MANUAL PARA EL CULTIVO DE MICROALGAS Bi LOGO

Transcripción

UNIVERSIDAD
AUT NOMA
DE BAJA
CALIFORNIA SUR
`REA INTERDISCIPLlNARIA
DE CIENCIAS DEL
MAR
DEPARTAMENTO DE
BIOLOG A
MARINA
MANUAL PARA EL CULTIVO DE
MICROALGAS
MEMORIA T CNICA DE UN TRABAJO
PROFESIONAL
QUE COMO UNO DE lOS REQUISITOS PARA
OBTENER El
Bi LOGO
T TULO
DE
MARINO
PRESENTA
ABRIL KARIM ROMO
PI ERA
la Paz B C S
diciembre de 2002
f
1
y
0
t
OTEC
054616v
rTE
I 26G3
I
I
L
v
AUT NOMA
UNI TERSIDAD
I
BAJA CALJFORNli SlJR
Ap
1J1J
lit
Co
lo Posl
o
I
L I dJ
RicA
I
TUmiSl
ll
DE
D
k 1ll
1110
T h
Illi
l IJ
I
j
d
12li 0 132
ItC S
bx In os 01
In
10
RL
CIE
CL S DI
1111
1I1
I
l
I
119 11
1JI 23lJliO
L R
11ngiJ
tri
n
1
F ccha
BIOL
lAR EMELIO BAIUAlJ GONZAL
2
0
Z
BIOLOG A
JEFE DEL DEPARTAMENTO DE
bu
iL t 2
3
1 lARINA
PRESF NTE
firmantes comunicamos
abajo
realiz
el
ron
la
pas
Con el Titulo
lIItc
1Q
J
Q
J
e
R
o
C
l C
C
c
rJ
Dilœ1
p Il1kr
1 1
1
r
eld
Sf
c
T
i
L
J
h
i
l
n
Q0
Nombre
C
Completo
D
r uLtr
J 1œ
1
el
C
I
I
1
11111
ti
L
l1ciJ
SI
CRET
RIO
1
OC
111
1
I
I
ok
Sll ll ll
Firll1J
SUPLE7 TE
c
Id
I
Z
Completo
il hlllri
1
I
1
Completo
IllkIJ
1
j
t
Nombre
1
d
r
BG
h
R
Nombre
ec l
a
l
ttv
c
1C
eje rllx
qut
a
cr
pjF
Completo
Q
hf
O
i
RQt
de Tesis
Trabajo
t@A l
Jt
ve J ˙
Numbrl CO llpkt
U f
LOlhvo
s lclo el
J
uL
o lf
L
irt
lŁ
Cl mpklO
Nombre
´
jJ e1
pQ
it
ombI
que habiendo
A6 LJ Ot
5
C
rr
u
rr
Usted
1
u
Los
Itr
s
DIRECTOR
DEDICATORIA
A Dios
A Osmar por existir por
su amor
A Daniel
comprensi n
por
su amor
y por
ser lo
mejor
compaæ a
de mi vida
y apoyo
siempre y
en
todos
aspectos
A mis
padres Laura y Francisco por
su
cariæo
confianza y apoyo
vida
A mis hermanos Paco Laura y Yazm n
por
su
cariæo
en
toda mi
AGRADECIMIENTOS
Muy especialmente a Erika por su amistad ayuda y enseæanza tanto
profesional como personalmente por las revisiones ideas correcciones y
demÆs
inicio
Al
cosas
en
Doc
hechas
a
este documento
Østa Ærea Gracias
Rangis por
ayuda que
me
A los demÆs
su
amistad
ha brindado
integrantes
amigocha
Jefe
del
sus
ademÆs de
ahora si
quedo
ser
enseæanzas
iPor fin
aqu
la persona que
me
listo
las comidas y
esta la tesis
por toda la
proyecto Cultivo de Pteridos Hector Hugo Champ
tambiØn la
y Alex a quien agradezco
ademÆs del acomodo de grÆficas
ayuda en la revisi n
ndices fotograf as etc
de este documento
A mis
compaæeros de generaci n X el Ofelia y Carlitos con quienes logre
ademÆs de un trabajo en equipo una gran amistad En especial a Marichu por
su cariæo y bastantes platicas y parrandas junto a Ella al Negrito por su
amistad y a ambos gracias por adoptar a mi hijo como su sobrino y en la
impresi n de este trabajo
A mis
compaæeros de trabajo en la Unidad Don Cuiti por sus dulces y platicas
A Micke por la ayuda elØctrica e hidrÆulica en el laboratorio a Edgar por su
ayuda para los cultivos masivos a Esther por sus platicas ademÆs de su
ayuda con los anÆlisis bacteriol gicos a Efra n por su amistad por darme una
mano cuando necesitaba ayuda y por ser nano de mi hijo cuando lo he
necesitado
Gracias tambiØn
a
Marco Cadena por
que a Roberto Carmona por la
ayuda
parte de mi comitØ revisor al igual
la parte estad stica de este trabajo
ser
en
Romo Piæera Abril
UABCS
Karim
2001
Manual para el cultivo de
mieroalgas
Memoria tØcnica
profesional
50pp
NDICE
PRO LOGO
1
G LO SARIO
2
1
3
mTRO D Ue el o N
2 o BJETIV o
9
3 CONTROL DE LOS
REQUERIMIENTOS F˝SICOS
Y
QU˝MICOS
EN EL
LADO RA TO RIO
9
3 1 PARAM ETROS FISICOS
9
3 2 PARAM ETROS QUI M ICOS
11
4
12
EQUIPO
DE TRABAJO
4 1 AREA DE GAS I N ETE
12
4 2 AREA H U M ED A
18
4 2 1 TRATAMIENTO DEL AGUA UTILlZADA
18
20
2 2 CULTIVOS MASIVOS
4
5 ASPECTOS IMPORTANTES DEL CULTIVO DE MICROALGAS
5 1 CONT AMINA e 10 N
5 1 11NDICADORES DE
5 1 2 INDICADORES DE
22
CONTAMINACi N QU MICA
CONTAMINACi N BIOL GICA
5 2 CONTROL DE LA CALIDAD DEL AGUA
5 3 I N oe u LO
MARINA
23
23
25
5 1 SIEMBRA EN LIQUiDO
4
28
S LIDO
BACTERI OL G ICOS
4 2 SIEMBRA EN
5
AN`LI S IS
23
24
5 4 NIVEL CEP ARIO
5 5
22
30
33
6 EVALUA CIO N DE LA BIOMASA
6 1 HEMA TOCIT
METRO O C`MARA
35
DE NEUBAUER
6 2 E SPECTo FOTO METR O
35
37
2 1 CURVAS DE
6
38
CALIBRACi N
Romo Piæera
UABCS
Abril Karim
2001
mieroalgas
Memoria tØcnica
profesional
50pp
7
IES
ESPEC
EXISTENTES EN EL LEAP
44
r
Bm LIOG RAFIA
ANEXO I
45
FORMULACI N PARA
LA PREPARACI
N DEL MEDIO DE CULTIVO
F 2 DE GuaLARD y RYTHER 1973
47
ANEXO n BIT` CORAS DE APARA TOS
49
r
BITAeoRA AUTOCLAVE
50
r
BITAeo RA MICROSCO PIo
51
BITAeo RA BALANZA
52
BITAeo RA DESTILADOR
53
BIT`CORA SISTEMA
DE
FILTRACI N
ANEX O ID CRIS TALERIA
E
IRRADIACI N
DE AGUA
INVENTARIO
54
MARINA
55
ANEXO IV PROTOCOLO DE USO DEL SISTEMA DE FILTRACION E
RAD lACIO N D E AGUA MARINA
IR
NDICE
Figura
Figura
Figura
Figura
56
DE FIGURAS Y TABLAS
1
Curva
representativa de crecimiento de
un
cultivo estÆtico de
Material utilizado para cultivos estÆticos
3 Autoclave para esterilizaci n de
material
4 Campana de flujo laminar Utilizada para siembras y elaboraci n de
vitaminas esterilizadas
Figura
Figura
Figura
Figura
Figura
Figura
Figura
Figura
Figura
Figura
2 Cristaler a
5 Destilador de agua
6 Sistema de filtraci n
7
e
irradiaci n de agua marina
Sistema hidrÆulico
plÆstico montada
10 Estante
con
a
en
nivel
el sistema de
cepario
columpio
y cultivos estÆticos
en la campana de flujo laminar
colocados
sobre una pipeta de 5 mL
agar
Sembrado en zig zag sobre agar
13 Tubos
14
cultivos
con
cepario
19
21
precisi n
12 Siembra del
16
20
marino
9 Bolsa de
Horno de
15
18
8 Cultivos masivos
11
8
microalgas
13
21
25
27
28
31
32
11
Romo Piæera
UABCS
Abril Karim
2001
mieroalgas
Memoria tØcnica
profesional
50pp
Figura 15 Diiluci n del cultivo para la
toma de muestra en un anÆlisis
bacteriol gico
34
Figura
un
16 CÆmara de conteo Neubauer Utilizada para
cultivo
conocer
la concentraci n de
35
Figura 18 Tendencia de la regresi n entre la absorbancia y la densidad de
Isochrysis galbana en cultivos de 1 OOL
Monochrysis
luther
en
cultivos de 1 OOL
Figura 20 Tendencia de la regresi n
Dunalliela tertiolecta
Figura
21
en
39
39
entre la absorbancia y la densidad de
cultivos de 1 OOL
40
Tendencia de la
Chaetoceros
gracilis
regresi n entre la absorbancia y la densidad de
en cultivos de 1 OOL
41
entre la absorbancia y la densidad de
Figura 22 Tendencia de la regresi n
Isochrysis galbana en cultivos de 400L
Monochrysis luther en cultivos de 400L
Figura
en
cultivos de 400L
42
42
43
25 Tendencia de la
Chaetoceros gracilis
Tabla 1 Relaci n de
Tabla 11
regresi n entre la absorbancia y la densidad de
en cultivos de
400L
interruptores y
Tiempos de irradiaci n para los
1O
lÆmparas
14
matraces
Tabla 111 Relaci n del volumen de agua marina yagua destilada
Tabla IV
Proporci n de vitaminas y silicatos de acuerdo al valumen
44
26
a
29
utilizar
ili
Romo Piliera
UABCS
Abril Karim
2001
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
50pp
PR LOGO
La Unidad
ubica
en
junto al
Pichilingue de la Universidad Aut noma de Baja California Sur
el km 16 de la carretera La Paz
La
mar
Unidad
en un
Ærea concesionada
depende acadØmica
Coordinaci n de Ciencias del Mar debido
a
y administrativamente de la
la naturaleza de las actividades que
la acuacultura y la pesca
Para el aæo de 1993 el Laboratorio Experimental de Acuacultura de la Unidad
se
desarrollan
Pichilingue
se
Pichilingue
como son
LEAP
de la Universidad Aut noma de
Baja California Sur inicia sus
nivel superior y la investigaci n
actividades
para respaldar la docencia a
teniendo como l neas prioritarias el cultivo de moluscos y el cultivo de peces
marinos Siendo tambiØn sede de la Maestr a en Ciencias en Acuacultura del
Programa Regional de Posgrado
El
LEAP
consta de
laboratorio
seco
Æreas
donde
en
Acualcultura
especializadas
se
localizan
las
divididas
Æreas
de
en
dos
secciones
Histolog a
El
Qu mica
Microbiolog a y Microalgas El laboratorio hœmedo donde se encuentran las
Æreas de Cultivo de Microalgas Cultivo de Moluscos Cultivo de Peces Planta de
Alimentos Balanceados y Ærea de Temperatura Controlada
Todas las Æreas tienen como principio dar respaldo a las labores docentes y de
investigaci n en particular para la realizaci n de prÆcticas capacitaci n y
entrenamientos
para el asesoramiento continuo de los
trabajos de tesis para los estudiantes de licenciatura maestr a y doctorado tanto
de nuestra Instituci n como de las Instituciones de educaci n superior o
investigaci n
espec ficos
con
las que
se
as
como
tengan convenios vigentes
1
Romo Piiera Abril Karim
UABCS
2001
Memoria tØcnica
microalgas
profesional
50pp
GLOSARIO
AGAR
Polisacarido extra do
como
AISLAMIENTO
agente
de Gelidium y otras algas marinas utilizado
en medios de cultivo
solidificante
Obtenci n de cultivos
monoalgales
a
partir
de
muestra de
una
agua
ASEPSIA
Estado libre de
BACTERIA
Procariota unicelular
CEPA
Cultivo puro de
COSECHA
Extracci n de
alcanzado
ESTERILIZACi N
una
especie
microalgas
una
Destrucci n
microorganismos pat genos
del
determinada de
recipiente
microorganismos
de cultivo
una vez
que han
densidad deseada
total
de todos
los
organismos
que
viven
en
un
volumen de agua
FOTOAUT TROFOS
FOTos NTESIS
Organismo
capaz de sintetizar su
sustancias inorgÆnicas usando la luz
Proceso de s ntesis
propio
como
de carbohidratos
carbono yagua utilizando energ a
clorofila en las cØlulas vegetales
fuente de
partir
Organismo
INOCULAR
Procedimiento de transferencia de
a
partir
en
de
captada por
compuestos orgÆnicos complejos
microalgas
de
energ a
de bi xido
radiante de la luz
HETER TROFOS
que necesita
fuente de carbono
a
alimento
la
como
los diferentes
niveles del cultivo
MEDIO DE CULTIVO
Soluci n
MIXOTR FICOS
Organismo
u
otro substrato utilizado para cultivar
de
capaz
reproducirse
en
microorganismos
luz
u
pueda utilizarse
en
presencia
de
oscuridad
NUTRIENTE
TØrmino
genØrico
para
cualquier sustancia
los procesos metab licos de
pH
Logaritmo negativo
virtud de la cual
se
un ser
que
vivo
de la concentraci n
del ion
expresa el grado de acidez
o
hidr geno por
alcalinidad de un
l quido
SOLUCi N STOCK
Soluci n
fÆcil
que contiene el medio de cultivo concentrado para
su
manejo
2
Romo Piflera
UABCS
Abril Karim
2001
Manua para el cultivo de mieroagas Memoria tØcnica
profesional
50pp
INTRODUCCi N
1
El cultivo de
considerando
conocido
microalgas
en
cultivos de apoyo
como
esta definici n tambiØn al cultivo de
desarrollo de los cultivos
esto
principales
en su
suministro de
medio de biomolØculas
energ a por
transformados
complejos
travØs
a
la
mayormente contribuyen
a
reservorios
de estos
pilares
La
posici n
producci n
por estos Hoff y Snell 2001
se
han
sustituir
podido
larvaria
aporte
como
de
primordial
es
microalgas son
