16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968 - Instituto Nacional de Pediatría

Transcripción

Banco de Sangre
Instituto Nacional de Pediatría
Código: CAL-01
Nivel de Revisión: 03
Fecha: 16 ENERO de 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 1 de 5
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de identificación de los
Procesos necesarios para el sistema de gestión de la calidad
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Guillermo Escamilla
Guerrero
Nombre:
M. Leticia Medina Macias
Nombre:
Dinora V. Aguilar
Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
16 enero 2012
Fecha:
16 enero 2012
16 enero 2012
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-25
Fecha: 26 de Agosto 2003
Página 1 de 32
Procedimiento de Grupos sanguíneos
y Anticuerpos
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-25
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y Anticuerpos
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
26/08/03
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y Anticuerpos
DESCRIPCION DEL PROCESO
Una vez que al donador se le toma la muestra (Ver procedimiento CAL-43) se
procede a caracterizarlo inmunohematológicamente abarcando los siguientes
estudios:
1. Grupo sanguíneo (Sistema ABO)
2. Subgrupo sanguíneo (Sistema A)
3. Grupo sanguíneo (Sistema Rho)
4. Determinación del Du
5. Fenotipo Rho (EeCc)
6. Rastreo de Anticuerpos irregulares fuera de
Sistema ABO (semipanel o panel completo)
7. Hemolisinas
8. Chequeo de grupo sanguíneo (Sistema ABO &
Rho)
Los métodos para realizar estos ensayos (a excepción de las Hemolisinas)
son:
 Método semiautomático
Tubo
Gel
 Método automático
Gel
Las pruebas de aglutinación establecen:
 HEMOLISIS: Indica una reacción positiva para la
unión Antígeno – anticuerpo.
 AGLUTINACION: la presencia del par Antígeno y/o
Anticuerpo complementarios relevante.
 NO AGLUTINACIÓN la ausencia de cualquiera de
ellos.
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y Anticuerpos
INTERPRETACION Y PONDERACIÓN DE LAS AGLUTINACIONES
DESCRIPCION
GRADO
PONDERACION
Hemolísis total
Ht
Botón completo, sobrenadante claro
4+
12
Botón grande con algunos agregados, fondo claro
3+
10
Botón fragmentado en varios grumos grandes, fondo
2+
8
1+
5
+/-
1
negativo
0
turbio
Botón fragmentados en numerosos grumos regulares,
fondo turbio
Botón fragmentado múltiples grumos pequeños, fondo
muy turbio
Aglutinación no visible
1.- DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO
La prueba consiste de dos etapas:
 Prueba directa o celular: eritrocitos estudiados
desafiados contra antisueros comerciales de
especificidad conocida
 Prueba inversa o sérica: suero estudiado desafiado
contra eritrocitos de fenotipo conocidos
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y Anticuerpos
PRUEBA DIRECTA
en tubo
Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete
eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se
transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).
Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml aproximadamente de
solución que contiene solución salina y solución de pHix + dos gotas de concentrado eritrocitario del donador
(concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%)
Se realiza la prueba directa y la prueba inversa
Para la prueba directa se requiere lo siguiente:
Se identifican 4 tubos
TUBO 1
Agregar una gota
de reactivo Anti-A
(suero de color
azul)
TUBO 2
Agregar una gota de
reactivo Anti-B
(suero de color
amarillo)
TUBO 3
Agregar una gota de
reactivo Anti-AB
(suero incoloro)
TUBO T
Agregar 2 gotas del
plasma o suero del
donador
Adicionar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a 3500RPM
Se realiza un ligera agitación para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscópica para observar si existe o no
aglutinación
Registrar resultados en el formato F-A-14-26
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y Anticuerpos
PRUEBA INVERSA
en tubo
Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O
Células de fenotipo conocido preparadas a una concentración del 2-5%
TUBO A1
Agregar una gota de
celulas A1+ 2gotas del
plasma del donador
TUBO A2
Agregar una gota de
celulas A2 + 2gotas del
plasma del donador
TUBO B
Agregar una gota de
celulas B + 2gotas del
plasma del donador
TUBO O
Agregar una gota de
celulas O + 2gotas del
plasma del donador
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.
Se realiza un ligera agitación para desprender el botón de celulas
Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación
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y Anticuerpos
Formato F-A-14-26 que es llenado por el personal de área de donadores:
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y Anticuerpos
Tabla 1
Prueba Directa
GRUPO SANGUINEO
ANTIGENOS PRESENTES EN LOS
ERITROCITOS
ANTICUERPOS PRESENTES EN
SUERO O PLASMA
A
A
Anti - B
B
AB
O
GRUPO
A
B
AB
O
CAL-02-B
Anti-A
POST
NEGT
POST
NEGT
B
AyB
ni A ni B
INTERPRETACION
Prueba DIRECTA
Tubo con Antisuero
Anti-B
Anti-AB
Testigo
A1
NEGT
POST
NEGT
NEGT
POST
POST
POST
NEGT
POST
POST
NEGT
NEGT
NEGT
NEGT
POST
NEGT
Anti - A
----Anti – A & Anti - B
Prueba INVERSA
Tubo con céluas:
A2
B
NEGAT
POST
POST
NEGT
NEGT
NEGT
POST
POST
O
NEGAT
NEGT
NEGT
NEGT
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y Anticuerpos
De forma Manual:
GRUPO SANGUIENO SABO
EN GEL
transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Y se puede introducir al equipo WADiana o realizarlo
de forma manual.
Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solución de DianaSol 1
con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)
Se realiza la prueba directa y la prueba inversa
Empleo de tira del DianaGel Donors/Donantes
ver imagen
INVERSA
MICROTUBOS
7y8
colocar 50 l de eritrocitos
reactivos (Serigrup Diana A1 y B)
con 50 l del suero o plasma del
donador
DIRECTA
MICROTUBOS
1, 2, 3, 4, 5, y 6
colocar 25 l de solución de
eritrocitos del donante
Centrifugar en DianaFuge
(ver imagen)
Leer
La lectura puede ser visual o en el DianaScanner (equipo WADiana)
(ver imagen)
Interpretación
(Acorde a la imagen presentada)
o mandar impresión
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y Anticuerpos
A1
B
# donador:
Fecha:
Iniciales y clave de quien realizó:
S.ABO
CAL-02-B
S.Rho
AT
INVERSA
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y Anticuerpos
2. SUBGRUPOS SANGUINEOS (SISTEMA ABO)
Para realizar la prueba de Lectina A1 y H se requiere lo siguiente:
Marcar 1 tubo con la letra A1 (Anti-A1) y otro con la letra H (Anti- H)
TUBO A1
Agregar 1 gota del reactivo Anti-A1 Lectina
TUBO H
Agregar 1 gota del reactivo Anti-H
Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.
Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación y se interpretan los resultados
abla # 2 Subgrupo SABO
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y Anticuerpos
3.- DETERMINACION DEL FACTOR Rh
GRUPO SANGUIENO Rho
en tubo
transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).
Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml de solución salina con
amortiguador de Phix con dos gotas de concentrado eritrocitario del donador
Marcar un tubo con la letra Rh (anti D) y otro con la letra C (control)
TUBO D
agregar una gota del
antisuero comercial
Anti - D
TUBO C
Agregar una gota del reactivo
Control Rh ó
ALB 22%
Agregar una gota de suspensión al 2-5% de eritrocitos del donador
Centrifugar 45 segundos/3500RPM
Leer resuspendiendo con movimiento suave el botón. Interpretación acorde a la aglutinación presente
NO AGLUTINACION
Rh neg (D-)
AGLUTINACION
Rh post (D+)
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y Anticuerpos
4. Determinación del Du
SI la prueba Anti-D es NEGATIVA
Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos a 37 C
Centrifugar e Interpretar
Positiva
Negativa
Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica.
Se decanta la salina por completo en la última lavada
Agregar una gota de suero de Coombs poliespecífico (anti IgG-C3d)
Centrifugar e interpretar
Positiva
Negativa
El resultado
se considera
Rh+ ( D+)
El resultado
se considera
Rh- y Du+
( para fines de
transfusión se
considera :
donadores Rh+
receptores Rh-
Rh - (D-)
La determinación del grupo ABO en la tarjeta de Gel conlleva la
determinación del anti D y el Du
Los resultados de Rh negativo en gel se confirman con el Anti D Totem
(anticuerpo policlonal dirigido contra las 6 fracciones del Antígeno D: I – VI)
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y Anticuerpos
5. FENOTIPO Rho (EeCc) :
Marcar la tarjeta con el número del donador que le corresponde
Hacer un suspensión de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra)
Añadir 25 microlitros de la suspensión de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e
(Ver imagen)
Centrifugar en DianaFuge y leer manual (Tabla 3A, 3B, 3C)
Registrar los resultados en el formato F-A-14-23
Interpretación de fenotipo Rh
Registro del donador
Fecha:
Iniciales y clave de quien
realizó
Fenotipo: CcE
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Fecha:
realizó
Fenotipo: CEe
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y Anticuerpos
FORMATO F- A – 14 – 23
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y Anticuerpos
Tabla 3B
Fenotipo Rh
REACCION SEROLOGICA ANTI
FENOTIPOS
GENOTIPO
D
C
c
E
e
WIENER
FISHER
DCe/dce
+
+
+
-
+
R1r
DCcee
DCe/DCe
+
+
-
-
+
R1R1
DCCee
DcE/dce
+
-
+
+
+
R2r
DccEe
DcE/DcE
+
-
+
+
-
R2R2
DccEE
DCe/DcE
+
+
+
+
+
R1R2
DCcEe
dce/dce
-
-
+
-
+
rr
ddccee
Dce/dce
+
-
+
-
+
R0r
Dccee
dCe/dce
-
+
+
-
+
r'r
ddccee
dCe/dCe
-
+
-
-
+
r'r'
ddccee
dcE/dce
-
-
+
+
+
r" r
ddccee
dce/dcE
-
-
+
+
-
r" r "
ddccEE
dCe/dcE
-
++
+
+
+
r' r"
ddCcEe
DCe/DCE
+
+
-
+
+
R1RZ
DCCEe
DcE/DCE
+
+
+
+
-
R2RZ
DCcEE
DCE/DCE
+
+
-
+
-
RZRZ
DCCEE
dCE/dCe
-
+
-
+
+
r y y'
ddCCEe
dCE/dcE
-
+
+
+
-
r y r"
ddCcEE
dCE/dCE
-
+
-
+
-
ryry
ddCCEE
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y Anticuerpos
Tabla 3C
Fenotipo Rh
ANTI-
CAL-02-B
FENOTIPO
GENOTIPO PROBABLE
D
C
E
c
e
WIENER
FISHER- RACE
WIENER
FISHER- RACE
+
+
-
+
+
Rh1rh
DCe
R1r
DC/dce
+
+
-
-
+
Rh1Rh1
DCe
R1R1
DC/dce
-
-
-
+
+
rhrh
ce
rr
Dce/dce
+
+
+
+
+
Rh1Rh2
DCcEe
R1R2
DC/DcE
+
-
+
+
+
Rh2rh
DcEe
R2r
DcE/dce
+
-
+
+
-
Rh2Rh2
DcE
R2R2
Dce/DcE
+
-
-
+
+
Rh rh
Dce
Ror
Dce/dce
-
+
-
+
+
rh´rh
Cce
r´r
dC/dce
-
-
+
+
+
rh´rh
cEe
r"r
dce/dce
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y Anticuerpos
6.- DETERMINACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
SISTEMA ABO (SEMIPANEL O PANEL COMPLETO)
FUERA
DEL
A todas las mujeres, personas politransfundidas y personas Rh negativos se les
realiza la siguiente prueba:
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y Anticuerpos
RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES FUERA DE SISTEMA ABO, EMPLEANDO PANEL TRIO
Se marcan los tubos con # del 1 al 3 con su respectivo duplicado y un tubo más con una T (testigo) y con su duplicado
En cada tubo se coloca:
TUBO 1
1 gota de Gamma Trio #1 + 2
gotas de suero del donador
TUBO 2
gota de suero del donador
TUBO 3
TUBO T
1 gota De suspensión de
eritrocitos del donador + 2
TUBO 1’
gotas de suero del donador
TUBO 2’
TUBO 3’
TUBO T’
1 gota De suspensión de
eritrocitos del donador + 2
Se realiza una ligera agitación a cada uno de los tubos y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos.
Las rpm estan establecidas en la centriifuga.
Se realiza la lectura macroscópica en salina rapida y reportar si existe aglutinación (Ver tabla 3A)
Los tubos #1, 2, 3 y T se incuban 22 C durante 60 minutos
Los tubos # 1’, 2’, 3’ y T” se incuban a 37 C durante
30-60 minutos
Se realiza la lectura macroscópica en frio para observar
aglutinación (Ver tabla 4) y se desechan las muestras
Centrifugar 30 seg. Antes de realizar la lectura macroscópica
para observar aglutinación
NEGATIVO
Registrar
resultados como
Salina a 22 C
en el formato
F-A-14-23
POSITIVO
Registrar resultados como Salina a 37 C
en el formato F-A-14-23
Se lava con solución salina con pHix y se centrifuga durante
1minuto se realiza este procedimiento 3 veces (al decantar
tener cuidado con el botón) en el último lavado decantar la
salina por completo
Agregar 1 gota de Anti-IgG-C3d
Se realiza el panel
completo con las
diluciones de los
eritrocitos del IMSS
del Banco Central
de Sangre del
Centro Medico
Nacional Siglo XXI
Mezcle ligeramente, centrifuge y leer
Ademas de
POSITIVO
Registar
resultados como
Salina Coombs y/
o CAGH en el
formato
F-A-14-23
NEGATIVO
Se realiza la Prueba confirmatoria o CAGH (adición de células
sensibilizadas con anti D)
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y Anticuerpos
Y la siguiente reacción en tarjeta:
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:
Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 3 y un T( testigo) Las células se preparan empleando 10 l de eritrocitos con 1
ml de solución Diana 2
MICROTUBO 1
Anadir 50 l de
Gamma Trio 1
MICROTUBO 2
Anadir 50 l de
Gamma Trio 2
MICROTUBO 3
Anadir 50 l de
Gamma Trio 3
MICROTUBO T
Anadir 50 l de
eritrocitos del donador
MICROTUBO 1, 2, 3 y T
Anadir 25 l de plasma del donador
Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C
Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4)
Si es positivo se debe realizar el panel completo (10 -11 células del panel siglo XXI o comercial)
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y Anticuerpos
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta con técnica LISS-gel se requiere lo siguiente:
Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 10 u 11 y un T( autotestigo)
10 l EN CADA UNO DE LOS MICROTUBOS DE CADA UNA DE LAS CELULAS Y DEL TESTIGO
Realizar una suspensión con 10 l de eritrocitos con 1 ml de DIANA 2 y adicionar a todos los microtubos 50microlitros
CEL 1
CEL 2
CEL 3
CEL 4
CEL 5
CEL 6
CEL 7
CEL 8
CEL 9
CEL
10
CEL
11
MICROTUBO 1 al AutoTestigo
Anadir 25 l de suero del donador
La interpretación se realiza contra la CARTA PANEL
Tabla 4
Detección de Anticuerpos con reactivo Gamma TRIO 1, 2 y 3
Escanear imagen de carta panel del:
 CARTA PANEL DEL TRIO
 CARTA PANEL DE SIGLO XXI
 CARTA PANEL DE PANEL DIANA
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AT
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y Anticuerpos
7. HEMOLISINAS
A las personas con grupo O se les realiza la siguiente prueba:
Para realizar la prueba de Hemolisinas se requieren los tubos con células A1, A2, B y O de la prueba inversa y de el tubo
AutoTestigo de la prueba directa
Todos los tubos se incuban a 37 C/1hora y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas
en la centriifuga.
Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis
La Prueba es negativa cuando el líquido sobrenadante es de color claro y positiva cuando es de color rojizo
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y Anticuerpos
8.- Chequeo de Grupo sanguíneo (Sistema ABO & Rho)
CONFIRMACION DEL GRUPO
SANGUIENO SABO EN GEL
Se realiza la centrifugación del tubo PILOTO que se toma directamente de la bolsa de concentrado eritrocitario (etiquetado
con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación
del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).
con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)
Se realiza una prueba directa
Empleo de tira del DianaGel Confirm
(ver imagen)
MICROTUBOS
Ctrl
colocar 50 l
donador
DIRECTA
MICROTUBTOS
A, B, D, Ctrl
eritrocitos del donante
(ver imagen)
Leer
La lectura puede ser visual
(ver imagen)
Interpretación
Registrar resultados en la libreta de RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A
y pegar la impresión
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y Anticuerpos
Fecha:
realizó
Fecha:
realizó
Libreta RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A
# REGISTRO
FECHA DE
REALIZACION
A B D
CAL-02-B
GRUPO
DETECTADO
IMAGEN
Ctrl
GPO REPORTADO
DISCREPANCIAS
REPORTA
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y Anticuerpos
El formato F-A-14-26 se muestra a continuación:
CAL-02-B
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y Anticuerpos
El formato F-A-14-26 se llena de la siguiente manera:
Anti-A:
Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número
que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).
Anti-B:
Anti-AB:
Auto (Testigo):
GR A1:
GR A2:
GR B:
GR O:
Lec. A1:
Esta prueba se realiza solo en personas de grupo
sanguíneo A. Se anota + si es positivo o – si es negativo y
el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique
la tabla 3A).
Ant. H:
Esta prueba se realiza solo en personas de grupo
sanguíneo A. Se anota + si es positivo o – si es negativo y
el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique
la tabla 3A).
Rh Anti-D:
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y Anticuerpos
T Auto:
Resultados
Grupo:
que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A)
Escribir la letra del grupo donador.
El formato F-A-14-23 muestra a continuación:
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y Anticuerpos
Fecha:
Día, mes y año en que se esta realizando el
análisis de la muestra.
Registro:
Se escribe el análisis que se esta realizando
en este caso es Anticuerpos irregulares.
# del donador:
# que le corresponde al donador según la
bitácora de ingresos y egresos.
22 C:
Temperatura a la que se realizo la prueba.
37 C:
Temperatura a la que se realizo la prueba.
1:
.
# de microtubo que se esta analizando.
Se anota + si es positivo o – si es negativo y
el número que le corresponde del 1 al 4
(Según lo indique la tabla 3A)
2:
.
.
3:
.
T:
Conclusiones:
CAL-02-B
Testigo de la prueba.
Escribir
las
observaciones
resultados obtenidos.
de
los
Banco de Sangre
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y Anticuerpos
Soluciones requeridas
La solución salina y pHix se compone de 1lt de solución salina isotónica y 10 ml
de la solución pHix.
La suspensión de eritrocitos se prepara con 2.5 – 3.0 ml aproximadamente de
solución salina isotónica y pHix más 2 gotas de eritrocitos del donador.
La solución Diana-1 es una solución salina para suspensiones de hematíes para
técnicas en gel, se utiliza para la determinación de grupos sanguíneos, pruebas
cruzadas y autocontrol , se debe conservar a 18-25 C.
La solución Diana-2 Es una solución de baja fuerza iónica para suspensión de
hematíes que facilita la unión de anticuerpo a los hematíes por reducirse la
densidad de la nube de cationes alrededor de los mismos, favoreciendo la
sensibilización , se conserva a 2-8 C.
REGISTROS
El Formato F-A-14-26 se debe almacenar 1año.
El Formato F-A-14-23 se debe almacenar 1año.
LISTA DE DISTRIBUCION
Laboratorista:
____________________________________
Suplente:
____________________________________
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Fecha: 23 de Octubre de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de Técnicas de Serología
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
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Firma:
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Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
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Código: CAL-26
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.
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
26/08/03
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Código: CAL-26
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En este procedimiento de Serología se pueden encontrar pruebas de Rutina,
Confirmatorias, seguimiento y para pacientes dentro del protocolo de Transplante de
medula ósea.
Dentro de las pruebas que se realizan de rutina y/o
encuentran:
tamizaje en el laboratorio se
PRUEBAS DE TAMIZAJE
ENSAYO PARA DETECCION DE:
PRUEBA DE RUTINA
Anticuerpos contra Chagas
ELISA
Anticuerpos contra Chagas
HAI
Antígeno de Superficie de Hepatitis B
ELISA
Anticuerpos contra HCV
ELISA
Anticuerpos contra HIV 1+2
ELISA
Anticuerpos contra Sífilis
VDRL o RPR
Anticuerpos contra Brucela
Antígeno Rosa de bengala
En caso de salir reactivo la prueba de tamizaje, se procede con la realización de
la prueba confirmatoria o suplementaria:
PRUEBAS CONFIRMATORIAS
MARCADOR
CHAGAS
HBV
HCV
HIV
HIV
SIFILIS
SIFILIS
BRUCELA
CAL-02-B
CONFIRMATORIA
HAI 2 - MERCAPTO ETANOL
NEUTRALIZACIÓN
INMUNOBLOT RIBA HCV
WESTERN BLOT HIV-1
WESTERN BLOT HIV-2
TP-PA ELISA
TP-PA HAI
ANTIGENO BLANCO
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PROPUESTA DE UN ALGORITMO DE
TRABAJO EN BANCO DE SANGRE
Reactivo
DESTINO
FINAL DEL
PRODUCTO
2a corrida
(tubo y piloto)
1er CORRIDA DE MUESTRAS
PARA MARCADORES
SEROLOGICOS
Negativo
Negativo
REPORTE A
DONADOR
Reactivo
PRUEBA
CONFIRMATORIA
Negativo
NEGATIVO
Reactivo
Solicitar 2a muestra
Se corre ELISA
(1er & 2a MUESTRA)
INDETERMINADO
POSITIVO
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LIBERACION
Y
ASIGNACION
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ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (ELISA)
La enfermedad de Chagas es una infección provocada por un parásito llamado
Tripanosoma cruzi. El diagnostico para esta enfermedad depende de la fase en que se
encuentra la cual puede ir de una fase aguda a una fase crónica. Para el diagnostico de
la fase crónica se utiliza entre otros métodos el de ELISA y para la fase aguda el HAI
que serán los métodos que se explicaran en este procedimiento.
El método de Ensayo inmunoenzimàtico (ELISA) para la determinación de anticuerpos
contra el Tripanosoma cruzi se fundamenta en que la muestra del donador o paciente se
diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antígeno, si contiene
anticuerpos específicos contra Tripanososma cruzi, se formara un complejo que se
mantiene unido al soporte. La fracción que no se une se desecha por medio de lavados.
Se agrega anticuerpos anti inmunoglobulina humana conjugados con peroxidasa, si se
produjo la reacción en la primera etapa del proceso, se unirá el conjugado. Se realiza un
segundo lavado para eliminar en anticuerpo conjugado que no se une. Se agrega el
sustrato. Si existe unión con el conjugado aparece un color celeste y se detendrá la
reacción con ácido sulfúrico, con lo que el color celeste vira al amarillo. La concentración
de anticuerpos específicos es directamente proporcional al color de la reacción.
El reactivo que utilizaremos para realizar la prueba es el CHAGATEST ELISA:
 Incluye una policubeta sensibilizada que contiene tiras
removibles con pocillos que contienen antígenos
citoplasmáticos y de membrana de Tripanosoma cruzi
inmovilizados.
 Diluyente de muestra
 Buffer de lavado de placa
 Controles positivo y negativo
 Anti inmunoglobulina humana conjugado
 Solución de revelado
 Solución de paro
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La muestra para esta prueba puede ser plasma o suero y de preferencia no se debe de
utilizarse muestras lipemicas, hemolizadas o cualquier otra causa en la que la muestra
se observe turbia.
Cuando el análisis no se realiza el día de la extracción de la muestra se puede conservar
la muestra durante 7 días a 2-10°C o congelada a –20°C, cuando la muestra se requiera
guardar y descongelar de nuevo.
Este procedimiento se lee a una longitud de onda primaria de 450nm (filtro de lectura),
una longitud de onda secundaria de 620-650nm (filtro de referencia).
Una vez que se inicia el análisis no debe de existir interrupciones, es importante que la
muestra y los reactivos al ser colocados en los diferentes pocillos sean colocados en el
seno del pocillo y que al dispensar se enjuague la pipeta para asegurar la
homogenización. Los reactivos utilizados en esta prueba están listos para usar y solo al
Buffer de lavado (5X) se le realiza una dilución 1+ 4 (ejemplo para preparar 1l: 200ml de
buffer de lavado + 800ml de agua destilada). Ver el inserto al final del procedimiento).
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DETECCION DE ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS ELISA
Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s) si se requiere.
Se prende la Incubadora Abbott Commander y se pone a 37 C para cuando se necesite introducir la muestra.
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, bco, controles (los pocillos no se puden
marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis (mapa de muestras).
Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
análisis ( la muestra puede ser plasma o suero)
A todos los pocillo previamente identificado en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 200microlitros de diluyente de muestra
incluyendo al blanco
A los pocillos que son de los pacientes, donador o repetición de análisis se les adiciona 10 microlitros del suero o plasma y se homogenizan
con la misma punta con que se esta colocando.
Al pocillo identificado como control internos positivo se le colocan 10 microlitros del tubo marcado como control interno positivo y al pocillo
marcado como control interno negativo se le adicionan 10 microlitros del tubo marcado como control interno negativo.
A los 2 pocillos identificados como control positivo se les colocan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control positivo y al los
3 pocillos marcados como control negativo se le adicionan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control negativo.
Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta s (para evitar
evaporaciòn).
Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se
realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35
Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpeàndola varias veces sobre papel
absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (60microlitros) de conjugado a todos incluyendo al blanco y mezclar aplicando
con suaves golpes en los laterales de la policubeta.
Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se
realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35
Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpeàndola varias veces sobre papel
absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (50microlitros) de revelador A y una gota de revelador B y mezclar aplicando
con suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg.
La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.
Se agrega 1 gota (50 microlitros) de soluciòn Stopper (para detener la reacciòn) a todos incluyendo al blanco mezclar aplicando con suaves
golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg.
Leer a 450nm o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable durante 30min) o con el programa del equipo LP-400.
Se interpretan los resultados y se guarda el reporte impreso en el Folder de Serologia Chagas y el mes en que se esta realizando el anàlisis y
tambien en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A.
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VALIDACIÓN DE LA CORRIDA
Si la corrida realizada no cumple con una o ambas de las siguientes condiciones se
repite la corrida:
Una lectura de al menos 2 de los 3 controles negativos que corregidas contra el
blanco de reactivos deben ser menores o iguales a 0,150 D.O.
Una lectura media de los controles positivos que corregida debe ser mayor o igual
a 0,600 D.O.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Con instrumental óptico:
La presencia o ausencia de Ac. Anti-T. cruzi se determina relacionando la absorbancia
de la muestra respecto al valor Cut-off
Cut-off = CN + 0,200 D.O.
Donde CN: promedio de las lecturas del control negativo
Zona de indeterminación: Cut-off +- 10%
Muestras no reactivas: se consideran aquellas con absorbancia menores que el
límite inferior de la zona de indeterminación.
Muestra reactiva: se consideran aquellas con absorbancia mayores que el límite
superior de la zona de indeterminación.
Muestras indeterminadas: se consideran aquellas con absorbancia que caen
dentro
de la zona de indeterminación. Estas muestras deben ser ensayadas
nuevamente.
Interpretación visual: Si se opta por esta interpretación debe considerarse:
No reactiva: muestra que no presenta una coloración mayor que los controles
negativos.
Reactiva: muestra que presenta una coloración netamente amarilla.
Cuando se presentan colores tenues mayores que el control negativo se requiere de
interpretación instrumental.
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ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (HAI)
La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva, se
basa en la propiedad que tienen los anticuerpos del Tripanosoma cruzi de producir
aglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los
correspondientes antígenos.
En el suero existen anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar
glóbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con
los GR
no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante
tratamientos con 2-mercaptoetanol que se utiliza en la Prueba confirmatoria.
Para la realización de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las
muestras no se encuentren de preferencia lipemicas o hemolizadas. Si la muestra se
resguardara antes de su análisis se conservara a 2-10 C durante no más de 72 Hrs.
contadas a partir de la extracción o a –20 C para periodos mas largos de conservación.
Los reactivos a utilizar en esta prueba no todos están listos para usar y es muy
importante que sean preparados con las cantidades que indica el inserto CHAGATEST
HAI y el tiempo que se considera son estables. (Ver el inserto al final del
procedimiento).
Cuando se presenten resultados en todas las diluciones reactivas o todas con ausencia
de reactividad, puede ser indicio de autoaglutinación por la presencia de Anticuerpos
heterofilos del antígeno HAI o deterioro de los reactivos.
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Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s).
Se marca la placa con dividiones de 4 pocillos
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos que requiera la
bitacora para la correcta identificación del análisis.
Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde
análisis ( la muestra solo puede ser suero). A todos los pocillo se les adiciona una alicuota de 25microlitros de diluyente de suero (Buffer)
El diluyente del suero se prepara: 200 microlitros de solución proteica por cada 10 ml del buffer
A los pocillos que son de los pacientes, donador o repetición de análisis se les adiciona 25microlitros del suero y se homogenizan con la
misma punta con que se esta colocando.
Se realizaran diluciones seriadas a partir del primer pocillo (½, ¼, 1/8, ….. etc).
Se toma una alicuota de 25microlitros del primer pocillo del paciente y se pasa al segundo pocillo, se homogeniza y se toma una alicuota del
segundo pocillo de 25 microlitros y se pasa al tercer pocillo y lo mismo para el cuarto pocillo (en el cuarto pocillo se toma la alicuota de
25microlitros y se tira para que contenga el mismo volumen que los demas pocillos. Las diluciones seran de ½ para el primer pocillo, ¼ para el
segundo pocillo y asi sucesivamente.
Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion.
Una vez reconstituido y agitado el reactivo que contiene los GR no sensibilizados (control de heterofilia) se le adiciona 25microlitros a los
pocillo que contienen la dilucion ½ y ¼ de todas las muestras y controles
Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/8 y 1/16 muestras y controles se les adiciona 25microlitros de Antigeno HAI o GR sensibilizados
Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta
(para evitar evaporaciòn).
Se deja en reposo durante 90min (en un lugar donde no exista vibracion)
Leer a partir de los 90min. Se puede aumentar la nitidez de lectura haciendolo sobre un espejo, ilumunando la placa desde arriba e
interponiendo un papel blanco y traslùcido entre la policubeta y la fuente de luz.
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A.
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No reactivo: presencia de un sedimento en forma de un botón o pequeño anillo de
bordes regulares.
Reactivo: formación de una película o manto que cubre el 50% o más del fondo de los
pocillos. Si no se usan microdilutores la imagen del manto puede ser más pequeña.
Cuando se observan resultados positivos y además se presenta manto en los pocillos
de control de heterofilia (diluciones ½ y ¼), debe realizarse otra titulación con los sueros
correspondientes pero previamente tratados con 2-ME o adsorbidos con GR no
sensibilizados (el tratamiento elimina la reacción inespecífica).
ANTIGENO DE SUPERFICIE DE HEPATITIS B (ELISA)
Ensayo inmunoabsorbente enzimático para la detección del antígeno de superficie de la
hepatitis B en suero o plasma humano.
La prueba de anticuerpos frente al HBs Ag ELISA es un ensayo inmunoabsorbente
enzimático de tercera generación para la detección del antígeno de superficie de la
hepatitis B (HBs Ag). Es una prueba de preselección de muestras y herramienta
diagnóstica ante una posible infección por hepatitis B.
Se utilizan pocillos recubiertos con anticuerpos frente al HBs Ag como fase sólida. El
técnica ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida
pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una
enzima capaz de actuar como substrato cromegénico. Al aplicar el substrato, la
presencia de un antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de un producto
final coloreado, el ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas.
El procedimiento se divide en dos etapas y se lleva a cabo en un micropocillo recubierto
con anticuerpos frente al HBs Ag. El control de omisión de muestra (COM) es una
característica de la prueba basada en la medición del cambio de densidad óptica ( DO) a
405nm que se produce en los pocillos al añadir la muestra. Cambio que se observa
también visualmente, cuando el diluyente de conjugado pasa de color azul a verde
azulado al añadir la muestra.
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Etapas de la prueba:
En la primera
Se añade al pocillo de ensayo el conjugado de trabajo, constituido por anticuerpos
conjugados con HPR y diluidos en diluyente de conjugado de color azul. La microplaca
se incuba y si la muestra contiene HBs Ag, éste se fija al pocillo recubierto de
anticuerpos, y simultáneamente al conjugado para formar complejos inmovilizados,
constituidos por anticuerpos- HBs Ag-conjugado. Las proteínas séricas o plasmáticas se
eliminan en el siguiente paso de lavado.
En la segunda etapa
Se añade al pocillo un sistema de detección de enzimas compuesto por OPD y peróxido
de hidrógeno. Si el conjugado se ha fijado a la muestra, el OPD se oxida bivalentemente
la peroxidasa para formar un compuesto intermedio que, a su vez, se reduce, donante
de iones hidrógeno. La forma oxidada de OPD resultante es de color naranja. Por último
se añade ácido sulfúrico para detener la reacción. La intensidad de color depende de la
cantidad de conjugado fijado que haya en el pocillo. La intensidad de color ésta en
función de la concentración de HBs Ag que contenga la muestra, se mide con un lector
de microplaca a 490 0 492nm.

Precauciones
Los reactivos se puede almacenar entre 2-8° C.
No mezclar reactivos de lotes diferentes.
Dejar reactivos a temperatura ambiente 30 min. antes de su empleo.
Utilizar guantes y lavarse las manos al terminar.
La preparación de los reactivos se observa en el inserto de la prueba anexada al final del
procedimiento.
Es importante que si utiliza plasma este recolectado con anticoagulante adecuado
(heparina no) y que contenga la cantidad que se requiere para la muestra. Se puede
utilizar suero. El suero o plasma se puede almacenar a 2 y 8 C durante un máximo de 7
días, en congelación a –18 C o menos y no descongelar y congelar consecutivamente.
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CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO
Se considera que una placa es válida con respecto al substrato en blanco si el valor de
la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o
mayor que –0,001 e igual o menor que 0,050.
CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CALIBRADOR NEGATIVO
Se considera que una placa es válida si al menos dos de los tres calibradores negativos
cumplen con los siguientes criterios.

Si uno de los tres valores control está fuera de estos límites, deberá
volver a calcularse la media de los controles negativos (NCalx) en base
a los dos valores de absorbancia aceptables de los calibradores.

Los valores que estén entre –0,006 y 0,012, ambos incluidos, son
válidas y deben redondearse a 0,000 para efectuar el cálculo.

Determine la media de los valores de absorbancia del calibrador
negativo (NCalx).

La placa no será válida y deberá repetirse la prueba si dos o más de los
tres valores control está fuera de los límites.
CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO
Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la
prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el
procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente.
Se considera que una placa es válida únicamente cuando los valores de absorbancia
respectivos a 490nm ó 492nm son iguales o mayores que el valor de corte, y cumple
además los siguientes criterios:
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El valor de absorbancia del control positivo es igual o mayor que 0,225 e igual o
menor de 2,500.
El valor de absorbancia del control positivo no difieren entre sí más de 0,230.
Si uno cualquiera de estos valores controles está fuera de estos límites, el ensayo
no se considera válido y deberá repetirse.
CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO
El calibrador negativo y el control positivo deben cumplir los criterios de aceptación de
control de calidad para que la microplaca se pueda considerar válida.
CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off)
Valor de corte = NCalx + 0,030
Ejemplo:
Control negativo
1
0,001
2
0,000
3
0,002
Absorbancia
Absorbancia total=
0,003
NCalx = Absorbancia total/ 3 =
0,001
Valor de corte= 0,001 + 0,030 = 0,031
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Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a
utilizar para esta prueba.
Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se
pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.
análisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma )
La forma de colocarlos es asi:
Blanco
Colocar 3 pocillos
con Controles
negativos
Colocar 2 pocillos
con controles
positivos
Colocar las
muestras
Colocar el Control
interno negativo
Colocar el Control
interno positivo
Adicionar 50microlitros de Conjugado de Hepatitis B a todos los pocillos menos al blanco (7ml de diluyente de conjugado + 20microlitros de
concentrado de conjugado)
Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona.
Colocar 150microlitros de
cada muestra
Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
negativo
positivo
Colocar en los 3 pocillos de
Controles negativos
150microlitros del control
Colocar en 2 pocillos de
Controles positivos
Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 90min.
Realizar los respectivos lavados (solución de lavado con 950ml de agua destilada+ 50ml de solución de lavado 20X) con el LP 35 SANOFI
Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 6 ciclos) La forma de operar del equipo se describe al final del procedimiento. Quitar exceso de lavado
con golpes sobre un papel. Se prepara la Solución Buffer-sustrato-OPD
(1 pastilla de OPD + 6ml de Buffer)
Adicionar 200microlitros deSolución Buffer-sustrato-OPD a todos los pocillos (incluyendo al blanco). Tapar la placa con una cubierta de metal
si se tiene o en oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Al termino de la incubación se adicionan a todos 50microlitros de
acido sulfurico 4N (para parar la reacciòn)
Se realiza la lectura y se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A. y se guarda el registro impreso
en el folder del mes y con el nombre de la prueba.
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Las muestras con valores de absorbancia menores que –0,014 deben volver a
ensayar una vez. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición se
obtenga el mismo valor.
Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o
mayor de –0,014 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba.
Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte
se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de
proceder a su interpretación definitiva.
Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera
repetidamente reactiva al HBs Ag si una cualquiera de las determinaciones por
duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte.
Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera
reactiva y el resultado es confirmado por neutralización con anti- HBs Humano, se
considera la muestra como positiva al HBs Ag.
no reactiva al HBs Ag si ambas determinaciones duplicadas son no reactivas y menor
que el valor de corte e igual o mayor de –0,014.
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ANTICUERPOS CONTRA HCV (ELISA)
Este es un Inmunoensayo enzimático cualitativo para la detección de Anticuerpos frente
al Virus de la Hepatitis C (anti- HCV) en suero o plasma humanos.
En el Inmunoensayo enzimático (ELISA) se utiliza como fase sólida pocillos con un
revestimiento de una combinación de antígenos recombinantes configurados del virus de
la hepatitis C. El principio de la ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se
fijan a la fase sólida pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo
complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromogénico.
Al aplicar el substrato enzimático, la presencia sobre el antígeno o anticuerpo puede
detectarse por el desarrollo de u producto final coloreado. El ELISA es utilizado para
enfermedades infecciosas.
El virus de la Hepatitis C es el agente causal de la mayoría si no es de todas, las
hepatitis transmitidas por sangre y que no son del tipo A ni del tipo B.
En la primera
Se incuba una muestra diluida en el pocillo de pruebas durante un periodo determinado
de tiempo. Si en la muestra existe anticuerpo reactivo frente a cualquiera de los tres
antígenos, se formarán complejos de antígeno-anticuerpo en la superficie del
micropocillo. Si no existe anti-HCV, no formarán dichos complejos. La etapa de lavado
elimina las proteínas del suero o plasma que no se hayan unido.
En la segunda etapa
Se añade al micropocillo un anticuerpo monoclonal de rata conjugado con peroxidasa de
rábano. El conjugado se une específicamente a la porción de la IgG humana de los
complejos antígeno-anticuerpo. Si estos complejos antígeno-anticuerpo no se hallan
presentes, el conjugado que no se ha unido se eliminará en la fase de lavado que ha de
realizarse a continuación.
En la tercera etapa
Se añade al pocillo un sistema de detección de enzima compuesto de o-fenilendiamina
(cromogénico) y peróxido de hidrógeno (sustrato). Si existe conjugado unido, el OPD se
oxidará y dará lugar a un producto final coloreado. En esta reacción, la peroxidasa se
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oxida de forma divalente mediante el peróxido de hidrógeno y forma un compuesto
intermedio que, a su vez, se reduce a su estado inicial mediante interacción subsiguiente
con el OPD donador de ión hidrógeno. Entonces, se añade ácido sulfúrico para paralizar
la reacción.
La intensidad de color depende de la cantidad de conjugado unido, está en función de la
concentración de anti-HCV presente en la muestra. La intensidad de color se mide con
un lector de micropocillos diseñado para cuantificar la absorbancia de la luz en un
micropocillo.
La preparación de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al
final del procedimiento.
Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido
el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA,
CP2D, CPD y citrato de sodio al 4% y heparina.
La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 días y si se requiere un
almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C. Los pocillo que no se
van a utilizar se almacenan entre 2-8 C en la bolsa de aluminio que se suministra, con
desecante, sellada firmemente y se debe utilizar dentro de los 42 días siguientes a la
apertura de la bolsa de aluminio.
Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que
0,0120 y mayores o iguales que –0,005. Si uno de los tres valores control se encuentra
fuera de alguno de estos límites, recalcule el valor medio del control negativo en base a
los dos valores controles aceptables. La placa no será válida y deberá repetirse la
prueba si dos o más de los tres valores control están fuera de los límites.
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Determinar la media de los valores control negativo.
Ejemplo:
1
2
3
Control negativo
0,005
0,015
0,010
Absorbancia
Absorbancia total=
0,030
NCx = Absorbancia total/ 3 =
0,010
Se considera que una placa es válida, si ambos controles positivos, si el valor de
ambos controles positivos es mayor o igual al valor de corte “cutoff” dentro de la lectura
del lector de placas
Nota: los valores por encima del límite superior del rango soportado del lector de
microplacas puede aparecer como “ OVER” o “ *** “ .
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Adicionar 20 microlitros de Soluciòn buf er- sustrato-OPD (1 pastil a de OPD en 6ml de Buf er sustrato) a todos los pocil os (incluyendo al
blanco). Tapar la placa con una cubierta de metal o /y oscuridad se incuba a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a todos
50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reac iòn)
Se realiza la lectura, se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A y a guarda el registro dentro del
folder del mes y prueba cor espondiente
Valor de corte = NCx + 0,330
Ejemplo:
Control negativo
1
0,005
2
0,015
3
0,010
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Absorbancia
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Absorbancia total=
0,030
0,010
Valor de la línea de corte = 0,010 + 0,330 = 0,340
ensayar en un pocillo único. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición
se obtenga el mismo valor o inferior a –0,025.
Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte se
consideran no reactivas. No es necesario repetir la prueba.
proceder a su interpretación definitiva.
repetidamente reactiva para anticuerpos a HCV si una cualquiera de las determinaciones
por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte.
no reactiva para anticuerpos HCV, si ambas determinaciones por duplicado son no
reactivos, es decir menores que el valor de corte.
ANTICUERPOS CONTRA HIV 1 + 2 (ELISA)
Este es un Inmunoensayo enzimático cualitativo para la detección de Anticuerpos frente
al Virus de Inmunodeficiencia humana de Tipos 1 y/o 2 (HIV-1 y HIV-2) en suero o
plasma humanos.
En el Inmunoensayo enzimático (ELISA) se utiliza como fase sólida pocillos con un
revestimiento de una combinación de antígenos recombinantes HIV-1 y HIV-2. El
principio de la ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida
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pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una
enzima capaz de actuar como substrato cromogénico. Al aplicar
el substrato
enzimático, la presencia de un antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo
de un producto final coloreado. El ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas.
El síndrome de Inmunodeficiencia adquirida (SIDA) como el complejo relacionado con el
(CRS) están causados por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y tipo 2.
HIV-1 y HIV-2 son similares pero distintos.
Morfología y linfotropismo similar
Modos de transmisión parecen ser idénticos.
Los genomas de los virus exhiben aproximadamente un 60% de homología en
genes conservados tales como gag y pol y un 30-40% de homología en genes menos
conservados.
Este método puede ser utilizado tanto para el estudio de donadores de sangre como
para fines de diagnóstico. El ensayo utiliza una combinación de dos proteínas de
envoltura recombinantes de HIV-1 y una proteína core recombinante de HIV-2.
En la primera Etapa del procedimiento se diluye en diluyente de la muestra (color
verde). La dispersión de la muestra o el control provoca un cambio de color evidente que
puede monitorearse visualmente o mediante lecturas fotométricas a 610nm. A
continuación la muestra o control diluidos se incuban en el pocillo del equipo durante un
periodo de tiempo establecido. Si la muestra contiene un anticuerpo reactivo a alguno de
los 4 antígenos, se formaran complejos antígeno-anticuerpo en la superficie del pocillo.
Si no hay anti HIV-1 y/o anti-HIV-2, nose formarán los complejos. Las proteínas séricas o
plasmáticas no fijadas se eliminarán en la siguiente fase de lavado.
En la segunda etapa se añade al pocillo una mezcla de los 4 antígenos HIV-1 y
HIV-2 recombinantes conjugados a peroxidasa de rábano. El conjugado se fija
específicamente la porción inmunoglobulina anti-HIV-1 y/o anti-HIV-2 (IgG e IgM) de los
complejos antígeno-anticuerpo. Si no existen complejos antígeno-anticuerpo, el
conjugado no fijado se eliminará en el siguiente lavado.
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En la tercera etapa, se añade un sistema de detección de enzimas consistente en
o-fenilenediamina y peroxido de hidrógeno. Si hay conjugado fijado, el OPD se oxidará
produciendo una reacción de color anaranjado. Entonces se añade ácido sulfúrico para
detener la reacción.
La intencidada del color resultante depende de la cantidad de conjugado fjado y
es, por lo tanto, una función de la concentración de anti- HIV-1 y/o anti-HIV-2 presente
en la muestra. La intensidad del color se mide con un lector de microplacas diseñado
para medir la absorbancia de luz de un pocillo.
La preparación de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al
final del procedimiento.
Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido
el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA,
CP2D, CPD y citrato de sódio al 4% y heparina.
La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 días y si se requiere un
almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C.
Los pocillos que no se utilizan se deben de cerrar bien y darles 60 días de caducidad a
2-8 C con desecante.
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Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a
utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas.
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se
pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.
La forma de colocarlos en la placa es asi:
Blanco
Colocar 3 pocillos
con Controles
negativos
Colocar 1 pocillos
con controles
positivos HIV1 y
otro + HIV2
Colocar las
muestras
Colocar el Control
interno negativo
Colocar el Control
interno positivo
Adicionar 50microlitros de diluyente de muestra a todos los pocillos menos al blanco
Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona.
cada muestra
Controles negativos
Colocar en 1 de los pocillos
de Controles positivos
+HIV1 y en otro +HIV2
negativo
positivo
Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 30min.
Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 5 ciclos) La forma de operar del equipo se
describe al final del procedimiento. Quitar exceso del lavado con golpes sobre un papel.
Adicionar 200microlitros de Conjugado a todos los pocillos (excepto al blanco). Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C
durante 30min. Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur
Adicionar 200microlitros de Soluciòn buffer- sustrato-OPD (1 pastilla de OPD en 6ml de Buffer sustrato) a todos los pocillos (incluyendo al
blanco). Tapar la placa con una cubierta metalica o poner a oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a
todos 50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reacciòn) incluyendo al blanco.
Se realiza la lectura, se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A y se guarda el registro en el
folder del mes y la Prueba correspondiente.
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Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que
0,070 e iguales que –0,010. Las cifras entre 0,000 y –0,010, ambas inclusive, son
válidas y deben redondearse a 0,000. Si uno de los tres valores control está fuera de
estos límites, deberá volver a calcularse la media de los controles negativos (NCx) en
base a los dos valores aceptables. La placa no será válida y deberá repetirse la prueba
si dos o más de los tres valores control están fuera de los límites.
Determinar la media de los valores control negativo (NCx).
Ejemplo:
Control negativo
0,005
0,010
0,015
Absorbancia
Absorbancia total=
0,030
0,010
Se considera que una placa es válida, si ambos controles positivos (HIV-1 y HIV-2)
satisfacen los siguientes criterios:
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El valor de absorbancia del control positivo HIV-1 es igual o mayor que 0,200 y
está dentro del rango soportado por el lector de microplacas.
El valor de absorbancia del control positivo HIV-2 es igual o mayor el corte del
ensayo y está dentro del rango soportado por el lector de microplacas.
Si uno cualquiera de estos valores controles está fuera de estos límites, el ensayo
no se considera válido y deberá repetirse.
Nota: los valores por encima del límite superior del rango soportado del lector de
microplacas puede aparecer como “ MAS DE” o “ *** “ .
Valor de corte = NCx + 0,125
Ejemplo:
Control negativo
1
0,005
2
0,010
3
0,015
Absorbancia
Absorbancia total=
0,030
0,010
Valor de corte= 0,010 + 0,125 = 0,135
ensayar en un pocillo único. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición
se obtenga el mismo valor.
Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o
mayor de –0,025 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba.
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proceder a su interpretación definitiva para posteriormente realizar la Prueba
confirmatoria para definir si es positiva, indeterminada o negativa.
repetidamente reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2 si una cualquiera de las
determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el
valor de corte.
no reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2, si ambas determinaciones por duplicado
son negativas, es decir menores que el valor de corte.
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ANTICUERPOS CONTRA SIFILIS (VDRL o RPR)
Esta prueba es utilizada para detectar sífilis a través de una técnica aglutinación cuando
existe presencia de Treponema pallidum, por medio de una reacción inmunológica color
azul.
El reactivo SYPAL-CB es una suspensión coloidal de cardilipina, colesterol y lecitina. La
cardiolipina es extraída del corazón de la res y la lecitina del pollo. Para su conservación
el almacenaje se realiza a una temperatura de 2 - 8 C y cuidando que el recipiente se
encuentre bien cerrados y alejados de luz.
Las tarjetas que contiene el kit no se introduce al refrigerador para evitar que se
humedezcan. Se requiere atemperar los reactivos antes de utilizarlos (15-30°C)
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El Técnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB, los controles y la muestra(s).
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos que requiera la
bitacora para la correcta identificación del análisis (si se considera necesario) si no se pueden marcar a un lado de la placa con el # de toma
de muestra.
Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis (
la muestra puede ser suero o plasma)
En esta prueba se utiliza una placa de prueba SYPAL-CB a todos los circulos se les adiciona una alicuota de 50microlitros o 1 gota con
pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc.y se extiende con la misma pipeta desechable o punta.
De igual forma se aplican los controles positivo y negativo
A todos los circulos se les adiciona 1 gota de SYPAL-CB
(con la punta especial que incluye el kit para la aplicacion de este reactivo) y se agita la placa en el agitador BAXTER ROTATOR V durante
6 min. Leer a partir de los 6min. /100 RPM
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B
Cuando el Resultado es Negativo se reporta como Negativo,
cuando el Resultado es Positivo se realizan diluciones seriadas para determinar el titulo y se realiza la confirmatoria
Para realizar la lectura de la placa se agita manualmente por unos segundos (lo que
aumenta el tamaño de los aglutinados) y se observa con luz fuerte y se continua
agitando suavemente durante la lectura para distinguir cualquier microaglutinado.
Una prueba se considera positivas si se obtiene grandes aglutinados (lo que
depende de la cantidad presente de anticuerpos en el suero).
Una prueba se considera negativa cuando la mezcla permanece homogénea.
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ANTICUERPOS CONTRA BRUCELA (ANTIGENO ROSA DE BENGALA)
Para determinar la presencia de anticuerpos en el diagnostico de la Brucela de forma
rutinaria en el laboratorio se realiza la siguiente prueba:
Esta prueba es utilizada para el diagnostico de Brucelosis es de aglutinación rápida en
placa es empleada para la detección temprana de aglutininas especificas de Brucilla
( B. melitensis, B. abortus y suis).
Para la realización de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las
muestras no se encuentren lipemicas o bemolizadas. Si la muestra se resguardara
antes de su análisis se conservara a 2-8 C.
El Técnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s).
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles (los circulos no se puden
marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.
Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis (
la muestra solo puede ser suero)
En esta prueba se utiliza una placa de prueba, la cual debe ser identificada, en donde a todos los circulos se les adiciona una alicuota de 3040microlitros o una gota con pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc. y a los controles positivo y negativo de reactivos internos.
Se homogenizan dentro del circulo con la parte plana de la pipeta desechable una vez que se colocan.
Se les adiciona a todos (incluyendo controles) 30microlitros o 1 gota del Antigeno Rosa de Bengala previamente homogenizado.
Agitar la placa en el agitador BAXTER ROTATOR V durante 4 min.
Leer a partir de los 4min.
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B.
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RESULTADOS
La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se
comenzó a mezclar.
No aglutinación: cuando se presenta un suero negativo.
Cualquier cantidad de aglutinación: presencia de anticuerpos específicos. Cuando se
presenta un suero positivo.
Como esta prueba es cualitativa cuando se tiene un resultado positivo debe ser confirma
mediante una prueba cuantitativa para brucelosis como: aglutinación lenta estándar o
aglutinación lenta en presencia de 2-mercaptoetanol.
CONFIRMATORIA y/o SUPLEMENTARIAS
CHAGAS ( HAI 2- BETA MERCAPTO ETANOL)
La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva, se
basa en la propiedad que tienen los anticuerpos del Tripanosoma cruzi de producir
aglutinación especifica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los
correspondientes antígenos.
Y de esta manera eliminar los anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de
aglutinar glóbulos rojos de distintas especies (y dar falsos positivos). Su presencia se
investiga enfrentando el suero con los Glóbulos Rojos no sensibilizados. Esta prueba se
realiza para eliminar los anticuerpos heterófilos de las muestras con el tratamientos con
2-mercaptoetanol.
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El Técnico de Serlogia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s).
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos se pueden anotar en
la placa o en la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se realiza por duplicado en la misma placa.
análisis ( la muestra solo puede ser suero)
Se realiza una dilución 1:100 con 25ml de solución fisiologica + 25microlitros de 2- mercaptoetanol
Se toma una alicuota de 25 microlitros de la muestra del donador, paciente, etc y de los respectivos controles + 25 microlitros de la dilución
anterior, se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando y se tapa con la cubierta adhesiva.
Se incuba a 37 C durante 1 hr.
Se les adiciona una alicuota de 25microlitros de diluyente de suero (Buffer)
Se realizaran diluciones seriadas a partir del primer pocillo.
Se toma una alicuota de 25microlitros del primer pocillo del paciente y se pasa al segundo pocillo, se homogeniza y se toma una alicuota del
segundo pocillo de 25 microlitros y se pasa al tercer pocillo y lo mismo para el cuarto pocillo (en el cuarto pocillo se toma la alicuota de
25microlitros y se tira para que contenga la misma cantidad que los demas pocillos. Las diluciones seran de ½ para el primer pocillo, ¼ para el
segundo pocillo y asi sucesivamente.
Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion.
Una vez reconstituido y agitado el reactivo que contiene los GR no sensibilizados (control de heterofilia) se le adiciona 25microlitros a los
pocillo que contienen la dilucion ½ y ¼ de todas las muestras y controles
Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/8 y 1/16 muestras y controles se les adiciona 25microlitros de Antigeno HAI
Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta s (para evitar
evaporaciòn).
Se incuba durante 60min en ABBOTT COMMANDER/ Se deja en reposo durante 90min (en un lugar donde no exista vibracion)
Leer a partir de los 90min. Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A.
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HbsAg ELISA (NEUTRALIZACION)
Es una Prueba confirmatoria que detecta anticuerpos para la Hepatitis B en muestras
reactivas en la ELISA para Antigenos de Hepatitis B.
Es una técnica de neutralización en conjunto con métodos estándares en ELISA
ORTHO-ANTICUERPOS.
El Técnico del área de serologia enciende la incubadora ABBOTT COMMANDER para tenerla a la temperatura que se requiere al introducir las placas.
Se divide la placa en dos partes que contienen cada una lo siguiente:
TIRA CONTROL
TIRA PRUEBA
BLANCO
3 CONTROLES NEGATIVOS
2 CONTROLES POSITIVOS
LA MUESTRA POR DUPLICADO
2 CONTROLES POSITIVOS
MUESTRAS POR DUPLICADO
Una vez que se tienen vien identificados el contenido de cada pocillo se adiciona 50 microlitros de conjugado (conjugate diluent y antibody to hep. B
sudpase antigen) EXCEPTO AL BLANCO
TIRA CONTROL
Se le adiciona 20 microlitros de Confirmatory control
TIRA PRUEBA
Se le adiciona 20 microlitros de Antibody hep. B surface antigen
TIRA CONTROL
A los 3 pocillos marcados para CONTROL NEGATIVO se le adiciona
200microlitros de calibardor negativo a cada uno.
A los 2 pocillos marcados para CONTROL POSITIVO se le adiciona
200microlitros de calibardor positivo a cada uno.
A los 2 pocillos marcados para MUESTRA Y MUESTRA DUPLICADO
se le adiciona 200microlitros de la muestra.
TIRA PRUEBA
A los 2 pocillos marcados para CONTROL POSITIVO se le adiciona
200microlitros de calibardor positivo a cada uno.
A los 2 pocillos marcados para MUESTRA Y MUESTRA DUPLICADO
se le adiciona 200microlitros de la muestra.
Se tapa la placa con el papel adherible y se incuba a 37 C durante 180 min.
Se lava 6 veces con solución lavado en el SANOFI DIAGNOSTIC PASTEUR LP35.
Se adiciona 200microlitros del sustrato OPD (12ml de Buffer con 1 pastilla de OPD) a todos los pocillos y se incuba a temperatura ambiente en oscuridad
durante 30 min.
Se adiciona 50 microlitros de H2SO4 4N a todos los pocillos
Leer a 492 con referencia de 620 en el equipo SANOFI DIAGNOSTIC PASTEUR LP 400
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La absorbancia promedio de la muestra diluida o sin diluir es mayor o igual al valor
Cutoff y la adición de anticuerpos al antígeno de Hepatitis B reduce la reactividad de la
muestra en un 50% o más la Prueba se considera positiva.
Cuando la absorbancia promedio de la muestra diluida o sin diluir es mayor o igual al
valor Cutoff y la adición de anticuerpos al antígeno de Hepatitis B no reduce la
reactividad de la muestra al menos un 50% la muestra es no neutralizable y se debe
diluir al menos 1 a 10 y reinspeccionarse.
Si la absorbancia de la muestra duplicada es menor al Cutoff de la muestra diluida y sin
diluir se considera NO NEUTRALIZABLE.
Para calcular el Cutoff se requiere sumar los valores resultantes de absorbancia de los
3 controles negativos y dividirlos entre 3. Una vez que se tiene el valor promedio de los
controles negativos se suma a un valor 0.050 y se obtiene el Cutoff.
HCV (INMUNOBLOT RIBA HCV)
La prueba CHIRON* RIBA* HCV 3.0 SIA es un inmunoensayo cualitativo in vitro para la
detección de anticuerpos frente a proteínas individuales codificadas por el virus de la
hepatitis C (anti- HCV) en suero o plasma humano donado por la transfusión o
manufactura posterior. Los antígenos recombinantes utilizados son c33c y NS5 y dos de
los péptidos sintéticos son c100p y 5-1-1p que proceden de regiones putativas de la
nucleocápside viral.
Esta prueba tiene 3 etapas:
Primera etapa
La muestra o el control del ensayo se diluye e incuba con la tira. Si muestra contiene
anticuerpos específicos frente a HCV, éstos se fijarán a las correspondientes bandas de
antígeno recombinante y/o péptido sintético de la tira. Los componentes séricos o
plasmáticos no fijados se eliminarán por aspiración y lavado.
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Segunda etapa
La tira se incuba en presencia de un conjugado de anti- IgG humana de cabra, marcada
con peroxidasa. El conjugado se fija a la porción de anti- IgG humana del complejo
antígeno-anticuerpo. El componentes no fijados se eliminarán por decantación y
posteriores pasos de lavado.
Tercera etapa
Se añade un sistema colorimétrico de detección enzimática compuesto por agua
oxigenada y 4-cloro-1-naftol. Si el conjugado se fijo a la muestra, la reacción enzimática
origina un producto de reacción de color azul-negro insoluble en cada banda específica
de antígeno, péptido o control HCV. La reactividad de la muestra ante cada banda de
antígeno se determina comparando visualmente la intensidad de la banda antigénica
individual con la de las bandas de control interno de IgG humano alta y baja absorbidas
en cada tira.
Los reactivos se debe almacenar a 2 y 8 C.
Leer en el inserto de la prueba anexado al final del procedimiento para conocer sobre las
precauciones que se debe tener con los reactivos que incluye la prueba al igual que la
preparación de los reactivos y soluciones
CONTROL DE CALIDAD
Los controles positivo y negativo se deben incluir en cada serie , independientemente el
número de muestras o número de tiras utilizadas.
Como controles internos en cada tira se incluyen dos niveles de IgG humana (nivel I,
control bajo y nivel II, control alto). La reactividad de las bandas individuales de HCV se
determina comparando la intensidad de cada banda con los controles internos de la tira
IgG humana de nivel I y nivel II.
Los resultados previstos de los controles positivo y negativo que incluye la prueba son:
Las bandas del control interno IgG de nivel I y nivel II deben ser claramente
distinguibles a simple vista en las tiras de control positivo y negativo, y el control
IgG de nivel I debe ser evidentemente más claro que el control IgG de nivel II.
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La tira de control positivo debe mostrar una respuesta de 2+ o mayor para todas
las bandas de antígeno y péptido del HCV. La respuesta en la banda SODh debe
ser visible inferior al control IgG humano de nivel I.
La tira de control negativo debe mostrar una respuesta a cada una de las bandas
de antígeno del HCV y SODh que sea visiblemente inferior al control IgG humano
de nivel I.
Si los controles de la prueba incluidos no cumplen los criterios anteriores, la serie queda
invalidada y debe repetirse.
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El Técnico de Serologia escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, bco, controles (los
tubos no se puden marcar y contienen una tira dentro de ellos que contiene un número) y los datos que requiera la bitacora para la correcta
identificación del análisis.
análisis ( la muestra puede ser plasma o suero)
A todos los tubos previamente identificado en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 1ml de diluyente ( specimen diluent)
A los tubos que son de los pacientes, donador o repetición de análisis se les adiciona 20 microlitros del suero o plasma y se homogenizan con
la misma punta con que se esta colocando.
Al tubo identificado como control negativo se le colocan 20 microlitros y al tubo marcado como control positivo se le adicionan 20 microlitros y
se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando.
Se tapan y se colocan en agitación vertical a temperatura ambiente durante 4 horas.
Se tira el liquido excedente teniendo cuidado con la tira que contiene y se adiciona 1ml del diluyente y se pone en agitación vertical durante
30min a temperatura ambiente
Preparo una solución de lavado WASH BUFFER CONCENTRATE (50X) con 450ml de agua destilada + 25ml de WASH BUFFER
CONCENTRATE
Decanto y pongo las tiras en la bandeja de reacción con 30ml aproximadamente de la solución de lavado que prepare en el paso anterior,
este proceso de decantación y lavado lo realizo 3 veces
Observo en el incerto cuanto conjugado debo agregar con respecto al número de tiras que tengo.
