n a r e n q u e m e d i d a la p r e s i ó n a r t e r i a l de un p e rro se ve a f e c t a d a al a d m i n i s t r a r f r a c c i o n e s de u n
extracto de Solanum crispum R.(natre)por via endoven o s a . P a r a l e l a m e n t e se r e g i s t r a r o n p a r â m e t r o s c o m o
frecuencia cardíaca,frecuencia respiratória y diur e s i s del a n i m a l . F r a c c i o n e s d e r i v a d a s d e i e x t r a c t o
m a d r e p r o d u c e n u n e f e c t o h i p o t e n s o r y u n a u m e n t o de
la f r e c u e n c i a c a r d í a c a y r e s p i r a t ó r i a ( p < 0 . 0 1 ) . N o se
o b s e r v a r o n a l t e r a c i o n e s en la d i u r e s i s d e l a n i m a l .
L o s e n s a y o s a n a l í t i c o s a p l i c a d o s a Ias f r a c c i o n e s
f i n a l e s i n d i c a n p r e s e n c i a de a m i n a s y c o m p u e s t o s f l a v ó n i c o s . C u a n d o se a d m i n i s t r a r o n f r a c c i o n e s q u e c o n t i e
n e n C-27 a l c a l ó i d e s n o se o b s e r v a r o n c â m b i o s de pre-~~
siõn.
C o n s i d e r a m o s q u e e s i n t e r e s a n t e p r o f u n d i z a r en el
c o n o c i m i e n t o de m e t a b o l i t o s s e c u n d á r i o s e x i s t e n t e s en
v e g e t a l e s de n u e s t r o m e d i o con el o b j e t o de o b t e n e r
m a y o r i n f o r m a c i ó n d e su e f e c t o a l ser a p l i c a d o s en
modelos experimentales.
Res.Ex. N° 434/85.
CUANTIFICACIÓN E INTERACCIÓN D E LA FERREDOXIN A - N A D P * R E D U C T A S A C O N L A S M E M B R A N A S TILACOIDES EN
L A C I A N O B A C T E R I A Anabaena Sp. 7119.
(Quantification and interaction of ferredoxin-NADP
reductase to the thylakoid membranes in the cyanobacterium Anabaena Sp. strain 7119). Sonctni, F.C., Serrano.A.
y Vallejos, R.H.
Centro de Estúdios FotosintÊticos y Bioquímicos (CONICET, F.M. Lillo, Universidad Nacional de Rosário) Suipacha 531, Rosário, Argentina.
La ferredoxina-NADP* reductasa (EC 1.18.1.2) es la
enzima terminal del transporte de electrones fotosintétices
en plantas superiores, algas verdes y cianobacterias.
Se ha estudiado Ia interacción de esta flavoproteína
con la membrana tilacoide en la cianobacteria Anabaena
sp. 7119. Mediante ruptura mecânica (sonicación) en presencia de cationes divalentes se observo que solo un 2 0 %
dei total de la proteína, determinada por técnicas inmunoelectroforéticas o usando el ensayo de citocromo c reductasa. permanece unida a membrana. El empleo de polímeros no iónicos {polietilenglicol y polivinilpirrolidona)
en el medio de ruptura, incremento el porcentaje de la
enzima unida a membrana hasta un 8 0 % dei total, obteniéndose valores de 8-10 n mol es de reductasa por umol
de clorofila. EI incremento de Ia cantidad de enzima unida a membrana en presencia de polímeros no iónicos puede ser explicado por la reducciõn de Ia actividad dei agua
producida por estos polímeros.
Estos resultados indicarían que la interacción de la
proteína con la membrana tilacoide en cianobacterias seria diferente de Ia ya Informada para plantas superiores,
en donde la interacción con Ia membrana es dependiente
de la presencia de cationes divalentes.
R256
MODIFICACIÓN DE LOS OLIGOSACARIDOS DE (5-GALACTOSIDASA
EPIDIDIMAFIA. EFECTO EN SU AFINIDAD POR MEMBRANAS.
(Modifications of the oligosaccharide of epididymal t^>galactosidase. Effects on its affinity for membranes).
Sosa, H.A., Mayorga, L.S. y Bertini, F.
IHEM-CONICET, U.N.Cuyo. Mendoza. Argentina.
Las enzimas lisosomales secretadas conservan los residuos manosa 6-fosfato (M6P) que son reconocidos por
receptores específicos presentes en membranas subcelula
res. Previamente hemos observado que ^-galactosidasa se
cretada por el epitelio epididimario de rata se une con
alta afinidad y en forma saturable a membranas subcelulares. Sin embargo, M6P no fue un buen inhibidor de la
union, la que en cambio fue desplazada por derivados de
fructosa 6-fosfato.
Con el objeto de determinar que residuos son responaables de esta afinidad, la enzima dei fluido fue parcialmente purificada por DEAE celulosa y tratada con
fosfatasa alcalina (1 U/ml), con metaperiodato de sodio
(5 mM) o con neuraminidase (0.38 U/ml). Luego de los
tratamientos la enzima fue enfrentada con membranas obteni das de una fracción poBt-nuclear de un homogeneizado de hígado de rata a 49 000 g x 15 min. y posteriormente lavada con KC1 0.2 M. Luego de 1 h de incubación
la actividad enzimática unida a membranas fue medida en
el sedimento lavado por dos veces. El tratamiento con
foafataaa alcalina produjo un descenso dal 8 0 % de la afinidad. La periodación inhibió la actividad enzimática por lo que se hizo un tratamiento suave que redujo
la afinidad en un 75%. Por último el tratamiento con
neuraminidasa produjo un aumento de la afinidad al doble. Los resultados indican que la unión es mediada
por un residuo fosfoazúcar distinto de M6P.
C A R A C T E R I Z A C I O N PARCIAL.
DF
FflSFORILAC-JON
DE
PROTEÍNAS
EN
PEROXISOHAS,
(Partial
c h a r a c t e r i z e t i o n of p r o t e i n p h o s p h o r w l a t i o n in
peroxisomes).
Soto» U.» Necocheai C» » Skorin>
C*» Ni covani » S.» a Leiáhton» F*
Departamento
de
Biolosiia
Celular»
U.
C a t ó l i c a de C h i l e .
C a s i l l a 114-D» Santiaáo» C h i l e .
Hemos
detectado
fosforilación
de
proteínas
peromsoinales
lo
aue
ocurre
p r i n c i p a l m e n t e en una p r o t e í n a de m e m b rana
de
63
kDa
<Eur.J.Cell Biol*
41(814)Í2A»
i986>.
La p r o t e i n a de m e m b r a n a < P x ó 3 ) se d e t e c t a
por
electroforesis
en
gel
de
poliacrilamida
«
a u t o r a d i o á r a f 1 a de p e r o x i s o m e s o b t e n i d o s de un
fraccionamiento
subcelular
de h e p a t o c i t o s de
rata»
incubados
en
presencia
de
32P
inorãanico»
Para
evaluar
pste
h a l l a z â o se
constato
aue
la
marca
incorporada
es
r e s i s t e n t e a TCA en c a l i e n t e v a la e x t r a c c i ó n
con s o l v e n t e s o r g â n i c o s »
w
es
removida
por
proteolysis
suave
de
oráanelos
enteros
o
solubilizados»
confi rmando
la
naturaleza
pol i pep tidica de Px A 3 .
Por o t r a parte» tanto
en p e r o x i s o m e s n o r m a l e s c o m o
proliferados
se
detecta
incorporación
de
marca
a
Px A 3 en
similar proporción.
En
presencia
de
40
uM
FCCP
la
marca
en
Px
63
es
minima*
p r e s u m i b l e m e n t e por Ia c a l d a d e t e c t a d a
en
la
concentración
de
ATP
celular»
en
estas
c o n d i c i o n e s la i n h i b i c i ó n de la
oxidaeion
de
ácidos
árasos
es
m o d e r a d a en m i t o c o n d r i a s «
m a r c a d a en p e r o x i s o m e s .
Estas
ohservaciones
contribuaen
a
la c a r a c t e r i z a c i o n m o l e c u l a r w
funcional
de
este
nuevo
constituyente
USO DEL EFECTO DE CARBAJtlLACION SOBRE LA INHIBICIÓN DE
LA FRUCTOSA-1,6-BISFOSFATASA POR AMP PARA APOYAR LA
EXISTÊNCIA DE UN SITIO ALOSTÉRICO PARA FRUCTOSA-2,6-BISFOSFATO ( Use of the carbamoylation effect on the
fructose 1,6-bisphosphatase AMP inhibition to probe the
existence of a fructose 2,6-bisphosphate allosteric site.
Soto, M., Ludwig, H. y Hubert, E. Instituto de Bioquímica, Universidad Austral de Chile, Valdivia, Chile.
Al analizar la inhibición alostérica por AMP de la
fructosa-1,6-bisfosfatasa (FBPasa) de rifión de cerdo,
encontramos que su carbamilación, en presencia de concentraciones altas de fructosa-1,6-bisfosfato (25 m M ) ,
forma un derivado activo que ha perdido sólo la interacción cooperativa entre los sitios de union de AMP
(Slebe et al. J. Prot. Chem. 2, 437, 1983). En vista que
hemos sugerido la existência de un segundo sitio
(inhibitorio) para el sustrato, que corresponderia mas
bien a un sitio de union para el inhibidor fructosa-2,6bisfosfato (Fru-2,6-P ) , en este trabajo estudiamos el
efecto de Fru-2,6-P
sobre la carbamilación selectiva
del sitio de union de AMP.
FBPasa (14 pH) se trato con N a N C 0 (100 mM) a 37*C,
pH 7,5, en presencia de Fru-2,6-P (120 ,uM). Se estudiaron la estequiometría de la reacción y algunas propiedades cinéticas de la enzima modificada. La enzima carbamilada mostro poseer todas las características de la
FBPasa nativa excepto la interacción cooperativa entre
los sitios de union de AMP. No se observo protecciÓn con
niveles no inhibitorios de sustrato. La perdida de la
respuesta cooperativa hacia AMP se correlaciono con la
modificación de un residuo lisina por subunidad.
Nuestros resultados apoyan la idea que la inhibición
por exceso de sustrato se debe a la union del Fru-1,6-P
a un sitio alostérico para Fru-2,6-P y confirman que
este sitio se encuentra en íntima relación con el sitio
de unión de AMP. Además confirman que la lisina implicada en la respuesta cooperativa hacia el nucleótido, no
se encuentra en el sitio de union del AMP en la enzima.
(Financiado por: DID-UACH, S-85-26; F0NDECYT, 1199).
2
2
U
2
2
GLUC0C0RTIC0IDES INHIBEN LA POTENCIACIÓN DEL TWITCH
INDUCIDA POR DENERVACIÓN (Twitch potentiation after denervation is prevented by glucocorticoid treatment).
Soza,M.1» Karpati, G. , Carpenter, S . , Rouleau,G. - U.
Católica de Chile, Santiago.
Montreal Neurological
Institute, Montreal. (Patrocinio: N.C. Inestrosa).
2
2
Se estudiaron las características del twitch y del tétano en cuatro grupos de músculos s o l e o
de rata en
un sistema in vitro. (a) Normal; (b) 13 dias postdenervación; (c) 13 dias de administraciòn de dexametasona; (d) Combinación de (b) y (c).
El tratamiento con dexametasona aumento la atrofia de
los músculos denervados. La tension del twitch por
gramo de músculo en el grupo denervado, fue muy superior a la dei grupo control. Esta potenciación dei
twitch fue inhibida por el tratamiento con dexametasona.
La amplitud dei tétano a 20 Hz fue significativamente
menor en músculos denervados comparados con los controles. La administraciòn de dexametasona a este grupo indujo una aún mayor redueción de la tension tetãnica.
La potenciación del twitch post-denervación se debe
probablemente a una prolongación dei estado activo. Así
lo sugiere la prolongación de la duración del twitch.
En los músculos denervados y tratados con dexametasona,
la disminución de la tension del twitch se debe probablemente a la perdida de miosina (filamentos gruesos)
observados en electroforesis y en microscopía electrónica (Muscle and Nerve 9 N° 5 S , 3 6 . 6 , 1 9 8 6 ) .
p e r o x i somai»
Financiado por Proyecto DIUC.
( F i n a n c i a d o por p r o w e c t o D I U C 7 9 / 8 6 y
1181/85)
F0NDECYT
2
d
2
R 257
M O D I F I C A C I O N D E L A F R U C T O S A - 1 , 6 T B I S F O F F A T A S A DF.
CLOROPLASTOS P O R ANIONES CAOTROPICOS. (Chloroplast fructose-1, 6-bisphosphatase
modification
by c h a o t r o p i c a n i o n s ) . S t e i n , M . y V'olosiuk, R.
Fundaciõn Campomar.