las
Estas
en
los ocØanos
ciclo
encargadas
microalgas
el
en
su
sintetizadas de elementos
de biomasa
organismos
Es as
como
Las
de la fotos ntesis
bases de Østas debido al
o
zooplancton
anexos
para los moluscos durante todo
es
de vida crustÆceos y peces
etapa
cultivos
o
del
menos
las que
son
estuarios
lagos
y
dentro de las redes tr ficas forman los
de las biomolØculas sintetizadas
energ a
hasta el momento estos
fuente nutricional para
microorganismos
cualquier organismo
en
no
cultivo
Caæizares et al 1994
El tØrmino
otros
microalga
pigmentos
se
refiere
fotosintØticos
sentido taxon mico
alguno
a
aquellos microorganismos
que contienen clorofila y
capaces de realizar fotos ntesis
y dentro del mismo
se
Este tØrmino
incluyen organismos
con
no
tiene
dos
tipos
celulares distintos cianobacterias que tienen estructura celular procariota y las restantes
microalgas
con
estructura celular eucariota Pese
fisiol gicamente
ambos
tipos
metabolismo fotosintØtico
generalmente
los
de
microalgas
procariotas
cianobacterias
con
tiempos
y de 8
a
las
grandes diferencias
eucariota y
similar al de las
por divisi n binaria
a
procariota
plantas superiores
de
duplicaci n
24 horas
o
de
son
La
una
estructurales
similares
con un
reproducci n
hora
o menos
mÆs para las eucariotas
es
para
Carpenter
1979 Dawes 1991
stos organismos
de biomolØculas sintetizadas
primarios
a
energ a
composici n
qu mica
de
su
Son
pared
otras caracter sticas
puedan
fotosintetizadores
seleccionar
a
organismos
celular el
tipo
son
partir
considerados
de la transformaci n de
unicelulares
de clorofila
utilizadas para clasificarlas
aquellas que puedan
como
los
y de
cuales
productores
energ a
luminosa
dependiendo
pigmentos accesorios
permiten que
cultivarse
los
Carpenter
de
entre
de tal diversidad
1979
la
se
Hoff y Snell
2001
3
Romo Pinera Abril Karim
UABCS
2001
No todas las
requieren
Æcidos
de
pueden reproducirse
microalgas
igual
en
heterotr ficamente
luminosa y
sustancias
otras
de
energ a
Memoria tØcnica
microalgas
profesional
alga
de luz
de
nutrientes Aœn cuando
especies
se
la
algunas
al
que
no
los azœcares y
es
que
Hoff y Snell 2001
encuentran virtualmente
cada clase
en
de obtener la
capacidad
en
energ a
la utilizaci n de la
utilizando bi xido de carbono as
qu mica
obligados
de este grupo
se
con
base
a
anÆlisis
en
experimentaci n
especies pueden
de estas
cuando los niveles de nutrientes
como
a
mixotr ficas esto
son
la oscuridad
algunos integrantes
Ufotoaut trofos
tales
necesidades alternando
a
explic
como se
1974
orgÆnicas Oroop
como
o en
sus
transformaci n
que
fotoaut trofas
compuestos orgÆnicos
fotoaut trofa tiene la
dependiendo
su
son
verdaderas heter trofas debido
son
forma muchas otras
presencia
El
Cabe mencionar
etiquetados
este grupo
en
heter trofas y mixotr ficas
taxon mica del grupo
energ a
algunas
de luz y toman la
orgÆnicos
Las
incluidas
especies
de esta secci n
principio
como
SOpp
transformarse
encuentran sustancialmente arriba
han sido
con
en
heter trofas
por
o
niveles de
debajo
de
las condiciones naturales Gladue 1991
El crecimiento
crecimiento
mieroalgal
aquel
es
microalga
de tolerancia de
una
Es
por la
fluctœa
para
un
Caæizares
conocer
potencial
en
el cultivo
de crecimiento
crecimiento activo
es
del
como
en
depende
salinidad y
Al
igual
influencia
que
en
intervalo de
como
cualquier
conseguir
para
in culo
Caæizares
otro
el crecimiento de la
temperatura
de carbono y
energ a
ox geno
y los l mites
parÆmetros
Ahora
cambian cuando
un
mencionar que mÆs que la influencia de
de
mieroalgas
m nimo
y f sicas
su
en
suministro de
luz aireaci n
vivo las condiciones f sicas
Cada
especie presenta
preferencias espectrales
de
un
cultivo
qu micas
desarrollar
pueden
1994
microalga
producci n
un
viable de tamaæo
organismo
intensidad de luz
para la
critico
tanto de la concentraci n de
que las cØlulas
nutrientes y microelementos adecuadas condiciones
temperatura
al m nimo
ptimas
las condiciones
parÆmetro generalmente
grado
un
pr ximas
1994
Por tanto
I ecesario
decir el factor Iimitante del
el mayor nœmero de
o
En el cultivo masivo el rendimiento alcanzado
las cØlulas
es
cantidades mÆs
en
para todos
l mites
o
del m nimo
ley
importante
microalga
estas condiciones
segundo parÆmetro
rige
que estÆ presente
necesario para la
bien
se
un
solo
tienen gran
un
salinidad bi xido
mÆximo crecimiento TambiØn
parÆmetro
es
el
particular
conjunto
de
se
debe
parÆmetros
4
Romo Pilera
UABCS
lo que
Abril
Karim
Manual para al cultivo de
2001
Memoria tØcnica
microa
gas
profesional
50pp
determinadas
crea
el crecimiento de las
en
respuestas
microalgas Caæizares
1994
Como
de convertir la
encargadas
de
periodos
sus
discontinuos
o
luminosa
energ a
Østa
a
en
pueden
las
microalgas
ser
continuos
dentro del cultivo
distribuci n de la luz
a
las cØlulas
activas evitando que
se
su
para
previene
y
1986
la
mejor aprovechamiento mejora
que permanezcan fotosintØticamente
asegurando
sedimenten
tambiØn
de oscuridad
de las cØlulas y los nutrientes
homogØnea
dejÆndolos disponibles
y
mediante luz artificial
periodos
con
el ciclo natural d a y noche Richmond
la distribuci n
fotoaut trofas
son
metab lica por medio de la fotos ntesis
de iluminaci n alternados
asegura
La aireaci n
La luz
consideran
se
exposici n
periodos
luz artificial
con
f sicos
parÆmetros
estratificaci n tØrmica
una
Richmond
1986
En el
caso
generalmente
que
su
ptimo
de la
crecimiento
de 240C
sin
microalga
cultivo
su
para
no
son
microalgas
las consideradas
sufre alteraciones
Bajas temperaturas
embargo puede
arriba de 350C
las
temperatura
provocar an
una
se
estÆ
a
debido
270C presentando
el intervalo anterior
con
interesado
especies tropicales
no
disminuci n de crecimiento
de las
mayor a
como
las que
intervalo de 16
referencia
en
provocar
que la
en un
en
matan
a
un
a
la
temperaturas
Hoof y Snell
microalgas colapsaran
2001
El intervalo de salinidad
Generalmente
salin dad
el
el cultivo
en
presente
control
parÆmetro
Dentro de los
microalgas
en
en
en
Otro
en
importante
un
requerimientos qu micos
encuentran
se
nutrientes
a
o
en
el
cultivo
se
A balde et al
necesarios para
otras
invariablemente
controlado y
exterior la salinidad
microalga
es
un
cosas
se
maneja
convierte
la
en
1995
buen crecimiento de las
el
balance
Un desbalance
se
se
en
manifiesta ya
entre
la
los
proporci n
sea como
la disminuci n de la fuente de nutrientes
cultivo
y
como
denominados cultivos masivos Provasoli et al
Por macronutrientes
a
no es
especie
un
hasta la detenci n del mismo Hoof y Snell 2001
considerqr
limitativo
parÆmetro
entre
de la
microalga dependerÆ
y los micronutrientes
espec ficos
el crecimiento
aspecto
En
mar
suministrada de estos
descenso
una
para
interiores este
el agua de
cultivo
macronutrientes
a
ptimo
control
de calidad
nutricional
respecto
factor
en
los
1957
consideran la fuente de nitratos fosfatos y
diatomeas la adici n de silicatos Con
como
a
los micronutrientes
en
son
el
caso
aquellos
de las
que
se
5
Romo Pil era Abril Karim 2001
Memoria tØcnica
microalgas
profesional
UABCS 50pp
suministran
por ello
no
pero
metales
tetracØtico
comparaci n
Se sabe que
importantes
menos
se
tales
microalgas Kaplan
microalgas
auxotr ficas
para obtener
cerca
de cianocobalamina 812
a
mejor
crecimiento La
marinas sin
es
al
mayor a
una
microalgas
la cianocobalamina 812 y la biotina
mayor a
microalgas Spotte
de las
de todas las
1979
es
necesario
enriquecerfa
pero todos coinciden
con
en una
con
nutrientes Los medios
fuente
principal
de
nitr geno
soluci n de quelante y vitaminas Provasoli et
1973
diversas formulaciones de medios de cultivo
han formulado medios
se
provasoli et al
se realicen
diversas
1957
ademÆs
modificaciones
microalgas
La tasa de
es
algunos
de estos han sido
bi xido
de carbono
prÆctica
algunas especies
para
comœn que
hasta que
se
a
partir de
satisfagan
investigaci n Myers
un
los
en
o
de la
la circulaci n
Mejorando
bicarbonato de sodio
exponencial
conteniendo mÆs del 5
el cultivo
poblaci n
Sin
puede
de bi xido de carbono
puede
o
igual
microalgas
medio formulado
requerimientos
de
puede
prolongaci n
el bombear aire
tener
un
convertirse
la adici n adecuada de
provocarse la
embargo
de
De
1962
y bi xido de carbono suministrado al cultivo
ox geno
factor limitativo
espec ficos
emp ricamente
utilizadas para
en un
crecimiento
De
microalgas planct nicas requieren
seleccionados de diferentes laboratorios y utilizados durante muchos aæos
forma
son
medio de cultivo ideal para el crecimiento de las
un
mezcla de metales traza
1957 Stein
Existen
de las
requeridas
son
Snell 2001
embargo
de cultivo son muy diversos
f sforo y
del 70
Hoffy
El agua marina
microalgas
disponibles
estos nutrientes se debe seleccionar el medio de cultivo que se va
proporcionar
utilizar
soluci n haciØndolos
esto es que no son capaces de sintetizar todas las vitaminas necesarias y
hecho se ha estimado que
Para
Acido Etilen diamino
el EDT A
y micronutrientes existen otras sustancias que
consideradas esenciales para la
son
algunos
et al 1986
tienen que asimilarlas del medio La tiamina 81
86
soluciones alcalinas
en
en
los anteriores mencionados
con
como
utilizan para mantener los metales
AdemÆs de los mÆcr
por las
en
precipitan agentes quelantes
se
para las
poca cantidad trazas
en
a
del
los cultivos
efecto inhibitorio Hoff y
Snell 2001
El bi xido de carbono y el bicarbonato de sodio
que Øste debe
Como
se
ser
revisado
ha mencionado las
peri dicamente
microalgas
pueden
afectar el
para mantenerlo
en
pH
del cultivo as
condiciones
ptimas
utilizan bi xido de carbono para la fotos ntesis
6
Romo Pinera Abril Karim 2001
UABCS
y liberan
ox geno
durante los
de luz Sin
periodos
Un alta
baja
o
provocando
excesiva
baja
una
el
en
incrementarse
el
en
de las
de luz y
periodos
nitr geno
en
los cultivos
una
suministrado al cultivo
microalgas selectiva mente
tomaran el ion amonio
Si los iones nitratos
el
pH
pero usualmente controlado por suministro de bi xido
de
pH
embargo
eliminados por el
son
si el bi xido de carbono
es
Iimitante el
Si el cultivo
es
mantenido
microalgas
durante el
bajo
por el
microalga
no es
controlando los ciclos de luz oscuridad
o
inyectado
es
cultivos utilizados para acuacultura
pH disminuye
elevarse hasta 11 matando
de ambiente
los
en
mayor a
carbono del cultivo Sin
puede
profesional
suficiente Hoff y Snell 2001
es
sal de amonio la
a
embargo
de muchos procesos celulares Si el
rompimiento
tiende
Memoria tØcnica
microalgas
escala comercial el bi xido de carbono
a
aireaci n moderada
como
50pp
periodo
se
alga
en
condiciones
observa elevado
de oscuridad tendiendo
a
del cultivo
pH
pH
durante