El incerto indica por ejemplo que para una tira requiero 1ml de conjugado pero
que cuando son menos de 10 tiras debo tomar a un así 10ml de conjugado
Una vez adicionado en la bandeja de reacción el conjugado pongo en agitación durante 10- 12 min. y realizo lavados y decantaciones 3 veces
como en lo hice anteriormente.
Preparo una solución substrato de trabajo en la que depende el número de tiras que tengo. Ejemplo: cuando tengo de 3-10 tiras preparo 1.7ml
de volumen de solución substrato con 8.5ml solución buffer del subtrato
Es muy importante que no sepeguen las tiras.
Agitar de 15 a 20 min a temperatura ambiente y decantar.
Lavar con 60ml de agua destilada dos veces.
Con pinzas colocar las tiras en un papel absorbente y retiro el exceso de agua.
Dejar secar las tiras durante 30min en la oscuridad y a temperatura ambiente
Leer resultdos antes de 3 hrs.
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La reactividad anti-HCV en una muestra se determina comparando la intensidad de cada
banda de HCV con la intensidad de las bandas del control interno de IgG humana (nivel I
y nivel II) de cada tira. La identidad de los anticuerpos se define por la ubicación
especificada de la banda de HCV.
La intensidad de las bandas de HCV se clasifica en función en función de la intensidad
de los controles de IgG internos de la siguiente forma:
Intensidad de la banda
Ausente
Menor que la intensidad de la banda control IgG de nivel I
Puntuación
NEGATIVO
POSITIVO / NEGATIVO
Igual a la intensidad de la banda control IgG de nivel I
1+
Mayor que la intensidad de la banda control IgG de nivel I y
menor que la intensidad de la banda control IgG de nivel II
2+
Igual a la intensidad de la banda control IgG de nivel II
3+
Mayor que la intensidad de la banda control IgG de nivel II
4+
La interpretación NEGATIVA, INDETERMINADA o POSITIVA se basa en el patrón de
reacción presente en la tira. Para interpretar las series como válidas deben utilizarse los
siguientes criterios:
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Patrón de la banda de antígeno
Ninguna banda de HCV presenta
reactividad 1+ o mayor.
O
Sólo la banda de SODh
presenta
Una única banda de HCV presenta
O
La banda de SODh presenta reactividad
1+ o mayor conjugadamente con una o
más banda de HCV presenta reactividad
1+ o mayor.
Al menos dos banda de HCV presenta
Interpretación
NEGATIVO
INDETERMINADO
POSITIVO
Una intensidad de banda menor que el control IgG nivel I (es decir +/-) está por
debajo del valor límite parta la reactividad en el ensayo.
Solamente se puede hacer una interpretación POSITIVA de la tira en ausencia
de reactividad de la banda de SODh (es decir +/-).
Un resultado de la prueba POSITIVO indica la presencia de anti-HCV e infección
previa o actual con HCV. Un resultado de la prueba INDETERMINADO indica que
el anti-HCV puede no estar presente y que no se puede llegar a una conclusión
sobre si existe infección por HCV. Dado que una reactividad de +1 o mayor con
cualquiera de los antígenos codificados del virus HCV de la tira es una posible
evidencia de infección previa o actual con HCV, todos los individuos clasificados
INDETERMINADOS deben volver a someterse a la prueba durante un período de
6 a 12 meses para verificar si se ha producido un aumento de la reactividad. Se
recomienda que los INDETERMINADOS se vuelvan a someter a una prueba al
cabo de 6 meses, usando una muestra obtenida en ese momento.
Un resultado NEGATIVO que es REACTIVO por un procedimiento aprobado de
escrutinio de anti-HCV, no excluye la posibilidad de infección con HCV. Las
concentraciones de anti-HCV pueden no ser detectables en la infección inicial.
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HIV (WESTERN BLOT HIV 1 + HIV 2
Es una detección por electroinmunotransferencia de los anticuerpos anti-HIV 1 en suero
o plasma humano para la confirmación de una respuesta anti-HIV 1y anti-HIV 2 positiva
y para precisar la especificidad antigénica en el cuadro diagnóstico del SIDA.
La calidad de los antígemos utilizados en estos test no permite eliminar absolutamente
determinadas respuestas inespecíficas.
En el cuadro diagnóstico del SIDA, es necesario para la caracterización de la infección
por los virus HIV-1 ó HIV-2.
Este test se basa en el principio del ELISA indirecto sobre una tira de nitrocelulosa que
contiene todas las proteínas constituyentes del virus HIV-1, HIV 2 y un control interno
anti-IgG. La banda del control interno se halla situada junto al extremo no numerado de
la tira antes de la reacción p18 o p16 y permite validar la adición de la muestra y de los
reactivos así como el buen desarrollo del método.
El procedimiento de ensayo comprende las siguientes etapas:
Rehidratación de las tiras de nitrocelulosa
Incubación de las muestras a confirmar y sueros de control.
Si están presentes los anticuerpos anti-HIV 1 o HIV 2 se unirán a las proteínas virales
presentes sobre la tira de nitrocelulosa.
Después del lavado, se incuban las tiras con anticuerpos anti IgG humanos
marcados con fosfatasa alcalina. El conjugado se une a los anticuerpos anti-HIV 1 o
HIV 2 fijados al soporte sólido.
Después del lavado y eliminación del conjugado en exceso, la adición de solución de
revelado permite evidenciar la actividad enzimática de los complejos ligados a la
nitrocelulosa.
La aparición de bandas coloreadas específicas permite reconocer la presencia de
anticuerpos anti-HIV 1 o HIV 2 en el suero.
IMPORTANTE
No mezclar en un mismo ensayo diferentes lotes.
Reactivos no caducos.
Reactivos a temperatura ambiente antes de ser utilizados.
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No tocar las tiras con las manos, utilizar pinzas.
Utilizar los sueros de control en cada ensayo
REACTIVO PARA RECONSTITUIR
R2 Solución de lavado / diluyente
Homogenizar la solución, diluir (1/5) en agua destilada (ejemplo: 30ml de solución de
lavado + 120ml de agua destilada). Homogenizar cuidadosamente.
Una vez reconstituido permanece estable durante un mes a +2 - 8 C.
El equipo
contiene 3 botes :
Desechos con tapón rojo
H20 destilada con tapón azul
Solución de lavado (1/5) con tapón amarillo.
VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS
La banda del control interno anti-IgG debe ser de coloración fuerte. Permite validar la
adición de la muestra y de los reactivos así como el buen desarrollo del método. La
ausencia o la escasa intensidad de coloración de la banda del control interno anti-IgG
indica ya sea la ausencia de depósito de la muestra o de los reactivos, o ya sea un
incumplimiento del método.
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El Químico del área de serologia enciende el equipo SANOFI DIAGNISTIC PASTEUR LS 12 con el interruptor que se encuentra en la parte de atras del
lado derecho.
En la pantalla se observa lo siguiente:
L-S.12 - Version 6.07.2ySelection Mode RUN = START
EDIT=1 CONFIG=2 SERV=3
Presionar START
RUN: Select. Test: New LAV BLOT
=1 =2 Valid= START Return= STOP
Presionar START
Run= Check botte contents-Rack on 1
Prime=3 Valid= START Return= STOP
Verificar que la linea amarilla este endentro del bote del
agua
Presionar el # 3
Una vez que termina se cambia la linea amarilla a el bote
de solución de lavado
Presionar el # 3 , apretar 3 veces el 3 para realizar 3
lavados)
Como los virus de HIV son similares son tratados igual
Se acomodan las tiras en cada unos de los Rack de la
siguiente forma:
RACK 1
RACK 2
RACK 3
HIV 2 Control negativo
HIV 2 Control positivo
Muestra
RACK 4
RACK 5
RACK 6
HIV 1 Control negativo
HIV 1 Control positivo
Muestra
Presionar START
RUN: Number of strips 1st Rack:5
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Presionar el # 2
Cambiar a 1 st Rack= 6
Presionar el # 2
RUN: Number of strips 2nd Rack:6
Presionar el # 1 hasta llegar al 0 para que quede
2nd Rack=0
Presionar START
RUN: Put the rack (s) on the tray
Valid= START Return= STOP
Presionar START
=1
RUN: New Lav Blot / Pha: 1:
=2 Valid= START Return= STOP
Presionar START
RUN: New Lav Blot
Phase 1: Soaking strip
Se agitan durante 5 min.
RUN: New Lav Blot Valid= START
Phase 2: Dispense 20microlitros of sample
Abrir la tapa del equipo
Adicionar 20 microlitros del control negativo WB1y 2
y 20 microlitros del control positivo WB1 y 2.
Adicionar 20 microlitros de la muestra
Homogenizar con la punta de la pipeta cada una despues
de adicionar
RUN: New Lav Blot
R3
Negative Control serum
Positive Control serum R4
Presionar START
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RUN: New Lav Blot R3
Negative Control serum
Positive Control serum R4
Presionar START
RUN: New Lav Blot
2Hrs.
Phase 3: Incubation of samples
Se incuba 2 hrs con agitación.
RUN: New Lav Blot
Phase 5:2nd wash of sample
(3 veces)
RUN: New Lav Blot Valid=START
Phase 6: Dsipense 2.0ml de Conjugate
2.0ml de conjugate
RS
Presionar START
RUN: New Lav Blot 60min.
Phase 7: Incubation Conjugate R5
RUN: New Lav Blot
Phase 8: 1st wash conjugate R5
RUN: New Lav Blot
Phase 9: 2nd wash conjugate R5
RUN: New Lav Blot Valid:START
Phase 10: Dispense 2.0ml Substrate R6
2ml de Colour developent solution R6
Presionar START
RUN: New Lav Blot Reaction stop STOP
Phase 11: Incubation substrate R6 Oh. Mn. S
5min. Aprox.
Presionar STOP
RUN: New Lav Blot
Phase 12: 1st. Rinse Subtrate R6
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RUN: New Lav Blot
RUN: New Lav Blot
RUN: New Lav Blot Valid:START
Phase 13: End of test
Presionar START
RUN: Begin a new test
YES= START NO=STOP
Presionar STOP
RUN: Instrument cleaning.Put a Rack
(1st pos.) Valid=START
Return= STOP
Presionar START
RUN: Conect R2 and H20
Tubing to the H2O bottle
Valid=START Return= STOP
Presionar START
RUN: Instrument cleaning.
0H mn-s
RUN: Disconnect the R2
and H2O tubing
Presionar START
RUN: Dring instrument
0H mn-s
RUN: Descontamination
Presionar START
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Colocar en un vaso de precipitado una solución de etanol
al 30% e introducir al vaso las lineas amarilla y azul
RUN: Inmerse both tube ends in 30% ethanol
Presionar START
RUN: Descontaminating tubing
-mn-s
RUN: 30% ethanol contact
OH--mn--s
RUN: Connect R2 and H2O tubing to
the H2O bottle
Presionar START
RUN: Cleaning instrument
3mn
RUN: Disconnect the R2 and H2O
tubing
Presionar START
RUN: Drying instrument
3mn
RUN: End of decontamination
Turn off the instrument
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La presencia de anticuerpos anti-proteínas constitutivas del virus HIV 1 y HIV 2 en las
muestras, se traduce por la aparición de bandas específicas coloreadas (azul-violeta).
Su posición corresponde a las masas molares de las proteínas virales representadas en
la tabla siguiente:
HIV 1
DETERMINA GEN
NATURALEZA
CIÓN
GP 160
ENV Glicoproteína precursora de
la GP 110/120 y de la GP 41
GP 110/ 120 ENV Glicoproteína de la envoltura
P 68
POL Transcriptasa inversa
P 55
GAG Precursora de proteínas
internas
P 52
POL Transcriptasa inversa
GP 41
ENV Glicoproteína
transmembranal
P 40
GAG Precursora de proteínas
internas
P 34
POL Endonucleasa
P 24/ 25
GAG Proteína interna
P 18
GAG Proteína interna
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ASPECTO EN WESTERN
BLOT
Banda nítida
Banda de bordes difusos
Banda nítida
Banda doble
Banda nítida
Banda difusa
Banda nítida
Banda nítida
Banda nítida
A veces banda doble
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INTERPRETACIÓN NEW LAV BLOT 1
Utilizar el control positivo para identificar los anticuerpos revelados y verificar la
presencia de la banda del control interno en cada tira.
INTERPRETACIÓN
Positivo
PERFIL
2ENV +/- GAG +/- POL
1ENV GAG POL
GAG + POL
GAG
POL
Ninguna banda Bandas no
significativas
Indeterminado
Negativo
La calificación de indeterminado puede ser por alguna de las alternativas siguientes:
Seroconversión
HIV-2
Reacción cruzada con otros retrovirus.
HIV 2
DETERMINACIÓN
GEN
GP 140
GP 105
P 68
P 56
ENV
ENV
POL
GAG
GP 36
ENV
P34
P 26
P 16
POL
GAG
GAG
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NATURALEZA
ASPECTO EN
WESTERN BLOT
Precursor de GP 105 y GP 36 Banda + -difusa
Glicoproteína de la envoltura Banda difusa
Transcriptasa inversa
Banda nítida
Precursora de proteínas
Banda nítida
internas
Glicoproteína
Banda difusa
transmembranal
Endonucleasa
Banda nítida
Proteína interna
Banda nítida
Proteína interna
Banda nítida
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INTERPRETACIÓN NEW LAV BLOT II
Utilizar el control positivo para identificar los anticuerpos revelados y verificar la
presencia de la banda del control interno en cada tira.
INTERPRETACIÓN
Positivo
Indeterminado
Negativo
HIV
PERFIL
ENV + GAG + POL
ENV + GAG
ENV + POL
GAG + POL
GAG
POL
ENV
Ninguna banda Bandas no significativas
(Ag P24 ELISA)
VIRONOSTIKA HIV-I ANTIGEN
El sistema microelisa VIRONOSTIKA HIV-I ANTIGEN es un enzimoinmunoensayo para
detección cualitativa y cuantitativa del antígeno de la nucleocápside p24 del virus de la
inmunodeficiencia humana del tipo 1 en suero, plasma o sobrenadante de cultivo celular
humano.
Es un inmunoensayo que se basa en el principio del sándwich. El anti-HIV-1 (humano)
acoplado a la peroxidasa de rábano (HRP) sirve como conjugado, usando como sustrato
a la tetrametilbencidina (TMB). Al concluir la prueba, el desarrollo de color sugiere la
presencia del antígeno del HIV-1.
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TAMPON FOSFATO DILUIDO
Verificar la ausencia de cristales de sales en el tampón fosfato concentrado. Si se han
formado cristales en la solución, volver a solubilizarlos calentando a 37 C hasta la
disolución de los mismos.
Diluir el tampón fosfato concentrado 1:25 con agua destilada o desionizada. Preparar
50ml de tampón fosfato diluido, como mínimo, para cada tira microelisa empleada.
El tampón fosfato diluido es estable durante dos semanas si se almacena a 2–8 C.
SUSTRATO TMB
Preparación del substrato TMB
Número de pocillos
1-16
17-32
33-48
Solución TMB
1ml
2ml
3ml
Solución de peróxido de urea
1ml
2ml
3ml
49-64
4ml
4ml
65-80
81-96
5ml
6ml
5ml
6ml
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El Químico de serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la
muestra(s) que se van a utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas.
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan las muestras y controles (los circulos no se pueden
marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.
La forma de colocarlos en la placa es asi:
Colocar 3 pocillos con Controles
negativos
Colocar 1 pocillos con controles
positivos
Colocar las muestras
Adicionar 25microlitros de disruptor a todos los pocillos
Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia:
cada muestra
Controles negativos
Colocar en 1 de los pocillos
de Controles positivos
Agitar ligeramente la placa y taparla con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 60min.
Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 4 ciclos) La forma de operar del equipo se
describe al final del procedimiento. Lavar con tampón fosfato diluido. Quitar exceso del lavado con golpes sobre un papel.
Adicionar 100microlitros de Conjugado a todos los pocillos. Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 60min. Realizar
los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 4 ciclos, lavar con tampón fosfato diluido)
Adicionar 100microlitros de sustrato-TMB preparado a todos los pocillos. Incubar a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a
todos 100microlitros de ácido sulfúrico 1mol/l (para parar la reacciòn)
Se realiza la lectura a 450nm con referencia de 620nm, se interpretan los resultados y guarda el registro en el folder del mes de la Prueba
correspondiente.
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RESULTADOS
Calificación de los valores de control negativo (CN)
La absorbancia de cada pocillo de CN debe ser menor que o igual a 0,090 (longitud de
onda doble) o 0,130 (longitud de onda única) y mayor que o igual a 0,000 (longitud de
onda doble) o 0,040 (longitud de onda única).
Eliminar los valores fuera de rango y determinar el valor de control negativo medio
(CNx). Eliminar todo CN que no satisfaga los criterios siguientes, y volver a calcular el
valor medio:
Longitud de onda doble
CN mayo o igual a 0,5x (CNx)
CN menor o igual a 1,5x (CNx)
Longitud de onda única
CN mayo o igual a 0,8x (CNx)
CN menor o igual a 1,2x (CNx)
Si dos o más valores están fuera del intervalo, el ensayo no es válido y debe repetirse.
Calificación de los valores de control positivo (CP)
La absorbancia de cada pocillo de CP debe ser mayor que o igual a 0,960 (longitud de
onda doble) o 1,000 (longitud de onda única).
Valor cutoff
Si el ensayo de prueba es válido, calcular el valor cutoff como sigue:
Cutoff para suero y plasma = CNx + 0,070
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VIDAS HIV DUO (HIV4)
Es una prueba de screening para la infección por HIV automatizado en el sistema
VIDAS, basado en la detección combinada del antígeno p24 de VIH-1 y las
inmunoglobulinas G anti-VIH1 y anti-VIH2 en suero o plasma humano por una técnica
ELFA.
Los virus de inmunodeficiencia humana (VIH) son retrovirus ARN transmitidos
principalmente por vías sexual, parenteral, perinatal y transplacentaria. Desde el
aislamiento del VIH 1 en 1993 Y del VIH 2 en 1995, han sido caracterizadas numerosas
variantes genéticas.
El diagnóstico de una infección por VIH, se basa en la práctica normal en la
detección de anticuerpos séricos anti-VIH por una técnica ELISA.
Existe un periodo de 3 semanas y media entre la contaminación y la aparición de
los primeros anticuerpos.
Durante este periodo, el antígeno p24 esta presente en la mayoría de los
pacientes infectados por VIH-1, sea cual sea su origen.
La detección simultánea de la antigenémia p24 y de los anticuerpos anti-VIH-1 y
anti-VIH-2 permite reducir el retraso existente entre la contaminación y el diagnóstico de
la infección. Objetivo de VIDAS HIV DUO.
Todas las etapas de la reacción están controladas por el sistema. El cono de uso único,
sirve a la vez de fase sólida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos están
listos para su uso y distribución en el cartucho.
Primera reacción
La detección de inmunoglobulinas G anti-VIH1 (también las del subtipo (grupo) O) y antiVIH2, se realiza en la parte baja del cono, donde después de la etapa de dilución, la
muestra es aspirada y expulsada varias veces de la parte inferior del cono. Esta
operación permite a las IgG anti-VIH de la muestra unirse a los péptidos de síntesis gp
41y/o subtipo (grupo) O y/o gp 36 fijados en el cono. Los componentes no ligados se
eliminan en los lavados.
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El conjugado anti-IgG humana marcado con fosfatasa alcalina se incuba ahora en el
cono, en el cual se fija a las IgG anti-VIH. Los componentes no ligados se eliminan en
los lavados.
Segunda reacción
Es la detección del antígeno p24 y se realiza en la parte alta. La muestra previamente
diluida y los anticuerpos de conejo anti-p24 biotinilados son aspirados y expelidos en el
cono. Durante la incubación del virus es lisado y los antígenos p24 liberados se unen
por un lado los anticuerpos anti-p24 monoclonales de ratón fijados en la parte superior
del cono, u por otro lado a los anticuerpos anti-p24 biotinilados. Los componentes no
fijados son eliminados mediante estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina, cuyo
exceso se elimina mediante lavados.
Etapa final
La etapa final de revelado se realiza simultáneamente en las dos partes y el substrato
(4-metil-umbeliferil fosfato) se aspira y expele en el cono. La enzima presente en el
conjugado cataliza la reacción de este substrato en un producto (4-metil umbeliferota)
midiendo la fluorescencia emitida a 450nm. Esta es proporcional a la presencia de IgG
anti-VIH y/o antígeno p24 presentes en la muestra.
Al final de la prueba, los resultados son calculados automáticamente por el VIDAS en
relación a un estándar, y posteriormente impresos.
El cono es sensibilizado en el momento de la fabricación con 3 péptidos sintéticos
( 1péptido env VIH-1, gp 41 + 1péptido env VIH-2, gp 36 + 1péptido específico VIH-1
grupo O) y 3 anticuerpos monoclonales anti-p24. Los péptidos permiten la captura de
las IgG anti-VIH 1 o anti-VIH 2 y los anticuerpos monoclonales el antígeno p24.
La identificación de la prueba, el número de lote y la fecha de caducidad están indicadas
sobre el cartucho en un código de barras y está compuesto de 10 pocillos. El primer
pocillo tiene una parte precortada para facilitar la introducción de la muestra. El último
pocillo es una cubeta que permite la lectura por fluorimetría. Los 8 pocillos intermedios
contienen los diferentes reactivos necesarios para el análisis.
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Precauciones:
No utilizar reactivos después de la fecha de caducidad.
No mezclar reactivos o consumibles de equipos diferentes.
Utilizar guantes de látex de uso único sin talco (puede provocar falsos).
Los reactivos y productos de se recomienda manipular con precaución.
Los reactivos se conservan a 2-8 C.
MUESTRA:
Suero o plasma (EDTA, citrato, trombina, heparina de litio, gel de heparina de litio,
oxalato)
Las muestras que contienen partículas deberán centrifugarse.
Se conservan a 2-8 C, 48 horas como máximo, sino congelar a –25 C. No congelar y
descongelar. No descomplementar las muestras.
CALIBRACION
Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo, se efectúa a la llegada de cada
nuevo lote, después de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 días.
El estándar identificado como S1, será analizado dos veces y el valor debe encontrarse
entre los límites de RFV fijados. Si no la media no será memorizada y se tendrá que
repetir la calibración.
CONTROL DE CALIDAD
Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se
debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia
de alteraciones de los reactivos. Cada recalibración debe ser verificada con la ayuda de
estos controles.
Para que el aparato pueda verificar el valor de los controles, es necesario identificarlos
mediante C1 y C2.
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Si los valores obtenidos del control positivo se desvían del intervalo de confianza
indicado en la etiqueta del frasco. Si el valor se desvía de los valores esperados, los
resultados no pueden validarse.
La técnica se observa al final del procedimiento.
RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente.
El equipo efectúa dos medidas de fluorescencia en la cubeta de lectura para cada
prueba:
La primera tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta substrato antes
de ponerse en contacto el substrato con el cono.
La segunda se efectúa después de la incubación del substrato con la enzima
presente en el cono.
El cálculo del RFV es el resultado de la diferencia de las dos lecturas, apareciendo en la
hoja de resultados.
El RFV se interpreta por el sistema VIDAS de la siguiente forma:
Valor del test = RFV paciente/ RFV calibrador
El valor de la prueba y la interpretación se imprimen en la hoja de resultados.
La interpretación en función del valor de la prueba es la siguiente:
Valor del test
Cuando el valor es menor a 0,25
Cuando el valor es menor o igual a 0,25 pero menor a 0,35
Cuando el valor es mayor o igual a 0,35
Resultados
Negativo
Positivo límite
Positivo
INTERPRETACION
Las muestras cuyo valor sea inferior a 0,25 se consideran negativas dentro de los
límites de las características del reactivo. En caso de sospecha de una primo-infección,
los valores próximos a 0,25 deberán ser interpretados con prudencia.
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Las muestras con valor superior o igual a 0,25 debe repetirse.
Deben ser analizadas con una prueba ELISA en donde se detecta el Ag P24.
Si resulta positivo se realiza una ELISA donde solo se detecta Ag P24.
BRUCELA (ANTIGENO BLANCO)
PRUEBA DE AGLUTINACIÒN LENTA EN PRESENCIA DE 2-MERCATOETANOL
Esta es una técnica cuantitativa para la determinación de anticuerpos anti-Brucella de la
clase IgG e IgA (Marcadores de infección activa).
El antigeno que se utiliza es la cepa de B. Abortus. Al ponerse en contacto con los
anticuerpos, estos van uniéndose entre si a las bacterias suspendidas desarrollando la
reacción de aglutinación, de esta manera se van depositando en el fondo formando una
malla visible.
La molécula de 2-mercaptoetanol actúa sobre la cadena J de la molécula de IgM
liberando las subunidades, mismas que pierden la capacidad de aglutinar, por lo que la
reacción visible se debe fundamentalmente a la presencia de IgG e IgA.
Para observar mejor la reacción se realiza la lectura frente a una fuente de luz. El titulo
de cada muestra se determina tomando en cuenta la dilución más alta en donde se
observa una reacción positiva.
Reacción positiva: Formación de una malla de aglutinación en el fondo del pozo con
clarificación del medio.
Reacción negativa: Permanece la turbidez del medio y el fondo se aprecia un acumulo
de células sedimentadas en forma de botón.
INTERPRETACION
Los resultados en esta prueba se consideran significativos desde títulos de 1/20,
reflejando así una etapa activa de la infección.
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El Químico de serologiamarca la placa a utilizar con los # del 1 al 12 y en el otro extremo con las
letras A a la H.
Diluir el diluyente para suero (2-Me) con SSI ( dilución 1:10)
-Adicionar 180microlitros de esta solución en los pozos marcados como H
-Adicionar 100microlitros en el resto de los pozos
Adicionar 20microlitros de cada muestra de la siguiente manera:
En los pozos 1H al 10H colocar la muestra problema
En el pozo 11 H El Control positivo
En el pozo 12 H Control negativo
Para realizar las diluiciones se requiere:
-Subir y bajar 3 veces con la pipeta para mezclar el suero
-Tomar 100microlitros del pozo H y pasarlos al pozo G
-Mezclar y pasar 100microlitros al pozo F se continua de la misma forma hasta llegar al pozo A.
Después de mezclar se descartan 100microlitros de este último para igualar el volumen.
PUNTA DIFERENTE PARA CADA MUESTRA
Agitar el antígeno y diluir con SSI (diluir 1:10)
Mezclar y colocar 100microlitros de esta suspensión a todos los pozos
Cubrir la placa para evitar desecación e incubar a 37 C de 20-24 hrs.
Leer la placa y anotar el resultado en la Bitácora de serologia CAL-13-A
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TRANSPLANTE DE MEDULA OSEA
CITOMEGALOVIRUS
VIDAS CMV IgG (CMVG)
Diagnostico in vitro
Determinación inmunoenzimàtica de IgG anticitomegalovirus (CMVG) en suero humano
por tècnica ELFA (enzima LINKED flourecente validación)
El citomegalovirus forma parte de la familia de los herpes virus.
Causa patologías graves tanto en niños como en adultos.
Puede persistir durante años en la persona infectada
Es causante de infecciones recurrentes
Se puede transmitir a otros individuos.
Existen casos de entre un 60 – 85% de la población infectada, la mayoría se tratan de
casos asintomáticos.
Entre el 1 -3% de los casos se da en mujeres embarazadas y en 1 caso de cada 2 la
infecciòn se transmite al feto, siendo una infección asintomático.
En 5% de los casos puede tener consecuencias graves como:
Hepato especnomegália
Hidrocefalia
Micromegalia
Partos prematuros.
La muerte del feto es frecuente.
En infecciones asintomáticas el 10% de los niños presentan secuelas neurosensoriales
tales como:
Sordera
Ceguera parcial o total.
Pude causar infecciones severas en personas inmunodeprimidas (infectadas por VIH o
transplantados).
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VIDAS CMV IgG es una tecnica automatizada que permite medir cuantitativamente las
IgG anti CMV en suero humano. El principio de determinación asocia el método
inmunoenzimático a una lectura final en fluorescencia (ELFA).
La identificación del la prueba, el número de lote y la fecha de caducidad están indicadas
sobre el cartucho en un código de barras.
La identificación de la prueba, el número de lote, los parámetros de calibración y el título
del calibrador, están indicados claramente y contenidos en un código de barras de la
ficha de especificaciones adjuntas al equipo.
Precauciones:
Dejar reactivos a temperatura ambiente 30 min. antes de su empleo.
Comprobar que el deshidratante contenido en la bolsa de los conos no cambia de color
(pasa de azul al rosa).
Homogenizar el cartucho con los calibradores, controles y muestras para una mejor
reproducibilidad de los resultados.
Utilizar guantes de látex de uso único sin talco.
MUESTRA:
Suero:
No descomplementados
No hemolizados
No contaminados
Se conservan 5 días a 2-8C, congelar a -20C. No congelar y descongelar
sucesivamente.
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CALIBRACION
Se efectua mediante el estándar incluido en el equipo , se efectúa a la llegada de cada
CONTROL DE CALIDAD
estos controles. Si los valores obtenidos de los controles se desvían de los valores
esperados, los resultados no pueden validarse.
La técnica se puede observar al final del procedimiento.
RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente y las
concentraciones en IgG anti CMV del suero o controles son calculados por el equipo.
Los resultados son expresados en Ua/ml respecto a una curva de calibración
memorizada en el equipo.
Umbral e interpretación de los resultados
Valor (Ua/ml)
Interpretación
Menor a 4
Negativo
Mayor o igual a 4 pero menor a
6
Dudoso
Mayor o igual a 6
Positivo
Para valores entre 4 y 6, repetir la prueba.
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RESULTADOS FUERA DE LA CURVA
Las muestras con resultado mayor de 400 Ua/ml pueden ser diluidas al ¼ en suero
fisiológico. Multiplicar el resultado por el factor de dilución para obtener el título de la
muestra. Solo diluir las muestras cuyo título puro sea mayor a 400 Ua/ml.
VALOR CRITICO
Determina un aumento significativo del nivel de anticuerpos, equivalente a un aumento
de 4 veces el título de anticuerpos. Este aumento indica que existe una infección activa,
y se calcula como sigue:
Valor crítico: Muestra convaleciente Ua/ml / muestra aguda Ua/ml
Valor Crítico
Menor a 2
De 2 a 4
Mayor a 4
Interpertación
Sin cambio significativo del nivel de
anticuerpos.
Valor crítico evocador de un aumento de
anticuerpos. Una muestra suplementaria
deberá ser extraída y analizada entre 7 y 14
días, y reestudiado con la primera para
recalcular el valor crítico.
Aumento del nivel de anticuerpos muy
significativo.
Se recomienda repetir las muestras agudas y convalecientes en la misma lista de trabajo
del VIDAS.
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VIDAS CMV IgM (CMVM)
Pra esta prueba no es recomendable utilizar plasma.
Determinación cualitativa inmunoenzimática de IgM anti-citomegalovirus (CMVM) en
suero humano por técnica ELFA (enzima LINKED flourecente validación)
El citomegalovirus forma parte de la familia de los herpes virus.
Causa patologías graves tanto en niños como en adultos.
Puede persistir durante años en la persona infectada
Es causante de infecciones recurrentes
Se puede transmitir a otros individuos.
Existen casos de entre un 60 – 85% de la población infectada, la mayoría se tratan de
casos asintomáticos.
Entre el 1 -3% de los casos se da en mujeres embarazadas y en 1 caso de cada 2 la
infecciòn se transmite al feto, siendo una infección asintomático.
En 5% de los casos puede tener consecuencias graves como:
Hepato-esplenomegalia
Hidrocefalia
Micromegalia
Partos prematuros.
La muerte del feto es frecuente.
En infecciones asintomáticas el 10% de los niños presentan secuelas neurosensoriales
tales como:
Sordera o ceguera parcial o total.
Pude causar infecciones severas en personas inmunodeprimidas ( infectados por VIH o
transplantados).
La detección de las I g M anti- CMV puede ser útil en el diagnóstico de las infecciones
primarias recientes, particularmente en mujeres embarazadas.
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La detección de las IgM puede presentar resultados falsamente positivos debido al factor
reumatoide, y resultados falsamente negativos debido a la presencia de IgG. Problemas
que se evitan con la adsorción.
El principio de determinación asocia el método inmunoenzimático a una lectura final en
fluorescencia (ELFA).
Una vez adsorbidas las IgG y el factor reumatoide, la muestra es aspirada y expulsada
del interior del cono durante un tiempo determinado. Los anticuerpos IgM anti- CMV
presentes en la muestra van a fijarse en el antígeno CMV fijado en la pared interne del
cono. Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados.
Un anticuerpo monoclonal anti-IgM humano marcado con fosfatasa alcalina es aspirado
y expulsado dentro del cono y se va a fijar en las IgM anti- CMV humanas fijados en la
pared del cono. La etapa de lasvado elimina los componentes no fijados.
La etapa final de revelado, el substrato (4-metil-umbeliferil fosfato) es aspirado y
después expulsado en el cono; la enzima del conjugado cataliza la reacción de hidrólisis
de este substrato en un producto (4-metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es
medida a 450nm.
sobre el cartucho en un código de barras, el primer pocillo tiene una parte precortada
para facilitar la introducción de la muestra.
Precauciones:
No utilizar reactivos después de la fecha de caducidad.
No mezclar reactivos o consumibles de equipos diferentes.
Utilizar guantes de látex de uso único sin talco (puede provocar falsos).
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MUESTRA:
Suero:
No descomplementados
No hemolizados
No contaminados
sucesivamente.
No sueros lipémicos, bemolizados o contaminados.
CALIBRACION
Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo , se efectúa a la llegada de cada
CONTROL DE CALIDAD
estos controles.
Para que el aparato pueda verificar el valor de los controles, es necesario identificarlos
mediante C1 y C2.
Si los valores obtenidos del control positivo se desvían del intervalo de confianza
indicado en la etiqueta del frasco. Si el valor se desvía de los valores esperados, los
resultados no pueden validarse.
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RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente.
El equipo efectúa dos medidas de fluorescencia en la cubeta de lectura para cada
prueba:
La primera tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta substrato antes
de ponerse en contacto el substrato con el cono.
La segunda se efectúa después de la incubación del substrato con la enzima
presente en el cono.
El cálculo del RFV es el resultado de la diferencia de las dos medidas. Aparece en la
hoja de resultados.
El índice i de la prueba es calculado por el instrumento (es la relación entre la señal
fluorescente encontrada para el suero a analizar con respecto a la señal memorizada del
estándar).
Indice
Una i menor a 0,70
Cuando i es menor o igual a 0,70 y pero menor a 0,90
Cuando i es mayor o igual a 0,90
Interpretación
Negativo
Dudoso
Positivo
Para índices entre 0,70 y 0,90, repetir la prueba.
Si la verificación vuelve a dar dudosa, se repite el análisis sobre un nuevo suero tomado
entre 10 y 15 días más tarde.
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TOXOPLASMA
VIDAS TOXO IgG II (TXG)
Determinación cuantitativa inmunoenzimática de las IgG anti-toxoplásmaticas en suero
o plasma humano (anticoagulante permitido EDTA, heparina) por técnica ELFA (enzima
LINKED flourecente validación)
Ayuda a conocer el estado inmunitario.
El Toxoplasma gondii, es un protozoario, parásito intracelular obligatorio, es un patógeno
muy extendido en el hombre. Parásito cuyo huésped definitivo es el gato, se disemina en
la naturaleza e infecta a numerosos mamíferos.
Las afecciones en personas inmunocompetentes es discreto, pero las afecciones fetales
así como en inmunocomprometidos puede ser muy severa.
Mujeres O positivo antes de quedar embarazada, no transmiten el paràsito usualmente
el parásito a su hijo.
Mujeres O negativo, son susceptibles de ser infectadas en el curso del embarazo.
La transmisión al feto ocurre durante la fase aguda de la enfermedad.
La gravedad y frecuencia de la afectación fetal depende de:
Fecha de la infección materna
Virulencia de la cepa infectante
Importancia del inóculo
Calidad de la respuesta inmune de la madre.
El diagnóstico de la infección se basa en la exploración biológica: búsqueda de
inmunoglobulinas específicas (IgM e IgG).
El diagnóstico de una infección aguda adquirida durante el embarazo se realiza
poniendo de manifiesto una seroconversión, o por un aumento significativo del título de
anticuerpos detectados en dos muestras secuénciales testadas en paralelo.
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El principio de determinación asocia el método inmunoenzimático sándwich
etapas con una lectura final en fluorescencia (ELFA).
en dos
Todas las etapas de la reacción están controladas y son realizadas por el sistema.
En a primera etapa la muestra se diluye, se aspira y expulsa del interior del cono
durante un tiempo determinado. Los anticuerpos anti-T. gondii IgG presentes en la
muestra van a fijarse en los antígenos de T. gondii fijado en el interior del cono. Las
etapas de lavado eliminan los componentes no fijados.
Las IgG de ratón monoclonales anti-IgG humanas conjugadas con fosfatasa alcalina son
expulsadas y aspiradoas del interior del cono y se van a fijar en las IgG humanas fijados
en la pared interna del cono.
La etapa final de revelado, el substrato (4-metil-umbeliferil fosfato) es aspirado y
después expulsado en el cono; la enzima del conjugado cataliza la reacción de hidrólisis
de este substrato en un producto (4-metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es
medida a 450nm. Proporcional a la concentración de anticuerpos presentes en la
muestra.
El cono esta sensibilizado con antìgeno toxoplásmatico de membrana y citoplásmico,
cada cono está identificado por el código TXG. Se utilizan solo los conos necesarios y
se deje el resto en la bolsa.
sobre el cartucho en un código de barras, el primer pocillo tiene una parte precortada
para facilitar la introducción de la muestra. El último pocillo es una cubeta que permite la
lectura por fluorimetría. Los pocillos intermedios contienen los diferentes reactivos
necesarios para el análisis.
Precauciones:
No usar reactivos después de la fecha de caducidad.
No mezclar reactivos o consumibles de lotes diferentes.
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Manejar cada reactivo con sumo cuidado.
Homogenizar el cartucho con los calibradores, controles y muestras para una mejor
reproducibilidad de los resultados.
MUESTRA:
Suero o plasma (EDTA, heparina)
No hemolizados
No contaminados
sucesivamente.
CALIBRACION
Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo, se efectúa a la llegada de cada
CONTROL DE CALIDAD
RESULTADOS
Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente. El equipo
realiza dos lecturas de fluorescencia en la cubeta óptica para cada prueba. La primera
toma en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta y al substrato. La segunda lectura
se realiza después de la incubación del substrato en el cono. El cálculo de RFV es el
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resultado de la diferencia entre ambas lecturas y aparece en la hoja de resultados, se
interpretan en Ul / ml.
Título (Ul/ml)
Menor a 4
Mayor o igual a 4 pero menor a 8
Mayor o igual a 8
Interpretación
Negativo
Dudoso
Positivo
RESULTADOS FUERA DE LA CURVA
Las muestras con resultado mayor de 300 Ul/ml pueden ser diluidas al ¼ en el control
negativo.
Si el factor de dilución no se ha indicado en la lista de trabajo, multiplicar el resultado por
el factor de dilución para obtener la concentración de la muestra.
VIDAS TOXO IgM (TXM)
Determinación inmunoenzimática de las IgM anti-toxoplásmaticas en suero humano por
técnica ELFA (enzima LINKED flourecente validación). Tras la inmunocaptura de las
IgM del suero, las IgM antitoxoplásmaticas se detectan específicamente gracias a un
inmunocomplejo marcado con fosfatasa alcalina.
Ayuda a conocer el estado inmunitario.
Los reactivos se conservan a 2-8 C y su fecha de caducidad esta indicada en el envase.
Precauciones:
No usar reactivos después de la fecha de caducidad.
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Los reactivos después de ser utilizados deben ser correctamente eliminados.
Manejar cada reactivo con sumo cuidado y desecharlos adecuadamente.
MUESTRA:
Suero
No hemolizados
No contaminados
sucesivamente.
CALIBRACION
Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo , se efectúa a la llegada de cada
CONTROL DE CALIDAD
RESULTADOS
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Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente y el l índice i
de la prueba es calculado por el instrumento (es la relación entre la señal fluorescente
encontrada para el suero a analizar con respecto a la señal memorizada del estándar).
Indice
Una i menor a 0,55
Cuando i es menor o igual a 0,55 pero menor a 0,65
Cuando i es mayor o igual a 0,65
Interpretación
Negativo
Dudoso
Positivo
Para índices entre 0,55 y 0,65, repetir la prueba.
Si la verificación vuelve a dar dudosa, se repite el análisis sobre un nuevo suero tomado.
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El equipo Mini VIDAS se enciende con el interruptor que se encuentra en la parte de abajo en la zona de en medio a un lado del cable de
conexión
Mini VIDAS BOOT R1.13
MES DIA AÑO HORA: MINUTOS: SEG
1992 bioMerieox Vitek, Inc.
All Rights Reserved
Booting …………..
Initializing
Please wait ……..
Se puede introducir el cartucho en cualquiera
de los RAP de muestra A y B
Se introduce el cartucho para que la zona con
el punto verde se siga viendo.
Inicializar sección ………………….
Pantalla de estado …………………
Menú de calibración ………………..
Menú de resultados ………………..
Menú de utilidades …………………
Error codigo de barras: #
Hora:
día/mes/año
Atención: Estandar de Prueba
# caducidad
Reporta cada estandar caducado
Cuando se introduce un kit nuevo en la
charola
Dar click en Menú de calibración……...
Lectura del lote ………………….
Introd. Manual del lote patrón …
Introd. Hoja manual TOS …..…..
Lista de standares memorizado.
Lista de lote patrón …………,…
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Seleccionar
Lista de standards memorizados……..
Se observa en la pantalla la prueba a realizar
TXG…………
TXM ………..
HIV4 ……….
Buscando estandares
Nombre de la Prueba
Lote: #
HR.: MIN.: SEG
DIA/MES/AÑO
Caducidad : HR:MIN:SEG
DIA/MES/AÑO
# : #
BORRAR……...
Como es un Kit nuevo se introduce la
información
Seleccionar Lectura del lote ……………...
Sección A …………..
Sección B …….…….
Se pone la tarjeta de codigo de barras en la
charola y se introduce en A o en B
Por favor, espere ……….
Si algun codigo de barras esta dañado manda
el siguiente mensaje
Error codigo de barras: #
Hora: HR: MIN: SEG DIA/MES/AÑO
Datos tarjeta MLE
incorrectos
Seleccionar
Introd. Manual del lote patrón……...
Lectura automática
1/16|
BORRAR……….
DEFECTUOSO O # DE CODIGO DE
BARRAS
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A B C …………..Z +
Se debe verificar todos para ver cual es que
esta mal
Cuando llego al 16 / 16 se da un regreso de
pantalla
Datos de lote incorrectos
¿ Editar de nuevo?
SI ……….
NO ……….
Seleccionar
SI ……….
Se observa la siguiente pantalla
Dar un regreso de pantalla a la principal
Seleccionar Pantalla de estado ………..
A
B
Disponible …………………..
Visualizar
temp………….
Seleccionar
Visualizar temp………….
Temperatura
Bandeja
A: #
B: #
Conos
#
#
Imprimir …………….
A
B
Visualizar
A o B
CAL-02-B
temp………….
en la charola que se desea trabajar
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Sección A
1
2
3
# de cartuchos que puedes utilizar
COMENZANDO ………….
Selecciono el # 1
Posición
A1
S ……….……
C……….…….
Test ……….…
Dilución …..…
ID Muestra ....
Se S …………
Se tienen 2 standares
Introducir el número de estándar (1-4)
Seleccionar el # 1
Posición
A1
S1
S ……….……
C……….…….
Test ……….…
Dilución …..…
ID Muestra ....
Seleccionar Test …………...
Programas a utilizar
CH2
CHB
CDA2
CDB
Para seleccionarla moverte con las fechas
Seleccionar el que se va a utilizar
Por favor, esperar
Posición
S1
Programa utilizado
A1
S……...……...
C……….…….
Test ……….…
Dilución …..…
ID Muestra ....
Paso a la siguiente posición
CAL-02-B
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Seleccionar C ……..
e introducir # controles
Selecciono ID Muestra ……………….
Posición
Nombre
A
# ID
completo
Borrar ….……
…….…….
M1 ……….…
M2…...…….
Z
Moverse con las flechas
No da espacios
Cuando ya no se desea colocar otra muestra
se busca el simbolo de pantalla siguiente
Por favor, esperar
Seleccionar Test …………...
Seleccionar Borrar …………...
Borar configuración de la posición………
Borar configuración de la sección……...
Seleccionar
Borar configuración de la posición……...
Posición
S1
Programa utilizado
A #
S……...……...
C……….…….
Test ……….…
Dilución …..…
ID Muestra ....
Se observa lo que se programo:
1
2
3
4
Nombre
Sección A
Nombre de la Prueba S1
Nombre de la Prueba S2
Control
C1
Control
C2
completo del donador o paciente
COMENZANDO …………...
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Los frascos de los reactivos
VIDAS HIV DUO
C1 Control +
VIDAS HIV DUO
C2 Control VIDAS HIV DUO
S1 Estandar
Agitar en el vortex
Adicionar 100microlitros del reactivo
correspondiente y colocar el cartucho en el
orificio que tiene suero o plasma, cerrar la
puerta A o B. Presionar
COMENZANDO…………….
Aparece en la pantalla lo siguiente:
ID Técnico
1:
2:
3:
Seleccionar el # corresspondiente al nombre
del Químico que esta realizando la prueba
Código de barras…………
Disponible ………………..
Visualizar temperatura …...
Comenzando
…………
RUN
…………
INICIAR EL PROCESO
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VIRUS DE EPSTEIN BAAR
VIRONOSTIKA EBV VCA IgM e IgG
Es un enzimoinmunoensayo ELISA para la determinación cualitativa y semicuantitativa
de anticuerpos IgM o IgG frente al Antígeno de la Cápside del Virus Epstein Barr en
suero o plasma humano. Esta indicado como ayuda en el diagnóstico de infección por
EBV primaria o reactivada.
El virus Epstein Barr es el agente etiológico de la mononucleosis infecciosa (MI) e
interviene en el linfoma de Burkitt y en el carcinoma nasofaríngeo.
El péptido p18 VCA, una proteína marcadora específica del VCA recién definida única
del EBV, se utiliza en el Vironostika EBV VCA IgM junto con un anticuerpo monoclonal
específico de p18 VCA como conjugado. Péptido formado po 56 aminoácidos
codificados por la secuencia de inicio de lectura BRRF3. Para IgG se utiliza anti-IgG
humana de cabra como conjugado. Péptido, bien caracterizado, está formado por 56
amonoácidos codificados por la secuencia de inicio de lectura BRRF3.
En IgM la técnica se fundamenta en el principio de captura de anticuerpos, los pocillos
se hallan recubiertos de anticuerpo monoclonal contra IgM humano que constituye la
fase sólida. En IgG la técnica se fundamenta en el principio de sándwich, los pocillos se
hallan recubiertos con péptidos sintéticos p18 EBV VCA que constituye la fase sólida.
RESULTADOS CUALITATIVOS
IgM
Los cálculos deben efectuarse por separado para cada soporte de tiras.
Validez de la prueba
Abreviaturas:
Cal I: Absorbancia del calibrador I
Cal II: Absorbancia del calibrador II
Cal IV: Absorbancia del calibrador IV
1. Cal I debe ser menor a 0,300
2. Determinar el valor medio de Cal II (Cal IIx)
Cal II debe ser mayor o igual a 0,75 Cal IIx menor o igual y 1,25 Cal IIx
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-26
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Si un (máximo de un ) replicado de Cal II no cumple esta condición, eliminar el
más externo, y volver a calcular Cal IIx para la calificación de los replicados Cal II
restantes.
3. Cal IV - Cal IIx debe ser mayor a 0,600.
Un ensayo es válido si se cumplen los criterio indicados anteriormente.
Valor cutoff
Si el ensayo es válido, el valor del cuoff= Cal IIx.
RESULTADOS
Una muestra es reactiva para anticuerpos IgM contra EBV VCA si la absorbancia de
la muestra es mayor o igual del valor del cutoff.
Una muestra es no reactiva para anticuerpos IgM contra EBV VCA si la absorbancia
es menor del valor del cutoff.
IgG
Los cálculos deben efectuarse por separado para cada soporte de tiras.
Validez de la prueba
Abreviaturas:
Cal I: Absorbancia del calibrador I
Cal II: Absorbancia del calibrador II
Cal IV: Absorbancia del calibrador IV
1. Cal II debe ser menor a 0,250
2. Determinar el valor medio de Cal II (Cal IIx)
Cal II debe ser mayor o igual a 0,75 Cal IIx menor o igual y 1,25 Cal IIx
Si un (máximo de un ) replicado de Cal II no cumple esta condición, eliminar el
más externo, y volver a calcular Cal IIx para la calificación de los replicados Cal II
restantes.
3. Cal IV - Cal IIx debe ser mayor a 0,750.
Un ensayo es válido si se cumplen los criterio indicados anteriormente.
Valor cutoff
Si el ensayo es válido, el valor del cuoff= Cal IIx.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-26
ISBN: 978-968-9170-17-4
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RESULTADOS
Una muestra es reactiva para anticuerpos IgG contra EBV VCA si la absorbancia de
la muestra es mayor o igual del valor del cutoff.
Una muestra es no reactiva para anticuerpos IgG contra EBV VCA si la absorbancia
es menor del valor del cutoff.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-26
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El Técnico de Serologia escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, calibradores (los
pocillos no se pueden marcar ) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.
análisis ( la muestra puede ser plasma o suero). Se realiza una dilución 1:101 en un tubo previamente marcado (1ml del diluyente de
muestras +10microlitros de la muestra) se homogeniza con la misma punta y la deja la punta dentro del tubo
De la placa e deja la primera tira para puros controles y empezando con la segunda tira se coloca 100microlitros simultaneamente en la placa
para IgM y en la de IgG de la dilución de la muestra.
Se corrobora que los reactivos para las IgG e IgM estan bien identificados y se procede a colocarlos en los respectivos pocillos
Coloco en los pocillo 100microlitros de cada CALIBRADOR
para IgM que contienen:
Coloco en los pocillo 100microlitros de cada CALIBRADOR
para IgG que contienen:
CALIBRADOR 1: 5 U
CALIBRADOR 2: 20 U
CALIBRADOR 3: 80U
CALIBRADOR 4: 140U
CALIBRADOR 1: 10 U
CALIBRADOR 2: 20 U
CALIBRADOR 3: 110U
CALIBRADOR 4: 170U
POR DUPLICADO CADA CALIBRADOR
POR DUPLICADO CADA CALIBRADOR
EJEMPLO:
POCILLO 1 y 2 CALIBRADOR 1
(por eso se deja una linea para calibradores)
Tapo las placas con cinta ahesiva y se pone a incubar durante 1 hr. a 37 C
Prepara una solución Buffer de fostatos 1:25 (480ml de agua destilada + 20ml de Buffer de fostatos) y con ella realizo el lavado.
Lavo con el LP 35 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR (Programa 5 con 4 cliclos)
CONJUGADO PARA IgM
El conjugado que se va aprepar a continuación requiere como minimo
10 min para su preparación por lo que se debe ´prepara con
anterioridad para que se encusntre homogenizado a la hora de
colocar en los pocillos.
PREPARACION DEL CONJUGADO:
En el frasco que contiene la solución de reconstituyente de conjugado
adiciono 5ml de la solución reconstituyente de conjugado y pongo a
agitar hasta que se encuentra homogeo. Cuando se encuentra
totalmente resuspendido se agregan 100microlitros de conjugado.
CONJUGADO PARA IgG
PREPARACION DEL CONJUGADO:
Para dos tiras aproximadamente
Se toman 2.5ml de diluyente de conjugado y se mezcla con
50microlitros de conjugado, y se homegeniza y se agregan
100microlitros de conjugado
Tapo las placas con cinta ahesiva y se pone a incubar durante 1 hr. a 37 C
Lavo con el LP 35 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR (Programa 5 con 4 cliclos)
Se adicionan 100microlitros de TMB y se deja a temperatura de entre 18-.22 C durante 30 min. y se para la reacción con 200microlitros de
solución de acido sulfurico 1N
Una hora despues se realiza la lectura aen el LP 400 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR a 450nm
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EQUIPO MINI VIDAS
Se utiliza para realizar las siguientes pruebas:
Elisa de 4ta Generación, detecta Ag p24 y Ac HIV-1/2
En paciente con T.M.O. para Citomegalovirus y Toxoplasmosis.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-26
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SANOFI DIAGNOSTICS PATEUR LP 35
El equipo SANOFI DIAGNOSTICS PATEUR LP 35 se enciende con el interruptor que se encuentra en la
El equipo tiene 3 botes: 1. Solución de lavado, 2. Agua destilada y 3. Desechos
Primero se realiza el mantenimiento:
En la pantalla se observa los siguiente:
WASH?
N/
WASH PARM?
RIUSE?
Y/
WASH?
W/TEST NUM:01?
Y/
WASH?
W/CYCLES NUM: 04?
Y/
WASH?
W/STRIPS NUM:04?
Y/
WO1/ CYC:4/ST:04?
Y/
Se cambian las mangueras a la solución de lavado
Lavado de la muestra
WASH?
W/TEST NUM:01?
Y/
WASH?
W/CYCLES NUM: 05?
Y/
WASH?
W/STRIPS NUM:04?
Y/
CAL-02-B
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ESPECTROFOTOMETRO SANOFI PASTEUR LP 400
El Equipo SANOFI PASTEUR LP 400 se enciende con el interruptor que se encuentra en la parte del frente del
equipo e inmediatamente checa los filtros.
En la pantalla se observa los siguiente:
SELF TEST REPORT
ENTER
LP 400
(FAST) (START) (DATA) (ASSAY) (SETUP)
Colocar la placa y presionar (DATA)
DATA: SELECT DATA MANIP. FUNTION
(IDENT) (LIST) (RECALC) ( DIR) (CLEAR)
Presinar (IDENT)
DATA/IDENT: ENTER ID KEYS/BARCODE
PLATE ID:
Se escribe la fecha como identificación y se presiona
(ENTER)
DATA/IDENT: SELECT ASSAY (NUM/CURSOS)
ASSAY NR:
Presionar el # asignado a la prueba que desea realizar
que va del 1 al 7
Se observa en la pantalla # - Prueba seleccionada
presionar (ENTER)
DATA/IDENT: ENTER ID KEYS/BARCODE
FIRST SAMPLE ID:
Seleccionar el # 1 y presionar (ENTER)
DATA/IDENT: TOTAL NUMBER OF SAMPLES
n:
Seleccionar el # de pocillos que desea que se lean
(sin contar blanco, controles internos y externos),
Teclear el # y dar un (ENTER)
DATA/IDENT: INCREMENT FOR SAMPLE ID
I=
# DE
Seleccionar el # 1 y presionar (ENTER)
CAL-02-B
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Código: CAL-26
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IDENTIFICACION
# SAMPLES PUT ON 1 PLATE (S)
Presionar (ENTER)
LP 400
(FAST) (START) (DATA) (ASSAY) (SETUP)
Presionar (START)
START: SELECT PLATE W/ CURSOR
Nr. 1-ID: Fecha que puse como identificación identified
Presionar (ENTER)
START: PRINTOUT INMEDIATELY?
(YES) (NO)
Presionar (YES)
MEASURING
450
620
PRINTING
ASSAY # (# de prueba)
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Incubadora ABBOTT COMMANDER
La incubadora ABBOTT COMMANDER se enciende con el interruptor que se encuentra en la
parte de atras del equipo
Se presiona el botón que indica la temperatura que se desea y se observa que aparece en la pantalla
Se indica en cual carril se pondra el soporte que contiene la prueba y se presiona el #
La pantalla se pone en ceros para que se especifique el tiempo a los que desea suene la alarma
Una vez que se introduce la prueba se presiona el # de carril donde se metio y empieza a correr el tiempo
Una vez que pasa el tiempo especificado suena la alarma y se puede sacar la placa introducida
La bitácora de Resultados de Serologia CAL-13-A debido a su tamaño no se muestra
dentro de este procedimiento.
La bitácora de Resultados de Serologia CAL-13-A se llena de la siguiente manera:
Fecha:
No.:
Disponente:
Día, mes y año en que se realizó la toma de
muestra.
Número asignado en toma de muestra.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s) del
donador.
Para la valoración de los siguientes datos se toma en cuenta las especificaciones
que se encuentran en la NOM-003-SSA2-1993.
Hematología
Hto:
Hb:
Leu:
Plq:
Prot:
CAL-02-B
Hematocrito el valor es obtenido del equipo Sysmex.
Hemoglobina el valor es obtenido del equipo
Sysmex.
Leucocitos el valor es obtenido del equipo Sysmex.
Plaquetas el valor es obtenido del equipo Sysmex.
Se deja el espacio vació.
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Sistema ABO
Se especifica en el recuadro correspondiente la letra(s) del grupo sanguíneo o se
palomea.
A, B, AB, O:
A1, H:
Tipos de Grupo sanguíneo del Sistema A,B,O del
donador .
Subgrupos sanguíneos de A cuando el donador
es del grupo sanguíneo A.
(Ver procedimiento CAL- 25)
Se especifica en el recuadro correspondiente la palabra del factor sanguíneo o se
palomea.
Pos.
Neg.
D
Factor sanguíneo positivo.
Factor sanguíneo negativo. Cuando el Rh es negativo
se realiza la confirmación en el sistema DianaGel antiD (Ver procedimiento CAL- 25)
Se especifica si es negativo (-) o positivo (+) .
Los siguientes datos se toman del formato F-A-14-23:
D, C, E, e, c:
SRr
Se realizan por medio del sistema DianaGel anti-D
(Ver procedimiento CAL-25), los resultados de la
lectura del fenotipo se reportan como positivo(+) o
negativo (-) en el cuadro correspondiente.
La resultados de la lectura del fenotipo se lee en
CAL-13-B.
RASTREO DE Abi FSABO
Este análisis se realiza a:
Todas las mujeres donadoras.
Personas politransfundidas.
Como rutina el análisis se realiza con el REAGENT RED BLOOD CELLS FOR
ANTIBODY DETECTION
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Post.
Negt.
Ab
Cuando el análisis de rutina es positivo se debe de
realizar una prueba más especifica con los reactivos
que son surtidos por el Banco de Sangre del Instituto
Mexicano del Seguro Social (presenta fecha de
caducidad). Para resultados positivos se palomea el
cuadro o se escribe la palabra positivo y se
establece la especie del mismo
(Ver procedimiento CAL- 25)
Cuando el análisis de rutina es negativo se palomea
el cuadro o se escribe la palabra negativo
(Ver procedimiento CAL- 25).
Se deja el espacio vació.
HEMOLISINAS
Este análisis se realiza solo a Personas con grupo sanguíneo O (Ver Procedimiento
CAL- 25)
Negt.
Post.
Se palomea el cuadro cuando es negativo.
Se palomea el cuadro cuando es positivo.
SEROLOGIA BASICA
Las Pruebas serólogicas siguientes son realizadas a todas las muestras de los
donadores y son reportan como:
Reactiva Se sella con esta leyenda cuando se considera que el análisis de la
muestra presenta una probable infección. Se realiza la Prueba confirmatoria con
la 1era muestra y una ELISA con la segunda muestra
Negativo Se sella con esta leyenda cuando no presenta la enfermedad (Ver
procedimiento CAL- 26).
CAL-02-B
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Código: CAL-26
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Serologia básica:
VIH Detecta la presencia de anticuerpos contra el virus de Síndrome de
Inmunodeficiencia Adquirida.
AgsHB
Detecta la presencia del Antígeno de superficie de la
Hepatitis B.
HCV
Detecta el anticuerpo para la Hepatitis C.
BRUCELLA
Detecta el anticuerpo para la Brucella.
V.D.R.L.
Detecta el anticuerpo contra el Treponema pallidum.
CHAGAS
Detecta el anticuerpo contra el Tripanosoma cruzi.
Diferentes técnicas para realizar la detección:
HAI
ELISA
Los siguientes análisis se realizan en los siguientes casos:
Pacientes en tratamiento de medula ósea.
Pacientes o donadores con solicitud de Médica.
CMV
IgM
IgG
Citomegalovirus
Inmunoglobulina M
Inmunoglobulina G
IgG
IgM
Toxoplasma
Inmunoglobulina G
Inmunoglobulina M
IgM
IgG
Virus Eimtein Barr
Inmunoglobulina M
Inmunoglobulina G
TOXO
EVB
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-26
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Pruebas confirmatorias:
WB I
WB II
RIB
Para detectar anticuerpos para H.I.V.1
Para detectar anticuerpos para H.I.V.2
Para detectar anticuerpos para H.C.V.
CONFIRMATORIAS
NEUTRALIZACIÓN
Ag BLANCO
MERCAP
TP/PA
PBS. ESPECIALES
Citometría
CD34
Carga viral
Prueba confirmatoria para Hepatitis B.
Prueba confirmatoria para Brucella
Prueba confirmatoria para Chagas
Prueba confirmatoria para Sifilis
Pruebas especificas de Control de calidad.
Pruebas especificas de Control de calidad
Pruebas especificas de Control de calidad.
OBSERVACIONES: Para escribir más información sobre el análisis de la muestra.
REALIZO: Escribir la rubrica o poner el sello de las personas que llena la bitácora.
Al finalizar el llenado de la bitácora el personal de Serología debe incluir el siguiente
sello con la información que se le solicita para cada Enfermedad que fue analizada.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-26
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REGISTROS
La Bitácora de resultados de Serologia CAL-13-A se guarda durante 1 año en
archivo activo y 1 año en archivo muerto.