CANALES UNICOS DE CALCIO EN MEMBRANAS NATIVAS
DE HETICULO SARCOPLASMATICO DE MUSCULO ESQUELÉTICO. (Single calcium channels in native
sarcoplasmic reticulum membranes from skeletal
muscle). S uáre z, B. Centro de Estúdios Científi
cos de Santiago y Departamento de Fisiologia y
La a c t i v i d a d e s p e c í f i c a d e la f r u c t o s a - 1 , 6
Biofísica, Facultad de Medicina, Universidad de
b i s f o s f a t a s a (FBPasa) d e l o s c l o r o p l a s t o s d e e s
Chile (Patrocinio: E. Jaimovichi.
pinaca es modulada por un azúcar bisfosfato y
Las propiedades eléctricas de las membranas
u n m e t a l b i v a l e n t e . E x p e r i m e n t o s in v i t r o h a n
nativas del retículo sarcoplasmático (RS) aisla
m o s t r a d o q u e la t i o r r e d o x i n a o l o s s o l v e n t e s o r
das de músculo esquelético de conejo se investT
g S n i c o s e s t i m u l a n d i c h o e f e c t o m o d i f i c a n d o el
garon utilizando la técnica patch-clamp. Las
Ag ^ p a r a la f r u c t o s a 1 , 6 - b i s f o s f a t g ( F B P ) , e n
membranas contienen un canal catiónico que se
t a n t o n o a l t e r a n e l A g - p a r a e l Ca . La c o r r e
activa en forma espontânea y posee una baja con
l a c i õ n e n t r e e l i n c r e m e n t o d e la a c t i v i d a d e s p e
ductancia ( 5 pS en 200 mM CaCli , soluciones sj.
cífica y el caracter hidrofóbico del solvente
métricas) selectiva para Ca" y B a " . El aumento
o r g â n i c o c o n d u j o a la u t i l i z a c i ô n d e a n i o n e s
en la conductancia con [Ca"] , entre 5 0 y 200mM
c a o t r õ p i c o s p a r a m o d i f i c a r la e x p o s i c i õ n a l sol^
CaCli (simétrico), se pudo describir mediante
vente d e los grupos no polares.
una curva hiperbólica regular (K«,« - 8 3 mM Ymax=
L o s a n i o n e s c a o t r 6 p i c o s e s t i m u l a n la a c t i 7 . 9 p S ) . La conductancia dei canal único obteni
v i d a d e s p e c í f i c a d e la F B P a s a ^ e n p r e s e n c i a d e
da por extrapolación a niveles de Ca" fisiológi^
d i t i o t r e i t o l ( D T T ) , F B P , y Ca . E l o r d e n a m i e n t o
co fue de 0 - 5 pS. El canal se activa en estalli_
d e e s t o s a n i o n e s d e a c u e r d o a la e f e c t i v i d a d p a
dos o "bursts" seguidos por largos períodos de
ra la a c t i v a c i õ n r e s p o n d e a la s e r i e l i o t r õ p i c a
silencio de hasta 1 minuto. Durante un estallide Hofmeister ( S C N , C 1 0 ~ , l ~ , B r " , R O ^ ) . Dicha
do el canal oscila muy rapidamente con constanestimulaciõn resulta de una disminuciõn en el
tes de tiempo en el rango dei milisegundo, la
A. ^ P f Ç
/
tanto no cambia el A .
para
duración promedio dei estallido depende del vol
e l * C a . P o r o t r a p a r t e , e n la f a s e c a t a l í t i c a
taje. La aplicación de cafeína (1.6 mM) aumenta
son inhibidores q u e d i s m i n u y e n l a Vmax pero no
significativamente la duración promedio dei e s cambian el
para FBP o Mg . Experimentos e n
tallido. Por el contrario, 5 0 Ü M de dantroleno
filtración p o r gel muestran q u e no existen c a m disminuye significativamente la frecuencia de
b i o s e n el p e s o m o l e c u l a r d e la e n z i m a . En c a m estallidos, mientras que la nitrendipina (10 uM)
b i o e s p e c t r o s d i f e r e n c i a l e s e n U V y la e x p o s i no produce efecto alguno. Laa propiedades funciõn d e grupos tioles indican u n cambio conforcionales y farmacológicas de este canal indican
m a c i o n a l d e la F B P a s a .
que puede tener una participación importante en
Los resultados presentes y l o s estúdios
la liberacion de Ca" desde el RS durante el pro
p r é v i o s s u g i e r e n q u e la a c t i v a c i õ n d e la F B P a s a
ceso de acoplamiento excitación-contracción.
de los cloroplastos es el resultado d e un cambio
e n l a s i n t e r a c c i o n e s hidrofflbicas i n t r a m o l e c u l a r e s d e la e n z i m a .
+
-
a
F
B
P
e
n
+
5
E S T Ú D I O E S T R U C T U R A L DE L A I N T E R A C C I Ó N DE CLORPROMAZINA
CON B I C A P A S F O S F O L I P I D I C A S . ( S t r u c t u r a l S t u d i e s o n t h e
Interaction o f Chlorpromazine with Phospholipid
Bilay e r s ) . Suwalsky, M . , Gimenez, L . y Saenger, V . Depart^
mento de Q u í m i c a , U n i v e r s i d a d d e C o n c e p c i ó n .
En n u e s t r o l a b o r a t ó r i o h e m o s e s t u d i a d o i n t e n s i v a m e n _
t e l a s e s t r u c t u r a s de b i c a p a s f o s f o l i p i d i c a s p o r d i f r a £
c i ó n d e r a y o s X , e n e s p e c i a l l a s d e L - a - d i m i r i s t o i l fos_
f a t i d i l c o l i n a (DMFC) y L - a - d i m i r i s t o i l f o s f a t i d i l e t a nolamina (DMFE), l o sque t e n d e r í a n a u b i c a r s e r e s p e c t i vamente e n e l l a d o e x t e r n o e i n t e r n o de l a s membranas
de e r i t r o e i t o s h u m a n o s . A u n q u e ambas e s t r u c t u r a s p o s e e n c a r a c t e r í s t i c a s c o m u n e s , DMFE p r e s e n t a u n e m p a q u e t a m i e n t o m o l e c u l a r mas c o m p a c t o q u e D M F C ,
l o que hace
q u e e s t a ú l t i m a s e a mas s e n s i b l e a l a a c c i ó n d e i a g u a .
La c l o r p r o m a z i n a ( C P Z ) e s un n e u r o l é p t i c o
mente usado d e r i v a d o d e l a F e n o t i a z i n a y que
I a s f u n c i o n e s de membranas c e l u l a r e s .
amplia—
afectaría
M e z c l a s d e C P Z . H C 1 c o n DMFC y DMFE e n d i f e r e n t e s
proporciones molares fueron preparadas y estudiadas p o r
d i f r a c c i ó n derayos X cond i s t i n t o s contenidos de agua.
Los r e s u l t a d o s obtenidos i n d i c a n l o s i g u i e n t e :
REC0NSTITUTI0N OF PURIFIED CALCIUM CHANNELS INTO PLANAR
LIPID BI LAYERS. Ta Ivenheima* Jane A., Worley, J.F. and
Nelson, M.T. Dept. of Pharmacology, University of Miami
and Dept. of Pharmacology, University of Vermont, U.S.A.
(Patrocinio: E. Ja/movich).
Dihydropyridine (DHP) receptors were solubilized and
purified from rabbit skeletal muscle transverse tubule
(TT) membranes according to Curtis 6 Catteral1(Biochem.
23_:2113,1984), to an estimated specific 3H-PN200-110
binding activity of 2500 pmol/mg protein. The purified
DHP receptor contains three polypeptides of molecular
weight of 33 kDa, 51 kDa and 140 kDa, corresponding to
the three polypeptides identified by Curtis and CatteralI
(32, 50 and 135 kDa). The purified receptor was reconstituted into phospholipid vesicles, then incorporated into
planar lipid bilayers by adding the vesicles to one side
(designated c i s) of a preformed bilayer. Using asymmetric
ionic conditions (80 mM BaClj cis, 50 mM NaCl trans),
two levels of current fluctuation were recorded. The
smaller event had a conductance of 8 pS, the larger event
had a conductance of 15-20 pS. Both channel types were
selective for barium over sodium or chloride, and were
observed in the presence or absence of the agonist Bay K
8644. In the presence of 6 uM Bay K 8644, nifedipine
significantly reduced the probability of the 15 pS purified C a
channel being open. The 15 pS C a
channel
appears to be very similar to the 20 pS DHP-sensitive Ca
channel identified by Affolter & Coronado in rat TT membranes (Biophys. J. 48:341,1985). The two types of C a
channels observed in the purified receptor preparation
were also observed when intact TT membranes were incorporated into planar lipid bilayers, and may be related to
the two components of skeletal muscle calcium current
described by Beam et al (Nature, 320:168,1986) and
Cognard et al (PNAS, 83: 517, 198S77
A
2 +
a)
b)
e n a u s ê n c i a d e agua l a CPZ n o l o g r a a l t e r a r I a s e s t r u c t u r a s n i l o s empaquetamientos moleculares de
ninguno de l o s f o s f o l í p i d o s estudiados.
E n p r e s e n c i a d e agua l a CPZ tampoco a f e c t a a l a
DMFE.
S i n e m b a r g o , l a a d i c i ó n d e u n 20% d e a g u a a l
s i s t e m a D M F C : C P Z 1:1 m o d i f i c a l a e s t r u c t u r a m o l e c u l a r d e i f o s f o l í p i d o con posible i n t e r d i g i t a c i ó n de
sus cadenas h i d r o c a r b o n a d a s .
En e x c e s o d e agua no
se o b s f : r v a n i n g u n a r e f l e c c i õ n l o q u e p u e d e
deberse
a profundos câmbios e s t r u c t u r a l e s d e i f o s f o l í p i d o .
Esta i n v e s t i g a c i ó n conto cone l apoyo de l a D i r e c —
ción deInvestigación (Proyecto 20.13.27).
2 +
2 +
(Supported by grants of the Muscular Dystrophys Association (J.A.T.), the American Heart Association (M.T.N.)
and an American Heart Association fellowship (J.F.W.).
R 258
PRODUCCIÓN DE COMPONENTES DE M A T R I Z E X T R A C E L U L A R POR F I B R O B L A S T S DE MEDULA OSEA H U M A N A . ( P r o d u c t i o n
of extrac e l l u l a r m a t r i x components b y bone m a r r o w s t r o m a l c e l l s )
T e t a s , M . .Fernandez ,M.y Barahona.M.C. Dpto. C s . B á s i c a s , D i v .
O r i e n t e , F a c . M e d i c i n a y U n i d . B i o l . C e l u l a r . I N T A . U. de C h i l e
L a p r o l i f e r a c i õ n y d l f e r e n c i a c i ó n de c é l u l a s t r o n c a l e s
h e m a t o p o y é t i c a s e s r e g u l a d a p o r un m i c r o a m b i e n t e c o n f o r mado p o r v á r i o s f e n o t i p o s de e s t r o m a , f a c t o r e s de c r e c i m i e n t o y p o r m a t r i z e x t r a c e l u l a r ( M E ) . En c u l t i v o , e l ini_
d o de l a h e m a t o p o y e s i s c o i n c i d e
c o n l a g e n e s i s de l a
ME. A f i n de c a r a c t e r i z a r y c o n o c e r s u r o l , s e e s t ú d i o
l a s í n t e s i s de c o l á g e n o , f i b r o n e c t i n a y g l i c o s i l a m i n o g l j ^
c a n o s ( G A G s ) e n c u l t i v o s de c é l u l a s de e s t r o m a de m e d u l a
ósea humana.
En c u l t i v o s de f i b r o b l a s t o s ( F M O H , 80% d e i e s t r o m a h e m a t o p o y é t i c o ) s e d e t e r m i n o : p r o d u c c i ó n de c o l á g e n o p o r i n
c o r p o r a c i ó n de p r o l i n a t r i t i a d a a m a t e r i a l c o l a g e n a s a - s e n _
s i b l e y c a r a c t e r i z a c i o n de t i p o g e n é t i c o p o r c r o m a t o g r a f í a e n D E A E - C e l u l o s a y S D S - P A G E ; p r o d u c c i ó n de GAGs p o r
i n c o r p o r a c i ó n de g l u c o s a m i n a m a r c a d a a m a t e r i a l p r e c i p i t a b l e ( C T A , 1 % ) y c a r a c t e r i z a c i o n de t i p o s p o r t r a t a m i e n t o c o n e n z i m a s s e l e c t a s ; p r o d u c c i ó n de f r i b r o n e c t i n a
y
p r o t e í n a s g l i c o s i l a d a s p o r i n c o r p o r a c i ó n de g l u c o s a m i n a
tritiada y cuantificaciõn y caracterizacion por ELISA,
S e p h a r o s a - G e l a t i n a y SDS-PAGE.
L o s FMOH p r o d u c e n y l i b e r a n a l m e d i o de i n c u b a c i ó n :
a ) g l i c o p r o t e i n a s , e n c o n t r á n d o s e f i b r o n e c t i n a y un c o m ponente s i m i l a r a ' s p r e a d i n g f a c t o r (MW.60.000), cuya
p r o d u c c i ó n e s d e p e n d i e n t e de g l u c o c o r t i c o i d e s .
b) c o l á g e n o I y I I I , e n r e l a c i ó n 1 : 1 , s i e n d o l a p r o d u c c i ó n de c o l á g e n o t o t a l , m a y o r e n e s t a d o s de p r o l i f e r a c i õ n q u e de r e p o s o , c o n d i c i õ n e n l a c u a l l a p r o d u c c i ó n e s
d e p e n d i e n t e de g l u c o c o r t i c o i d e s .
c ) GAGs d e i t i p o c o n d r o i t i n s u l f a t o , á c . h i a l u r õ n i c o
y
heparan s u l f a t o .
L o s r e s u l t a d o s s e h a l a n q u e e n m e d u l a ó s e a humana h a y
p r o d u c c i ó n de c o m p o n e n t e s de M E , c u y a o r g a n i z a c i ô n c o n t r i b u i r i a a l e s t a b l e c i m i e n t o de un m i c r o a m b i e n t e h e m a t o p o y é t i c o . ( F i n a n c i a D I B . B-2173
y FONDECYT 1 1 2 9 - 8 5 ) .
EFECTO DE LA REVERSION DE UN SHOCK DE FRIO EN LAS ACTIVIDADES DE
LAS ENZIMAS AFECTADAS. ( R e v e r s a l of a cold shock: Its effect on enzymes
Involved). Toonettl, J . . Calderón, P. y P o n t l s . H.O. Instituto de
Investigaciones Biológicas, Facultad de Ciências Exactas y Naturales,
Universidad Nacional de Mar del Plata y Centro de Investigaciones
Biológicas ( F I B A ) , Casllla de C o r r e o 1 3 4 8 , 7 6 0 0 Mar del Plata.
Exlsten numerosos trabajos que muestran evidencias dlrectas e
Indtrectas vinculando el metabolismo de fructanos con la respuesta de las
plantas a un shock de f r i o . También se he demostrado que la actividad de la
enzima SST que inicio la síntesis de fructanos, es consecuencia de la
acumulación de sacarosa, y que en plantas de t r i g o la actividad de las
enzimas sacarosa slntssa aumenta dentro de la media hora de producldo e l
stress.