balancear el
pH
Hoff y Snell 2001
AdemÆs de los factores fisico qu
importante
considerar
a
crecimiento
se
y costosas de
mejor
observar
se
da
en
asociaci n
sabe que
En el cultivo de
crecimiento de cada
o
fase de
pudiendo
Exponencial
Se ha
parece
ser
a
la
que muchas
microalga Hoffy
llegar a
una vez
el aumento
cultivada
se reconoce un
Fogg y
En donde
disminuir
en
adaptadas
nœmero
de
Thake
de
microalgas
se
ha
podido
812 que lleva
nœmero
a
incremento
con
respecto
a nuevas
microalgas
se
de la
estÆndar de crecimiento
patr n
al medio de cultivo
lugar
Independientemente
1987 figura
no ocurre
que la divisi n da
en
mejor
hace necesario el conocimiento de la cinØtica de
cada determinado volumen
fases
las
Snell 2001
especie
es
especies
los que esto
casos en
se
en
con
que el
sugerido
de cianocobalamina
producci n
aspecto
condiciones que s n dif ciles
microalgas
multiplicarse puesto
dividirse
la
a
proporciona
adaptaci n
Ya
la asociaci n de estas
es
entendida
las bacterias En los
debe
se
siguientes
incluso
microalgas
mejor
ser
embargo
con
y el volumen al que
indicado por las
Lag
Sin
conseguir
en
a
otro
mencionados anteriormente
cultivos libres de bacterias axØnicos
cabo la bacteria y que la
especie
el cultivo de
la cual comienza
bacterias
crecen
en
micos
1
en
el nœmero de cØlulas
al inoculo inicial
las
microalgas
cØlulas
que
comienzan
son
a
capaces de
acelera continuamente
en
forma
exponen cial
De declinaci n relativa de crecimiento En este
se
da
una
disminuci n de nutrientes cambios de
caso
pH
conforme el cultivo va creciendo
y alteraci n de otros factores
como
7
Romo
lera
Pil
UABCS
50pp
Abnl Karim 2001
consecuencia del incremento de la
tasa de
de ah
poblaci n
Memoria tØcnica profesional
microa
gas
que las
microalgas disminuyan
su
divisi n celular
Estacionaria
Cuando ya
de cØlulas alcanzado
no se
aprecia
divisi n celular neta esto
una
mantiene constante por cierto
se
balance entre la natalidad y la mortalidad que
De muerte Las cØlulas
aunque lo mÆs normal
pueden
es
durar
en
que comiencen
presenta
la
periodo
poblaci n
fa fase anterior
a
que el nœmero
debido al
tiempo
en
cultivo
semanas e
es entonces
morir
de
es
cuando
incluso
se
meses
presenta
esta
fase
4
Densidad
celular
Tiempo
Figura 1 Curva representativa de crecimiento de un cultivo estÆtico de microalgas Modificado
Fogg y Thake 1987 1 Fase de adaptaci n 2 Fase de crecimiento exponencial 3
de
Fase de
declinaci n relativa de crecimiento 4 Fase estacionaria 5 Fase de muerte
La medici n de la biomasa
recuento directo de la
como son
el conteo celular
mØtodos mÆs
un
comunes
espectrofot metro
tiempo
es
y
concentraci n
radica
en
curva de
poblaci n
un
a
es
celular y
se
travØs de
en
el cultivo de
puede
una
hacer
de alta
de c1orofilas
a
ventaja
de
travØs de
un
que la concentraci n de clorofila
ptica
poder
fluor metro
a
no
para tener
un
travØs de diferentes mØtodos
o
este es uno de los
absorbancia
con
leer varias muestras
El mØtodo
precisi n
a
microalgas
cÆmara de conteo
La medici n de la densid d
que tiene la
mØtodo
importante
de fluorometr a
la
desventaja
ayuda de
en un corto
que mide la
de este mØtodo
permanece constante durante toda la
crecimiento del alga por lo que los valores
no
son
constantes Otro mØtodo
es
8
Romo Pitlera Abnl Karim 2001
UABCS
Memoria tØcnica
m croalgas
profesional
50pp
el de la cuantificaci n de la biomasa
L pez
muy utilizado
travØs del peso
a
este mØtodo tambiØn
seco
es
1993
et al
2 OBJETIVO
Este
manual contiene
utilizadas para
informaci n
el cultivo de
respaldadas
microalgas
y
presenta
este documento consiste en
y
su
base
con
aplicaci n
con
base
en
a
en
proporcionar el
las tØcnicas
a
respecto
por investigadores versados
probadas
metodolog as
con
mŁtodolog as
mÆs
comunes
propuestas
ya
el tema El formato
el cual
en
se
te rico de dichas tØcnicas y
marco
las caracter sticas
de la infraestructura que
presenta el Laboratorio Experimental de Acuacultura de la Unidad Pichilingue LEAP de
la Universidad Aut noma de
Baja
Este laboratorio de cultivo de
investigaci n
cualquiera
la existencia de
de informaci n
sino tambiØn para
3
Sin
embargo
a
procedimientos
su
elaboraci n
realiz
no
solo para la
considerar durante el cultivo de estas
aportar mÆs
allÆ que
una receta a
REQUERIMIENTOS F SICOS
CONTROL DE LOS
para
fundamental para
es
se
como
especies
al lector los elementos bÆsicos necesarios para realizar
de
objetivo
utilizado tanto para docencia
es
manual de
bibliogrÆfica
proporcionar
esta actividad con el
microalgas
un
de las dos actividades
compilaci n
California Sur
seguir
QU MICOS
Y
EN EL
LABORATORIO
3 1
PAR`METROS F SICOS
LUZ Se utiliza luz artificial constante
tipo
cool white
tolvas
fux
250O
de 400 L
balastras
Østas
en
Estas
per odos
todos los niveles de cultivo
lÆmparas
estÆn
en
la
pared
momento de
de cada
trabajar
lÆmpara
se
con
lÆmparas
se
de
cepario
del
hasta las
respectivas
sus
seguridad
hace necesaria
adhiere a Østas debido al agua de
los cultivos de
detectando de
1
interruptor Tabla
a
lÆmparas
que
se
exterior al cuarto de cultivo
Para efecto de mantenimiento de las
semanal de la sal que
desde el
conectadas por pares
a su vez se conectan a un
encuentra localizado
de 24 horas por medio de
manera
igual
mar que
una
llegase
a
limpieza
salpicar al
forma el verificar las condiciones de uso
preventiva
la
presencia
de coloraci n
oscura
la
9
Romo Pif era Abnl Karim
2001
microa
gas
UABCS 50pp
cual
es
indicativo de que la
esta
lÆmpara
pr xima
fundirse y tomar las medidas
a
necesarias
Tabla 1 Relaci n de interruptores y lÆmparas
No de
Serie de
Interruptor
1
Tolvas 100 L 400 L 1 2 3 y 4
2
Tolvas 400 L 5 6
agitan
Al
cepario
con
el
Bolsas 20 L
5
Cultivo estÆtico y estante
central
homogenizar
manualmente para
realice diariamente
4
cultivos estÆticos
o
objeto
cØlulas reciban la luz durante
dependerÆ
cultivo de
el
su
no se
el cultivo
de evitar que
se
ninguna
manera
supere los 5 d as
proporciona
sugiere
Se
aireaci n y s lo
se
agitaci n
se
que esta
permitir
que todas las
de duraci n de estos cultivos
tiempo
prepararon
cambios de volumen de cultivo
o
le
sedimenten y
se
crecimiento El
de los fines para los cuales
mantenimiento
y7
Tolvas 400 L 8 9 y 10
3
AIREACi N
lÆmparas
ya
sea
procurando que
para cambios
recambio de cepas
el
tiempo
en volumen
mÆximo de
y de 7 d as para
cepario
En el
con
caso
ayuda
de
de los cultivos masivos
un
compresor
conectado al Ærea de cultivo
a
blower
PVC dentro del cual
TEMPERATURA
integral
una
como
Esta
se
En
se
utiliza aireaci n constante
de 1 2
hp
utilizan air Iift que constan de
se
se
disminuya
a reventarse
encuentra
tuber a flotante de PVC
encuentra conectada
mantiene constante por medio de
verano
el cual
de mayo
a
octubre
se
a
un tubo
delgado
de calidad
es
decir
debido al brusco incremento
en
un
aire acondicionado
sugiere
mantener el Ærea a
que
la
de
la salida de aire
de 24 i 1 oC para tratar de evitar que al momento de utilizar la
alimento Østa
comiencen
se
de 20 L
baja presi n
una
la manguera que
va
de 3 toneladas
temperatura
de
travØs de
Para las tolvas de 100 Y 400 L
partir
a
sus
paredes
temperatura
microalga
celulares
que presenta el
10
Romo Pit era Abnl Karim 2001
UABCS
50pp
cultivo
principal
cultivo
Para el
21 t 10C
a
temperatura
periodo
Se tiene
del laboratorio
cualquier cambio en el
medidas de
Manual para el cultivo de microalgas Memoria tØcnica
de invierno
un tenn
se
recomienda hacer
estÆticos
debido
a
el 15
el
cepario
mantener el
para ir verificando la
bitÆcora para efectos de detectar
integral y
partir
a
llevar acabo las
se
de 20 L el agua marina utilizada
su
disminuirÆ
salinidad
En el
la salinidad
caso
de agua
temperatura
a
es
de los cultivos
de 35 ups
de agua destilada del volumen del agua marina
que al aumentar la
evaporaci n
sugiere
seguridad correspondientes
incluyendo
agregando
una
funcionamiento del aire acondicionado
irradiada sin necesidad de disminuir
e
se
metro de mÆximos y m nimos
SALlNIDAD Para los cultivos masivos
filtrada
noviembre abril
profesional
a
30 ups
preparar Esto
al momento de la esterilizaci n
existe
por lo que aumenta la salinidad y esta debe mantenerse
una
en
35
base
en
ups
3 2
PAR`METROS QU MICOS
NUTRlENTES
la formulaci n
El medio de cultivo utilizado
sugerida
se enumeran en
BI XIDO
a
lo mÆs axØnico
su
cu
cuya
elabora
preparaci n
En el laboratorio
no se
con
y especificaciones
suministra bi xido de carbono
ASOCIACi N
CON LAS MICROALGAS
a
los
En los cultivos estÆticos
hasta el volumen de 1 500 mL matraz Fernbach
posible procurando
mantenimiento
do
1973
se
que el suministro de aire ha sido suficiente para estos hasta la fecha
BACTERIAS Y SU
cepario
Ryther
Øste laboratorio
el ANEXO 1
DE CARBONO
cultivos debido
del nivel
por Guillard y
en
tener todas las condiciones
En los cultivos masivos
se encuentran
bajo riguroso
bolsa 20 L
sistema de
asepsia
se
mantienen cultivos
asØpticas requeridas
tolvas de 100 y 400 L
no se
en
aun
consideran axØnicos
11
Romo Pif era Abril Karim 2001
UABCS
4
de
equipo
de
requisitos
microalgas
a
donde
esterilizaci n
gabinete y
cubre los
primera
principalmente
en
cumplir
los m nimos
con
el cultivo
lograr que
cultivan
se
as
el material serÆ
trabaje
se
microalgas
de diverso
cuenta
se
con
de
requerimientos principales
microorganismos
sistema de filtraci n
desag e
2 Æreas
de nutrientes
preparaci n
cristaler a y Ærea de mantenimiento del material La segunda Ærea
cultivo canal de
En la
Ærea hœmeda
cabo el cultivo de estos
a
basa
se
cabo
del Ærea
Ærea de
espec ficas
lleva
utilizar
facilidad y maniobrabilidad adecuados para
lleve
se
a
de los laboratorios donde
mayor a
La
trabajo
limpieza
Dependiendo
se
microa
gas
EQUIPO DE TRABAJO
El
de
50pp
y consta de
una toma
irradiaci n de agua de
e
es
donde
de agua para
aireaci n
mar
luz y contenedores para cultivo
4 1
`REA
sta
DE GABINETE
Ærea
superficie
con una
necesario para el cultivo En este
matraces
microscopio compuesto y
caso
y
m
es
la que
generalmente
tubos de ensaye
probetas pipetas
mantenimiento de reactivos
de 6x6
proporciona
cuenta
vasos
de
con
lo
todo el material
precipitado
refrigerador
autoclave horno de microondas campana de
balanza
as
bitÆcoras para
registrar el
cristaler a
siguiente
uso
laminar
flujo
de cada
para
aparato
se
encuentran en el ANEXO 11
AdemÆs de estanter a
tubos de vidrio
para el material del almacØn y material accesorio
pipetas probetas
alcohol agua de
mar
CRISTALER˝A
La cristaler a
principalmente
cepario
que
por los
se
selladora de bolsas
polietileno
guantes
yagua destilada
utilizada
requerimientos
y cultivos estÆticos
cristaler a
bolsas de
como son
tienen
en
en
en
el
del usuario
Ærea
de