Laboratorista:
____________________________________
Laboratorista:
____________________________________
Laboratorista:
____________________________________
Suplentes:
____________________________________
Suplentes:
____________________________________
Suplentes:
____________________________________
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-27
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 122 de 6
Procedimiento de almacenamiento de los
productos obtenidos de la Sangre Total
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-27
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 123 de 6
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
15/08/03
Banco de Sangre
Código: CAL-27
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 124 de 6
Una vez que se ha llevado a cabo el fraccionamiento de la muestra (Ver
procedimiento CAL-21) y etiquetado se requiere guardar cada uno de los
productos de la siguiente manera para su adecuada conservación:
PRODUCTO
Concentrado de Eritrocitos
Concentrado de Eritrocitos leucorreducido prealmacenamiento
Concentrado de Eritrocitos lavados (con solución salina al 0.9%)
Concentrado de Plaquetas
Plasma fresco
Plasma envejecido
Crioprecipitado
TEMPERATURA
DE
CONSERVACION
+1 a +6 C
+1 a +6 C
+1 a +6 C
+20 a +24 C*
-18 C o menor **
-18 C o menor **
-18 C o menor **
Es recomendable irradiar las unidades de sangre y componentes sanguíneos
celulares, con una dosis mínima de 1,500 cGy (1,500 rads) para reducir el riesgo
de enfermedades injerto contra huésped, en los receptores que se encuentren en
los casos siguientes:
a) Fetos receptores de transfusiones intrauterinas;
b) Exsanguineotransfusión en prematuros y en recién nacidos de peso
corporal inferior a 1,000g;
c) Pacientes seleccionados inmunocomprometidos;
d) Receptores que han sido sometidos a trasplante de médula ósea;
e) Receptores de unidades provenientes de familiares consanguíneos de
primer grado.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-27
ISBN: 978-968-9170-17-4
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La sangre o componentes celulares irradiados puede ser aplicados a receptores
inmunológicamente normales. Los CE irradiados después de 5 días se deben de
lavar.
La temperatura de los refrigeradores, congeladores e incubadoras que almacenan
sangre, componentes sanguíneos, muestras o reactivos, se deberán registrar
cuando menos cada ocho horas, aunque tengan graficador automático y un
sistema de alarma audible. Los equipos sin indicador de temperatura, deberán
tener en su interior un termómetro, en caso de refrigeradores y de utilizarse
termómetros de laboratorio, el bulbo de éste deberá estar sumergido en glicerina
al 10% y, tratándose de congeladores, en glicerina al 50%.
La vigencia máxima del Concentrado de Eritrocitos y Concentrado de Eritrocitos
pobre en leucocitos a partir de la recolección depende del sistema y del
anticoagulante:
Para sistemas cerrados son:
ANTICOAGULANTE
Heparina
ACD
CPD
CPDA-1
ACD-SAGMANITOL
CPDA-MANITOL
VIGENCIA MAXIMA
2 días
21 días
21 días
35 días
42 días
45 días
Para sistemas abiertos, bajo condiciones de esterilidad (dentro de la campana
de flujo laminar), la vigencia máxima será de 24 hrs conservándose entre +1 y
+6 C y de 4hrs. si se conserva entre +20 y +24 C (Las unidades que se
conservan en congelación mantienen el periodo de vigencia según el
producto):
La vigencia máxima del Concentrado de Eritrocitos lavados a partir de la
recolección es de 4 hrs, a partir de su preparación.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-27
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 126 de 6
Las plaquetas por fraccionamiento y por Aféresis podrán conservarse durante 5
días a +20 y +24 C y agitación constante.
El Plasma Fresco Congelado, el Plasma sin Factor tiene una duración de 1 año
a –35° C
El Plasma envejecido tiene una duración de 1 años a –18 C y entre +1 y +6 C
de 26 días (con ACD o con CPD); 40 días (con CPDA ) 12 meses.
El Plasma fresco tiene una duración de 12 hrs, una vez descongelado.
El Crioprecipitado a –18 C o menor tiene una duración de 1 año y de 6 hrs,
una vez descongelado.
**El factor VIII de la coagulación que contiene el crioprecipitado se preserva
mejor cuando el plasma fresco y crioprecipitado se conservan a temperatura de
–30 C o menores.
Los productos se acomodan por grupo, y orden numérico, del menor al mayor, de
derecha a izquierda y del frente hacia atrás
REGISTROS
Los Registro de temperaturas se guardan durante 5 años en archivo activo y 5
años en archivo muerto.
Químico:
__________________________
Químico:
__________________________
Químico:
__________________________
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-27
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 127 de 6
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Técnico laboratorista:
__________________________
__________________________
Auxiliar laboratorista:
__________________________
Auxiliar laboratorista:
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
CAL-02-B
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-28
Fecha: 26 JULIO 2006
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 129 de 7
Procedimiento de recepción y entrega
de los productos en el laboratorio
CAMBIO
1.
CAL-02-B
Se modifica titulo del
procedimiento.
2.
REVISIÓN
FECHA
0
15/08/03
Banco de Sangre
Código: CAL-28
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 130 de 7
La solicitud y la entrega de los diferentes productos se realiza de la siguiente
manera:
El formato A-13-14-07 es llenado por el Médico tratante que solicita el producto y
se muestra a continuación:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-28
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 131 de 7
El formato A-13-14-07 es llenado por el Químico, Laboratorista, Técnico del
Laboratorio, (ocasionalmente el Médico) del Banco de Sangre que recibe, procesa
y asigna el producto solicitado:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-28
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 132 de 7
El formato M-3-0-21 es llenado por el Médico tratante que solicita el producto y se
muestra a continuación:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-28
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 133 de 7
La bitácora CAL-28-A es llenada por el Médico tratante, enfermera, solicitante o
mensajero que pide el producto, por su tamaño no se muestra.
La bitácora CAL-28-B se llena de la siguiente manera:
Fecha:
Día, mes y año en que se realiza lo solicitado
Registro de la unidad:
# que se indica como Unidad en el paquete o # de
frascos que se entregan.
Nombre del donador:
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del
donador.
Producto:
Tipo de producto que se solicito (CP, CE, PFC,
Albúmina, Factor VIII y IX.
Grupo sanguíneo:
Tipo de sangre del donador (A, B, AB u O) y
Factor Rh.
Volumen que contiene
la bolsa del producto:
Quien realiza el estudio:
Compatibilidad:
# de entrada:
Cantidad en unidades o mililitros que contiene
la bolsa
Personal del área de Inmunohematologia que
realiza el estudio o la separación del producto, etc.
El resultado que dio la prueba de compatibilidad
# consecutivo solicitud el producto.
Registro del paciente:
# que fue designado por la institución en su
credencial de afiliado.
Nombre del paciente:
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del
paciente
Grupo sanguíneo:
CAL-02-B
Tipo de sangre del donador (A, B, AB u O) y Factor
Rh.
Banco de Sangre
Código: CAL-28
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Servicio al que pertenece:
Cama:
Fecha:
Hora:
Volumen:
Nombre:
Nombre:
# de egreso:
Área o servicio que solicito el producto.
# de cama donde se encuentra el paciente.
Día, mes y año en que se egresa el producto.
Hora de egreso del producto.
Cantidad que se le entrega de producto.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s),
clave o sello personal de la enfermera o mensajero
que recibe el producto.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s),
clave o sello personal del Laboratorista, Químico,
Técnico que entrega el producto.
# consecutivo de entrega el producto (con la letra
asignada según el turno).
REGISTROS
La bitácora CAL-28-A se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el
archivo muerto.
La bitácora CAL-28-B se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el
archivo muerto.
El formato A-13-14-07 se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el
archivo muerto.
El formato M-3-0-21 se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el
archivo muerto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-28
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 135 de 7
Químico:
__________________________
Químico:
__________________________
Químico:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
Laboratorista:
__________________________
__________________________
__________________________
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
Suplentes:
__________________________
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-30
Fecha: 10 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento para valoración de venas y somatometría
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: IRMA GUTIERREZ Nombre: DRA. MARGARITA Nombre: DRA. DINORA
LETICIA MEDINA MACIAS
AGUILAR ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 27 JUNIO 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-30
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 137 de 8
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se agrega el sistema informático de
banco de sangre y el sistema Kanban
1
10/06/2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-30
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Una vez que el donador ha sido registrado (Ver procedimiento CAL-20) se procede
de la siguiente manera
La Enfermera toma del Kanban ubicado en el área de recepción la
ficha de identificación del donador M-3-0-23 ó M-3-0-10-a (Historia
clínica en proceso manual) con número de control interno de
ingreso a recepción
De la ficha de identificación del donador M-3-0-23 observa el
nombre completo del candidato a donador, lo llama y le indica que
pase a la sala donde se le realizará la valoración de sus venas y
somatrometría
La enfermera solicita al candidato a donador se suba a la báscula
para tener su peso, pregunta su estatura o lo mide y los registra en
la parte inferior del formato M-3-0-23 ó M-3-0-10-a si es manual
Pide descubra y extienda ambos brazos para valorar sus venas e
indicar con una M el sitio de toma de muestra
si
¿El donador tiene mala
calidad de venas?
no
Pregunta y revisa si tiene algún dibujo, herida o tatuaje (menos de 1 año de
realizado) NOM 003-SSA2-1993
si
El donador presenta alguna
herida o tatuaje
no
Se toma temperatura tensión Arterial (TA), Frecuencia Respiratoria
(FR), Frecuencia Cardiaca (FC)
Se registran los resultados en la parte inferior de el formato M-3-0-10-a ó en la
Historia clínica M-3-0-10-b inciso L, cuando es proceso manual y firma de
responsable.
Observa si los valores se encuentran dentro de los límites establecidos
por la especificaciones indicada en la norma NOM-003-SSA2-1993,
ingresa estos datos al sistema informático de banco de sangre
no
Valores OK?
si
Deja en el Kanban del área de toma de muestras la ficha de
identificación con formato M-3-0-23, y la historia Clínica con
formato M-3-0-10 sólo en proceso manual, para continuar con la
Valoración médica (Ver Procedimiento CAL-40)
CAL-02-B
Se descarta al
candidato como
donador
y se avisa a Trabajo
social y al Médico
para que le indique
la causa del
rechazo, el médico
la anota en ficha de
Identificación con
formato M-3-0-23.
Médico pasa a
Trabajo social la
ficha de
Identificación con
formato M-3-0-23.
para que haga
evaluación social y/
o reprogramación
de cita
Banco de Sangre
Código: CAL-30
ISBN: 978-968-9170-17-4
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La Ficha de Identificación del donante (M-0-3-0-23) en donde se registran los
datos de enfermería se encuentra en la parte inferior en donde dice uso exclusivo
de enfermería y se muestra a continuación:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-30
ISBN: 978-968-9170-17-4
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La ficha de identificación del donador (M-3-0-23) cuando el sistema es manual se
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-30
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Cuando el procedimiento es manual se registra en La Historia clínica de
candidatos a donación M-3-0-10-b inciso L) EXPLORACION FISICA y se muestra
a continuación.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-30
ISBN: 978-968-9170-17-4
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En el formato electrónico de historia clínica, se registran los datos de
somatometría por el personal de enfermería y se muestra a continuación:
El formato M-3-0-10-b se inciso L) EXPLORACION FISICA y el formato M-3-0-23
se llenan de la siguiente manera:
Peso:
Talla:
FC:
CAL-02-B
Cantidad en Kg que pesa el candidato a donar.
La estatura que indica el candidato.
Frecuencia Cardiaca (Latidos por minuto) que presenta el
candidato.
Banco de Sangre
Código: CAL-30
ISBN: 978-968-9170-17-4
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FR:
T/A:
Temperatura:
Frecuencia Respiratoria (Respiraciones por minuto) que
presenta el candidato (puede tomar la mitad del tiempo y
calcularlo).
Tensión Arterial que presenta el candidato.
Temperatura que indica el termómetro colocado debajo del
brazo izquierdo del candidato
Nota: El formato M-3-0-23 debe estar lleno previamente por la recepcionista con
los datos generales y el consentimiento informado firmado por el donador
(Ver procedimiento CAL-20). En caso manual los candidatos a donar
llenarán la ficha de identificación y la recepcionista revisará que los datos
estén completos.
REGISTROS
M-3-0-23 Ficha de identificación del donante apto se debe almacenar en el archivo
activo durante 5 años y en el archivo muerto 5 años. (NOM-003-SSA2-1993).
Cuando es rechazado se almacena su registro por 3 meses (NOM-003-SSA21993).
Sistema informático de banco de sangre.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-01
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se modifica el flujo grama del proceso
que se lleva a cabo en el Banco de
Sangre
03
16 ENERO 2012
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-01
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Banco de sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo, la selección
de los candidatos a donación, y posteriormente el procesamiento de la sangre bajo los
estándares de calidad aplicables.
El flujo grama de la operación que se lleva a cabo es el siguiente:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-01
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CITA PARA DONACIÓN (CAL-11)
REGISTRO de los donadores (CAL20)
VALORACIÓN DE VENAS Y
SOMATOMETRÍA ( CAL-30)
TOMA MUESTRA ( CAL-43)
VALORACIÓN MÉDICA (CAL-40)
EXTRACCIÓN DE
SANGRE,
(Flebotomía CAL-46)
EXTRACCIÓN DE
SANGRE,
(Aféresis CAL-50)
EXTRACCIÓN DE
SANGRE,
(RCSP CAL-52)
LIBERACION:
DETERMINACION DE
GRUPO SANGUINEO Y
ANTICUERPOS (CAL-25)
SEROLOGIA (CAL-26)
NAT (CAL-71)
LIBERACION:
DETERMINACION DE
GRUPO SANGUINEO Y
ANTICUERPOS (CAL-25)
SEROLOGIA (CAL-26)
NAT (CAL-71)
LIBERACION:
DETERMINACION DE GRUPO
SANGUINEO Y ANTICUERPOS
(CAL-25)
SEROLOGIA (CAL-26)
ALMACENAMIENTO
(CAL-27)
ALMACENAMIENTO
(CAL-27)
ENTREGA DE
COMPROBA
NTE
(CAL-31)
FRACCIONAMIENTO
(CAL-21)
CRIOPRESERVACION
(CAL-77)
PRUEBAS DE
COMPATIBILIDAD (CAL-31)
ENTREGA DE PRODUCTOS
(CAL-28 )
CAL-02-B
CUANTIFICACION Y
VIABILIDAD CELULAR
(CAL-66)
Banco de Sangre
Código: CAL-01
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Para cada proceso del diagrama anterior, existen procedimientos documentados que
describen la forma de llevarlos a cabo (Ver lista maestra de documentos CAL-02-A)
REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-04
Fecha: 3 de Nov de 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de control de sangre recibida
de otros hospitales
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-04
ISBN: 978-968-9170-17-4
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de otros hospitales
CAMBIO
ninguno
CAL-02-B
REVISIÓN
00
FECHA
03/11/03
Banco de Sangre
Código: CAL-04
ISBN: 978-968-9170-17-4
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de otros hospitales
La trabajadora social ó el personal del laboratorio del Banco de Sangre del INP,
solicita vía telefónica a otro banco de sangre los hemocomponentes que se
necesiten de acuerdo a la valoración por el médico adscrito o el jefe del servicio.
Una vez que se consigue el apoyo de alguna institución, se elabora el formato
F-A-14-29 (original y 2 copias), y se solicita al Servicio de Ambulancias que traiga
los hemocomponentes.
El personal del Banco del INP (Inmunohematología) entrega un recipiente
adecuado para traslado de los hemocomponentes, así como el formato F-A-14-29
al personal de ambulancias.
El personal de ambulancias recoge los hemocomponentes en el banco de sangre
de la institución otorgante, entregando el original y copia del formato F-A-14-29,
el banco de sangre externo sella el acuse y entrega relación del producto o
productos solicitados con el certificado de serología negativa.
El personal del Banco de Sangre del INP recibe los hemocomponentes junto con
una copia del formato F-A-14-29 revisa que los hemocomponentes traigan todos
los datos requeridos como son:







Nombre del donador
Registro
Grupo Rh
Fecha de extracción
Fecha de caducidad
Volumen
Evidencia de serología negativa
El personal del laboratorio verifica el estado físico del producto recibido para
determinar si éste se acepta o no (rechazando productos que no estén con una
temperatura adecuada de transportación, hemolizados, lipémicos, el volumen
debe corresponder al indicado en la etiqueta de la bolsa y debe traer una muestra
piloto para realizar las pruebas serológicas aplicables).
Si el producto cumple con los requisitos, se acepta, en caso contrario se regresa.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-04
ISBN: 978-968-9170-17-4
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de otros hospitales
En caso de aceptación se da ingreso en la Libreta de Ingresos y Egresos del
Banco de Sangre del INP registrando la serologia y se toma la muestra piloto para
realizar pruebas serológicas.
El formato F-A-14-29 se muestra a continuación, (La copia se entrega al personal
administrativo para que lo archive).
Insurgentes Sur 3700-C
BANCO DE SANGRE
Solicitud de: PRODUCTOS SANGUINEOS
México, D.F., a ____de ______________ de ______.
Folio:____________
C. Dr. (a) __________________________.
Director o Jefe del Banco de Sangre Del
__________________________________
P R E S E N T E ,
Por este medio me permito solicitar a ustedes los siguientes productos:
O
SANGRE TOTAL
PAQUETE GLOBULAR
PLASMA FRESCO CONGELADO
PLASMA RICO EN PLAQUETAS
CONCENTRADOS PLAQUETARIOS
GLOBULINA ANTIHEMOFÍLICA
A
B
AB
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
POSITIVO
NEGATIVO
OTRAS SOLICITUDES:
Agradeciendo de antemano su atención, aprovecho este para enviarle un cordial
saludo.
A T E N T A M E N T E
JEFE DEL BANCO DE SANGRE
c.c.p. Banco de Sangre
F-A-14-29
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-04
ISBN: 978-968-9170-17-4
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de otros hospitales
REGISTROS
El formato F-A-14-29 se almacena por cinco años pasados los cuales se puede
desechar.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
Fecha: 12 enero 2012
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Procedimiento de citas para donación
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: LIC. TS ANA
MARÍA DORANTES CEH
Nombre: DRA. MARGARITA
LETICIA MEDINA MACÍAS
Dra. DINORA AGUILAR
ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 12 Enero 2012
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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CAMBIO
1.- Se puntualizan los 3 tipos de cita.
2.- Se modifica el tiempo de tolerancia
en las citas para donar sangre en
concordancia con el folleto.
3.Se
puntualizan
algunas
excepciones de las personas que no
pueden donar que no incluye el folleto
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
05
12 Enero 2012
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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El Personal de Trabajo Social del Banco de sangre del Instituto Nacional de
Pediatría lleva a cabo el siguiente proceso para proporcionar una cita para
DONACION a las personas que lo soliciten en base a los siguientes lineamientos:
1.- Horarios para programación de cita para donación: Se programaran las citas a
los familiares de los pacientes que acuden al Banco de Sangre en los siguientes
horarios: 11:30 am y 12:30 pm.
2.- Se otorgaran 200 minutos de tolerancia para recibir familiares de pacientes a
programación de citas.
3.- A su ingreso al Banco de Sangre el vigilante otorgará una ficha numerada para
establecer el orden de ingreso.
4.- La trabajadora social asignada al área de selección de disponentes atenderá a
los familiares por grupos según el horario de ingreso al Banco de Sangre y les
impartirá una plática de orientación y sensibilización para la donación de sangre.
5.- El contenido de la plática impartida por la trabajadora social es el siguiente:
5.1 Presentación
5.2 Documentos necesarios para solicitar cita.
5.3 Importancia de la donación de sangre segura.
5.4 Promoción de la donación altruista
5.5 Documentos que necesita tener el donador el día de su cita.
5.6 Características físicas y de salud que debe reunir el candidato a donador.
Se exceptúan a las personas sordomudas o que hablen un dialecto ya que implica
dificultad para la comunicación con el personal que presta la atención y esto afecta
la confiabilidad de los resultados.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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5.7 Beneficios de donar sangre (estudios de laboratorio como grupo sanguíneo y
serología, un examen médico).
5.8 Donación de sangre y/o aféresis
5.9 Programación de citas
La Trabajadora social solicita la Hoja de Hospitalización u orden de
cirugía (Ver tabla A )
Llena el folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre ? Con los
datos de la solicitud de donación
y anota en la bitácora de citas CAL-11-A los datos solicitados
ocupando el # de espacios de citas de donadores que les corresponda
cubrir.
En base a la situación social del paciente asigna el día de la cita ,
considerando diagnóstico y servicio donde se atiende al paciente . En
el Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría se manejan
tres tipos de citas: CITA ABIERTA, CITA PROGRAMADA y CITA
PROGRAMADA DE URGENCIA (Ver abajo descripción de cada tipo
de cita.
Verifica con el solicitante los datos del paciente registrados en el
folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre ? , confirma la cita
para la donación y le indica leer el folleto Información importante para
la donación sanguínea (Ver procedimiento
CAL-20) para conocer los requisitos para ser donador .
Le recuerda que debe traer los folletos el día de la donación , además
de su identificación personal con fotografía y vigente .
FIN
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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TIPOS DE CITAS
En el Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría se manejan tres
tipos de citas:
 CITA ABIERTA. Trabajo Social asigna a familiares de pacientes con base en
los siguientes criterios:
a. Pacientes foráneos
b. Diferimiento o rechazo en más de una ocasión de donadores
c. Sin redes de apoyo
El plazo para traer a sus donadores no será mayor a dos semanas.
 CITA PROGRAMADA (Cita que Trabajo Social asigna con una fecha y hora
determinada).
 CITA PROGRAMADA URGENTE. Se solicitan más donaciones de acuerdo a
los requerimientos del paciente, a pesar de haber cumplido con las dos
donaciones. Deberán acudir a la brevedad posible (plazo no mayor a una
semana) ya que se requieren de forma inmediata para cubrir las necesidades
transfusionales del paciente.
MANEJO DE PRÓRROGAS
Trabajo Social del Departamento de Banco de Sangre proporciona prórrogas a los
familiares de los pacientes cuando:
1. Se adelanta fecha de cirugía.
2. Se da a los familiares fecha inmediata para la cirugía del paciente (en las
siguientes 24 hrs.)
MANEJO DE CONDONACIONES
Ver procedimiento CAL-63 para manejo de condonaciones por el Banco de
Sangre
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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IMÁGENES DE FORMATOS RELACIONADOS CON ESTE PROCEDIMIENTO
El Folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre?
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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Información importante para la donación sanguínea” También es entregada al
donador, y se muestra a continuación:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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Tabla A. Donadores solicitados.
SERVICIO EN QUE SE ATIENDE
AL PACIENTE
Cirugía ambulatoria
Cateterismo cardiaco
Cirugía cardiovascular
Estancia en áreas críticas
Cirugía programada
Hospitalización
Transplante de Células
Progenitoras Hematopoyéticas
NO DE DONADORES
SOLICITADOS
1
1
4 ó más
2 ó más
2
2
10 ó más
Cirugía ambulatoria y cateterismo cardiaco: Se solicita una donación de
sangre, esta se debe de realizar antes de la cirugía o el mismo día dependiendo
el caso. SOLO EN ESTE CASO TRABAJO SOCIAL DEL BANCO DE SANGRE
DA PRORROGAS PARA QUE SE CUBRA POSTERIORMENTE LA DONACIÓN,
en caso de que la cirugía o cateterismo se haya realizado de manera urgente y se
solicita realizar la donación un tiempo no mayor a una semana.
Cirugía cardiovascular: Cirugía cardiovascular requiere 3 donadores de sangre 1
de plaquetas el día de la cirugía, en caso necesario se solicita un mayor número
de donadores según los requerimientos del paciente.
Estancia en áreas críticas (Urgencias, Terapia Intensiva), Cirugía
programada, Hospitalización: Se solicitan dos donaciones de sangre, con
variaciones de acuerdo a los requerimientos del paciente.
Trasplante de células progenitoras hematopoyéticas: Se solicitan 10
donadores de plaquetas aptos quienes iniciarán el proceso de donación antes del
trasplante y se programan de acuerdo a las necesidades del paciente y puede
haber modificaciones de acuerdo a los requerimientos transfusionales del
paciente.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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El folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre? se debe llenar de la
siguiente manera:
DATOS DEL PACIENTE PROPORCIONADOS POR EL
DONADOR:
Número de expediente:
Servicio:
Nombre completo del paciente para el que va a
realizar la donación
Número de Expediente asignado por el INP
(equivale al # de registro).
Especialidad en la que se esta tratando el
paciente.
# de cama en que se encuentra el paciente
hospitalizado para quien se solicita la donación
Cama:
PARA USO EXCLUSIVO DEL BANCO DE SANGRE:
Número de donadores:
Fecha de la donación:
Hora de la cita:
Número de donadores que se solicitan según sea
el caso (Ver tabla A)
Fecha de la cita para asistir a la donación
Hora de la cita para la donación
La Bitácora de citas CAL-11-A contiene lo siguiente:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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BITÁCORA DE CITAS
CAL-11-A
Fecha:
No./Hora
Nombre
Registro Servicio
#de
Fecha
donadores
Observaciones
La Bitácora de citas CAL-11-A se llena de la siguiente manera:
Fecha:
No. / Hora:
Nombre:
Registro:
Servicio:
# De donadores:
Fecha:
Observaciones:
CAL-02-B
Día, mes y año en que está citado el candidato a donador.
# consecutivo del día y hora de su cita.
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente.
# de registro del paciente asignado por el INP.
Especialidad donde se encuentra el paciente.
# de donadores solicitados.
Día y mes en que se da la cita.
Cualquier observación que se considere relevante.
Banco de Sangre
Código: CAL-11
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REGISTROS
Bitácora CAL-11-A (Libreta programación de citas) se almacena en el archivo del
área de recepción durante 1 año.
Bitácora CAL-20-A (Registro de donadores) se almacena 3 meses después de que
completa el llenado de todas sus hojas.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de Entrega de resultados
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Dr. Ismael Hernández
Montiel
T.S. Ana María Dorantes
Ceh
Nombre:
Dra. Margarita Leticia
Medina Macías
Nombre:
Dra. Dinora V. Aguilar
Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAMBIO
Se establece el mismo tiempo de
entrega de resultados después de la
donación de sangre y de aféresis
Se actualiza el formato electrónico de
entrega de resultados
Se cambia plazo de almacenamiento
en archivo activo y muerto de la
Bitácora CAL-13-A
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
3
10/01/2012
3
10/01/2012
3
10/01/2012
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Una vez que al donador se le ha realizado el Sangrado o el Procedimiento de
Aféresis (Ver Procedimiento CAL-46 o CAL-50) se le informa que podrá recoger
los resultados del análisis de la muestra personalmente a los 8 días posteriores a
la donación. El día de entrega de resultados se procede de la siguiente manera:
La recepcionisa solicita identificación y fecha en que realizó donación de sangre (verifica que
coincida la fotografía de la identificación , con la persona presente) y le pide que se registre en
la bitacora de entrega de resultados CAL -13-A
En el sistema de cómputo, la recepcionista ingresa apellidos para localizar Resultados de
Serología (siempre que sean negativos), imprime los resultados, y sube con el químico para
que los avale con su firma.
De manera manual, La recepcionista, sube al laboratorio para copiar los datos de la libreta de
Serología (siempre que sean negativos) al formato F-A-14-07; Procede a transcribirlos a
máquina para que el químico los avale con su firma .
SI
La serología es
positiva?
La recepcionista detecta serología positiva en
el sistema de cómputo o en la libreta de
Serología, e informa al médico responsible y
al químico de laboratorio
NO
La recepcionista entrega resultados por escrito al donador .
El donador firma de recibido en la bitacora de resultados
CAL-13-A
FIN
Químico informa al médico
responsible de SeroPositivos
Médico le solicita a Trabajo Social que localice al donador
Trabajo social trata de localizar vía telefónica al donador para
informarle la necesidad de una 2da. muestra para completar
estudios (se realizan 3 llamadas en un lapso de 1 mes para
tratar de localizar al donador en caso de no ser posible se
canaliza el caso al Servicio de Epidemiología )
Cuando el donador acude a 2da. Muestra por haber
obtenido un resultado REACTIVO de su muestra
El médico habla con el donador para comentar que se requiere
otra muestra de su sangre para completar estudios , se toma
2da, muestra y se da “Cita en una semana para entregar
Resultados”
En laboratorio se realiza la prueba de ELISA
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REACTIVO
El resultado
puede ser
NEGATIVO
Se realiza prueba confirmatoria
de la cual podemos obtener los
siguientes resultados
Resultado
INDETERMINADO
Resultado
NEGATIVO
Resultado
POSITIVO
Médico reporta como
indeterminado, da cita en
tres meses para otra
muestra, se da seguimiento
durante un año
Brucella, chagas,
VHC, VDRL, VHB
VIH
Médico notifica y explica
posibles causas
Médico entrega resultados y
refiere al donador a
Epidemiología para que lo
canalice a donde reciba
atención.
Médico refiere al donador a
psicología para que sea
sensibilizado, y el psicológo
informa al médico cuando
considera que el donador
puede recibir la noticia.
FIN
El médico en
compañía del
psicologo notifica el
diagnóstico
FIN
Positivo:
Cuando el análisis de la Prueba de rutina o tamizaje realizada a la 2da muestra
es REACTIVA y la Prueba confirmatoria se encuentra dentro de los rangos
considerados como POSITIVO, la muestra se determina como POSITIVA.
Negativa:
Cuando el análisis de la Prueba de rutina o tamizaje realizada a la 1era muestra
es NEGATIVA dentro de los rangos considerados, la muestra se determina como
NEGATIVA.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Indeterminada:
Es cuando el resultado de la prueba No cumple con el 100% los criterios de
interpretación.
Opciones:
PRIMERA MUESTRA SEGUNDA MUESTRA CONFIRMATORIA
1era. Corrida: reactivo
2da Corrida: reactivo
(se corre tubo
primario y tubo piloto)
1era. Corrida: reactivo
2da Corrida: negativo
Reactiva
Positiva
Negativa
Indeterminada
RESULTADO DE LA
PRUEBA
Positiva
Negativo
Indeterminado (seguimiento
del donador)
Negativa
1era. Corrida:
negativo
Negativa
El formato de Entrega de Resultados F-A-14-07 se llena en la maquina de
escribir de la siguiente manera:
INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA
BANCO DE SANGRE
Resultado de los exámenes practicados al DONADOR:
Nombre:
Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s)
Número de Registro:
Número de la bitácora de egresos e ingresos.
Grupo (ABO):
Resultados obtenidos por medio del análisis de la
muestra
Resultados obtenidos por medio del análisis de la
muestra
Resultados obtenidos en serología.
FACTOR RH (D):
V.D.R.L.,
HUDDLESSON,
ANTIGENO
AUSTRALIA,
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 28 de 10
HEMOGLOBINA g.%
y HEMATOCRITO:
Resultados obtenidos del equipo automatizado de
biometría hemática.
OTROS:
Resultados de H.I.V.,CHAGAS
obtenidos en serología
México, D,F., a:
Fecha en que se solicita el comprobante de donación.
Clave,
Firma:
Nombre
y
HEPATITIS
C
y Del Jefe del Laboratorio o del químico responsable
La Hoja de entrega de resultados F-A-14-07 que se obtiene del sistema
informático de Banco de Sangre contiene lo siguiente:
BANCO DE SANGRE
Donante:
Donación:
Fenotipos:
Anticuerpos:
Hemoglobina
Hematocrito
Grupo
Rh
Hepatitis B
Nombre del donador
No. De Unidad, Fecha
Resultado obtenidos por medio de análisis de la muestra
Resultado obtenidos por medio de análisis de la muestra
RESULTADOS ANALÍTICOS
Resultados obtenidos en el equipo automatizado de
biometría hemática
Resultados obtenidos en el equipo automatizado de
biometría hemática
Resultados obtenido por medio del análisis de la
muestra del donador
muestra del donador
Resultados obtenidos en serología
Hepatitis C
HIV 1-2
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 29 de 10
Sífilis
Chagas
Brucella
NAT Hepatitis B
Resultados obtenidos en Biología Molecular
NAT Hepatitis C
NAT HIV
Proteínas Totales
muestra del donador
Nombre y firma del Jefe del Laboratorio o del químico
responsable
Nombre y firma del
personal de laboratorio
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 30 de 10
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 31 de 10
BITÁCORA DE ENTREGA DE RESULTADOS CAL-13-A
Fecha de
solicitud de
Resultados
Nombre del
Donador
Fecha de
Donación
NÚMERO
UNIDAD
Tipo de
Resultados
Se entregaron
Resultados
Firma de
Recibido
Persona que
entrega
OBSERVACIONES
Si:_____ No:____
Escritos
Causa: _________
Si:____ No:____
Verbales
Causa:_________
___
FORMA DE LLENAR LA BITÁCORA CAL-13-A:
Se anota la fecha en que acude el donador a
solicitar resultados
Fecha de solicitud
de Resultados
Nombre del
Donador
Nombre del donador
Fecha de
Donación
Fecha en que se realizó la donación
Se anota el número de unidad que se le asignó
NÚMERO UNIDAD
Escritos
Se entregaron
Resultados
Firma de Recibido
Persona que
entrega
OBSERVACIONES
Tipo de
resultados
Verbales
Si:____ No:___
Causa _______
Si __ No: ____
Causa:____
Se tacha el lugar que indique el tipo de resultados
entregados y la causa de este tipo de entrega de
resultados
Firma del donador de que recibió resultados
Nombre de quien integra resultados
Cualquier comentario acerca de si es reactivo,
acude a segunda muestra, o dato importante del
donador
Nota: La Recepcionista entrega los resultados al donador en caso de que todas
las pruebas serológicas sean negativas, de lo contrario el médico proporciona la
información y plan a seguir al donador.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-13
Fecha: 10-01-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 32 de 10
REGISTROS
La Bitácora de Resultados CAL-13-A se guarda durante 1 año en archivo activo y
5 años en archivo muerto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-14
Fecha: 7 Octubre 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 33 de 5
Procedimiento de Calibración del CELLDYN RUBY
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: Q.F.B. MARÍA
TERESA FLORES
CAMACHO
Nombre: M en C GUILLERMO Nombre: Dra. DINORA
ESCAMILLA GUERRERO
V. AGUILAR ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:07 Octubre 2009
Fecha:14 Octubre 2009
Fecha:
14 Octubre 2009
CAL-02-B
anco de Sangre
Código: CAL-14
Fecha: 7 Octubre de 2009
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 34 de 5
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se actualiza procedimiento porque se
cambió el equipo automatizado de
Biometría Hemática
2
7 Octubre de 2009
CAL-02-B
anco de Sangre
Código: CAL-14
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 35 de 5
Para poder realizar los análisis de la toma de muestra (Ver Procedimiento CAL16) se requiere haber realizado una calibración previa del equipo CELLDYN
RUBY para la que se procede de la siguiente manera:
CAL-02-B
anco de Sangre
Código: CAL-14
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 36 de 5
FLUJOGRAMA PARA PROCESO DE CONTROLES
CHECAR
NUMERO DE
LOTE Y
FECHA DE
CADUSIDAD
PONER LOS
TUBOS 15
MIN A
TEMPERATU
RA
AMBIENBTE
VERIFICAR
VALORES Y
CURVA DE LJ
INICIAR
ASPIRA
DO
ROTAR LOS
CONTROLE
S CON LA
MANO POR
20
SEGUNDOS
PONER
CONTROLES EN
EQUIPO EN
SISTEMA
ABIERTO
SELECSIONAN
DO EL NIVEL
DE CONTROL
SI
NO
PROC
ESAR
MUES
TRA
S
CAL-02-B
CHECAR
CONTROLES Y
REACTIVOS
INVERTIR
EL
CONTROL
Y ROTAR
POR 20
SEGUNDOS
INVERTIR
LOS
CONTROL
ES A LA
DERECHA
Y A LA
IZQUIERD
E CON LA
MABNO
POR 10
SEG
anco de Sangre
Código: CAL-14
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Las hojas de los resultados de la calibración se guardan en la carpeta CAL-14-A
La carpeta CAL-14-A se llena de la siguiente forma:
Fecha de calibración:
Día, mes y año en que se realizo la
calibración. (Impresa en la hoja de
resultados.
Control patrón de calibración usado: Indicar el lote y fecha de caducidad del
control patrón de calibración.
Persona que realiza la calibración:
Nombre completo o sello de la persona
que realiza la calibración.
Nota 1: La Calibración se debe realizar todos los días antes de analizar las
muestras.
Nota 2: La bitácora se debe encontrar en el área de toma de muestra para su
llenado.
Nota 3: El control patrón de calibración tiene una fecha de caducidad pasada la
cual se desecha y se cambia de control.
REGISTROS
La carpeta CAL-14-A se debe guardar durante al menos 1 año.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-15
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 38 de 3
Procedimiento de identificación de muestras
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
Fecha: 7 de Octubre 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 1 de 131
Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se asigna el número de bitácoras de
registro
1
7 de octubre 2003
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Banco de sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo los siguientes
procesos para proveer de sangre segura a los pacientes que la requieran:

















CAL-02-B
RECEPCION DE MUESTRAS
GRUPO SANGUINEO (Sistema ABO & Rh)
LECTINAS
FENOTIPO (Rh & FSABO)
COOMBS DIRECTO
RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES
(COOMBS INDIRECTO)
PRUEBA CRUZADA
o OPCIONES DE TRANSFUSION
 RN
 TABLA DE NOM
ALTGORITMOS:
o PRUEBA CRUZADA INCOMPATIBLE
o PRUEBA CRUZADA INCOMPLETA
o REACCION TRANSFUSIONAL
RPR / VDRL
DESPLASMATIZAR PLAQUETAS
LAVADO DE PAQUETES GLOBULARES
SANGRE RECONSTITUIDA
FILTRACION
CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS Y
CELULAS
ELUSION
o ELU KIT
o EGA KIT
ADSORCION
AGLUTININAS ANTI A & ANTI B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Los métodos para realizar ensayos de aglutinación son:
 Método semiautomático
Tubo
Gel
 Método automático
Gel
Las pruebas de aglutinación establecen:
 HEMOLISIS: Indica una reacción positiva para la
unión Antígeno – anticuerpo.
 AGLUTINACION: la presencia del par Antígeno y/o
Anticuerpo complementarios relevante.
 NO AGLUTINACIÓN la ausencia de cualquiera de
ellos.
INTERPRETACION Y PUNTUACION DE LAS AGLUTINACIONES
DESCRIPCION
GRADO PUNTUACION
Hemolísis total
Ht
Botón completo, sobrenadante claro
4+
12
Botón grande con algunos agregados, fondo claro
3+
10
Botón fragmentado en varios grumos grandes, fondo turbio
2+
8
Botón fragmentados en numerosos grumos regulares, fondo turbio
1+
5
Botón fragmentado múltiples grumos pequeños, fondo muy turbio
+/-
1
negativo
0
Aglutinación no visible
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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INTERPRETACION Y PONDERACIÓN DE LAS AGLUTINACIONES EN GEL
NEGATIVO
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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RECEPCION DE MUESTRAS
Una vez que el Médico, enfermera o mensajero lleva la muestra a la ventanilla del laboratorio, el PERSONAL DE BANCO DE SANGRE, revisa que las
muestras esten bien identificadas con el Nombre completo del paciente, registro, fecha y hora de toma de la misma; que la muestra sea la indicada
para el analisis solicitado y que la solicitud tenga todos los datos requeridos.
Discrepancia entre
membrete de tubo
con requisición
NO
Se retiene la muestra
y la solicitud se rotula
“MUESTRA MAL
ETIQUETADA”
Se solicita nueva
muestra
SI
NO
Menor cantidad de
la indicada
Se le indica al Médico, enfermera o mensajero que lleva la
muestra anote en la Bitácora de Registro CAL-031-A los datos
solicitados en el número consecutivo correspondiente. El
PERSONAL DE BANCO DE SANGRE, asigna el número
correspondiente a la entrada tomado de la Bitácora CAL-031-A
en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original y copia)
El PERSONAL DE BANCO DE
SANGRE procede a centrifugar la
muestra para trasvasar en tubos
membretados con los datos del
paciente, fecha y número de
requisición, el plasma o suero y el
paquete eritrocitario, para su
distribución, almacenamiento o
trabajo.
1.- DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO
La prueba consiste de dos etapas:
 Prueba directa o celular: eritrocitos problema
desafiados contra antisueros comerciales de
especificidad conocida
 Prueba inversa o sérica: suero problema desafiado
contra eritrocitos de fenotipo conocidos
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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PRUEBA DIRECTA
en tubo
Se realiza la centrifugación del tubo de muestra para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero.
Se rotula 2 tubos para la transferencia de suero y suspensión de eritrocitos (2-5%) con solucion salina amortiguada
Se realiza una prueba directa y una prueba complementaria llamada inversa
Para la prueba directa se requiere lo siguiente:
Marcar 4 tubos con los # del 1 al 3 y el cuarto con una T (testigo)
TUBO 1
Agregar una gota
de reactivo Anti-A
(suero de color
azul)
TUBO 2
Agregar una gota de
reactivo Anti-AB
(suero incoloro)
TUBO 3
Agregar una gota de
reactivo Anti-B
(suero de color
amarillo)
TUBO T
Agregar 2 gotas del
plasma o suero del
paciente
Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos del paciente a los cuatro tubos
Se introducen en la centrifuga durante 15 a 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Esta prueba se realiza
a temperatura ambiente
Se realiza un ligera agitación para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscópica para aglutinación (Ver tabla 1)
Registrar resultados en el / los formato A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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PRUEBA INVERSA en tubo
Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O
Células de fenotipo conocido preparadas a una concentración del 2-5%
TUBO A1
Agregar una gota de
celulas A1+ 2gotas del
plasma del paciente
TUBO A2
Agregar una gota de
celulas A2 + 2gotas del
plasma del paciente
TUBO B
Agregar una gota de
celulas B + 2gotas del
plasma del paciente
TUBO O
Agregar una gota de
celulas O + 2gotas del
plasma del paciente
Se introducen en la centrifuga durante 15-30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.
Se realiza una ligera agitación para resuspender las celulas
Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación (ver tabla 1)
Registrar resultados en los formatos A-13-14-07; FA-14-23; F-A-14-27
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Tabla 1
Prueba Directa
GRUPO SANGUINEO
ANTIGENOS PRESENTES EN LOS
ERITROCITOS
ANTICUERPOS PRESENTES EN
SUERO O PLASMA
A
A
Anti - B
B
AB
O
B
AyB
ni A ni B
Anti - A
----Anti – A & Anti - B
INTERPRETACION
GRUPO
A
B
AB
O
CAL-02-B
Prueba DIRECTA
Prueba INVERSA
Tubo con Antisuero
Tubo con céluas:
Anti-A
Anti-B
Anti-AB
POST
NEGT
POST
NEGT
NEGT
POST
POST
NEGT
POST
POST
POST
NEGT
Testigo
NEGT
NEGT
NEGT
NEGT
A1
A2
B
O
NEGT
POST
NEGT
POST
NEGAT
POST
NEGT
POST
POST
NEGT
NEGT
POST
NEGAT
NEGT
NEGT
NEGT
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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GRUPO SANGUINEO Sitema ABO/Rh EN GEL
con 25 l de concentrado eritrocitario del paciente (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)
Se realiza una prueba directa y una prueba complementaria llamada inversa
Empleo de tira del DianaGel Donors/Donantes
ver imagen
DIRECTA
MICROTUBOS
A, B, AB, D,D`
eritrocitos del PACIENTE
AUTOTESTIGO
TUBO Ctrl
colocar 25 l de eritrocitos del
donador y 50 l del suero o
plasma del PACIENTE
INVERSA
MICROTUBOS
A1; B
colocar 50 l de eritrocitos
reactivos (Serigrup Diana A1 y B)
PACIENTE
(ver imagen)
Leer
La lectura puede ser visual o en el DianaScanner
(ver imagen)
Interpretación
Registrar resultados en el formato F-A-14-26; F-A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-114-27
o mandar impresión
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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A1
B
REGISTRO:
# REQUISICION:
Fecha:
Clave de quien realizó:
S.ABO
CAL-02-B
S.Rho
AT
INVERSA
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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SUBGRUPOS DE “A”
Marcar 1 tubo con la letra A1 (Anti-A1) y otro con la letra H (Anti- H)
TUBO A1
Agregar 1 o 2 gotas del reactivo Anti-A1 Lectina
TUBO H
Agregar 2 gotas del reactivo Anti-H
Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos (2-5%) del PACIENTE A CADA TUBO
Se realiza una ligera agitación a cada uno de los tubos
Se realiza una ligera agitación a cada uno de los tubos
y se incuban durante 5 minutos aproximadamente a
temperatura ambiente.
Se introducen en la centrifuga durante 15-30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.
Se realiza un ligera agitación para resuspender los eritrocitos.
Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación
Registrar resultados en los formatos FA13-14-07; FA-14-23; F-A-14-27
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Tabla # 2 Subgrupo “A”
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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GRUPO SANGUIENO Rho en tubo
Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml de solución salina con
amortiguador con dos gotas de concentrado eritrocitario del PACIENTE
Marcar un tubo con la letra Rh (anti D) y otro con la letra C (control)
TUBO D
agregar una gota del
antisuero comercial
Anti - D
TUBO C
Agregar una gota del reactivo
Control Rh ó
ALB 22%
Agregar una gota de suspensión al 2-5% de eritrocitos del donador
Centrifugar 15-30 segundos, la revolución esta predeterminada
Leer resuspendiendo con movimiento suave el botón. Interpretación acorde a la aglutinación presente
NO AGLUTINACION
Rh neg (D-)
AGLUTINACION
Rh post (D+)
NO
AGLUTINACION
Registrar resultados en los formatos F-A-14-26; F-Q-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27
o mandar impresión
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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SI la prueba Anti-D es NEGATIVA
Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos a 37 C
Centrifugar e Interpretar
Positiva
Negativa
Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica, teniendo cuidado para resuspender las celulas por completo
Se decanta la salina por completo en la última lavada
Agregar una gota de suero de Coombs poliespecífico (anti IgG-C3d)
Centrifugar e interpretar
Positiva
VALIDAR TECNICA CON CELULAS
SENSIBILIZADAS
Negativa
El resultado
se considera
Rh+ ( D+)
El resultado
se considera
Rh- y Du+
( para fines de
transfusión se
considera :
donadores Rh+
receptores Rh-
Rh - (D-)
Registrar resultados en los formatos: F-A-13-14-07; F-A14-23; F-A-14-27
La determinación del grupo ABO en la
tarjeta de Gel conlleva la determinación del anti D y su especie el Du
Los resultados de Rh negativo en gel se confirman al desafiarlos con el Anti
D Totem (anticuerpo policlonal dirigido contra las 6 fracciones del Antígeno
D: I – VI)
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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FENOTIPOS Rh
Hacer un suspensión de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra)
Añadir 25 microlitros de la suspensión de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e
(Ver imagen)
Centrifugar en DianaFuge y leer manual o en el Diana scanner (Tabla 3A, 3B, 3C)
Registrar los resultados en los formatos F-A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27
Interpretación de fenotipo Rh
Fecha:
realizó
Fenotipo: CcE
CAL-02-B
Fecha:
realizó
Fenotipo: CEe
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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FORMATO F- A – 14 – 23
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Tabla 2
Fenotipo Rh
REACCION SEROLOGICA ANTI
FENOTIPOS
GENOTIPO
D
C
c
E
e
WIENER
FISHER
DCe/dce
+
+
+
-
+
R1r
DCcee
DCe/DCe
+
+
-
-
+
R1R1
DCCee
DcE/dce
+
-
+
+
+
R2r
DccEe
DcE/DcE
+
-
+
+
-
R2R2
DccEE
DCe/DcE
+
+
+
+
+
R1R2
DCcEe
dce/dce
-
-
+
-
+
rr
ddccee
Dce/dce
+
-
+
-
+
R0r
Dccee
dCe/dce
-
+
+
-
+
r'r
ddccee
dCe/dCe
-
+
-
-
+
r'r'
ddccee
dcE/dce
-
-
+
+
+
r" r
ddccee
dce/dcE
-
-
+
+
-
r" r "
ddccEE
dCe/dcE
-
++
+
+
+
r' r"
ddCcEe
DCe/DCE
+
+
-
+
+
R1RZ
DCCEe
DcE/DCE
+
+
+
+
-
R2RZ
DCcEE
DCE/DCE
+
+
-
+
-
RZRZ
DCCEE
dCE/dCe
-
+
-
+
+
r y y'
ddCCEe
dCE/dcE
-
+
+
+
-
r y r"
ddCcEE
dCE/dCE
-
+
-
+
-
ryry
ddCCEE
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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COOMBS INDIRECTO O RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES
PANEL CASERO se les adiciona 5 microlitros de las células panel + 500 microlitros de la solución Diana sol 2
(suspensión al 1%) y se homogenizan. EL PANEL COMERCIAL SE ADICIONA DIRECTAMENTE
Se le realizan de 3 a 5 lavados al tubo que contiene los eritrocitos de la muestra problema.
Se identifica la tarjeta de Diana Gel Coombs con los # del 1 al 10 y el AT (testigo) y se toma una alicuota de 50
microlitros de cada tubo y se depositan en su respectivo microtubo + 25 microlitros del suero de la muestra problema
Al microtubo marcado con la letra AT se le adiciona 50microlitros de la suspensión de eritrocitos problema
previamente lavadas + 25 microlitros del suero problema.
Se incuba en el equipo Diana Incubador a 37°C / 15min., transcurrido el tiempo se centrifuga en Diana Fuge y se
interpretan los resultados con la CARTA PANEL CORRESPONDIENTE.
RESULTADO es NEGATIVO: Se indica al reportar que los Anticuerpos irregulares FSABO.
RESULTADO es POSITIVO: Se reporta como POSITIVO & ANTICUERPO DETECTADO CON PROBABLE
ESPECIFICIDAD:…..
Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitácota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el
formato F-A-14-23 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al
Médico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de
recibido en la Bitácora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Y la siguiente reacción en tarjeta con el PANEL TRIO:
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:
Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 3 y un T( testigo) Las células se preparan empleando 5 l de eritrocitos con 0.5 ml de solución Diana 2
MICROTUBO 1
Anadir 50 l de
Gamma Trio 1
MICROTUBO 2
Anadir 50 l de
Gamma Trio 2
MICROTUBO 3
Anadir 50 l de
Gamma Trio 3
MICROTUBO 1
Anadir 25 l de plasma del PACIENTE
Si es positivo se debe realizar el panel completo
CAL-02-B
MICROTUBO T
Anadir 50 l de
eritrocitos del
PACIENTE
Banco de Sangre
Código: CAL-31
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Tabla 3
CARTA PANEL TRIO
Escanear imagen de carta panel del:
TABLA 4
CARTA PANEL DIANA
 CARTA PANEL DE SIGLO XXI
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COOMBS DIRECTO EN TUBO
El concentrado eritrocitario se toma una alicuota y se realiza una suspensión al 2-5%, a la cual se le realizan 3
lavados minimo con solución de cloruro de sodio al 0.9% (SSI), en cada lavado se centrifuga. se decanta y se repite el
proceso de lavado.
Una vez que se realizarón los lavados se decanta el exceso de solución y se adiciona SSI para obtener una solución
al 5%.
AGREGAR 1 GOTA DE LA DILUCION DE ERITROCITOS DEL PACIENTE Y 2 GOTAS DE SUERO DE COOMBS
Se centrifugan los tubos y se leen anotando el resultado en el formato F-A-14-27 donde indica 22 °C en su respectiva
dilución,
Si el RESULTADO es POSITIVO se titula (diluyendo el suero de Coombs en forma doble seriada,)se reporta en los
formatos A-13-14-07 y F-A-14-27 POSITIVO y la dilución
Si el RESULTADO es NEGATIVO si la técnica fue realizada en tubo se continua con el llamado CAGHs (consumo de
antiglobulina humana) es la prueba que se realiza para corroborar que se haya realizado bien la técnica anterior.
Para realizar el CAGHs se adiciona una gota de células sensibilizadas a todos los tubos, se mezclan y centrifugan a
SI ES POSITIVO SE VALIDA EL ENSAYO, SI ES NEGATIVO SE REPITE DESDE SU INICIO
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RPR o VDRL
El Químico de Inmunohematologia antes de iniciar la prueba lleva a temperatura de entre 15-30 C el REACTIVO Y
SUS CONTROLES
Procede a centrifugar la muestra para continuar con la separación del plasma y el concentrado eritrocitario.
Se realiza la identificación de la placa: controles y muestra
A los circulos que se van a ocupar se les adiciona una alicuota 1 A 2 gota del suero del paciente.y se extiende con la
misma pipeta desechable o punta.
De igual forma se aplica en los circulos correspondientes los controles positivo y negativo
A todos los circulos se les adiciona 1 gota del REACTIVO
Se homogeniza y se lleva a agitar la placa en el equipo BAXTER ROTATOR V durante 6 - 8 min. A 100 rpm.
Realizar lectura macroscopica e interpretar, ausencia de aglutinación resultado negativo, presencia de aglutinación
resultado positivo
Se anota el resultado en la Bitácora de Estudios especiales de Inmunohematologia
CAL-31-B y en el formato de solicitud A-13-14-07 original y copia, se entrega al personal que venga por los resultados
la copia de la forma A-13-14-07 y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de recibido en la Bitácora
de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C.
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COOMBS DIRECTO EN GEL
El concentrado eritrocitario se toma una alicuota y se realiza una suspensión al 2-5%, a la cual se le realizan 3
lavados minimo con solución de cloruro de sodio al 0.9% (SSI), en cada lavado se centrifuga. se decanta y se repite el
proceso de lavado.
Una vez que se realizarón los lavados se decanta el exceso de solución y se adiciona SSI para obtener una solución
al 5%.
AGREGAR 1 GOTA DE LA DILUCION DE ERITROCITOS DEL PACIENTE Y 2 GOTAS DE SUERO DE COOMBS
Se centrifugan los tubos y se leen anotando el resultado en el formato F-A-14-27 donde indica 22 °C en su respectiva
dilución,
Si el RESULTADO es POSITIVO se titula (diluyendo el suero de Coombs en forma doble seriada,)se reporta en los
formatos A-13-14-07 y F-A-14-27 POSITIVO y la dilución
Si el RESULTADO es NEGATIVO si la técnica fue realizada en tubo se continua con el llamado CAGHs (consumo de
antiglobulina humana) es la prueba que se realiza para corroborar que se haya realizado bien la técnica anterior.
Para realizar el CAGHs se adiciona una gota de células sensibilizadas a todos los tubos, se mezclan y centrifugan a
SI ES POSITIVO SE VALIDA EL ENSAYO, SI ES NEGATIVO SE REPITE DESDE SU INICIO
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ANTIGENOS ERITROCITARIOS
Se rotulan 2 tubos con los datos del paciente, una vez que la muestra se centrifuga y se separa el suero o plasma del
tubo y en el otro se realiza una suspensión al 2-5% de globulos rojos.
Se identifican 20 tubos con la sigla de cada uno de los antigenos a determinar
Se coloca en cada tubo una gota de la suspensión de eritrocitos al 2-5% de la muestra problema + 1 gota del
antisuero correspondiente (VER TABLA ANEXA 5)
Se incuban de 15-20 min
Cuando obtengo en Salina rápida un negativo se continua con una incubación de 15-30min. en la temperatura a la
cual reacciona optimamente con su respectivo anticuerpo (MNSU 22 C, el resto a 37 C) al termino de la incubación se
sacan los tubos se centrifugan a 3500RPM / 20-30 segundos y se toma tubo por tubo observando algun tipo de
aglutinación. Se reporta todos los resultados obtenidos en el formato F-A-14-23.
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TABLA 5: ANTIGENOS ERITROCITARIOS
M N S s P Fya Fyb K k Jka Jkb Lea Leb Dia
S/4°C
S/22°C
S/37°C
S/SC
CAGH
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TIEMPO DE
INCUBACION
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Una vez que el Médico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Químico revisa que la
muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma,
que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren.
Una vez que el Químico verifica lo anterior le pide al Médico residente se anote en la Bitácora de Registro CAL-31-A y
el Químico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original) y M-3-0-21 (original y
copia) y el turno que le corresponde. Este procedimiento se realiza si el Médico del Banco de sangre lo considera
adecuado por el diagnostico del paciente o por que no se tengan en existencia concetrados plaquetarios del grupo
sanguineo del paciente.
El procedimiento se realiza de igual manera para Pool de plaquetas, Feresis o Concentrado plaquetario
La centrifuga se pone a temperatura de 22 a 24 C
El producto a desplasmatizar se centrifuga a 1400rpm/10min a una temperatura de entre 22-24 C, una vez que
concluye la centrifugación por medio del Conector esteril o puncionanado la bolsa con la espiga de la bolsa transfer,
sosteniendo en la palma de la mano la bolsa que contiene el plasma y las plaquetas, se trasvaza el plasma en su
totalidad a la nueva bolsa.
A la bolsa que contienen las plaquetas se le deja una linea de aprox. 15 cm sellandola y desechando la bolsa que
contiene el plasma
A la bolsa que contiene las plaquetas por medio del conector esteril se le conecta un equipo de venoclicis para que
por medio de el puncione una bolsa o frasco de solución salina fisiologica y se trasvasa la cantidad de solución
adecuada o solicitada.
Se sella la bolsa para separa la solución salina, se resuspenden las plaquetas y se coloca en agitación durante
30min./100RPM/T.A. Con el formato M-3-0-21 copia y en la etiqueta indica que el producto fue desplamatizado.
Se anotan los datos del donador y paciente en la Bitácota de Control de asignación de sangre CAL-31-D y se
conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21. La copia del formato M-3-0-21 se le entrega
al Médico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el producto. Una vez que el Químico completa
los datos de la bitácora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido en la Bitácora CAL-31-D y en el original del
formato M-3-0-21.
Una que el Químico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la fecha
y hora en que se entrego el producto.
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DESPLAZMATIZACIÓN
copia) y el turno que le corresponde.Este procedimeinto se realiza cuando el Médico solicita por medio del formato A13-14-07 un paquete eritrocitario lavado o que el paquete a transfundir haya sido radiado 5 días antes o por que la
patologia del paciente asi lo requiera. (Verificar si el paquete fue filtrado cuando fue fraccionado)
Al Concentrado eritrocitariose le conecta por medio del Conector esteril la parte contraria a la espiga del equipo de
venoclisis y la parte sobrante se desecha. La parte que queda libre que es donde se encuentra la espiga se une a la
bolsa o frasco de solución salina y se deja de 100 a 150ml.
Se sella la bolsa dejando aprox. de 5-10cm de linea en la bolsa del concentrado eritrocitario, homogeniza por medio
de inversión.
Se centrifuga colocando el paquete con los puertos de entrada hacia abajo a 3500RPM durante 10min.
Una vez que finaliza la centrifugación se retira con sumo cuidado los vasos de la centrifuga y posteriormente el
Concentrado eritrocitario lavado el que se cuelga en un tripie.
Se identifica la bolsa transfer con los datos de la bolsa que contiene el CE a lavar y se prepara con 50-100ml de SSI la
cual se une a CE lavado y se deja pasar el CE LAVADO a la bolsa transfer deteniendo la transferencia de CE antes
de que la linea que divide el CE y el sobrenadante quede antes de 3cm de la base de los puertos.
Una vez que se detiene la transferencia se sella la linea y se separa la bolsa que contiene el sobrenadante para
desecharla
Se homogeniza el CE y se refrigera hasta su solicitud
conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21. La copia del formato M-3-0-21 se le entrega
al Médico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el producto. Una vez que el Químico completa
los datos de la bitácora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido en la Bitácora CAL-31-D y en el original del
formato M-3-0-21.
Una que el Químico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la fecha
y hora en que se entrego el producto.
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LAVADO DE PAQUETES
ELUSION
FILTRACION
el Químico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original y copia) y el turno que le
corresponde. Este procedimiento se realiza cuando el Médico lo solicita o cuando el Médico del Banco de sangre lo
considera necesario se realiza para pacientes que se cree tiene aloanticuerpo o autoanticuerpo.
Se rotulan 2 tubos con los datos del paciente, una vez que la muestra se centrifuga a 3500RPM/8min. Se separa el
plasma y se toma aprox. 1ml (varia según la cantidad de muestra extraída) del paquete de celulas
LAVADO CON SSI
Al tubo que contiene el paquete de celulas se le adiciona ¾ partes de SSI del tubo
Centrifugar a 3500rpm/2min, decantar (3 lavados minimo).
LAVADO CON SOLUCION DE LAVADO
Solución de lavado dilución 1/10 (1ml de solución de lavado concentrado + 9ml de solución salina fisiologica)
Al tubo que contiene el paquete de celulas lavadas con SSI se le adiciona ¾ partes de Sol. de lavado del tubo
Centrifugar a 3500rpm/2min, decantar (4 lavados minimo).
Después del último lavado se decanta totalmente la solución de lavado.
Del paquete previamente lavado se toma una alicuota y se coloca en un tubo identificado y se adiciona la misma
cantidad de sol. de elución
Se realizan dos movimientos de inversión al tubo y se introduce a la centrifuga a 3500rpm/1min. se decantar
(3 lavados minimo).
Después del último lavado se decanta totalmente la solución de lavado y se adicionan 20 gotas de amortiguador
(color azul) pH 7
ELUIDO
TARJETA
TUBO
Realizar una solución al 1% del panel de células del
del SIGLO XXI
Identificar 10 tubos
Tomar una alicuota de 50microlitros de las solución
anterior + 50 microlitros del ELUIDO
Adicionar 1 gota de células panel del SIGLO XXI
+
2 gotas del ELUIDO
Incubar durante 15min.
Incubar durante 15min. en Diana Incubador
Lavadar con solución de lavado 1 vez
Interpretar los resultados con la carta del panel
Agregar 2 gotas de suero de Coombs a cada tubo
Mezclar y centrifugar a 3500rpm/15-30seg
Interpretar los resultados con la carta del panel
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copia) y el turno que le corresponde. Este procedimiento se realiza si el Médico en la solicitud indica que se le realice
filtración al producto solicitado
Una vez que se le realizarón las pruebas de compatibilidad al producto y esta listo para ser filtrado
Se selecciona el filtro por su capacidad y producto a filtrar y se identifica la etiqueta que trae la bolsa del equipo para
filtrar con el nombre del donador, tipo de sangre, # de registro, volumen, fecha de extracción, fecha de caducidad y
fecha en que se esta realizando la filtración.
Se realiza la unión de la bolsa y el equipo de filtración con el TSCD SC-201A
Se corta la parte sobrante y se abre la parte de la linea que se sello para dejar pasar el producto y el piloto de la bolsa.
Se cuelga la bolsa en un tripie y se espera a que termine de pasar todo el producto
Si no se va a requerir el total de la bolsa, se coloca la bolsa ( a donde se encuntra el producto filtrado) en la balanza y
tomo solo la cantidad que requiero, procedo a sacar el aire de la bolsa y sello. Si se requiere todo el producto se
espera a que se filtre todo, se saca el aire, se sella y se pesa para conocer el peso final.
conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21(se especifica la cantidad que entrega). La
copia del formato M-3-0-21 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el
producto. Una vez que el Químico completa los datos de la bitácora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido
en la Bitácora CAL-31-D y en el original del formato M-3-0-21.
Una vez que el Químico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la
fecha y hora en que se entrego el producto.