SI la acumulación de fructanos, y la modificación de la actividad da las
enzimas Involucradas es consecuencia del shock f r i o , podría a s u m l r s e que
cuando el s t r e s s OBsaparezca, las plantas van a responder volvlendo a la
situacion que e x i s t i a antes de producirse el shock. P a r a determinar s i
esta es la situacion, se sometió a plantas de t r i g o de 1 2 - 1 5 dias de edad
crecidas a 2 4 » c, a u n shock f r l o , pesandoles a una camara a 4 » C. Se
dejaron a esa temperatura 15 dias y luego se las v o l v i ó a la temperatura
más alta. Se determinarem las actividades ds sacarosa slntasa, sacarosa
fosfato slntasa, UDPasa, fruetan htdrolasa, i n v e r s t a s a , sacarosa sacarosa
fructosll transferasa, asi como los niveles de sacarosa, fructanos y
proteínas. Las mlsmas fueron medidas tanto antes del shock de f r i o ,
durante el período a 4° C y duranto Ias p r i m e r a s horas dei cambio de
temperatura. Se encontro que Ias enzimas que se habian modificado
v o l v l a n a n í v e l de los controles mantenldos en f r i o o ambiente, no
debiéndose la variacion de actividad a una modificación de Ias propiedades
de Ias proteínas por el cambio de t e m p e r a t u r a , mientras que los niveles de
sacarosa y fructanos dBsclenden.
Apoyado por CONICET y C I C .
M U U E H O A DE LA « M M S I W d C N DE N-AETIL CLSIEINA ((fee) SOHE LA
(BOBEIS PAPILAR (NP) FINAL POTUODA POR EfOCETUJMDtó (BEA).
(Effect of N-Acetyl-cystein cn the experimental Qromethylamne indu ced renal papillary necrosis).
Thielemann,!.., Oerta,M.C, Oberhauser.E., Oontadcr.A., Escufero,J.,
Eac. de Medicina Depto. Cs-Med. Biol, y Básicas, Div.Cs.Med.Sur.
{íàtrccinio : M. Vega)
La inyección i.v. única de BEA en ratas produce, en forma rerjxduci ble, selectiva NP renal cuyo mecanismo patogênico no ha síòd ailucidado. El gluratión reduzido (GSH) tisular participa en uno de les mas
importantes mecanismos protecteres celulares frente a efectos tóxicos
de alganos xenahi&ticos. Hemos demostrado que la BEA produce disminj ción de GSH renal. La adninistración de agentes que iirranenten lets rã
veles de GSH renal (Nac), deberian disminuir la necrosis remi inducida por BEA. tetas hembras Dornjcu de - 200g recihieron Nac o su solven
te prévio a la acministración de BEA o suero fisiológico. Se rõcieron
grupos experimentales: DCbntroles 21BEA solo 250 mg/Kg (iv) 3)Nac
1.5 nmol/Kg (dosis A) subcutáneo (sc) 4)Nac 6 rmol/Kg (dosis B) ip y
sc 5)Nac Idcsis A) administrada 2 heras antes de BEA 6)Nac (dosis B)
admnistrada 10 min antes de BEA. A Ias 72 hrs. pcst-BEA se hieieren
cortes carcnales de ambos rifíones para estúdio histológico con técnicas de Hsmtxmlina-eosim y Masson. Con una pauta de evaluación graduada crdinalnEnte se tipifico el dano de papila ccmpletas (I) y también de tercios capilares (distal,medio y proximal) ( N ) . Las oempara cienes entre los grupos se hicieron empleando el test no peramétrico
de la DBcüana, calculando la prcbabilidad exacta de Fisher. Gcrrocoran
ao experiências antericres la BEA a una dosis de 250 mg/Kg produj° necrosis en un 97% de ruestras animales. Los 3 semnentos de la papila re
nal fueron afectados. EL tercio capilar distai presentó mayor grado de
necrosis comparado ccn el tercio médio, y este a su vez, mayor necrosis respecto al tercio proximal de Ias papila. En el grupo 5 no huto
diferencia significativa ccn respecto al grupo 2. Eh el grupo 6 se
aprecio una notable disminución ccn respecto al grupo 2 en ambos estúdios. (I y H I . La admmstraciõn de Nac a la dosis de 6 mrol/Kg junto
con BEA logra amincrar en gran cedida y en forma significativa, la NP
provocada por el xencoiòtico. Eh este modelo, la adniniâtraciòn de
agentes que inuuiuilan los niveles de GSH renal, protegeróan la papila de la NP inducida per BEA.
A I S L A M I E N T O DE UN T R A N S P O S O N Q U E C O D I F I C A M U L T I R R E S I S T E N C I A A A N T I B I Ó T I C O S EN UNA C E P A PAT Ó G E N A DE K l e b s i e l l a p n e u m o n i a e . ( M u l t i r e s i s tance t r a n s p o s o n isolated from a p a t h o g e n i c
s t r a i n of K . p n e u m o n i a e ) . T o l m a s k y , M . E Í » ^ y
Crosa.J.H. .1 Oregon Health Sci.Univ.Portland,
Oregon,USA y 2 Inst.Inv.Bioq."F.Campomar",
Bs.As., Argentina.
1
De u n a cepa p a t ó g e n a d e K . p n e u m o n i a e se a i s 15 el p l a s m i d o p J H C M W l (11 k b p ) el c u a l p o s e i a
determinantes genéticos para resistência a a m i
kacina(Ak), kanamicina(Km), tobramicina(Tm) y
a m p i c i 1 i n a ( A p ) . Dichos genes fueron clonados y
c a r a c t e r i z a d o s . El gen que c o d i f i c a b a r e s i s t e n
cia a Ap r e s u l t ó ser s i m i l a r al de ^ - l a c t a m a s a
de T n 3 . La r e s i s t ê n c i a a A k , Km y Tm e s t a b a
c o d i f i c a d a en u n f r a g m e n t o d e no m a s de 1.5
kbp y p o s i b l e m e n t e un solo gen sea r e s p o n s a b l e
por la r e s i s t ê n c i a a los tres a n t i b i ó t i c o s .
Para c o m p r o b a r si los g e n e s de r e s i s t ê n c i a a
antibióticos formaban parte de una secuencia
de t r a n s p o s i c i o n , u n a cepa de E . c o l i recA que
c o n t e n í a el p l a s m i d o p V K 1 0 2 ( T e t r a c i c l i n a
( T c ) , K m ) que s e r i a u s a d o como r e c i p i e n t e
d e l t r a n s p o s o n y p J H C M W l fue c o n j u g a d a c o n E .
coli c o n t e n i e n d o p R K 2 0 1 3 (como " h e l p e r " de la
c o n j u g a c i õ n ) y u n a cepa r e c i p i e n t e de E . c o l i
Nal
p o l A . Y a que p J H C M W l no r e p l i c a en m u t a n tes po 1A, s e l e c c i ó n con ã c i d o nal id íxico , Ap , Ak,
y Tc solo p e r m i t e el c r e c i m i e n t o d e E . c o l i r e c i p i e n t e con p V K 1 0 2 , si a d q u i r i a g e n e s de r e s i s t ê n c i a a Ap y A k . Los p l ã s m i d o s p r e s e n t e s
en Ias c o l ô n i a s a i s l a d a s e r a n P V K 1 0 2 con una
i n s e r c i ó n d e 7,55 kbp en d i v e r s a s p o s i c i o n e s .
E s t o s r e s u l t a d o s i n d i c a r o n que p J H C M W l p o s e e
u n a s e c u e n c i a de t r a n s p o s i c i õ n de 7,55 kbp que
tiene los g e n e s de r e s i s t ê n c i a a A p , A k , Km y
Tm.
r
r
r
r
R259
ENZIMAS RAMIPICANTES (Branching enzymes). Tolroasky,
D.S. y_ Krisman, C R .
Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Fundación
Carrpomar" y Facultad de Ciências Exactas y Naturales,
Antonio Machado 151, (1*105) Buenos Aires, ARGENTINA
Haciendo uso dei nuevo método para medir actividad
ramlficante, estudiamos varias de estas enzimas provenientes de distintos tejidos, ya sean estos animales o vegetales. De cada tejido en estúdio se extrajo
la enzima ramlficante y el pollsacárldo de reserva
que le es propio. Tanto Ias enzimas ramif icantes como
los poUsacaridos fueron purificados parcialmente.
A partir de ias enzimas obtenidas se sintetizo, en
condiciones adecuadas y controladas, un polisacárido
cuyo espectro y grado de ramiflcación coincide con el
dei polisacárido extraído dei mismo tejido- Estas
condiciones
de
Incubación,
parecidas
a
Ias
fisiológicas, son tales que la elongación, es decir
la formación de uniones c<l,4 es lo suficientemente
lenta y que la enzima ramlficante está en exceso. Así
cuando el gluco-oligo3acárido OCl^ âlcanza el largo
apropiado para cada ramlficante, está puede cortar la
unión o( 1,4 y resintetizar una unión glucosídica
oi 1,6.
De esta manera nuestros resultados demuestran que el
grado de ramiflcación de un polisacárido es función
de la actividad ramlficante y no de la relación
elongación: ramiflcación.
DEMOSTRACION DE LA SEGREGACION DE FIBRAS A Y C DEL
NERVIO SINUSAL EN EL NÚCLEO DEL TRACTO SOLITÁRIO.
(A demonstration of the segregation of A a/id C
fibers from the sinus nerve in the Nucleus of the
Tractus Solitarius). Torrealba, F., Calderón, F. y
Claps, A. Facultad de Ciências Biológicas, Universidad Católica de Chile.
El cuerpo carotideo (CC) de mamíferos es inervado
por fibras aferentes de conducción rápida (A, mielínicas) y fibras aferentes lentas (C, amielinicas).
Las fibras mielínicas dai origen en el CC a arboriza
cion.es terminales en nido, que contactan. 20-60 célu
Ias glómicas. Los axones C producen arborizaciones
con escasos terminales y se relaciona.i con 5-10 células glómicas. En el presente trabajo describiremos
la proyecciôn de ambos tipos de axones al núcleo dei
tracto solitário (NTS). En gatos adultos se extirpo
un gânglio petroso (el cual contiene los somas de am
bos tipos de fibras), y después de sobrevidas de 3 a
10 días, se estúdio en el NTS la degeneración walleriana, con la técnica de Fink-Heimer. Las fibras finas tienen un curso temporal de degeneración más pre_
coz, y se distribuyen en el subnúcleo comisural. La
degeneration gruesa estaba en los subnúcleos ventrolateral y dorsolateral y apareció degeneración mixta
en los subnúcleos dorsal e intersticial. Estas obse£
vaciones permiten concluir que Ias fibras C barorreceptoras y quimiorreceptoras del nervio sinusal ocupan diferentes territorios en el NTS que Ias fibras
A. Los hallazgos experimentales sobre la segregasión
de axones finos y gruesos en el NTS son apoyados por
las observaciones de la distribución de mielina, la
cual está ausente en el subnúcleo comisural. Asimisitio, la presencia en este subnúcleo de fibras con
reacción positiva para la fosfatasa ácida resistente
a flúor apoya la hipótesis de que hay segregación en
el NTS de axones A y C. Esta enzima está presente en
fibras C de Ias raíces dorsales y en la substancia
gelatinosa de la medula espinal.
Financiado por proyectos DIUC 95/85 y Fondecyt 1193-
HISTONA Hi EN TRYPANOSOMA CRUZI (Hi histone in Trypanosoma cruzi). Toro, C. y Galanti, N. Departamento
de Biologia Celular y Genética, Facultad de Medicina,
La presencia de histona H-] ha sido cuestionada en
T. cruzi porque no se ha encontrado una banda que comigre con H1 de timo, en geles de poliacrilamida-SDS.
Además, la mayor parte de la cromatina no se condensa
durante la mitosis en este parasito.
A partir de cromatina, se extrajo proteínas en ácido perclórico (PCA) 0.75M, correspondiente en eucariontes superiores a bistonas H-j y a HMG. Estas proteínas se fraccionaron por precipitaciôn diferencial
en acetona. Las fracciones obtenidas se analizaron en
geles de poliacrilamida-Tritôn DFl6-ácido-urea. Por
otra parte, de la cromatina de T. cruzi se extrajo
bistonas totales en H2SO4 0.4N. Las histonas se anali
zaron por inmunodifusiÓn contra antisuero anti H-] de
espermios de erizo de mar. Alternativamente, Ias bistonas se separaron por electroforesis en dos dimensio
nes, se transfirieron a papel de nitrocelulosa y se
incubaron con el mismo antisuero. Las zonas de inmuno
reacción se detectaron por el sistema biotina-estreptovidina.
Por electroforesis en una dimension, el extracto
en PCA 0 . 7 5 M mostro una banda de alta movilidad electroforétioa, probabl emente similar a una H-j descrita
en otros protozoos. La inmunodifusiÓn mostro reacción
cruzada entre Ias histonas totales de T. cruzi y el
antisuero anti-H-f de espermios de erizo de mar. La
técnica de Western mostro reacción positiva con tres
proteínas. Una corresponderia a Hj y se debería a
reacción cruzada con anti-H-j. Las otras dos podrían
corresponder a bistonas H-j. Estos resultados permiten
establecer la presencia de por lo menos una histona
, detectada por diversos métodos, y abren posibilidâdes para estudiar su participación durante la division de este parasito. (Proyectos B - 2 3 6 5 / 8 6 1 3 D.I.B.
PONDECYT y UNDP/WB/WHO TDR ID 8 2 0 5 9 9 ) .
TEMPERATURA, pH Y AGENTES DISOCIANTES
DE
PRL HIPOFISIARIA DE RATA.
N00IFICAN LA
INNUNORREACTIVIDAD
(Teaperature, pH and dissociating agents
aodify iaaunoreactivity of rat hypophyseal PRL). Torres, A.I., Prada,
N.I,
y Aofci, A.
Centro
de
Nicroscopia
Electróníca,
Facultad
de Ciências Médicas,
Universidad Nacional de Círdoba.