figura
volœmenes de 10 mL
a
2
gabinete
estÆ
El nivel al que
determinada
se
utiliza es
2500 mL Los diferentes
Øste laboratorio se encuentran enlistados
en
tipos
en
de
el ANEXO 11I
12
Abril
Romo Piæera
Karim
Manual para el cultivo de mieroalgas
2001
UABCS 57pp
Figura
Debido
es
a
que el
uso
de la cristaler a
necesario que antes de utilizarla
limpieza sugerido
El matraz deberÆ
2
Con
4 Lavar
5 Dar
enjuagarse
con
con
un
jab n
œltimo
lave
exige
con un
da
medidas de
de
estrictas
limpieza
El mØtodo
de
piseta limpiar
las
anticipaci n
con
agua de la llave
clorh drico
al 10
no
queden
contenido
en
una
residuos de materia
orgÆnica
abundante agua de la llave
libre de fosfatos
enjuague
con
NOTA El Æcido utilizado para
previo
se
del matraz para asegurarse que
Enjuagar
el cultivo
en
siguiente
soluci n de Æcido
una
paredes
el
es
1
3
Material utilizado para cultivos estÆticos
2 Cristaler a
de los matraces
con
enjuagar con
y
agua destilada y
limpieza
es
abundante agua de la llave
dejar secar escurriendo
reutililizable de tal forma que
agua de la llave para desechar
cualquier
se
sugiere
residuo de
un
enjuague
y
poder
soluci n
HCI
microalga
reutilizar el Æcido
Para el
al
10
caso
de los tubos de ensaye serÆ necesario
m nimo
por
24
desengrasada primeramente
rutinaria y
luego
esterilizada
REFRIGERADOR
El
h
Cuando
con
en
se
utilice
sumergirlos
cristaler a
hidr xido de sodio al 10
Y
en esa
esta
nueva
despuØs
debe
lavada de
ser
manera
autoclave
refrigerador
con
el que
se
cuenta
en
modelo SR 458DV Se recomienda que toda soluci n que
el laboratorio
sea
guardada
es un
ah
SAMSUN
contenga
los
13
Romo Piflera Abril Karim 2001
UABCS
datos nombre de la sustancia y
siguientes
da
Manual para el cultivo de microalgas Memoria tØcnica profesional
50pp
mes
y aæo
que al tØrmino de
manera
de caducidad fecha de elaboraci n
usuario y elaborador
Es recomendable que cada usuario
de tal
tiempo
de verificar caducidad
en
de 1 4 Kw de
correspondiente
sustancias aqu
almacenadas
o
se
aparato
de las sustancias
les dØ el destino
El laboratorio cuenta
Este
potencia
su uso se
las soluciones
HORNO DE MICROONDAS
responsabilice
se
con un SAMSUNG
para efectos
modeloMW8610T
para esterilizaci n
principalmente
usa
preparadas
de
matraces aunque su utilizaci n se encuentra cuestionada por el hecho de la existencia
del autoclave
Sin
bacteriol gico
en
embargo
su uso es
recipientes
Tabla 11
de recipiente
existe
un
Tiempos
No
tiempo
Volumen
Tiempo en la mÆxima
potencia
75mL
6min
12
Erlenmeyer
4
500 mL
10 min
Fembach
1
1500 mL
13 min
de cultivo as
aparato figura
como
100
se encuentra en
3
nos
por lo cual
se
150 mL
el laboratorio
pennite
el material utilizado
anÆlisis
Para cada
11
Tabla
de irradiaci n para los matraces
Erlenmeyer
El que
un
determinado de irradiaci n
12
STMEL Este
1210C
realiz
Erlenmeyer
AUTOCLAVE
a
se
el laboratorio que avala los resultados de esterilizaci n
volumen y nœmero de
Tipo
recomendable pues ya
en
necesita vapor
8min
es una
esterilizar
con
MARKET FORGE modelo
mayor
los cultivos estÆticos
a
presi n
de 15 Ib
seguridad
los medios
Se utiliza calor hœmedo
pulg2
para
esta
lograr
temperatura
Este
aparato
tenn metro y
1
un
consta de un
instruments
Slow
y 2
Se
libera la
para el control de la temperatura
indicador de nivel de agua Presenta dos
Fast
aparato
reloj
presi n
recomienda
Iiquids
utilizada para
utilizar
humedezcan los tapones de
cuya diferencia radica
man metro
un
para esterilizar
en
la fonna
en
que el
lograr la temperatura requerida
capuchones
algod n
opciones
un
de
papel
encerado
para
evitar que
de los matraces Dadas las caracter sticas
se
de la
14
Romo Piæera
UABCS
del autoclave
puerta
evitar
Abril Karim
es
accidente al momento de
algœn
considerar
es
con
cerrar
objeto
ningœn
profesional
Memoria tØcnica
el
del material dentro de la misma para
aparato
con
o se
de
presi n
sustancias esterilizadas
de tal forma que para el
necesario
presi n
control de
para la eliminaci n
de agar
en
utilizara el
se
placas
una vez
no
caso
a
puesto
se
Otro
aspecto
a
el nivel indicado
trabajar
Cuando
dispositivo
propiedades
de instrumentos
en
donde
de
de las
no es
Al utilizar el autoclave
Fast
derrame
motivo
ningœn
utilizarÆ el
afecte las
dispositivo
no se
uso
sobrepasando
recomienda meterlas
se
para efectos de que el agar disuelto
posteriormente
en su
prepare agar para cultivo
para efectos de que la liberaci n
ese
no
agua
deberÆ por
no se
tiempo
modo descuidar el mismo
esterilicen medios de cultivo
plÆstico
microalgas
de ahorrar
el verificar el llenado correcto
para el cilindro y de
Slow
la distribuci n
importante
sobrellenarlo de matraces
se
2001
57pp
en
en un
recipiente
el aparato y
de
obstruya
el drenado del agua
h
iG
o
Figura
Se
sugiere
operaci n
1
utilizar agua destilada
del aparato
L1enarlo
con
nivel indicado
4 L
en
es
3 Seleccionar el
reloj
la
o
agua de
garraf n
para el llenado del
aparato
La
debajo
del
siguiente
aproximadamente
de agua de
garraf n
o
destilada por
el cilindro
2 Introducir el material
4 Activar el
3 Autoclave para esterilizaci n de material
a
esterilizar y
dispositivo
cerrar
la
de liberaci n de
puerta
presi n
select exhaust
15 minutos
15
Romo Piæera
UABCS
El
2001
Abril Karim
Manual para el cultivo de microalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
dispositivo
de temperatura
las
presenta
siguientes opciones
230oF 110oC 240oF 1180C y 250oF 121 oC utilizar esta œltima para esterilizaci n
CAMPANA DE FLUJO LAMINAR
Es
aqu
tubos de ensaye de los cultivos estÆticos
travØs de
un
filtro de fibra de vidrio
mantenimiento y que
laboratorio
Para
su
figura
utilizaci n
ayuda
EstÆ
se
provista
el cual debe
de los mecheros
ser
realiza la siembra de matraces y
de
un
ventilador que
verificado cada 3
crea un
arroja
meses
aire
para
a
su
ambiente aislado del resto del
4
se
recomienda lo
Limpiar
2
Prender los mecheros
3
Encender la campana y esperar cinco minutos antes de iniciar
en su
el Ærea de
totalidad
siguiente
1
limpiar
el Ærea
con
donde
trabajo
con
alcohol
DespuØs
de
su uso
nuevamente
Unidad de
Figura
4
Campana
de flujo laminar Utilizada para siembras y elaboraci n de vitaminas
esterilizadas
16
Romo Pif era Abril Karim 2001
UABCS
Memoria tØcnica
microa
gas
MICROSCOPIO
OPTICAL
El
microscopio
el cual consta
observaciones del œltimo
BALANZA
2842 de
de 4
objetivo
La balanza que
160g
de
se
utilizado
es
objetivos
de
tipo compuesto
4X 10X
que
tiene
en este
laboratorio
es
de
2
Pesado
Se
tipo anal tica
Sartorius
pesado
Ærea de
son
A 1
histolog a
a
9 g
a
150
recomienda utilizar la
se
del laboratorio
B 10
a
150 g Y E denominado
bloqueo
El proceso de
pesado
previo
es
el
suma
siguiente
del contenedor de la sustancia
se anota
bot n de inicio
a
regresa
utilizando para las
aceite de inmersi n
se encuentra en el
Los botones utilizados para
bot n de
AMERICAN
Se recomienda utilizarta para pesar sustancias de 1
capacidad
balanza anal tica
marca
40X y 100X
g Para pesar vitaminas metales traza EDTA y cloruro fØrrico
1
profesional
50pp
El bot n E
se mueve
hacia
abajo
y
se
el peso observado
la cantidad del peso observado del contenedor
mas
el de la sustancia
a
pesar
EJEMPLO
Contenedor
Cantidad
Total
a
2 9
pesar
77 9
75 9
Con los botones A y B
3 Se enciende la balanza y
se va
se
coloca la cantidad
agregando
a
cantidad
balanza marque las dØcimas de gramo observadas al
4 Una
vez
alcanzado el peso deseado se regresa
a
pesar
correspondiente
hasta que la
pesado previo
a ceros
la balanza
con
los botones A
yB
DESTILADOR DE AGUA
Jen ons
instalado
siguiente
serpent n
El laboratorio consta de
conectado al agua corriente del laboratorio
en
un
el cuarto
anexo
dispositivo
un
destilador de agua Autostill
figura
al laboratorio de cultivo de
5
El
aparato
microalgas
suavizador de agua por medio de iones
se encuentra
y consiste
en
water softenerj
lo
un
de vidrio y calentador de agua
17
Romo Piæera
Abril Karim
2001
mieroalgas
Memoria tØcnica
profesional
UABCS 57pp
i
h
y
l
r
f
i
I
l
5 Destilador de agua
Figura
Este
aparato
funciona de
manera
enciendan los calentadores
controla la entrada del
entonces
es
el contenedor
que
necesario que
Estos tienen
de Østa
evaporaci n
agua y la
desborde el resto lo realiza el
sta
s lo
2 botones de encendido
estar verificando
4 2 AREA
automÆtica
a
llenar
se
conecte y
un sensor con
por lo que serÆ
el cual
necesario
agua destilada
con
se
no
se
automÆticamente
aparato
H MEDA
Ærea
presenta
acabo los cultivos
temperatura
una
Esta
de 6x9
superficie
provista
controlada Debido
cuenta normas y medidas de
a
comprende aquella
m
de agua marina
la
importancia
limpieza
canal de
de Østa Ærea
de las cuales
se
donde
es
hablarÆ
llevan
a
aireaci n
y
recomendable tomar
en
desag e
luz
se
posteriormente
4 2 1 TRATAMIENTO DEL AGUA UTILIZADA
El tratamiento del agua de
desarrollo de los cultivos Toda
ser
tratada para
bacterias
y
dependiendo
remover
ciertos
utilizada
aquella
materia
metales
mar
es
de vital
agua utilizada para el cultivo de
particulada protozoarios
disueltos
importancia
El
tratamiento
otras
puede
microalgas
especies
ser
un
para
de
simple
ptimo
debe
microalgas
o
complejo
de la fuente de agua utilizada
18
Romo Piæera
UABCS
Abril Karim
FILTRACi N
SISTEMA DE
en
2001
mieroalgas
57pp
E
IRRADIACi N
este laboratorio consta de cuatro
120 W lo que da
una
capacidad
cuatro filtros de cartucho que
protocolo
su uso se
UV de 30 W cada
El sistema utilizado
de esterilizaci n de 258 5 Lmin
de 15 Ilm
encuentra
en
10 Ilm
dando
una
un
ademÆs
5 IJm y hasta 1 IJm
total de
presenta
Figura
6
El
el ANEXO 111
o
para
van
lÆmparas
DE AGUA MARINA
ti
il
1
f
1
llt
i
I
r
tl
l
Figura
HIDR`ULICO
SISTEMA
denominado
vierte
arena
se
arena
figura
e
MARINO
canal de llamada
serie de decantadores
filtraci n
6 Sistema de filtraci n
7
en
despuØs
El
el cual
e
irradiaci n de agua marina
agua
presenta
llegando
irradiaci n
una
longitud
del canal el agua pasa
dos contenedores de donde
finalmente al Ærea
de agua marina
El
de
proviene
es
a
la
bah a
de 200
travØs de
bombeada
a
m
de
travØs
largo
y
del
una
primer
filtro de
segundo
filtro de
un
un
a
hœmeda donde pasa por el sistema de
protocolo
para
su
uso se
encuentra
en
el
ANEXO 111
19
Romo Piæera
Abril Karim
2001
mieroalgas
UABCS 57pp
iIJ6I
l
T
c
7
Figura
Sistema hidrÆulico marino
4 2 2 CULTIVOS MASIVOS
Definiremos as
objetwo
de
permitir
espec ficamente
organismo
El
reemplazo
permitiendo
A
partir
cultivos
los cuales
en
se
suministra aire
reciban la misma intensidad
microorganismos
regular
de Øste
es
en
este nivel
requerimientos
de
con
raz n de diluci n
de nutrientes
microalgas
utilizados de forma
son
de los
por la remoci n
como
que los