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CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS Y CELULAS
El Químico del área de grupos realiza el Control de calidad de los hemoclasificadores y células reactivo que son las siguientes:
Los hemoreactivos a utilizar son:
-Anti-A
-Anti-B
-Anti-AB
-Anti-A1
-Anti-H
-Anti-D
-Albumina 22% o Control de Rh
Las Células que se van a ocupar:
-Globulos rojos A1
-Globulos rojos A2
-Globulos rojos B
-Globulos rojos O
-Eritrocitos sensibilizados
-Eritrocitos no sensibilizados
-Globulos rojos de fenotipo conocido
(panel1-10)
El Control de calidad se realiza con las células del C.M. Siglo XXI a las que se les realizan tres lavados previos a su uso con SSI (1 L. de
solución CS + 10ml pHix) hasta ¾ partes del tubo, centrifugar a 3500/ 2min, decantar, agitar para resuspender las células En el último lavado
decantar sin resuspender. De cada una de las células realizar una suspensión al 5%. Durante los lavados determinar la existencia de
hemolisis y turbidez.
Identificar 4 tubos con los # del 1 al 4 y con la letra A,
4 tubos con la letra AB, 4 tubos con la letra B, 2 tubos con la letra A1 y 2 tubos con la letra H
Adicionar 2 gotas de su respectivo reactivo a los 4 o 2 tubos
Una vez que se adicionarón los reactivos se realiza lo siguiente:
A los TUBOS 1
Adicionar 1 gota de globulos
rojos A1(lavados)
A los TUBOS 2
rojos A2(lavados)
A los TUBOS 3
rojos B(lavados)
A los TUBOS 4
rojos O (lavados)
Centrifugar 3500rpm / 15-30seg. Leer Aglutinación y anotar en la bitácora de Control de Calidad
Identificar 2 tubos como D Rh+ y D Rh- :
A los 2 tubos adicionarle 2 gotas de Hemoclasificador D y al #1 adicionar 1 gota de globulos rojos R1r (células del panel C.M. Siglo XXI Rh
positivas) y al # 2 adicionar 1 gota de globulos rojos rr (células del panel C.M. Siglo XXI Rh negativas)
Identificar 2 tubos como albumina o control Rh:
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A los 2 tubos adicionarle 2 gotas de reactivo ALBUMINA o el Control Rh y al #1 adicionar 1 gota de globulos rojos R1r (células del panel C.M.
Siglo XXI Rh positivas) y al # 2 adicionar 1 gota de globulos rojos rr (células del panel C.M. Siglo XXI Rh negativas)
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Centrifugar 3500rpm / 15-30 seg. Leer Aglutinación y anotar en la bitácora de Control de Calidad
Obsevar las especificaciones en la NOM- 017-SSA1-1993
Observar Avidez en placa de as células del C.M. Siglo XXI A1, A2, B, de la siguiente manera:
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-A
+
1gota de células A1
Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-A
+
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-B
+
1gota de células B
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-AB
+
+
+
1gota de células B
Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-D
+
1gota de células con fenotipo R1r
Obsevar las especificaciones de Avidez de la NOM- 017-SSA1-1993
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Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-C3d-IgG
+
1gota de células sensibilizadas
Obsevar las especificaciones de Avidez de la NOM- 017-SSA1-1993
Para realizar el Control de calidad del suero de Coombs se identifican 1 serie de 8 tubos cada una con las siguientes diluciones: 1/1 o sin diluir
, ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64 y 1/ 128
Adicionar al tubo # 1
1 ml de Anti-IgG,-C3d
Adicionar al tubo #2 1ml de de Anti-IgG,-C3d + 1ml de SSI
Homogenizar
Al tubo #3 se le adiciona una alicuota de 1ml del tubo #2 y se homogeniza ,
Al tubo #4 se le adiciona una alicuota de 1ml del tubo #3 y se homogeniza
Asi se continua hasta la dilución 1/128
en la última dilución se desecha 1ml para que todos los tubos tengan la misma cantidad.
Montar 2 SERIES de 8 tubos identificada con cada una de las diluciones. Se toma una alicuota de 0.1ml de la última dilución y se coloca en el
últimos tubos de la SERIE I y IIy asi en todas las diluciones.
A las SERIE I y II adicionarles lo siguiente:
SERIE I
Adicionar 1 gota de eritrocitos sensibilizados lavados
SERIE II
Adicionar 1 gota de eritrocitos NO sensibilizados lavados
Se centrifugan 30seg / 3500rpm .
Leer Aglutinación y anotar en la bitácora de Control de Calidad
En caso de obtener resultados negativos en cualquiera de las 2 series realizar consumo de antiglobulina humana para control de la técnica y
reportar en la bitácora.
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ACTIVIDADES DE RUTINA
Anotar la temperatura de los refrigeradores
Ordenar refrigeradores
Sacar la lista de CE existente por # de registro, Fecha de caducidad y grupo.
Sacar la lista para Centro Nacional
Acomodar las plaquetas según lo siguiente:
radiadas, cruzadas, próximas a caducar, disponibles.
Sacar la lista de plaquetas cruzadas
Tener el producto solicitado para cirugías e indicar la fecha en que se requiere
Se ordenan las requisiciones A-13-14-07 por # y turno
Se anota en egresos M-3-0-21
Cotejar en entrega de guardia
Lista de egresos y cancelados
Verificar que el producto solicitado a las 24 hrs se encuentra todavía se
reincorpora al stock
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CAL-31- A BITACORA DE ESTUDIOS ESPECIALES DE
INMUNOHEMATOLOGIA
Fecha: Día, mes y año en que se esta realizando el estudio.
Registro: #de registro del paciente.
Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente.
Edad: Años que tiene en ese momento el paciente (opcional)
Sexo: M (hombre) y F (mujer).
Depto. y/o Servicio: Servicio de donde se solicita el estudio.
Cama: # de cama donde se encuentra el paciente.
Diagnostico: Diagnostico que da el medico.
G: Gesta
P: Partos
A: Abortos
Rhogam: Vacuna de Rh
Transfusión: Si ha sido transfundido si o no
Fecha: Fecha en fue transfundido
EST. LAB.
Bilis: Bilirrubinas
HTO: Hematocrito
HB: Hemoglobina
RETIS: Reticulositos
TP: Tiempo de protombina
P/G: Peso (g)
SABO
Grupo: Grupo Sanguíneo del paciente.
Subgrupo: Cuando el paciente es del grupo A se determina su subgrupo A1 o A2
SRh
D, DU, Rh Salino, C, c, E, e: Determinación de fenotipo de Rh
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COOMBS
IgG-C3d, IgG, C3, IgM, Titulo, Potencia: Determinación con el reactivo de
Coombs Positivo o Negativo, su titulo y potencia.
RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES FSABO
Suero: Tipo de muestra utilizada (suero)
Eluido Adsorción: Tipo de muestra utilizada (eritrocitos)
Positivo: Cuando se encuentra positivo
Negativo: Cuando se encuentra negativo
Especificidad: Probable Anticuerpo
Titulo: Respuesta (en cruces)
Potencia: Potencia encontrada.
FENOTIPO
P, M, N, S, s, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lea, Leb, K, k: Antígenos eritrocitarios con
anticuerpos específicos.
Día: Día en se realiza el estudio.
RPR
Positivo: Se marca con una X si es positivo
Negativo: Se marca con una X si es negativo
Titulo: Titulo encontrado en la prueba.
Ab INMUNES
Anti-A, Anti-B: Prueba de aglutininas o Sello, firma, rubrica del Químico que
realizo el estudio.
CAL- 31-E CONTROL DE CALIDAD
Fecha: Día, mes y ano en que se realiza el control de calidad.
Turno: Turno que esta realizando el control de calidad (M matutino, V vespertino,
N nocturno, E especial)
Reactivo: Hemoclasificado al que se le va a realizar el control de calidad..
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Lote: de lote del hemoclasificado.
Caducidad: Fecha en que caduca el hemnoclasificado.
Marca: Nombre comercial que tiene el hemoclasificado
Registro: # que tiene como registro el hemoclasificado.
Color: Color que presenta el hemoclasificado.
Aspecto: Aspecto transparente o turbio del hemoclasificado.
A1, A2, B, O, R1r, rr, A1, A2, B, Rr: Resultados al realizar el control de calidad.
Hemolisis: Negativa o positiva.
Turbidez: Negativa o positiva
Cel. Sensib.: Con dilucioneas del 1/1 al 1/128 y células sensibilizadas.
Cel. no sensib: Con dilucioneas del 1/1 al 1/128 y células no sensibilizadas.
CAGH: Consumo de antiglobulina humana.
31-F ENTREGA DE GUARDIA
Fecha: Día, mes y ano de entrega de turno.
Req. Inicial: # de requisición inicial
Req. Final: # de requisición final
Turno: Turno que esta realizando el control de calidad (M matutino, V vespertino,
N nocturno, E especial)
Egreso: Numero de egreso inicial con que se recibe el turno.
Ingreso: Numero de egreso final con que se recibe el turno.
Cirugía con células: Nombre completo del paciente y registro.
Productos liberados: Numero, tipo de producto y estado en que se encuentra
(pendiente, liberados)
Pacientes: Nombre del paciente y registro
Refrigeradores: Si están en orden o no.
Entrega: Firma o/y sello, rubrica del Químico(a) que entrega el turno.
Recibe: Firma o/y sello, rubrica del Químico(a) que recibe el turno.
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CAL-31-D CONTROL DE ASIGNACION DE SANGRE
Fecha: Día, mes y ano en que asigna la sangre
Registro: Numero de registro del donador (paquete).
Nombre del donador: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del
donador.
Producto: Tipo de producto solicitado (CE, CP, etc )
GPR. Y Rh: Grupo sanguíneo y Rh del donador.
Volumen: Volumen que contiene el paquete.
Realizo Prueba: Químico que realiza la asignación del producto.
Resultados: Compatible o no compatible.
No. Solic.: Numero y turno de la solicitud.
Proced.: ------------------Observaciones: Cuando existe alguna especificación.
Registro: Numero de registro del paciente.
Nombre del receptor: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del
paciente.
GPO Y Rh: Grupo sanguíneo y Rh del paciente.
Departamento y/o Servicio: Servicio que solicita el producto.
Cama: Numero de cama en que se encuentra el paciente.
Fecha ent.: Día, mes y ano en que se entrega el producto solicitados
Hora entr.: Hora en que se entrega el producto solicitado.
Volumen: Volumen real que se entrega.
Recibió: Personal que recibe el producto.
Entrego: Químico que entrega el producto.
No. Salida: Numero que se le asigna de salida y turno.
CAL -31-C ENTREGA DE RESULTADOS DE ESTUDIOS ESPECIALES
Fecha: Día, mes y ano en que se realiza el estudio.
Servicio: Departamento que solicita el estudio.
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Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del
paciente.
Estudios solicitados: Prueba Que se solicita se realice
Medico, Nombre, firma, clave: Rubrica o/y firma y clave del personal que recoge
los resultados del estudio.
CAL – 31- G RELACION DE PRODUCTOS ENVIADOS A RADIOTERAPIA
Fecha: Día, mes y ano en que se lleva a radiología.
Tipo de producto: Tipo de producto a radiar (CE, CP)
Grupo: Grupo sanguíneo y Rh del producto a radiar.
Registro: Numero de registro de los productos a radiar.
Hora de entrega: Hora en que se entrega el producto a radiología.
Hora de recoger: Hora en que se puede pasar a recogerlo.
GRUPOS EN EL TURNO VESPERTINO
Fecha: Día, mes y año en que se determino el grupo sanguíneo y Rh al donador.
Muestra: # de registro del donador.
Grupo: Grupo sanguíneo del donador.
Rh: Fenotipo del donador.
Observaciones: --------------------------CAL- 31-I PRODUCTOS REGRESADOS
Fecha: Día, mes y año en que se regresa el producto.
Hora: Hora en que se regresa el producto
Registro del producto: # del registro del producto que se regreso.
Grupo: Grupo sanguíneo del producto devuelto.
paciente.
Registro del paciente: # de registro del paciente.
Servicio: Departamento donde se devuelve el producto.
Regresa: Personal que regresa el producto.
Recibe: Químico que recibe el producto.
Causa: Motivos por que el producto es devuelto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 40 de 131
CAL-31-J BITACORA DE ESTADISTICAS INMUNOHEMATOLOGICAS
Fecha: Día, mes y año en que se realiza la estadística.
M: Turno Matutino.
V: Turno Vespertino.
N: Turno Nocturno
# REQ.: # de requisiciones.
S ABO: # de Pruebas de grupos sanguíneos en el sistema ABO realizadas.
SUB GRUPO: # de subgrupos realizados.
S Rh: # de análisis para conocer el Rh
Fenotipo: # de pruebas para conocer el fenotipo.
Fenotipo otros: # de otras pruebas que se realizaron para conocer el fenotipo.
C.D.: # de Coombs directo realizados.
C.D. ESP.: # de Coombs directo especial realizados.
Rastreo de Ab: # de Rastreo de Anticuerpos que se realizaron.
Titulo de Ab: # de titulaciones de anticuerpos se realizaron
Eluido: # de eluidos realizados.
Adsorciones: # de adsorciones realizadas.
Aglutininas A: # de aglutininas A se realizaron.
Aglutininas B: # de aglutininas B se realizaron.
RPR: # de Pruebas RPR se realizaron.
C.E.: # de Concentrados Eritrocitarios entregados.
C.P.: # de Concentrados plaquetarios entregados
P.F.: # de Plasmas Frescos entregados.
G.A.H.:
F VIII: # de Factor VIII
F IX: Factor IX
ALB. HUMANA: Albúmina humana
C.E. FRACC.: # de Concentrado Eritrocitario que se fraccionaron.
C.P. FRACC.: # de Concentrado plaquetario que se fraccionaron.
C.E. LAVADO: # de Concentrado Eritrocitario que se lavaron.
C.E. FILTRADO: # de Concentrado Eritrocitario que se filtraron.
C.E. REGRESADO: # de Concentrado Eritrocitario devueltos.
P.F. REGRESADO: # de Plasma Fresco devuelto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-31
ISBN: 978-968-9170-17-4
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C.P. REGRESADO: # de Concentrados plaquetarios revueltos.
VALORACIONES: Valoraciones realizadas.
RESPONSABLE: Químicos responsables del turno.
CAL-31-K PACIENTES CON PROBLEMAS DE TRANSFUSION
Fecha: Día, mes y año en que se suscita el problema de transfusión.
Reg. pte. : # del registro del paciente.
Nombre pte.: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del paciente.
Gpo: Grupo sanguíneo del paciente.
Dx: Diagnostico especificado por el Médico.
Gpo a trans: Grupo sanguíneo a transfundir.
Observaciones: Cualquier observación que sea importante en cuanto a la
transfusión realizada.
CAL-31- L BITACORA DE SALIDA DE PRODUCTOS A OTROS BANCOS
La libreta debe incluir el # de registro del producto a salir, el tipo de producto, el
nombre completo del disponente, el volumen del paquete, el grupo sanguíneo y
Rh y la fecha de extracción del producto junto con la de caducidad.
Una vez que el Químico saca la relación le entrega una copia a la Secretaria para
que llene el formato A-14-01 o F-A-14-01.
REGISTROS
Todas las Bitácora de este procedimiento se resguardan en archivo activo durante
1 año y en archivo muerto 5 años.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
Fecha: 3 Febrero-2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 42 de 7
Procedimiento para valoración médica
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: Dr. Carlos E. Cob
Sosa
Nombre: Dra. Margarita L.
Medina Macías
Nombre: Dra. Dinora V
Aguilar Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 3-Febrero-2010
Fecha: 3-Febrero-2010
Fecha: 3-Febrero 2010
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
Fecha: 3 Febrero 2010
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 43 de 7
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se cambia formato de Historia Clínica
y programa de cómputo
03
03/02/10
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 44 de 7
Una vez que al donador se le toman los datos de identificación, se imprime la
Historia Clínica, el candidato a donador firma la carta de consentimiento
informado, se registra en la Bitácora CAL-20 B, se valoran las venas,
somatometría, signos vitales y toma de muestra (Ver procedimiento CAL-20, CAL
20-B, CAL-30 y CAL-43) se procede de la siguiente manera:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Medico toma del área de recepción la ficha de
identificación del donador M-3-0-23 (y la Historia Cliníca M3-0-10-a; sólo en caso de procedimiento manual)
De la ficha de identificación del donador M-3-0-23 observa el nombre
completo del donador, lo llama y le indica que pase al consultorio donde
se le realizará la valoración medica
El médico, supervisa que los parámetros de signos vitales
registrados, por el enfermera, en la ficha de Identificación, esten
dentro de las especificaciones marcadas por la NOM-003-1993, Así
como también que los resultados de la biometría hemática que se
realizó en el área de toma de muestras esté acorde con los
parámetros que establece la NOM-003-1993. Posteriormente
interroga, explora y elabora Historia Clínica (cuando el procedimiento
es manual llena formato de Historia Clínica M-3-0-10-a), ó ingresa
datos en el sistema de cómputo (Programa Winlab)
Médico verifica datos de somatometría, signos vitales e ingresa, los
parámetros emitidos de toma de muestra de la biometría hemática en el
apartado del sistema de cómputo (Datos del Donante) y determina si el
candidato cumple con los requerimientos para donar sangre.
No Apto
El médico determina que el
candidato no es apto para donar
sangre y anota causa de rechazo
en la Historia Clínica así como en
el sistema de cómputo busca y
graba la (s) causa (s) por la (s)
cual(es)el donador NO ES APTO
Si es Apto
En el sistema de cómputo (en Datos del Donante) determina que el donador
es aceptado para donar sangre y lo graba. Deposita en el buzón del área de
Recepción la Histotia Clínica con la Biometría Hemática para que sea
tomado por la recepcionista para asignar número de unidad, imprimir
etiquetas y entregar todos estos documentos a la enfermera para continuar
con el procedimiento de extracción de sangre total o de componentes
sanguíneos por aféresis. (Ver Procedimiento CAL-43).
Médico informa causa(s)
de la exclusión para donar
sangre
El Médico informa al
personal de Recepción y
Trabajo social para
evaluación social y
reprogramación de cita.
Les entrega la Historia
Clínica
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
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FICHA DE IDENTIFICACION DEL DONADOR
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 47 de 7
HISTORIA CLINICA DE CANDIDATO A DONADOR
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 48 de 7
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REGISTROS
Bitácora de entrega y recepción de Historias Clínicas del donador de sangre y
componentes sanguíneos.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
Fecha: 12-Julio-2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 50 de 11
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
NOMBRE: DR. ISMAEL
HERNÁNDEZ MONTIEL
NOMBRE: DRA. MARGARITA NOMBRE: DRA. DINORA
L. MEDINA MACÍAS
V. AGUILAR ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 12-Juulio-2011
Fecha: 13-Juliol-2011
Fecha: 13-Julio- 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
Fecha: 12 Julio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 51 de 11
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
04
08/04/11
Se integra el sistema Kanban.
Se anexa firma de la evaluación de la
biometría hemática así como la
impresión del formato de historia
clínica electrónica M-3-0-10 a y b por
el médico responsable.
Se integra el CAL-64 Procedimiento
de manejo de candidatos a donación
No Aptos del área de selección de
disponentes en este procedimiento,
así mismo se da de baja en la lista
maestra.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 52 de 11
El médico toma la hoja de Ficha de identificación del Kanban ubicado en el área
de recepción y procede de la siguiente manera:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 53 de 11
El Medico toma del Kanban ubicado en el área de valoración médica la ficha
de identificación del donador M-3-0-10-(a y b) y el resultado de la biometría
hemática (BH) en caso de procedimiento manual también se incluye la
Historia Cliníca M-3-0-10-(a y b)
De la ficha de identificación del donador M-3-0-10a el médico observa el
nombre completo del donador, lo llama y le indica que pase al
consultorio donde se le realizará la valoración medica. En caso de
sistema manual los datos los toma de la Historia Clínica
El médico, verifica que los parámetros de signos vitales registrados,
por la enfermera, en la ficha de Identificación, estén dentro de las
especificaciones marcadas por la NOM-003-1993, Así como también
que los resultados de la biometría hemática que se realizaron en el
área de toma de muestras estén acordes con los parámetros que
establece la NOM-003-1993, y anota su nombre, clave y firma.
Posteriormente interroga, explora y elabora la Historia Clínica,
ingresa los datos en el sistema informático de banco de sangre ó
cuando el procedimiento es manual llena formato de Historia Clínica
M-3-0-10-(a y b).
El médico emite el diagnóstico y determina si el candidato cumple con
los requerimientos normativos para realizar la donación de sangre o de
aféresis.
Si el disponente es APTO ó NO APTO lo registra en el sistema
informático de banco de sangre, si es Apto imprime la historia clínica;
anota su nombre, clave y firma de responsable en la ficha de
identificación (formato M-3-0-23) y en la historia clínica (formato M-3-010-a y b) y solicita la firma al disponente
No Apto
El médico anota causa de rechazo
en la ficha de identificación formato
M-3-0-23 y en la Historia clínica en
el formato M-3-0-10-(a y b) del
sistema informático de banco de
sangre (y manual)
Si es Apto
El médico informa al
disponente la causa de
rechazo
Deposita en el Kamban del área de Recepción la Ficha de Identificación,
impreso de biometría hemática y la Historia Clínica para que en recepción
se le asigne número de unidad e impresión de etiquetas para
posteriormente colocar todos estos documentos en el Kamban del área de
flebotomía ó aféresis según corresponda y proceder a la extracción de
sangre total (Ver CAL-46) o de componentes sanguíneos por aféresis. (Ver
Procedimiento CAL-50)
CAL-02-B
El médico informa trabajo
social y a recepción que
el disponente no es apto,
para posterior evaluación
social y/o reprogramación
de cita
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 54 de 11
FICHA DE IDENTIFICACION DEL DONADOR M-3-0-23 (PROCEDIMIENTO
MANUAL)
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 55 de 11
HISTORIA
CLINICA
DE
(PROCEDIMIENTO MANUAL)
CAL-02-B
CANDIDATO
A
DONADOR
M-3-0-10a
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 56 de 11
HISTORIA
CLINICA
DE
(PROCEDIMIENTO MANUAL)
CAL-02-B
CANDIDATO
A
DONADOR
M-3-0-10b
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 57 de 11
FICHA DE IDENTIFICACIÓN DEL
INFORMÁTICO DE BANCO DE SANGRE
CAL-02-B
DONANTE
(M-0-3-23)
SISTEMA
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 58 de 11
HISTORIA CLÍNICA (SISTEMA INFORMÁTICO DE BANCO DE SANGRE)
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 59 de 11
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-40
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 60 de 11
En el caso de los candidatos a donación No Aptos:
 La ficha de identificación y/o la Biometría Hemática impresas, se archivan
durante 3 meses como indica la NOM-003-SSA-1993
 La historia clínica permanece resguardada en el sistema informático de
banco de sangre.
En el sistema quedan registrados los candidatos a donación excluidos
permanentemente que por no cumplir con los requisitos no serán aceptados como
donadores en caso de solicitar nuevamente ser candidatos.
REGISTROS
Bitácora de entrega y recepción de Historias Clínicas CAL-50D se almacena en el
archivo durante 3 meses.
Bitácora CAL-20B (Registro de donadores), se almacena en el archivo durante 3
meses.
Ficha de Identificación (M-3-0-23) (Manual y sistema informático de banco de
sangre), se almacena junto con la historia clínica.
Historia Clínica M-3-0-10-(a y b) (Manual y sistema informático de banco de
sangre). Cuando el donador es Apto dichos registros permanecen durante 5 años
en archivo activo y 5 años en archivo muerto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-42
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 61 de 7
Procedimiento de solicitud y entrega de estudios
en el laboratorio
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-42
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 62 de 7
en el laboratorio
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
29/09/03
Banco de Sangre
Código: CAL-42
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 63 de 7
en el laboratorio
Los diferentes estudios que se realizan en el Área de Inmunohematologia del
laboratorio se solicitan de la siguiente manera:
El Médico tratante solicita al Área de Inmunohematologia los estudios con los siguientes documentos:
-El formato A-13-14-07 original y copia donde indica los estudios que requiere
-Y la muestra del paciente identificada (Registro y nombre completo del paciente, fecha y hora de toma de muestra)
La muestra puede ser entregada en el Área de Inmunohematologia por el Médico tratante, Residente, personal paramédico y mensajeros
El personal de Inmunohematologia revisa el original y la copia de los formatos que le entrega y verifica que coincida el nombre que tiene
el formato A-13-14-07 y la muestra , tambien verifica que la muestra sea la adecuada para los estudios solicitados . Si la identificación de
la muestra o el tipo de muestra no es la correcta se procede a retener la muestra y solicitar una nueva muestra identificada correctamente.
El personal de inmunohematologia entrega los formatos al medico, enfermera o mensajero y le pide que anote en la bitácora de solicitud
de productos CAL-28-A los datos que se le solicitan y asigna el # consecutivo del día y una inicial según el horario (M para matutino, V
para vespertino, N para nocturno y E para sabado, domingo o dias festivos) en el formato A-13-14-07 .
Solo en caso de duda se consulta con el Jefe de Laboratorio o con el Médico especialista
SI
NO
Se esta de acuerdo con lo
solicitado lo indica en el
formato con un SI en la parte
superior derecha
Se cancela su realización, y se notifica al servicio solicitante
El personal de inmunohematologia realiza las pruebas solicitadas
Una vez que el personal de inmunohematologia realizo los estudios solicitados anota en la bitácora de estudios especiales CAL-42-A los
datos que se le solicita y procede a anotar los resultados en el original y en la copia del formato A-13-14-07 y guardar en el folder de
estudios especiales la copia del formato
Cuando el Médico, enfermera o mensajero solicita los resultados se le indica anote en la Bitacora de entrega de resultados de estudios
especiales CAL-42-B lo que se le solicita y firme de entregado y se le entregan la copia del formato A-13-14-07 con los resultados.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-42
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 64 de 7
en el laboratorio
El formato A-13-14-07 es llenado por el Médico que solicita el producto y se
La bitácora CAL-28-A es llenada por el Médico que solicita el producto y se
muestra en el Procedimiento CAL-28.
El formato A-13-14-07 que se entrega al laboratorio como solicitud del estudio
contiene al frente en la parte superior izquierda un recuadro en blanco donde se
plaquea el carnet o se le escriben los datos de la persona a la que se realizara el
estudio.
Cualquiera de los datos que no se encuentren en el formato A-13-14-07 y no sean
esenciales para realizar el estudio se puede quedar el espacio vació o cancelar
con una raya
La bitácora de Estudios especiales de Inmunohematologia CAL-42-A debido a su
tamaño no se muestra dentro de este procedimiento.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-42
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 65 de 7
en el laboratorio
La bitácora de Estudios especiales de Inmunohematologia CAL-42-A se llena
de la siguiente manera:
Fecha:
Registro:
Nombre:
Edad:
Sexo:
Depto. y/o servicio:
Cama:
Diagnostico:
Día, mes y ano en que se solicita el estudio.
# asignado por el INP
Apellido paterno, Apellido materno y Nombre del
paciente o donador a quien se le solicita se le realicen
los estudio.
Se calcula de la fecha de nacimiento que contiene el
carnet
M masculino y F femenino y puede ser obtenido del
carnet.
Se encuentra en el formato A-13-14-07
# de cama donde se encuentra el paciente
Se encuentra en el formato A-13-14-07
Datos referentes a la madre
G:
P:
A:
# de gesta es el paciente
# de parto es el paciente
# de abortos
RHOGAM:
Transfusión:
Fecha:
Vacuna anti-D
Si existen transfusiones anteriores
Si existe alguna transfusión la fecha en que se le realizo
Estudios de Laboratorio
Bilis:
Si se requiere este resultado para los estudios que se
van a realizar debe ser incluido por el medico que
solicita los estudios.
HTO:
HB:
CAL-02-B
Si se requiere este resultado para
van a realizar debe ser incluido
los estudios que se
por el medico que
los estudios que se
por el medico que
Banco de Sangre
Código: CAL-42
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 66 de 7
en el laboratorio
RETIS:
TP:
P/G:
los estudios que se
por el medico que
los estudios que se
por el medico que
los estudios que se
por el medico que
SABO
Grupo:
Subgrupo:
Estudio que se puede solicitar al laboratorio.
Estudio que se puede solicitar al laboratorio.
SRh
D, Du, Rh salino, C,
c, E, e:
Estudios que se puede solicitar al laboratorio.
Coombs
IgG-C3d, IgG, C3d,
IgM, Titulo, Potencia:
Rastreo de anticuerpos irregulares FSABO
Suero, Eluido Absorción ( Positivo o Negativo),
Especificidad, Titulo, Potencia:
Fenotipo
P, M, N, S, s, Fya,
Fyb, Jka, Jkb, Lea,
Leb, K, k, Dia:
RPR
Positivo, Negativo,
Titulo:
CAL-02-B
Estudios que se puede solicitar al laboratorio para el
análisis de sífilis.
Banco de Sangre
Código: CAL-42
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 67 de 7
en el laboratorio
Ab inmunes
Anti A y/o Anti B:
Estudios que se puede solicitar al laboratorio para
conocer la presencia de anticuerpos.
La bitácora de Entrega de resultados de Estudios
Inmunohematologia CAL-42-B se muestra a continuación:
especiales
de
BITACORA DE ENTREGA DE RESULTADOS DE ESTUDIOS ESPECIALES DE INMUNO HEMATOLOGÍA
CAL-42-B
Fecha
Registro
Nombre del
paciente
Estudio
solicitado
Personal que recoge el
resultado
Nombre/Firma/clave
La bitácora de Entrega de resultados de Estudios especiales
Inmunohematologia CAL-42-B se llena de la siguiente manera:
de
Fecha: Día, mes y año en que se realiza el estudio.
paciente.
Estudios solicitados: Prueba Que se solicita se realice
Personal que recoge el resultado, Nombre, firma, clave: Rubrica o/y firma
y clave del personal que recoge los resultados del estudio.
REGISTROS
El formato A-13-14-07 se debe almacenar 5 año en archivo activo y 5 años en
archivo muerto.
La bitácora CAL-42-A se debe almacenar 5 año en archivo activo y 5 años en
archivo muerto.
La bitácora CAL-42-B se debe almacenar 5 año en archivo activo y 5 años en
archivo
muerto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 68 de 6
Procedimiento de toma de muestra
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 69 de 6
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se modifica procedimiento con datos
administrativos actualización del
equipo automatizado de Biometría
Hemática.
04
07 de Octubre de 2009
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 70 de 6
Una vez que al donador se le realiza la valoración DE SIGNOS VITALES Y
SOMATOMETRIA (Ver procedimiento CAL-30), el Químico/Laboratorista del área de
toma de muestras de Banco de Sangre toma la Ficha de Identificación del Donador
(Formato M-3-0-23) del “Buzón de valoración del disponente”, que se encuentra en
recepción y se procede de la siguiente manera:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 71 de 6
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 72 de 6
El formato F-A-14-26 se muestra a continuación:
BANCO DE SANGRE
CLASIFICACION DE GRUPOS ABO Y Rh0 (D)
RESULTADOS
SUBGRUPOS DE A
No. DE
UNIDAD
ANTI-A
ANTI-B
ANTIAB
AUTO
GR-A1
GR-A2
GR-B
GR-O
LEC.-A1 ANTI-H
S-RH
ANTI-D
CRho
GRUPO
Hto
Hb
LEUCO
PLAQ RAiFSABO HORA REQ. HORA RES
1
k
2
3
4
5
6
7
8
9
0
F-A-14-26
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 73 de 6
Resultados:
Hb (Hemoglobina): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
Hto (Hematocrito): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
LEUCO (Leucocitos):Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
PLAQ (Plaquetas): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY
Nota 1: En el equipo CELL DYN RUBY se debe correr controles diariamente antes de
su uso (Ver procedimiento CAL-14).
Nota 2: Los tubos deben contener el nombre completo del paciente, número de registro,
número de toma de muestra y fecha.
REGISTROS
F-A-14-26 Se debe almacenar en el archivo activo durante 5 años y en el archivo muerto
5 años.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 27 Junio del 2011
Página 74 de 5
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 27 de Junio del 2011
Página 75 de 5
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se inserta el nuevo formato M-3-4-10
05
27 de Junio del 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 76 de 5
Una vez que al donador se le realiza la valoración DE SIGNOS VITALES Y
SOMATOMETRIA (Ver procedimiento CAL-30), el Químico/Laboratorista del área de
toma de muestras de Banco de Sangre toma la Ficha de Identificación del Donador
(Formato M-3-0-23) del “Buzón de valoración del disponente”, que se encuentra en
recepción y se procede de la siguiente manera:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 78 de 5
El formato M-3-4-10 se muestra a continuación:
El formato M-3-4-10 se llena de la siguiente manera:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-43
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Resultados:
Hb (Hemoglobina): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
Hto (Hematocrito): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
LEUCO (Leucocitos):Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
PLAQ (Plaquetas): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados
Nota 1: En el equipo Automatizado de Biometrías se debe correr controles diariamente
antes de su uso (Ver procedimiento CAL-14).
Nota 2: Los tubos deben contener el nombre completo del paciente, número de registro,
número de toma de muestra y fecha.
REGISTROS
No asociados
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-44
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 80 de 3
Procedimiento de separación y almacenamiento
de muestras
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-44
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 81 de 3
de muestras
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
29/09/03
Banco de Sangre
Código: CAL-44
Fecha: 29 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 82 de 3
de muestras
El Personal Auxiliar del laboratorio del Banco de sangre que se encarga de separar y
almacenar las muestras analizadas lleva a cabo el siguiente proceso:
De las muestras obtenidas en el área de sangrado (en enfermería) y que son utilizadas en el área de serologia se
realiza la separación y almacenamiento de la muestra.
Los tubos de sangre total (tapon rojo) se centrifugan en la centrifuga Hettich Eba8s, de 5 a 10 minutos, de 3500 a
5500 rpm, y de 70 a 100% de potencia.
Los tubos de biometría hemática (tapón morado) se separan en la centrifuga Sero-fuge durante 3 minutos a su
máxima velocidad.
Coloca las muestras separadas en una gradilla y las entrega al área de serología.
Para realizar el almacenamiento:
Se marca el criotubo (s) con el números de registro del día y/o Nombre completo del paciente o # del donador
Se toma el tubo que contiene la muestra y se trasvasa al criotubo identificado con ese mismo # o Nombre,
asegurandose solo pase el suero, se cierra y se coloca en una gradilla de unicel
Una vez que se a terminado de vaciar todas las muestras, se saca la gradilla del refrigerador observando que sea la
que contenga la última muestra colocada un día anterior.
Una vez que se encuentran ordenadas se resguardan en el refrigerador a -70 C
El Auxiliar de laboratorio marca las gradillas de unicel para poderlas guardar en el
refrigerador con el # correspondiente visible para que sea posible identificarlas
fácilmente y las coloca por # consecutivo.
REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-45
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 83 de 6
Procedimiento de lavado del material
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-45
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 84 de 6
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
2
27/07/2006
Banco de Sangre
Código: CAL-45
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 85 de 6
El Personal Auxiliar de laboratorio del Banco de sangre encargado del lavado de
los diferentes tipos de material lleva a cabo el siguiente proceso:
El Auxiliar del laboratorio prende el horno a una temperatura aprox. de 120º C.
Se toman los diferentes botes de las áreas de Pruebas cruzadas y grupos sanguineos y se verifica que el material haya estado en
contacto con la solución que contiene el bote. Si no es así se sumergen durante 10-15min. Aproximadamente para que se lleve a cabo
la desactivación.
El bote que contiene las pipetas se vacia en la tarja y se
seleccionan
-Las rotos: las separo o tiro al contenedor de material
peligrosos.
-Las que tienen presencia de contaminación las pongo al
chorro del agua y las ordeno para que la punta de todas quede
hacia el mismo lugar.
-Las que presentan una contaminación mayor se ponen a
remojar en una mezcla de agua/jabón/ cloro.
El bote que contiene los tubos se vacia en la tarja y se
seleccionan
-Los rotos: se separan y tiran a una caja de cartón
-Los que tienen presencia de contaminación los pone al
chorro del agua y los talla con el escobillon uno por uno
-Los que presentan una contaminación mayor se ponen a
remojar en una mezcla de agua/jabón/ cloro
Una vez que las pipetas o tubos contaminados se han remojando se enjuagan uno por uno
(si se cree necesario) en el chorro del agua
Si alguno de los tubos presentara algun tipo de marca con plumón se les talla con el sacate hasta borrarla en su totalidad .
Cuando ya se tallarón se enjuagan con agua a presión, se sacuden y se unden en una charola que contiene agua destilada , hasta que
se observe que no contienen jabón.
Las pipetas se sacuden y se colocan boca a arriba en una canastilla y los tubos boca a bajo .
Una vez que se termina el tiempo en la estufa se ponen los guantes adecuados y se saca la canastilla , se deja enfriar y se coloca el
material en su lugar.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-45
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 86 de 6
Nota: Observar que el material este en contacto con la mezcla agua/jabón/cloro
antes de lavar. Si no fue así hundir durante 30-45 minutos aproximadamente para
desactivarlos.
REGISTROS
No existen registros asociados a este procedimiento.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-45
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 87 de 6
INDICACIONES DEL LAVADO DE MATERIAL DEL EQUIPO VITROS ECiQ
1. -Inactivar con alcohol etílico durante 30 minutos
2. Enjuagar con agua de la llave
3. Dejar en
minutos.
una mezcla de agua-jabón al 2 % por aproximadamente 15
4. Enjuagar con abundante agua de la llave y posteriormente con agua
destilada.
5. Dejar boca-abajo para escurrir y secar.
6. Colocar el material en el lugar correspondiente.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-45
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 88 de 6
TABLA PARA PREPARAR MEZCLA CLORO-AGUA AL 1:10
LTS. AGUA
0.900
1.800
4.5
9.0
13.5
ml CLORO
100
200
500
1000
1500
VOL. FINAL
1 LT
2 LT
5 LT
10 LT
15 LT
TABLA PARA PREPARAR MEZCLA JABON-AGUA AL 2%
LTS. AGUA
0.980
1.960
4.900
9.800
10.780
11.760
ml JABON
20
40
100
200
220
240
REGISTROS
CAL-02-B
VOL. FINAL
1 LT
2 LT
5 LT
10 LT
11LT
12LT
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
Fecha: 05 de Diciembre 2011
Página 89 de 10
Procedimiento de Extracción Sanguínea
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: Enf. Martha
Concepción Jiménez Martínez
Nombre: Dra. Margarita L.
Medina Macías
Nombre: Dra. Dinora Aguilar
Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 1de diciembre 2011
Fecha: 5 de diciembre 2011
Fecha: 5 de diciembre 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 90 de 10
CAMBIO
Se detalla el procedimiento de
asepsia
Se ajusta el sistema para la toma de
muestras para la determinación de
grupo sanguíneo y serología.
Se agrega la captura en la bitácora
electrónica de cada donador.
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
08
5 de diciembre de 2011
08
08
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 91 de 10
Una vez que al candidato a donación se le ha realizado la toma de la muestra (Ver
procedimiento
CAL-43) y cumple con las especificaciones publicadas en el área se procede así:
La Enfermera administrativa recibe del área de recepción la Historia clínica de candidatos a donación (cuando
el procedimiento es manual, también el formato M-3-0-10-a y b), la Ficha de Identificación del donador,
formato M-3-0-23, las etiquetas que salen del sistema de cómputo (en procedimiento manual se usa la etiqueta
M-3-0-30), Y hoja de resultado de Biometría Hemática.
De la Historia clinica de candidatos a donación observa el nombre completo del donador, lo llama y le
indica que pase a la sala donde se le realizará recolección sanguínea. Verifica que coincida
Identificación Oficial con el donador y los datos de la Historia Clínica
Las enfermeras solicitan al donador le indique en que brazo le fue tomada la muestra, le pide se
acomode en el reposet
Se le muestra al donador que el material que se va a utilizar esta cerrado , esteril y nuevo. Se le dá a
leer el folleto informativo: El que tenga un amor ….. Que lo cuide.
Las Enfermeras verifican el nombre del donador de la Historia Clínica y Número de Unidad asignado,
coloca las etiquetas en los tubos, lila para la determinación de grupo sanguíneo y rojo para la
serología (ó transcribe los datos a las bolsas cuando el sistema es manual)
La enfermera que realiza la flebotomía corrobora que los datos del donador sean correctos verificándolos con
la identificación con fotografía. Coloca el torniquete en el brazo, identifica la vena en donde se realizará la
flebotomía y realiza el procedimiento de asepsia en el siguiente orden: jabón antiséptico, iodopovidona y
alcohol. Posteriormente realiza la flebotomía y se fija la línea al brazo con tela adhesiva, indica al donador
abrir y cerrar el puño de la mano durante el tiempo que dure la extracción sanguínea.
La pantalla y la alarma de la balanza indica el llenado adecuado de la bolsa (450 a 480 ml +/- el 10%
dependiendo de la bolsa que esté en uso), automáticamente se cierra el sistema y no deja pasar más sangre,
o se pinza la línea de extracción y se retira la aguja y la bolsa (se da máximo 10 minutos y si no se obtiene el
volumen deseado retira la aguja y la bolsa).
Las muestras sanguíneas se tomarán dependiendo de la bolsa que esté en uso al inicio o al final de la
extracción, respectivamente. Primero se toma la muestra del tubo con el tapón color lila (grupo sanguíneo) y
luego el tubo de tapón color rojo o amarillo (serología).
Se pinza la línea y se retira la aguja, colocando inmediatamente una torunda de algodón seca, dando indicación
al donador de que permanezca acostado con el brazo suavemente doblado sin hacer presión hasta que le den la
indicación de levantarse. La enfermera que retiró la aguja sella y corta la línea de la misma así como la línea del
vacutainer, depositando el material punzocortante en el contenedor de RPBI. Anota la hora de inicio y término
del sangrado. Homogeniza la línea 2 veces y en el sellador dieléctrico se realizan las secciones para los pilotos
para su uso en el laboratorio. Se coloca la bolsa en el refrigerador (Temperatura 1 a 6°C) para que el personal
de laboratorio la traslade al mismo.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
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La enfermera da las indicaciones a los donadores de permanecer acostados aprox. 10 minutos. Coloca parche adhesivo
en el sitio de la flebotomía y vendaje ligeramente compresivo en el área. Entrega etiqueta de autoexclusión al donador
(ó talón en sistema manual) Para que de acuerdo a lo que leyó del folleto marque lo que considere si su sangre es
segura “si o no”. Pregunta al donador como se siente:
Si
¿Se siente
bien?
No
Se suspende la extracción si estuviera en este
proceso e inmediatamente se avisa al médico
responsable del área quien dará indicaciones
para el manejo del evento
Le indica que se puede levantar y mantenga doblado el brazo durante 20 minutos más, deposite la etiqueta en el
buzón y pase a tomar un refrigerio para posteriormente pasar a recepción y registrar su hora de salida, pedir su
comprobante de donación con la trabajadora social (ver procedimiento CAL-19) , el cual se imprime del sistema de
cómputo (o comprobante con formato M-3-0-25, cuando se emplea sistema manual). Despide al donador y da la
gracias.
La etiqueta (o talón, en procedimiento manual) de autoexclusión, permite al donador,
informar si considera que su sangre es segura o no es segura
SI
La enfermera llena la Bitácora CAL-46 A
(Disponentes y eventos adversos) con los datos
de los donadores y coloca la etiqueta de
autoexclusión en el ángulo superior izquierdo de la
ficha de identificación del donador
¿Mi sangre
es segura?
no
Las enfermeras registran la Autoexclusión y el Producto
no Conforme por defecto de recolección en la bitácora
CAL-46-B.
Colocan la etiqueta de Producto No Conforme
inmediatamente en la bolsa de sangre total (etiqueta
fluorescente) ; Notifican al químico responsable y al
personal de fraccionamiento para que le de el manejo
de producto de conforme.
Al final de la jornada, las enfermeras registran en la Bitácora 46-A los datos de todos los
donadores del día y eventos adversos a la donación (en caso de que se presenten). Captura
los datos en la bitácora electrónica de cada donador y entrega los documentos de los
donadores efectivos al médico asignado.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
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VIGILANCIA MÉDICA
En cuanto a la permanencia de los médicos en el área de selección de
disponentes se determina lo siguiente:
1. Durante el procedimiento de toma de muestra, extracción de sangre total y
aféresis cualquier reacción adversa será atendida de manera inmediata por
la persona que realiza el procedimiento. (enfermera o químico)
2. La enfermera o químico, avisará al médico.
3. Los médicos deben permanecer en el área, durante los procedimientos
mencionados.
4. cuando algún médico requiera ausentarse del área, avisará y encargará a
otro médico para que esté pendiente de los donadores.
BITÁCORAS Y FORMATOS RELACIONADOS A ESTE PROCEDIMIENTO
CAL-46-A
BITACORA DE DISPÓNENTES Y EVENTOS ADVERSOS A LA DONACIÓN
Los rubros que contiene la Bitácora CAL-46-A, son los siguientes:
FECHA
Numero de
Donadores
Sexo
Femenino
CAL-02-B
Masculino
HORA DE
INICIO
HORA DE
TERMINO
AUTOEXC
LUSION
No de
UNIDAD
OBSERVACIONES
Y
EVENTOS
ADVERSOS A LA
DONACIÓN
ENFERMERA
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
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BITÁCORA DE REGISTRO DE PRODUCTO NO CONFORME
Los rubros que contiene la Bitácora CAL-46-B, son los siguientes:
FECHA
Numero de
unidad
NOMBRE
DONADOR
CAUSA DE LA NO
CONFORMIDAD
NOMBRE Y FIRMA DE
ENFERMERA QUE
ENTREGA
NOMBRE Y FIRMA DE LA
PERSONA DEL
LABORATORIO QUE
RECIBE
Los datos que solicita la Bitácora son los siguientes:
Fecha: se anota la fecha actual, del día en el se esta llevando a cabo el
procedimiento
Número de unidad: se anota el número que se asignó en toma de muestra y
que se encuentra en el extremo superior derecho de la ficha de Identificación
con formato M-3-0-23
Nombre del Donador: se anota el nombre del donador que aparece en la parte
superior de la Historia Clínica y que coincide con el número de unidad que
tiene la etiqueta o talón de autoexclusión.
Causa de la No Conformidad: Se detalla el motivo por el cual no cumple con
los requisitos del producto.
Nombre y firma de la Enfermera que entrega: Se anota el nombre y la firma de
la enfermera quien detectó el producto no conforme.
Nombre y firma del personal de laboratorio que recibe: Se anota el nombre y la
firma de la persona del laboratorio que recibe el producto no conforme.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Talón de autoexclusión se muestra a continuación:
Talón del sistema informático de
Banco de Sangre
Talón sistema Manual
El Talón de autoexclusión se debe llenar de la siguiente manera:
DESPUES DE QUE HAYAS
DONADO SANGRE,
DEPOSITALO EN EL BUZON.
MI SANGRE:
SI ES SEGURA (Tacha aquí si consideras que tu
sangre SI es segura)
NO ES SEGURA (Tacha aquí si consideras que tu
sangre NO es segura)
No. DE REGISTRO: Número de unidad asignado
consecutivamente y se encuentra
en la bitácora de ingresos y
egresos.
Nota 1:
El Personal del laboratorio debe recoger las muestras
identificadas y el formato M-3-0-30 previamente lleno.
Nota 2:
Es importante revisar que la enfermera deje en
recepción los formatos M-3-0-10-a y b, M-3-0-23,
cupón de autoexclusión y el ticket de resultado de
toma de muestra.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 96 de 10
Nota 3:
En el Procedimiento CAL-19 se indica como llenar el
formato M-3-0-25.
Nota 4:
La bolsa de recolección de sangre no debe contener
burbujas mayores a 3mm de diámetro antes de ser
utilizada. Y debe de contener el sello que indica
PENDIENTE DE ESTUDIOS NO TRANSFUNDIR.
Nota 5:
Las unidades marcadas con autoexclusiones
implican su destrucción al llegar a la sección de
fraccionamiento
Nota 6:
ASEPSIA: En caso de que algún candidato a donar
sangre refiera ser susceptible a algún componente
que se utiliza para realizar al asepsia, previo a la
venopunción, se modificará el procedimiento,
eliminando la sustancia o solución a la que es
susceptible.
REGISTROS
CAL-46-A Bitácora de control de disponentes.
CAL-46-B.-La bitácora de control de autoexclusión
y efectos adversos a la donación , CAL-46-B No tiene Caducidad.
Cupón de autoexclusión se almacena en el archivo activo durante 5 años y en el
archivo muerto 5 años.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 97 de 10
ANEXO 1
CARACTERISTICAS DE REFRIGERIO A DONADORES
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-46
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 98 de 10
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
Fecha: 31 de Julio 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 99 de 22
Procedimiento de Control de Calidad en los
diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 100 de 22
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
31/07/03
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 101 de 22
En el área de Control de calidad aplicado a la sangre y sus componentes
obtenidos en el Banco de sangre del INP se realizan las siguientes pruebas:
A. CONCENTRADOS ERITROCITARIOS:
Determinación de Biometría hemática:
Conteo de leucocitos
Hematocrito
Hemoglobina
Control Bacteriológico
B. CONCENTRADOS PLAQUETARIO Y PLAQUETAFERESIS:
Determinación de Biometría Hemática:
Conteo de leucocitos
Cuenta de plaquetas:
Indices plaquetarios:
ADP
VPM
Control Bacteriológico
Determinación de pH
C. PRODUCTOS LEUCORREDUCIDOS:
Determinación de leucocitos residuales
Determinaciones acorde al tipo de producto estudiado
(Ver incisos A y B)
D. PLASMA FRESCO CONGELADO:
Determinación de Factores de Coagulación:
Factor I
Factor VIII
Factor IX
Determinación de proteínas totales
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
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E. PLASMA DESPROVISTO DE FACTOR:
Determinación de Factor IX
Determinación de Proteínas Totales
F. CRIOPRECIPITADOS:
Determinación de Factor I
Determinación de Factor VIII
Este análisis se realiza en 8 productos (8 CE, 8 CP, 8 PFC, 8PSF, 8 GAH) de la
población captada mensualmente y en todo producto anormal.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 103 de 22
CONTROL DE CALIDAD DEL CONCENTRADO ERITROCITARIO
El Químico de Control de calidad toma al azar el 1% o 8 Unidades (lo que sea mayor ) de los Concentrados eritrocitarios del mes en cuestión
obtenidos del refrigerador donde se resguardan para ser utilizados
Se colocan las bolsas que contienen el CE en la campana de extracción y se Identifica un tubo por cada producto con el # de registro que
presenta la bolsa que contiene el C.E. a analizar
Se coloca la bolsa que contiene el CE en agitación aproximadamente de 10-15 min. con una velocidad de 100- 120 RPM ( es importante que
la temperatura de la bolsa no suba demasiado).
La bolsa contiene 2 lineas. la que fue utilizada para realizar la extracción de la sangre y la otra es la que unía a las demás bolsas. Esta última
es la que se purga.
La homogenización entre el CE que contiene la bolsa y el que se encuentra en la linea es muy importante por que esta linea sera la vía de
extracción de la muestra. Se toma la punta de la linea de la bolsa con las pinzas de rodillo y se purga (se mueve la pinza en dirección de la
bolsa, para dejar pasar todo el CE que contiene y sin quitar la pinza se agita la bolsa sosteniendola en la palma de la mano) este proceso de
purga y agitación se realiza varias veces.
Se utiliza el conector esteril ( TERUMO STERILE TUBING WELDER TSCD) para unir una bolsa de transferencia con el fin de evitar habrir el
sistema y contaminarlo.
BOLSA DE TRANSFERENCIA
De la Bolsa de transferencia que contiene
aproximadamente con 50 ml se toma una
muestra para el estudio
Se analizan las muestras en el Sysmex
KX-21N observando los resultados obtenidos
en la muestra y el tubo de leucocitos,
hemoglobina y hematocrito.
De la Historia clinica del donador se buscan
los valores iniciales de leucocitos,
hemoglobina y hematocrito para establecer la
eficiencia del producto.
Todos los datos obtenidos durante este
proceso se escriben en la bitácora de Control
de Calidad CAL-47-A y se anexa el ticket
obtenido del Sysmex KX-21N y se escriben
los datos indicados en la bitácora de Control
de Calidad Bacteriológico CAL-47-B
Los CE analizados se mandan al laboratorio
de bacteriología junto con el formato M-3-106-a o el F-A-13-16-06 y
la bitácora CAL-47-B para que el personal de
bacteriología firme de recibido el producto.
Los resultados de bacteriología son enviados
al Jefe del banco de sangre y el Químico de
control de calidad los pasa a la bitácora
CAL-47-A
CAL-02-B
BOLSA ORIGINAL CON EL
VOLUMEN REMANENTE:
se envia al servicio de bacteriologia
para su cultivo.
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Curva de actividad para dosificación de FACTORES en el equipo ORGANON
TEKNIKA COAG-A-MATE
Muestra biológica:
 Estándar liofilizado o
 Pool de plasmas citratados (mínimo 10)
Reactivos:






Sustrato liofilizado deficiente en factor VIII
Sustrato liofilizado deficiente en factor IX
Tromboplastina parcial activad
Trombina
Cloruro de clacio 0.025M
Buffer veronal (Owren)
Material:
 Micropipetas de 50, 100, 200 y 1000 µl
 Cubeta de plástico para el equipo de coagulación
 Gradilla metálica en cubeta de hielo
Condiciones:
 Sustratos, reactivos, controles y muestras de trabajo
mantenerlos en baño de hielo
 Sistema de reacción a 37°C
Nota: el pool de plasmas se obtiene de donadores, se recomienda que sean
mujeres (mayor concentración de factor VIII y/o IX).
En caso de no correr la curva el mismo día de la toma de muestra, se mantiene a 35°C hasta por un año.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CURVA DE ACTIVIDAD O CONCENTRACION
Tubo 1(dilución 1/5)
Se adiciona 800microlitros de Buffer + 200microlitros de la muestra
Tubo 2 (dilución 1/10)
Se adiciona 500microlitros de Buffer + 500microlitros de la muestra del Tubo 1
se quitan 500microlitros después de homogenizar para que contenga la misma
cantidad que los demás.
Las diluciones utilizadas para la calibración de la curva de Fibrinogeno son las
siguientes:
Se adiciona 200microlitros de la estándar o control (≥360mg%) + 800microlitros de
Tampón Owren
Tubo 2 (dilución 1/10)
Se adiciona 100microlitros de la muestra+ 900microlitros de Tampón Owren
Se adiciona 100microlitros de la muestra + 1.9ml de Tampón Owren
Se adiciona 100microlitros de la muestra+ 2.9ml de Tampón Owren
Reactivos para reconstituir para la curva de Factor VIII, IX y Fibrinogeno:
STA Factor IX se reconstituye en 1ml de agua destilada.
Factor VIII Deficient plasma se reconstituye en 1ml de agua destilada.
Trombina se reconstituye en 5ml de agua destilada.
PTT Reagent se reconstituye 30min. antes de ser utilizado.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Patrón de Fibrinógeno se reconstituye en 1ml de agua destilada.
Coagulación
La Prueba de coagulación se realiza para los siguientes productos:
Al Plasma fresco congelado se le realiza Factor VIII, IX y Fibrinógeno.
Al Plasma sin factor se le realiza Factor IX.
A los Crioprecipitados se les realiza Factor VIII y Fibrinógeno.
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CURVA DE CALIBRACIÓN
CAL-02-B
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Código: CAL-47
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MUESTRA
Cuando la muestra que se va a analizar es un Crioprecipitado se reconstituye con
15ml de solución salina todo el crioprecipitado, se agita durante 15minutos y se
toma una alicuota y diluye con diluyente o tampón 1:5 o 1:10
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
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A continuación se describe el manejo del Citometro:
CAL-02-B
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Código: CAL-47
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CAL-02-B
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Código: CAL-47
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CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-47
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El formato M-3-1-06-a se llena de la siguiente manera:
En el recuadro vacío del lado superior izquierdo se anota el numero de la unidad
que se encuentra en la etiqueta de la bolsa del producto.
El grupo:
Grupo sanguíneo del paquete.
El tipo de producto: Hemoderivado enviado (CE, CP, Plasma, etc.)
Servicio :
Servicio que solicita el análisis “Banco de sangre”.
Fecha:
Día, mes y año en que se solicita el análisis.
El formato F-A-13-16-06 se llena de la siguiente manera:
Dependencia:
Servicio :
Fecha:
Institución que requiere el análisis “ INP ”
Servicio que solicita el análisis “Banco de sangre”.
Día, mes y año en que se solicita el análisis.
En el recuadro vacío del lado superior izquierdo se anota el número de la unidad
que se encuentra en la etiqueta de la bolsa del producto.
El grupo:
Grupo sanguíneo del paquete.
El tipo de producto: Hemoderivado enviado (CE, CP, Plasma, etc.)
La bitácora de Control de calidad de Bacteriología CAL-47-A
siguiente manera:
se llena de la
Fecha: Día en que se realiza el control de calidad.
Procedencia: Institución de donde se manda realizar el análisis.
Registro: # Unidad
Producto: Tipo de hemoderivado para analizar.
CAL-02-B
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Código: CAL-47
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Anticoagulante: Anticoagulante que contiene la bolsa cuando se realiza el
sangrado, se encuentra especificado en la etiqueta del hemoderivado.
RPM : Velocidad a la que fue fraccionado el hemoderivado (Bitácora de
fraccionamiento)
T°C:Temperatura a la que fue fraccionado el hemoderivado (Bitácora de
fraccionamiento)
Fecha de caducidad del producto: Día, mes y año en que caduca el
hemoderivado esta especificado en la etiqueta.
Hemólisis: Cuando se realiza el conteo en los CE se requiere saber si el
hemoderivado se encuentra hemolizado o no.
pH: Cuando se realiza conteo en CP se requiere conocer el pH
Peso bruto: Se requiere conocer el peso del hemoderivado (Bitácora de
fraccionamiento)
Volumen (ml): Se requiere conocer el volumen del (Bitácora de
fraccionamiento)
PLQ/microlitros: Cuando se realiza conteo en CP (ticket del Sysmex)
PLQ/U: Cuando se realiza conteo en CP (Dilución)
Leucocitos/microlitros: Cuando se realiza conteo en CP y CE (ticket del
Sysmex)
Leucocitos/U: Cuando se realiza conteo en CP y CE
Hematocrito inicial: Cuando se realiza conteo en CE (ticket del Sysmex)
Hematocrito final: Cuando se realiza conteo en CE (ticket del Sysmex)
Control bacteriológico:.Resultados del cultivo en el Laboratorio de
Bacteriología.
Factor VIII %: Se obtiene % de actividad del factor de coagulación en Plasma
y crioprecipitados
Factor IX %: Se obtiene % de factor de coagulación del Plasma y
crioprecipitados
Fibrinógeno (mg/dl) Se obtiene la concentración en mg de Fibrinógeno en
PFC y GAH.
La bitácora de Control de BacteriologiaCAL-47-B se llena de la siguiente manera:
Fecha: Día en que se realiza el control de calidad.
Registro: # Unidad
Producto: Tipo de hemoderivado para analizar.
Grupo: Grupo sanguíneo del hemoderivado (etiqueta del producto)
CAL-02-B
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Código: CAL-47
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Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del donador o
paciente.
Entrega: Nombre completo de la persona que esta solicitando el análisis.
Recibe: Fecha en que recibe y firma de quien lo recibe.
REGISTROS
El formato F-A-13-16-06 se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en
archivo muerto.
El formato M-3-1-06-a se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en
archivo muerto.
La bitácora CAL-47-A se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en
archivo muerto.
La bitácora CAL-47-B se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en
archivo muerto.
Laboratorista:
____________________________________
Laboratorista:
____________________________________
Suplente:
____________________________________
Suplente:
____________________________________
Suplente:
____________________________________
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-50
Fecha: 23 de junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de Aféresis
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: Dra. DORIS
LORDMENDEZ JACOME
Nombre: Dra. M. LETICIA
MEDINA MACÍAS
Nombre: Dra. DINORA
AGUILAR ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:23 de junio 2011
Fecha:23 de junio 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-50
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAMBIO
a) Se modifica el nombre de la
bitácora CAL-46 B (Bitácora de
registro de producto no
conforme)
b) Se agregan lineamientos
incluyendo las características
del producto conforme de
Aféresis.
c) Se agrega el formato Control
diario de procedimientos de
aféresis
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
04
23 de junio 2011
Banco de Sangre
Código: CAL-50
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Instituto Nacional de Pediatría requiere la donación de plaquetas en el Banco de
sangre para el diferente aporte transfusional que se lleva a cabo en el mismo, la
cantidad de donadores al procedimiento de aféresis dependerá de la demanda en el
Banco de Sangre.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-50
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El candidato a donador solicita a la Trabajadora social una cita para donar plaquetas
Se presenta el donador el día de su cita, presentando su identificación oficial con fotografía y vigente, pasa a recepción en
donde se registra (Ver procedimiento CAL-20); y se identifica el formato M-3-0-23 de acuerdo al procedimiento de aféresis que
se vaya a realizar (PLAQUETAS, GRANULOCITOS, CÉLULAS TALLO)
Se le realiza la valoración de venas y signos vitales (Ver procedimiento CAL-30), toma de muestra (Ver procedimiento CAL-43) y
la valoración medica (Ver procedimiento CAL-40).
Si el donador se encuentra apto el Médico le proporciona la información sobre el procedimiento y lo ingresa a la sala de Aféresis y
solicita el número de unidad y las etiquetas correspondientes (Ver procedimiento CAL-20) pegando una etiqueta en la hoja de
identificación y desprende otra para que entrega a trabajo social para que sea pegada en el comprobante de donación y anota en
forma manual el motivo de la donación (control interno de trabajo social . Si por necesidades del servicio o por ser producto
dirigido se programará una cita registrándose en la Bitácora de Citas de Aféresis CAL-50-B se le entrega recordatorio CAL-50-C
de cita y se le dan indicaciones generales previas a la donación.
Cita
programada
no
si
Cuando el candidato acude a su cita de donación, el
médico recaba la documentación con resultados en el
área de Serología, y verifica resultado de marcadores
serológicos
El médico entrega al área de
enfermería la documentación
correspondiente, para inicio del
proceso de aféresis
si
Serologfía
Negativa
no
Si alguna(s) de las pruebas del candidato a
donador presenta un resultado REACTIVO se
descarta como donador y el área de Serología
notifica al Medico para que se solicite 2da muestra
para realizale la prueba confirmatoria, y una vez
que se tiene el resultado se anexa la hoja de
resultados en su documentacion y el Medico le
informa el motivo de rechazo
CAL-02-B
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Código: CAL-50
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La Enfermera llama al candidato a donación por su nombre completo, le solicita su identificación y le
indica que pase a la sala donde se le realizará el proceso, se le muestra el equipó que será utilizado y
se abre en su presencia haciendo énfasis en que el equipo esta cerrado , estéril y es desechable.