Estúdios recientes han demostrado que la prolactina
es
(PRL) políaéYica
alaacenada selectivaaente en gránulos secretorios.
horaonal no es detectado en dosajes
radioinaunoanálisis
del
(RIA).
pH, temperatura
inaunorreaetividad
y
de
de
PRLh
tabla.
por
agentes
disociantes
sobre
la
Tris-CIH
0.05N
pH
7,0
y
luego
durante 3 h en los aedios y condiciones que se detallan en la
Las auestras se centrifugaron a 10.000 x g; el
RIA
(PRLh) por
de ratas heibras estrogenizadas. Las
glândulas fueron homogeneizadas en
incubadas
Este contenido
hipofisiaria
En este trabajo se estúdio la influencia
distintos
la
PRL
se
realizo
en
los
sobrenadantes.
procesados para licroscopia electrinica.
Los
dosaje
de PRL
pellets
fueron
La tabla muestra los valores
de PRLh (ug/ml):
Kedio* extrictivos
pH
Teep.t'C
TRIS-C1M 0.05*
7.0
8.50 - 0,5
TRIS-CIH 0.05*
10.0
32.22 - 1,92
28,00 - 1,73
Ditiotr.itol O . L H
10.0
25,28 - 2,92
28,38 - 2,08
Glutation red.10.PI
10.0
20,56 - 1,73
24,00 - 3,6
7.0
36,50 - 2,18
31.83 - 2,84
10.0
55,83 - 3,82
41,67 - 3,78
Urea
2.S H
Urta
2.5 fi
dosajt de PRLh et •ayer a pH alcalino.
afectan la inaunorreaetividad de PRLh.
2,5
Te.p.30°C
9,33 - 1,15
N
auaenta
signifieativamente
Las luttanciae tiíTii
La extracción de PRL con
urea
en ambos pH y a menor teaperatura.
Lot pellets muestran resultados coaparables a los obtenidos en el RIA;
a
aayor
extracción
observables.
menor
es
la
cantidad de gránulos secretorios
El aedio de extracción ais efectivo ts urea 2,5 M a pH
10,0 incubado a 4*C. La urea
tiene un
efecto disociante
polímero de PRLh ya que permite exponer aayor
antigánicot detectables por RIA.
cantidad
de
dei
sitios
R260
TYMPANOCTOMYS BARRERAE (OCTODONTIDAE): UN ROEDOR
ESPECIALISTA. Tympanoetomys barrerae: a specialist rodent
Torres-Mura, J.C., Lemus, M.L.
y Contreras, L.C.
Depto. Biologia & Química, Universidad de Talca.
T. barrerae habita en formaciones desérticas halófilas
y se conoce solo de tres localidades en Mendoza, Argentina. Esta espécie presenta características de roedor de
desierto como cola larga, andar bipedal, grandes bulas,
etc. Esta convergência morfológica lleva a preguntarse
si esta espécie es granivora, como aquellas espécies con
las que converge, o es herbívoro generalista como otros
roedores presentes en el Desierto de Monte.
Se estudian los hábitos alimentarios de T. barrerae
y tambien los de Microcavia australis, Ctenomys mendocinus y Eligmodontia typus. Las dietas se determinan por
examinacion microhistologica de fecas. Para cada especimen se realizo un análisis cualitativo y cuantitativo de
Ias dietas.
Tympanoctomys es exclusivamente herbívoro y se alimenta basicamente de "apén", Heterostachys ritteriana t 95$
en Septiembre y 92% en Abril. La especialización dietaria queda corroborada al encontrar que el 100$ de los
animales muestreados presentaba "apén en su dieta. Por
atra parte M. australis es un herbívoro generalista,
Ctenomys se alimenta de gramíneas y E. typus es omnivoro,
con un 2b% de insectos en su dieta.
Entre Tympanoctomys y tanto Ctenomys como Eligmodontia,
casi no existe sobreposición dietaria. En cambio con
Microcavia esta alcanza a casi un 50% • Además, se ha observado en terreno que TT. barrerae es desplazado de ciertos lugares por el ubicuo Microcavia. Estas interacciones y la alta especialización dietaria permitirían explicar la restringida distribuciôn de este octodóntido.
11
PRESENCIA DE CUERPOS MULTILAMELARES EN LA GASTRULA DE
DE AVE. (Prescence of multilamelar bodies in bird
g a a t r u l a ) .. Torres, P.F.; Barbieri, F.D.
Depto. Biologia dei Desarrolló (INSIBIO). CONICET Universidad Nacional de Tucumán.Rep. Argentina.
Distintos territórios celulares dei embrión de pollo
en el estádio V según la tabla de Hamburger y Hamilton
(1951) fueron analizados mediante microscopía electrõnica de transmisiõn.
Los resultados obtenidos en el presente estúdio pusieron en evidencia la presencia de cuerpos multilamelares
unicamente en células de la prolongación cefálica y dei
território neural presuntivo. Fueron observados en relaciôn con diversos organoides citoplasmãticos tales como
Ias mitocondrias, los grãnulos vitelinos y el retículo
endotelial. Fueron también detectados en el âmbito
nuclear, principalmente en el ãrea periférica, exhibiendo un gran polimorfismo y un contenido de naturaleza
amorfa. Su evidenciaciõn mediante distintos procedimientos de fijación, así como el hecho de que fueron yã
detectados en una notable variedad de células de distintas espécies, permite argumentar que no se trataria de
artefactos de técnica.
Teniendo en cuenta que estas estructuras fueron reconocidas en Ias células implicadas en el proceso de inducción neural, se postula como hipStesis de trabajo su
eventual intervención en el transporte de Ias senales
químicas que determinan el proceso de neuralización.
Parcialmente financiado por Dirección de Investigación,
Universidad de Talca.
EFECTOS DE I N FOMjLMX) DE PARKTION S O B E LA FBCUCMCXCM DEL ERZZO
DE MAR. (Effects of fornulated parathicn on sea urchin fertilization
Tbr-torelll, M.C.. Harnández, D.A.. Lontoardo, R.J., Ferrari,L. y Del
Giorgio, P.. Dpto. de Cs. Básicas, universidad Nacional de Luján y
DupLu. De Ob. Biológicas, Universidad de Buenos Aires.
Los organismos acuáticos resultan afectados por residuos de plaguicidas on distintas etapas de su ciclo de vida, influyendo, en última
instância, sobre el crecimiento poblacicnal. El propósito de este
trebajos fue evaluar la incidência de un fornulado oon 100g/L de paration (FP) sobre la fecundaciòn y su posible implicância en el crecimiento poblacicnal.
Adultos de Pseudechinus maaellanicus (Ftúlippi)fuercn colectados en
el canal Beagle (Argentina). La obtención de ©metas y la fecundaciòn "in vitro" se realizaron mediante técnicas cue evitan la poliespermía. Se «Mqyarcn 4 ocndicicnes experimentales: a. fecundaciòn
sin expceición previa al FP, b. fecundaciòn de oocitos (occ) expuestos previamente a distintas ocncentrac ienes de FP durante 1 h, c.fecundaciòn oon espermatoaooides (spz) expuestos previamente a distintas conom tree ienes de FP y d.fecundación con occ y spz previamente
expuestos a FP. El rango de conoentracienes utilizados fue de 1 a 64
ppb. El desarrolló embrionário fue detenido con fbnnol 2% dos hs des
puás. Loa experimentos oontrol también se efectuarcn por duplicado y
en condiciones ocntroladas de T°C, pH y sallnidad.La CE50 se estimo
cen el método prcoit.
Se registro un marcado efecto inhibitorio dei FP sobre la fecundaciòn
Las CE50 fueron: au 92.2, b: 26.9, c: 13.5 y d: 0.9 ppb. Teniendo en
cuenta estos resultados y la proporción de occ fecundados que alcanza el estádio pluteus en condiciones control (75-89&) y de ellos los
que sufren metemorfosis exitosa, es razonable sospechar que bajas
cenoentracianee de FP (menores a 100 ppb) en el mar pueden provocar
un nurcado efecto secundário sobre el crecimiento poblacicnal dei
erizo de mar.
EFECTO DE LA DESNUTRICI0N PROTEICA PRE Y P0S-NATAL SOBRE EL CONTENIDO DE GANGLI0SIDI0S Y SIAL0PR0TEINAS HI
POTALAMICAS DE RATAS.(The effect of pre- and post natal proteic undernutrition on the gangliosides and sia
loproteins content in rat hypothalamus). Treis Trindade, V.M., Perry, M.L.S., Gamallo, J.L. e Bernard, E.A.
Departamento de Bioquímica, Instituto de Biocíencias,
U.F.R.G.S., Porto Alegre, R.S., Brasil.
A desnutrição proteica provoca alterações estruturais e bioquímicas no cérebro, entre as quais, redução
na proliferação dendrítica e mielinizaçao. Hã evidencias de que ganglíosídios e síaloglicoproteínas estejam envolvidas na adesão sinãptica e atuem como receptores para os neurotransmissores. Em ratos, o período
mais suceptível aos efeitos permanentes da restrição
proteica se estende desde uma semana antes do nascimen
to até a terceira semana pÕs-natal. Este trabalho mostra o efeito da desnutrição proteica pre-natal (desde
o primeiro dia de gestação) e pós-natal (a partir do
nascimento) sobre o hipotãlamo. 0 peso dos hipot alamos
aumenta ligeiramente até os dez dias de idade e com as
duas desnutrições apresenta diminuição a partir dos
dez dias após o nascimento. 0 conteúdo de gangliosidios
cresce até os dez dias de idade atingindo um plat3. Com
a desnutrição pré-natal aos dez dias se verifica uma
redução no conteúdo de gangliosídios enquanto que com
a desnutrição põs-natal este efeito é retardado. Quando se expressa a concentração de gangliosídíos por mg
de tecido se observa uma diminuição aos 15 dias de Ída_
de nos ratos desnutridos pré-natalmente, tornando
a
igualar-se aos 20 dias. As síaloglicoproteínas apresen
tam um lento aumento com a idade e se observa que
a
desnutrição pre-natal afeta o seu conteúdo aos 20 dias
apôs o nascimento. Esta abordagem poderã contribuir na
avaliação das alterações bioquímicas e na interpretação das mudanças comportamentais dos ratos desnutridos.
Auxílios Financeiros: CNPq, FINEP, PROPESP/UFRGS.
M A P A DE R E S T R I C T I O N DE A D E N O V I R U S 35 A I S L A D O
DE P A C I E N T E S CON I N M U N O C O M P R O M I S O . ( R e s t r i c cion mappi ng o f A d e n o v i r u s 3 5 , i s o l a t e d from
i n m u n o c o m p r o m i s e d h o s t s ) . ^ l d « r r a m a , G_. y
H o r v i t z , M . S ^ D e p a r t m e n t of M i c r o b i o l o g y and
I m m u n o l o g y ' A l b e r t E i n s t e i n C o l l e g e of M e d i c i n e . ( P a t r o c i n i o 0, L e o n ) .
A d e n o v i r u s de s e r o t i p o s c o m u n e s h a n sido ais
l a d o s de p a c i e n t e s con i n m u n i d a d a l t e r a d a , par
t i c u l a r m e n t e A d e n o v i r u s (Ad) 3 * y 3 5 . De e s t o s
A d 3 5 es i n t e r e s a n t e , d e b i d o a que es un A d e n o v i r u s n u e v o y solo ha sido a í s l a d o de p a c i e n t e s con s e v e r a i n m u n o s u p r e s i ó n . En e s t e l a b o r a
t o r i o se ha r e p o r t a d o el a i s l a m i e n t o de e s t o s
A d e n o v i r u s en p a c i e n t e s con S i n d r o m e de Inmuno
d e f i c i ê n c i a A d q u i r i d a . En e s t e t r a b a j o se p r e s e n t a la c o n s t r u c c i ó n dei m a p a de r e s t r i c e i ó n
de A d 3 5 u t i l i z a n d o Ias enzimas: B A M H I , E c o R I ,
PstI,
Smal y H p a l ,
P l a s m i d i o s c o n t e n i e n d o f r a g m e n t o s de DNA dei
A d 7 fueron r a d i a c t i v a m e n t e m a r c a d o s y u s a d o s
como p r u e b a s de h i b r i d i z a c i ó n con f r a g m e n t o s
de DNA de A d 3 5 o b t e n i d o s por d i g e s t i o n con e n zimas de r e s t r i e c i ó n e i n m o v i l i z a d o s en G e n e
S c r e e n . De e s t a m a n e r a se d e t e r m i n o la p o s i cíón de a l g u n o s de los f r a g m e n t o s de DNA que
p r e s e n t a n h o m o l o g í a con A d 7 . Los f r a g m e n t o s de
DNA t e r m i n a l e s de c a d a e x t r e m o , fueron d e t e r m i
n a d o s u t i l i z a n d o el s i s t e m a de r e p l i c a c i ó n de
DNA in v i t r o .
N u e s t r o s r e s u l t a d o s i n d i c a n que la r e g i o n
que c o d i f i c a p a r a el p o l i p e p t i d o de e n v o l t u r a
es d i f e r e n t e a la e n c o n t r a d a en o t r o s t i p o s de
A d e n o v i r u s del m i s m o g r u p o . E s t e n u e v o m é t o d o
p u e d e ser a p l i c a d o en la c o n s t r u c c i ó n de o t r o s
n u e v o s m a p a s de A d e n o v i r u s .
1
R261
DESARROLLO DE UN NUEVO MÉTODO POR HPLC PARA SEPARAR Y
QUANTIFICAR ANDROSTENEDIONA Y SUS PRODUCTOS DE 0XIDACI0N
MICROSOMAL (A new HPLC method to separate and quantify
Androstenedíone and its microsomal oxidative products).
Valdés, E. y Gil ,L- Departamento de Bioqutmica,Facultad
Androstenediona (A), es un agente androgenico débil que
circula en la sangre periférica, actuando como prohormona para la síntesis de potentes andrógenos en sitios extraglandulares. La (A)es hidroxilada regio y estereoespe_
cificamente por diferentes espécies de Citocromo P-^50
en varias posiciones dei esqueleto esteroidal. No se sabe con exactttud cuantas isoenzimas de Citocromo P-í*50
participan en el metabolismo oxidativo de (A).