de cultivo utilizado
dependiendo
el
los cultivos de
directa
alimento
como
de la
el
con
de luz y
de
especie
cultivo
en
tipo
a
un
de
el denominado Semicontinuo
producci n
Un cultivo semicontinuo
volumen estÆndar de cultivo
medio
nuevo
a
dependiendo
te ricamente el crecimiento
es
aquel
en
masivos
figura
8
A Østos
se
les
se
Continuo
caracteriza
lo que
tiempo
y
se conoce
donde la cosecha y renovaci n
microalga
Lo anterior
continuo del cultivo
de las bolsas de 20 L hasta las tolvas de 400 L
como
original
de la tasa de divisi n de la
exponencial
o
ciertos intervalos de
para obtener el volumen
Un cultivo continuo
constante
es
proporciona
consideraremos
agua de
mar
a
tratada
estos
con
el
sistema anteriormente mencionado luz constante y aireaci n
20
Romo Piæera
Abril Karim
2001
Memoria tØcnica
microalgas
profesional
UABCS 57pp
111 1 8
t
1 44
I
Vi
A
tr
Figura
PrÆcticamente
con
cultivo estÆtico
el inicio de los cultivos masivos
de 3
a
5 d as
a su vez
Del rollo de
plÆstico
2 Con la selladora
forma
de
un
ojal
columpios
de 50
cm
previamente
en uno
se
realiza
siendo sembrada
dependiendo
El proceso de elaboraci n de las bolsas
1
1
8 Cultivos masivos Bolsas de 20 L Y tolvas de 400 L
para 20 L esta
capacidad
I
se
de ancho
de la
especie
realiza de la
se corta
a
a
y el extremo
partir
serÆ sellado
en su
un
matraz Fernbach
manera
la bolsa de 120
calentada esperar 5 minutos
opuesto
de
polietileno
cultivar
siguiente
de los extremos de la bolsa para que
la bolsa de
con
cm
de
largo
de encenderla
despuØs
pueda colgar
se
totalidad
figura
en
se
el sistema
9
Columpio
Ojal
Sello
Sello
50 cm
Figura
9 Bolsa de
plÆstico
montada
en
el sistema de columpio
21
054616
Romo Pilera Abril Karim 2001
UABCS
La
permanencia
dependiendo
La
de la
aæadiendo
especie
pero
no
de cultivo
deberÆ exceder de este tiempo
es
la tolva
ya
de fibra de vidrio translœcido
las cuales
80 L de agua marina y los nutrientes
de duraci n
tiempo
de estos cultivos
de 100
sea
siembran
se
de los
dependerÆ
este sistema lo anterior para asegurar la calidad de la
como
400 L Son tolvas
la bolsa
con
correspondientes
utilizaci n Se recomienda que los cultivos semicontinuos
servir
microalgas
de este volumen de cultivo bolsas de 20 L serÆ de entre 3 y 5 d as
siguiente etapa
cilindroc nicas
El
50pp
no
requerimientos
pasen de
microalga
medida de seguridad para el control de las condiciones
a
mas
para
de 15 d as
su
en
utilizar ademÆs de
higiØnicas
asØpticas
y
del Ærea
Se hace necesario que
enjuague
caso
con
de que
enjuaga
agua dulce y doro
quedasen
mÆs 24 horas
con
restos de
e
terminadas de utilizar las tolvas cada usuario las
cepillando
microalgas
las
en
paredes
el
para evitar daæar el contenedor
agua dulce por y
usarla Antes de lIenarla
filtrada
una vez
con
se
dejan
cono
Una
reposar por lo
el agua de cultivo
se
y el
se
vez
cono
deje
con
Se
sugiere
que
en
doro yagua por
no
transcurrido este
menos
tiempo
se
24 horas antes de volver
sugiere enjuagarla
con
agua de
a
mar
irradiada
5 ASPECTOS IMPORTANTES DEL CULTIVO DE MICROALGAS
Si bien
menci n
manera
es un
los
de
hecho que lo anteriormente escrito
aspectos contemplados
puntualizarlos
ya que
se
en
presenta
esta secci n del texto
consideran
como
parte
una
se
importancia
tomaron
en
en su
cuenta
a
medular dentro del cultivo de
microalgas
5 1
CONTAMINACi N
La contaminaci n de los cultivos de
sin
embargo Fluede
afectar de
manera
microalgas puede ser biol gica qu mica
particular
o ser una
o
f sica
combinaci n de estos tres
tipos
22
Romo Pirera Abnl Karim 2001
UABCS
Memoria tØcnica
microalgas
profesional
CONTAMINACi N QU MICA
5 1 1INDICAOORES DE
Existen diversos
ha
50pp
ca do
indicativos de este
patrones
alta disminuci n
conservando Østa
su
poca circulaci n
cambio
o
en
el nœmero
color natural el
repentino
de
se
crecimiento
se
sembrada la
deberse a la
En este
temperatura
si el cultivo
caso
se
microalga
composici n
del agua
las cØlulas estÆn vivas
agitaci n
disueltos
qu micos
conserva un
puede
reciØn
toma blanco dentro de las 24 h de sembrado
debe al cloro residual y otros
Si el cultivo
de contaminaci n
celular
problema podr a
y deben reponerse incrementando la
Cuando el cultivo
tipo
color claro
se
el agua
en
despuØs
deber a que la fuente de luz
probablemente
es
de 3
poca
4 d as
o
existe
observando poco
un desbalance en
los
nutrientes
Cultivos
de 15
viejos
se toman
generalmente
o
mÆs d as de cultivo que inician
turbios y
algunos
una
deficiencia
en
nutrientes
otros levemente claros Esfuerzos por recobrar
estos cultivos ya carentes de nutrientes son inœtiles
CONTAMINACi N BIOL GICA
5 1 2INDICADORES DE
los
mÆs
tipos
bacterias otras
d as
comunes
de contaminaci n
microalgas protozoarios
cambia de color y eventualmente
se
o
biol gica
macroalgas
aclara la
causa
Si
son
un
por protozoarios Excesivo crecimiento de bacterias
turbia
crecimiento y
colapso del
cultivo
mÆs comœn
provocada
bajo
excesivos niveles de
se
despuØs
se
de 3
7
debe considerar
manifiesta
como
agua
cultivo
5 2 CONTROL DE LA CALIDAD DEL AGUA MARINA
Como ya
filtraci n
e
se
mencion
irradiaci n
a
en
la secci n 4 2 1
en este
laboratorio el agua
travØs de rayos ultravioleta
teniendo la
es
tratada con
seguridad
que
es
suficiente para asegurar agua marina de buena calidad
Otra
manera
neutralizÆndola
desee realizar
para tratar el agua
despuØs
se
hace
a
con
puede
tiosulfato de sodio
partir de la
se
para neutralizar agrega el tiosulfato de sodio
Sin
embargo
El
procedimiento
n de la misma
n caso
de que
se
bolsa de 20 la las tolvas de 400 lagregando 1 ml
de cloro por cada 5 litros de agua marina y
ml de cloro utilizado
mediante la c10ra
ser
deja
con
en una
aireaci n hasta el d a
siguiente
concentraci n de 1 5 g por cada 4
el tratar el agua
con
luz UV y filtraci n ha sido
23
Romo Pit era Abril Karim 2001
UABCS
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
50pp
suficiente y eficiente para efectos del cultivo Se recomienda de
posible
ser
utilizar
no
cloro para preparar el agua de cultivo
Un
a
aspecto importante
considerar para evitar
los usuarios que mientras estØn
tal que
manera
diluido que
pueda
introducir los
encuentra
se
trabajando
pies
en
en un
cualquier contaminaci n
recipiente
necesario entonces que al regreso del cuarto de bombas
y
despuØs pisen el recipiente
No
es
posible permitir
cultivo esto
a
es
con
la bacterizaci n
a
de
conteniendo cloro
plÆstico
enjuaguen
Ærea hœmŁdel
Es
calzado con agua
su
cloro
que los cultivos
para evitar que
pedir
el laboratorio utilicen botas de hule de
las entradas al laboratorio de cultivo
a
es
cualquier
nivel pasen del
que estos cultivos estØn
una vez
puedan ser foco
a
tiempo
estricto de
sean
propensos
viejos y
de infecci n para otras tolvas
Se hace necesario que el usuario marque las mangueras utilizadas para cosecha de
tal forma que
se
hagan responsables de su mantenimiento y limpieza y
fuente de contaminaci n
Se deberÆn
enjuagar
con
que estas no
agua dulce y
sean
secar antes
de
guardarlas
Se recomienda
Ærea
que esta
enjuagada
harÆ necesaria la
caso se
5 3
sea
de las cosechas de las tolvas
despuØs
con
agua dulce y secada
limpieza
con
o
con un
de haber
trabajado
trapeador limpio
en
en
el
algœn
cloro
IN CULO
Una
vez
que
se
tiene evaluada la cinØtica de crecimiento de la
tomar en cuenta que la
viables pero
no en una
cultivo de donde
de las cØlulas inoculadas
mayor a
sembradas
condici n de dividirse inmediatamente
proviene
el in culo
cultivo
madrej
inactivas y las concentraciones de metabolitos
es
pueden
viejo
microalga
se
pueden
espec ficamente
las enzimas
decrecer
a
debe
pueden
ser
si el
estar
niveles insuficientes
para la divisi n celular Caæizares et al 1994
Se sabe que existe
esto
es
inoculo
una
relaci n entre la
la duraci n de la fase
sea
lag
tomado durante la fase
en
longitud
de la fase
el cultivo iniciado serÆ
exponencial del
lag
y la edad del inoculo
menor mientras que el
cultivo madre
Fogg y
Thake 1987
24
i
Romo P æera
UABCS
Abril Karim
2001
mieroalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
5 4 NIVEL CEPARIO
En esta
y
de cultivo
etapa
hace necesaria la mayor
se
control y verificaci n de las condiciones de la
en
15 d as
a
las
microalgas
con
Matraces
Cajas
Agar
a
utilizar
a
nivel
en
medidas
asØpticas
Se deberÆ observar cada
microalga
para verificar las condiciones de cultivo
Los volœmenes recomendados
Tubos
precauci n
figura
10
cepario son
10 mL de medio de cultivo
de 75 mL de medio de cultivo
Erlenmeyer
de Petri
con
agar
inclinado
Figura
10
Estante
con
cultivos
nivel
a
cepario
estÆticos
ESTERILIZACi N
previamente
con
utiliza
HCI al 10
Los matraces
100 mL
Se
o
tubos
estrictamente
tal cual
se
tubos
matraces
llenan
se
describi
con
con
con
el
10 mL y matraces
mL
autoclave
y
75 mL
y cultivos
el
material
debe estar
anteriormente
el volumen de medio
150 mL Se recomienda tener ya
con
1500
preparada
agua de
requerido
10 mL 75 mL
mar
filtrada
con
nutrientes
e
irradiada
con
medio de cultivo macronutrientes y micronutrientes
El agua utilizada
salinidad
Esto
volumen que
es
en
este nivel antes de
de 35 ups que
se va a
presenta
a
ser
preparada
30 ups
con
agua destilada
baja
en
dependiendo
del
se
preparar Tabla 111
25
Romo Pif era Abnl Karim
UABCS
El agua de cultivo
a
mayor
2001
profesional
50pp
15 d as
se
este nivel
preparada para
puede
refrigerada por un tiempo
ser
recomienda entonces al momento de
su
no
elaboraci n fechar el
contenedor
Una
vez
introducen
para el
los
al autoclave
caso
tubos
que los matraces ya contienen el agua de
con
el medio de cultivo
de diatomeas por 15 minutos
matraces
y
para
el
de
caso
el
preparada
excepci n
a
en
mar
nutrientes
se
de las vitaminas y silicatos
slow
dispositivo
la
con
liquids
de agar
preparaci n
esto
se
es
para
descæbirÆ
pqsteriormente
Tabla 111 Relaci n del volumen de agua marina yagua destilada
Volumen
NOTA
se
a
Preparar
Agua
destilada
1700 mL
300 mL
1000 mL
850 mL
150 mL
500 mL
425 mL
75mL
recomienda mantenerlo lejos del sol
en
e
irradiada
este caso se
sin nutr entes
guarda
duraci n de esta agua viable dependerÆ de la temporada esto
no mas de 10 d as
Agua
2000 mL
tener agua de mar filtrada
puede
marina
es
en
en
un
contenedor de 20 1
el estante del laboratoæo
en
el tiempo de
inviemo puede durar 20 dlas
Se recomienda durante cada Denado del contenedor lavar y enjuagar
se
en verano
previamente
el
recipiente
VilAMINAS Las vitaminas
evitar que
se
se
desnaturalicen
deben estar esterilizadas
a
colocan hasta el momento
con
el calor y la
travØs de
una
presi n
en
que
se va a
sembrar para
del autoclave por lo que Østas
unidad de filtraci n
Figura 4
26
Romo Piæera
Abril Karim
2001
Memoria tØcnica
mieroalgas