Se le pide al donador que pase al baño y regrese al área para iniciar la donación .
Aproximadamente 30 minutos previos al inicio del procedimiento de aféresis, la enfermera o el médico
encargado del procedimiento administrará de manera profiláctica 2 tabletas de carbonato de calcio
(500mg/tab) por vía oral a cada donador. Se reforzará la información a los donadores sobre los
síntomas iníciales de hipocalcemia por parte del personal médico y de enfermería para asegurar la
comprensión de dicha información.*
Se procede a instalación y purgado de equipo (cebado) (Ver manual del operador del separador en
uso)l e inicia el proceso de donación de Aféresis registrando la información en la hoja de control de
procedimientos de aféresis Bitácora CAL 50-A
Al terminar el proceso de Aféresis, se toman signos Vitales y se colocan parches en las zonas de venopunción
Se le entrega al donador el folleto “El que tenga un amor que lo
cuide” y el talón de autoexclusión confidencial
si
AUTOEXCLUSIÓN
no
La Enfermera notifica
al médico del área de
aféresis, y se
registra en la
Bitácora CAL 46-B
y se maneja como
producto No
conforme (ver
procedimiento CAL09 )
Se le pide al donador pase al comedor para ingerir su refrigerio y al terminar pasar a trabajo
social quien entrega el comprobante de donación y proporciona información del horario para
recoger resultados de exámenes realizados.
Al terminar de retirar el equipo la enfermera identifica las unidades del producto obtenidas (2
bolsas), la ficha de identificación. Una de las etiquetas se pegan en la Bitácora CAL-50-a de
la hoja que corresponde al procedimiento que se lleva a cabo
NOTA: La identificación de las bolsas es provisional hasta la identificación final en Serología .
(Ver CAL- 32 )
Se anota en cada una de las bolsas el número de Aferesis (obtenido de la bitacora CAL-50-A), la
cantidad de concentrados plaquetarios (estimados por la máquina) y el volúmen.
La enfermera lleva las bolsas del producto al área de Inmuno-Hematología – receptores.
Se colocan en el refrigerador correspondiente y se avisa al personal del área .
Se entrega al área de Serología la Historia clinica, la ficha de identificación, el talón de
autoexclusión, los resultados de la biometría PRE.
Al terminar el procedimiento la enfermera registra la información en el sistema informático de
CAL-02-B
banco de sangre .
Banco de Sangre
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*El contenido de la plática de información que deben impartir el personal médico y de
enfermería sobre los potenciales síntomas iníciales de la hipocalcemia secundaria a
efectos adversos por la anticoagulación con citrato son:
Adormecimiento peribucal, vómitos, diarreas y menos frecuentemente contracturas.
Se anexa a la Historia Clínica el siguiente control diario de procedimiento de aféresis:
LINEAMIENTOS O POLÍTICAS:
1.- La información adicional que se anexa a la hoja de identificación del donador no
deberá eliminarse (desprenderse o borrarse).
2.La obtención de componentes celulares por métodos de aféresis deberán tener
como propósito cubrir la deficiencia específica de dicho componente en un paciente.
3. La realización de los procedimientos para la obtención de plaquetas, eritrocitos y
plasma se justificara en base a las reservas y demandas de dicho componente para
cubrir las necesidades de los pacientes.
4.- Los procedimientos de aféresis para la obtención de leucocitos (granulocitos y/o
células progenitoras hematopoyéticas deberá estar justificada por una solicitud de
interconsulta del servicio y el médico del servicio responsable del tratamiento del
paciente
CAL-02-B
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Código: CAL-50
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5- Los donadores de componentes celulares obtenidos por aféresis deberán cubrir
todos los requisitos normativos de selección.
- Para plaquetas.
Accesos venosos adecuados.
Cuenta plaquetaria mínima de 150x103
No ingesta de medicamentos que contengan acido acetilsaliciclio en
las ultimas 72 h (única toma) o 7 días (tomas repetidas).
- Para leucocitos (granulocitos, neutrófilos).
Accesos venosos adecuados.
Movilización 12 h previas al procedimiento con esteroides y/o factor
estimulante de colonias).
Por los menos dos cuentas leucocitarias con diferencial previas al
procedimiento que permitan valorar la respuesta al estimulo de la movilización.
Para eritrocitos (dobles rojos):
Donador: Genero. Masculino.
Peso: ≥ 65 Kg.
Talla: ≥ 165 cm
Hematocrito: ≥45%
Grupo: Dependerá de las necesidades de pacientes y/o del
faltante de las reservas del banco de sangre.
Para plasma:
Donador: genero: indistinto.
Peso: ≥ 50 Kg.
Proteínas séricas: ≥ 6 g/mL
Dependerá de las necesidades del servicio.
6.-Los concentrados de leucocitos y plaquetas obtenidos al final de cada procedimiento
deberán cumplir con los siguientes requisitos para ser considerado como producto
conforme:
Componente:
Leucocitos
(Neutrófilos)
Volumen (mL
Cuenta celular mínima
CAL-02-B
variable
1x1010 neutrófilos
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Plaquetas
Volumen (mL)
200-250 mL
Cuenta mínima de plaquetas
3.0x1011 de plaquetas
Plasma
450-750 mL
Proteínas 60g/L
FVIII 1UI/mL
Fibrinógeno 160 mg/dL
12 meses congelado
Células progenitoras
≥ 50 mL
≥ 2x106/kg de peso de receptor de
células CD34+ Hematopoyéticas
(Alogenico)
≥1.5x106/Kg de peso receptor de células
CD34+
(Autólogo)
Para todos los componentes sanguíneos:
Integridad de los contenedores.
Identificación de la unidad con: Nombre del donador
Número de unidad/Número de aféresis.
Fecha de obtención.
Tipo de componente.
Volumen.
Talón de autoexclusión con respuesta SI ES SEGURA. (EXCEPTO DONADORES
PEDIATRICOS)
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7.- Los componentes celulares obtenidos por aféresis que no cumplan con los criterios
de conformidad deberán ser evaluados conjuntamente con el personal médico y de
laboratorio de banco de sangre cuando el componente sean plaquetas, glóbulos rojos o
plasma Y el coordinador de trasplantes cuando se trate de Células progenitoras
hematopoyéticas, en base a los siguientes criterios:
 Cuando la dosis no sea la óptima se considerara la posibilidad de la realización
de otro procedimiento para poder alcanzar la dosis sumando la dosis anterior.
 El volumen y la concentración de plaquetas sea equivalente como mínimo a un
concentrado de Plaquetas obtenido de sangre total y en el caso de eritrocitos y/o
plasma fresco pueda cubrir una dosis de 10 mL/Kg de peso.
La Bitácora de Aféresis CAL-50-A se llena de la siguiente manera:
Procedimiento:
Anotar el procedimiento realizado:
Plaquetaféresis
Después de anotar el procedimiento poner A (significa Aféresis) / número consecutivo
de la bitácora CAL-50-A / los dos últimos números del año.
Fecha:
Equipo:
Flujo:
Día, mes y año en que se realiza la aféresis.
Indicar el tipo de máquina usada.
Indicar el tipo de flujo usado para la aféresis:
Continuo
Discontinuo
I. DATOS DEL RECEPTOR
Nombre:
Apellido paterno, Apellido materno y
Nombre(s) del paciente que requiere el
producto.
Cama:
# de la cama donde
hospitalizado el paciente.
Grupo sanguíneo:
Tipo de sangre del paciente que va a recibir el
producto.
Diagnostico:
Diagnostico principal del paciente para el que
se realiza la donación.
CAL-02-B
se
encuentra
Banco de Sangre
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II. DATOS DEL DONADOR
Nombre:
Apellido paterno, Apellido
Nombre(s) del donador.
materno
y
Edad:
# de años que tiene el donador al momento
de realizar el procedimiento.
Grupo sanguíneo:
Tipo de sangre del donador
Parentesco:
Relación que existe entre el paciente y el
donador (Amistad, familiar, etc).
Peso
El peso del donador expresado en Kg
H.I.V., H.C.V., HbsAg, R.P.R, BRUCELLA, OTROS.
Resultados de las pruebas realizadas al
donador por el Laboratorio del Banco de
sangre tomado de la Historia Clínica.
Nombre y firma de quien realizo las Pruebas
Sello o firma de quien realizo el análisis de las
pruebas.
III. DATOS DEL PROCEDIMIENTO
Hora de inicio:
Hora de terminación:
Responsable:
Hora en que se inicio el procedimiento.
Hora en que se finalizó el procedimiento
Nombre y firma de la enfermera que realiza
el procedimiento.
Otros datos que se registran en la bitácora CAL-50-A anotados por la enfermera
durante el procedimiento:
VELOCIDAD VELOCIDAD
TIEMPO
DE
DE
**
SANGRE *
PLASMA *
CAL-02-B
VOLUMEN
DE
SANGRE *
VOLUMEN
DE
PLASMA *
GOTAS DE
ACD **
SIGNOS VITALES
Y OBSERVAC. ***
Banco de Sangre
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*. Obtenidos directamente de la máquina.
**. Al momento de llenar el registro.
***. Se registran antes, durante y después del procedimiento.
Volumen procesado de sangre:
Cantidad de sangre que se proceso al finalizar
el procedimiento, obteniendo este dato
directamente de la máquina, referido como
END-POINT.
Anticoagulante:
Cantidad de anticoagulante que se utilizo
durante el procedimiento.
Solución salina:
Cantidad de solución salina que se utilizo
durante el procedimiento
NOTA: La enfermera que realizo el procedimiento calcula las cantidades de Solución
salina y Anticoagulante mediante la inspección visual de las bolsas; resta al volumen
inicial marcado en las bolsas el volumen contenido en las bolsas al final del
procedimiento (Las bolsas son graduadas).
IV. RESULTADOS
Volumen de la cosecha:
DATOS DE
BIOMETRIA HEM.
PLAQUETAS
LINFOCITOS
GRANULOCITOS
HEMATOCRITO
OTROS
CAL-02-B
MUESTRA
PRE
Dato que es obtenido por la enfermera al
pesar cada bolsa que contiene el producto y
restarle el peso de la bolsa vacía (40 ml)
MUESTRA
POST
MUESTRA DE LA
COSECHA
COSECHA FINAL
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Código: CAL-50
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Datos obtenidos de:
Muestras del Donador (PRE Y POST)
Equipo
automatizado
de
biometría
hemática
Área de Control de Calidad
Médico que supervisa el procedimiento
Muestra de la Cosecha
Cálculo de la cosecha final
Nombre y firma del Médico que
realizo el procedimiento:
Firma de quien realizó el
análisis de la cosecha final .
La Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B se muestra a continuación:
DONADOR
FECHA Y
HORA
NOMBRE
TELEFONO
FECHA DE
ESTUDIO
PROCEDIMIE
NTO
PACIENTE
MOTIVO DE
NOMBRE
LA
DONACIÓN
OBSERVACI
ONES
La Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B se llena de la siguiente manera:
DONADOR
Fecha y hora:
Día, mes y año de la cita de donación. Y
Hora y minutos en que se da la cita de
donación.
Nombre :
Nombre(s) del donador.
materno
y
Teléfono:
# telefónico del donador.
Fecha del estudio:
Día, mes y año en que se le realizo los
estudios de Serologia.
PACIENTE
Procedimiento:
Procedimiento a realizar
Nombre:
Nombre(s) del paciente.
CAL-02-B
materno
y
Banco de Sangre
Código: CAL-50
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Motivo de la donación:
Diagnostico por el que el Médico justifica el
procedimiento de plaquetaféresis.
Observaciones:
Anotar cualquier observación relacionada al
procedimiento
(Cancelado,
Suspendido,
Reprogramado, No acudió donador, etc.)
El recordatorio de cita de aféresis CAL-50-C es el siguiente:
Favor de permitir el paso al
Sr. (a): Nombre completo del candidato a donar plaquetas.
DONADOR (B) DE PLAQUETAS
El día: Fecha de cita de donación.
A las: Horario de la cita de donación.
Fecha de Estudio: Fecha en que se tomaron muestras para estudio.
Al reverso deberá contener la siguiente información:
CAL-02-B
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Código: CAL-50
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Indicaciones.
El día anterior a la cita:
 No comer de preferencia alimentos con grasa
 No tomar bebidas alcohólicas con un mínimo de 72 hrs previas a la
donación.
 No tomar medicamentos con un mínimo de 72 hrs previas a la
donación.
 Cenar sin grasa y no tomar leche
 Aseo Corporal
 Dormir como mínimo 6 horas
El día de la cita:
 Puede tomar jugo y fruta
 Usar ropa holgada y con manga corta.
La Bitácora de Entrega y Recepción de Historias clínicas CAL-50-D se llena de la
siguiente manera:
Fecha:
Día, mes y año en que se entregan las
Historias clínicas al personal de grupos.
# de Historias Clínicas Totales:
# final de Historias clínicas del día (donación
de sangre total)
Intervalo de Unidades:
# de Plaquetas:
CAL-02-B
# de Unidad inicial y # de Unidad final.
# de donadores de plaquetas del día.
Banco de Sangre
Código: CAL-50
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Firma de quien entrega:
Firma del Médico que entrega al personal de
grupos la bitácora.
Firma de quien recibe:
Firma del personal de grupos que recibe y
verifica que se encuentren el # de Historias
clínicas que se especifican en la bitácora.
Observaciones:
Comentarios con respecto a la entrega de la
documentación.
Nota 1: Se requiere de 2 venas gruesas para que se lleve a cabo la Aféresis.
Nota 2: Existen 3 maquinas Separadoras de células sanguíneas TRIMA para realizar el
procedimiento de aféresis de plaquetas.
*Nota 3: Si las plaquetas se necesitan para una urgencia, se realiza la Aféresis sin
tener los resultados de las Pruebas serológicas, pero no se liberan las plaquetas hasta
que se tienen los resultados de las mismas.
NOTA: ENTREGA DE RESULTADOS DE SEROLOGIA Y COMPROBANTE DE
DONACIÓN LO REALIZA EL MÉDICO COORDINADOR O LA ENFERMERA Y
SOLICITA QUE FIRMA LA BITACORA DE REGISTRO DE ENTREGA DE
RESULTADOS.
FECHA: En que recibe los resultados
NOMBRE: Del donador de aféresis
FIRMA: Del donador de aféresis
COMENTARIOS: Comentarios que el donador quiera aportar
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-50
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REGISTROS
Control de procedimientos de Aféresis CAL-50-A clínicas se almacenan durante 5 años
en archivo activo y 5 años en archivo muerto.
Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B se almacena durante 3 meses después de que
se termina el llenado de la última hoja.
Recordatorio de cita de aféresis CAL-50-C se anexa a la historia clínica.
Bitácora de Entrega y Recepción de Historias clínicas CAL-50-D, se almacena durante
3 meses después de que se termina el llenado de la última hoja.
El CAL-50 A y las Historias clínicas se archivan durante 5 años en archivo activo y 5
Bitácora CAL-50-G De entrega de resultados
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-15
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
24/09/03
Banco de Sangre
Código: CAL-15
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 40 de 3
Una vez que al candidato a donar se le realizo la valoración médica (Ver
procedimiento CAL-40) y fue considerado apto en el área de toma de muestra sale
impresa la etiqueta para la Biometría Hemática. De donde se toma el Nombre
completo del donador y se corrobora con el de la Ficha de identificación del
candidato y se escribe en la Hoja de toma de muestra F-A-14-26 posteriormente
se pega la etiqueta en el tubo para la Biometría.
La Etiqueta de identificación es la siguiente:
Nombre completo del candidato a donador:
Fecha:
No. Toma:
Nombre de la Prueba:
Número de Toma de muestra:
La Etiqueta contiene los siguiente datos:
Nombre completo del candidato a donador:Apellido paterno, Apellido materno y
Nombre (s) del donador.
Fecha:
Día, mes y año en que se toma la
muestra
No. de Toma:
Número de candidato a donador, es
consecutivo y el Químico lo escribe
a mano
No. de Toma de muestra:
Número que se le asigna en Toma
de muestra.
Fecha:
Día, mes y año en que se toma la
muestra.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-15
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 41 de 3
REGISTROS
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-16
Fecha: 27 Junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 42 de 9
Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: Q.F.B. MARÍA
TERESA FLORES
CAMACHO
Nombre: M en C
GUILLERMO ESCAMILLA
GUERRERO
Nombre: DRA. DINORA
V. AGUILAR ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 7 DE OCTUBRE DE Fecha: 14 DE OCTUBRE
2009
2009
CAL-02-B
Fecha: 14 DE
OCTUBRE 2009
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 43 de 9
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se actualiza procedimiento y se
cambia nombre por Uso del
Equipo Automatizado para
Biometrías Hemática, se
modifican valores de leucocitos
3
27 de junio de 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 44 de 9
Una vez que el candidato a donador ha sido valorado por el personal de
enfermería (Ver Procedimiento CAL-30), se calibra el equipo Automatizado de
Biometría Hemática (Ver Procedimiento CAL-14), se le toma la muestra de sangre
(Ver Procedimiento CAL-43) y posteriormente se realiza el análisis
correspondiente de la siguiente manera:
El equipo Automatizado de Biometría Hemática se usa para el procesamiento de
la biometría hemática para determinar los niveles de plaquetas, hematocrito,
hemoglobina, etc. En muestras de sangre. El equipo permite obtener resultados
casi inmediatos y con ello decidir si las condiciones de la sangre son las
adecuadas para llevar a cabo la donación.
El equipo Automatizado de Biometría Hemática se opera de la siguiente manera:
TOMA DE MUESTRA
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 45 de 9
EL QUÍMICO Y/ O
LABORATORISTA ENCIENDE EL
EQUIPO AUTOMATIZADO DE
BIOMETRÍA HEMÁTICA
Verificar Niveles de Reactivos,
de Bote de Desechos ( RPBI) e
Hojas de impresión
Introducir Controles Bajo,
Normal y Alto verificar que
estén dentro del rango
especificado y checar la curva
de L J
Tomar ficha de identificación
de Donador ( M-3-0-23) del
Buzón de Valoración de
Disponentes ubicado en área
de recepción
Anotar # de registro y nombre
en el formato
M-3-4-10).
Colocar etiqueta emitida por
recepción en tubos lila para
BH (2), y tubo rojo si es mujer
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 46 de 9
Llamar al Donador por su Nombre,
verificando su identidad con su
credencial de elector o documento
oficial con fotografía
Realizar asepsia de la zona a
puncionar, aplicar
Torniquete y puncionar en
el antebrazo seleccionado
Colocar el tubo de Biometría
Hemática en el Rack o de
forma manual según sea el
caso en el equipo de
Automatizado de Biometría
Anotar resultados de BH en
formato M-3-4-10), anexar hoja
en la ficha de identificación de
donador y se coloca en buzón
de valoración Médica
Pegar las etiquetas con el # de
Unidad emitidas por recepción
correspondientes a cada tubo de
Donador cuando este ha sido
aceptado
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 47 de 9
ANALIZADOR DE BIOMETRÍA HEMÁTICA
SELECCIONAR
ADMINISTRADOR
ENCENDER
ANALIZADOR
CHECAR EL
BACKGROUND
Y METER
CONTROLES
EN MODO
ABIERTO
PONER
CONTROLES
TECLEAR QC
(CAL)
BAJO
MEDIO
ALTO
RESULTADO
IMPRESO CHECAR
CON TABLA DE
VALORES
QUE VIENE EN
LAOS CONTROLES
SELECCIONAR
ICONO
MUESTREADO
R CON EL
NUMERO DE
LOTE DE
CADA
CONTROL
INICIAR
SI
NO
SELECCIONAR
SISTEMA
CERRADO
EXPLORADOR
PONER
MUESTRAS EN
RACK
DONADOR
SELECCIONAR
ICONO DE
MUESTREADOR
AUTOMÁTICO DE
MUESTRAS E
INICIAR
CAL-02-B
OBSERVAR
PUNTOS EN
GRÁFICAS DE L-J Y
VERIFICAR QUE
ENTREN EN EL
RANGO
OBSERVAR RESULTADOS
EN PANTALLA E IMPRESO
VACIAR RESULTADOS AL
FORMATO M-3-4-10
ENGRAPAR RESULTADO
EN HISTORIA
REPETIR PROCESO
Y/O
VERIFICAR
REACTIVOS
Y/O
CAMBIO DE
CONTROLES
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 48 de 9
La aceptación o rechazo de un donador en cuanto a los valores en la Biometría
Hemática se debe de basar en la NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA21993 “Para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines
terapéuticos”.
DEPARTAMENTO DE BANCO DE SANGRE
VALORES MÍNIMOS PARA FLEBOTOMÍA EN DISPONENTES
ALOGÉNICOS.
Género.
Altitud sobre el
nivel del mar.
Masculino.
Hemoglobina.
0 a 1500 m.
1501 o más.
13.5 g/dL.
14.5 g/dL.
Femenino
Hematocrito. Hemoglobina. Hematocrito.
41 a 56%
44 a 56%
12.5 g/dL.
14.0 g/dL.
Leucocitos
Plaquetas
4.0 a 12.0
x103 μL.
150 a 450
x103 μL.
38 a 50%
40 a 50%
La tabla de valores debe permanecer a la vista del personal que realiza las biometrías hemáticas para su consulta.
Autorizado.
Dra. Dinora Aguilar Escobar.
Jefe del Banco de Sangre, I.N.P.
Bibliografía:
Proyecto de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-253-SSA1-2009 para la disposición de sangre humana y sus
componentes con fines terapéuticos
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993 para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines
terapéuticos.
Ruiz Argüelles, Guillermo J. Fundamentos de hematología 4ª edición, México, Editorial Médica Panamericana, 2009.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 49 de 9
Esta tabla debe encontrarse a la vista del personal que realiza las biometrías
hemáticas para que siga dichos criterios.
Bibliografía
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993
La información que contiene la hoja de resultados es la siguiente:
LEU
ERI
HB
HTC
VCM
HCM
CCMH
IDE
PLT
MPV
IDP
LIN %
MON %
GRA %
LIN #
MON #
GRA #
Leucocitos totales/microlitros
Eritrocitos
Hemoglobina
Hematocrito
Volumen Corpuscular Medio
Hemoglobina Corpuscular Medio
Concentración Media de Hemoglobina Corpuscular
Ancho de Distribución Eritrocitaria (Desviación Estándar
Plaquetas
Volumen Plaquetario Medio
Ancho de Distribución Plaquetaria
Porciento de Linfocitos
Porciento de Monocitos
Porciento de Neutrofilos
Linfocitos totales
Monocitos totales
Número de Neutrofilos
Nota 1: Los valores que se toman en cuenta para la donación son Hemoglobina,
Hematocrito, Leucocitos y Plaquetas. Los Histogramas de WBC, RBC y PLT son
para observar gráficamente los valores de dichas células.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-16
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 50 de 9
REGISTROS
Los Resultados que se observan en la hoja de resultados se reportan en el
formato M-3-4-10 y se engrapan en las formas M-3-0-23 se debe guardar durante
5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-19
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 51 de 6
Procedimiento de entrega del comprobante de donación
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: LIC. TS ANA
MARIA DORANTES CEH
Nombre: DRA.
MARAGARAITA LETICIA
MEDINA MACÍAS
Nombre: DRA. DINORA
AGUILAR ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:7 JUNIO 2011
Fecha: 7 JUNIO 2011
Fecha: 9 JUNIO 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-19
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 52 de 6
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se actualiza formato del comprobante
de donación de acuerdo al sistema
informático de banco de sangre
1
9/06/2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-19
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 53 de 6
Una vez que el donador ha realizado la donación de sangre o aféresis y ha ingerido su
refrigerio (Ver Procedimientos CAL-46 y CAL-50) se le solicita anote en la bitácora
de Registro de entrada y salida de donadores CAL-20-A su hora de salida y su firma,
sobre la misma línea en la que se registró al inicio de la donación, se le entrega su
Comprobante de donación, indicándole que venga por sus resultados de Serología y
Hematología en 8 días y personalmente (a partir de la fecha en que realizó la
donación), con una identificación con fotografía y vigente. El comprobante de donación
tiene una vigencia de 3 meses.
El formato de Comprobante de Donación de Sangre M-3-0-25 (manual) se muestra a
continuación:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-19
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 54 de 6
El formato de Comprobante de donación de Sangre M-3-0-25 (manual) se llena de la
siguiente manera:
Nombre del donador:
del donador.
Nombre:
del paciente.
Registro número:
Número de registro que el INP asigna al
paciente.
Servicio:
Área del INP donde fue solicitada la donación.
Fecha:
Fecha en que se entrega el comprobante de
donación.
Nombre:
Nombre de la Trabajadora Social.
Clave:
Clave de la Trabajadora Social.
Firma:
Firma de la Trabajadora Social.
Numero de unidad:
Número de unidad asignado en recepción una
vez que el donador se considera APTO.
Hora:
En que se entrega el comprobante.
El formato de Comprobante de donación de Sangre que se realiza en el sistema
informático del banco de sangre se muestra a continuación:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-19
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 55 de 6
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-19
Fecha: 9 junio 2011
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 56 de 6
El formato de Comprobante de donación de Sangre que se realiza en el sistema
informático de banco de sangre contiene lo siguiente:
No. Unidad:
Número de unidad asignado en recepción una
vez que el donador se considera APTO.
Fecha y Hora:
Fecha y hora en que
comprobante de donación.
Donador:
del donador.
del paciente.
Registro No.:
se
imprime
el
Número que el INP asigna al paciente.
Nombre:
Nombre de la Trabajadora Social que autoriza
Clave:
Clave de la Trabajadora Social que autoriza
Firma:
Firma de la Trabajadora Social que autoriza.
REGISTROS
Comprobante de donación de sangre (manual) M-3-0-25.
Comprobante de donación en el sistema informático de banco de sangre M-3-0-25
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
Fecha: 5 de Enero 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 57 de 15
Procedimiento de Registro a Disponentes
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: Mireya López
Mejía
Nombre: Dra. Margarita
Medina Macías
Nombre: Dra. Dinora V.
Aguilar Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 5 de Enero de 2012 Fecha: 5 de Enero de 2012 Fecha: 5de Enero de 2012
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 58 de 15
CAMBIO
 Se homogeniza el término
donador
en
todo
el
procedimiento en donde se
menciona.
 Se ajusta el diagrama de
proceso
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
06
5 de enero 2012
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 59 de 15
El departamento de Banco de Sangre lleva a cabo el registro diario de los
candidatos a donación que acuden a estudiarse, así mismo se encarga de hacer
un registro de todos los candidatos para llevar a cabo su rastreabilidad.
El día de la donación el candidato a donador presenta el folleto ¿Cómo solicitar
una cita para donar sangre? (Ver procedimiento CAL-11) para continuar de la
siguiente manera:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 60 de 15
El candidato a donador muestra el folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre? y la identificación con
fotografía vigente al oficial en turno como pase de entrada al Banco de Sangre y este entrega un portagafete y una
ficha con numeración consecutiva, se les solicita portar el gafete durante su permanencia en el Banco de sangre
La Trabajadora Social da una plática de inducción y sensibilización sobre los facto res de riesgo y el proceso de donación para todos
los candidatos a donadores y sobre la importancia de que la sangre donada sea segura (Ver anexo 2) y/o se les presenta un video
informativo.
Les proporciona una copia del consentimiento informado para que la lean y analicen su contenido ya que posteriormente si está n de
acuerdo lo firmarán o se aclaran dudas al respecto.
NO
SI
TS evalúa la situación del donador para decidir si le programa cita por no
estar registrado ese día o lo acepta. Registra en la bitácora de citas CAL11-A en el rubro de observaciones los datos que la bitácora solicita
haciendo el señalamiento correspondiente para indicar que fue aceptado
para su valoración el mismo día. En caso necesario programa una nueva
cita para la donación y la registra en dicha bitácora (esto para efectos de
trazabilidad).
Si se corrobora la cita pasa al área de
recepción para su registro.
La recepcionista solicita el portagafete con su identificación oficial y el folleto ¿Cómo solicitar una cita? Para donador de
sangre, para registrar sus datos personales en el sistema informático de banco de sangre , se imprime la ficha de
identificación que incluye la carta de consentimiento informado (M-3-0-23) , se le solicita al disponente que firme el
consentimiento informado si es que está de acuerdo o si tiene dudas se indica que pase a trabajo social . . Posteriormente
se le devuelve el gafete con la identificación dentro y se le indica que pase a la sala de espera .
Se le indica al donador que espere a que sea llamado para la valoración de venas y somatometría (Ver
procedimiento CAL-30).
La ficha de identificación se coloca en el Kanban de toma de signos vitales.
FIN
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 61 de 15
FORMATOS RELACIONADOS CON ESTE PROCEDIMIENTO
FICHA DE IDENTIFICACIÓN
continuación:
CAL-02-B
DEL
DONANTE
M-3-0-23
se
muestra
a
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 62 de 15
El formato M-3-0-23 se llena de la siguiente manera:
Nombre:
Nombre, Apellido paterno y Apellido materno del candidato a
donar.
Parentesco:
Relación que existe entre el candidato a donar y el paciente.
Edad:
Años que tiene el candidato.
Fecha de nacimiento:
Día, mes y año en que nació el candidato.
Sexo:
Indicar el sexo del candidato: Masculino (Hombre) y Femenino
(Mujer)
Estado Civil:
Indicar el estado civil del candidato: Soltero (a),
Casado (a), Unión Libre, Viudo, Divorciado.
Escolaridad:
Indicar hasta que grado de escolaridad curso el candidato:
Primaria, Secundaria, Preparatoria o equivalente, Universidad,
etc.
Ocupación:
Actividad que realiza el candidato.
Domicilio, municipio, código postal: Lugar donde vive actualmente el candidato.
Teléfono:
Número telefónico donde se pueda localizar al candidato
(casa, oficina, caseta telefónica, etc.).
Tipo de donación:
Se especifica si la donación es:
o Familiar:
o
o
o
o
Altruista:
Autóloga:
Dirigida:
Aféresis:
No. de expediente:
Donación que se realiza para un paciente familiar (Padre,
Madre, Hermano, Primo, Amigo, etc.).
Donación que no se realiza para un paciente específico.
Donación que se la realiza para si mismo.
Donación que se realiza específicamente para un paciente.
Donación de plaquetas, Leucocitos, Granulocitos, Plasma y
Eritrocitos.
Nombre, Apellido paterno y Apellido materno del paciente
(este dato y los siguientes los puede encontrar en el folleto
¿Cómo solicitar una cita para donar sangre?)
Número que fue asignado para el paciente por el Instituto
Nacional de Pediatría (corresponde al # de registro).
PLATICA DE INDUCCION AL DONADOR
OBJETIVO: Sensibilizar e informar sobre los procesos a los cuales se someterá el
disponente y la importancia de la seguridad sanguínea.
1.- Introducción
Nombre de la trabajadora social en el Banco de Sangre.
Importancia del consentimiento informado.
Registro en Bitácora.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 63 de 15
2.- Describe los procesos:
Descripción del proceso de donación y probable tiempo de estancia.
Importancia de la sangre segura.
-Documentos necesarios para el registro en el área de recepción.
-Importancia de los datos personales para la ficha de identificación.
-Valoración por el personal de enfermería.
-Toma de muestra por el personal de laboratorio.
-Valoración médica.
-Extracción de sangre total o procedimiento de aféresis.
Importancia de ingerir el lunch posterior a la donación.
Entrega de comprobante de donación.
Acudir por los resultados de sus estudios.
Registro en Bitácora.
Video Informativo.
La bitácora CAL-20-A se muestra a continuación:
BITÁCORA DE REGISTRO DE DONADORES
CAL-20-A
Nombre Nombre Hora
Hora
No.
Firma
Unidad Observaciones
Donador Paciente Entrada Salida
Efectivos
Rechazados
Estudiados para Aféresis
Procedimientos Aféresis
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 64 de 15
La bitácora CAL-20-A se llena de la siguiente manera:
No.
Nombre
Donador
Número consecutivo en que se van anotando los
donadores
Nombre del candidato a donación de sangre
Nombre
Nombre del paciente para el que viene a ser
Paciente
donador
Hora Entrada Hora en que se están registrando
Hora en que sale el donador y ya se le entregó
Hora Salida
comprobante
Firma
Firma de que recibió comprobante de donación
No. de unidad que se asignó siempre que haya
Unidad
sido donador
Observaciones Motivo de rechazo o diferido, etc.
Efectivos
Número de donadores efectivos que pasaron donar
Rechazados
Número de donadores que no fueron aceptados
para donar
Estudiados Cantidad de donadores que se estudiaron para
para Aféresis procedimiento de Aféresis
Procedimientos
Número de procedimientos realizados
Aféresis
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 65 de 15
FORMATO CAL-20-B CONTROL DE REGISTRO DE DONADORES
INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRIA
BANCO DE SANGRE
CONTROL DEL REGISTRO DE DONADORES
FECHA:______________
UNIDAD DE INICIO________________
UNIDAD_________
ULTIMA
CAL-20-B
1
13
25
37
En este formato el personal de recepción registra:
1. Subraya el número de donador que ya ingresó en el sistema de cómputo
2. Anota si algún donador salió diferido, la causa del mismo, información que
permite conocer qué área rechazó al donador.
3. El número de unidad que le asigna a los donadores aceptados.
4. Señala los candidatos a donación que van a ser estudiados para aféresis.
5. Anota los donadores de aféresis y el número de unidad que les
corresponde.
6. Así mismo se registra el número de unidad de inicio y el último número de
unidad asignado del día.
REGISTROS
La bitácora CAL-20-A se almacena durante 1 año.
La Bitácora CAL-20-B se almacena en el archivo durante 3 meses.
M-3-0-23 (Ficha de Identificación) que incluye el Consentimiento informado del
candidato a donador, se almacena en archivo activo 5 años y en archivo muerto 5
años, en los donadores aptos (Ver CAL-40 Procedimiento de valoración médica).
En los donadores diferidos durante 3 meses.
Sistema informático de banco de sangre.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 66 de 15
ANEXO 1.-
MANUAL DEL MANEJO
DEL SISTEMA DE
CÓMPUTO PARA EL
ÁREA DE RECEPCIÓN
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 67 de 15
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 68 de 15
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 69 de 15
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 70 de 15
+
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-20
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 71 de 15
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 72 de 102
ANUAL DE PROCEDIMIENTOS
Procedimiento de Fraccionamiento
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 73 de 102
CAMBIO
1. Se
incluye
procedimiento
alterno
en
sistema
de
fraccionamiento.
2. Se incluye nuevo formato
electrónico en la captura de
datos
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
1
24/02/04
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 74 de 102
Una vez que el donador ha sido sangrado (Ver procedimiento CAL-46) se procede de la
siguiente manera:
El personal de Fraccionamiento checa el estado en que se encuentran cada uno de los equipos que
utiliza para realizar el proceso y anota los resultados en la bitacora de estado de los equipos
CAL-21-A.
Toma del área de sangrado las Bolsas con la ST recolectada al igual que los formatos M-3-0-30 y
los lleva al área de fraccionamiento. El Paquete de Bolsas de muestra contiene: 4 Bolsas.
Una de las bolsa madre contiene la Sangre Total con 63-65 ml de anticoagulante (ACD), otra bolsa
contienen el aditivo (100 ml de SAG-MANITOL o ADSOL), un filtro leucorreductor para concentrado
eritrocitario y las dos bolsas satelites vacias
En el área de fraccionamiento se anota en la bitácora de fraccionamiento CAL-21-B los siguientes
datos: Fecha del día de análisis y Fecha de caducidad de cada concentrado (CE, CP, PCF
y GAH cuando se realiza).
De cada una de las muestras se anotan en la bitácora CAL-21-B los siguientes datos: # que le
corresponde al donador, Peso Bruto del sistema (ST-PB = Bolsa madre con 63-65 ml de
anticoagulante + 450 +/- 10% de sangre más la bolsa con el aditivo (100ml), un filtro leucorreductor
rara concentrado eritrocitario y las dos bolsas satelites); sexo del donador, Peso Neto (ST-PN = PB
menos la suma de la Bolsa Madre con 63-65 ml de anticoagulante con bolsa de aditivo con dos bolsas
satelites) y volumen (V-ST= PN/1.054 o1.057)
Se pesa en una balanza granataria de 2 platos un paquete de bolsas y su peso se equilibra con otro
paquete de bolsas adicionando cualquier objeto de material similar al de las bolsas hasta que el peso
sea el mismo. Todo lo que se encuentre en el plato se cada brazo se mete a un vaso de centrífuga.
El peso en la centrífuga debe estar equilibrado para que el proceso se realice correctamente.
Para introducir las bolsas al vaso de la centrífuga y no sean maltratadas por el mismo movimiento, se
acomodan de la siguiente manera: coloque en la mesa las bolsas satelite y la del aditivo, despues las
lineas de todas las bolsas, forme un “taco” enrrollando las bolsas con las líneas dentro de ellas (para
protección). Para introducirlas en el vaso de la centrifuga: se coloca la bolsa madre con las costuras
de la bolsa alineadas con las muescas de sostén del vaso, a continuación meter el “taco” al frente de
la bolsa madre.
Se revisa que las zonas de conectores para equipos de transfusion estén sin sangre para evitar
contaminación (dar pequeños golpes a los pilotos hasta que ya no tengan sangre), se le coloca una
pinza en la linea que se uso para la extracción de la sangre y se introduce el vaso en la centrifuga
verificando que se oriente la bolsa madre hacia la flecha y el “taco” hacia las paredes de la
centrífuga.,el filtro queda orientado hacia la parte externa de la centrifuga soportado por la zona media
con la boca del vaso Se procede a centrifugar
(Ver procedimiento CAL-23)
Una vez que se termina la centrifugación, se saca el vaso de la centrifuga. Las 4 Bolsas se retiran del
vaso con sumo cuidado para evitar que el plasma se vuelva a mezclar con el
concentrado eritrocitario (CE)
Se revisa que la zona para conectores de equipo de transfusion esten limpios y se transfiere el plasma
rico en plaquetas(PRP) a una bolsa satelite, se sella en la línea que une a la bolsa madre (sellador
dielectrico. (Ver Procedimiento CAL-24)
Al finalizar la extracción del plasma se tienen pinzas colocadas en la bolsa que contiene el plasma rico
en plaquetas (PRP) y en la bolsa satelite si se considera necesario. Se cuelga en el tripié la bolsa que
contiene el aditivo, se rompe el broche de la bolsa de SAG-MANITOL para que pase atraves del
filtro (funciona para purgar el filtro). Se invierte el sistema para filtrar el concentrado eritrocitario (con
cuidado, evitando que pasen burbujas de aire). Se dejan colgadas en un tripie hasta que se termina el
proceso de filtración
Cuando se termina de adicionar el aditivo se procede a la quema de las lineas con el
TUBE SEALER ACS-152 TERUFLEX. Pimero se sella la linea que sale de la bolsa que contiene el
Concentrado Eritrocitario una vez separados, se agita para ayudar a la homogenización del CE y el
aditivo y se pesa.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El peso bruto del Concentrado Eritrocitario se anota en CAL-21-A en la columna de PB - CE y
posteriormente se resta el peso de la bolsa al valor del CE para obtener el PN-CE. El volumen del CE
se obtiene dividiendo el valor ( PN / 1.093 ) y se apunta en la bitácora CAL-21-A los resultados, se
verifica que se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CE, el volumen de CE y la caducidad (acorde al
anticoagulante empleados) y esta se pega en la bolsa e introduce en el refrigerador a 4° C cuando el
procedimiento es manual .
La Bolsa de PRP y la bolsa satelite se pesan para introducir y equilibrar con pesos iguales y no perder
la estabilidad que requiere la centrifuga para su uso adecuado (Ver Procedimiento CAL-23). Se
acomodan en pares de la siguiente manera para evitar que se rompan en la centrifuga: se coloca en la
mesa primero la bolsa satelite vacia y sobre ella la que contiene el plasma, cuando se introducen en
los vasos de la centrifuga las lineas deben quedar detrás de las bolsas. Una vez en el vaso se le
quitan las pinzas a las dos bolsas.
Se procede a
desechar la muestra y
se registra el motivo
en la bitácora
CAL-21-A y en la
Bitácora de Bajas
CAL-21-C.
Al termino del centrifugado se sacan los vasos de la centrifuga y se procede a retirar con sumo
cuidado las bolsas de PRP. Se transfiere a una bolsa satelite vacia la mayor cantidad de plasma
dejando un remanante de 40-60ml para reconstituir el botòn de plaquetas (CP) (con un volumen de
40 a 60 ml) y el PF (volumen de 150-180 ml) en el T-ACE o en su defecto empleando el sistema
manual (plancha para desplasmatizar) (Ver Procedimiento CAL-22)
El Concentrado Plaquetario se pesa y se anota el Peso Bruto en la bitácora CAL-21-A en la columna
PB-CP, en la columna PN-CP el valor del Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-CP el
Volumen (V= PN/1.028), los que se anotan en CAL-21-A .Se verifica que los valores obtenidos se
encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993.
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CP, el volumen de CP y la caducidad (5 días) y esta se
pega en la bolsa, Se mantienen en el incubador entre 20-24 ° C cuando el procedimiento es manual .
Se continua con el pesado e identificación de PF: el PB se anota en la bitácora CAL-21-A en la
columna PF-PB, en la de PN-PF el Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-PF el
Volumen (V= PN/1.028). Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores
especificados en la NOM-003-SSA2-1993.
Se procede a desechar
la muestra y se registra
el motivo en la bitácora
CAL-21-A y en la
Bitácora de Bajas CAL21-C.
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras PCF, el volumen de PCF y la caducidad (1 año) y esta se
pega en la bolsa e introduce en el CONGELADOR con rangos de -30 a -70 ° C cuando el
A los productos obtenidos en este proceso como son: CE, CP y PCF se les debe anotar con un
plumon y pegar una etiqueta con su respectivo grupo sanguineo obtenido de la bitácora de serología
CAL-26-A cuando el procedimiento es manual.
El Personal de fraccionamiento anota en la Bitàcora de producto radiado CAL-21-D la fecha, tipo de
producto, # de registro y el auxiliar de laboratorio antes de entregar el producto anota la hora de
recepcion y solicita anote su Nombre y firma quien lo recibe y al finalizar la radiaciòn de quien entrega
el producto , una vez que el producto se recoge de radiaciòn se coloca en las condiciones
especificadas para su posterior identificaciòn.
Al finalizar el proceso se registra en CAL-21-A el número de donadores, el número de ST, CP, CE,
PCF y GAH obtenidos, el nombre o sello y firma del personal que realizo el fraccionamiento. Se
ingresan datos de volumen y fracciones al sistema de computo TESI.
CAL-02-B
Se procede a
desechar la
muestra y se
registra el motivo
en la bitácora
CAL-21-A y en la
Bitácora de Bajas
CAL-21-C.
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El personal de Fraccionamiento checa el estado en que se encuentran cada uno de los equipos que
utiliza para realizar el proceso y anota los resultados en la bitacora de estado de los equipos
CAL-21-A.
Toma del área de sangrado las Bolsas con la ST recolectada al igual que los formatos M-3-0-30 y
los lleva al área de fraccionamiento. El Paquete de Bolsas de muestra contiene: 4 Bolsas.
Una de las bolsa madre contiene la Sangre Total con 63-65 ml de anticoagulante (ACD), otra bolsa
contienen el aditivo (100 ml de SAG-MANITOL o ADSOL) y las dos bolsas satelites vacias
En el área de fraccionamiento se anota en la bitácora de fraccionamiento CAL-21-B los siguientes
datos: Fecha del día de análisis y Fecha de caducidad de cada concentrado (CE, CP, PCF y GAH
cuando se realiza).
De cada una de las muestras se anotan en la bitácora CAL-21-B los siguientes datos: # que le
corresponde al donador, Peso Bruto del sistema (ST-PB = Bolsa madre con 63-65 ml de
anticoagulante + 450 +/- 10% de sangre más la bolsa con el aditivo (100ml) y las dos bolsas satelites);
sexo del donador, Peso Neto (ST-PN = PB menos la suma de la Bolsa Madre con 63-65 ml de
anticoagulante con bolsa de aditivo con dos bolsas satelites) y volumen (V-ST= PN/1.054 o1.057)
Se pesa en una balanza granataria de 2 platos un paquete de bolsas y su peso se equilibra con otro
paquete de bolsas adicionando cualquier objeto de material similar al de las bolsas hasta que el peso
sea el mismo. Todo lo que se encuentre en el plato se cada brazo se mete a un vaso de centrífuga. El
peso en la centrífuga debe estar equilibrado para que el proceso se realice correctamente.
Para introducir las bolsas al vaso de la centrífuga y no sean maltratadas por el mismo movimiento, se
acomodan de la siguiente manera: coloque en la mesa las bolsas satelite y la del aditivo, despues las
lineas de todas las bolsas, forme un “taco” enrrollando las bolsas con las líneas dentro de ellas (para
protección). Para introducirlas en el vaso de la centrifuga: se coloca la bolsa madre con las costuras
de la bolsa alineadas con las muescas de sostén del vaso, a continuación meter el “taco” al frente de
la bolsa madre.
Se revisa que las zonas de conectores para equipos de transfusion estén sin sangre para evitar
contaminación (dar pequeños golpes a los pilotos hasta que ya no tengan sangre), se le coloca una
pinza en la linea que se uso para la extracción de la sangre y se introduce el vaso en la centrifuga
verificando que se oriente la bolsa madre hacia la flecha y el “taco” hacia las paredes de la centrífuga.
Se procede a centrifugar
(Ver procedimiento CAL-23)
Una vez que se termina la centrifugación, se saca el vaso de la centrifuga. Las 4 Bolsas se retiran del
vaso con sumo cuidado para evitar que el plasma se vuelva a mezclar con el concentrado eritrocitario
(CE)
Se revisa que la zona para conectores de equipo de transfusion esten limpios y se transfiere el plasma
rico en plaquetas(PRP) a una bolsa satelite, se sella en la línea que une a la bolsa madre (sellador
dielectrico. (Ver Procedimiento CAL-44)
Al finalizar la extracción del plasma se tienen pinzas colocadas en la bolsa que contiene el plasma rico
en plaquetas (PRP) y en la bolsa satelite si se considera necesario. Se cuelga en el tripié la bolsa que
contiene el aditivo, se rompe el broche de la bolsa para dejarlo pasar al CE.
CAL-02-B
Cuando se termina de adicionar el aditivo se procede a la quema de las lineas con el
TUBE SEALER ACS-152 TERUFLEX. Pimero se sella la linea que sale de la bolsa que contiene el
Concentrado Eritrocitario una vez separados, se agita para ayudar a la homogenización del CE y el
aditivo y se pesa.
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El peso bruto del Concentrado Eritrocitario se anota en CAL-21-B en la columna de PB - CE y
posteriormente se resta el peso de la bolsa al valor del CE para obtener el PN-CE. El volumen del CE
se obtiene dividiendo el valor ( PN / 1.093 ) y se apunta en la bitácora CAL-21-B los resultados, se
verifica que se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CE, el volumen de CE y la caducidad (acorde al
anticoagulante empleados) y esta se pega en la bolsa e introduce en el refrigerador a 4° C cuando el
La Bolsa de PRP y la bolsa satelite se pesan para introducir y equilibrar con pesos iguales y no perder
la estabilidad que requiere la centrifuga para su uso adecuado (Ver Procedimiento CAL-23).
Se acomodan en pares de la siguiente manera para evitar que se rompan en la centrifuga: se coloca
en la mesa primero la bolsa satelite vacia y sobre ella la que contiene el plasma, cuando se introducen
en los vasos de la centrifuga las lineas deben quedar detrás de las bolsas. Una vez en el vaso se le
quitan las pinzas a las dos bolsas.
Al termino del centrifugado se sacan los vasos de la centrifuga y se procede a retirar con sumo
cuidado las bolsas de PRP. Se transfiere a una bolsa satelite vacia la mayor cantidad de plasma
dejando un remanante de 40-60ml para reconstituir el botòn de plaquetas (CP) (con un volumen de
40 a 60 ml) y el PF (volumen de 150-180 ml) en el T-ACE o en su defecto empleando el sistema
manual (plancha para desplasmatizar) (Ver Procedimiento CAL-22)
El Concentrado Plaquetario se pesa y se anota el Peso Bruto en la bitácora CAL-21-A en la columna
PB-CP, en la columna PN-CP el valor del Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-CP el
Volumen (V= PN/1.028), los que se anotan en CAL-21-A .Se verifica que los valores obtenidos se
encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993.
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CP, el volumen de CP y la caducidad (5 días) y esta se
pega en la bolsa, Se mantienen en el incubador entre 20-24 ° C cuando el procedimiento es manual .
Se continua con el pesado e identificación de PF: el PB se anota en la bitácora CAL-21-A en la
columna PF-PB, en la de PN-PF el Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-PF el
Volumen (V= PN/1.028). Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores
especificados en la NOM-003-SSA2-1993.
NO
SI
Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras PCF, el volumen de PCF y la caducidad (1 año) y esta se
pega en la bolsa e introduce en el CONGELADOR con rangos de -30 a -70 ° C cuando el
A los productos obtenidos en este proceso como son: CE, CP y PCF se les debe anotar con un
plumon y pegar una etiqueta con su respectivo grupo sanguineo obtenido de la bitácora de serología
CAL-26-A cuando el procedimiento es manual.
El Personal de fraccionamiento anota en la Bitàcora de producto radiado CAL-21-D la fecha, tipo de
producto, # de registro y el auxiliar de laboratorio antes de entregar el producto anota la hora de
recepcion y solicita anote su Nombre y firma quien lo recibe y al finalizar la radiaciòn de quien entrega
el producto , una vez que el producto se recoge de radiaciòn se coloca en las condiciones
especificadas para su posterior identificaciòn.
Al finalizar el proceso se registra en CAL-21-A el número de donadores, el número de ST, CP, CE,
PCF y GAH obtenidos, el nombre o sello y firma del personal que realizo el fraccionamiento. Se
ingresan datos de volumen y fracciones al sistema de computo TESI.
CAL-02-B
Se procede a
desechar la
muestra y se
registra el motivo
en la bitácora
CAL-21-A y en la
Bitácora de Bajas
CAL-21-C.
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
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SISTEMA ALTERNO EN BOLSA
TERUMO
RECOGER DEL AREA DE SANGRADO EL PRODUCTO OBTENIDO
(SANGRE TOTAL)
Se pesa el Sistem y se ingresa en la Cal 21-B
(en sistema de computo)
Colocar en las camisas de la centrifuga la ST y balancear por peso
Centrifugar 1800 rpm/10 min
aproximadamente
Separar PG
Se pasa el PG a la
bolsa de ADSOL y
se sella
Se conceta el filtro
al PG. Por
gravedad se filtra
y almacena
CAL-02-B
Separar PRP
CENTRIFUGAR
3500 RPM /15
MIN
Pesar e ingresar
en el SISTEMA
SEPARA EL CP.
PESAR
SEPARA EL PFC.
PESAR
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El formato de identificación de productos sanguíneos, M-3-0-30
continuación:
se muestra a
El formato M-3-0-30 se llena de la siguiente manera para cada producto:
Nombre del donador:
Fecha y hora de caducidad:
Producto:
Volumen:
CAL-02-B
Nombre y apellido completo
Fecha en que caduca el producto.
Tipo de producto: ST, CE, CP, PCF.
Cantidad en ml que se obtuvo del producto.
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La bitácora de estado de los equipos CAL-21-A se muestra a continuación:
BITÁCORA DE ESTADO DE LOS EQUIPOS
CAL-21-A
Fecha:
Nombre o sello del Químico de Fraccionamiento
Centrifuga DAWONDAMON/IEC DIVISION
Temperatura
RPM
Tiempo
Limpieza
Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3
Temperatura
RPM
Tiempo
Limpieza
Centrifuga BECKMAN J6-MC
Temperatura
RPM
Tiempo
Limpieza
Limpieza del Extractor de plasma
Funcionamiento y limpieza de Equipo T-ACE
Observaciones
La bitácora CAL-21-A se llena de la siguiente manera:
Fecha:
Día, mes y año de uso del equipo.
Nombre o sello del Químico
de Fraccionamiento:
Nombre(s), Apellido Paterno y Materno
Centrifuga DAWON/IEC
DIVISION,Centrifuga SORVALL
General-Purpose RC-3 y
Anotar una paloma en el caso de que el
equipo se encuentre en buen estado
antes de su uso y una X en caso
contrario.
:
CAL-02-B
Banco de Sangre
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Temperatura:
Realizar
pruebas
a
diferentes
temperaturas y anotar una paloma en el
caso de que el equipo se encuentre en
buen estado antes de su uso y una X en
caso contrario.
RPM:
Realizar
pruebas
a
diferentes
revoluciones por minuto y anotar una
paloma en el caso de que el equipo se
encuentre en buen estado antes de su
uso y una X en caso contrario.
Tiempo:
Realizar pruebas a diferentes tiempos y
anotar una paloma en el caso de que el
equipo se encuentre en buen estado
antes de su uso y una X en caso
contrario.
Limpieza del extractor de plasma:
Si el equipo se encuentra limpio anotar
una paloma y en caso contrario una X.
Funcionamiento y limpieza del
equipo T-ACE:
Si el equipo funciona y se encuentra
limpio anotar una paloma y en caso
contrario una X.
CAL-02-B
Banco de Sangre
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La bitácora de fraccionamiento CAL-21-B se muestra a continuación:
BITACORA DE FRACCIONAMIENTO
CAL-21-B
No.
REGIS
TRO
ST
PB-ST PN-ST
SEXO
CE
VOL
PB-PG PN-PG
PF
V
PF-PB PF-PN
CP
PF-V
CP-PB CP-PN
H.
EXTR
H. F.
delta
T. FIL. INI
T. FIL.
FIN
DIF
CP-V
La bitácora de bajas CAL-21-B debido a su tamaño no se muestra dentro de este
procedimiento.
La bitácora CAL-21-B se llena de la siguiente manera:
No.:
# de bitácora de Ingresos y egresos.
REGISTRO:
# de unidad
SEXO:
Masculino (M).- Densidad: 1.057
Femenino (F).- Densidad: 1.054
CAL-02-B
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Fecha: 24 Feb 2004
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ST-PB:
Peso (gr) del sistema de sangrado: la bolsa
madre con 63-65 ml de anticoagulante más la
sangre de la flebotomia (450 gr +/-10%), la
bolsa con el aditivo y las dos bolsas satelites.
ST-PN:
Es la diferencia de peso entre el ST-PB
y la suma de la bolsa madre con 63-65 ml de
anticoagulante más la bolsa con 100 ml de
aditivo más las dos bolsas satelites
ST-V:
Es el PN entre la densidad de la sangre
(Masculino 1.057 o Femenino 1.054)
CE-PB:
Peso del Concentrado eritrocitario más la
bolsa
CE-PN:
PB-CE menos el peso de la bolsa
contenedora (47gr para el sistema que
actualmente empleamos)
VOL:
PN entre1.093 (densidad del CE)
CP:
Peso del Concentrado plaquetario más la
bolsa.
PN:
Peso del CP menos 25 que es el peso
la bolsa
VOL:
Es el PN entre 1.028 (densidad del CP)
h. extraccion:
Hora de extracción
H. F.
Hora de termino del sangrado
CAL-02-B
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Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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delta
Diferencia entre inicio y término del sangrado
Tfil ini.
Hora
de
inicio
prealmacenaminto
Tfil fi
Hora
de
término
prealmacenamaiento
Dfilt
Diferencia entre inicio y término del proceso
de filtración
NOMBRE O SELLO:
Nombre(s),
Apellido
Paterno,
Apellido
Materno del Químico de Fraccionamiento que
realizo el proceso.
FIRMA:
Firma del Químico, Laboratorista, Técnico o
Auxiliar de laboratorio que realizo el
Fraccionamiento
de
de
la
filtración
la
filtración
La bitácora de bajas CAL-21-C debido a su tamaño no se muestra dentro de este
procedimiento.
La bitácora de bajas CAL-21-C se llena de la siguiente manera:
Se marca con una paloma o una X el motivo de la baja.
Fecha:
Registro:
Nombre:
Vol:
Día, mes y año de baja del producto.
# de bitácora de ingresos y egresos
Apellido
Paterno,
Apellido
materno
nombre(s)
Volumen desechado en ml o UI.
Tipos de productos:
ST:
CE:
CAL-02-B
Sangre Total
Concentrado eritrocitario
y
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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PF:
PE:
PSF:
CP FERESIS:
CP:
CR:
Plasma fresco.
Plasma envejecido
Plasma sin factor
Concentrado plaquetario obtenido por aféresis
abierta o cerrada.
Concentrado plaquetario
Crioprecipitado
CAUSAS DE BAJA
6.7.1 Marcadores Infecciosos:
VIH:
VBH:
VCH:
VDRL:
CHAG:
BRUC:
CMV:
OTROS:
Virus de Inmunodefiencia adquirida
Hepatitis B
Hepatitis C
Sifilis
Chagas
Brucela
Citomegalovirus
Estudios específicos solicitados.
Otros motivos de baja:
672AUTOEX.:
673 CAD.:
674 Def. conserv.:
675 Def. recolec.:
676 Roto:
Autoexclusión
Caducidad
Deficiente conservación
Deficiente recolección
Sistema Roto (Bolsa, linea, etc)
677 Cont. erit/Hem.:
678 Lipem.:
679 Cont./Pic.:
Contaminación de Eritrocitos y/o Hemólisis.
Lipemico
Picado (Bolsa, linea, etc)
Control de Calidad:
Nombre:
Utilizado en estudios de Control de calidad
Nombre Completo o sello del Químico,
laboratorista, técnico o auxiliar de laboratorio
que dio de baja el producto
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-21
Fecha: 24 Feb 2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Nota 1: El uso de guantes para el proceso de fraccionamiento es obligatorio.
Nota 2: El funcionamiento y la limpieza de los equipos deben ser revisados por el
Químico de Fraccionamiento antes de iniciar el proceso.
Nota 3: Se puede utilizar la bolsa vacía para recolectar el PCF o la bolsa que contenía el
aditivo, tomando en cuenta la variación de peso entre cada bolsa para los cálculos.
Nota 4: La temperatura de los refrigeradores es muy importante para el almacenamiento
adecuado de los diferentes tipos de muestras.
Nota 5: Se debe tener la calibración y revisión continua de balanzas, del equipo T-ACE
y centrifugas.
REGISTROS
La bitácora CAL-21-A se debe almacenar 1año.
La bitácora CAL-21-B se guarda 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto.
La bitácora CAL-21-C se guarda 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-22
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de operación
del equipo T-ACE
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-22
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 88 de 5
del equipo T-ACE
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
24/09/03
Banco de Sangre
Código: CAL-22
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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del equipo T-ACE
Durante el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento CAL-21)
se puede realizar la separación utilizando el Extractor de plasma (Ver
procedimiento CAL-24) o por medio del Equipo T-ACE la siguiente manera:
Verifique en el manometro que se encuentra en la parte de atras baja del equipo que la presion este en 5. (1)
Encienda el equipo con el interruptor (2) que se encuentra en la parte de atras del equipo.
Oprima MENU en el panel de control (3) para seleccionar el programa que desea
Oprima SCROLL (4) para seleccionar el No del programa
Oprima STOP (5) y aparece la siguiente pantalla:
PROGRAMME 5
PRP
phase:05
Colocar la bolsa que contiene el plasma previamente centrifugado en frente de la puerta (7) dentro de dos
piezas de metal (6).
Colocar la bolsa satelite vacia en la balanza (8) que le corresponde
La linea que sale de la bolsa que contiene el plasma se coloca dentro de los clamps marcados con numeros y
de acuerdo al diagrama siguiendo siempre la linea marcada. (9) , (10), (11).
(marcado en el equipo en color rojo)
Cerrar la puerta y el equipo indicara que se puede comenzar y la pantalla sera la siguiente:
BREAK CLICK-TIPS
AND PUSH “START”
Y en el panel de control se observa que el foco del STOP (5) se prende y el del START (12) empieza a
parpadear
Oprimir START (12) para iniciar y las pantallas que se observan son las siguientes:
PROGRAMME 5
P:08
plasma (g):
PRP
PROGRAMME 5
phase:09
sealing head 1
PRP
PROGRAMME 5
phase:09
sealing head 2
PRP
PROGRAMME 5
close tubing with
plastic clamps
and push STOP
PRP
Escuchara el sonido de alarma y en el panel observara el foco del MENU (3) encendido y el STOP (5)
parapadeando y se escucha como sellan los clamps las líneas de plástico e indica que a terminado el
procedimiento
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-22
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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del equipo T-ACE
Se abren los clamps
Se ponen los dedos del lado izquierdo de los clamps 1 y 2 (13) y el sobrante de linea se desecha en el bote
correspondiente.
Quitar la bolsa que contiene el PCF y despues la que contiene el plasma teniendo cuidado al sacar las lineas
de los clamps
Equipo T-ACE
4 Obstructores y Cabezales selladores de Alta frecuencia
(10 Y 11)
Balanzas (8)
(13)
(7)
1 Pantalla Digital y un Fácil
Panel de Control (3), (4) ,(5) y (12)
(6)
(1)
Motor Regulador de Flujo y un
1 Detector (9)
12 Detectores de Presión
(2)
1 Lector de Código de Barras
Universal
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-22
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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del equipo T-ACE
Nota 1: Se requiere el mantenimiento periódico del equipo.
Nota 2: Mantener limpia el área de los clamps.
Nota 3: Realizar la inspección diaria para conocer el estado del equipo.
REGISTROS
No existen registros asociados con este procedimiento.
CAL-02-B
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
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CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-23
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento general de operación
de centrifugas
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Se anexa procedimiento de manejo
para la centrifuga SERO - FUGE
1
27/02/04
Una vez que el donador ha sido sangrado (Ver procedimiento CAL-46) se procede
a realizar el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento
CAL-21) en el que se realizan varias centrifugaciones de la siguiente manera:
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Banco de Sangre
Código: CAL-23
ISBN: 978-968-9170-17-4
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de centrifugas
Centrifuga DAMON/IEC DIVISION
La centrifuga DAMON/ IEC DIVISION se prende con el interuptor que indica MAINWER (1).
Al encender el equipo se ilumina al mismo tiempo el foco naranja que se encuentra arriba del la palabra
anterior y el foco verde donde indica STOPPED (2).