En este trabajo, presentamos una nueva técnica desarro liada en nuestro laboratório para separar y cuantificar
(A) y sus productos de oxidaeion por H P L C El método utj_
M z a una columna de Lichrosorbdiol que separa en fase
normal, el sustrato y sus productos de oxidaeion cuando
se utiliza como fase móvil una mezcla de n-hexano e iso
propanol. (A) y sus metabolitos eluyen con los siguientes tiempos de retención : (A) 15.30 min.; Testosterona
(T) 17.20 min.; 6B-hidroxi Androstenediona (6B-0HA)20.15
min.; 2B-0HA 2 1 . 8 min.; 2a-0HA 22.50 min.;7a-0HA 2A.30
min., 16a-0HA 2 6 . 3 0 min.; 1la-OHA 2 7 . 2 0 min.; 6a-0HA
2 7 . A O min. y 15a-0HA 2 9 . 2 0 min.
Esta técnica es rápida, no requfere el uso de gradientes
y utiliza sistemas simples de HPLC. La hemos apl tcado p^
ra estudiar el metabolismo hepático de (A) en ratas macho de 35 dias,cepa Wistar. Microsomas incubados con
NADPH y oxfgeno molecular producen : (T) , 68-0HA, 2fí-0HA
7a-0HA y l6a-0HA. La gran sensibilidad y resolución dei
método facilita Ias determinaciones en tejidos extrahepáticos de bajo contenido de Citocromo P-450 tales como,
rinón y pulmõn.
Financiado por proyecto B: 1 9 7 0 - 8 6 3 5 dei DIB, Universidad de Chile y 8025 del FONDECYT.
D I F E R E N C I A S EN E L N I V E L DE L I P 0 P E R 0 X I D A C I 0 N , C O N T E N I D O
DE CITOCROMO P - 4 5 0 Y CONSUMO DE O X I G E N O MICROSOMAL E N TRE E L L 0 B U L 0 DERECH0 E I Z Q U I E R D 0 DEL H I G A D 0 F E T A L DE
LA O V E J A . { D i f f e r e n c e s i n t h e l i p i d p e r o x i d a t i v e s t a t u s ,
c y t o c h r o m e P-450 c o n t e n t a n d m i c r o s o m a l o x y g e n consumpt i o n between r i g h t and l e f t l o b e s . o f t h e l i v e r i n f e t a l
s h e e p ) . V a l e n z u e l a A * . , G a r r i d o A * . , Caflas p i . , E s p i n o z a
M^., Germain A ^ . , L l a n o s A 2 . 1 L a b o r a t ó r i o de B i o q u í m i c a
F a r m a c o l 6 q i c a , I N T A . 2 L a b o r a t ó r i o de F i s i o l c g f a y F i s i o p a _
t o l o g i a P e r i n a t a l . F a c . M e d i c i n a . U . de C h i l e .
La e x i s t ê n c i a d e l d u c t u s v e n o s u s e n e l h í g a d o f e t a l
de m a m í f e r o s d e t e r m i n a q u e e l a p o r t e d e o x i g e n o s a n g ü í neo s e a menor e n e l l ó b u l o d e r e c h o . E s t a s i t u a c i o n
pod r í a i m p l i c a r un d i f e r e n t e m a n e j o b i o q u í m i c o d e l metabo
l i s m o d e l o x i g e n o e n ambos l ó b u l o s h e p á t i c o s .
Con e s t e
p r o p ó s i t o s e e v a l u ó l o s n i v e l e s b a s a l e s de 1 i p o p e r o x i d a _
c i ó n , c i t o c r o m o P-450 y consumo m i c r o s o m a l de 02» a s i
como a l g u n o s p a r â m e t r o s r e l a c i o n a d o s c o n l a p r o t e c c i Ó n
c e l u l a r c o n t r a e l s t r e s s o x i d a t i v o , e n ambos l ó b u l o s d e i
hígado f e t a l de l a o v e j a . El lóbulo i z q u i e r d o presenta
m a y o r e s n i v e l e s d e 1 i p o p e r o x i d a c i ó n ( e x p r e s a d a como m a l o n d i a l d e h i d o ) , c o n s u m o d e o x i g e n o m i c r o s o m a l y u n a can_
t i d a d mayor de c i t o c r o m o P-450. Respecto a l o s l ó b u l o s
homólogos de l a m a d r e , s o l o e l c o n t e n i d o de c i t o c r o m o P-450 e s m a y o r e n e s t a s . L o s n i v e l e s de a c t i v i d a d d e l a s
enzimas superóxido dismutasa, catalasa y g l u t a t i Ó n
per o x i d a s a n o s o n d i f e r e n t e s e n t r e ambos l ó b u l o s d e i f e t o
n i tampoco e n t r e e s t o s y a q u e l l o s de l a madre. E l c o n t e
n i d o de g l u t a t i ó n r e d u c i d o e s s i g n i f i c a t i v a m e n t e menor
en l o s l ó b u l o s f e t a l e s . S e p l a n t e a q u e e l l ó b u l o i z q u i e r
do d e i h í g a d o f e t a l e s t a r i a s o m e t i d o a un m a y o r s t r e s s
o x i d a t i v o que el derecho debido a l a mayor o x i g e n a c i ó n
que r e c i b e . E l s i s t e m a m i c r o s o m a l de e s t e l ó b u l o p r e s e n
t a r í a un c i e r t o g r a d o de d e s a c o p l a m i e n t o , d e r i v a n d o s u
a c t i v i d a d h a c i a l a f o r m a c i ó n de e s p é c i e s a c t i v a s d e i o x í
geno i n v o l u c r a d o s e n e l i n i c i o de l a 1 i p o p e r o x i d a c i ó n ce
l u l a r . E s t a s d i f e r e n c i a s m e t a b ó l i c a s p o d r í a n t e n e r impor
t a n c i a e n l a e t i o g e n i a de a l g u n a s a n o m a l i a s h e p á t i c a s d e i
r e c i é n n a c i d o . ( F i n a n c i a D I B . P r o y . B-2399-8613 U . d e C h i l e )
ALTERACION DE ACTIVIDAD METABOLICA EN CÉLULAS DE LEYDIG
DESENSIBILIZADAS. (Modification of some metabolic parameters in desensibilized Leydig cells). Valladares, L. E.,
Ronco, A.M., y Pino A.M. Unidad de Biologia de la Reprod.
INTA, Universidad de Chile.
Una dosis única farmacológica de LH/hCG (100 Ul) produce una alteración en la capacidad funcional de las células de Leydig, fenômeno conocido como desensibilización.
En este trabajo se estudia el efecto de una dosis desen
sibilizante de LH/hCG sobre algunos parâmetros moleculares de la célula de Leydig, luego de 1, 2, 3, 6 y 12 días
después de la inyección.
Ratas adultas fueron tratadas con 100 Ul de LH/hCG y se
sacrificaron a los tiempos sefialados después de la inyeç_
ción. Las células de Leydig se purificaron a partir de te_
jido intersticial por gradiente de metrizamida. En estas
células se determino: numero de receptores para LH/hCG
por unión de 125 i-HCG, síntesis de testosterona al cabo
de 3 hr. de incubación y síntesis de RNA por incorporación de 3H-uridina a material ãcido insoluble. Posteriormente estos RNA fueron analizados por cromatografía de
afinidad para identificar fracciones ricos en poli-(A).
Los resultados obtenidos indican un desaparecimiento
dei numero de receptores para gonadotrofinas, hecho que
se hace evidente desde el 1er día después de la inyección. La síntesis de testosterona en Ias células desensibilizadas se ve disminuida frente a un segundo estímulo
"in vitro" de hCG. Tanto el número de receptores como la
síntesis de Testosterona se encuentran recuperadas en un
80% , 12 días después de la inyección.
La síntesis de RNA
disminuye paulatinamente desde el
1er día después de la inyección siendo esta disminución
máxima, al cabo de 2 días. El análisis de estos RNA indica que no hay una disminución preferencial de la síntesis
de los RNA poli-(A).
Estos antecedentes indican que la desensibilizacion es
taría asociada con fenômenos transcripcionales, existien
do una correlaciòn entre la disminución de RNA y el numero de receptores.Fin.DIB,B-2020-8633,U. de Chile.
R262
E F E C T O S DE L A V I T A M I N A D Y E S T I G M A S T E R O L SOBRE L A S I N T E S I S DE C A L M O D U L I N S EN R A I Z . L O C A L I Z A C I O N Y D E P E N D Ê N C I A
DEL C A L C I O ( E f f e c t s o f v i t a m i n D3 a n d s t i g m a s t e r o l o n
root calmodulin s y n t h e s i s . L o c a l i z a t i o n and calcium d e p e n d e n c e ) . V e g a , M.A. y B o l a n d , R . L . Departamento de
B i o l o g i a , U n i v e r s i d a d N a c i o n a l d e l S u r , 8000 B a h i a B l a n ca.
3
E s t ú d i o s p r é v i o s m o s t r a r o n q u e l a v i t a m i n a D3, a c o n c e n t r a c i o n 1 n M , i n d u c e l a s i n t e s i s de novo d e c a l m o d u l i n a ( C A M ) e n r a i c e s d e Phaseolue
vulgaris
in vitro.
Se
r e a l i z a r o n experimentos para obtener información sobre
l a l o c a l i z a c i ó n d e l o s e f e c t o s y modo d e a c c i õ n d e l e s t e r o l . Los e s t ú d i o s se e f e c t u a r o n con r a i c e s p r i m a r i a s
de P. vulgaris
c u l t i v a d a s en medio S h e n k - H i l d e b r a n d t a
28 °C e n l a o s c u r i d a d . L o s c u l t i v o s f u e r o n t r a t a d o s c o n
v i t a m i n a Do 1 0 - 9 M d u r a n t e 2 h . Se m i d i ó l a s i n t e s i s d e
CAM e n d i s t i n t a s p o r c i o n e s d e l a r a i z p o r e l m é t o d o d e
d o b l e m a r c a c i ó n de p r o t e i n a s c o n ^ H - l e u c i n a ( v i t a m i n a
D3) y * C - l e u c i n a ( c o n t r o l ) y p o s t e r i o r s e p a r a c i ó n p o r
e l e c t r o f o r e s i s SDS-PAGE o c r o m a t o g r a f í a de a f i n i d a d e n
c o l u m n a s d e f e n o t i a z i n a - a g a r o s a . Se o b s e r v o q u e l a e s t i m u l a c i õ n d e l a s i n t e s i s d e CAM p o r v i t a m i n a D3 e s t á l o c a l i z a d a e n e l e x t r e m o más a p i c a l d e l a r a i z ( 0 - 5 mm
d e s d e e l á p i c e ) . M e d i a n t e t é c n i c a s d e l i g a d o in vivo d e
f e n o t i a z i n a s f l u o r e s c e n t e s s e determino que en e s t a z o na l a CAM s e l o c a l i z a p r i n c i p a l m e n t e e n I a s c é l u l a s d e
l a c o f i a y d e i m e r i s t e m a c o r t i c a l . E n p o r c i o n e s mãs d i s t a n t e s d e i á p i c e l a CAM s e u b i c a s e i e c t i v ã m e n t e e n l o s
e l e m e n t o s d e i x i l e m a . E l e s t i g m a s t e r o l ( I O ' ) M ) , un e s t e r o l m a y o r i t a r i o en v e g e t a l e s , produjo efectos s i m i l a r e s a l o s d e v i t a m i n a D3 e n l a s i n t e s i s d e CAM. L a a c c i ó ç de l o s e s t e r o l e s f u é s i m u l a d a p o r e l i o n ó f o r o de
Ca'
A23187 y a b o l i d a c u a n d o e l t r a t a m i e n t o c o n l o s m i s mos s e r e a l i z o e n m e d i o l i b r e d e Ca2+ y e n p r e s e n c i a d e
2 mM E G T A . E s t o s r e s u l t a d o s s u g i e r e n q u e l o s e f e c t o s d e
v i t a m i n a D3 y e s t i g m a s t e r o l s o b r e l a s i n t e s i s d e CAM e s t á n mediados p o r l a e n t r a d a de C a 2 a l a r a i z .
-
+
RELACIÔN ENTRE EL SISTEMA A D E N I L A T O C I C L A S A Y S I N T E S I S
DE E S T E R 0 I D E S DURANTE L A F A S E L U T E A HUMANA ( R e l a t i o n s h i p between a d e n y l a t e c y c l a s e s y s t e m and s t e r o i d s s y n t h e s i s t r o u g h o u t human l u t e a l p h a s e ) .
Vega. M., Navarro, V . , C a s t r o , 0. y Devoto, L. Depto. C s .
BSs., Depto. O b s t / G i n e c o l . , D i v . C s . Méd. S u r , I n s t . I n v .
C l i n . , H . Paula J a r a q u e m a d a , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
R e c i e n t e m e n t e s e ha d e s c r i t o que e l s i s t e m a a d e n i l a t o c i c l a s a ( A C ) d e l a s membranas l ú t e a s e s t á c o n s t i t u í d o p o r
3 subunidades: Receptor ( R ) , Regulatoria ( N ) , C a t a l í t i c a
( C ) , y q u e e n r e s p u e s t a a L H / H C G a u m e n t a e l cAMP i n t r a c e l u l a r y l a p r o g e s t e r o n a ( P 4 ) . Hemos d e m o s t r a d o q u e i n v i t r o HCG e s t i m u l a s i g n i f i c a t i v a m e n t e l a s i n t e s i s d e P y
E s t r a d i o l (E2) en Cuerpo l ú t e o ( C L ) i n t e r m é d i o ( I ) y en
m e n o r g r a d o , e n CL t a r d i o ( T a ) , p e r o n o e n CL t e m p r a n o
( T e ) ; s i n embargo, dbcAMP, t o x i n a c ó l e r a ( T C ) y f o r s k o l i n
( F K ) e s t i m u l a n P4 y cAMP e n C L T e . E s t e t r a b a j o e v a l ú a e l
c o m p o r t a m i e n t o i n v i t r o d e l s i s t e m a A C d e CL h u m a n o a l o
l a r g o d e l a f a s e l ú t e a e n r e l a c i ô n a l a s i n t e s i s d e P4 y
í o . L o s CL f u e r o n o b t e n i d o s d e p a c i e n t e s s o m e t i d a s a e s t e
n l i z a c i ó n t u b a r i a . L a e d a d d e i CL s e d e t e r m i n o p o r F U R ,
n i v e l e s e n p l a s m a d e L H , P4 y E 2 ; b i o p s i a d e CL y e n d o m e t r i o . Los c o r t e s fueron incubados 3 h r s . en Krebs/HC03,
g l u c o s a y B S A , pH 7 . 4 c o n 0 2 / C 0 2 : 9 5 / 5 a 3 7 ° C , c o n o s i n
HCG ( 1 0 U l / m l ) ; dbcAMP (1 m M ) ; T C ( 1 0 u g / m l ) o F K ( 5 0 u M ) .