profesional
UABCS 57pp
Modo de
preparaci n
1 Todo el proceso deberÆ realizarse
2 Se coloca
un
una
3 Se
manguera
procede
a
la campana de
filtro whatman GFC de 25
cual estarÆ conectada
de
en
laminar
de diÆmetro
matraz kitasato de 250 mL que
a un
a una
mm
flujo
en
la unidad de filtraci n
a su vez se
conecta
a
la
travØs
bomba de vac o
encender la bomba de vac o y
comienza
se
a
filtrar la soluci n
primaria
de vitaminas
4 Una
vez
terminada de filtrar la
para hacer la soluci n de
trabajo
5 Ya lista la soluci n de
trabajo
esterilizado y
guardarse
IMPORTANTE
horno
a una
en
el
soluci n
temperatura
vierte el agua destilada necesaria
en un
tubo
o
frasco
previamente
refrigerador
de 800C durante 6 horas
en
se
esta deberÆ colocarse
Todo el material utilizado deberÆ
deberÆ estar esterilizada
estar
Figura
previamente
11
SILlCATOS Los silicatos tambiØn
se
11
Horno de
esterilizan
del resto de los nutrientes debido
a
esterilizado
en
el
el agua destilada tambiØn
el autoclave y estar fr a al momŁnto de
Figura
separado
primaria
usarse
precisi n
en
el autoclave
la tendencia que
en un
tubo de ensaye por
presentan
a
precipitarse
27
Romo Piæera
UABCS
SIEMBRA
cultivo
1
Abril Karim
2001
La siembra
lleva
se
Limpiar
con
a
cabo
o
inoculaci n de los matraces tubos
con
el
siguiente
alcohol el Ærea de
figura
proceso
profesional
Encender el
interruptor
Figura
cajas
o
agar inclinado para
12
trabajo
2 Prender ambos mecheros de la campana de
4
Memoria tØcnica
microalgas
57pp
laminar
flujo
de la campana y esperar 5 minutos
12 Siembra del
cepario
en
la campana de flujo laminar
5 4 1 SIEMBRA EN LIQUIDO
Los volœmenes que
se
siembran
matraces Fernbach de 1500 mL
asegurarse que el agua donde
que las
dejar
microalgas
de las que
los matraces
o
transferirÆ la
en
tomando
en
en
la campana de
matraces las vitaminas y los silicatos y
proporciones
desde tubos de 10 mL hasta
van
microalga
tomara el in culo
tubos ya esterilizados
momento de la siembra
Las
la campana
Previo al sembrado de los tubos y matraces
se
se
en
despuØs
Para
estÆ
lograr
a
la misma
lo anterior
el Ærea de cultivo
flujo
laminar
se
hay
temperatura
se
recomienda
Al
Ærea hœmeda
agregan
que
primero
a
los
el cultivo
de vitaminas y silicatos
serÆn
segœn
cuenta la formulaci n del medio f 2 de Guillard y
el volumen
Ryther
tabla IV
1973 de Q 5mUL
de vitaminas y 1 mUL de silicatos
28
UABCS
Tabla IV
de vitaminas y silicatos de acuerdo al volumen
Proporci n
VITAMINAS
utilizar
a
PROPORCi N
VOLUMEN mL
10
5lJL
10
10lJL
75
0 0375
75
0 075
100
0 050
100
0 100
150
0 075
150
0 150
1500
0 75
1500
1 5
Para agregar estas cantidades
frasco de vidrio para autoclave
plÆstico
de las
resistentes al calor el
de 1
puntas
se
mL
abrirÆn para
El in culo
mismos Si
se
se
primero
en
en
para
un
puntas
el autoclave
la campana de
este
y
tipo
sembrar Si s lo
a
sembrara 1 mL de
Al realizar la siembra
que las microalgas
se
se
agitar la
con
en
activas Para las
especies
misma
manera a
diferencia que la
permanencia
menor
pero
la
vez
colocan en
un
cajas
de
o en
segundo
para el
a
caso
esterilizar y
del
dependerÆ
como
en
prop sito
volumen
respaldos
se
vez
superficie
microalgas
de estas
sin
en
utilizarÆ el 5
para los
matraces y 0 5 mL
a
de los
en
trabajos
de
los tubos
3 minutos para
hecho esto
con
la
para asegurarse de
flagelo
funciona de la
la columna de agua
es
suficiente para realizar las inoculaciones
que se abra
pasarÆ
con
laminar
la muestra de la
de
se
los matraces
la columna de agua Una
se toma
Eppendorff
el fondo
muestra y esperar de 2
microalgas
muestra se
I Y el
en los
tomar
pipeta
automÆtica
requiere
microalgas
deberÆ
distribuyan
se
de la
vez
de 100
de volœmenes
ayuda
Cada
en
junto
flujo
puntas
algod n
estÆ transfiriendo el cultivo para aumentarlo
se
a
automÆtica
pipeta
una
tapadera
con
meten
su uso en
utilizado
del volumen
investigaci n
utiliza
se
esterilizadas Para la esterilizaci n de las
puntas previamente
10
profesional
SILICATOS
PROPORCi N
VOLUMEN mL
solo
Memoria tØcnica
microalgas
50pp
un
tubo
o
la boca de cada
matraz antes y
uno
despuØs
de tomar
por la flama del mechero
o
como
depositar
la
medida de
seguridad
El
tiempo
de cultivo de estos volœmenes
es
de mÆximo 7 d as para los matraces de
75 100 y 150 mL y de 15 d as para los tubos de 10 mL
29
Romo Pinera Abril Karin 2001
UABCS
5 4 2 SIEMBRA EN
Este
del
tipo de
Se
cepario
profesional
S LIDO
rutina
se
pueden
disponibilidades
1
50pp
realiza para tener
tener
de Petri
cajas
en
o
medio s lido las
de
especies
tubos de ensaye todo
microalgas
de las
dependerÆ
del laboratorio
Se utiliza agar
utilizando 14 5 g por cada litro de agua marina
bacteriol gico
a
preparar
2
Al agua marina filtrada
microondas
proporci n
3
se
agita
para que
4 Cuando la mezcla
15 Ib pulg2
un
en
pegue
observe
el
en
micros y silicatos
en
desee preparar
se
encuentre
se
en
el matraz
transparente
inmediatamente
se
mete
el autoclave
a
a
1210C por 15 minutos
5 Antes de sacario del autoclave
un
macros
poco hasta observar que toda la soluci n
no se
se
3 minutos
calentada
previamente
y los nutrientes
la cantidad de medio que
La mezcla
suspensi n
irradiada y
le agrega el agar
se
a
e
cambio brusco de
es
temperatura
necesario abrir
que afecte
a
parcialmente
la mezcla Østa
la
puerta
para evitar
presentarÆ
un
color
amarillo cristalino
6
Esperar aproximadamente
temperatura
adecuada para
de 15
a
20 minutos para
poder manejaria
y llenar las
que la
cajas
mezcla
de Petri
o
baje
de
los tubos de
ensaye
7 Antes de iniciar el llenado se deben de agregar las vitaminas
8 Es
importante etiquetar
tanto las
cajas
como
los tubos
con
en
el agar
el nombre de la
especie
y
la fecha de siembra
LLENADO DE LAS CAJAS DE PETRI
1 Se realiza
en
la campana de flujo laminar
2 Se vierte la mezcla dentro de la
caja en un volumen
de 30 mL
esto
aproximadamente
c
es
sin pasar del
3 La
caja
enfr e
un
4 Una
que
semicerrada
borde de la
se
coloca
caja
en un
J
lugar
dentro de la campana
esperando
a
que
poco para evitar condensaci n
vez
se
primer
terminado de llenar las
solidifiquen
estas
cajas
columnas
se van
no
poniendo
deberÆn
una
ser
sobre otra para
mayores
de
5
dejarias
cajas
30
Romo Piftera Abril Karim
UABCS
Memoria tØcnica
microalges
profesional
50pp
1 h durante este
aproximadamente
los mecheros
5 Al d a
se
es
a
tiempo
apagan ya solidificadas
siguiente
incubadora
6 No
2001 Manual para 81 cultivo de
se
revisan las
cajas
œnicamente la campana
se
y si
guardan
en
el
se
dejarÆ
encendida
refrigerador
alguna presenta condensaci n
se
mete
a
la
300C por 4 horas
recomendable utilizar
aquellas cajas
donde la condensaci n
no se
elimine por
en una
proporci n
completo
LLENADO TUBOS DE ENSAYE AGAR INCLINADO
1 La mezcla
se
vierte
de entre 9 y 10 mL
2
DespuØs
3
Una
se
vez
los tubos
en
meten
en
de 10 mL
el autoclave para la esterilizaci n
esterilizados
colocan
se
4 Se dejan solidificar hasta el d a
caso
ayuda de una pipeta
aproximadamente
obtiene colocando los tubos sobre
5 En
con
de condensaci n
Figura
se
13 Tubos
una
el
Ængulo
pipeta de 5
de inclinaci n
figura
13
que
se
mL
siguiente
meten
con
en
a
la incubadora
agar colocados sobre
a
300C por 4 horas
una
pipeta de 5 ml
31
Romo Piæera
UABCS
Abril Karim
2001
Manual para el cultivo de mieroa gas Memoria tØcnica
profesional
57pp
SEMBRADO EN AGAR
1 Se realiza
en
la campana de
flujo
laminar
bacteriol gica
2 Se utiliza
un asa
3 El
pasa por el mechero hasta el
asa se
4 Se abre la
5 El
asa se
caja
o
tubo
enfr a
1
es en
zig
respectivo
segundo
de donde
las
en
vivo
rojo
se
sembrara
de la
paredes
caja
o
tubo y
se
toma la muestra de
microalga
6 El
7
rayado
DespuØs
de
en
zag
el
descargar
la
asa
caja
el tubo
o en
esta
se
figura
14
pasa por el mechero hasta
rojo
vivo antes de
iniciar otra siembra
8 Las
cajas
de Petri
se
sellan
con
papel parafilm
el lado del agar hacia la fuente de luz
9 Los tubos
se
colocaran
en
la
Figura
en
de
gradilla
14
el Ærea del
manera
Sembrado
Los resultados de crecimiento
en
se
en
placa
zig
se
cepario
invertida
se
pueda
detectar si
presentan alguna
indicativo de contaminaci n
l quido
y
generalmente
su
La coloraci n
aspecto
es
el
tap n
hacia
abajo
observaran entre los 7 y 10 d as
alteraci n
dependerÆ
brilloso y
con
zag sobre agar
sembrado Se deberÆ observar el crecimiento de cada
que
colocaran para cultivo invertidas
una
en
de las colonias de
el color
o
forma
del color de la
manera
esto ser a
microalga
en
de
tal
un
medio
homogØneo
32
Romo Piftera Abril Kaæm
UABCS
2001
Se
el
sugiere para
encuentren al final del
menor
El
va
Memoria tØcnica
mcros
gas
profesional
50pp
escoger las colonias que
sembrado de transferencia
de la
rayado
placa
el tubo
o
pues estas
una
presentan
se
carga
de bacterias
tiempo
de 15
a
de cultivo de las
20 d as
placa
en
en
microalgas
y hasta 1
mes en
s lido
depŁnderÆ
tubo
dependiendo de
de la
especie pero este
la carga bacteriana
del cultivo
Una
meten
Øste
pasado
vez
la autoclave
a
gradilla
caso
el
con
recuperar solo
5 5
de
cajas
lavan
cajas
en un
de Petri si
recipiente
y estas
aparato
de
cajas
se
de Petri de vidrio y los tubos de ensaye
hacia arriba
siguiendo
es
el
el mismo
procedimiento
son
plÆstico
plÆstico
se
para evitar
desechan
colocados
en una
Estas
pueden
procedimiento
de
de
se
mencionado
limpieza ya
AN`LISIS BACTERlOL GICOS
Se recomienda que
presente
3
de las
caso
dentro del
se escurra
tap n
se
el
Fast Instrumenf 10 min
que el material diluido
En el
en
tiempo
4
en
realicen monitoreos
se
los cultivos de
microalgas
peri dicos
de la
bacteriana
poblaci n
En el laboratorio se realizan estos
una vez
cada
meses
Estos anÆlisis
realizan
se
dos diferentes medios
general
y TCSS
travØs del mØtodo de extensi n
bacteriol gicos agar
en
presencia
utilizando
superficie
marino para la observaci n de bacterias
Citrato Sales Siliares Sacarosa DIFCO 065
Tiosulfato
observar si existe la
a
01 2
en
para
Vibrio
MEDIO DE AGAR MARINO
1
El agar marino
previamente
se
prepara utilizando 55 1 g de este por cada litro de agua destilada
calentada
a
luego
preparar
se
s lido para la esterilizaci n y llenado de las
2 Para el sembrado
diluciones de 10
nœmero 1
se
1
placa
hasta 10
10
qu—
Del tubo nœmero
cuidadosamente
con
se
es decir
le coloca 1 ml de la
el tubo nœmero 2 y as
3
en
cajas
realiza
se
microalga
ayuda
de
va
en
el
procedimiento
del sembrado
en
secci n 5 4 2
la campana de
flujo
laminar
se
hacen
cada tubo tendrÆ 9 ml de agua destilada al tubo
de este tubo
sucesivamente hasta
10
sigue
a
una
llegar
tomar 0 1
pipeta
se toma
1 ml que
al tubo nœmero 10
ml que serÆ
se
figura
colocado
coloca
en
15
en
la
placa
automÆtica
33
UABCS
4
doblada
en un
dejando
que
se
de 900
enfr e
mientras