Se establecen las RPM (3) y la Temperatura (4) especificas para cada producto a centrifugar
(Ver Tabla CAL-23-A)
Se abre la tapa de la centrifuga con la palanca que se encuentra en la tapa, la que se giran a la izquierda y se
jala hacia arriba.
Se sacan los vasos de centrifuga
Se introduce la muestra a centrifugar en el vaso (previamente pesada y corroborado que los vasos paralelos
tendran el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga).
Se introducen los vasos que contienen las muestras a la centrifuga
Una vez adentro los 4 vasos de la centrifuga se cierra la puerta y se jala hacia la derecha la palanca.
Se pone el tiempo que se requiere según la muestra introducida.(5)
Se aprieta START (6) y se puede observar que ha iniciado la centrifugación cuando el foco verde que dice
STOPPED (2) se apaga.
Pasado el tiempo de la centrifugación se enciende el foco verde STOPPED (2) lo que indica que ha terminado
de centrifugar y se pueden sacar los vasos de la centrifuga.
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Banco de Sangre
Código: CAL-23
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de centrifugas
Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3
La centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 se prende con el interuptor que dice MAIN SWITCH ON
(encender) y OFF (apagar) (1) , cuando la enciendes se prende el foco naranja que dice MAIN POWER (2)
Se establecen las RPM (3) y la Temperatura (4) especificas para cada producto a centrifugar
(Ver Tabla CAL-23-A)
La tapa de la centrifuga se abre jalando la palanca hacia arriba
tienen el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga).
Se incorporan los vasos que contienen las muestras a la centrifuga
Se cierra la puerta de la centrifuga
Se pone el Tiempo (5) que se requiere según la muestra introducida.
Se aprieta START (6) y se prende el foco naranja (7) que indica el inicio de la centrifugación.
Una vez terminada la centrifugación se pueden sacar los vasos de la centrifuga.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-23
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de centrifugas
La centrifuga BECKMAN J6-MC se prende con el interuptor (1) y se observa al encender que se prende un
foco naranja donde dice MAIN POWER (2)
Para introducir las condiciones se siguen los siguientes pasos:
Para poner las RPM se presiona el boton que dice SPEED (3) teclee el valor y presione ENTER/RECALL (4)
para que se fije el dato que metio
Para introducir el tiempo se presiona el boton que dice TIME (5) teclee el valor y presione ENTER/RECALL
(4) para que se fije el dato que metio
Para introducir el valor de la temperatura presione de el boton TEMP (6) teclee el valor y presione ENTER/
RECALL (4) para que se fije el dato que metio. Los valores especificados para cada producto se encuentran
en la Tabla CAL-23-A.
La tapa de la centrifuga se abre empujando la palanca hacia abajo y jalando la tapa.
La tapa de los vasos se abre jalandola hacia arriba y se coloca en la parte interna de la tapa de la centrifuga.
tengan el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga).
Se incorporan los vasos que contienen las muestras a la centrifuga
Se pone la tapa de los vasos verificando que entre totalmente y posteriomente se cierra la puerta de la
centrifuga
Se presiona PROGRAM RECALL (7) para verificar que las condiciones. Se presiona START (8) y se prende el
foco verde que indica el inicio de la centrifugación.
Al termino del tiempo suena la alarma y cambia de START (8) a STOP (9)
Se pueden sacar los vaso de la centrifuga.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-23
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de centrifugas
SERO - FUGE
El personal de banco de sangre recibe los tubos para su
separación en tubos 12 x 75mm
Se colocan los tubos con volumen similar en cotraposición
La SERO FUGE es una centrífuga de velocidad constante (3400 rpm
aproximadamente) y con tiempo variable.
El timer que se localiza en la parte frontal se gira en dirección a las manecillas del
relog y se ubica en el timpo deseado.
Al término del tiempo la centrífuga se detiene en automático.
Destapar y sacar los tubo.
La tabla CAL-23-A se muestra a continuación:
Sangre Total
Centrifuga DAMON/IEC DIVISION
Plaquetas
2200RPM
10MIN
18 C
1500RPM
10MIN
18 C
Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 2200RPM
10MIN
18 C
1500RPM
10MIN
18 C
10MIN
18 C
1500RPM
10MIN
18 C
Centrifuga BECKMAN
CAL-02-B
J6-MC
2200RPM
Banco de Sangre
Código: CAL-23
ISBN: 978-968-9170-17-4
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de centrifugas
Nota 1: Se requiere el mantenimiento y la calibraron periódica de las balanzas.
Nota 2: Mantener sin golpes y limpios los vasos de la centrifuga.
Nota 3: Realizar la inspección diaria de los equipos de trabajo.
Nota 4: Las centrifugas DAMON/IEC DIVISION y la SORVALL General-Purpose
RC-3 contienen 4 vasos para centrifugar y la BECKMAN J6-MC tiene 6 vasos.
REGISTROS
No existen registros asociados con este procedimiento
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-24
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de operación del
extractor de plasma
Elaborado por:
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Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-24
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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extractor de plasma
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
0
24/09/03
Banco de Sangre
Código: CAL-24
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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extractor de plasma
Durante el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento CAL-21)
se utiliza el extractor de plasma de la siguiente manera:
Para realizar la extracción del plasma se requiere introducir la bolsa que contiene el Concentrado eritrocitario
y el Plasma previamente separados por la centrifugación en el Extractor de plasma.
Para introducir la bolsa se baja la palanca (1) que se encuentra en la tapa (2) que ejercera la presión y se
atora en el gancho (3) que se encuentra en la base del extractor, una vez introducida la bolsa se suellta la
palanca de la tapa girando el gancho a la derecha y se inicia la presión sobre la bolsa.
Se coloca una pinza en la línea que va a la bolsa vacía que esta sola y se rompe el seguro de la linea principal
de la bolsa que contiene el producto para dejar salir el plasma.
Dejando un poco de plasma aproximadamente 1cm y finalizada la separación se coloca una pinza en la linea
que va al plasma y se quita la usada en la toma de muestra (si concidera que sea necesario poner una pinza
en la bolsa vacia)
Extractor de plasma:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-24
Fecha: 24 sep 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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extractor de plasma
REGISTROS
No existen registros asociados con este procedimiento
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-51
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-51
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Ninguno
00
03/Dic/03
Banco de Sangre
Código: CAL-51
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva acabo la valoración
médica de los pacientes para los que solicitan productos del Banco.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-51
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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VALORACION CLINICA DEL
PACIENTE
SOLICITUD A-13-14-07
Se recibe solicitud de producto sanguíneo en ventanilla de sección de
Inmunohematología del Banco de Sangre. Se revisa
SI
ok
NO
NO SE RECIBE
muestra ni solicitud
Se recibe muestra
y solicitud
NO
Se notifica la
Médico adscrito al
Banco de Sangre
para su valoración
El Médico revisa:
Nombre del paciente
Servicio Solicitante
Cama
Fecha de última transfusión
Diagnóstico
Hb/Hto
Peso del paciente
Causa de la Urgencia (si existe)
Depués de realizar la valoración
clínica del paciente, se pone una
nota en la solicitud con los
cambios a efectuar en:
A).- los productos solicitdos
B).- dosis
SI
OK
NO
SE ACEPTA
Se procede a realizar la
valoración clínica de
acuerdo a los productos
sanguíneos solicitados,
revisando al paciente así
como su expediente clínico
SI
Se realiza una
anotación con la
palabra SI en el
ángulo superior
derecho de la
solicitud
CAL-02-B
Se da la solicitud al
personal de laboratorio
para la asignación del
producto solicitado
Banco de Sangre
Código: CAL-51
Fecha: 03 Dic 2003
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REGISTROS
Formato A 13-14-07.- se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en archivo
muerto
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-52
ISBN: 978-968-9170-17-4
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PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: Dra. Doris
Lordméndez Jácome
Nombre: Dra. M. Leticia
Medina Macías
Nombre: Dra. Dinora V.
Aguilar Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 8-Julio-2011
Fecha: 8 Julio 2011
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-52
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAMBIO
 Se elimina la sección de
cuantificación de células tallo (CD
34+) por citometría, ya que esto
se describe en otro procedimiento
(CAL-66 Citometría).
 Se agrega el diagrama de flujo de
este procedimiento.
 Se agregan lineamientos
incluyendo las características del
producto conforme de Aféresis.
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
1
08-07/11
Banco de Sangre
Código: CAL-52
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El donador/paciente acude a su cita se registra en el área de recepción presentando su identificación con fotografía y vigente, si
es menor de edad acude con el padre o tutor y se identifica el formato M-3-0-23 con la leyenda CÉLULAS TALLO)
La enfermera toma del Kanban de recepción la ficha de identificación y llama al donador para toma de signos vitales,
somatometría y toma de muestra de biometría hemática la cual es procesada por el quíco encargado del área de toma de
muestra.
El médico toma del Kanban de recepción la ficha de identificación con resultado de la biometría hemática y realiza la historia
clínica (Ver procedimiento CAL-40). Lo ingresa a la sala de Aféresis y solicita el número de unidad y las etiquetas
correspondientes (Ver procedimiento CAL-20) pegando una etiqueta en la hoja de identificación y se procede a realizar la
recolecciónm de células tallo.
Se procede a instalación y purgado de equipo (cebado) (Ver manual del operador del separador en uso) e inicia el proceso de
recolección de células tallo conectando el equipo desechable instalado en el separador al catéter deldonado/paciente con
técnica estéril*, registrando la información en la hoja de control de procedimientos de aféresis Bitácora CAL50-A.
Se administra gluconato de calcio y solución salina (1gr./10 Kg) en infusión continua en la línea de retorno como profilaxis para
prevenir la toxicidad por citrato.
Al terminar el proceso de recolección de células tallo se toman signos Vitales y se desconecta el equipo desechable
de las líneas del cateter, se cierran las líneas del mismo dejándose heparinizados.( con técnica estéril).
Se le proporciona un refrigerio y al terminar se envía al servicio de trasplantes para seguir indicaciones y se
programa para una segunda recolección al día siguiente (solo en caso de no haberse obtenido la dosis terapéutica).
Al terminar de retirar el equipo la enfermera identifica las unidades del producto obtenidas (2 bolsas),
la ficha de identificación. Una de las etiquetas se pegan en la Bitácora CAL -50-a de la hoja que
corresponde al procedimiento que se lleva a cabo
NOTA: La identificación de las bolsas es provisional hasta la identificación final en Serología . (Ver
CAL- 32 )
Se anota en cada una de las bolsas el número de Aferesis (obtenido de la bitacora CAL-50-A), y el
volúmen.
La enfermera lleva las bolsas del producto al área de Inmuno -Hematología – receptores. Se colocan
en el refrigerador correspondiente y se avisa al personal del área .
Se entrega al área de Serología la Historia clinica , la ficha de identificación, el talón de
autoexclusión, los resultados de la biometría PRE.
Al terminar el procedimiento la enfermera registra la información en el sistema informático de banco
de sangre .
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-52
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1.-PROPOSITO:
Obtener células progenitoras de sangre periférica de donadores alogénicos o
autólogos en cantidades terapéuticas que garanticen el injerto satisfactorio de las
mismas en los pacientes que lo reciban.
2.-ALCANCE:
Desde la aceptación del paciente en protocolo de Trasplante de células progenitoras
hematopoyéticas de sangre periférica (TCPH-SP), el estudio/valoración del donador
alogénico o autólogo en el banco de sangre, control de la movilización de CPH, hasta la
recolección de las CPH por medio de procedimientos de aféresis.
PERSONAL INVOLUCRADO Y RESPONSABILIDADES.
- COORDINADOR DEL COMITÉ DE TRASPLANTE DE CÉLULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYÉTICAS.
Informar a miembros del comité sobre los pacientes aceptados para el protocolo de
trasplante de células progenitoras hematopoyéticas.
Elaborar solicitudes para estudios a realizar en Banco de Sangre (BS). (Ver
procedimiento de elaboración de solicitudes de estudios en BS).
Administrar estimulo al donador para movilización.
Solicitar unidades de CPH-SP para su infusión.
- JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BANCO DE SANGRE.
Enlazar las actividades del BS con la coordinación del comité de TCPH.
Coordinar actividades relacionadas a la recolección en el Banco de sangre.
Solicitar apoyo para la criopreservación de las CPH-SP si no se dispone del recurso en
el BS.
- COORDINADOR (A) DE LA UNIDAD DE AFERESIS.
Informar y orientar al familiar, sobre el proceso de recolección de CPH-SP y
apoyo transfusional peri trasplante
Recoger, verificar los resultados de los estudios realizados e informar al jefe del
departamento, al coordinador del comité de TMO sobre los resultados de los estudios
realizados en BS.
Programar los procedimientos de recolección de CPH-SP
Supervisar los procedimientos de recolección de CPH-SP.
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Código: CAL-52
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Informar a la jefatura de BS y a la Coordinación del comité de TCPH sobre cualquier
eventualidad de los procedimientos.
Coordinar con el laboratorio de BS la existencia de componentes sanguíneos dirigidos
para los pacientes en caso de utilizarse durante el procedimiento de
recolección.
JEFE DEL LABORATORIO DEL BANCO DE SANGRE.
Coordinar la realización de los estudios de los donadores y/o pacientes en protocolo de
TCPH.
Proporcionar de manera oportuna, a la coordinación de aféresis los resultados de los
estudios de laboratorio realizados a los donadores, pacientes en protocolo de TCPH.
Coordinar la realización del control de la movilización en sangre periférica de los
donadores (BH, cuantificación de células mononucleares (CMN) y/o CD34+)
Coordinar la realización del control de calidad a las cosechas de CPH-SP obtenidas en
los procedimientos de recolección.
Mantener bajo resguardo las CPH y supervisar la adecuada conservación de las CPHSP obtenidas.
Proporcionar las unidades de CPH-SP cuando se lo soliciten.
RECEPCION. (Ver CAL-20 Procedimiento de registro a disponentes)
Ingresar datos personales del donador en el sistema e imprimir etiquetas para
identificación de tubos de muestras de sangre y asignar número de unidad.
ENFERMERA.
Valora accesos venosos, somatometría y signos vitales de los candidatos a donadores
de CHP-SP (Ver CAL- 30 valoración de venas y somatometría).
Realiza procedimiento de recolección de células (Ver Manual Operativo del separador
celular)
QUIMICO
Procesar muestra de sangre para BH (Ver CAL-16 Uso del equipo automatizado de
Biometría Hemática) y cuantificación de CD34.
3.-DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO.
Se realiza en 4 fases que son:
1.- Presentación de pacientes al programa de Trasplante de medula ósea (TMO).
Se realizan reuniones quincenales en donde se comentan los casos (Ver Minutas).
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Código: CAL-52
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2.- Estudio de donador, donador/paciente en banco de sangre (Ver Cal-25
Procedimiento de grupo sanguíneo y anticuerpos y Cal-26 Procedimiento de serología).
Valoración en la unidad de aféresis.
Se realiza valoración clínica del donador de acuerdo a edad:
A) Mayores de edad solicita cita a TMS de BS para estudio como donador
habitual.
B) Si es menor de edad llena historia clínica de disponentes de sangre, se toman
signos vitales y somatometría y se valora la utilización de concentrado
eritrocitario para el cebado del equipo desechable del separador celular.
Se programa procedimiento de acuerdo a características específicas de cada donador.
Se proporciona al padre o tutor o al donador la carta de consentimiento bajo
información donde se describen las características del procedimiento: como, donde y
quien lo realiza y quien supervisa, preparación (movilización), duración y frecuencia,
efectos adversos y posibles complicaciones; y solicita su firma de autorización para la
realización del mismo. (Ver Carta de consentimiento bajo información).
3.- Movilización.
Inicia 4 días antes del inicio de la recolección con la administración de citocinas,
quimioterapia, citocinas/quimioterapia y/o radioterapia, según protocolo de TMO.
El donador o paciente/donador acude al servicio de oncología para la administración
del estimulo cada 24 h incluyendo los días de recolección de CPH-SP.
Simultaneo a la administración del estimulo, se toma una muestra de sangre en tubo de
BH para el control de la movilización, de acuerdo a el incremento de la formula blanca
(leucocitos totales, % y total de CMN).y se envía al BS el tubo con la muestra de
sangre para el conteo de células CD34+.
4.- Recolección de células hematopoyéticas progenitoras de sangre periférica.
El donador acude al BS al 4º ó 5º día del inicio de la movilización, presenta la solicitud
de BH y CD34+.
La recepcionista ingresa la información en el sistema, le proporciona la hoja ficha de
identificación de donador (M-3-0-23) la cual ha identificado con la leyenda células tallo,
y solicita la firme el donador o el padre /tutor.
La recepcionista solicita al familiar o al donador se anote en la Bitácora de
Disponentes Atendidos (CAL-46-B), y pase a la sala de espera.
La enfermera toma la hoja de identificación del Kanban ubicado en la zona de
recepción. Lo llama para tomar signos vitales. Nota: Si no tenemos resultado de
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biometría hemática y cuenta de CD34 previas, se tomarán en ese momento las
muestras correspondientes.
Pide al donador o al familiar que lleve al menor de edad que acudan a tomar un
desayuno ligero.
El químico procesa la citometría hemática y entrega el resultado a la enfermera y/o
médico y posteriormente se realiza la cuantificación de células CD34+.
El médico encargado del procedimiento valora los resultados de la biometría hemática
y de la cuantificación de CD34+ si se tienen disponibles del día anterior y decide la
realización o no del procedimiento de acuerdo a lo programado de acuerdo a las
características clínicas del donador valoradas previamente.
La enfermera procede instalar el equipo desechable en el separador celular según las
instrucciones del Manual del operador.
El médico supervisa permanentemente el procedimiento, las condiciones clínicas del
paciente y da instrucciones si se presentan problemas técnicos y/o clínicos
relacionados con el paciente.
Nota: La conección y desconección de las líneas del catéter al equipo desechable
deberá realzarse utilizando técnicas de asepsia y antisepsia y se tomarán las muestras
pre y post procedimiento necesarias para el control del mismo (biometría hemática,
hemocultivo, tiempos de coagulación, etc.).
Al finalizar el procedimiento la enfermera o el médico solicita al área de recepción las
etiquetas de identificación de unidades y documentación, y las pega en las bolsas de
recolección de CPH, plasma, bitácora, historia clínica y hoja de identificación.
La enfermera entrega el o los productos obtenidos al área de inmunohematología para
su almacenamiento hasta que se soliciten para su infusión.
LINEAMIENTOS O POLÍTICAS:
1.- La información adicional que se anexa a la hoja de identificación del donador no
deberá eliminarse (desprenderse o borrarse).
2.- La obtención de componentes celulares por métodos de aféresis deberán tener
como propósito cubrir la deficiencia específica de dicho componente en un paciente.
3.- Los procedimientos de aféresis para la obtención células progenitoras
hematopoyéticas deberá estar justificada por una solicitud de interconsulta del servicio
y el médico del servicio responsable del tratamiento del paciente.
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4.- Los donadores de células hematopoyéticas obtenidas por aféresis deberán cubrir
los requisitos normativos:
Accesos venosos adecuados (preferentemente catéter venoso central)
Estudios de inmunohematología (grupo ABO, Rh), antígenos eritrocitarios, aglutininas
en caso específicos (incompatibiloidad mayor)
Estudios de serología del donador: VIH, HB, AgsHB, Brucella, Chagas, CMV IgM.
Consentimiento informado.
Control de movilización con biometría hemática y/o cuantificación de células CD34+.
Células progenitoras
≥ 50 mL
≥ 2x106/kg de peso de receptor de
células CD34+ Hematopoyéticas
(Alogénico)
≥1.5x106/Kg de peso receptor de células
CD34+
(Autólogo)
Para el producto final:
Integridad de los contenedores.
Identificación de la unidad con: Nombre del donador
Número de unidad/Número de aféresis.
Fecha de obtención.
Tipo de componente.
Volumen.
5.- El producto final que no cumpla con los criterios de conformidad deberá ser
evaluado conjuntamente con el personal médico y de laboratorio de banco de sangre y
el coordinador de trasplantes, en base a los siguientes criterios:
 Cuando la dosis no sea la óptima se considerara la posibilidad de la realización
de otro procedimiento para poder alcanzar la dosis sumando la dosis anterior.
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DESCRIPCIÓN DEL LLENADO DE LA BITÁCORA CAL-50-A (Control de
procedimientos de Aféresis)
Una vez firmada la carta de consentimiento bajo información ya sea para disposición
Alogénica o Autóloga (Ver Anexo 1 y Anexo 2) se procede a realizar la recolección de
células progenitoras hematopoyéticas de sangre periférica.
Registrándose la información en la bitácora CAL 50 A (Control de procedimientos de
aféresis), que contiene la siguiente información:
HOJA DE CONTROL DE PROCEDIMIENTOS DE AFÉRESIS
M-3-4-06 a
No. De Aféresis: Con la letra A para identificar que es procedimiento de aféresis, el
número consecutivo del procedimiento, se inicia el No. 1 con el primer procedimiento
del año y finaliza el 31 de diciembre, y el año en curso.
No. De Unidad: Asignado por el sistema informático de banco de sangre en forma
consecutiva.
Procedimiento: Según el componente(s) que se va(n) a obtener.
Fecha:
Día, mes y año en que se realiza la recolección.
Equipo:
Elegir las opciones (Abierto o Cerrado).
Flujo:
Establecer si es continuo o discontinuo
Máquina:
Se refiere al separador que se utiliza.
Cámaras:
NA (No aplica)
I. DATOS DEL RECEPTOR.
Nombre: Apellido paterno, apellido materno y nombre (s)
Registro: No. de registro otorgado por el INP
Cama: En caso de que el paciente se encuentre hospitalizado, se anotará el número
de cama correspondiente.
Grupo sanguíneo: Se anotará solo si se tiene disponible.
Edad: En años
Sexo: Se refiere a género femenino ó masculino.
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II. DATOS DEL DONADOR
Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del donador.
Edad: # de años que tiene el donador al momento de realizar el procedimiento.
Grupo sanguíneo: Tipo de sangre del donador
Parentesco: Relación que existe entre el paciente y el donador (Amistad, familiar, etc).
Peso: En kilogramos.
SEROLOGIA: Se refiere a los resultados de los siguientes exámenes:
- H.I.V.
- H.C.V.
- AgS HB
- R.P.R.
- BRUCELLA
- OTROS
Nombre y firma del químico que realizó las pruebas: El químico anota su nombre y
firma.
III. DATOS DEL PROCEDIMIENTO
Hora de inicio: Hora en que se inicio el procedimiento.
Hora de terminación: Hora en que se finalizó el procedimiento.
Nombre y Firma de la enfermera que realiza el procedimiento
Otros datos que se registran en la bitácora CAL-50-A anotados por la enfermera
durante el procedimiento:
VELOCIDAD DE VELOCIDAD DE
SANGRE(ml/min)
PLASMA
TIEMPO **
*
(ml/min)*
VOLUMEN
DE
SANGRE (ml) *
VOLUMEN
DE
PLASMA (ml)*
SIGNOS VITALES
Y OBSERVACIONES ***
ACD (ml)**
PRE
CAL-02-B
TRANS
POST
Banco de Sangre
Código: CAL-52
ISBN: 978-968-9170-17-4
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*. Obtenidos directamente de la máquina.
**. Al momento de llenar el registro.
***. Se registran antes, durante y después del procedimiento.
Volumen procesado de sangre: Cantidad de sangre que se proceso al finalizar el
procedimiento, obteniendo este dato directamente de la máquina.
Anticoagulante: Cantidad de anticoagulante que se utilizo durante el procedimiento.
Solución salina: Cantidad de solución salina que se utilizo durante el procedimiento
IV. RESULTADOS
Volumen de la cosecha:
Dato que es obtenido por la enfermera al
pesar cada bolsa que contiene el producto y
restarle el peso de la bolsa vacía (40 ml)
C.P. Estimados:
El cálculo que se realiza para programar la
plaquetaféresis.
DATOS DE BIOMETRIA
HEMATICA
MUESTRA PRE MUESTRA POST
MUESTRA DE LA COSECHA
COSECHA FINAL
PLAQUETAS
LINFOCITOS
GRANULOCITOS
HEMATOCRITO
OTROS
Nombre y firma del médico que supervisó el procedimiento: El médico anota su nombre
y firma.
M-3-4-06 b
Reacciones adversas durante el procedimiento: (RAP)
Presentó RAP: Se anota afirmativa o negativamente
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Banco de Sangre
Código: CAL-52
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Tipo de RAP: Se anota el tipo de reacción presentada.
Medidas Tomadas: Se anota el manejo que se dio a la reacción.
Observaciones: Se anota algún comentario adicional si es que existiera.
Fallas técnicas durante el procedimiento: (FTP)
Tipo de falla: Se anota las características de la falla técnica que hubo durante el
procedimiento.
Medidas tomadas: Se anotas las acciones tomadas para tratar de resolver la falla.
Observaciones: Se anota algún comentario adicional si es que existiera.
ESPACIO LIBRE PARA ADHERIR ETIQUETA DEL EQUIPO.
ANEXO 1: CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION (Autólogo)
DEPARTAMENTO BANCO DE SANGRE
PROGRAMA DE RECOLECCIÓN DE CELULAS PROGENITORAS
HEMATOPOYETICAS
(Autólogo)
CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION.
México, D.F A día
mes año-
Yo NOMBRE DEL PADRE O TUTOR acepto que mi hijo (a) NOMBRE Y APELLIDOS
DEL PACIENTE de edad en años y meses de edad, con número de registro ---------done células hematopoyéticas progenitoras obtenidas de sangre periférica a través del
método de aféresis, para que le sean transfundidas, ya que se encuentra en el
protocolo de trasplante de células hematopoyéticas progenitoras y quién tiene el
diagnóstico -------------------------------------------------. Se me explicó que el procedimiento
de aféresis consiste en la extracción de sangre del organismo a través de un equipo
plástico, desechable y de uso único. Inmediatamente al salir la sangre del organismo
es mezclada con un anticoagulante con la finalidad de que no se coagule. Por medio
de un equipo de centrifugación integrado a la máquina que separará de la sangre las
células hematopoyéticas progenitoras con una pequeña cantidad de sangre y plasma
que le sirve para su conservación, el resto de la sangre ya mezclada con el
anticoagulante es retornada a su organismo.
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Banco de Sangre
Código: CAL-52
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Todo esto requiere que antes del procedimiento haya cubierto varios requisitos que
son:
a) Acudir a una valoración de su estado de salud actual, realizada por el médico
tratante, y los servicios interconsultados por el mismo, incluyendo banco de sangre
En
el
banco
de
sangre
le
realizaran:
estudios para conocer su grupo sanguíneo ABO Y Rh, antígenos eritrocitarios, y todas
las pruebas que se consideren necesarias para evitar o disminuir posibles
complicaciones inmunohematológicas como consecuencia de transfusiones previas y/o
secundarias al trasplante.
b) Pruebas para la detección de infecciones que puedan trasmitirse por medio de
la sangre, y que de estar presente en su organismo de manera latente puedan
reactivarse como consecuencia de la baja de defensas que presentará durante el
trasplante y que garanticen su seguridad, la del personal que trabaja con su sangre y
de la persona (s) que se encuentra (n) atendiéndola(o).
c) Valoración de sus signos vitales.
La aplicación de un medicamento (factor estimulante de colonias) durante 4-6 días
previos a la realización del procedimiento para la obtención de las células
hematopoyéticas progenitoras, con el propósito de movilizarlas de la medula ósea
hacia la periferia y puedan ser separadas de esta mediante el procedimiento en
cantidad suficiente para alcanzar la cantidad necesaria (dosis terapéutica).
Puede presentar efectos adversos a la administración del medicamento (factor
estimulante de colonias) como seria: dolor óseo (huesos), escalofríos, elevación leve
de la temperatura corporal (menor de 38 grados C) dolor de cabeza (cefalea) los cuales
son leves y ceden generalmente con la administración de medicamentos que calmen
el dolor o controlen la fiebre, si a pesar de estos persisten las molestias, se considerara
la suspensión del procedimiento.
d) Toma de muestras para la realización de estudios de laboratorio (biometría
hemática) que se consideren necesarios para valoración de la respuesta a la
aplicación del que sirvió para movilizar las células.
Pueden ser necesarios 2 o
más procedimientos de recolección de células
hematopoyéticas para alcanzar la dosis que mí paciente requiera.
Se me informó también que:
- El procedimiento será realizado por una enfermera especialista en el manejo de la
máquina y por un médico que supervisará la realización del mismo. Para asegurar una
buena tolerancia del procedimiento tomarán constantemente sus signos vitales:
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frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria, tensión arterial, temperatura y llevaran un
registro de la
Cantidad de sangre procesada, la cantidad de anticoagulante administrado y el tiempo
en que se realiza.
Puede presentar efectos adversos como son: dolor y/o moretones al momento o
después de las punciones y en el sitio de las mismas, por efecto del anticoagulante
las molestias pueden ser: adormecimiento de los labios u hormigueo en diferentes
partes del cuerpo, ocasionalmente mareos, vómito, mismas que serán atendidas de
manera inmediata por el médico supervisor del Banco de sangre, quién dará las
instrucciones pertinentes para corregir estos efectos o suspender el procedimiento si
considera conveniente por ser de riesgo para el paciente continuarlo.
Existe el riesgo excepcional de que la máquina deje de funcionar por una falla de la
corriente eléctrica, esto no condiciona riesgo ya que el equipo cuenta con dispositivos
de seguridad para estas situaciones y que son implementadas por el personal al cargo
de las mismas.
Existe un riesgo mínimo (1:10,000) de muerte secundaria al procedimiento.
Se me recomendó que después del procedimiento debo mantener a mi paciente en
reposo relativo y no realizar actividades intensas.
He recibido información amplia sobre el procedimiento de donación de células
hematopoyéticas progenitoras de sangre periférica, con respuesta a todas mis
preguntas y estoy satisfecho(a) con la explicación. Por ello acepto que mi hija(o) done
las células hematopoyéticas progenitoras por el método de aféresis, enterado de los
beneficios y de los riesgos de la realización de este procedimiento, liberando de toda
responsabilidad al personal médico y paramédico del Banco de Sangre.
ATENTAMENTE
Nombre Madre o tutor del paciente) -----------------------------------
Firma___________________
Coordinador (a) de Aféresis---------------------------------------------Firma_____________________
Responsable del Banco de Sangre------------------------------------------
Firma____________________
Testigo--------------------------------------------------------------------------Firma___________________
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ANEXO 2: CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION (Alogénico)
DEPARTAMENTO BANCO DE SANGRE
PROGRAMA DE RECOLECCIÓN DE CELULAS HEMATOPOYETICAS
PROGENITORAS.
Alogénico
CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION.
México, D.F A día de mes de año
Yo NOMBRE DEL DONADOR (A) acepto donar células hematopoyéticas progenitoras
obtenidas de sangre periférica para que mi parentesco NOMBRE Y APELLIDOS DEL
PACIENTE de 1edad en año y meses, (del paciente) con número de registro ------(del paciente) a través del método de aféresis, para que le sean transfundidas, ya que
se encuentra en el protocolo de trasplante de células hematopoyéticas progenitoras y
quién tiene el diagnóstico de diagnostico del paciente.
Se me explicó que el procedimiento de aféresis consiste en la extracción de sangre del
organismo a través de un equipo plástico, desechable y de uso único. Inmediatamente
al salir la sangre del organismo es mezclada con un anticoagulante con la finalidad de
que no se coagule. Por medio de un equipo de centrifugación integrado a la máquina
que separará de la sangre las células hematopoyéticas progenitoras con una pequeña
cantidad de sangre y plasma que le sirve para su conservación, el resto de la sangre ya
mezclada con el anticoagulante es retornada a mi organismo.
Todo esto requiere que antes del procedimiento haya cubierto varios requisitos que
son:
Acudir a una valoración de mi estado de salud actual, realizada por el médico tratante,
y los servicios interconsultados por el mismo, incluyendo banco de sangre
En
el
banco
de
sangre
me
realizaron:
a) estudios para conocer mi grupo sanguíneo ABO Y Rh, antígenos eritrocitarios, y
todas las pruebas que se consideren necesarias para evitar o disminuir posibles
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complicaciones inmunohematológicas como consecuencia de transfusiones previas y/o
secundarias al trasplante.
b) Pruebas para la detección de infecciones que puedan trasmitirse por medio de la
sangre, y que de estar presente en mi organismo de manera latente puedan reactivarse
como consecuencia de la baja de defensas que presentará durante el trasplante y que
garanticen su seguridad, la del personal que trabaja con su sangre y de la persona (s)
que se encuentra (n) atendiéndola(o).
Valoración de sus signos vitales.
La aplicación de un medicamento (factor estimulante de colonias) durante 4-6 días
previos a la realización del procedimiento para la obtención de las células
hematopoyéticas progenitoras, con el propósito de movilizarlas de la medula ósea
hacia la periferia y puedan ser separadas de esta mediante el procedimiento en
cantidad suficiente para alcanzar la cantidad necesaria (dosis terapéutica).
Puede presentar efectos adversos a la administración del medicamento como seria:
dolor óseo (huesos), escalofríos, elevación leve de la temperatura corporal (menor de
38 grados C) dolor de cabeza (cefalea) los cuales son leves y ceden generalmente con
la administración de medicamentos que calmen el dolor o controlen la fiebre, si a pesar
de estos persisten las molestias, se considerara la suspensión del procedimiento.
- Toma de muestras para la realización de estudios de laboratorio (biometría hemática)
que se consideren necesarios para valoración de la respuesta a la aplicación del que
sirvió para movilizar las células.
Pueden ser necesarios 2 o
más procedimientos de recolección de células
hematopoyéticas para alcanzar la dosis que el paciente requiere.
Se me informó también que:
- El procedimiento será supervisado por una enfermera especialista en el manejo de la
máquina y por un médico que supervisará la realización del mismo. Para asegurar una
buena tolerancia del procedimiento tomarán constantemente mis signos vitales:
frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria, tensión arterial, temperatura y llevaran un
registro de la cantidad de sangre procesada, la cantidad de anticoagulante
administrado y el tiempo en que se realiza.
Puedo presentar efectos adversos como son: dolor y/o moretones al momento o
después de las punciones y en el sitio de las mismas, por efecto del anticoagulante
las molestias pueden ser: adormecimiento de los labios u hormigueo en diferentes
partes del cuerpo, ocasionalmente mareos, vómito, mismas que serán atendidas de
manera inmediata por el médico supervisor de Banco de Sangre, quien dará las
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Banco de Sangre
Código: CAL-52
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instrucciones pertinentes para corregir estos efectos o suspender el procedimiento si
considera conveniente por ser de riesgo para el paciente continuarlo.
Existe el riesgo excepcional de que la máquina deje de funcionar por una falla de la
corriente eléctrica, esto no condiciona riesgo ya que el equipo cuenta con dispositivos
de seguridad para estas situaciones y que son implementadas por el personal al cargo
de las mismas.
Existe un riesgo mínimo (1:10,000) de muerte secundaria al procedimiento.
Se me recomendó que después del procedimiento debo mantenerme en reposo relativo
y no realizar actividades intensas.
He recibido información amplia sobre el procedimiento de donación de células
hematopoyéticas progenitoras de sangre periférica, con respuesta a todas mis
preguntas y estoy satisfecho(a) con la explicación. Por ello acepto donar las células
hematopoyéticas progenitoras por el método de aféresis, enterado de los beneficios y
de los riesgos de la realización de este procedimiento, liberando de toda
responsabilidad al personal médico y paramédico del Banco de Sangre.
ATENTAMENTE
Nombre Madre o tutor del paciente) -----------------------------------
Firma___________________
Coordinador (a) de Aféresis---------------------------------------------Firma_____________________
Responsable del Banco de Sangre------------------------------------------
Firma____________________
Testigo--------------------------------------------------------------------------Firma___________________
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-52
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REGISTROS
Bitácora de Aféresis CAL-50-A
Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B
El CAL-50 A y las Historias clínicas se almacenan durante 5 años en archivo activo y 5
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-55
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-55
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
NINGUNO
00
3-mayo-2004
Banco de Sangre
Código: CAL-55
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo estudios especiales
como el de Coombs Directo
COOMBS DIRECTO
TÉCNICA DIANAGEL D.C. Scan
Este procedimiento se realiza cuando el Médico lo solicita por medio del
formato A-13-14-07 señalando el Coombs Directo, o cuando el Médico del
banco de sangre o el personal mismo lo considera adecuado por el
dignóstico del paciente.
Se realiza la centrifugación del tubo que contiene la muestra del paciente
para separar el Paquete eritrocitario. Se recomienda lavarlo una vez.
Preparar una suspensión de hematíes al 1 % (1 mililitro de Diana Sol 2 más 10
microlitros del paquete eritrocitario).
De esta suspensión de eritrocitos se agregan 50 microlitros a cada uno de los
pozos de la tarjeta, que deberá estar previamente identificada con los datos del
paciente.
Centrifugar en la centrífuga Dianafuge.
Leer e interpretar los resultados.
NEGATIVO
Registrar resultado en el
Formato A-13-14-07, y en
Bitácora CAL-31-B de
CAL-02-B
Estudios Especiales
POSITIVO
Identificar si es por complemento o
por una IgG. Se requiere titularlo
para poder reportarlo en el
Formato A-13-14-07 y en la libreta
de Estudios Especiales
Banco de Sangre
Código: CAL-55
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REGISTROS
FORMATO.- A-13-14-07
Bitácora.- CAL-31-B.-De Estudios Especiales
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-56
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 28 de 4
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-56
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
NINGUNO
00
3-mayo-2004
Banco de Sangre
Código: CAL-56
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Laboratorio del Banco de Sangre lleva a cabo un protocolo especial para la técnica
de Coombs en Neonatos.
Determinación de antígenos del sistema ABO, Rh y prueba de Coombs Directo
en recién nacidos con el DianaGel Neonatal 2D.
Este procedimiento se realiza cuando el Médico lo solicita por medio del
formato A-13-14-07 señalando el Coombs Directo, o cuando el Médico del
banco de sangre o el personal mismo lo considera adecuado por el diagnostico
del paciente.
Se realiza la centrifugación del tubo que contiene la muestra del paciente para
separar el Paquete eritrocitario. Se recomienda lavarlo una vez.
Preparar una suspensión de hematíes al 1 % (1 mililitro de Diana Sol 2 más 10
microlitros del paquete eritrocitario).
De esta suspensión de eritrocitos se agregan 50 microlitros a cada uno de los
pozos de la tarjeta, que deberá estar previamente identificada con los datos del
paciente.
Centrifugar en la centrífuga Dianafuge.
Leer e interpretar los resultados.
NEGATIVO
Registrar resultado en la
Formato A-13-14-07, y
Bitácora CAL-56-A de
Estudios Especiales
CAL-02-B
POSITIVO
Identificar si es por complemento o por una
IgG. Se requiere titularlo, y realizar un
eluido para identificar el posible anticuerpo
pegado a los eritrocitos y así poderlo
reportaren el formato A-13-14-07 y en la
libreta de Estudios Especiales
Banco de Sangre
Código: CAL-56
Fecha: 3-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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REGISTROS
FORMATO A-13-14-07
Bitácora CAL-56-A.- De Estudios Especiales
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-57
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 32 de 4
Procedimiento de la Técnica para
Anemia Hemolítica en el Recién Nacido
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-57
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 33 de 4
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
NINGUNO
00
10-mayo-2004
Banco de Sangre
Código: CAL-57
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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ENFERMEDAD HEMOLIÍTICA DEL RECIEN NACIDO (EHRN)
La EHRN es un proceso inmunológico que afecta al feto y al recién nacido, y se
caracteriza por un cuadro de anemia hemolítica inmune debido a la incompatibilidad
entre el grupo sanguíneo de la madre y el de su descendiente.
Clasificación de la EHRN según la causa desencadenante:
1. EHRN debido a sensibilización a otros antígenos del sistema Rh-Hr: D, C, E, c, e.
2. EHRN por incompatibilidad con el sistema ABO.
3. EHRN causada por la sensibilización a otros antígenos: Kell, Duffy, Kidd, Diego, etc.
ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIEN NACIDO
EXAMENES DE LABORATORIO DEL BANCO DE SANGRE PARA SU
DETERMINACIÓN
RECIEN NACIDO (RN)
Determinación del Sistema ABO y Rh-Hr
(fenotipos completos del sistema).
Coombs Directo (CD)
RN: grupo A, B, AB y Rh positivo.
CD positivo o negativo.
Madre: O positivo, RAI negativo.
Probable incompatibilidad por Sistema ABO
Titular el CD del RN si es positivo.
Realizar un eluido para Sistema ABO.
CAL-02-B
MADRE
Determinación del Sistema ABO y Rh-Hr
(fenotipos completos del sistema).
Rastreo de Anticuerpos Irregulares (RAI)
RN: grupo A, B, AB, O, y Rh positivo
CD positivo o negativo.
Madre: O negativo, RAI positivo o negativo.
Probable incompatibilidad por sistema Rh-Hr
Titular el CD del niño si es positivo.
Realizar un eluido para Ac irregulares
fuera de Sistema ABO.
Banco de Sangre
Código: CAL-57
Fecha: 10-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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En caso de que se requiera exanguinotransfusión el RN seleccionar la sangre
de acuerdo con la tabla CAL-57-A
REGISTROS
No existen registros
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-58
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 36 de 4
Procedimiento de la Técnica de Prueba Rápida
para Coombs Directo
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-58
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 37 de 4
para Coombs Directo
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
NINGUNO
00
24-mayo-2004
Banco de Sangre
Código: CAL-58
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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para Coombs Directo
El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo pruebas rápidas en
tubo para Coombs Directo, la cual está indicada en:
a. Todos los mcasos de anemia o enfermedad hemolítica del recién nacido.
b. Estudios de la sangre de pacientes con anemia hemolítica.
c. Reacciones hemolíticas transfusionales.
PRUEBA RÁPIDA EN TUBO
La muestra de los eritrocitos del paciente en estudio, deberá obtenerse en un tubo
de Biometría Hemática
Se centrifuga la muestra y se separan los eritrocitos.
En un tubo de ensayo se vierten aproximadamente 0.5 ml de eritrocitos, o una
cantidad menor, dependiendo del tamaño de la muestra; se lavan 3 veces con
solución salina fisiológica. Un minuto a 3000 rpm.
Después de cada lavada se retira con cuidado la solución salina fisiológica.
Se prepara una suspensión aproximadamente al 2% en salina fisiológica de los
eritrocitos lavados.
En un tubo de ensayo se coloca una gota de suero Anti- Humano (Coombs),
poliespecífico (IgG-C3d), y se le añade una gota de la suspensión al 2% de las
células lavadas
Centrifugar durante 20 segundos a 3000 rpm (velocidad máxima de una Sero- Fuge).
Agitar el tubo suavemente para suspender el concentrado de eritrocitos y
observar perfectamente si hay presencia de aglutinación.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-58
Fecha: 24-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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para Coombs Directo
Una prueba negativa se reconocerá por la suspensión homogénea de todas las
células.
Una prueba positiva mostrará eritrocitos aglutinados visibles macroscópicamente.
Registrar resultados en el
Formato A-13-14-07, (ver forma de
llenado en proc. CAL-42) Y
Bitácora CAL-31-A de Estudios
Especiales (Ver forma de llenado
en el procedimiento CAL-31)
REGISTROS
Formato A-13-14-07.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5
Bitácora CAL-31-A.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-59
Fecha: 18-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de la Técnica DE Elución por Calentamiento
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
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Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-59
Fecha: 18-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de la Técnica de Elución por Calentamiento
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
NINGUNO
00
18-mayo-2004
Banco de Sangre
Código: CAL-59
Fecha: 18-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de la Técnica de Elución por Calentamiento
El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo la técnica de
ELUCIÓN POR CALENTAMIENTO (Landsteiner y Miller)
1. Lavar el volumen de células con un exceso de salina por 6 veces. Después del
último lavado, conservar una alícuota de salina para investigar anticuerpos
libres. Si persisten, significa que los lavados no han sido suficientes y deben
practicarse lavados adicionales hasta que el residuo de salina no muestre
anticuerpos.
2. Después del último lavado, empaquetar bien las células y agregarle igual
volumen de albúmina bovina al 6%. La cual se prepara mezclando 2 ml de
albúmina al 30% para 8 ml de salina, o 3 ml de albúmina al 22% para 8 ml de
salina. Mezclar bien.
3. Llevar al baño María a 56ºC durante 10 minutos, mezclando periódicamente.
4. Centrifugar a altas velocidades por 5 minutos.
5. Separar el sobrante rosado en un tubo aparte e identificado adecuadamente.
Este método ofrece buenos resultados para eluir anticuerpos anti – A y anti – B,
pero no es recomendable para otros anticuerpos.
Registrar el resultado en el
Formato A-13-14-07, Ver forma de llenado
en proc. CAL-42) y Bitácora CAL-31-A de
Estudios Especiales (Ver forma de llenado
en el procedimiento, CAL-31)
REGISTROS
Formato A-13-14-07.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5
Bitácora CAL-31-A.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-60
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo
para Titular Eritrocitos Problema Positivos.
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-60
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 44 de 4
CAL-02-B
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
NINGUNO
00
25-mayo-2004
Banco de Sangre
Código: CAL-60
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo la Prueba de
Coombs para titular eritrocitos problemas positivos.
PRUEBA DE COOMBS DIRECTO PARA TITULAR ERIOTROCITOS PROBLEMA POSITIVOS.
MATERIAL.1. Sangre problema anticoagulada con EDTA (eritrocitos problema)
2. Eritrocitos sensibilizados con IgG (testigo positivo de Coombs)
3. Eritrocitos no sensibilizados (testigo negativo de Coombs)
4. Suero de Coombs poliespecífico IgG-C3d
Preparación de los eritrocitos.a. Se requieren 3 tubos de 12 X 75 mm, en uno de ellos se coloca 1 gota de eritrocitos problema, en
otro 1 gota de testigo positivo de Coombs, y en el tercero 1 gota de testigo negativo de Coombs.
b. Lávelos con Solución Salina Fisiológica (SSF) tres veces, llenando el tubo.
c. Resuspéndalos al 2.5% con SSF (25 microlitros de eritrocitos en 1 ml de SSF)
Preparación de la dilución del suero de Coombs.1. Numere 4 series de tubos de 10 X 75 mm o de 12 X 75 mm del 1 al 8.
2. La serie 1 se utilizará para hacer la dilución del Suero de Coombs, en los tubos No 1 y 2, se
colocan 8 gotas de suero de Coombs.
3. A partir del tubo 2 hasta el No 8, coloque 8 gotas de Solución Salina Fisiológica.
4. Mezcle el contenido del tubo No 2 y pase 8 gotas al tubo No 3 y así sucesivamente hasta el No 8
donde se descartan 8 gotas.
5. Del tubo No 8 , pasar con una pipeta limpia m2 gotas a los tubos 8 de la serie 2, 8 de la serie 3, 8
de la serie 4.
6. Pase el tubo No. 7, 2 gotas a los tubos 7 de la serie 2, 7 de la serie 3, 7 se la serie 4, y así
sucesivamente hasta los tubos No 1 de la serie 2, 1 de la serie 3, 1 de la serie 4.
7. Con una pipeta limpia se pone una gota de los eritrocitos problema a todos los tubos de la serie 2.
1 gota de eritrocitos sensibilizados a todos los tubos de la serie 3 y una gota de eritrocitos no
sensibilizados a la serie 4.
8. Mezcle cuidadosamente cada serie.
9. Centrifugue todos los tubos a 3000 rpm durante 20 segundos.
10. Lea cuidadosamente cada uno de los tubos, comenzando del tubo No 8 al No 1.
11. Los resultados positivos se reportan en cruces, 4+ para el más positivo, 1+ para el menos positivo.
12. El título se reporta de acuerdo a la dilución que resulte más elevada.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-60
Fecha: 25-mayo-2004
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Registrar resultado en el
Formato A-13-14-07, (ver forma de
llenado en proc. CAL-42) y Bitácora
CAL 31-A de Estudios Especiales
(Ver forma de llenado en el
procedimiento CAL-31)
REGISTROS
Formato A-13-14-07.- Se almacena en Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5
Bitácora CAL-31-A.- Se almacena en Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-63
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Procedimiento para manejo de Condonaciones
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Lic. TS Ana María Dorantes
Ceh
Dra. Margarita Leticia
Medina Macías
Dra. Dinora V. Aguilar
Escobar
Firma:
Firma:
Fecha:
10-enero-2012
CAL-02-B
Firma:
Fecha:
10-enero-2012
Fecha:
10-enero-2012
Banco de Sangre
Código: CAL-63
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CAMBIO
 Se elimina el inciso 3 de los
requisitos para la condonación
 Se
establece
tiempo
de
resguardo del formato A-14-33A
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
01
10-enero-2012
Banco de Sangre
Código: CAL-63
ISBN: 978-968-9170-17-4
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DESCRIPCIÓN DEL PROCESO
Dentro del Instituto Nacional de Pediatría se solicitan donaciones de sangre, según
el manual de procedimientos del Departamento de Trabajo Social (Ver Manual de
Procedimientos de Trabajo Social para la donación de sangre y procedimiento CAL-11,
del Banco de Sangre) y lleva a cabo la condonación de sangre para los pacientes que
lo ameriten. Dichas propuestas de condonación se llevan a cabo en Trabajo Social del
Banco de Sangre y en Trabajo social de Hospitalización, y son autorizados por la
Trabajadora Social del Banco de Sangre y por el Jefe del Departamento del Banco de
Sangre o quien este a cargo del departamento.
CONDONACIONES EN EL BANCO DE SANGRE
El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo condonaciones
de donación de sangre cuando la situación socio-económica de los pacientes lo amerite
y bajo las siguientes situaciones:
1. Cuando son pacientes que forman parte de algún protocolo de investigación.
2. Cuando el paciente este bajo protección institucional.
3. Por diagnóstico conocido del paciente y/o de los padres.
Dicha determinación se basa en el estudio social del área de Trabajo Social del
Banco de Sangre y es autorizado por el Jefe del Departamento del Banco de
Sangre.
Si el Jefe del Departamento autoriza la Condonación de Sangre, La Trabajadora
Social realiza el llenado del Formato de Condonación A-14-33-A, (ver abajo) y
entrega a los padres la parte correspondiente y se queda en el Banco de Sangre la
parte que registra la condonación realizada, así mismo se acompaña de una breve
descripción del motivo de condonación.
El Formato de Condonación A-14-33-A, es almacenado por el Banco de Sangre en
el archivo del área de recepción.
La Trabajadora Social de Hospitalización da indicaciones a los padres del paciente
para que pase a Trabajo Social del Banco de Sangre y entregue el motivo social
para sugerir que se condone la donación de sangre y/o documento que ampara la
protección institucional del paciente.
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Notifica al jefe del Departamento de Banco de Sangre y llena el Formato de
Condonación con clave A-14-33-A, esto con la finalidad de que El Banco de Sangre
lleve un registro y evidencia de las condonaciones que se realizan en el Instituto.
Llenado del Formato de Condonación A-14-33-A, la Trabajadora Social del Banco
de Sangre, lo pasa a autorización con el Jefe del Departamento, o el responsable
del Departamento que se encuentre en ese momento.
FORMATOS RELACIONADOS A ESTE PROCEDIMIENTO
Formato A-14-33-A
BANCO DE SANGRE
Nombre del Paciente:________
Reg.___ Servicio:___Cama:____
Se condonó Sangre:
1Donación ( )
2 Donaciones ( )
Motivo:_______________________
____________________________________
A-14-33-A
CAL-02-B
INSTITUTO NACIONAL DE
PEDIATRÍA
BANCO DE
SANGRE
No
Nombre del
paciente:_______________________
Reg:______ Servicio:______
Cama_______
Se condonó sangre:
1Donación ( )
2
Donaciones ( )
JEFE DEL BANCO DE SANGRE
Banco de Sangre
Código: CAL-63
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Forma de Llenar el Formato A-14-33-A
Nombre del
Paciente:
Registro:
Servicio
Cama:
Se condonó sangre:
1Donación ( ) 2
Donaciones ( )
Motivo:
Nombre del paciente para el que se solicita la
donación
Número de expediente que tiene el paciente en el
INP
Servicio para el que le estan solicitando la
donación sangre
Cama en la que esta hospitalizado niño, o referir
si es externo
Tachar en el espacio correspondiente a la
cantidad de donaciones condonadas
Describir brevemente la razón por la que se
decide condonar la donación de sangre
REGISTROS
A-14-33-A se almacena en el Banco de Sangre, en el archivo del área de Recepción,
durante 5 años.
ANEXO 1.- MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE TRABAJO SOCIAL, AUTORIZADO
INSTITUCIONALMENTE
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Código: CAL- 65
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PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL
VHC Y VIH-1
Elaborado por:
Revisado por:
Nombre: Pilar Sánchez S.
Nombre: Guillermo Escamilla Nombre: Dinora Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
02 Enero 2012
Fecha:
02Enero 2012
Fecha:
02 Enero 2012
CAL-02-B
Aprobado por:
Banco de Sangre
Código: CAL- 65
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VHC Y VIH-1
CAMBIO
CAMBIO DE EQUIPO COBAS
AMPLICOR A TAQ MAN
CAL-02-B
REVISIÓN
01
FECHA
02 ENERO 2012
Banco de Sangre
Código: CAL- 65
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VHC Y VIH-1
Después de que las muestras de los pacientes que resultaron positivas, al Virus de
Inmunodeficiencia Humana (VIH-1) ó al Virus de la Hepatitis C, se continuará el seguimiento
clínico con determinaciones de la carga viral de manera periódica solicitándola al Banco de
Sangre.
OBTENCION
DE LA MUESTRA (CAL-76) Y CENTRIFUGACION DE LA MISMA
Campana de Flujo Laminar
OBTENER ALICUOTA DE 550 uL DE PLASMA (de ser posible dos ), IDENTIFICAR Y
GUARDAR EN EL CONGELADOR DE -20 C A -80 C A
PROCESO DE EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS
Software AMPLINK / Equipo Taq Man
CREACION DE SERIE ANALITICA
Software AMPLINK / Equipo Taq Man
AMPLIFICACION Y DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS
Software AMPLILINK
VALIDACION DE RESULTADOS Y GENERACION DE ARCHIVO (RESPALDO
ELECTRONICO)
IMPRESIÓN DE RESULTADOS Y DESCARGAR AL SIBS (Sistema Informático de Banco de
Sangre)
LOS REPORTES IMPRESO GENERADOS SE GUARDAN 5 AÑOS EN ACTIVO Y 5 AÑOS
EN ARCHIVO MUERTO
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VHC Y VIH-1
Carga viral del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH)
La prueba COBAS® TaqMan® HIV-1, para uso con el sistema de alta pureza (HPS) es una
prueba in vitro de amplificación del ácido nucleico para la determinación cuantitativa de ARN
del virus de inmunodeficiencia humana de tipo 1 (HIV-1) 1 en plasma humano con EDTA,
utilizando el kit para ácido nucleico vírico del sistema de alta pureza para la preparación
manual de las muestras y el analizador COBAS® Taq Man® 48 para la detección y
amplificación automática.
La prueba está indicada para usarse conjuntamente con la presentación clínica y otros
marcadores analíticos de progreso de la enfermedad para el tratamiento clínico de los
pacientes infectados por HIV-1. La prueba puede utilizarse para evaluar la prognosis del
paciente mediante la medición de la concentración de referencia (antes de iniciar el
tratamiento) de ARN del HIV-1 o para controlar los efectos de la terapia antirretrovírica
mediante la medición de los cambios en las concentraciones de ARN del HIV-1 en plasma
en el curso del tratamiento antirretroviral.
La prueba COBAS® TaqMan® HIV-1 no está indicada para utilizarse para detectar la
presencia de HIV-1 en sangre o hemoderivados ni como prueba diagnóstica para confirmar la
existencia de una infección por HIV-1.
Utiliza la tecnología PCR para lograr una sensibilidad máxima y un intervalo dinámico para la
detección cuantitativa del ARN del HIV-1 en plasma anticoagulado con EDTA.
La prueba puede cuantificar el ARN del HIV-1 en un intervalo de 47 - 10.000.000 copias/ml.
Una copia de ARN del HIV-1 es equivalente a 1,7 UI basándose en el estándar de la OMS
(Código NIBSC 97/656).
NOTA: Para mayor información consulta el inserto
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VHC Y VIH-1
Principios del ensayo
La prueba COBAS® TaqMan® HIV-1 está basada en tres procesos principales:
1. Preparación manual de las muestras para obtener el ARN del HIV-1
2. Transcripción reversa automática del ARN del objetivo para generar un ADN
complementario (ADNc).
3. Amplificación simultánea del ADNc del objetivo con iniciadores complementarios
específicos del HIV-1, y la detección de sondas de detección oligonucleótidas marcadas con
dos colorantes fluorescentes que permiten la determinación cuantitativa del producto
amplificado del objetivo del HIV-1 (amplicón) y del ARN del estándar de cuantificación del
HIV-1, que se procesa, amplifica y detecta simultáneamente con la muestra.( Ver inserto)
Obtención de la muestra y centrifugación:
Para la obtención de la muestra se procederá de acuerdo al procedimiento CAL-76 de
recolección y toma de muestras de pacientes.
En este proceso se utilizan únicamente muestras con EDTA.
La sangre obtenida con EDTA se puede almacenar a una temperatura de 2 a 28°C hasta 6
hrs. a partir de su obtención.
Una vez obtenida la muestra se procederá a separar el plasma de los hematíes mediante
centrifugación a 800-1600g por 20 minutos a temperatura ambiente. Separar e identificar el
plasma en tubos de rosca en (uno ó dos) alícuotas de 550 µL y almacenar de -20°C a -80°C
en caso de no ser usado de inmediato.
Para mayor información referirse a la pagina 11 del inserto)
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VHC Y VIH-1
EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS PARA MUESTRAS Y CONTROLES PARA VIH-1
1) Descongelar las muestras.
2) Preparar los siguientes reactivos:.
a) Inhibitor Removal Buffer (IRB)
No Test
IRB
(negro)
(mL)
Etanol
(mL)
12 test
8.25
5
24 test
16.5
10
48 test
Todo
20
Conservar a 15-25 C
Estabilidad 30 días
Mezclar por inversión (5 a 10 veces)
b) Wash Buffer
No Test
Wash
Buffer
(azul) (mL)
Etanol
(mL)
12 test
5
20
24 test
10
40
48 test
Todo (20)
80
Conservar a 15-25 C
c) Elution Buffer (ELB). Incubar a 70°C. 75 ul por muestra
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No Test
ELB (mL)
12 test
5
24 test
10
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VHC Y VIH-1
d) Isopropanol en tubo Falcon
e) CAR (Blanco)
No Test
Isopropanol
(mL)
12 test
5
24 test
10
f) PK (Magenta)
Para 24 tests: 0,5 ml ELB en
frasco CAR. Mezclar por
inversión y vortex.
Para 24 tests: 5 ml ELB en frasco
PK. Mezclar por inversión y
vortex.
Conservar a -20°C hasta 28 días.
3) Vórtex a muestras, controles y QS.
4) Tener Lysis Rack blanco listo con marca orientación de primera
muestra y N de rack.
5) Preparar la Lysis Binding Working Solution en tubo Falcon agregando los
reactivos en el siguiente orden. Cuando se agrega el QS y PK mezclar
inversión (no vortex).
Reactivo
12 Test
24 Test
7 mL
14 mL
CAR RNA
140 µL
280 µL
HIV-1 QS
84 µL
168 µL
PK
1.4 mL
2.8 mL
Lysis Binding
6) Agregar inmediatamente 625 μl de la Lysis Binding Working Solution
preparada en cada well del Lysis Rack (blanco).
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VHC Y VIH-1
7) Agregar 500 μl de muestra y controles a sus respectivos wells del
Lysis Rack. Vortex el Rack 10 seg.
8) Incubar el Lysis rack a 50 C – 10 minutos en baño de agua (5 cm
altura de agua).
9) Secar el Rack y centrifugar 20 sec a 4600 g.
10) Agregar 350 μl de isopropanol a cada well (1 por vez). Mezclar el Rack por inversión y luego vortex 10 seg.
11) Centrifugar 20 sec a 4600 g.
12) Preparar el Filter Tube Rack (amarillo) con su Waste Rack.
Colocar las marcas de orientación y N de Rack.
13) Transferir 750 μl de cada well al well correspondiente del Filter
Tube rack (amarillo) con su Waste Rack ajustado. Tener en cuenta las
marcas de muestras.
14) Centrifugar 2 min a 4600 g.
15) Transferir el remanente de cada well del Lysis rack (blanco ) a su
correspondiente well en el rack amarillo. Descartar el Lysis Rack
blanco.
16) Centrifugar 2 min a 4600 g.» Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
17) Abrir los wells con el gripper. Agregar 400 μl del IRB preparado por la pared del well sin tocar la pared.
19) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer preparado por la pared del well sin tocar.
20) Centrifugar 2 min a 4600 g. » Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer por
la pared del well sin tocar.
22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack (base azul).
23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 μl de ELB a 70 C a
cada well (en el centro del filtro sin tocarlo).
24) Incubar 3 min a Temp amb.
25) Centrifugar 3 min a 4600 g. » Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el Cover Rack (azul). Respetar
las marcas de orientación.
26) Utilizar 50 μl del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con
la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la
formación de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C
27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la
MMX de trabajo.
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VHC Y VIH-1
22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack
(base azul).
25) Centrifugar 3 min a 4600 g. » Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el
Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientación.
MMX de trabajo.
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VHC Y VIH-1
Preparación de Master Mix (MMX)
1) Sacar los reactivos de la MMX de la heladera y estabilizar a Temperatura
ambiente 30 minutos. Proteger de la luz. Limpiar los K-carriers y K-carrier holders
con isopropanol 70%.
2) Colocar el K-carrier (gradilla) en el K-carrier Holder.
3) Colocar los K-tubes en el K-carrier sin tocar las paredes del tubo.
Posiciones obligatorias: 1-2-5-20-23-24
4) Preparar la MMX de trabajo:
12 tests
En tubo 1,5
ml
24 tests
En vial MMX
HIV-1 MMX (μl)
700
Todo el vial de HIV-1 MMX
CTM Mn 2+ (μl )
85
170
Reactivo
Mezclar por inversión. No usar vortex.
Usar dentro de las 2 horas de preparada (proteger de la luz).
5) Destapar los K-tubes con el destapador y colocar las tapas en su gradilla.
6) Agregar 50 μl de la MMX preparada a cada K-tube.
Agregar 50 µL del eluído de muestras y controles a cada K-tube mezclar por pipeteo 3 veces
sin producir burbujas.