Se m i d i ó P4 y E2 e n m e d i o y t e j i d o p o r R I A . L o s r e s u l t a d o s d e m u e s t r a n q u e e n CL I y T a e x i s t e u n m a y o r a u m e n t o
de P4 p o r HCG q u e e n CL T e ( p < . 0 . 0 0 5 ) . D b c A M P , T C y F K e s t i m u l a n s i g n i f i c a t i v a m e n t e ( v s C o n t r o l ) P e n CL T e ( p < .
0 . 0 5 ) , I ( p < 0 . 0 1 ) y T a ( p < 0 . 0 5 ) ; a l E2 e n C L I ( p < 0 . 0 1 ) y
T a ( p < 0 . 0 5 ) . E l i n c r e m e n t o d e P4 e s d e 2 . 2 ; 4 . 0 y 2 . 8 v e c e s y e l d e E2 d e 1 . 2 ; 1.8 y 2 . 7 v e c e s e n CL T e , I y T a
r e s p e c t i v a m e n t e . E s t e modelo e x p e r i m e n t a l s u g i e r e l a e x U
t e n c i a d e i s i s t e m a AC d u r a n t e t o d a l a f a s e l ú t e a s i e n d o
su r e s p u e s t a d e p e n d i e n t e de l a edad d e i CL y p r o b a b l e m e n t e l a r e s p o n s a b l e d e i d i f e r e n t e p e r f i l d e s i n t e s i s d e P4
y E 2 , c o n t r o l a n d o de p r e f e r e n c i a P4.
4
4
R o c k e f e l l e r GAPS 8523 y D I B M - 1 6 8 5 .
EFECTO DE LA HERBIVORIA EN LA ABUNDÂNCIA DE LAS ALGAS DE
POZAS INTERMAREALES (Herblvory effect on the tide-pools
algae abundance). Vega, R. y Moreno, C. Laboratório de
Ecologia, Depto. CCNN, P. Universidad Católica Sede Temuco - Instituto de Ecologia,Universidad Austral de Chile.
En la zona intermareal de la Reserva Marina de Mahuin
(X Region) de la Universidad Austral, las pozas altas se
encuentran dominadas por clorõfitas ulvoides y las bajas
por algas crustosas calcãreas.Se pregunta iQué factores,
bióticos o abióticos, regulan la persistência y dominan cia de Ias algas en estas pozas?
Entre Agosto 1982 y Enero 1984 se realizo en Mehuín
una serie de experimentos para determinar en Ias pozas a_l
tas y bajas, el efecto sobre la abundância de Ias algas
de: a) competência entre algas, b) herbivoría, c) interact
ción de estos dos factores y d) interacción de factores
bióticos y abióticos. Se estimo % de cobertura de Ias a^
gas, densidad de la fauna y biomasa de ambas.
En Ias pozas intermareales de Mehuín pueden persistir
clorõfitas, rodófitas y feõfitas, que estarían reguladas
por factores biológicos: competência entre algas y herbivoría. Las clorõfitas ulvoides son espécies colonizadoras
iniciales dominantes competitivas en Ias pozas. Los berbí
voros presentes en Ias pozas altas
(Siphonaria,Collisella,
Littorina) son poco eficiente en la regulación de la abundância de Ias algas; al contrario de los de Ias pozas ba jas, principalmente Fissurella.
La baja o alta intensldad de una perturbaciõn como es
la herbivoría genera dos estructuras extremas para un mis
mo habitat, así en Ias pozas intermareales se reclutan uj^
voides pioneras que ante una baja intensidad de herbivo ria, dominan por exclusion competitiva, persistiendo el
estado ulvoide al detenerse la sucesiõn (pozas altas).Las
macroalgas foliosas desaparecen ante una alta intensidad
de herbivoría dominando Ias algas crustosas calcáreas (pc>
zas bajas).
Financiado por Proyectos: 2.83.3. U. Católica Temuco,
RS 82-7 UACH y 1067-83 Fondo Nacional de Ciências.
V E S I C U L A S DE M E M B R A N A P L A S M Á T I C A DE M U S C U L O DE
Balanui
PARA EL E S T Ú D I O DE C A N A L E S I Ó N I C O S .
( P l a s m * m e m b r a n e v e s i c l e s from b a r n a c l e m u s c l e
for the study of Ion c h a n n e l s ) . V e r g a r a , C. y
B a c l g a l u p o , J. D e p t o . B l o i o g f a , F a c . C I ene las ,
Datos m a c r o s c ó p i c o s y de p a t c h c l a m p s u g i e ren q u e en m ú s c u l o de balanui
la m a y o r T a de
los c a n a l e s C a * * , c u y a s p r o p i e d a d e s nos Intere
sa e s t u d i a r , se e n c u e n t r a n en Invag I n a c t o n e s
de la m e m b r a n a p l a s m a t i c * .
El m é t o d o d e p a t c h
c l a m p no es a d e c u a d o para r e g i s t r a r de e s t a s
reglones
por Io t a n t o d e c i d i m o s u s a r un m e t o
do a l t e r n a t i v o .
E s t e c o n s i s t i a en p r o d u c l r ve
s l c u l a s de m e m b r a n a p l a s m á t i c a en d o n d e se pue
den e s t u d i a r c a n a l e s I ó n i c o s .
Se Incubaron 3 ~
10 c é l u l a s de balanui
en agua d e m a r a r t i f i cial (AMA) d i l u í d a a la m l t a d c o n t e n l e n d o 10
m g / m l de c o l a g e n a s a por 2 h r s .
Se u s 6 AMA d i luída con el o b j e t i v o de h a c e r m i s a c c e s l b l e
la m e m b r a n a de Ias 1 n v a g t n a c t o n e s .
Este t r a t £
mlento
p r o d u j o v e s T c u l a s de m e m b r a n a de 3 0 150|i q u e se u t i l i z a r o n en e x p e r i m e n t o s de
p a t c h c l a m p o f u e r o n a g r e g a d a s a un s i s t e m a de
r e g i s t r o d e c a n a l e s en m e m b r a n a s art If I ctaI e s .
En t o d o s e s t o s c a s o s fue p o s i b l e r e g i s t r a r c o rrientes u n i t á r i a s .
E n t r e los d i s t i n t o s c a n a les o b s e r v a d o s d e s t a c a m o s un canal de 12 ps
que t r a n s p o r t a iones B a , c u y a a c t i v i d a d es blo
q u e a d a por Iones Cd lo q u e s u g i e r e q u e es un
canal d e C a .
Financiado
por
DIB-B
1986-8523
R263
A C T I V I D A D Y L O C A L I Z A C I O N SUBCELULAR. DE AM I N O T R A N S F E R A S A
DE A M I N O Ã C I D O S R A M I F I C A D O S E N E S P E R M A T O Z O I D E S DE R A T A
( A c t i v i t y ands u b c e l 1 u l a r l o c a l i z a t i o n o f b r a n c h e d - c h a i n
aminoacid aminotransferase in r a t spermatozoa)
Vermouth, N . T . , Montamat, E . E . y B l a n c o , A .
C á t e d r a de Química B i o l ó g i c a , F a c u l t a d de C , M é d i c a s ,
Universidad Nacional de Cordoba, Cordoba, A r g e n t i n a .
Estúdios p r é v i o s e n este l a b o r a t ó r i o habían demostrado
que l a i s o z i m a X de l a c t a t o d e h i d r o g e n a s a (LDH X o Cn)
d e r a t ó n u t i l i z a como s u s t r a t o s c t - c e t o ã c i d o s d e c a d e n a
r a m i f i c a d a p r o d u c i d o s p o r t r a n s a m í n a c i ó n d e l e u c i n a , va_
1ina e i s o l e u c i n a . E n p r e p a r a c i o n e s d e t e s t í c u l o , s e
comprobô que l a a m i n o t r a n s f e r a s a d e aminoãcidos r a m i f i c a d o s ( A T A R ) p o s e e l a misma d i s t r i b u c i ó n s u b c e l u l a r que
que LDH X ( e n c i t o s c í y e n m a t r i z m i t o c o n d r i a l d e o r g a n e l a s s i m i l a r e s a I a s e x i s t e n t e s en l a p i e z a media d e
espermatozoides). Estas evidencias llevaron a postular
e l f u n c í o n a m i e n t o d e u n s i s t e m a c o n m u t a d o r d e H q u e ut\_
l i z a l a c u p l a r e d o x a - O H - S c i d o / a - c e t o ã c i d o d e c a d e n a ra_
mificada. La e f e c t i v a operacfón de esta "lanzadera" ha
s i d o d e m o s t r a d a e n s i s t e m a s r e c o n s t i t u í d o s i n v i t r o . D_i_
chos e s t ú d i o s s e r e a l í z a r o n con m i t o c o n d r i a s " t i p o e s perma" a i s l a d a s de t e s t í c u l o t o t a l pues no es p o s i b l e
o b t e n e r l a s de e s p e r m a t o z o i d e s . Para comprobar s i l a s i t u a c i o n e s l a misma e n I a s g a m e t a s s e h a a n a l i z a d o a c t j _
v i d a d d e ATAR y d i s t r i b u c i ó n s u b c e l u l a r d e LDH X y ATAR
en e s p e r m a t o z o i d e s a i s l a d o s de e p i d í d i m o d e r a t a p o r e l
método i n d í r e c t o de t r a t a m i e n t o con d i g í t o n i n a ( D ) . L a
a c t i v i d a d ATAR e s d e 15,É>5umoles/10 c é l u l a s ; 0,27umol e s / m g d e p r o t e í n a . L a s g a m e t a s e n t e r a s t r a t a d a s c o n àl_
g í t o n i n a 1 i b e r a n h a s t a 70% d e s u a c t i v i d a d A T A R y L D H X
a c o n c e n t r a c i o n e s d e 0,2mg D/mg p r o t e í n a y r e c i é n a
0,7mg D/mg p r o t e í n a c o m i e n z a a I i b e r a r s e e l r e s t o . E s t e
resultado confirma l a distribución dual, en citosol y
m i t o c o n d r i a s , p a r a LDH X y ATAR de e s p e r m a t o z o i d e s y l a
p o s i b i l i d a d de su p a r t i c i p a c i ó n en e l sistema lanzadera
propuesto.
9
LOCALIZACION ESTRUCTURAL DE TSOFORMAS DE ACTINA EN EL
ELECTROCITO DE DISCOPYGE TSCHUDII.(Structural localization of actin isoforms in Discopy$e tschudii electrocytes),Vidal,A.,Prado Figueroa.M.y Barrantes.F.J.
Instituto de Investigaciones Bioquímicas,Universidad Nacional del Sur y CONICET,8000-Bahia Blanca,Argentina.
La actina es un componente de las membranas enriquecidas en receptor colinérgico nicotínico(AChR).distinguible de otras proteínas periféricas de membrana.Con el ob
jeto de establecer eventuales relaciones estructurales
entre el AChR y la actina se efectuaron estúdios inmunohistoquíraicos dei organo eléctrico de Discopyge tschudii
pez de la fam.Torpedinidae,y se utilizaron técnicas de
fluorescencia con falacidina,una toxina que tiene la pro
oiedad de unirse con alta afinidad a la forma filamentosa(F)de la actina,y dos líneas de anticuerpos monoclonales(mAbs)anti-actina(OAB.y QAB )obtenidas del musculo
pectoral de codorniz.Se diferencio la membrana ventral
de la no inervada mediante Ol-cobrotoxina conjugada con
isotiocianato de tetrametil rodamina(ITC-TMR) .El OABjinos
tró* una fluorescencia puntual a nivel de Ias terminaciones nerviosasjel OAB_,en cambio.se distribuyõ en todo el
citoplasma,en concordância con las observaciones de Cace
res y col.(1983)en neuronas.La falacidina reconociõ a la
F-actina exclusivamente en la cara dorsal dei electrocito.De los presentes resultados puede concluirse que coexisten varias isoformas de la actina en el electrocito:
l)la isoforma detectable por falacidina en su cara dorsal,de localización discreta;2)la reconocible por el
mAb QAB2»que podría corresponder a la evidenciada por
Chançeux y col.(1986)(G-actina citoplasmãtica);3)la acti
na presumiblemente de origen neural,que detecta el mAb
QAB^,posiblemente análoga a la descrita por Wítzemann y
col.(1985)en el electrocito.La actina detectable por m |
todos bioquímicos en Ias membranas ricas en AChR parece
no corresponder a ninguna de Ias isoformas descritas aquí por métodos inmunocitoquímicos, o se halla en cantidades no detectables por estos métodos.
2
Mini-Mutac, UN NUEVO VECTOR PARA LA EXPRESIÓN
DE GENES EN PROCARIOTAS. (Mini-Mutac. a new vector
for gene expression in prokaryotes). Viale, Af. Gram a jo.
Hg y de Mendoza. DJt
Centro de Estúdios Fotosin té ticos y Bioquímicos* y Departamento de Micróbiología#, Facultad de Ciências Bioquímicas y Farmacêuticas. Universidad Nacional de Rosário,
Argentina.