completamente
absorba
observe que
en
no
en
Ængulo
se
mL de cultivo
el agar este
queda l quido
5 A continuaci n las
20C
1
28
profesional
50pp
Este 0 1 mL serÆ distribuido
que
Memoæa tØcnica
microa
gas
placas
la
placa
mojada
se
en
gira
la
el in culo
se
con
alcohol y
placa
de
ayuda
con
Es decir
una
varilla de vidrio estØril
luego pasada
la
mano
una vez
extenderÆ por toda la
placa
por el mechero y
simultÆneamente hasta
ha colocado el 0 1
que
se
con
la varilla hasta que
se
sobre el agar
sembradas
se
invierten y
prosigue al
conteo de colonias colocando las
son
colocadas
en
la incubadora
a
por 48 h
6 Transcurrido el
tiempo
se
placas
en un
contador de colonias Quebec
1m
n
Se toma 0 1 mL
para el anÆlisis
11
l
C
aa
a
i
CD
tJ
Q
o
Figura
t
o
o
lo
1
o
o
o
o
G
G
G
15 Diluci n del cultivo para la toma de muestra
en un
o
anÆlisis
bacteriol gico
MEDIO DE Teas
1
Se utilizan 89 9 por cada litro de agua
ebullici n
a
2 Se
enfriar un poco
deja
preparar NO
3 A continuaci n
partir del punto
se
se
sigue
estilada
previamente
calentada hasta la
utiliza el autoclave
aproximadamente
la misma
15 minutos
metodolog a
para el llenado de las
placas
que para el medio de agar marino
a
nœmero 2
34
Romo Pitlera Abril Karim 2001
UABCS
6
EVALUACi N
los
a
cultivos
principales
necesario
es
concentraci n de biomasa que presentan los cultivo de
la
profesional
DE LA BIOMASA
Para alimentar
es
Memoria tØcnica
mictoa
gas
50pp
de alimento que
proporci n
laboratorio para medir biomasa
6 1 HEMA TOCIT
METRO
O
Presenta dos cÆmaras
canales
existen
longitudinales
un
y
se
cuadr cula mÆs fina
Figura
microalgas
para as
describen
a
la
es
saber cual
suministrar Los mØtodos utilizados
se va a
en
este
continuaci n
C`MARA DE NEUBAUER
En la
cara
superior
del
portaobjetos
canal transversal central
dos cuadros de 9
grabados
cual
conocer
mm2
de
a
superficie
se
encuentran cuatro
cuyos lados
superior
subdivididos
inferior
e
a su vez en una
16
Canallat8nll
Canal
nInII
D
FIgura
16 CÆmara de conteo Neubauer Utilizada para
Al colocar el
cubreobjetos
encima de la
cuadr cula
existe entre ellos cuadr cula y
de 0 1
misma que viene indicada
mm
muestra
1 0
problema
mm2
X 0 1
en uno
de los cuadros
0 1
mm
en
mm3
conocer la
donde
superficie
cubreobjetos
el
portaobjetos
grandes
concentraci n de
de 1
una
se
encuentra
distancia
1000
que
como
10 000 X 0 1
ya
se
vio
es
mm3
siempre
grabada
mm2
de
superficie
serÆ
igual
Las tØcnicas de conteo consideran el nœmero
entonces 1 mL
de 0 1
10 000
la
Por lo tanto el volumen de la
nœmero de individuos por cada mililitro Ya que 1 mL
mm3
cultivo
fija profundidad
individuos presentes en la muestra de volumen determinado y comœnmente
como
un
veces
cm3
1000
se
a
de
expresan
mm3
y
como
el volumen de la muestra
mm3
35
UABCS
microa
gas
50pp
Vamos
a
se
suponer que
hizo
conteo de cØlulas
un
el cuadro central de la
en
cuadr cula
obteniØndose la cifra de 320 cØlulas Para expresar el nœmero de cØlulas por
mililitro
multiplica
1mL
El
se
320 X 10 000 ya que
10 000 X 0 1
procedimiento
1000
mm3
para el conteo
El resultado
es
el
vivo esto tiene
observa el
se
es
en
mm3 y
0 1
de 3 200 000 cØlulas I mL
una en un tubo
microscopio
objetivo verificar las
como
320 las cØlulas existentes
siguiente
1 Se toman dos muestras de 1 mL cada
2 Una de las muestras
son
sin
de ensaye
fijar para
condiciones de la
efecto de observarta in
microalga
NOTA ESTO SE DEBE HACER CADA SEMANA CON EL CEPARIO SOLO PARA EFECTOS
DE
REVISi N
DEL CULTIVO
3 La otra muestra
fija
se
lugol
con
1
gota ellugol puede
preparado
ser
de la
siguiente
forma
soluci n
tipo
1
soluci n
tipo
2 1 1 1
4
Tinci n Gram
Dependiendo
Qugol
1 5
agua destilada
Iugol
de la densidad del cultivo
la cÆmara de conteo y si el nœmero de
es
mayor
a
100
se
mL de agua marina filtrada
diluci n
5
6 mL y as
cuadr culas
1
rejillas
La f rmula
No
se
puede
Cuando
microalgas
a
se
en uno
a usar se
localizadas
observara la muestra
en
diluir la muestra Por
los cuadros de 4
ejemplo
es
si
se
x
en
4 de
agregan 5
de f d factorde
utiliza
en
el laboratorio
es
por
cualquiera
de los
de ellos hasta que la muestra pase al otro lado y
se
de la cÆmara
en
nœmero
la cÆmara
de cØlulas contadas I No
Figura
de cØlulas
15 esto
los cuadros 4L
por mililitro
se
dependerÆ
de las
es
de cuadros contados
d I No de cuadrantes contados
se cuentan
o
hacer diluci n de la muestra para
1mL de muestra la diluci n
irradiada
para obtener el
utilizadas
contadas f
el laboratorio
sucesivamente
canales laterales iniciando
6
e
procede
El llenado de la cÆmara que
cubran ambas
en
formol agua destilada
efecto de conteo Para la determinaci n de la diluci n
la cÆmara
utilizada
10 000
de cØlulas
No
10 000
dividirÆ entre 4 esto por cada
una
de las
rejillas
de la cÆmara
2
No de cØlulas contadas
esto cuando
3
se
cuenta solo
10 000
un
No de cØlulas contadas f d
10 000
cuadro L
10 000
5
fd
10 000
5
36
Romo Piæera
UABCS
Abril Karim
2001
Manual para el eultivo de
cuando
conteo
se
cuenta el cuadro del centro de la
realiza
se
Nannochloropsis
para
Este
tipo
de
las
microalgas
Micromonas
sp
6 2 ESPECTRO FOT
poder
calibraci n para cada
menores
de densidad
basarse
especie
que
Para la lectura de la muestra el
homogeniza
las 4E
rejilla
a
E central
8
este
tipo
Nannochloris
Jlm
de
sp
METRO
metodolog a
Para
rÆpidamente
Se
profesional
pusilla
la determinaci n de biomasa de las
1
Memoria tØcnica
mieroalgas
57pp
la muestra y
absorbancia
o
microalgas presentando
en
se
este
mØtodo
es
la
es
muy utilizado para
ventaja
de
necesario realizar
poder
leer
curvas
de
desee medir
procedimiento
se
ptica
toma
un
es
el
siguiente
volumen de
aproximadamente
20 mL
en un
recipiente
2 Se
nm
procede
donde
no
3 Se calibra
a
leer
en
el
espectrofot metro
exista interferencia por
con un
se
registra
17
a una
longitud
de onda de 750
pigmentos
blanco de agua de
4 Se lee la muestra y
figura
mar
filtrada
e
irradiada
a
O de absorbancia
la absorbancia
4
1
i
11
i
ft
I
lIECIlM4I
Figura
17
S
Espectrofot metro Utilizado para medir biomasa
a travØs
de
longitudes de onda
37
Romo Pit era Abril Karim 2001
UABCS
Las
curvas
utilizadas
Memoria tØcnica
profesional
CALIBRACi N
de calibraci n que
en
se dan a
el este laboratorio
tertiolecta y Chaetoceros
gracilis
masivo que
en
estas
mictoalgas
50pp
6 2 1 CURVAS DE
mas
se
mantiene
Isochrysis galbana Monochrysis
en
cultivos semicontinuos
este laboratorio
Es
importante
deben mantener las condiciones de
curvas se
presente
continuaci n fueron hechas para las
ya que
especies
lutheri Dunallie a
es
el
cultivo
tipo
recalcar que para utilizar
ya mencionadas
cultivo
en
el
manual
Para obtener las
volœmenes
de 100 y 400
celulares
con
el
Tanto
espectrofot metro
cuadruplicado
de calibraci n
se
L
se
los cuales
realizaron cultivos semicont nuos
mantuvieron
hematocit metro
los
conteos
A los datos obtenidos
obtener la ecuaci n
se
se
utilizarÆn para
lecturas
y
las
como
les realiz
de la recta para cada
ecuaciones son las que
un
Y
15 y
13 d as
se
hicieron
regresi n
en
el
por
lineal para
y volumen de cultivo
la concentraci n
con
Estas
ceVmL del cultivo
independiente
bx
a
Donde y variable
absorbancia
anÆlisis de
especie
conocer
de
mediciones
utilizando la lectura de absorbancia como nuestra variable
ECUACi N
durante
en
Diariamente fueron tomadas muestras de los cultivos para hacer
respectivamente
conteos
curvas
dependiente
cØlulas mL
a
ordenada al origen
b
pendiente
x
variable independiente absorbancia
CULTIVOS DE 100 L
Isochrysis galbana
Donde
a
580680 943
b
7069008 38
x
absorbancia
38
Romo Piftera Abril Karim 2001
UABCS
Manual para el cultivo de microalgas Memoæa tØcnica
profesional
57pp
Isochrysis galbana
2500000
200000O
O
1500000
E
i 3
1000ooo
c
500000
o
0 02
o
0 04
0 06
0 08
Absorbaocia
I
Figura
18 Tendencia de la
regresi n
0 12
01
0 14
0 16
0 18
om
datos obsenedos
modelo
I
entre la absorbancia y la densidad de Isochrysis
cultivos de 100L
galbana
en
Monochrysis luthen
Donde
534024 34
a
b 7355434 98
absorbancia
x
Af onochrysis lutheri
2500000
200000O
0
lIS
2E
1500000
i31000000
c
500000
o
O
0 02
0 04
0 06
0 08
01
Absorbaocia
I
Figura
19 Tendencia de la
datos obsenados
regresi n
0 12
0 14
0 16
0 18
om
modelo
I
entre la absorbancia y la
iadde
densi
Monochtysis
lutheri en cultivos de 100L
39
xabsorbancia40
Romo Piflera Abril Karim 2001
UABCS
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
Dunallie a tertiolecta
Donde
a
161737 936
b
2738972 75
x
absorbancia
500000
450000
400000
35
al
oo
300000 E
250000
200000
u
CD
e
a
150000
10
oo
50000
O O
0 02
0 04
0 06
0 08
01
0 12
0 14
0 16
0
18
Absoranci
nro
datos
I
obsen
modelo IFigura 20 Tendencia de la regresi n
edos
entre la absorbancia y la densidad
deDunaTtela tertiolecta en cuftivos
de100L
Chaetoceros
gracilis
Donde a
354705
199 b
6228837
89
Romo Pif era Abril Karim
UABCS
2001
Manual para el cultivo de microaJgas Memoria tØcnica
profesional
57pp
Chaetoceros gracilis
1600000
1400000
1200000
i
1000ooo
2 E
lA
c
4D
4D
Q
800000
600000
400000
200000
O
O
0 02
0 04
0 06
0 08
01
Absorbancia
I
Figura
21
Tendencia de la
regresi n
datos observados
0 12
0 14
0 16
0 18
nro
modelo
I
entre la absorbancia y la densidad de Chaetoceros gracilis
en cultivos de 100L
CULTIVOS DE 400 L
Isochrysis galbana
Donde
a
100504 156
b
10189981 4
x
absorbancia
41
UABCS
microa
gas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
lsochrysis galbana
1600000
1400000
1200000
g
J 1000ooo
Œ
c
el
el
o
0
800000
600000
400000
200000
O
O
0 02
0 04
0 06
0 08
Absorbancia
I
Figura 22 Tendencia
Monochrysis
Donde
0 12
01
0 14
nm
datos obsenedos
modelo
de la
regresi n entre la absorbancia y
galbana en cultivos de 400L
I
la densidad de Isochrysis
lutheri
172093 1
a
b 10066436 1
x
absorbancia
Monochrysis lutheri
1600000
1400000
1200000
g
J 1000ooo
si E
e
CD
CD
2
0
800000
600000
400000
200000
O
O
0 02
0 04
0 06
0 08
Absorbancia
I
Figura
23 Tendencia de la
datos obsenedos
regresi n
lutheri
en
0 12
01
0 14
nm
modelo
I
entre la absorbancia y la densidad de Monochrysis
cultivos de 400L
42
Romo Pitlera Abril Karim 2001
UABCS
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
Donde
a
56111 3817
b
1807414 9
x
absorbancia
160000
140000
120000
i
100000
g
80000
c
60000
40000
20000
O
o
0 02
0 04
0 06
0 08
Absorbancia
I
Figura 24
Tendencia de la
0 12
0 14
nm
datos obsenados
regresi n
01
modelo
I
entre la absorbancia y la densidad de Dunaliela
terlioJecta en cultivos de 400L
Chaetoceros
Donde
a
gracil s
74429 724
b
11035287 6
x
absorbancia
43
Romo Pinera Abril Karim 2001 Manual para el cultivo de
UABCS 57pp
Chaetoceros
microalgas
grad
Memoria tØØnica
profesional
is
1600000
1400000
1200000
i
1000ooo
g E
800000
