Taller 3 - Entendre la recurrència del càncer

Taller 3 - Entendre la recurrència del càncer

Cèl·lules Mare i Càncer
• Què són les cèl·lules mare?
• Tipus de cèl·lula mare
a) Cèl·lula mare embrionària (ES)
b) Cèl·lula mare adulta
- Cèl·lula mare adulta en un teixit sa
- Cèl·lula mare tumoral (CSC)
El epitelio intestinal
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/res
earch.html
Movie 1: The gut
El epitelio intestinal
Intestí prim
Colon
Reyes et al, 2005.
Tinción histoquímica de tejido normal y tumoral
Normal
Células
diferenciadas
Células
madre
Tumor
Cáncer de colon, una enfermedad con diferentes etapas
Cáncer de colon, una enfermedad con diferentes etapas
adenoma
adenocarcinoma
Stage I
Stage II
Stage III
Stage IV
Desenvolupament
del càncer
Supervivència
als 5anys
Reaparició del
tumor després
de la cirurgia
%
Diagnòstics
segons l’estadi
90%
70%
56%
7%
5%
10%
40%
-
37%
63%
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/res
earch.html
Movie 4: Adenoma formation
Acumulació de mutacions
Mutacions
en gens de proliferació
Cèl·lula
Sana
Inestabilitat
genòmica
Cèl·lula
Transformada
Mutacions
en gens de polarització
Tumor
Benigne
(Adenoma)
Mutacions
en gens de control de mutacions
Adenoma
Avançat
Cèl·lules que
inicien el tumor
Metàstasi
Tumor Maligne
(Carcinoma)
Els tumors també tenen cèl·lules mare
Colon Sano
Adenocarcinoma
Differentiated-like cells
Diff
TA
ISC-like
cells
ISC
ISC
ISC
Merlos-Suárez et al. Cell Stem Cell (2011)
Els tumors també tenen cèl·lules mare
Jung et al., Nature Medicine (2011)
Merlos-Suárez et al. Cell Stem Cell (2011)
Les cèl·lules mare tumorals poden generar nous tumors
Tumor Intestinal
Cèl·lules tumorals
diferenciades
Cèl·lules mare
tumorals
Nou tumor o metàstasi
Células Madre del Cáncer y Terapia
Terapia
Convencional
Recidiva
Células Madre del Cáncer
CSCs
No elimina las CSCs
Las CSCs regeneran el tumor
Tumor
Curación
Terapia
Contra CSCs
Elimina las CSCs
Los tumores degeneran
¿Cómo podemos aislar las células madre intestinales?
1. Aislamiento a partir de resecciones intestinales
Enzimas (Colagenasa) +
Fuerza mecánica
Tumor
Mezcla de Células
individuales
Enzimas (Dispasa) +
Fuerza mecánica
Tratamiento
químico
Tejido normal
Colon diseccionado
Verde
2. Tinción con
anticuerpos
Marcador
Epitelial
Mezcla de Células
individuales
Rojo lejano
Marcador
ISC
Verde
Rojo
Marcador
Epitelial
Marcador
sanguíneo
¿Cómo podemos aislar las células madre intestinales?
3. Purificación de las células madre por citometría de flujo
Células madre marcadas
(fluorescencia roja)
Citómetro celular
Tubo 1:
Resto de células
Tubo 2:
Células madre
purificadas
Cultivo celular
in vitro
Organoides derivados de células madre intestinales en cultivo
in vitro
dia
0
dia dia
2
1
dia
5
dia
7
dia
9
dia
11
dia
13
Gota de 50 μl matrigel
A partir de 2000 células plaqueadas
Jung et al., Nature Medicine, 2011
Organoides derivados de células madre intestinales en cultivo
in vitro
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/res
earch.html
Movie 6: MiniGut 3D
Pase celular de organoides
Organoides dentro de
una gota de matrigel
Añadir 1ml de
Matrisperse
Pipetear durante
2-3min
Añadir 0.5ml
de medio
Descartar
el sobrenadante
Resuspender el
pellet en 50µl
de matrigel frío
Centrifugar
5min a 1000rpm
Descartar
el sobrenadante
Transferir 100µl a un
nuevo tubo
Transferir el
matrigel con
células a un
nuevo pocillo
Añadir 0.5ml
trispina-PBS 50%
Centrifugar
5min a 1000rpm
Incubar 5min a
37ºC y después
añadir 0.5ml
de medio
Proyectos de investigación en el laboratorio
A partir del cultivo de células madre intestinales (normales y tumorales) estamos interesados
en:
-
Identificar nuevos marcadores de célula madre
-
Identificar marcadores específicos de célula madre tumoral
-
Usar estos marcadores para aislar y caracterizar estas células
-
Encontrar nuevas dianas terapéuticas para desarrollar fármacos contra las células
madre tumorales
-
Desarrollar protocolos para el transplante de organoides sanos en pacientes con
enfermedades inflamatorias intestinales
http://www.hubrecht.eu/research/clevers/research.html.
Movie 3: Transplantation
Moltes Gràcies