La expresión regulada de genes cl on ados en E.colÍ es
realizada mediante la utilización de vectores de expresión,
piásmldos multicopia que poseen promotores regulables seguidos de sitios de restriccíón en los cuales se inserta el
gen que se desea expresar. Esto requiere un laborioso manipuleo in vitro del material genético.
Nosotros hemos construído un nuevo vector para la expresión regulada de genes en E.coli clonando el promotor
tac en el extremo derecho dei minl-bacteriõfago transposable MudII1681. Dicho bacteriõfago fue integrado al cromosoma de una cepa de E.coli lisógena para un Mucts auxiliar. Esta bacteria fue transformada con plâsmídos conteniendo genes carentes de promotores reconocíbles por Ia
RNA poli me rasa de E.coli. La expresión de estos genes
fue observada en cepas receptoras que fueron transducidas
a partir de los lisados mfxtos obtenidos luego de la inducción a 42 C de la bacteria transformada. De esta forma
se logro la expresión de genes que codifican resistência
a tetraciclina y a cloranfenicol, dei gen de la galactoquinasa de E.coli y la de genes heterõlogos como el de la
RuBisCO de R.rubrum.
La utilización de mini-Mutac como promotor portátil
in vivo ofrece una nueva alternativa para Ia expresión regulada de genes clonados en plásmidos.
Q
E S T Ú D I O S S O B R E LA C A P A C I D A D A N T I O X I D A N T E DE D E S
F E R R I O X A M I N A (DF) EN S I S T E M A S B I O L Ó G I C O S . (Stud i e s on the a n t i o x i d a n t c a p a c i t y of d e s f e r r i o x a
m i n e in b i o l o g i c a l s y s t e m s ) . V ide l a , L. A . , V i 1 l e n a , M . I . , S a l g a d o , C . y C a n a l e s , P . U n i d a d de B i o quimica,Dept. Ciências Biologicas,Fac.MedicinaD i v i s i ó n O c c i d e n t e , U n i v e r s i d a d de C h i l e .
La DF e s un a g e n t e q u e l a n t e de h i e r r o ( F e ) ,
u s a d o e n el t r a t a m i e n t o de s u j e t o s con sobrecar
ga de e s t e m e t a l . M e d i a n t e este m e c a n i s m o de aç_
c i ó n , D F i n h i b i r í a la p r o d u c c i ó n de s u p e r o x i d o
(®2*^
°
^ " ical h i d r o x i l o (HO* ) p o r Fe y
sus c o n s e c u e n c i a s l i p o p e r o x i d a t i v a s ( L P ) . Este
t r a b a j o e s t u d i a la c a p a c i d a d a n t i o x i d a n t e de D F
en s i s t e m a s b i o l ó g i c o s b a j o c o n d i c i o n e s de L P
basal e inducida.
Se e s t ú d i o el e f e c t o de d i f e r e n t e s (Í>f] s o b r e :
a ) q u i m i o l u m i n i s c e n c i a (QL) b a s a l e i n d u c i d a p o r
F e y e l c o n s u m o de 0^ (QO,) a s o c i a d o s a la auto
x i d a c i õ n de homogenizados*"de c é r e b r o de r a t a ,
b)Q0
i n d u c i d o p o r t-butil h i d r o p e r ó x i d o ( t - B H P )
en s u s p e n s i o n e s de e r i t r o c i t o s de rata y c) el
Q O j en el s i s t e m a de p e r f u s i o n h e p ã t i c a .
DF p r e s e n t a u n e f e c t o i n h i b i t o r i o de la Q L y
Q°2
*l
h o m o g e n i z a d o s de c é r e b r o , con u n a
de 0 , 6 3 y 0 , 5 2 uM r e s p e c t i v a m e n t e . En este
s i s t e m a , la a c t i v i d a d p r o - o x i d a t i v a d e i Fe es
e l i m i n a d a a u n a r e l a c i ó n m o l a r DF/F e*= o , 6 5 . El
Q O ^ i n d u c i d o p o r t-BHP en e r i t r o c i t o s e s inhibi_
do en u n 3 8 % con u n a K ^ ^ = 2 1 0 u M . DF a g r e g a d a al
s i s t e m a de h í g a d o p e r f u n d i d o d i s m i n u y e progresi_
v ã m e n t e el Q O , con u n a r e s p i r a c i ó n s e n s i b l e a
DF m á x i m a de 2 6 8 n m o l / g / m i n y K , Q = 1 2 5 u M .
Los r e s u l t a d o s i n d i c a n q u e DF es u n p o t e n t e
a n t i o x i d a n t e , t a n t o en s i s t e m a s de b a j a como de
alta velocidad peroxidativa, efecto que podria
tener u n r o l r e l e v a n t e en c i t o p r o t e c c i õ n f r e n t e
a la a c c i ó n LP t ó x i c a de x e n o b i ó t i c o s . (Financ i a d o p o r D . I . B . « U n i v e r s i d a d de C h i l e , B - 1 8 6 0 ) .
raa
2
D a s
R264
CARACTERIZACIÓN DE CLONAS GENOMICAS
CORRESPONDIENTES A COLÁGENO DEL TIPO IV.
(Characterization of genomic clones harbouring
type IV collagen) Villa, L.L., Santos, C.L.S.,
Bonjardim, C.A., Brentani, R.R.
Ludwig Institute for Cancer Research - Sao
Paulo Branch - Brasil
Two human genomic libraries constructed in
cosmids (a gift from Dr. E. Solomon from ICRF,
London) were screened for type IV collagen
sequences employing a mouse oDNA clone (Santos
et al., Nucl. Acids Res 12(4):20, 35, 1984).
We ended up with two clones which were further
characterized by restriction mapping.
Northern, Southern and hybrid selection
procedures. Both hybridize to a 7kb mRNA
species derived from total mRNA of two cell
lines involved in type IV collagen synthesis,
and we have observed that the signal with the
homologous one - human HT10-80 - is stronger
than the mouse one PYS-2. Furthermore the
hybrid selected in vitro translated product
showed a 180 Kd
polypeptide equivalent to
al(iv)chain, which is collagenase sensitive.
For the sequencing of so large inserts (25 and
35 Kb approximately) we selected restriction
fragments which hybridize with both cDNA and
specific oligonucleotides derived from type IV
collagen cDNA sequences recently published by
others. Some fragments were sele'cted, cloned
in M13 and partially sequenced by Sanger's
protocol. We've sequenced at least 5,0 Kb,
however we still couldn't find the (Gly-X-Y)n
repeats characteristic of collagen genes. A
new sequencing strategy using Exo III nuclease
which is more suitable to sequence large DNA
stretches is underway right now.
P A R N C L P A C I O N DE LOS OXLOANTES DERIVADOS DEL OXIGENO EN
LA PATOGENIA DE LA FASE CRÔNICA ACTIVA DE PROCESOS INFLA
MATORIOS. (Participation of oxygen derived oxidants in
the pathogenesis of the active chronic phase of inflammatory processess). Vivaldi, E . E., Ward, P. H. y Moreno, M. Departamento de Ciências Fisiológicas. Facultad
de Ciências Biológicas y de Recursos Naturales. Universidad de Concepción.
Independienteniente del agente etiológico, los procesos inflamatorios tienden a la cronicidad por lo menos
mediante tres mecanismos: a) persistência del agente cau
sal, favorecida o no por agentes locales, b) reactivación de procesos inflamatorios aparentemente normalizados, y c) reacciones antigeno-anticuerpo de evolución
subclinics y de potencial importância patológica.
Con el fin de evidenciar la posible participación de
oxidantes derivados del oxigeno, hemos utilizado diversos modelos experimenta les, no inducidos por microorganismos, (quemadura en ratones, infección en ratas y
reacción de Thomas en conejos) en los cuales hemos podido comprobar que la superõxido dismutasa (SOD) y/o el
alopurinol, un inhibidor competitivo de la xantino oxidasa, son capaces de inhibir la respuesta inflamatoria
y la necrosis local, lo que se manifiesta por atenuación
evidente del edema, de las alteraciones tisulares, así
coro de la migraciSn leucocitaria a la zona injuriada.
Ademãs, los animales que sobreviven debido a la acción
de la S O D se diferencian de los controles porque no presentan lesiones crônicas, cicatriciales o infecciones
sépticas secundarias.
Como se ha logrado evidenciar en algunas afecciones
cutâneas, creemos posible que la terapia prolongada oon
SOD o oon antioxidantes (vitamina A, E y C) puede interferir con procesos auto inmunes o degenerativos consecuen
tes a reacciones antigeno-anticuerpo.
ADSORCIÓN DE FOSFOLIPASA A2 A VESICULAS DE FOSFATIDIL
COLINA (Adsorption of phospholipase A2 to phosphatidylcholine vesicles). Viskatis.L.. Canziani.G.. Donnet,C.
y Vidal.J..Instituto de Química y Fisicoquímica Biológicas (UBA-CONICET). Facultad de Farmácia y Bioquímica.
Universidad de Buenos Aires.
Se estúdio la adsorción de fosfolipasa A2 de veneno de
Bothrops neuwiedii a vesiculas de fosfatidilcolina de
yema de huevo por cromatografía en condiciones de equilíbrio en Sepharosa 4B-CL. Se erapleó el formalismo desarrollado por STANKOWSKI para la region de bajas densidades de ligadura. Los parâmetros calculados a partir dei-,
gráfico de Scatchard fueron Kasoc = 1.08 (- 0.2)x 10 M
y n = 23 (-4). La enzima puede ser considerada como un
ligando con forma de disco y aplicar, entonces, la aproximaciõn de ANDREWS, que permite calcular la fracción de
sitios libres a saturación arbitraria. Se puede obtener
un gráfico normalizado para ligandos con forma de disco,
independiente de los valores de Kasoc y n. El valor de
los parâmetros de.ligadura a partir de dicho gráfico fue
Kasoc= 1.025 x 10 M~ y n=25. El gráfico de Hill lineal y
de pendiente unitária se obtuvo al representar log(X/l-X
en función de log (fracción molar de sitios libres), en
vez de log ( i i b ) •
alejamiento de la respuesta hiperbólica (p.ej. isoterma de Langmuir) se debe a la acumulación de espacios entre Ias moléculas adsorbidas. Los
cálculos termodinâmicos demuestran que el reordenamiento
de Ias moléculas adsorbidas para permitir mayor ligadura
requiere una disminuciõn de la entropia de mezcla y, por
lo tanto, la saturación de la superfície resulta ser un
proceso no espontâneo.
+
p c
E
1
r e
STANKOWSKI, S. (1983) Biochim.Biophvs.Acta 735, 352-360
ANDREWS, F.C. (1975) J.Chem.Phys. 62, 272-275
A N T I C U E R P O S E S P E C Í F I C O S A N T I - T . C r u z i E N U N A P O B L A C I O N HU
MANA D E LA R E G I O N M E T R O P O L I T A N A (Anti-T.cruzi s p e c i f i c
a n t i b o d i e s in a h u m a n p o p u l a t i o n o f t h e R e g i o n M e t r o p o L i
t a n a ) . Wallace,A.* Sanchez,G.**y Potocnjak,P.**. *Dpto.
de M e d i c i n a E x p e r i m e n t a l . F a c . d e M e d . D i v . N o r t e . **INTA.
En l a fase c r ô n i c a d e l a e n f e r m e d a d d e C h a g a s T . c r u z i
p u e d e p e r m a n e c e r d u r a n t e t o d a l a v i d a d e l h o s p e d e r o . En
e l h o m b r e e s t a s i t u a c i õ n e s p o s i b l e p o r un e q u i l í b r i o en
t r e la v i r u l ê n c i a d e l p a r a s i t o , q u e v a r i a d e a c u e r d o a s u
o r i g e n g e o g r á f i c o , y a l a c a p a c i d a d d e l h o s p e d e r o d e desa^
rrollar u n a respuesta inmune eficiente. Esta última puede m a n i f e s t a r s e e n n i v e l e s v a r i a b l e s de a n t i c u e r p o s espe
c í f i c o s . E l p r o p ó s i t o d e e s t e e s t ú d i o f u e e s t a b l e c e r los
t í t u l o s de a n t i c u e r p o s a n t i - T . c r u z i en u n a p o b l a c i o n h u m a n a d e l C a j õ n d e l Maipo,Region M e t r o p o l i t a n a y s u e s p e c i f i c i d a d p o r r e a c t i v i d a d con c e p a s d e l p a r a s i t o a i s l a das en C h i l e y o t r a s r e g i o n e s de S u b a m e r i c a .
Los s u e r o s s e o b t u v i e r o n d e 4 3 p e r s o n a s con e d a d e s e n tre 6 y 8 4 a n o s . L o s t í t u l o s de a n t i c u e r p o s I g G e IgM e s pecíficos anti-T.cruzi fueron determinados p o r díluciõn
s e r i a d a d o b l e en r e a c c i ó n d e E L I S A e I n m u n o f l u o r e s c e n c i a
I n d i r e c t a , I F I , s o b r e f o r m a s d e c u l t i v o . L a a c t i v i d a d líti^
c a se m i d i õ s o b r e t r i p o m a s t i g o t e s s a n g ü í n e o s v i v o s a i s lados d e r a t o n e s i r r a d i a d o s .
E l 81.0% d e los s u e r o s r e s u l t a r o n p o s i t i v o s e n I F I y
E L I S A . L o s t í t u l o s d e a n t i c u e r p o s I g M v a r i a r o n e n t r e 1/40
y 1/1280.Los t í t u l o s d e a n t i c u e r p o s I g G v a r i a r o n e n t r e
1/20 y 1/5120.Los a n t i c u e r p o s líticos s e d e t e c t a n s o l o
en un 2 5 % d e los s u e r o s y se c o r r e s p o n d e n c o n los t í t u los m ã s a l t o s e n I g G . N o t o d o s los s u e r o s p o s i t i v o s l í t i cos p a r a l a c e p a T u l a h u e n r e a c c i o n a r o n con la cepa Y .