Llevar al equipo de PCR.
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VHC Y VIH-1
Software Amplilink/Taq Man
Encender:
CPU
Monitor
Impresora
Pestaña
Service
Due
Perform
Siga las
instrucciones
Usuario:_____
Pasword_____
Icono System
Al finalizar:
Done
Escritorio
Icono
AMPLILINK
Encender el
Equipo
Taq Man
Creación de Serie Analítica
2) Pestaña
K-Carrier
1)Icono
Orders
3) New
Icono System
4) Ingresar la
identificación de
las muestras
5) Escoger el
Test
6) Save
Introducir al termociclador
el K-Carrier con ayuda de
transportador
Star
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Open
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VHC Y VIH-1
RESULTADOS
Cálculo de resultados
El analizador COBAS® TaqMan® 48 determina de forma automática la concentración de ARN
del HIV-1 para la muestra o el control. La concentración de ARN del HIV-1 se expresa en
copias/ml. El factor de conversión entre copias/ml de HIV-1 y unidades internacionales UI/ml
es de 0,6 copias/UI, utilizando el material de referencia de la OMS para el HIV-1B 97/65635.
El analizador COBAS® TaqMan® 48:
• Determina el valor umbral del ciclo (Ct) para el ARN del HIV-1 y el ARN del estándar de
cuantificación del HIV-1.
• Determina la concentración de ARN del HIV-1 basándose en los valores Ct del ARN del HIV1 y el ARN del estándar de cuantificación del HIV-1, así como los coeficientes de calibración
específicos de cada lote.
• Determina que las concentraciones calculadas en copias/ml para el HIV-1 L(+)C y HIV-1
H(+)C se encuentran dentro de los intervalos asignados.
Validación de la serie
Compruebe la ventana de resultados del software AMPLILINK o la impresión en busca de
avisos y comentarios para asegurarse de que la serie es válida.
La serie es válida si no aparecen avisos para los controles
La serie no es válida si aparece alguno de los siguientes avisos en los controles
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VHC Y VIH-1
Si la serie no es válida, repita toda la serie incluyendo la preparación de las muestras y los
controles, transcripción reversa, amplificación y detección.
Interpretación de resultados:
Para obtener una serie válida, compruebe cada una de las pruebas por si presentan avisos o
comentarios en la impresión de resultados. Interprete los resultados de la siguiente manera:
Una serie válida puede incluir resultados de muestras válidas y no válidas dependiendo de si
los avisos y/o los comentarios se obtienen para las muestras individuales.
Los resultados de las muestras se interpretan de la siguiente manera:
NOTA: Las muestras por encima del intervalo del ensayo también pueden producir un resultado no
válido con un aviso “QS_INVALID“. Si se desean resultados cuantitativos, la muestra original
debería diluirse con plasma humano con EDTA negativo para la presencia de HIV-1 y repetirse la
prueba. Multiplique el resultado notificado por el factor de dilución.
Nota: Para mayor información referirse al Inserto y al Manual.
Anotar los resultados en la bitácora CAL-65-A
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VHC Y VIH-1
VALIDACION DE RESULTADOS
1)Icono Results
Usuario:___
Pasword___
3) Número de
K-Carrier
(doble click)
4) Revisar
RESULTADOS
11) En barra de
menús
File
12) Shut Down
CAL-02-B
2) Número de
Review
5) Revisar
RESULTADOS
10) Apagar el equipo
(Interruptor lado
Izquierdo)
7)Yes
6) Accept
9) Close
8) Ir a System
Open
Retirar el K-Carrier
13) Cerrar
Windows
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VHC Y VIH-1
Carga viral del Virus del Hepatitis C (VHC)
La prueba está indicada para su uso conjunto con la presentación clínica y otros indicadores
de laboratorio como una ayuda en la evaluación de la respuesta vírica frente al tratamiento
antivírico a través de la determinación de cambios en los niveles séricos o plasmáticos de
ARN del HCV. Datos recientes parecen indicar que las variaciones tempranas en los niveles
de ARN de HCV en suero/plasma pueden pronosticar respuestas a largo plazo del tratamiento
con interferón1.
El virus de la hepatitis C está considerado como el principal agente etiológico responsable del
90 al 95% de los casos de hepatitis post-transfusional no A y no B. El HCV es un virus ARN
monocatenario de sentido positivo con un genoma de aproximadamente 10.000 nucleótidos
que codifican 3.000 aminoácidos. Como virus transportado en sangre, el HCV es transmisible
a través de la sangre y los productos hemoderivados. La adopción más o menos generalizada
de medidas de detección sistemática del HCV en sangre ha reducido de forma considerable el
riesgo de hepatitis asociado a las transfusiones.
La prueba puede cuantificar el ARN del VHC en un intervalo de 25 – 391, 000,000 UI/ml en
plasma conservado en EDTA y suero
Principios del ensayo
La prueba COBAS® Taq Man® HCV, v2.0 se basa en tres procesos principales: (1)
preparación manual de las muestras para obtener el ARN del HCV; (2) transcripción reversa
automática del ARN diana para generar un ADN complementario (ADNc); (3) amplificación
mediante PCR del ADNc diana utilizando primers complementarios específicos del HCV, y
detección simultánea de sondas oligonucleótidas marcadas con doble marcador fluorescente
escindido que permiten la determinación cuantitativa del producto amplificado de la diana del
HCV (amplicón). Ver Inserto
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VHC Y VIH-1
Obtención de la muestra y centrifugación:
Para la obtención de la muestra se procederá de acuerdo al procedimiento CAL-76 de
recolección y toma de muestras de pacientes.
En este proceso se utilizan muestras con EDTA ó suero.
La sangre obtenida con se puede almacenar a una temperatura de 2 a 28°C hasta 6 hrs. a
partir de su obtención.
Una vez obtenida la muestra se procederá a separar el plasma de los hematíes mediante
centrifugación a 800-1600g por 20 minutos a temperatura ambiente. Separar e identificar el
plasma en tubos de rosca en (uno ó dos) alícuotas de 550 µL y almacenar de -20°C a -80°C
en caso de no ser usado de inmediato.
Para mayor información referirse a la pagina 13 del inserto)
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VHC Y VIH-1
EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS PARA MUESTRAS Y CONTROLES PARA VHC
1) Descongelar las muestras.
2) Preparar los siguientes reactivos:.
a) Inhibitor Removal Buffer (IRB)
No Test
IRB
(negro)
(mL)
Etanol
(mL)
12 test
8.25
5
24 test
16.5
10
48 test
Todo
20
Conservar a 15-25 C
b) Wash Buffer
No Test
Wash Buffer
Agua
Etanol (mL)
(azul) (mL)
desionizada(mL)
12 test
5
12.5
7.5
24 test
10
25
15
48 test
Todo (20)
50
30
Conservar a 15-25 C
c) Elution Buffer (ELB). Incubar a 70°C. 75 ul por muestra
CAL-02-B
No Test
ELB (mL)
12 test
5
24 test
10
Banco de Sangre
Código: CAL- 65
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VHC Y VIH-1
d) Isopropanol en tubo Falcon
e) CAR (Blanco)
No Test
Isopropanol
(mL)
12 test
5
24 test
10
f) PK (Magenta)
Para 24 tests: 0,5 ml ELB en
frasco CAR. Mezclar por
inversión y vortex.
Para 24 tests: 5 ml ELB en frasco
PK. Mezclar por inversión y
vortex.
3) Vórtex a muestras, controles y QS.
4) Tener Lysis Rack blanco listo con marca orientación de primera
muestra y N de rack.
5) Preparar la Lysis Binding Working Solution en tubo Falcon agregando los
reactivos en el siguiente orden. Cuando se agrega el QS y PK mezclar
inversión (no vortex).
Reactivo
12 Test
24 Test
7 mL
14 mL
CAR RNA
140 µL
280 µL
HCV QS
56 µL
112 µL
PK
1.4 mL
2.8 mL
Lysis Binding
6) Agregar inmediatamente 625 μl de la Lysis Binding Working Solution
preparada en cada well del Lysis Rack (blanco).
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Banco de Sangre
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VHC Y VIH-1
7) Agregar 500 μl de muestra y controles a sus respectivos wells del
Lysis Rack. Vortex el Rack 10 seg.
8) Incubar el Lysis rack a 50 C – 10 minutos en baño de agua (5 cm
altura de agua).
9) Secar el Rack y centrifugar 20 sec a 4600 g.
10) Agregar 250 μl de isopropanol a cada well (1 por vez). Mezclar el Rack por
inversión y luego vortex 10 seg.
11) Centrifugar 20 sec a 4600 g.
12) Preparar el Filter Tube Rack (amarillo) con su Waste Rack.
Colocar las marcas de orientación y N de Rack.
13) Transferir 750 μl de cada well al well correspondiente del Filter
Tube rack (amarillo) con su Waste Rack ajustado. Tener en cuenta las
marcas de muestras.
15) Transferir el remanente de cada well del Lysis rack (blanco ) a su
correspondiente well en el rack amarillo. Descartar el Lysis Rack
blanco.
16) Centrifugar 2 min a 4600 g.» Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
17) Abrir los wells con el gripper. Agregar 400 μl del IRB preparado por la pared del
well sin tocar la pared.
19) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer preparado por la
pared del well sin tocar.
20) Centrifugar 2 min a 4600 g. » Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo.
(base azul).
CAL-02-B
MMX de trabajo.
Banco de Sangre
Código: CAL- 65
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VHC Y VIH-1
(base azul).
MMX de trabajo.
CAL-02-B
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Código: CAL- 65
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VHC Y VIH-1
Preparación de Master Mix (MMX)
1) Sacar los reactivos de la MMX de la heladera y estabilizar a Temperatura
ambiente 30 minutos. Proteger de la luz. Limpiar los K-carriers y K-carrier holders
con isopropanol 70%.
2) Colocar el K-carrier (gradilla) en el K-carrier Holder.
3) Colocar los K-tubes en el K-carrier sin tocar las paredes del tubo.
Posiciones obligatorias: 1-2-5-20-23-24
4) Preparar la MMX de trabajo:
12 tests
En tubo 1,5
ml
24 tests
En vial MMX
HIV-1 MMX (μl)
700
Todo el vial de HIV-1 MMX
CTM Mn 2+ (μl )
85
170
Reactivo
Mezclar por inversión. No usar vortex.
Usar dentro de las 2 horas de preparada (proteger de la luz).
5) Destapar los K-tubes con el destapador y colocar las tapas en su gradilla.
6) Agregar 50 μl de la MMX preparada a cada K-tube.
CAL-02-B
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Código: CAL- 65
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VHC Y VIH-1
Encender:
CPU
Monitor
Impresora
Pestaña
Service
Due
Perform
Siga las
instrucciones
Usuario:_____
Pasword_____
Escritorio
Icono AMPLILINK
Icono System
Encender el
Equipo
Taq Man
Al finalizar:
Done
Usuario:_____
Pasword_____
Creación de Serie Analítica
2) Pestaña
K-Carrier
1)Icono
Orders
3) New
Icono System
4) Ingresar la
identificación de
las muestras
5) Escoger el
Test
6) Save
Introducir al termociclador
el K-Carrier con ayuda de
transportador
Star
CAL-02-B
Open
Banco de Sangre
Código: CAL- 65
ISBN: 978-968-9170-17-4
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VHC Y VIH-1
RESULTADOS
Cálculo de los resultados
El analizador COBAS® Taq Man® 48 determina automáticamente el título del ARN del
HCV para la muestra o el control. El título del ARN del HCV se expresa en unidades
internacionales (UI)/ml según el segundo estándar internacional de la OMS para ensayos
NAT de ARN del HCV (código NIBSC 96/798).
El analizador COBAS® Taq Man® 48:
• Determina el valor de ciclo umbral (Ct) correspondiente al ARN del HCV y al ARN del
estándar de cuantificación del HCV.
• Determina el título del ARN del HCV según los valores Ct para el ARN del HCV y el ARN
del estándar de cuantificación del HCV y los coeficientes de calibración específicos del
lote.
• Determina si las UI/ml calculadas para HCV L(+)C, v2.0 y HCV H(+)C, v2.0 están dentro
de los intervalos asignados.
Validación de la serie analítica
Compruebe la ventana de resultados del programa AMPLILINK o la impresión de los
posibles avisos y comentarios para asegurarse de que la serie es válida.
La serie será válida si no aparecen avisos para los controles de HCV .
La serie no es válida si aparece cualquiera de los avisos siguientes para los controles de
HCV :
CAL-02-B
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Código: CAL- 65
ISBN: 978-968-9170-17-4
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VHC Y VIH-1
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 65
ISBN: 978-968-9170-17-4
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VHC Y VIH-1
Si la serie no es válida, repítala por completo incluyendo los pasos de preparación de las
muestras y los controles, transcripción reversa, amplificación y detección.
Interpretación de los resultados:
Para determinar si una serie es válida, compruebe los posibles avisos o comentarios
asociados a cada muestra en la impresión de los resultados. Interprete los resultados de la
siguiente manera:
Una serie válida puede incluir resultados de muestras tanto válidos como no válidos según
los avisos o comentarios asociados con cada una de las muestras.
Los resultados de las muestras se interpretan como se indica a continuación:
NOTA: Las muestras por encima del intervalo del ensayo también pueden producir un resultado no
válido con un aviso “QS_INVALID“. Si se desean resultados cuantitativos, la muestra original
debería diluirse con plasma humano con EDTA negativo para la presencia de HIV-1 y repetirse la
prueba. Multiplique el resultado notificado por el factor de dilución.
Nota: Para mayor información referirse al Inserto y al Manual.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 65
ISBN: 978-968-9170-17-4
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VHC Y VIH-1
1)Icono Results
Usuario:___
Pasword___
3) Número de
K-Carrier
(doble click)
4) Revisar
RESULTADOS
11) En barra de
menús
File
12) Shut Down
2) Número de
Review
5) Revisar
RESULTADOS
10) Apagar el equipo
(Interruptor lado
Izquierdo)
7)Yes
6) Accept
9) Close
8) Ir a System
Open
Retirar el K-Carrier
13) Cerrar
Windows
REGISTROS
La bitácora CAL-65-A Se debe almacenar en el archivo activo durante 5 años y en el
archivo muerto 5 años.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Fecha: 01 Noviembre 2011
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CUANTIFICACION DE
CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Página 79 de 8
CUANTIFICACION DE
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
En la calibración y lectura en el equipo
1
01/11/11
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Página 80 de 8
CUANTIFICACION DE
Cuantificar el número de células CD 34+ y determinar el porcentaje de viabilidad
de las mismas en la cosecha de células Células Tallo recolectadas por aféresis
para el Protocolo de Transplante de Médula.
PROCESO:
1. Recepción de muestra:
a. Biometría Hemática
b. Cosecha
2. Cuantificación de cantidad de leucocitos empleando citometría en equipo
de Biometría Hemática
3. Ajuste del número de células: ≤ 10,000 µl
4. Preparación de muestra acorde a inserto
5. Antes de usar el citómetro de Flujo, se recomienda:
a. Proceso de lavado largo
b. Calibración
c. Usar en cada corrida un control normal (ver viabilidad)
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Página 81 de 8
CUANTIFICACION DE
A.- Preparación de muestras para conteo de células CD34+
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Página 82 de 8
CUANTIFICACION DE
B.- Lavado previo al uso del equipo
CVE: BDIS
LAVADO
ENCENDER
REVISAR
PRESION
Cambiar de
ANALIZADOR (LO +
PRIME ; OBSSERVAR
BURBUJAS)
VENT-TANK CHANGE
A
VENT-RUN
LOADER
MANAGER
CPU
MAINTENANCE
MONITOR
DILUYENTE : LLENAR
MAX ¾
IMPRESORA
DESECHOS: VACIAR
TEST OPTION
COLOCAR LOS TUBOS
EN EL RACK COMO SE
INDICA
EN LAS POSICIONES:
EQUIPO
RUN
ESCOGER
LONG
O
39.. FAC’S CLEANE
SHORT
40. FAC’S RINSE
CLEAN
HI
COLOCAR EL
EN EL EQUIPO
RACK
MONITOR
RUN
RUN
ESPERAR A QUE
TERMINE EL
LAVADO
CAL-02-B
FILE
DONE
QUIT
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Página 83 de 8
CUANTIFICACION DE
Realizar Calibración
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Página 84 de 8
CUANTIFICACION DE
Llevar las muestras al equipo para proceder a su lectura
CD34
CITOMETRO
CD34
Plantillas
PANTALLA
PRINCIPAL
APARECE EL
ULTIMO
RESULTADO
OBTENIDO
ISHAGE
(Doble Click)
ACQUIRE
AL FINALIZAR LA CORRIDA REALIZAR UN
LAVADO LARGO (LONG) DEL EQUIPO.
CONECTAR
CITOMETRO
ACQUIRE
PARAMETERS
DESCRIPTION
PRESIONAR
LA TECLA COMAND
JALAR LA
CALIBRACIO
N L.N.W
CYTOMETER
INTRUMENTS
SETTINGS
MOVER
LOS
TUBOS
CON
EL
CONTROL
ADOR
M,ANUAL
PESTAÑA
COUNTER S
ACQUIRE
INGRESAR LOS
DATOS DEL
PACIENTE
( Y SIN SOLTAR
PRESIONAR 1, 2 Y 3
Calib.File.LNW
OPEN
EQUI
PO
RUN
HI
DESKTOP
FAC’STATION
COLOCAR LOS TUBOS
EN EL ORDEN QUE
SE INDICA. Y EN LAS
POSICIONES
38. H 2 O
39.. FAC’S CLEANE
40 . FAC’S RINSE
BD FILES
CHECAR QUE EN
THRESHOLD ESTE
SELECCIONADO FL 1 Y
ESTE EN UN RANGO DE
350-360
INTRUMENT
S SETTINGS
SET
DONE
COLOCAR EL RACK
EN EL EQUIPO
ACQUISITION
CONTROL
ACQUI
RE
ACQUISITION
CONTROL
PAUSE
ABORT
DESPUES DE
5 MIN
PAU
SE
SET UP
QUIT CELL QUEST
SET UP
DON´T
SAVE
CAL-02-B
SAVE
IMPRIMIR
RESULTAD
OS
Banco de Sangre
Código: CAL- 66
Página 85 de 8
CUANTIFICACION DE
Resultados
Obtención de resultados impresos en automático ó vaciar en el formato
PERLAS BOLSA
_________________
LOTE____________
NOMBRE
PESO: _______
Muestra:
CD 34+ viables
CD34+ total
CD 45+ viables
CD45+ total
Perlas
G6
G7
Dilución
Cuenta total
CD 34+/µl
CD34+/Kg paciente
(Células CD34+ viables) / (# perlas) X
(# perlas en el tubo) / (50 µl muestra) X
Viabilidad de 34+: (CD 34+ viables)(100) / CD34+
REGISTROS
Ningún registro asociado
CAL-02-B
dilución
Viabilidad de 45+: (CD 45+ viables)(100) / CD45+
Banco de Sangre
Código: CAL- 68
Fecha: 26 de Marzo 2008
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AGLUTININAS INMUNES
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Q.F.B. JUDITH
M. en C. GUILLERMO
RODRIGUEZ HERNANDEZ ESCAMILLA GUERRERO
Firma:
DRA. DINORA
AGUILAR ESCOBAR
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Fecha:
Banco de Sangre
Código: CAL-68
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AGLUTININAS INMUNES
CAMBIO
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
Banco de Sangre
Código: CAL-68
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AGLUTININAS INMUNES
OBJETI VO
Cuantificar la concentración de un Ac presente en una muestra de suero con fines terapéuticos, de
investigación y en la elaboración y control de calidad de los reactivos.
MATERIAL Y EQUIPO
Suero en estudio, hematíes conteniendo el Ag correspondiente al Ac a titular, pizeta con SSF,
guantes quirúrgicos, programador o gradilla, lápiz graso, pipeta de Pasteur de igual calibre, bulbo
de goma, tubos de ensaye 12 x 75 mm, termoblock temperatura variable (37, 56 a 70° C),
termómetro, centrifuga, antiglobulina humana (Coombs).
METODO
A.- Titulación de Ac anti "A" y anti "B" naturales. Realizar titulo de Ac naturales del sistema
ABO, según grupo sanguíneo:
Si es grupo "0" titular anti "A" y anti "B"
Si es grupo "A" titular anti "B"
Si es grupo "B" titular anti "A"
1. Utilizar guantes quirúrgicos
2. Obtener el suero en estudio
3. Realizar diluciones doble seriadas (solución salina / suero problema) según se requiera.
4. Colocar 100 µl de solución salina a partir del tubo número 1. Añadir 100 µl de suero.
5. Mezclar y pipetear el contenido del tubo 1 y transferir 100 µl al tubo 2, asi
sucesivamente hasta la dilución deseada.
6. Se preparan tres series: para aglutininas A, aglutininas B y un testigo
7. A la primer serie se le agregan 50 µl de eritrocitos A, a la segunda 50 µl de eritrocitos B
y a la tercera: 50 µl de eritoctios O.
8. Mezclar y centrifugar a tiempo y revoluciones (30” / 3500 RPM) .
9. Leer y anotar resultados en cruces, tubo en mano en formato correspondiente.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-68
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AGLUTININAS INMUNES
INTERPRETACION DE RESULTADOS
A1/2
A1/4
4+
4+
B1/2 B1/4
4+
4+
A1/8
A1116
3+
2+
B1/8
3+
A1/32
A1/64
A1/128
1+
1/2+
B1/16
B1/32
B1/64
B1/128
3+
2+
1+
1/2+
A1/256
B1/256
A1/512
B1/512
A1/102
B1/102
Re s ul t ad o del ti t ul o a nti "A " y a nti "B "
Anti "A" 64
Anti "B" 128
B. Titulación de anti "A" y anti "B" inmunes
Técnica para neutralizar el suero:
1. Utilizar guantes quirúrgicos.
2. Neutralizar el suero en estudio, utilizar una dilución de 1/4, 3 gotas de solución salina
fisiológica mas 1 gota de suero en estudio; adecuar esta proporción para obtener mayor
numero de gotas. ya que se debe comprobar si ocurrió a no la neutralización de los
anticuerpos naturales, utilizando pipetas de Pasteur o agregar a los tubos 1/2 de cada hilera
cuatro gotas del suero en estudio con pipeta de Pasteur o automatizada
3. Incubar el contenido de la dilución preparada de entre 56°C a 70°C por 30 minutos.
4. Retirar el contenido de la dilución neutralizada del baño de Maria y dejar reposar por 10
minutos.
5. Marcar dos tubos 12 x 75 mm como A y B.
6. Agregar a cada tubo 2 gotas de suero, posiblemente inactivado.
7. Al tubo A agregar eritrocitos "A," y al tubo "B" agregar eritrocitos B.
8. Mezclar y centrifugar a tiempo y velocidad establecida.
9. Leer y observar aglutinación.
10. Repetir los pasos 6, 7, 8, 9 y 10, si da negativo demuestre que los anticuerpos naturales han
sido neutralizados, procediendo a investigar anticuerpos inmunes.
11. Colocar dos tubos anteriores previamente neutralizados a 37°C por 30 a 60 minutos.
12. Lavar ambos tubos cuatro veces con SSF, y añadir dos gotas de suero de Coombs, mezclar y
centrifugar.
13. Leer y anotar resultados en cruces, tubo en mano en formato correspondiente. Si hay
aglutinación existe presencia de anticuerpos inmunes, proceder a realizar titulación.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL-68
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AGLUTININAS INMUNES
Interpretación:
Si se observa aglutinación, la neutralización ha sido insuficiente, se debe incubar el tubo con el
contenido de la dilución preparada durante 10 min. a 56°C a 70°C para que se termine de
neutralizar.
B.1 Título del suero
1. Identificar dos (2) hileras de tubos 12 x 75 mm, con la letra A 1 /2, A 1 /4 hasta A 1 /
1024 y proceder igualmente con la hilera B
2. Agregar a cada hilera un tubo adicional con Al 1, 1311.
3. 3. Colocar en ambas hileras excepto en el tubo numero 11, cuatro gotas de SSF con
pipeta de Pasteur.
4. Añadir a los tubos Al /2 y B 1 /2, cuatro gotas de suero en estudio, previamente
neutralizada.
5. Mezclar y pipetear el contenido del tubo A1/2 y transferir cuatro gotas al tubo A1/4 y
así sucesivamente hasta el tubo numero 11.
6. Repetir el paso numero 5 con la hilera B.
7. Agregar a la hilera A, excepto en el tubo numero 11, una gota de hematíes "A1".
8. Agregar a la hilera B, excepto en el tubo numero 11 una gota de hematíes "B".
9. Mezclar e incubar ambas hileras en baño Maria a 37° C durante 30 a 60 min.
10. Lavar todos los tubos, de ambas hileras con SSF por cuatro veces consecutivas
resuspendiendo en cada lavado, con una pequeña alícuota de SSF.
11. Agregar a cada tubo dos gotas de reactivos antiglobulina humana (Coombs).
12. Centrifugar a tiempo y revoluciones establecidas.
13. Leer, desprendiendo suavemente el botón celular, observando hemólisis o aglutinación,
comenzando de la mas alta dilución (1/2) a la menor sobre una fuente de luz.
14. 14. Anotar los resultados en cruces, tubo en mano en el formato correspondiente.
lnterpretación de resultados
A1/2
4+
A1/4
4+
A1/8
3+
A1/16
2+
*12
12
10
8
B1/2
4+
B1/4
4+
B1/8
3+
B1/16
3+
*12
12
10
10
Titulo
Anti A = 64
CAL-02-B
' Score
Anti A = 49
A1/32
1+
A1/64
1/2+
A1/128
5
2
Sc
B1/32
2+
B1/64
1+
B1/128
1/2+
8
5
2
A1/256
A1/512
A1/1
B1/256
B1/512
B1/1
Sc
Banco de Sangre
Código: CAL-68
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AGLUTININAS INMUNES
TÉCNICA ALTERNA
Técnica del 2- -mercaptoetanol
La prueba es de utilidad en la investigación serológica en la investigación de enfermedad hemolítica del
recién nacido, donde sólo las IgG son capaces de atravesar la placenta. Se emplea esta técnica también
el la demostración de anti-A y anti-B no neutralizables.
Los anticuerpos de naturaleza IgM al ser tratados con 2- -mercaptoetanol sufren la ruptura de los
puentes de disulfuro en su molécula afectandose así su función o actividad serológica. Bajo condiciones
similares, las IgG no sufren daño.
Método:
1. Adicione 1 ml de suero problema a una solución recién preparada del 2- mercaptoetanol 0.1 M en buffer a pH 7.4.
2. Se prepara un control con suero normal en forma similar
3. Incubar los tubos a 37°C durante 2 horas.
4. Dialice durante la noche buffer pH 7.4. o aplique método pertinente a fín de eliminar el
reactivo 2- -mercaptoetanol
Interpretación
En titulación no se observa mucha diferencia entre el suero tratado del no tratado. Aquellas
muestras que contienen mezcla de IgG/IgM muestran una disminución sensible al ser reducidas con el
2- -mercaptoetanol.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Limpieza y manejo de RPBI
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre: GUILLERMO
ESCAMILLA GUERRERO
Nombre: MARGARITA
LETICIA MEDINA MACIAS
Nombre: DINORA
AGUILAR ESCOBAR
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 93 de 12
LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI
CAMBIO
CAL-70
REVISIÓN
FECHA
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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En este procedimiento se describen los métodos de limpieza que se utilizan en las
diferentes áreas y la metodología para la recolección de los residuos peligrosos
biológicos infecciosos, los materiales, equipos y utensilios a emplear en cada
actividad, así como la asignación de responsables a realizar dicho procedimiento,
la frecuencia con que se debe realizar.
TECNICAS DE LIMPIEZA / DESINFECCIÓN APLICABLES
La descripción de las actividades para la limpieza de las áreas y su supervisión se
desglosan en el formato CAL-70-A y este se publica en cada una de las áreas
para que sean del conocimiento de todo el personal y puedan ser consultadas por
los mismos cada vez que sea necesario.
Una vez que el personal asignado para la limpieza conozca la descripción de ésta
actividad, deberá realizarla conforme a lo descrito y para ello será monitoreado
por:
A. Planta Baja: Jefa de enfermería.
B. Laboratorio: Jefe del Laboratorio.
a. Turno matutino: auxiliar asignado
b. Turno vespertino: auxiliar asignado
c. Turno nocturno: personal de guardia nocturna
d. Turno especial: auxiliar de turno
El reporte de cada turno en el área de laboratorio se remite a la jefatura del
laboratorio para elaborar reporte de informe semanal que será entregado a la
jefatura del Departamento de Banco de Sangre
El formato CAL-70-A se muestra a continuación:
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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S UPE RVIS ION DE L IMPIE ZA
FE C HA
NOMBR E DE L S UPE R VIS OR
TURNO
MATUTINO
VE S PE R TINO
NOC TUR NO
E S PE C IAL
AR E A
BANC O DE S ANGRE
M
C ONC E PTO
FR E C UE NC IA
PIS OS Y MUR OS
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS
PUE R TAS
FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS
VIDR IOS
FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS
MUE BLE S DE OFIC INA
FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS
FR E C UE NC IA
E QUIPO ME DIC O
PR ODUC TOS
INS TR UME NTOS
FR E C UE NC IA
PR ODUC TOS
R
B
M
R
B
M
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M
R
B
LIMPIE ZA Y DE S INFE C C ION DIAR IA TR APE ADO
C ONTINUO
GE R MIC IDA - J ABON NE UTR O
MAQ. LAVADOR A/AC C S C E PILLOS DE R AIZ,
C R UC E TAS , R E C OGE DOR , C UBE TAS ,
TR APE ADOR E S MANGO GR IS
LIMPIE ZA DIAR IA Y LAVADO C ADA OC HO DIAS
GE R MIC IDA - DE S E NGR AS ANTE
E S C ALE R A, FR ANE LA, GR IS , C UÑAS DE
MADE R A, C UBE TA, ATOMIZADOR
LIMPIE ZA Y DE S MANC HADO DIAR IO
DE S E NGR AS ANTE
ATOMIZADOR , C R UC E TA, FR ANE LA GR IS ,
C UBE TA, C E PILO
LIMPIE ZA DIAR IA Y LAVADO C ADA OC HO DIAS
DE S E NGR AS ANTE
ATOMIZADOR , FIBR A DE NY LON, FR ANE LA
GR IS
LIMPIE ZA DIAR IA (S UPE R VIS ION DE L
PE R S ONAL ME DIC O)
GE R MIC IDA-DE S E NGR AS ANTE
LAVADO DIAR IO Y TR APE ADO C ONTINUO
GE R MIC IDA-DE S E NGR AS ANTE
ATOMIZADOR , FR ANE LA R OJ A, FIBR A NY LON,
INS TR UME NTOS
GUANTE S DE HULE , C UBE TA, C UBR E BOC A
FR E C UE NC IA TR APE ADO Y BAR R IDO UNA VE Z POR TUR NO
PR ODUC TOS
GE R MIC IDA
E S C ALE R AS
TR APE ADOR MANGO GR IS , DOS C UBE TAS ,
INS TR UME NTOS
C R UC E TA
R E C OLE C C ION DE BAS UR A
TR E S VE C E S POR TUR NO
R E C OLE C C ION DE R PBI
DOS VE C E S POR DIA
S ANTIAR IOS
C OME NTAR IOS :
TOTAL
M
R
B
MALO
R E GULAR
BUE NO
CAL-70-A
El formato CAL-70-A se elabora de acuerdo a las necesidades de las áreas del
laboratorio de la siguiente manera:
ÁREA:
Se escriben las diferentes áreas del Banco de Sangre que
se deben limpiar y/o desinfectar.
FRECUENCIA:
Se indica la frecuencia con la que se debe realizar la
actividad mencionada
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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PRODUCTOS:
Se lista los productos necesarios para realizar la limpieza
y/o desinfección del área en cuestión
INSTRUMENTOS:
Se lista los instrumentos y/o materiales necesarios para
realizar la limpieza y/o desinfección del área en cuestión
M:
Malo, calificación de la actividad
R:
Regular, calificación de la actividad
B
Bueno, calificación de la actividad
FECHA:
Fecha en que se realiza la supervisión
NOMBRE DEL
SUPERVISOR:
Nombre de la persona encargada de la supervisión
TURNO:
Turno en que se realiza la supervisión, cruzar el espacio
adecuado
RESPONSABLES:
Se indica quien o quienes van a ser los responsables de
llevar a cabo la actividad mencionada.
COMENTARIOS:
Anexar comentarios extras, si es necesario
TOTAL:
Puntaje total de columnas M, R y B
Es responsabilidad de los jefes de laboratorio elaborar el programa mensual
de limpieza y verificar que las actividades se realicen.
Importante:
 El material de limpieza de cada área incluyendo las soluciones debe
guardarse limpio y seco en el lugar asignado, para evitar un uso indebido
en otras áreas.
 No se debe dejar equipo de limpieza fuera de los lugares asignados para
ello.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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 Las precauciones a seguir para el manejo de los químicos de limpieza y
sanitización serán las descritas por el proveedor cada producto.
MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO INFECCIOSOS
1. IDENTIFICACIÓN
INFECCIOSOS
DE
LOS
RESIDUOS
PELIGROSOS
BIOLÓGICO-
Clasificación.
Se deben clasificar los residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI) que se
generan en el laboratorio, así como el nivel de establecimiento que le corresponde
al mismo de acuerdo con lo que indica la norma NOM-087- ECOL-SSA1-2002.
2. ENVASADO
DE
INFECCIOSOS
LOS
RESIDUOS
PELIGROSOS
BIOLÓGICO-
Los contenedores para RPBI se clasifican de acuerdo al tipo de RPBI y los
mismos deben de cumplir con lo requerimientos especificados en la NOM-087ECOL-SSA1-2002.
TIPO DE RESIDUOS
ESTADO
FISICO
1
Sangre
Líquidos
2
Cultivos y cepas de agentes
infecciosos
Sólidos
3
Patológicos
Sólidos
Líquidos
Sólidos
4
Residuos no anatómicos
Líquidos
5 Objetos punzocortantes
CAL-70
Sólidos
ENVASADO
Recipientes
herméticos
Bolsas de
polietileno
Bolsas de
polietileno
Recipientes
herméticos
Bolsas de
polietileno
Recipientes
herméticos
Recipientes
rígidos
polipropileno
COLOR
Rojo
Rojo
Amarillo
Amarillo
Rojo
Rojo
Rojo
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Durante el envasado, los RPBI no deben mezclarse con ningún otro tipo de
residuos municipales o peligrosos.
Los contenedores de los diferentes tipos de RPBI deben de cumplir con las
siguientes especificaciones:
a) Contenedores para residuos sólidos (bolsas de polietileno)
Las bolsas deberán ser de polietileno color rojo de calibre mínimo 200 y
color amarillo calibre mínimo 300 , impermeables
Los materiales utilizados deberán estar libres de metales pesados y cloro,
mientras que los colorantes deberán ser fisiológicamente inocuos.
Resistentes.
Destruibles por medios fisicoquímicos.
Etiquetados con la leyenda “Peligro, residuos sólidos biológico infecciosos”
y con el símbolo universal de riesgo biológico.
b) Contenedores para residuos punzocortantes.
Deben ser rígidos
De polipropileno color rojo
Resistentes a fracturas y perdidas del contenido al caerse.
Destruibles por medios físicos.
Esterilizables.
Resistencia a la penetración en todas partes.
Tener tapa con y sin separador de agujas.
Abertura para depósito con dispositivo para cierre seguro.
Etiquetados con la leyenda “Peligro, residuos punzocortantes biológico
infecciosos” y con el símbolo universal de riesgo biológico.
Una vez llenos los recipientes no deben ser abiertos o vaciados.
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Código: CAL- 70
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c) Contenedores herméticos para residuos líquidos.
Deben ser rígidos.
Herméticos.
De polipropileno color rojo o amarillo
Resistentes a fracturas y perdidas del contenido al caerse.
Destruibles por medios físicos.
Etiquetados con la leyenda, “Peligro, residuos peligrosos líquidos biológico
infecciosos”.
Marcados con el símbolo universal de riesgo biológico.
A continuación se muestra el símbolo universal de riesgo biológico
3. RECOLECCIÓN Y TRANSPORTE INTERNO.
El manejo interno del material de residuos biológico – infeccioso, será exclusivo
del área de Intendencia, utilizando el equipo de protección que se les ha asignado
(bata, guantes, lentes protectores y cubrebocas).
Estos pasos comprenden la recolección de las diferentes áreas de laboratorio del
material residuo biológico infeccioso, el área de almacenamiento temporal y su
transporte por personal capacitado al lugar de su eliminación.
Para la recolección interna se siguen las siguientes normas:
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
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Los residuos nunca deben ser compactados.
Las bolsas y contenedores recolectados deben estar llenos al 80% de su
capacidad y no más.
Una vez cerrados los contenedores estos no deben ser abiertos.
Se utilizaran carritos para uso exclusivo de residuos biológico infecciosos.
Los carritos deberán ser lavados y desinfectados diariamente.
La persona que realiza esta labor deberá contar con equipo de protección
personal individual.
Se deben utilizar las rutas de evacuación diseñadas y señaladas con los
símbolos que marcan el manejo de RPBI.
TRANSPORTE INTERNO
1. El personal responsable recolectara diariamente todos los depósitos de RPBI
sólidos, identificándolos.
2. Se deberá identificar a simple vista que los RPBI se encuentren clasificados
debidamente, informando cualquier anomalía detectada al responsable en
turno.
3. El recorrido se llevara a cabo con las máximas precauciones y utilizando
siempre el material de protección asignado.
4. La ruta de RPBI podrá identificarse por flechas de color verde y las siglas RPBI
así como el símbolo universal de RPBI.
5. El transporte se realizara hasta el Almacén temporal, este deberá contar con
los señalamientos indicados de manejo de Precaución RPBI, así como el
símbolo universal de RPBI.
4. ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE RPBI
A. Destinar un área exclusiva para el almacenamiento temporal de los RPBI y
debe de cumplir con las características establecidas en el punto 6.3.5 de la
norma NOM-087- ECOL-SSA1-2002, excepto para los establecimientos
incluidos en el nivel 1.
B. El Almacén temporal deberá contar con un candado de seguridad al cual solo
tendrán acceso el personal asignado.
C. Este solo será abierto para el depósito y transporte externo de RPBI por la
empresa contratada para su eliminación.
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Banco de Sangre
Código: CAL- 70
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D. El periodo de almacenamiento temporal esta sujeto al nivel del establecimiento,
como sigue:
Nivel I: Máximo 30 días
Nivel II: Máximo 15 días
Nivel III: Máximo 7 días
E. Los residuos patológicos, humanos o de animales (que no estén el formol)
deben conservarse a temperatura de refrigeración no mas de 4°C
5. RECOLECCIÓN Y TRANSPORTE EXTERNO.
El transporte externo y la disposición final de los RPBI será efectuado por una
empresa contratada para este propósito, misma que se encuentra autorizada para
este fin por SERMANAT y en cumplimiento de la NOM-087-ECOL-SSA1-2002
para la disposición final de RPBI.
La empresa en el momento de la recolección emite un reporte de la cantidad de
RPBI recolectados, la cual es firmada por el responsable de laboratorio en turno.
Se encuentra establecida y actualizada una bitácora de la gestión de los residuos
biológico-infecciosos a fin de evaluar el desempeño de la gestión, así como para
mostrar el cumplimiento de la normatividad.
6. ACCIDENTE CON RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICOS INFECCIOSOS.
Se debe entender como accidente con residuos peligrosos biológico infecciosos
los siguientes:
Punciones y cortaduras.
Salpicaduras con residuos líquidos.
Inhalación de gases producidos por los escurrimientos.
Derramamientos, caídas o fracturas de bolsas y contenedores.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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a) En el caso de derrames. Se debe estar en posibilidad de descontaminar y
limpiar el sitio contaminado. Para ello se puede emplear una solución de cloro
inorgánico al 0.5 por ciento que representa una dilución de 1:10 del blanqueador
doméstico habitual; el cual tiene actividad esporicida, tuberculocida, inactiva
bacterias vegetativas, es fungicida y virocida. Se sugiere consultar al experto en
control de agentes infecciosos y la exclusión del movimiento de personas en el
área durante el proceso de desinfección y de limpieza.
Se debe disponer de un paquete de materiales de desinfección que incluya:
el desinfectante
el material absorbente de líquidos
las bolsas rojas para contener los materiales de limpieza
el equipo de seguridad para la protección de los trabajadores de limpieza.
Se deben establecer procedimientos para la contención y limpieza de derrames
que incluyan:
Salida inmediata del área para prevenir exposición
Determinación de si ocurrió exposición.
Identificación del residuo derramado.
Restricción de acceso al área.
Proporcionar el equipo de protección para limpieza.
Rociado de los materiales derramados con el desinfectante.
Remoción del material derramado.
Desinfección, enjuague y limpieza del área.
Disposición de los materiales de desinfección y limpieza.
Remoción del equipo de protección.
Lavado extenso de manos y piel expuesta.
Reemplazo de los materiales usados del paquete.
b) Incidentes de exposición: El seguimiento adecuado y estricto de los
procedimientos que atiendan los casos de exposición de trabajadores durante el
manejo de los RPBI como resultado de un derrame o salpicadura, podrán
minimizar las complicaciones que deriven de ello. El seguimiento pos exposición
es requerido para atender oportunamente cualquier infección.
Para ello es importante el uso y seguimiento del material de protección
proporcionado y el seguimiento estricto de los puntos tratados en este manual de
procedimientos.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 70
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Para el personal a cargo se deberán seguir los siguientes pasos:
Evaluación médica posterior a la exposición.
Documentar como ocurrió el accidente.
Identificar y documentar la fuente de sangre o muestra contaminada que
causó el accidente.
Notificar al empleado los resultados de las pruebas y que se hagan las
recomendaciones pertinentes.
Obtener el consentimiento del empleado, para hacer la determinación del VIH
y VHB; tan pronto como sea posible documentar los resultados del análisis.
Si el empleado no da el consentimiento para el análisis serológico, conservar
la muestra de sangre y convencerlo de la necesidad de realizar las pruebas.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT)
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
Fecha: 11-Enero-2012
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PROCEDIMIENTO
CAMBIO
1. Se incluye trabajo no conforme
2. Se incluye formato CAL-71-a
3. Se incluye bitácora de trabajo
CAL-71-b
4. Se incluye formato CAL-71-c
CAL-70
REVISIÓN
01
FECHA
11/01/2012
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
OBJETIVO GENERAL
La realización del tamizaje de las muestras de plasma de los donadores en
forma de pool para la detección del Virus de la Hepatitis C(VHC), el Virus de
inmunodeficiencia Humana (VIH) y el Virus de la Hepatitis B (VHB)
Resumen:
El VHC está considerado como el principal agente etiológico responsable del 90% al
95% de los casos de hepatitis postransfusional no A no B. El VHC es un virus ARN
monocatenario de sentido positivo con un genoma de aproximadamente 10,000
nucleótidos que codifican 3 000 aminoácidos. Como es un virus transportado por la
sangre, el VHC puede ser transmitido por la sangre y los productos sanguíneos.
Los ensayos serológicos han conseguido reducir en gran medida la transmisión, pero no
se ha eliminado por completo
El virus de la hepatitis B (HBV) está considerado como uno de los principales agentes
etiológicos causantes de la hepatitis crónica, aguda, cirrosis y carcinoma hepatocelular.
El virus HBV es un virus ADN circular parcialmente bicatenario con un genoma de
aproximadamente 3200 bases que contiene cuatro marcos de lectura abiertos
solapantes que codifican todas las proteínas víricas. Como virus transportado en sangre
el HBV es transmisible, con un riesgo más alto que el HCV y el HIV, a través de la
sangre y los productos hemoderivados.
El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) es el agente etiológico del síndrome de
Inmunodeficiencia adquirida (SIDA). La infección por el HIV puede transmitirse por
contacto sexual, exposición a sangre o productos sanguíneos infectados o por
transmisión de la madre infectada al feto. Dentro de las tres a seis semanas a partir de la
exposición al HIV, los individuos infectados generalmente desarrollan un síndrome
agudo, breve, caracterizado por síntomas de tipo gripal y asociado con valores elevados
de viremia en la sangre periférica.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
El ARN del HIV puede determinarse cuantitativamente en el plasma utilizando las
técnicas de amplificación del ácido nucleíco, entre ellas la reacción en cadena de la
polimerasa (PCR).
La prueba COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR, versión 1.5, usa la técnica de la PCR
para lograr un máximo de sensibilidad y de límites dinámicos para la detección
cuantitativa del ARN del HIV-1 en plasma anticoagulado con EDTA o ACD.
PRINCIPIOS DEL ENSAYO
La prueba consta de cuatro procesos principales para HBV: preparación de la muestra;
amplificación del DNA objetivo usando iniciadores complementarios específicos para el
HBV; hibridación de los productos amplificados con sondas oligonucleótidos especificas
para los objetivos; detección de los productos amplificados fijados a las sondas mediante
determinación colorimétrica.
Para el caso del HIV y HCV la prueba se basa en cinco procesos principales:
preparación de la muestra; transcripción reversa del RNA objetivo para generar ADN
complementario(ADNc),amplificación por PCR del ADNc objetivo usando iniciadores
complementarios específicos para cada marcador; hibridación de los productos
amplificados con sondas oligonucleótidas especificas para los objetivos y por ultimo
detección de los productos amplificados fijados a las sondas mediante determinación
colorimétrica.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
PROCESO GENERAL
OBTENCION
DE LA MUESTRA Y CENTRIFUGACION DE LA MISMA
Software DATA SCREEN
FORMACION VIRTUAL DE POOLS Y EMISION DE ETIQUETAS Y LISTA
Software AT WIN / Equipo HAMILTON
FORMACION FISICA DE POOLS Y PLACA DE ARCHIVO
PROCESO DE EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS
Software AMPLINK / Equipo COBAS
AMPLIFICACION Y DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS
Software AMPLILINK
VALIDACION DE RESULTADOS Y GENERACION DE ARCHIVO
(RESPALDO ELECTRONICO)
OBTENCION DE ARCHIVOS PARA INTERPRETACION DE RESULTADOS
Y EXPORTACION AL SIBS (Sistema Informático de Banco de Sangre)
LOS REPORTES IMPRESO GENERADOS SE GUARDAN 5 AÑOS EN ACTIVO Y 5 AÑOS
EN ARCHIVO MUERTO
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
OBTENCION DE LA MUESTRA Y CENTRIFUGACION
Se pueden utilizar muestras con EDTA, CPD, CPDA-1, CP2D, ACD-A y citrato de sodio
al 4%. Siga siempre las instrucciones del fabricante de los tubos de muestras.
Para la obtención de la muestra se procederá de acuerdo al procedimiento CAL-43 para
la obtención de muestras de donadores.
En este proceso se utilizan muestras con EDTA.
La sangre obtenida con EDTA se puede almacenar a una temperatura de 2 a 30°c
(máximo 72 hrs) a partir de su obtención.
Una vez obtenida la muestra se procederá a separar el plasma de los hematíes
mediante centrifugación a 1600g por 20 minutos.
TRABAJO NO CONFORME:
Se considera trabajo no conforme muestra con:
1. Lipemia
2. Hemolisis
3. Volumen insuficiente
4. Discrepancia en la identificación
5. No se haya tomado la muestra
En estos casos se tomara un piloto del producto plaquetario o se le llamara al donador
para la toma de la muestra; se realiza la observación en la bitácora de trabajo CAL-71-b.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
FORMACION VIRTUAL DE POOLES DE 6 DONADORES, EMISION DE ETIQUETAS
Y LISTA DE TRABAJO
Se ingresa a Data Screen siguiendo los pasos:
1. Encienda la computadora que contiene el software Amplilink.
2. Encienda el equipo Hamilton.
3. Encienda la computadora que contiene el software Data Screen y ATwin.
4. Etiquete los tubos de donadores de acuerdo al sistema de laboratorio.
5. Para abrir el software de Data Screen dar doble clic sobre el icono que se encuentra
en la computadora.
6. Escriba su nombre de usuario (INP)y contraseña (INP) para ingresar al sistema.
7. Dar clic sobre la opción muestras x 6
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
8. Para crear una nueva placa de archivo que contendrá nuevos pools, dar clic en la
opción” Nuevo”.
9. Teclear el código de la placa de archivo que se utilizara (código predeterminado). Este
número está compuesto de los últimos cinco dígitos que conforman la etiqueta para
placas de archivo.
10. Elegir el número de pools que se desea realizar en la opción “No de posiciones”
11. A continuación aparecerán en la pantalla el número de tubos correspondientes al
número de pools que se desea realizar.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
12. Pasar por el escáner los tubos de los donadores que formaran parte de un solo pool
y colocarlos en el primary rack en la posición que indica en la pantalla de la
computadora.
13. cuando todos los tubos han sido escaneados, las imágenes de los tubos de pools
deberán aparecer con los puntos de amarillo, lo cual indica que la posición ha sido
ocupada por un donador.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
14. Dar clic en el botón de grabar.
15. Cuando el archivo es grabado la opción código será activada. Dar clic en códigos
para imprimir las etiquetas que identificaran a los pools.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
16. Pegar las etiquetas de los pools sobre dos tubos Sarstedt.
17. Llenar los datos y pegar las etiquetas en la hoja de trabajo (CAL- 71 a).
CAL-71a
18. Dar click en listados para imprimir el listado de todos los donadores a estudiar.
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Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
19. Salir de Data Screen.
Software AT WIN / Equipo HAMILTON
FORMACION FISICA DE POOLS Y PLACAS DE ARCHIVO
1. . Colocar el primary rack en el equipo Hamilton.
2. Entrar al software dando doble clic en el icono AT Win, escribir su usuario asignado y su
contraseña (ADMIN para ambos casos).
3. Colocar en la placa primaria los tubos de los donadores (tubos primarios) del renglón
A al F y del 1 al 10, los tubos Sarstedt en el región H del 1al 10 identificados con sus
respectivas etiquetas.
4. Colocar la placa de archivo, identificada con sus respectivas etiquetas.
5. Asegurarse que estén colocadas las suficientes puntas para trabajar.
6. Realizar el Boot Run que sugiere el sistema dar clic en Yes
7. Posteriormente ir al menú de Execute y dar clic en la opción Run Next Method si
se quiere seguir usando el mismo método en caso contrario dar Reset Method
(esto borrará el anterior y se podrá elegir otro método deseado).
8. Aparecerá la pantalla, en la parte inferior izquierda encontrara el icono Reduce el
cual oprimirá encaso de no realizar los 12 pools (si trabaja solo 10 pools), de lo
contrario oprimirá el icono START y el sistema se iniciará a trabajar.
9. Si eligió el icono Reduce aparecerá otra ventana donde tendrá que elegir (dar
click) los renglones que no serán procesados, estos cambiarán a color gris y
posteriormente oprimirá el icono Reduce.
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Banco de Sangre
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PROCEDIMIENTO
10. Regresará a la ventana inicial, en este momento oprimirá START y el equipo
iniciará a trabajar.
11. Al terminar la corrida aparecerá una ventana pidiendo escanear automáticamente
o manualmente la identificación de los donadores o pools que no leyó el escáner
del equipo Usted eligirá la opción manual y aceptar. Usted leerá con el escáner
estos números.
Con esto termina el proceso de obtención de pooles. Ir a la campana de flujo laminar.
Cualquier duda consultar el manual del equipo.
CAMPANA DE FLUJO LAMINAR
PROCESO DE EXTRACION DE ACIDOS NUCLEICOS
El proceso de extracción puede ser de dos formas:
 Pre-PCR Preparación de múltiples muestras.
 Pre-PCR Preparación de muestras individuales (Proceso que usará en caso de
que algún pools fuese positivo se haría la apertura para la identificación
individual de la muestra positiva).
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Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
CAL-70
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PROCEDIMIENTO
CAL-70
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PROCEDIMIENTO
CAL-70
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Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
Diagrama del Equipo Cobas
Preparación de reactivos para el equipo COBAS
Se preparan reactivos:
Específicos
Genéricos
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Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
Reactivos Especificos
Reactivos Genéricos
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Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
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PROCEDIMIENTO
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
VALIDACION DE RESULTADOS
Revisar los resultados generados en los Cobas, por cada control y muestra el equipo
genera dos resultados uno detecta el virus humano (H) y el otro detecta el control interno.
NC= control negativo
PC= control positivo
M0JXRZA= nombre del pol
RESULTADO
INTERPRETACION
DEL RESULTADO
NUMERO
DEL
ANILLO
MUESTRA (S) O
CONTROL(C)
NUMERO DE
POSICION EN EL
ANILLO
CONTROL
- CN
+ CP
- CN
+ CP
CAL-70
HIV
HIH
+
AII
+
+
HCV
ACH
+
ACI
+
+
HBV
ABH
+
ABI
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Cualquier otro resultado la corrida se invalida (se repite el proceso)
CORRIDA
VALIDADA
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO DE CONTROL DE CALIDAD
1. Por cada prueba se deben procesar al menos un control Multiprep (-) y uno (+), y para
cada control su correspondiente control interno.
Para que el Control Negativo sea válido, la Absorbancia a 660 nm para el MP (-)
C debe ser < 0.1 y la obtenida para el control interno MP IC asociado ≥ 0.2.
Para que el Control Positivo sea válido, la Absorbancia a 660 nm para el MP (+)
C debe ser < 0.1 y la obtenida para el control interno MP IC asociado ≥ 0.2.
Resultado para CI (HCV, HIV1,HBV) :
Resultado para:
Control
Negativo
Control
Positivo
HCV
A660
HIV-1,HBV
A660
Comentario
A660
Comentario
<0.1
<0.2
Negativo
≥ 0.2
Valido
≥ 1.0
≥ 1.0
Positivo
≥ 0.2
Valido
En caso de no cumplir con algunos de estos criterios se invalida la prueba y se
tendrá que repetir todo el proceso de extracción, amplificación, desnaturalización
y detección.
Nota: para información más detallada consultar los insertos correspondientes.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
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PROCEDIMIENTO
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Resultados para HCV
A660
Comentario
< 0.2
NEGATIVE
Resultados para CI
A660
Comentario
≥ 0.2
VALID
< 0.2
NEGATIVE
< 0.2
INVALID
≥ 0.2
POSITIVE
CAL.
VALID
Resultados para HIV-1
A660
Comentario
< 0.2
NEGATIVE
Resultados para CI
A660
Comentario
≥ 0.2
VALID
< 0.2
NEGATIVE
< 0.2
INVALID
≥ 0.2
POSITIVE
CAL.
VALID
Resultados para HBV
A660
Comentario
< 0.2
NEGATIVE
Resultados para CI
A660
Comentario
≥ 0.2
VALID
< 0.2
NEGATIVE
< 0.2
INVALID
≥ 0.2
POSITIVE
CAL.
VALID
Interpretación
La muestra es negativa para ARN del HCV
Resultado no válido, repita el todo procedimiento
para la muestra no válida
La muestra es positiva para ARN del HCV
Interpretación
La muestra es negativa para ARN del HIV-1
Resultado no válido, repita el todo procedimiento
para la muestra no válida
La muestra es positiva para ARN del HIV-1
Interpretación
La muestra es negativa para ADN del HBV
Resultado no válido, repita el procedimiento para
la muestra no válida
La muestra es positiva para ADN del HBV
Nota: para información más detallada consultar los insertos correspondientes.
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
Página 129 de 22
PROCEDIMIENTO
VALIDACION, INTERPRETACION Y EXPORTACION DE RESULTADOS
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 71
Página 130 de 22
PROCEDIMIENTO
CAL-71-c
Terminado este proceso se procederá de forma manual o automática (interfaz) el ingreso de los
resultados al SIBS.
Documento asociado CAL-43
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Fecha:01 Noviembre 2011
Página 131 de 11
CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES
LINFOCITOS
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 132 de 11
LINFOCITOS
CAL-70
CAMBIO
REVISIÓN
FECHA
Diagramas de flujo
1
01/11/11
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 133 de 11
LINFOCITOS
Introducción
El monitoreo de pacientes de diagnóstico conocido es llevado a cabo por la
conjugación de la determinación de subpoblaciones de linfocitos CD4+; CD8+;
CD3+ & CD 45+ y determinando el porcentaje de ellos, así mismo, establecer el
radio CD8+/CD4+.
Principio de estudio
Anticuerpos monoclonales conjugados con diferentes cromógenos con
especificidad conocida se desafían con células de fenotipo desconocido a fin de
establecer la presencia o ausencia con el empleo de citometría de flujo de los
marcadores CD 4+, CD8+, CD45+ y CD3+
Responsabilidades
Jefe del Dpto
Jefe del Lab.
Medico
de
B.S.
Químico
Laboratorista
Auxiliar
Material……..
a) Tubos trucount
b) Pipeta semiautomática (25 µl, 50 µl, 1000 µl)
c) Puntas para pipeta semiautomática
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 134 de 11
LINFOCITOS
Tipo de muestra:
a) Biometría hemática
PROCESO:
6. Recepción de muestra:
a. Biometría Hemática
7.
Cuantificación de cantidad de leucocitos empleando citometría con equipo
para Biometría Hemática
8. Preparación de muestra acorde a inserto
9. Antes de usar el citómetro de Flujo, se recomienda:
a. Proceso de lavado largo
b. Calibración
c. Usar en cada corrida un control
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
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LINFOCITOS
A.- Lavado previo al uso del equipo
CVE: BDIS
LAVADO
ENCENDER
REVISAR
PRESION
Cambiar de
ANALIZADOR (LO +
PRIME ; OBSSERVAR
BURBUJAS)
VENT-TANK CHANGE
A
VENT-RUN
CPU
LOADER
MANAGER
MAINTENANCE
MONITOR
DILUYENTE : LLENAR
MAX ¾
IMPRESORA
DESECHOS: VACIAR
TEST OPTION
COLOCAR LOS TUBOS
EN EL RACK COMO SE
INDICA
EN LAS POSICIONES:
EQUIPO
RUN
ESCOGER
LONG
O
39.. FAC’S CLEANE
SHORT
40. FAC’S RINSE
CLEAN
HI
COLOCAR EL
EN EL EQUIPO
RACK
MONITOR
RUN
RUN
ESPERAR A QUE
TERMINE EL
LAVADO
CAL-70
FILE
DONE
QUIT
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 136 de 11
LINFOCITOS
B.- Realizar Calibración
CALIBRACION (DIARIO O EN CADA USO DEL
INSTRUMENTO)
3) Ir A:
1) PREPARAR DOS TUBOS CON:
A)
B)
1 mL de Fac´s Flow
3 mL de Fac´s Flow
Mezclar suavemente las microesferas
CALIBRITE y añadir una gota (invertir
completamente el vial) como se
indica en la siguiente tabla
ICONO DE FAC´COMP
INGRESAR NOMBRE DEL USUARIO
FAC´S FROM
INGRESAR Y/O VERIFICAR CADA UNO
DE LOS # DE LOTE
DE LA SEGUNDA COLUMNA DE LA
CAJA DEL CALIBRADOR (ETIQ.
NARANJA) Y DEL APC ( ETIQ. VERDE)
EN EL CARRUSEL PONER LOS TUBOS
sin tapón EN LAS SIGUIENTES
POSICIONES:
1. TUBO A
2. TUBO B
39. FAC´S CLEAN
40. FAC´S RINSE
2) Mezclar por inversión .
EN SOFTWARE :
RUN
CLEAN
NOTA: Es necesario revisar el
inserto para mayor detalle y en
caso de alguna modificación.
CAL-70
QUIT
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 137 de 11
LINFOCITOS
C.- Preparación de muestras para conteo de células CD4+
CD4/CD8 (AUTOMATICO)
ID Rack
Ingresar #
del Rack
ICONO
WORLIST
MANAGER
BARRA
IZQUIERDA
PANTALLA
PRINCIPAL
Assign
Rack
CD 4 (Un solo
tubo)
MULTISET
LINFOS T / B
(cuando son
tres tubos)
COLOCAR LOS
TUBOS EN EL
ORDEN QUE
SE INDICA. Y
INGRESAR
LOS
DATOS DE
LAS
MUESTRAS
ACEPTAR
SKIP FAC’S
COMP (Si ya se
realizó la
calibración
previamente)
Checar que en
el recuadro
derecho este
Multiset
ACEPTAR
EQUIPO
EN LAS
POSICIONES
39.. FAC’S
OPERADOR
EQUIPO
ACEPTAR
RUN
RUN
HI
CLEANE
40. FAC’S RINSE
COLOCAR EL
RACK EN EL
EQUIPO
CAL-70
AL FINALIZAR LA CORRIDA DEL
PROGRAMA SE REALIZA EN
AUTOMATICO UN LAVADO DEL
EQUIPO.
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 138 de 11
LINFOCITOS
EQUIPO
CD4/CD8 (MANUAL)
PANTALLA
PRINCIPAL
ICONO
BARRA
IZQUIERDA
OPERADOR
ACEPTAR
MULTISET
Abri---USUARIOS--banco sangre2--MAYO 2008
PANTALLA SET UP
Data Source
FAC’S COMP
ACEPTAR
From Cytometer:Aquisition with Analysis
Entry Level NamePrefix
Sample name viewReports
Until “Next” Button Pressed
LAUNCH SKIP
FAC’S COMP
Automatics SavingOption
Data Files
Fac´station: USUARIOS. banco sangre 2
Location
MAYO 2008
Laboratorio
Location
SELECCIONAR
MAYO 2008
Physician Report
Location
Summary Report
Use Date Generated File Name
Location
Export Document
Use Date Generated File Name
QUIT
SELECCIONAR
CAMBIAR LA FECHA SI PERDER
LA TERMINACION
Location
Lot IDs
SUBIR
EL
SEGUNDO TUBO
P/CD8
ACQUIRE
SAVE
ACCEPT
INTRODUCIR
NOMBRE.FECHA
Ejemp.:
SOLIS.020508
SUBIR
PRIMER
P/CD4
EL
TUBO
EQUIPO
(CD4-CD8-CD19). Y EN LAS
RUN
39.. FAC’S CLEANE
CAL-70
COPIAR
RESULTADOS
QUIT
HI
POSICIONES
COLOCAR EL RACK EN
EL EQUIPO
ACQUIRE
ACQUIRE
# Muestra
40 . FAC’S RINSE
AGITAR
PRIMERO
SUBIR
EL
SEGUNDO TUBO
P/CD19
Panel
Sample ID
# registro
COLOCAR LOS TUBOS EN
EL ORDEN COMO SE
INGRESARON
MOVER
LOS
TUBOS CON EL
CONTROLADOR
MANUAL
Don´t Save
CAMBIAR LA FECHA SI PERDER
LA TERMINACION
020508.exp
Continue
Absolute Counts
Bead
# lote
# De Perlas
020508.sum
AL FINALIZAR LA CORRIDA DEL PROGRAMA SE
REALIZAR UN LAVADO LARGO DE FORMA
MANUAL.