I
c
Q
i
u
600000
c
400000
200000
O
O
0 02
0 04
0 06
0 08
Absorbancia
I
Fgura
25 Tendencia de la
datos observados
01
0 12
0 14
nm
modelo
I
entre la absorbancia y la densidad de Chaetoceros
en cultivos de 400L
regresi n
gracilis
7 ESPECIES EXISTENTES EN EL LEAP
El laboratorio consta de 8
especies
de
microalgas
las cuales
se
enlistan
a
continuaci n El origen de estas cepas esta indicado por el sub ndice
Isochrysis galbana
Monochrysis
ISOC
Pavlova lutheri
Dunaliella tertiolecta
Tetrase mis suecica
Tetraselmis tetrathe
Chaetoceros
1
gracilis
DUT2
3
TESAt
4
TETE
e
CHGRA
3
Chaetoceros calcitrans CHCl
Chaetoceros sp
Phaeodactylum
1 Centro de
CHX 1
3
3
tricomotum
PHAEOT
4
Investigaciones Biol gicas
2 Acuacultores de la Pen nsula
3 Centro
Investigaci n
Cient fICa
4
desconocido
no
Origen
2
MONO
del Noroeste CIBNOR
S A APSA
existe
y de Educaci n
Superior de Ensenada
CICESE
registro
44
UABCS
Memoria tØcnica
mictoalgas
profesional
57pp
BIBUOGRAF A
Cid A
Abalde J
V
R O
C Casas C
microa
gas
IPN
Carpenter
Departamento
and
B
Dom nguez
de
Biotecnolog a
y
Microalgas Cultivo
y O
44 pp
Bioingenieria MØxico
Monographs
vol
CINVESTAV
Biotecnolog a
518 pp
671pp
of carbono En W O O Stewart
Biochemistry Botanical
y
Voltolina L 1994 Las
Ed Interamericana MØxico
Microbiolog a
Herterotrophy
1995
210 pp
Espaæa
BotÆnica Marina Ed Umusa MØxico
1991
M R 1974
Droop
A R
C
la acuacuHura Cuadernos sobre
en
p L 1982
Dawes C J
E y Herrero
Universidad de Coruæa
Aplicaciones
Caæizares
P Torres
Fidalgo
Ed
gae
A
physiology
10Univ OfCalif Press
53559
pp
Fogg
G
E and B
Thake
1987
University ofWiscoinsin
Gladue
R
1991
CuHures and
Algae
Phytoplancton Ecology
Press Third Edition E U A 126 pp
for
Heterotophic microalgae production potential
feeds
aquaculture
The
En Rotifer and
Microalgae
CuHure
Systems
application
to
The Oceanic
Inst Hawaii 275286 pp
Guillard
R
R
Ly
invertebrates
En
Culture of
1973
Ryther
Smith
W
L y M
for
phytoplankton
H
Eds
Chanley
Invertebrates Anima s Plenium Press E U A
60
26
feeding
marine
CuHure of Marine
pp
Hoff F and T Snell 2001 P1ankton cuHure manual Florida Aqua Farm Inc E
A 162
U
pp
Kaplan
O A E Richmond
Richmond
A
Oubinsky
Ed
and S Aronson 1986
Handbook of
microalgal
Algal
mass
nutrition 147 198 En
culture
CRC Press
Inc
EU A
L pez
E BÆez
de
O y Huerta
microalgas
tecnol gicas
Mart nez
CICTUS
del centro
de
investigaciones
Universidad de Sonora MØxico
Nannochloris sp
Muller 1786
J
Departamento
aplicadas
al cultivo
cient ficas
y
74 pp
F E 1998 Medios alternativos y evaluaci n de los costos para el cultivo de la
microalga
Myers
A 1993 Manual de tØcnicas anal ticas
1962
Tesis de Maestr a
Laboratory
R Lewin
Ed
como
cultures
615
595
alimento del rot fero
Brachionus
plicatilis
UABCS 90 pp
En
Physiology and biochemistry
of
gae
a
Academic Press E U A
45
UABCS
Provasoli L J A
McLaughin and
for marine
Richmond
algae
MR
Arch Fur
1957 The
Droop
profesional
Microbiologie
25
development of artifICial
S H
Handbook of microalgal
mass
6999 En Richmond
culture CRC Press Inc
1979 Seawater aquariums the
captive
media
428
392
A 19868 Cel response to environmental factors
Ed
Spotte
Manual para el cultivo de mictoalgas Memoæa tØcnica
57pp
environment
E U AU S
Wiley
A
A
Interscience
E U A U S A 413 pp
Stein J
R 1973 Handbook
measurements
o
Phycological
Cambridge University
Methods
Culture methods and
growth
Press USA 446 pp
46
Romo Pilera Abnl Karim
UABCS
2001 Manual para el cultivo de
ANEXO I Formulaci n para la
y
Memoria tØcnica
microa
gas
profesional
57pp
preparaci n
del medio de cultivo f 2 de Gulllard
Ryther 1973
MACRONUTRlENTES
l
Reactivo
Nitrato de sodio
Fosfato de sodio
NaN
3
Na2H2P04 H20
i
en 1 litro de agua destilada Soluci n de
Usar 1 mL por cada Iftro de aqua marina Jara
cultivo
Disolver los reactivos
trabajo
SILlCATOS
Reactivo
Silicato de sodio
3 9H20
NaSi
reactivo en 1 litro de agua destilada
en un recipiente
por separado
Usar 1 mL por cada Iftro de agua marina Jara
cultivo
Silicatos se les considera parte de los macronutrientes pero solo se utilizan para las
diatomeas
Disolver el
MICRONUTRJENTES
Reactivo
Soluci n
Sulfato
Cantidad
g1 L
stock de metales traza
cœprico CUS04
Sulfato de zinc
5
H20
Znso4 7 HzO
0 98
2 2
Cloruro de cobalto CoCh 6HzO
Cloruro de
man aneso
Molibdato de sodio
MnCh 4HzO
NazMo04 2HzO
1 0
18 0
0 63
Disolver en 100 mL de agua destilada cada uno de los reactivos por separado para
re arar las soluciones stock de metales traza
Conservarlas en el refri erador
Cloruro fØrrico
FeCb 6 H2
EDTA dis dica Na2EOTA
3 15
4 36
Para preparar la soluci n de trabajo de micronutrientes primero disolver en su totalidad el
EDT A dis dica agregar el cloruro fØrrico hasta que se disuelv finalmente agregar 1 mL de
cada una de las soluciones stock de metales traza aforando
Usar 1 mL de esta soluci n JOr cada litro de aqua marina Jala
a
1000 mL de agua destilada
cultivo
47
Romo Pillera Abril Karim
UABCS
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
VITAMINAS
Reactivo
Soluci n stock de vitaminas
Cantidad
8iotina B6
0 1
disolver
en
100 ml de
Cianocobalamina
0 1 g disolver
en
100 ml de agua destilada
a
ua
destilada
812
Pesar
hacer soluciones
se
aradas de cada
Tiamina 81
una
Conservarse
en
refri eraci n
0 2
Para preparar la soluci n de trabajo de vitaminas se disuelve la tiamina y se adiciona 1 ml
de la soluci n stock de B6 y 1ml de 812 y aforar a 1 Utro de agua destilada
Usar 0 5 roL f
Or litro de aaua marina para cultivo
NOTA Para la
preparaci n de vitaminas este laboratorio utiliza vitaminas provenientes de
una soluci n comercial inyectable de complejo 8 El procedimiento para elaborar la soluci n
con base a las concentraciones requeridas para el medio de cultivo f 2 es el siguiente
Disolver dos ampolletas de 8EOOYECTAMR
80 mg de 812
Aforar a 1 lde agua destilada y se hace la soluci n primaria
tomaran 10 ml
en
19 8 g de 81
De esta soluci n
1 l de agua destilada para hacer la soluci n de
tomaran 0 5 ml por litro de agua marina
a
trabajo
primaria
se
de la cual
se
utilizar para cultivo
OTRA VIA ES
Disolver dos
ampolletas
de
OOXEMINASuR
GenØrico Intercambiable
900 mg de 812
1989deB1
Aforar
a
1 ml en
1 l de agua destilada para preparar la soluci n primaria De Østa soluci n tomar
1 lde agua destilada para la soluci n de trabajo de la cual se tomaran 0 5 ml por
litro de agua marina
a
utirlzar para cultivo
48
Romo Pilera Abril Karim 2001
UABCS
profesional
57pp
ANEXO 11 BIT ACORAS DE APARATOS
BIT`CORA HORNO DE MICROONDAS
FECHA
USUARIO
TEIMPO DE USO
OBSERVACIONES
49
i
profesional
UABCS 57pp
BIT`CORA AUTOCLAVE
FECHA
USUARIO
TIEMPO DE USO
OBSERVACIONES
50
Romo Piftera Abril Karim 2001
UABCS
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
BIT`CORA MICROSCOPIO
FECHA
USUARIO
TIEMPO DE USO
OBSERVACIONES
51
Romo Pitiera Abril Karim 2001 Manual para el cultivo de
UABCS
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
BIT`CORA BALANZA
FECHA
USUARIO
REACTIVO QUE
TIEMPO DE
PESO
USO
OBSERVACIONES
˛
52
Romo Pinera Abril Karim
UABCS
microa
gas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
BIT`CORA DESTILADOR
FECHA
USUARIO
TEIMPO DE USO
OBSERVACIONES
53
Romo P f era Abril Karim 2001
UABCS
microa1gas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
BIT`CORA SISTEMA DE FILTRACi N E IRRADIACi N DE AGUA MARINA
FECHA
USUARIO
INICIO
TERMINO
TOTAL DE MINUTOS
54
Romo Piftera Abnl Karim 2001
UABCS
microalgas
Memoria tØcnica
profesional
57pp
ANEXO 11I CRlSTALERIA INVENTARIO
MATRAZ
CANTIDAD
Atorado 1000 ml
2
Atorado 500 ml
8
Atorado 100 ml
Bola de fondo
1
plano
1000 ml
Bola de fondo plano 250 ml
Erlenmeyer 1000 ml
Erlenmeyer 125
Erlenmeyer 225
12
23
ml
56
mL
36
Erlenmeyer 4 L
Erlenmeyer
11
500 mL
6
1
Erlenmeyer Kitasato 1000 mL
14
Fembach 2800 mL
41
PROBETAS
2000 mL de
plÆstico
1
1000 mL de
500 mL de
plÆstico
plÆstico
6
1
500 mL
1
100 mL
De
plÆstico
4
100 rol
2
50mL
9
25mL
4
10ml
2
VASOS DE PRECIPITADO
2
1000 mL
De
De
plÆstico
plÆstico
1000 mL
1
600 mL
1
500 ml
1
250 mL
11
100 mL
De
plÆstico
3
100 mL
1
OTROS
Embudo de vidrio
1
Embudo de plÆstico
2
55
Romo
Pii
era Abril Karin 2001 Manual para el cultivo de mictoalgss Memoria tØcnica
UABCS
57pp
ANEXO
IV
DE
PROTOCOLO
USO
DEL
SISTEMA
DE
profesional
FIL TRACION
E
IRRADIACION DE AGUA MARINA
1 Colocar los filtros de cartucho
la entrada del agua al
en
orden descendiente 15
10
5
1 J
1rT1
con
referencia
en
aparato
II Conectar las mangueras de entrada y salida de agua
11I
Abrir la llave de
desag e
11I
ubicada dentro del Ærea fr a
desfogue
colocando la manguera de
Ir al cuarto de bombas
Conectar y
encendidas
encender las
Importante
se
lÆmparas
de luz Ultravioleta
recuerda que para que este
Revisar que Østas
procedimiento
necesario haber encendido la bomba para la filtraci n por
se
lleve
a
el
arena
siguiendo
uso
apagar las
estØn
cabo
es
protocolo
conespondiente
IV
Anotar hora de inicio
anotarse
V
en
la bitÆcora
Al tØrmino
aparato
quitando primero
e
ir
a
apagar la bomba
los filtros de cartucho
desconectar la manguera de entrada de agua de
dejar
vac o
se
que
de
su
lÆmparas
y
la bitÆcora
Desconectar el
aparato
en
salga
el
Enjuagar
debe poner a
aparato
inclinando
un
mar
en
orden de 15
luego quitar la
poco el sistema para que
la manguera y los filtros de cartucho
secar en
cuarto de bombas
una vez
a
Desarmar el
11Jm
despuØs
manguera de salida y
quede completamente
enjuagada
la manguera esta
la toma de aire del Ærea hœmeda
56
Romo Piftera Abril Karin
2001
Manual para el cufivo de
microalgas
UABCS 57pp
PROTOCOLO DE USO DEL SISTEMA DE BOMBEO Y FILTRACION POR
ARENA DE AGUA MARINA
1 Verificar que
hay
en
agua
el
dep sito
o
cisterna
11 Verificar que el filtro por arena tenga conectadas y
las mangueras de salida y
aseguradas
entrada de agua
111 Verificar que la bomba estØ conectada al filtro por
arena
y enchufada
primer bomba
y
filtro ubicados entrando al cuarto de bombas
IV
Iniciar antes que nada el RETROLAVADO
reloj
hacia donde dice
hacia el
V
Apagar
dice filter
VI
desag e
backwash
Encender el
interruptor de
Al tØrmino de
interruptor
su uso
hacia donde dice Closed
la llave
a
favor de las manecillas del
verificar que la manguera de
la bomba Iniciar el FllTRAOO
y encender el
mover
este conectada
la bomba y esperar 2 minutos
primeramente
de la bomba
apagar el
desfogue
interruptor
moviendo la llave hacia donde
etiquetado microalgasj
de la bomba acto
seguido
Desconectar la manguera de salida del filtro y
mover
la llave
quitar el tap n
del
filtro para vaciarto
57

MANUAL PARA EL CULTIVO DE MICROALGAS Bi LOGO

Transcripción

Documentos relacionados

Microalgas dulceacuícolas

2. Mapas Sector Agricola