Las d i f e r e n c i a s o b s e r v a d a s en a c t i v i d a d l í t i c a s u g i e r e
d i v e r s i d a d a n t i g é n i c a e n t r e Ias c e p a s d e T . c r u z i q u e apo
y a n la e x i s t ê n c i a de s u b p o b l a c i o n e s d e l p a r a s i t o . E l r e s u l t a d o d e i d i a g n o s t i c o p o d r í a d e p e n d e r de la cepa u t i l i
z a d a lo cual t e n d r í a i m p l i c â n c i a s en Ias d e t e r m i n a c i o n e s
epidemiolõgicas.
Financiamiento: Proyecto 1083/85 FONDECYT.
Financiado p o r Proyecto B1475-8544. DIB, U.de Chile.
R265
INCORPORACIÓN
A BICAPAS LIPIDICAS DE
GRANDES
POROS
SELECTIVOS A CATIONES DE PEROXISOMES DE
H I G A D O D E RATA.
(Large c a t i o n - s e l e c t i v e pores
from rat l i v e r p e r o x i s o m a l m e m b r a n e s
incorporated
to p l a n a r l i p i d
bilayerB).
Wolff.D. .
L a b a r c a . P. * .
1.
Depto.
d e B i o l o g i a , Fac. d e
Ciências,
U.
d e C h i l e . 2. C e n t r o d e E s t ú d i o s
Científicos de Santiago.
Evidencias
indirectas indican que los los
p e r o x i s o m e s son a l t a m e n t e p e r m e a b l e s a s o l u t o s
de bajo peso molecular, pero las bases molecul a r e s del t r a n s p o r t e n o s e c o n o c e n .
La i n c o r poración de membranas peroxisomales a
bicapas
lipidicas
p o s i b i l i t a el e s t ú d i o e l e c t r o f i s i o l ó g i c o d e s u s p r o p i e d a d e s d e p e r m e a b i l i d a d . La
fusion
de
membranas de
peroxisomes
de
una
fracción
altamente purificada incorpora poros
de
alta conductancia selectivcw a cationes
y
s e n s i b l e B al v o l t a j e .
La r a z ó n d e p e r m e a b i l i dadea,
P / P c I e s a p r o x . 4. L o s p o r o B m u e s t r a n
vários
estados de conductancia
y
permanecen
abiertos
la
m a y o r p a r t e dei t i e m p o a
O
mV,
cerrándose
a potenciales más positivos y
más
n e g a t i v o s . A v o l t a j e a c e r c a n o s a O mV e l e s t a do
abierto más frecuente presenta una conduct a n c i a d e 2, 4 n S en K C 1 O , 3 H.
A voltajes más
p o s i t i v o s y m á s n e g a t i v o s d e - 1 0 mV el
estado
abierto
más frecuente tiene una
conductancia
de
1,2 n S .
Con e s t o s v a l o r e s d e c o n d u c t a n c i a
s e e s t i m a r o n d i â m e t r o s d e 3 y 1,5 nm r e s p e c t i vamente.
Estos
resultados
sugieren
que
la
presencia
de estos grandes poros podria
dar
c u e n t a d e la
alta permeabilidad de los
peroxisomal
a solutos de bajo peso molecular.
Se
i n c o r p o r a t a m b i é n un c a n a l a l t a m e n t e s e l e c t i v o
a
aniones que presenta dos
estados
abiertos
con
c o n d u c t a n c i a d e 5 0 y 1 0 0 p S en K C 1 O,1 M.
( L a b a r c a et a l :
J. M e m b r a n e B i o l . , e n p r e n s a ) .
Financiado
por
Proyectos
DIUC
79/86,
FNC,
1181/85,
y Fundación Tinker.
PRESENCIA DE ÜTOTENSINA II EN NEURONAS QUE ODNTACTAN EL
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO DEL CANAL CENTRAL DE PECES. (Pre
sence of urotensin II in central canal-cerebrospinal
fluid-contacting neurons of fishes). Yulis,C.R., Lederis ,K. Institute de Histología y Patologia, Fac.Medicina, Universidad Austral de Chile y Department of Pharmacology and Therapeutics, University of Calgary.
6 formas diferentes de urotensina II (UII), presentes
naturalmente en urófisis de 3 espécies de teleosteos (Gi
llichthys UII, Cyprinus UII,«i, p y£-y Catostcmus UII A,
B) han sido demostradas. La disponibilidad de anticuerpos específicos contra Gillichthys UII que reaccionan
cruzadamente con todas Ias formas conocidas de la rroléou
la, permitia el estúdio iriamocitcquímico de la distribu
cion de este péptido en el sistema nervioso central (SNCj
de Catostcmus cammersoni y otras espécies de peces. Se
observa la presencia de inmunoreactividad (IR) para UII
en la mayoría (90%) de Ias neuronas neurosecretorias cau
dales, en colocalizaciân con urotensina I. Estas neuronas proyectan la mayoría de sus prolongaciones hacia la
urófisis donde terminam alrededor de vasos sangüíneos.
Rostraljnente a la 6ta. vertebra preterminal se demostro
la presencia de un sistema sagital de neuronas UII-IR,
localizadas ventralmente al canal central a lo largo de
toda la medula espinal y dei bulbo raquídec. Sus dendritas se dirigen hacia el canal central donde algunas de
ellas contactan can el líquido cefalorraquídeo (LCR).
Axones arrosariados originados en estas neuronas forman
un plexo medial y un tracto longitudinal bilateral en la
medula espinal. Probables dilataciones terminales de es
tos axones fueron encontrados en la superficie ventrola
teral de la medula y en diversas regiones cerebrales.
El sistema descrito de neuronas que contactan el LCR fue
visualizado incluso, en espécies filogenêticamente antiguas de peces cartilagíneos (Hidrolagus Collei) en los
cuales un sistema caudal neurosecretorio no es evidente.
R E A C C I Ó N TISU LAR A COMPRIMIDOS DE PROGESTERONA.
(Tissue reaction to progesterone pellets). Zepeda, A.,
C r o x a t t o , H . D . , I n s t i t u t o C h i l e n o de M e d i c i n a
R e p r o d u c t i v a y S e r v i d o de Anatomia Patológica,
H o s p i t a l C l í n i c o Universidad Católica de Chile.
(Patrocínio: H.B. Croxatto)
Los comprimidos de progesterona implantados bajo
la piei en humanos son expulsados con mayor frecuencia
que los de otros esteroides
y ciertas técnicas de
fabricación se asocian a una mayor tasa de expulsion.
Se c o m p a r o entre sl la r e a c c i ó n tisular (RT) a
comprimidos de progesterona de d i s t i n t a t e x t u r a
superficial y con implantes de otros materiales. La
comparación fue intra e inter espécie. Se fabricaron
t a b l e t a s con p r o g e s t e r o n a en polvo ( P p ) o c o n
progesterona precomprimida (PreC), constatándose por
microscopía electronics de barrido que la textura
superficial de PreC es más lisa que la de Pp. Luego se
implantaron bajo la piei de ratas y cobayos usando
como c o n t r o l e s a n i m a l e s no i n t e r v e n i d o s , con
implantación
s i m u l a d a , c o n t a b l e t a s de
talco/colesterol (control positivo) y con implantes de
s i l i c o n s ( c o n t r o l n e g a t i v o ) . Los animales se
s a c r i f i c a r o n a los 7 , 21 6 90 d í a s . También se
colocaron subeutâneamente tabletas de Pp en perros y
cerdos y se estúdio la RT a estas a los 30 días. La RT
a Pp y PreC no mostro diferencias en rata, pero fue
m á s severa a Pp que a PreC en cobayo. La RT fue
granulomatosa a todos los implantes en cobayo, perro,
cerdo y sólo a talco/colesterol en rata. Ninguno de un
total de 113 implantes fue expulsado. Se concluye que
hay diferencias en la RT a implantes subdérmicos entre
espécies y entre i m p l a n t e s , pero n i n g u n o de los
modelos animales remeda el fenômeno de expulsion
o b s e r v a d o en h u m a n o . No hay una RT específica a
progesterona. La diferencia de textura superficial
entre los implantes de progesterona se asocia a
diferentes grados de RT en cobayo.
PURIFICACI0N Y CARACTERIZACION DE D-XILOSA-INADP+l-DESHIDROGENASA DE HIGADO DE CERDO. (Purification and
characterization of D-xylose dehydrogenase from pig
liver). Zepeda, S.' y Ureta, T. Departamento de Biologia, Kacultad de Ciências, Universidad de Chile.
'Departamento de Biologia, Universidad de La Serena.
1
M
Financiado por IDRC, Canadá
Financiado por Proyecto S-85-39, Dirección Investigación
U.A.CH. y Alberta Heritage Foundation for Medicai Research.
Se ha demostrado la presencia de deshidrogenasas
relativamente especilicas para pentosas libres en algunos tejidos de mamíferos, una de las cuales cataliza la
oxidaeion de D-xilosa a D-xilonolactona (Ureta y Radojkovic, FEBS Lett. 9, 57-60, 1970). Esta D-xilosa-NADP*deshidrogenasa se ha identificado en higado de cerdo y
degu pero no habia sido purificada ni caracterizada.
D-xilosa-deshidrogenasa se purifico a partir de
citosol de higado de' cerdo mediante un procedimiento
que se resume como sigue: 1. Absorción negativa en CMcelulosa; 2. Precipitaciôn con sulfato de amonio entre
40-70% de saturación; 3. Cromatografía en DEAE-celulosa; h. Filtración en Sephacryl S-300; 5. Cromatografía
en hidroxil-apatita; 6. Absorción en blue 2-agarosa y
elución específica con NADP+. La preparación final
tiene actividad especifica de 5,9 + 0,7 unidades/mg de
proteína y presenta una banda por electroforesis en
poliacrilamida-SDS. El pH Optimo es 7,8. El valor de Km
para D-xilosa es 7,6 mM y para N A D P 0 , 1 mM. Además de
D-xilosa, la enzima puede oxidar L-arabinosa con velocidad máxima menor (50%) y Km ap 8 veces mayor. N A D n o
reemplaza a NADP pero es un inhibidor incompetitivo.
Por cromatografía de exclusion se encontro un valor de
Mr de 63.600. Por electroforesis en poliacrilamida-SDS
se calculo un valor de Mr de 33.300, lo que sugiere que
la enzima nativa es un dimero de unidades dei mismo
peso molecular. Gráficas de dobles recíprocos obtenidas
de estúdios en velocidad inicial resultaron en lineas
paralelas lo que sugiere un mecanismo ping-pong.
El aislamiento y caracterizacion de D-xilosa-NADPdeshidrogenasa permitirá la investigación de la o Ias
vias metabólicas de utilización de D-xilosa en mamíferos. (Financiado por DIB (B-1989-8635) U. Chile).
+
+
+
R 266
P O S I B L E R O L EN A . T U M E F A C I E N S D E L 1 - 2 G L U C A N O
EN L A O S M O R E G U L A C I O N . (Posible r o l e in A . t u m e
f a c i e n s of ^ 1 — 2 g l u c a n in o s m o r e g u l a t i o n )
fingeles Z o r r e g u i e t a , S o n i a C a v a i g n a c , R o b e r t o
Geremla y Rodolfo Ugalde.
I n s t i t u t o de I n v e s t i g a c i o n e s B i o q u í m i c a s , F u n dación Campomar, Buenos A i r e s , Argentina.
CULTIVO UNI ALGAL DE SCENEDESMUS ACUTUS (MEYER), EN CONDICIONES DE LABORATÓRIO. (Unialgal culture of Scenedesmus acutus (Meyer) under laboratory conditionsT.
A. Zfifiiga, Laboratório de Limnología, Departamento d e
Botânica, Universidad de Concepción. (Patrocinio: P.
Mancinelli).
La espécie Scenedesmus acutus (Meyer) se aislo d e
muestras de agua de laguna Lo Mêndez (36, 5 0 Lat. S u r ,
73,2' Long. W.) hasta obtener un cultivo unialgal.
1
Agrobacterium y Rhizobium sintetizan
gluc a n o s , los c u a l e s se e n c u e n t r a n en el e s p a c i o
p e r i p l ã s m i c o y en el m e d i o de c u l t i v o . Se ha
d e s c r i p t o (Miller y c o l . . S c i e n c e (1986) 2 3 1 ,
48) q u e en m é d i o s d e a l t a o s m o l a r i d a d , A . t u m e f a c i e n s C 5 8 no s i n t e t i z a el g l u c a n o . E s t o s
resultados fueron confirmados utilizando otra
cepa de A . t u m e f a c i e n s . M u t a n t e s no v i r u l e n t a s
de A . t u m e f a c i e n s q u e no s i n t e t i z a n el p i - 2
g l u c a n o f u e r o n i n c a p a c e s d e c r e c e r en m é d i o s
de b a j a o s m o l a r i d a d (19 m o s M ) . El c r e c i m i e n t o
se r e s t a u r o c u a n d o la o s m o l a r i d a d fue de 29
mosM. Estos resultados indicarían una función
dei g l u c a n o en la o s m o r e g u l a c i ó n . S e e s t ú d i o
el s i s t e m a e n z i m ã t i c o d e s i n t e s i s "in v i t r o "
del p l - 2 g l u c a n o con m e m b r a n a s i n t e r n a s d e
células que fueron cultivadas a diferentes
o s m o l a r i d a d e s . P o r o t r o l a d o , se e s t ú d i o el
efecto de distintos osmolitos, CINa, C1K, sac a r o s a y m a n i t o l , sobre la s i n t e s i s "in v i t r o "
del b 1-2 g l u c a n o .
Las condiciones de cultivo fueron: temperatura de
22° ± 3°C; fotoperíodo 12:12; estímulo lumínico de
150 uE m ~ seg y medio de cultivo Hoagland al 50$. Se
utilizo vasos de cultivo de 500 cc.
2
El crecimiento se registro dos veces al dia median
te el control de densidad óptica, concentracion de ciorofila "a" y recuento de nCmero de células.
Los resultados permiten definir una fase de adaptaciõn no mayor a 2k horas y una fase de crecimiento
exponencial c a . 7 días.

iv congreso cono sur asocíacíon pan ame ri can a

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