Linfos T CD4,CD8 y
Linfos B
RUN TEST
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 139 de 11
LINFOCITOS
Resultados
Obtención de resultados impresos en automático ó vaciar en el formato
CAL-70
Banco de Sangre
Código: CAL- 75
Página 140 de 11
LINFOCITOS
LAVADO EXHAUSTIVO
REVISAR
PRESION
VENT-TANK CHANGE
DESCONECTAR LA
TUBERIA QUE VA AL
FILTRO Y CONECTAR
LA TUBERIA
BLANCA(DEL FAC´S
FLOW)
EL EL TUBO DE LA
CANULA 3 ML DE FAC´S
RINSE
DILUYENTE : LLENAR
MAX ¾ DE SOL FAC´S
RINSE
ENCENDER
EL EQUIPO
RUN
HI
DESECHOS: VACIAR
ESPERAR POR
15 MIN.
DESPRESURIZAR
VENT-TANK CHANGE
ENCENDER
EL EQUIPO
EL EL TUBO DE LA
CANULA 3 ML DE AGUA
DESIONIZADA
DILUYENTE : LLENAR
MAX ¾ DE AGUA
DESIONIZADA
APAGAR EL EQUIPO
DESECHOS: VACIAR
RUN
HI
ESPERAR POR
20 MIN.
REVISAR
ENCENDER
PRESION
ANALIZADOR (LO +
PRIME ; OBSSERVAR
BURBUJAS)
VENT-TANK CHANGE
APAGAR EL EQUIPO
REGISTROS
Ningún registro asociado
CAL-70
DILUYENTE : LLENAR
MAX ¾ DE SOL FAC´S
FLOW
MONITOR
DESECHOS: VACIAR
IMPRESORA
CPU
PANTALLA
PRINCIPAL
Banco de Sangre
Código: CAL-76
Página 141 de 10
Procedimiento de recolección y toma de
muestras de pacientes
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha:
Fecha:
Fecha:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
Página 142 de 10
CAMBIO
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
Banco de Sangre
Código: CAL 76
Página 143 de 10
Para el Banco del Instituto Nacional de Pediatría, una muestra primaria es una muestra de
sangre tomada a un paciente o a un candidato a donar para ser enviada o tomada en el
Banco de Sangre y la cual está destinada para practicarle un examen en el laboratorio del
mismo.
Se le conoce como muestra primaria debido a que es la muestra de la cual se parte para
generar alícuotas para practicar los exámenes
La toma de muestra primaria se efectúa por personal del Banco de Sangre especialista en
toma de muestra en base a lo especificado en la solicitud de trabajo.
Para la toma de muestra primaria se toman en cuenta las siguientes consideraciones:
Nombre de la prueba para la que se toma la muestra primaria
Condiciones en las que se debe presentar el paciente previas a la toma de muestra
Tipo y cantidad a tomar de la muestra primaria, con descripciones de los contenedores
de la misma y cualquier aditivo necesario.
El horario más adecuado para la toma de muestra, si se requiere
La información clínica, autorización y/o consentimientos cuando se requiera
Las condiciones de preservación de la muestra primaria
Los requisitos de acondicionamiento de la muestra
Los detalles de transportación desde los sitios de toma de muestra hasta las áreas
analíticas
Los criterios de aceptación para las muestras primarias.
MATERIAL
-
Tubos tipo vacutainer con anticoagulante (EDTA y citrato) y sin anticoagulante.
Guantes
Torundas con alcohol
Agujas estériles de calibre 20 y 21
Jeringas de 5 y 10 ml
Agujas tipo vacutainer
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
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-
Camisas para tubo vacutainer
Ligaduras
Gradillas
Contenedor para desechos punzo-cortantes
Mezclador para biometría.
PROCEDIMIENTO
1. Solicitar al paciente o donador una identificación con fotografía y corroborar los
datos con los de la solicitud y etiqueta y colocarla en el tubo.
2. El personal de laboratorio solicita al paciente y/o donador que tome asiento en la
silla de toma de muestra, y selecciona la vena asignada para puncionar.
NOTA
En caso de observar alguna lesión dérmica como datos de múltiples venopunciones (que
podría ser sospechoso de antecedente de administración de drogas intravenosas,
donación reciente), huellas de rascado (que podría ser sospechoso de reacción alérgica
activa o proceso infeccioso local), o dermatitis local (condicionada por infecciones virales
como herpes, verrugas), lo informará al médico que valorará al candidato a donador para
aceptación o rechazo de acuerdo a su criterio.
3. El personal encargado de tomar la muestra se coloca guantes para la toma de
muestra, realiza la asepsia, en un área de 5 cm. aproximadamente en zona de
punción, realizando una limpieza vigorosa de arriba hacia abajo sin invertir el
orden, utilizando jabón/ alcohol/isodine dejando secar, se liga inmediatamente y no
se vuelve a tocar el área ya preparada para la punción, inmediatamente después
se realiza la punción de la vena.
MÉTODO 1 CON JERINGA:
1. Ligar el brazo e introducir la aguja en la vena, para que el sangrado sea más rápido,
se le pide al paciente o donador que apriete el puño y que no mueva ni doble el brazo.
2. Quitar la ligadura antes de retirar la jeringa, pidiendo al paciente o donador que abra
su puño.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
Página 145 de 10
3. Al retirar la aguja, colocar una torunda con alcohol en el sitio de punción presionando
gentilmente, pidiendo al paciente o donador que mantenga su brazo doblado de 3 a 5
minutos.
4. Trasvasar puncionando la parte central del tapón, vaciar primero las muestras en los
tubos que contienen anticoagulante y después las muestras en los tubos sin
anticoagulante.
5. Desechar la aguja o jeringa directamente en el contenedor sin taparla.
NOTA: Por ningún motivo se deben tomar muestras solo con aguja, en caso de pacientes
pediátricos se debe solicitar apoyo al servicio de pediatría.
MÉTODO II VACUTAINER:
1. La aguja para el vacutainer es especial ya que se fija a la camisa en forma de tornillo.
2. Al pinchar la vena lo único que se sujeta es la camisa, para así tener un apoyo al
introducir los tubos en la camisa. se toman primero las muestras que no requieran
anticoagulante y después las que requieren de éste, sacar el tubo sin retirar la aguja
de la vena, en caso de muestras con anticoagulante, colocarla en el mezclador de
biometrías. Procurar no hacer movimientos bruscos para evitar lastimar al paciente o
donador. así mismo nunca se saca la aguja sin haber retirado el tubo totalmente.
3. Al terminar de tomar la última muestra se retira la ligadura y pedir al donador o
paciente que abra el puño, retirar la aguja y presionar la vena gentilmente con una
torunda de algodón con alcohol indicándole que mantenga el brazo doblado de tres a
cinco minutos aproximadamente.
4. La aguja se desecha en un envase rígido de plástico (contenedor) que no ofrezca
ningún peligro.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
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TIPOS DE PRUEBAS, TUBOS EN LOS QUE SE RECOLECTA LA SANGRE Y
VOLUMEN REQUERIDO
TIPO DE PRUEBA
VOLUMEN
REQUERIDO TEMPERATURA
(ml)
6
Grupo sanguíneo
4-6
Tubo morado
(anticoagulante EDTA)
NAT
4-6
CD4/CD8
4-6
Tubo rojo (sin
anticoagulante) o Tubo
dorado
CARGA VIRAL
4-6
SEROLOGIA
4-6
Las muestras se conservan a temperatura ambientes mientras
se pasan al laboratorio para su análisis
TUBOS PARA
RECOLECTAR LA
MUESTRA
Una vez que el especialista en toma de muestras obtiene la muestra primaria, la identifica
de manera única (ID para donadores o nombre del paciente) incluyendo la identificación
de quién tomó la muestra, la fecha y hora de la toma.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
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Nota: Cualquier desviación a las condiciones pre analíticas para la obtención de una
muestra adecuada para análisis, se debe informar al donador y/o paciente y en su
caso repetir la toma, o anotarse en la solicitud.
Los materiales empleados par la toma, son desechados en los contenedores que les
corresponda según lo marca la norma NOM-087 aplicable a los residuos peligrosos
biológico – infecciosos.
Las muestras son inspeccionadas por el personal que las recibe y en caso de ser
aceptadas para su procesamiento se ingresan en la bitácora y en el sistema de
informático del laboratorio. Las que no cumplen los criterios de inspección se tratan como
PRODUCTO NO CONFORME.
La temperatura de almacenamiento dependerá del tipo de estudio a realizar:
Área de red fría de 1 a 6 ºC, -18°C o menor en refrigeradores, congeladores o
ultra congeladores.
Área de temperatura ambiente
TRASNPORTE DE MUESTRAS
Es responsabilidad del personal del Banco de Sangre el transporte hasta el área de
laboratorio del Banco de Sangre de las muestras tomadas en las secciones de:
a) Toma de Muestras perteneciente al Laboratorio Central
b) Toma de Muestras del Banco de Sangre
c) Sección de flebotomía del Banco de Sangre
procederán de la siguiente forma:
 Usando hieleras de plástico o unisel, el personal coloca las muestras previamente
tapadas e identificadas, en la gradilla que se encuentra dentro de la hielera.
 La hielera es propiedad del Banco de Sangre, por lo que está identificada como:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
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Los recipientes secundarios deben llevar las etiquetas de:





Riesgo biológico
Riesgo secundario (según caso)
Datos del laboratorio al que van referidos
Datos de orientación
Señal de orientación
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
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NOTA: Para la recepción de muestras es necesario el uso de guantes.
Quien recibe los contenedores de las muestras verifica que estén bien cerrados.
1. Revisa que se encuentren a la temperatura correspondiente.
2. Revisa que las muestras estén correctamente identificadas.
3. Revisa el correcto llenado de la solicitud de cada muestra.
De detectar anomalías en esta inspección no se recibirán las muestras afectadas.
INSPECCION DE LA MUESTRA
El personal Químico/Técnico que recibe de muestras primarias, lleva a cabo la inspección
de las mismas según el estudio solicitado tomando como base los siguientes criterios de
aceptación:
a) Tipo de muestra:
El tipo de muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a realizar.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL 76
Página 150 de 10
b) Volumen:
El volumen de muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a
realizar. Una cantidad excedente o deficiente puede provocar problemas para la
realización del (los) examen(es) por lo que en este caso se procede a consultar con el
encargado de realizar al(s) prueba(s).
c) Contenedor
El contenedor en el que se recibe la muestra debe cumplir con lo indicado en la
especificación del estudio a realizar .
d) Aditivo
El aditivo de la muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a
realizar.
e) Temperatura de transportación y preservación de la muestra
La temperatura a la que se recibe la muestra debe cumplir con lo indicado en la
especificación del estudio a realizar.
f) Identificación de la muestra
Las muestras deben estar identificadas por lo menos con el nombre del paciente, el cual
debe coincidir con el nombre que aparece en la solicitud de estudios.
Si alguna muestra no cumple con los criterios definidos en la especificación del estudio a
realizar y/o no está identificada, no se recibe en el laboratorio y se le informa al cliente la
razón de ello.
Si la muestra cumple con los criterios, se recibe en el laboratorio, con la solicitud
correspondiente y se registra su entrada en la bitácora y en el sistema de informática del
laboratorio (SIL)-.
REGISTROS
F-A-14-26
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
Fecha: 02- enero-2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
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PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Nombre:
Nombre:
Nombre:
EBC Ma. Teresa de Lourdes M. en C. Guillermo Escamilla Dra. Dinora V. Aguilar
Flores Camacho
Guerrero
Escobar
Firma:
Firma:
Firma:
Fecha: 2 Enero 2012
Fecha: 2 Enero 2012
Fecha: 2 Enero 2012
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
Fecha: 02-enero- 2012
ISBN: 978-968-9170-17-4
Página 2 de 40
CAMBIO
1. Modificación de crioprotectores
2. Requisitos de recepción de
Células Tallo
3. Se incluye flujograma de
preparación de equipo para el
proceso.
4. Se incluye flujograma de
RECEPCIÓN Y PROCESO
5. Se incluye manejo de PNC
CAL-02-B
REVISIÓN
FECHA
01
2 de enero 2012
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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ABREVIATURAS
CPH
CPHSP
SP
MO
CMN
ºC
DMSO
NaCl
N2L
U. V.
BH
Hb
Hto
EDTA
Kg
μl
SSF
Dx
Tx
CAL-02-B
Células Progenitoras Hematopoyéticas
Células Progenitoras Hematopoyéticas de Sangre Periférica
Sangre periférica
Médula Ósea
Células Mononucleares
Grados Centígrados Celsius
Dimetilsulfoxido
Cloruro de Sodio
Nitrógeno Líquido
Ultra violeta
Hemoglobina
Hematocrito
Anticoagulante, Etilendiaminotetraacético disódico
Kilogramo
Microlitro
Solución Salina Fisiológica al 0.9%
Diagnostico clínico
Tratamiento
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Propósito y Alcance
1.1 Propósito
Criopreservar las Células Progenitoras Hematopoyéticas (CPH) obtenidas mediante
procedimientos de Aféresis y en el quirófano; conservando su viabilidad, esterilidad y
funcionalidad.
1.2 Alcance
Todos los usuarios podrán seguir este procedimiento para la criopreservación y el
trasplante de CPH.
2. Responsables
Personal Responsable del Cumplimiento de este Documento
Puesto
Departamento
Banco de Sangre
Jefe del Laboratorio
Personal adscrito al Laboratorio
CAL-02-B
Banco de Sangre
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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3. Introducción
3.1 Antecedentes
La logística de trasplantes de Células Progenitoras Hematopoyéticas (CPH)
incluye en la mayoría de casos, una etapa de criopreservación a temperaturas de —
196°C y en condiciones óptimas garantizan su almacenamiento durante el tiempo que
sea necesario, con la mínima pérdida de sus capacidades de autorregulación y
diferenciación. Las técnicas de congelación más extendidas utilizan DMSO como
crioprotector para optimizar la viabilidad y funcionalidad de las células reduciendo la
proporción de agua congelada y la deshidratación intracelular durante el proceso de
congelación.
La presencia del crioprotector hace que las suspensiones celulares
descongeladas sean hipertónicas y como las células responden importando y
exportando agua frente a un cambio de osmolaridad, el retorno a condiciones
isotónicas puede resultar en la superación de los límites mecánicos de las membranas
plasmáticas por una entrada masiva de agua al citoplasma (choque osmótico). Este
fenómeno es de especial importancia durante la reconstitución y manipulación de
células descongeladas debido a que la membrana celular es un conjunto de lípidos y
proteínas organizados que por debajo de los 20°C pierde fluidez, limitando su
resistencia y por tanto su capacidad de respuesta osmótica.
3.2. Condiciones generales para la preservación de la ultra estructura y función
celular
La resistencia al frío –y al congelamiento – depende de un gran número de diferentes
factores. En primer lugar el descenso repentino de la temperatura puede tener un
efecto adverso en ciertas células: una forma de CHOQUE TÉRMICO, que puede ocurrir
tanto por arriba y por debajo del punto de congelamiento. También, la FORMACIÓN DE
CRISTALES DE HIELO, dentro y fuera de las células pueden acarrear un gran DAÑO
FÍSICO.
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Otra consecuencia de la formación del hielo es un cambio del medio ambiente
extracelular, en donde el congelamiento del agua tiene como resultado un
INCREMENTO EN LA CONCENTRACIÓN DE SALES de la solución, elevándose a un
nivel específico que corresponde al punto.
Un incremento tal en la concentración de los electrolitos permite la DESHIDRATACIÓN
CELULAR. Es de notar que las células que son más resistentes, son las mismas que
son más resistentes en bajar su temperatura.
3.3 Choque térmico
El choque térmico puede ocurrir cuando ciertas células son enfriadas demasiado
repentinamente, incluso en la ausencia de cristalización. El rango crítico oscila entre +
15 ºC y 0 ºC, aunque también puede ocurrir entre 0 ºC y - 80 ºC. El choque térmico
comienza en la membrana como un resultado de:
● Contracción diferencial de varios componentes de la membrana
● Rompimiento mecánico
● Cambios conformacionales en la topografía de la membrana
El daño infligido no es dependiente significativamente del perfil CATIONICO en el fluido
extracelular, sin embargo, el perfil ANIÓNICO es mucho más importante. Los aniones
más importantes, desde el menos dañino al más dañino, son el acetato, cloruro, nitrato,
yoduro y sulfato.
El choque térmico pude ser minimizado por:
● Agentes crioprotectores
● La presencia de ciertos fosfolípidos (fosfatidil serina)
● Enfriamiento lento
● Acondicionamiento previo en medios de alta concentración de sales
3.4 Umbral de deshidratación
La mayoría de las células de los vertebrados son susceptibles incluso a una
deshidratación parcial (tanto a una temperatura normal o baja). Dependiendo del tipo
celular específico y de la especie, las células no pueden tolerar la pérdida de más del
20 al 80% de su línea basal de contenido de agua, estableciéndose así un límite del
umbral de deshidratación, en el cual las estructuras celulares sufren un daño
irreversible. La correlación entre la resistencia de las células a la deshidratación y su
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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resistencia a las bajas temperaturas es un reflejo de los efectos en el balance iónico.
Esto es, el incremento en la concentración de sales que acompaña a la cristalización es
el responsable de los efectos más dañinos.
El incremento en la concentración de sales induce la precipitación de proteínas
dañando la estructura lipoproteína de la membrana. Al mismo tiempo, la cristalización
de los amortiguadores electrolíticos puede inducir grandes cambios del pH. El
incremento en la concentración de ciertos iones y compuestos tiene efectos tóxicos en
el interior celular.
El congelamiento también puede afectar la naturaleza coloidal del medio intracelular,
un efecto que puede ser reversible o irreversible. El sistema coloidal puede separase
en dos fases distintas con moléculas de agua asociadas, siendo eliminadas de las
macromoléculas orgánicas de tal manera que posteriormente se agregan y se vuelven
vitrificadas.
3.5 Velocidad de congelamiento y calentamiento
El método ideal del congelamiento y la velocidad óptima de enfriamiento dependen de
varios factores conflictivos, muchos de los cuales son pobremente entendidos. Las
condiciones ideales son a menudo determinadas por pruebas de ensayo y error, dando
como resultado protocolos, en donde se establece la velocidad del enfriamiento; sí la
temperatura debería de ser disminuida en intervalos de tiempo; qué agente
crioprotector es empleado; etc. El objetivo es prevenir el choque térmico, los efectos
adversos de la excesiva concentración de sales, y el daño al medio coloidal de la
célula. En las velocidades de enfriamiento para uso rutinario, la CRISTALIZACIÓN y el
INCIO (SEEDING) siempre comienzan en el compartimiento extracelular. Esto significa
que el balance osmótico de la célula es perturbado, provocando una deshidratación
inicial. Una vez que el hielo ha empezado a formarse, un factor importante, con
respecto en mantener la viabilidad durante la subsecuente congelación, es el
VELOCIDAD DEL CAMBIO DE TEMPERATURA. Esto determina:
● La extensión del tiempo de las células durante el punto eutéctico, por ejemplo, el
tiempo transcurrido en que son expuestas a una alta concentración de sales
● La velocidad de congelamiento intracelular
● El tamaño y la forma de cualquier cristal de hielo formado.
Si el enfriamiento es lento, el crecimiento de los cristales de hielo en el compartimiento
extracelular es de tal manera que las células se contraen y son expuestas a altas
concentraciones de sales. Subsecuentemente, la fase líquida se congela a la
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temperatura eutéctica. Si el enfriamiento es muy rápido, el agua en el interior de las
células forma pequeños cristales de forma irregular que son relativamente inestables.
Si las células son descongeladas subsecuentemente muy lentamente, estos cristales
se agregarán a una forma más grande, formando cristales más estables, los cuales
pueden causar daño. El incremento en la concentración de sales que acompaña al
proceso de congelamiento causa contracción celular, y si continúa por encima de cierto
umbral, permite la permeabilización de iones en la membrana. Por ello, la VIABILIDAD
CELULAR depende de la velocidad de enfriamiento. La MAYOR SOBREVIDA a una
cierta velocidad disminuirá conforme esta velocidad se incrementa. La VELOCIDAD
IDEAL es disminuyendo lentamente la temperatura, que permita a las células perder
suficiente agua para prevenir el congelamiento intracelular prematuro. Sin embargo, si
la velocidad es demasiadamente lenta, las células serán expuestas a altas
concentraciones de sales por un largo periodo de tiempo. Además, el rango ideal de
enfriamiento depende del VOLUMEN CRÍTICO de las células que es definido por:
● La permeabilidad de la membrana celular al agua
● El área de la superficie de la membrana
● La superficie de la célula a su radio de volumen.
En resumen, podría decirse que la más simple explicación por el cual una velocidad
ideal de enfriamiento existe para ello, es porque la viabilidad celular depende de dos
factores conflictivos, los cuales dependen de la velocidad del reenfriamiento.
El factor principal que causa la perdida de la viabilidad es la formación de cristales de
hielo intracelularmente, y especialmente la agregación de estos cristales durante el
descongelamiento. A una velocidad lenta de enfriamiento la alta concentración de sales
resultante ejerce efectos adversos cuando el agua intracelular –que tiene un alto
potencial químico- difunde hacia el exterior celular y se congela en el compartimiento
extracelular.
Los PORCENTAJES MÁS ALTOS DE SOBREVIDA son obtenidos en una variedad de
velocidades de enfriamiento referida como la ZONA DE TRANSICIÓN, en el cual el
efecto de ambos mecanismos es mínimo.
3.6
Fenómeno a temperaturas bajas
Hay un gran consenso de información acerca de los cambios biofísicos y bioquímicos
que ocurren en las células vivientes en temperaturas inferiores a los 0 ºC. Se puede
concluir que, a no ser que la temperatura de almacenamiento sea demasiada baja,
algunas células continuarán viviendo y su tiempo de sobrevida dependerá de su radio
metabólico residual que será lentamente desacelerado a una mayor o menor extensión.
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A temperaturas entre 0 ºC y - 40 ºC, que no es lo suficientemente baja para la
preservación eficientemente de ciertos tipos celulares, la difusión procede y esto puede
modificar el balance iónico en el medio. A temperaturas más bajas, estas soluciones de
electrolitos son solidificados en eutéticos.
La estructura cristalina del hielo puede cambiar también (con el crecimiento de cristales
o recristalización) resultando en un serio daño físico a estructuras biológicas
importantes.
3.7
Preservación a temperaturas bajas
En el mundo de los seres vivos, la temperatura de -70 ºC es considerada el umbral de
temperatura más bajo en el cuál ningún proceso vital esta permitido. Cuando se
contempla el almacenamiento a largo o muy largo plazo, temperaturas por debajo de
este umbral deben de ser empleadas.
Muchos investigadores, conservan células almacenadas en la presencia de algún
agente crioprotector (por ejemplo, Dimetilsulfoxico [DMSO] o glicero, HES, Albúmina),
para prevenir cualquier daño, al momento en que son almacenadas a temperaturas
inferiores de -130 ºC. En al práctica, es difícil creer que cualquier proceso dañino puede
ocurrir todavía a esta temperatura que corresponde en la cual el agua se vuelve
vitrificada. Algunas células particularmente lábiles, pueden necesariamente
almacenarse a temperaturas extremadamente bajas de -196 ºC, como es el caso del
NITROGENO LIQUIDO (N2L).
3.8
Medición de la Temperatura
Debido a que la velocidad de congelamiento y descongelamiento pueden tener un
mayor impacto en la viabilidad de las células y tejidos, deben de ser medidas en una
forma cuantitativa. La mejor manera de realizarlo es generar una curva completa que
describa el proceso de congelamiento y descongelamiento. Para esto, lo siguiente
puede ser determinado:
● El enfriamiento antes de que el congelamiento inicie (1)
● El tiempo de super-enfriamiento (*) y sus parámetros (2)
● El inicio de la cristalización y la duración de la meseta de la fase de transición (3)
● El rango en el cual la temperatura desciende después de la fase de transición (4)
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Esta curva es referida como el PERFIL DE LA TEMPERATURA del sistema en
consideración y puede ser normalizada a una referencia medible para su fácil
manipulación. El parámetro más posible de estimar el rango de enfriamiento, es el
tiempo en que la temperatura cae desde 5 ºC, (al punto en el cual la mayor parte del
cambio de fase o eutéctico procede, con su correspondiente liberación del calor latente
de fusión) hasta -50ºC. Sobre este rango, la temperatura tiende a volverse lineal en
función del tiempo. Ver figura 1.
(*) SUPER-ENFRIAMIENTO: Durante el proceso de congelamiento, el superenfriamiento constituye una fase importante y crítica del perfil de temperatura. En
términos prácticos, la manera en que una solución es enfriada por debajo de su punto
de congelación puede determinar cómo ocurrirá el inicio de la formación de cristales de
hielo y por ende la forma de cristalización.
Figura 1. Perfil de la temperatura durante el proceso de congelamiento controlado.
Congelamiento
ideal
Incremento en la
velocidad de enfriamiento
3.9
Agentes crioprotectores
Las causas principales de la destrucción celular son la formación de hielo intracelular, y
la exposición a altas concentraciones de sales. El éxito durante el congelamiento
depende en mantener un volumen de agua suficiente en la fase líquida, tanto en los
compartimientos intracelular y extracelular, para mantener los electrolitos en solución.
El INICIO y la subsecuente CRISTALIZACIÓN pueden ser inhibidas por la inactivación
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del punto del potencial de condensación por medio de un ENVENENAMIENTO
QUÍMICO. Los agentes usados para este fin son capaces de unirse a las moléculas del
agua a través de puentes de hidrógeno y son referidos como CRIOPROTECTORES,
son muy diversos en estructura química pero todos actúan de la misma manera.
Cualquiera que sea su estructura, todos son muy solubles en agua y por su capacidad
de formar puentes de hidrógeno con las moléculas de agua, disminuyen el punto de
congelamiento de cualquier solución en la cual son incluidos.
La segunda propiedad importante de estos agentes es de que no son tóxicos a las
células. La toxicidad en este caso es más difícil redefinir a consecuencia de
condiciones externas, tan opuestas a la naturaleza de producto en sí mismo. En la
práctica, la toxicidad depende de la concentración del agente crioprotector, la tonicidad
del medio, y de cómo las células están en contacto con el agente. Las otras variables
que determinan la extensión a la cual un aditivo en particular será capaz de proteger
las células de un sistema biológico dado dependen de factores tales como el peso
molecular del compuesto y su habilidad de atravesar la membrana celular.
En términos generales los agentes crioprotectores modulan las propiedades
eutécticas de una solución de tal manera que la cantidad de hielo formado y en
consecuencia, la concentración de sales es reducida. Por disminuir el punto de
congelamiento del fluido extracelular, ellos inhiben el flujo de agua intracelular,
previniendo así la disminución del volumen celular a su mínimo volumen crítico. Por
reducir la retracción celular, estos agentes atenúan la hiperconcentración del fluido
intracelular y por ello inhiben la precipitación de las proteínas.
En la práctica, una solución salina isotónica (9 gramos de NaCl por litro) en la
presencia de 1% de DMSO alcanzará una concentración de 50 g/L a una temperatura
de -5 ºC. En la presencia de 5% de DMSO, esta concentración no será alcanzada
hasta que la temperatura haya descendido a -20 ºC y a una concentración de 10% de
DMSO no se alcanzará hasta los -50 ºC.
La cantidad del daño inducido en las células durante el congelamiento depende de dos
factores conflictivos, y ambos dependen de la velocidad de enfriamiento: a velocidades
que son demasiado lentas, altas concentraciones de sales serán generadas, ya
velocidades que son demasiado rápidas, el hielo se formará en el interior de las
células. La máxima viabilidad es obtenida por el enfriamiento a una velocidad en la
zona de transición en el cual el efecto combinado de ambos mecanismos es
minimizado.
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Como regla general, el agente crioprotector parece proteger a las células a velocidades
de enfriamiento lento en el cual el daño asociado con los EFECTOS DE SOLUCIÓN
predominan. Basadas en observaciones empíricas, se ha demostrado que el resultado
de incrementar la concentración de un agente crioprotector (por ejemplo, glicerol o
DMSO) en la suspensión celular siendo enfriada a diferentes velocidades, es trasladar
el radio óptimo más inferior acoplado con un incremento del rango general de
sobrevida, y se ha documentado que los problemas asociados con el congelamiento
intracelular no son afectados por la presencia del agente crioprotector.
Con referencia a la idea de la zona de transición descrita anteriormente, se pude decir
que el agente crioprotector presente durante el congelamiento, traslada la zona entera
en la dirección de rangos más bajos por disminuir el umbral asociado con el daño
causado por la combinación de las altas concentraciones de sales y del hielo
intracelular.
4. Instrucciones y procedimiento
Los factores críticos en este procedimiento son:
 La suspensión celular:
o La suspensión inicial de una muestra de CPH obtenida de sangre
periférica movilizada no debe de exceder de 2-3 x 10 7 células/ ml.
 El medio crioprotector:
o El medio crioprotector puede variar, se recomienda que contenga una
fuente nutritiva (albúmina humana, suero o plasma), en una concentración
final del 10%.
o El agente crioprotector de elección es el DMSO a una concentración final
del 10%.
o Se parte de una solución crioprotectora con DMSO al 20%. Se mezclan
un volumen de cosecha de CPH con uno de solución crioprotectora. La
concentración final del DMSO será 10%.
 NOTA: La adición del DMSO debe de realizarse lentamente y a
una temperatura de 4 ºC.
o Una vez terminada la mezcla, se transfiere a una bolsa de congelamiento
de material plástico no lipofílico (poliolefina/ o teflón-kapton) para evitar el
daño a las membranas celulares, y además debe de ser lo
suficientemente resistente a bajas temperaturas (-196 ºC).
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o La bolsa se introduce en un soporte de aluminio que mantenga
comprimidas ambas superficies, proporcionando así un espesor y forma
homogénea de la muestra que facilite un correcto intercambio de calor.
 El programa de congelamiento:
o El programa de congelación puede variar, pero en términos generales
debe incluir primero una fase de estabilización a una temperatura de 4 ºC,
seguida de un descenso constante de la misma a un ritmo de 1-2 ºC/min.
En el momento previo al punto eutéctico, se debe de inducir un descenso
prolongado de la temperatura de la cámara para compensar la liberación
del calor latente de fusión e inducir el proceso de nucleación. Una vez
superada la fase de transición, el ritmo de enfriamiento debe de
permanecer constante entre 1-2 ºC/min.
 El sistema de almacenamiento:
o Las células congeladas pueden almacenarse en un contenedor de N2L, en
su fase líquida, donde la temperatura se mantiene constante a –196 ºC.
Si la muestra se mantiene en la fase gaseosa, la temperatura puede
oscilar entre –100 ºC y –140 ºC.
 NOTA: El tiempo máximo de almacenamiento bajo estas
condiciones se desconoce con exactitud (pero se han llegado a
reinfundir productos almacenados durante 15 años, con resultados
satisfactorios).
4.1 Observaciones
El dimetilsulfoxido es potencialmente tóxico para las células en temperaturas por arriba
de 0 ºC, por ello la adición del DMSO y los pasos subsecuentes deben de realizarse lo
más rápido posible y todo el procedimiento, tanto en la preparación de los reactivos,
como en la preparación de las muestras biológicas se deben de mantener a una
temperatura de 4 ºC y con asepsia en la campana de flujo laminar.
En el laboratorio se han realizado experimentos de criopreservación usando la prensa
para la bolsa criogénica, incluida en el equipo CryoMed Freezeer, el casete de aluminio
(canister), y los sensores de temperatura, superficial o dentro de la muestra, con lo cual
hemos observado que el proceso se ve afectado por estas configuraciones y por tal
motivo es necesario elegir el programa adecuado al momento de criopreservar las CPH
según la manera que se elija al congelar las muestras.
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4.2 Material y equipo requerido para criopreservar CPH
1. Bata quirúrgica
2. Cubre bocas
3. Gorro quirúrgico
4. Guantes estériles
5. Campos estériles
6. Tijeras inoxidables estériles
7. Pinzas inoxidables estériles (Rocher)
8. Gasas estériles
9. Torundas de algodón (jabón, alcohol, isodine)
10. Alcohol isopropilico al 70%
11. Desinfectante (glutaraldehído, fenol al 5%, o formaldehído)
12. Isodine
13. Frascos estériles (100 ml) o matraz Elermeyer de 250 ml
14. Probeta graduada estéril (100 ml)
15. Acopladores para toma de muestras (Sampling Site Couplers, Fenwal 4C-2405)
16. DMSO estéril (Sigma, Cat D-2650) o USP (Sigma, Cat. D-1435)
17. Jeringas desechables estériles de 5, 10, y 20 ml
18. Agujas estériles del No, 18 G
19. Bolsa criogénica de 250 ml (OriGen, Cryostore, Cat. CS 250n)
20. Casete de aluminio (Canister) para bolsa criogénica a 4º C
21. Equipo para congelamiento controlado CrioMed Freezer
22. N2L a baja presión (22 PSI dewars)
23. Guantes criogénicos
24. Frascos para hemocultivo y de hongos/micoplasma (pediátricos, 1-3 ml)
25. Tubos para Biometría Hemática (BH)
26. Hielo fräppe
27. Refrigerantes envueltos en papel
28. Azul Tripano al 0.4%
29. Cubre y porta objetos
30. Microscopio óptico
31. Sellador dieléctrico
32. Bolsas para desechos
33. Etiquetas de identificación
34. Crioviales estériles
35. Campana de Flujo Laminar
36. Depósito para almacenamiento con N2L, Cryoplus 2
37. Formato del material necesario para criopreservar CPH (Formato I)
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38. Formato de registro del procedimiento para criopreservar CPH (Formato II)
39. Marcos metálicos (Racks) numerados
40. Diagrama del sitio de almacenamiento en el depósito de N2L.
41. Pipetas automáticas de 200 y 1000 μl
42. Puntas para pipetas automáticas de 200 y 1000 μl
43. Solución Salina Fisiológica
4.3 Espécimen a criopreservar
● Células progenitoras hematopoyéticas (alogénicas o autólogas) movilizadas de
sangre periférica y obtenidas mediante aféresis.
● Médula ósea autóloga obtenida en quirófano.
Si es necesario, la suspensión celular es primero concentrada en forma manual o por
una técnica automatizada (seguir el procedimiento apropiado).
4.4 Procedimientos previos a la criopreservación de CPH
4.4.1 Realizar la limpieza y desinfección de la campana de flujo laminar.
4.4.2 Realizar la esterilización con Luz ultravioleta (U.V.) del material que no se puede
esterilizar con vapor usado en la campana de Flujo laminar (por ejemplo, bolsas
criogénicas, DMSO, tubos de BH, etc.), dejar 15 minutos dentro de la campana de flujo
laminar y encender la lámpara de luz U.V. Colocar un letrero que indique que la luz
U.V. está encendida.
4.4.3 Solicitar el plasma del paciente (aprox. 100 ml) obtenido durante la aféresis al
equipo de enfermería y mantenerlo a 4 ºC.
4.4.4 Rotular las bolsas criogénicas y el casete de aluminio (canister).
4.4.4.1 Colocar una etiqueta de identificación en la porta-etiqueta de la bolsa
criogénica. Sellar con el sellador dieléctrico en varios puntos la portaetiqueta sin sellarlo completamente.
4.4.4.2 La información de la etiqueta debe contener:
 Nombre del donador
 No. de unidad o identificación (por ejemplo, expediente)
 Fecha
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 Producto celular (por ejemplo, CPHSP alogénica, MO o CPHSP autóloga
reducida), si es autóloga: SOLO PARA USO AUTOLOGO
 No. de secuencia de la bolsa criogénica, (por ejemplo, 1 de 3)
4.4.4.3 Apartar las bolsas criogénicas hasta que se necesiten.
4.4.4.4 Rotular una bolsa criogénica como bolsa control y apartarla hasta su uso.
4.4.4.5 Rotular los frascos de cultivo, BH y crioviales con la información del paciente.
4.4.4.6 Rotular el casete de aluminio (canister) con una etiqueta con la
de paciente.
información
4.4.4.7 Verificar el nivel de N2L. Abrir la válvula del N2L, y encender el equipo
congelamiento y elegir el programa que va ser utilizado.
de
4.4.4.8 Colocar el casete de aluminio (canister) en el congelador hasta su uso.
4.4.4.9 Anotar el número de lote, la fecha de caducidad y la casa comercial del DMSO
y de las bolsas criogénicas en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II).
4.5 Procedimiento para criopreservar
4.5.1 Pesar la bolsa que contienen las CPHSP al terminar su recolección. Restar el
peso de la bolsa vacía (bolsa transfer de 600 ml de equipo CobeSpectra = 32 g; bolsa
de recolección de equipo CS-3000 = 25 g) y dividir el resultado entre la densidad
específica de las CPH (d= 1.066) para obtener el volumen aproximado de la cosecha
de CPH. Con este valor se puede calcular la cantidad de bolsas criogénicas que serán
necesarias para la criopreservación de CPHSP.
Ejemplo,
Peso de la bolsa con CPHSP =
Peso de la bolsa transfer de 600 ml =
Densidad específica de las CPHSP =
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133 g
32 g
- __________
101 g CPHSP
÷
1.066 g/ml
__________
94.74 ml de CPHSP
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En la siguiente tabla se muestran el volumen mínimo y máximo permitido al
criopreservar CPH en las bolsas criogénicas de diferentes capacidades (Nota. Los
datos fueron tomados de las bolsas Cryostore de Origen Biomedical, pero se puede
aplicar a cualquier bolsa con las mismas dimensiones y capacidades).
Código del
Producto
Volumen, a
congelar
Min - Max
Volumen
Nominal
Largo,
cm
Ancho,
cm
CS 50
10 a 20
50
11.4
7.6
CS 250
30 a 70
250
15.2
12.7
CS 500
55 a 100
500
19.0
12.7
Tomando en cuenta la capacidad de las bolsas criogénicas, el volumen de CPH se
dividiría en 3 bolsas criogénicas con un volumen de 31.58 ml (más un volumen igual de
solución crioprotectora con DMSO al 20%).
4.5.1.1 Si el volumen de la cosecha es mayor a 140 ml, el volumen deberá ser
reducido, según el protocolo establecido en el Servicio de Medicina
Transfusional.
4.5.2 Si el volumen de la cosecha es igual o menor a 140 ml, colocar la bolsa dentro de
la campana de flujo laminar. Realizar la asepsia de uno de los puertos de entrada y
colocar un acoplador de toma de muestra en el
puerto y realizar su asepsia
correspondiente. Si no se cuenta con dicho acoplador, realizar la asepsia del tubo de
recolección de la bolsa de CPH para puncionarlo con una jeringa con aguja del calibre
18 G. En este momento se puede realizar la asepsia de los puertos de entrada de las
bolsas criogénicas y de los frascos de hemocultivo. De igual forma, realizar la asepsia
de un extremo de tubo de la bolsa del plasma para poder tomar el volumen indicado
para preparar la solución crioprotectora.
4.5.3 Usando una jeringa de 5 ml con aguja del calibre 18G retirar 2 ml de la
suspensión celular y depositar 1 ml en un tubo de BH (Tubo morado con EDTA),
rotulado previamente. Realizar el recuento celular en el equipo CellDyn 3500 y
determinar el número de células Mononucleares en la muestra. Inocular 1 ml de la
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suspensión celular a un frasco de hemocultivo, rotulado previamente como precongelamiento o pre-DMSO.
4.5.4 Tomar las jeringas de 20 ml con aguja del calibre 18G y llenar completamente a
un volumen de 20 ml cada una. Usar las jeringas necesarias para recolectar el volumen
total de CPHSP. La última jeringa contendrá menos de 20 ml.
4.5.5 Tapar la aguja con su capuchón cuidadosamente y retirar la aguja de la jeringa
(desechar la aguja en un contenedor de punzo cortantes). Unir cada jeringa a una bolsa
criogénica. Dispensar la suspensión celular hacia la bolsa, dejando la jeringa unida.
Comenzar con la bolsa criogénica # 1.
4.5.6 Repetir el procedimiento con las otras jeringas y bolsas criogénicas como en el
paso 4.5.4.
4.5.7 Anotar el volumen de cada bolsa criogénica en el formato del REGISTRO DEL
PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II).
4.5.8 Dispensar a la bolsa control un volumen igual al de la bolsa de CPH con mayor
cantidad de la solución control (se puede utilizar plasma).
4.5.9 Colocar las bolsas criogénicas entre los refrigerantes e incubar durante 30
minutos.
4.5.10 Calcular la cantidad de la mezcla crioprotectora (plasma autólogo con DMSO al
20%) para que al ser mezclada 1:1 con las CPH su concentración final sea del DMSO
al 10%.
4.5.10.1 Volumen de cosecha de CPH + volumen bolsa control = volumen de
solución crioprotectora + 10 ml de excedente. Ejemplo: 70 ml para CPH + 20 ml
para la bolsa control = 100 ml de solución
crioprotectora (90 ml para bolsas + 10 ml
excedente). Por lo tanto se
prepara de Solución crioprotectora = 80 ml de plasma
+ 20 ml DMSO.
En la siguiente tabla se muestran los cálculos de diferentes volúmenes
crioprotectora:
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de
solución
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Valores de DMSO-Plasma para la medición exacta del DMSO al 20%
Volumen Total (ml) =
DMSO
+
Plasma
5
1
4
10
2
8
15
3
12
20
4
16
25
5
20
30
6
24
35
7
28
40
8
32
45
9
36
50
10
40
55
11
44
60
12
48
65
13
52
70
14
56
75
15
60
80
16
64
85
17
68
90
18
72
95
19
76
100
20
80
105
21
84
110
22
88
115
23
92
120
24
96
125
25
100
130
26
104
135
27
108
140
28
112
145
29
116
150
30
120
160
32
128
170
34
136
180
36
144
190
38
152
200
40
160
250
50
200
300
60
240
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4.5.10.2 Anotar el volumen de la solución crioprotectora de cada bolsa criogénica en
el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIÓN DE
CPH (Formato II).
4.5.10.3 Anotar el volumen total de cada bolsa en el Formato del REGISTRO DEL
Volumen Total = volumen de CPH + volumen de solución crioprotectora.
4.5.11. Colocar un reloj con alarma a los 30 minutos y otro a los 20 minutos.
4.5.12 A la alarma de los 20 minutos preparar la solución crioprotectora. Con la probeta
estéril medir la cantidad del plasma autólogo frío (a 4 ºC) y depositarlo en un frasco
estéril en hielo. Con una jeringa de 20 ml tomar la cantidad necesaria de DMSO y
adicionar al plasma mezclando perfectamente para evitar desnaturalizar las proteínas
del plasma debido a la reacción exotérmica.
4.5.13. Iniciar el programa correspondiente del congelador programable y permitir que
se enfríe a 4 ºC.
4.5.14 A la alarma de los 30 minutos tomar con una jeringa de 20 ml la cantidad
necesaria de la solución crioprotectora. Retirar la jeringa vacía de la suspensión de
CPH, y en su lugar colocar la jeringa de la solución crioprotectora: Secuencialmente y
con prontitud adicionar la solución crioprotectora en cada bolsa criogénica, empezando
con la bolsa control y posteriormente a las bolsas con las CPH, mezclar perfectamente
las células. Usar el émbolo de la jeringa para retirar la mayor cantidad posible de aire y
tomar aproximadamente 2.5 ml de la mezcla. Colocar 0.5 ml en un criovial rotulado, 1
ml en el tubo de BH, rotulado previamente como post-DMSO, para corroborar su
viabilidad. Mantener el tubo a 4 ºC. Inocular 1 ml de la mezcla en el frasco de
hemocultivo, rotular como post-DMSO.
4.5.15 Sellar la línea de la bolsa criogénica que contiene la jeringa tres veces con un
sellador dieléctrico. Cortar con unas tijeras en medio de la línea sellada y desechar la
línea unida y la jeringa. Secar rápidamente cada bolsa criogénica y colocarlas adentro
del casete de aluminio (canister) previamente enfriado a -20 ºC; por ejemplo, colocar la
bolsa #1 en el casete (canister) #1. Cuando corte la línea sea cuidadoso en no dejar
cualquier gota de CPH en el área de sellado. Las células en un extremo abierto de la
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línea después del sellado debe de ser evitado a causa de que puede contaminar el N2L
en el tanque de depósito. Ver observaciones para otras opciones para congelar las
bolsas criogénicas usando una prensa para congelamiento del equipo CryoMed
Freezer.
4.5.16 Colocar los casetes de aluminio (canister) y el criovial en la cámara de
enfriamiento. Distribuir individualmente los casetes de aluminio (canister) en una
gradilla metálica para que se lleve a cabo el proceso en las mismas condiciones el
congelamiento.
4.5.19 Coloque la bolsa control dentro de un casete de aluminio (canister) e inserte el
sensor de la temperatura en uno de los puertos de muestreo. Tener cuidado de no
dejar aire para evitar un registro inadecuado del proceso de congelamiento. Cerrar con
cuidado el casete de aluminio (canister) para evitar maltratar el sensor de la
temperatura, y colocarlo en la gradilla metálica. Ver observaciones para otras
opciones para congelar las bolsas criogénicas usando una prensa para
congelamiento del equipo CryoMed Freezer.
4.5.20 Cerrar la puerta de la cámara de enfriamiento y oprimir el botón de RUN del
equipo. Registrar el programa utilizado para el congelamiento controlado y el tiempo de
inicio
en
el
Formato
del
REGISTRO
DEL
PROCEDIMIENTO
DE
CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II).
4.5.21 Al final del proceso de congelamiento presionar el botón STOP para silenciar la
alarma del equipo. Registrar el tiempo final en el Formato del REGISTRO DEL
4.5.22 Abrir la puerta de la cámara de enfriamiento, remover los casetes de aluminio
(canister) y el criovial de las CPH y colocarlos en el depósito de almacenamiento con
N2L en la fase de líquida o de vapor. Anotar el No. del marco metálico (rack), el lugar
en el marco metálico (rack), la fase de almacenamiento de N 2L, y el sitio dentro del
depósito de N2L en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II), según el siguiente diagrama:
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Esquema de la localización dentro del contenedor de N2L:
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Esquema de la localización dentro del marco metálico (Rack):
4.5.23 Imprimir la gráfica del registro de temperatura y rotular con la identificación del
paciente. La carta de congelamiento será parte del registro permanente del proceso. La
gráfica del congelamiento no deberá mostrar un cambio inusual o inesperado en la
temperatura. La curva apropiada del calor latente de fusión deberá de estar por debajo
de 0ºC.
4.5.24 Cerrar la puerta de la cámara de enfriamiento y accionar el botón de
calentamiento (warm) para descongelar la cámara. Al terminar, retirar la bolsa control y
almacenarla a -20 ºC y apagar el equipo de congelamiento.
4.5.25 Limpiar la campana de flujo laminar y tirar todo el material desechable en las
bolsas correspondientes.
4.6 Procedimiento para determinar el No. De CMN de las CPH
4.6.1 Encender el equipo para Biometría Hemática.
4.6.2 Evaluar los controles alto, normal y bajo, y establecer si el equipo no muestra
valores fuera del rango para dichos controles. Si algún valor está por afuera de estos
rangos será necesario calibrar el equipo según el manual del usuario.
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4.6.3 Procesar por duplicado la muestra rotulada como pre-DMSO que se obtuvo de la
cosecha de CPH. Si los valores están por encima del rango de detección del equipo
diluir la muestra de CPH 1:10 con SSF. Obtener el promedio de los valores y
reportarlos en el formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE
CRIOPRESERVACIÓN DE CPH
4.6.4 Calcular el No. De CMN presentes en la muestra y la dosis / Kg de peso, como
sigue:
Leucocitos Totales = valor de leucocitos obtenido del Cell-Dyn (K/μl) x 1000000 x
Dilución (si se realiza) x Volumen de la cosecha.
CMN Totales = % de Linfocitos Cell-Dyn + % de Monocitos Cell-Dyn ÷ 100 x Leucocitos
Totales.
Dosis de CMN/Kg = CMN totales ÷ peso del donador.
Anotar los resultados en el formato del REGISTRO DEL
4.7 Procedimiento para determinar la viabilidad celular de las CPH
4.7.1 Material requerido:
1. Portaobjetos
2. Microscopio óptico
3. Pipeta automática de 50 μl
4. Puntas para pipeta automática
5. Tubos de ensayo de 12 x 75 mm
6. Cámara de Neubauer
7. Cubreobjetos para cámara de Neubauer
4.7.2 Reactivos
Azul de Tripano al 0.4 %
4.7.3 Procedimiento
4.7.3.1 Verificar que el material este completamente limpio.
4.7.3.2 Rotular un tubo de ensaye de 12 x 75 mm con el nombre Donador y CPHcosecha Donador.
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4.7.3.3 Rotular otro tubo de ensaye de 12 x 75 mm con el nombre del Donador y CPH
post-DMSO.
4.7.3.4 Adicionar a cada tubo 50 μl de la CPH de la cosecha y de la muestra postDMSO, respectivamente.
4.7.3.5 Adicionar en cada tubo 50 μl de la solución de Azul Tripano al 0.4% y mezclar
perfectamente.
4.7.3.6 Adicionar la muestra en la cámara de Neubauer y contar el número de células
vivas y muertas con el microscopio óptico (40X). En caso de no mtener marcador de
viabilidad o anticuerpo monoclonal 7 ADD.
4.7.3.7 Reportar el porcentaje de viabilidad de las muestras.
4.8 Limpieza y asepsia de la campana de flujo laminar
Debido a que las CPH son recolectadas en un ambiente “abierto” y porque muchos de
los pasos de su procesamiento no pueden ser realizados en un sistema completamente
cerrado, hay numerosas oportunidades para la contaminación con microorganismos.
Por esto, se debe asumir un método estricto de asepsia que deberá de ser realizado en
el área de trabajo dentro de la campana de flujo laminar. Cultivos bacterianos y de
hongos deberán de ser realizados en las diferentes etapas del procesamiento para
determinar si cualquiera de las técnicas y/o materiales en uso están comprometiendo la
pureza del las CPH.
4.8.1 Material y equipo requerido
1. Solución de limpieza Dextran-Hipoclorito de Sodio
2. Solución desinfectante PRESEPT (Code Nr. SPW50, Johnson &
Johnson).
Disolver una tableta de 5 g en 3 litros de agua.
4. Alcohol al 70%
5. Fenol al 5 %
6. Guantes desechables
7. Cubrebocas
8. Lentes de Protección.
9. Gasas estériles
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4.8.2 Procedimiento
4.8.2.1 Encender la luz de la campana de flujo laminar y realizar la limpieza de la
superficie del piso, techo y paredes de la campana con la solución de DextránHipoclorito de Sodio.
4.8.2.2 Realizar la desinfección de las cuatro paredes de la campana con la solución
PRESEPT.
4.8.2.3 Humedecer las gasas estériles con etanol al 70 % y pasar por toda el área de
trabaja dentro de la campana.
4.8.2.4 Con la ayuda de las gasas estériles desinfectar toda el área de la campana con
la solución de Fenol al 5 %. Dejar actuar por 15 minutos.
4.8.2.5 Encender el motor de la campana y dejar durante 30 minutos como mínimo.
Posteriormente encender la luz U.V. y dejar actuar durante 15 minutos. Colocar un
letrero indicando que la luz U.V. está encendida.
4.8.2.6 Apagar la Luz U.V. A partir de este momento se puede trabajar en la campana
de flujo laminar, procurando evitar salirse del área estéril, así como también, evitar
movimientos bruscos para no provocar flujo de aire hacia el interior de la campana.
4.9 Verificación de la esterilidad del proceso
Mantener la esterilidad es una consideración importante en el procesamiento y
criopreservación de las CPH. Se ha reportado contaminación en pacientes que han
recibido trasplantes alogénicos y autológos. Los microorganismos identificados fueron
flora normalmente encontrada en la piel.
La contaminación puede ocurrir durante la colección de las CPH y en varias etapas
durante el procedimiento. La disponibilidad de sistemas semicerrados de recolección
reduce oportunamente la contaminación, sin embargo la esterilidad debe de ser
monitoreada con cultivos bacterianos y de hongos. La identificación del organismo
y su sensibilidad debería de ser realizada en los cultivos que resultaran positivos.
Aunque el mayor propósito de esta prueba es la protección del paciente, también
suministra información epidemiología útil acerca de las actividades de laboratorio y del
trasplante en general.
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4.10 Procedimiento para descongelar CPH criopreservadas
Las CPH criopreservadas son descongeladas en un baño maría a 37 – 40 ºC
inmediatamente antes de infundirlas y administrarlas a través de un catéter central. Es
posible diluir y/o lavar las CPH antes de la infusión en orden de remover el DMSO, pero
esta operación es rara vez realizada. Aunque la infusión de DMSO ha sido asociada
con cierta toxicidad incluyendo nauseas, vómitos, rubor, incremento en la frecuencia
cardiaca y presión sanguínea, y elevación de las transaminasas en suero, muchos
investigadores creen que la manipulación de las CPH descongeladas pueden resultar
en la pérdida celular inaceptable. Las CPH pueden ser tanto infundidas directamente
de la bolsa a través de un equipo de administración, o removidas de la bolsa con una
jeringa e inyectada hacia la línea central.
4.10.1 Material necesario
Baño María
Cronómetro
Agua estéril
Solución de limpieza Dextran-Hipoclorito de Sodio
Solución desinfectante PRESEPT (Code Nr. SPW50, Johnson & Johnson)
Disolver una tableta de 5 g en 3 litros de agua.
Alcohol al 70%
Fenol al 5 %
Refrigerantes
Tubos de vidrio de 12x75 mm
Frascos para Hemocultivo y Hongos
Microscopio Óptico
Porta y cubre objetos
Azul de tripano al 0.4%
Campos quirúrgicos
Contenedor de N2L portátil
Ropa quirúrgica
Gasas estériles
Tijeras estériles
Acoplador para toma de muestra
Jeringas desechables estériles de 10 y 20 ml
Agujas estériles del calibre 18 G
Torundas de alcohol e isodine
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Guantes estériles
Cubrebocas
4.10.2 Procedimientos previos para descongelar las CPH
4.10.2.1 Localizar en el depósito de almacenamiento de N2L las bolsas criogénicas con
las CPH correspondientes al paciente que va a ser reinfundido. Verificar perfectamente
que los datos de las bolsas concuerden con los datos del paciente que se va a
transfundir,
4.10.2.2 Determinar la cantidad de CMN y/o células CD34 de cada bolsa criogénica.
4.10.2.2 Transferir los casetes de aluminio (canister) de la fase líquida a la fase
gaseosa del depósito de N2L, por lo menos 12 horas antes de la reinfusión.
4.10.3 Procedimiento
4.10.3.1 Realizar la limpieza del Baño María con la solución de Dextran-Hipoclorito de
sodio.
4.10.3.2 Realizar la desinfección del Baño María con la solución desinfectante
PRESEPT con la ayuda de gasas estériles.
4.10.3.3 Realizar la asepsia del Baño María con una solución de Fenol al 3 %. Dejar
actuar por espacio de 30 minutos.
4.10.3.4 Cubrir el Baño María con un campo quirúrgico y trasladar el baño a pie de
cama del paciente al que se van a reinfundir las CPH.
4.10.3.5 Localizar las CPH criopreservadas y acomodar las bolsas de mayor a menor
concentración de CPH en el depósito de N2L portátil, el cual contiene N2L Trasladar el
contenedor al área donde se llevará a cabo la reinfusión.
4.10.3.6 En el área donde se llevará a cabo la reinfusión, conectar el Baño María a una
toma de corriente eléctrica. Adicionar agua estéril al baño y dejar que alcance la
temperatura de 40 ºC. Adicionar al un antiséptico.
4.10.3.7 A la indicación del Médico responsable, seleccionar la primera bolsa con
mayor concentración de CPH del contenedor portátil de N 2L y verificar una vez más los
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datos de identificación de la bolsa y del paciente. Introducir la bolsa al Baño María y
con una leve agitación dejar que se descongele aproximadamente 1 minuto y 50
segundos. Este tiempo puede variar según el volumen de las CPH y de las
características de la bolsa criogénica. NOTA: No descongelar completamente las
CPH, sino hasta el punto en que se note la apariencia de una moneda de 10
pesos en el centro de la bolsa.
4.10.3.8 Retirar la bolsa criogénica del Baño María y colocarla entre dos refrigerantes.
Realizar la asepsia de uno de los puertos de entrada con las torundas de alcohol e
isodine e insertar el equipo de transfusión para su reinfusión en el paciente. Otra opción
sería, colocar un acoplador de toma en el puerto de entrada y con la ayuda de una
jeringa de 20 ml con aguja del calibre 18 G, tomar las CPH e iniciar la reinfusión en
alguna de las líneas de soluciones que tenga el paciente.
4.10.3.9 Vigilar los signos vitales y reacciones que pudiera presentar el paciente.
4.10.3.10 Realizar el mismo procedimiento, pasos 4.10.3.6 a 4.10.3.8, para cada una
de las bolsas criogénicas restantes.
4.10.3.11 En cada una de las bolsas realizar la asepsia de una esquina y cortar con las
tijeras estériles un extremo de las bolsas. Tomar el sobrenadante remanente de las
CPH para realizar los cultivos bacterianos (hemocultivo y hongos) y la viabilidad de las
CPH después de descongelarlas. El DMSO es toxico para las CPH a temperaturas
mayores de 4 º, por tal motivo, conservar todas las muestras en los refrigerantes.
Requisitos de recepción de Células Tallo
Una vez que llega la bolsa de recolección el área de criopreservación deberá de
traer:
1.- Nombre del Donador
2.-Nombre de Paciente
3.- Número de la unidad asignada
4.- Volumen de obtenido
5.- Equipo en donde fue recolectada
6.- Marca de la bolsa de recolección
7.- Fecha de caducidad
8.- Número de Lote
9.- Tubo de biometría hemática previa a la recolección
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10.- Resultado de la biometría Hemática
11.- Resultado de CD 34, CD 45 y 7 ADD
12.- Resultado de Serología
o Nota estos requisitos son indispensables para la separación automática y
manual
METODO MANUAL PARA LA REDUCCIÓN DE VOLUMEN
Este método lo usaremos en caso que el Sepax no pueda ser utilizado debido a que
tenemos mayor volumen de muestra que rebase las especificaciones del fabricante.
Es muy importante pesar la bolsa de recolección vacía y llena
En la campana de flujo laminar previa limpieza con alcohol al 70% e irradiación de 15 a
20 min llevar la bolsa de recolección para limpiar toda la bolsa especialmente las líneas
Poner el acoplador a la bolsa de recolección (jeringa de 60 mí de preferencia) se extrae
un volumen y se vacía en tubos Falcon de 50 ml, estériles, se tapa y se centrifuga por
15 min a 4 ° C a 3500 RPM.
En la campana, abrir la tapa de tubo Falcon extraer el Plasma dejando alrededor de 5
ml. Dar pequeños golpecitos para despegar las células de la pared del tubo y
resuspender con un poco de plasma, tratando de recuperar el mayor número de células
posibles . Con una jeringa de 60 0 20 ml y aguja lila (16 G) se pasan las células a la
bolsa de criopreservación a través de la línea de la bolsa (pueden ser más bolsas
dependiendo del volumen que tengamos) de 250 ml y poner en el refrigerador.
Prepa en un tubo Falcon de 50 ml la solución Crioprotectora
DMSO al 10 % -------------------------------------------------10 ml
HEST (Hidroxietilalmidon) si es al 10 %…………….……30 ml
Albúmina Humana al 20% o 25%--------------------------10 ml
En el caso que el HEST sea del 6% ------------------------35ml
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Albúmina Humana del 20% o 25% -----------------------5 ml
Poner en el refrigerador la solución de DMSO por 15 minutos a 4°C, pues este debe
estar frío a la hora de ponerlo a las células
Encender el congelador minutado el cual deberá contener una sensor y a falta de este
una bolsa con la mezcla de DMSO como control y en cuanto llegue a una Temperatura
de 4°C
En lo que el congelador minutado llega a la Temperatura deseada se prepara la
Cosecha en la campana de flujo laminar con las solución crioprotectora la cual debe
ser agregada poco a y en frio mezclando al mismo tiempo que se va adicionando
lentamente.
Eliminar el aire y burbujas con una jeringa de la criobolsa, conservando 1.5 ml de
muestra, 500µl en un tubo criovial debidamente identificado y el resto de divide para
realiza hemocultivos viabilidad con citometria o azul de tripan
Se sella la bolsa con un sellador automático el cual también debe estar limpio y cerca
de la campana de flujo laminar
REACTIVOS PARA CRIOPRESERVACION
INSUMOS
La siguiente lista son reactivos indispensables para realizar la criopreservación de
Células Progenitoras Hematopoyéticas (CPH), procedentes de Sangre Periférica,
Medula Ósea y Cordón Umbilical
1.- Dimethyl Sulfoxide (DMSO) grado clínico
2.- Hidroxietil almidon al 10% (HES)
3.- Seroalbumina Humana al 20 %
4.- Etanol al 70% (desinfectante)
Sigma –Aldrich
PISSA Fresniere
MATERIAL PARA CRIOPRESERVACION
1. Bolsas de 250ml Congelación Cryostoic
Biomedica
2. Acopladores ( Sampling Site Copler ) ( en caso de no tener suplir con llave de
tres vias)
Baxter
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3. Sepax Cell Separetion Kitt
Biosafe
4. Crioviales de Nitrógeno liquido de 2ml
Labcon
5. Tubo Falcon de 50 ml
6. Jeringas (propulsor o perfusor) DE 60 ml
7. Jeringas de 20 ml
8. Agujas Insyde 14 G 1.7 sin 2.1x45mm
9. Agujas 16 G 1 ½
10. Pipetas de plástico de 25 ml estéril
11. Bolsas Estériles para descongelación ( syplog )
12. Pipetas con filtro desechables de 10 ml
13. Puntas para 200 µl
14. Puntas desechables para 1000 µl
15. Cubre bocas
16. Guantes Estériles
17. Guante manejo de temperaturas extremas (bajas)
EQUIPO
1. Congelador Programable
2. Tanque de almacenaje
3. Cajas y Marcos para almacenar bolsas y criobiales
4. Placas de Presión
5. Campana de Bioseguridad Clase II
6. Pipetor Automático
7. Sellador Automático
8. Tanques de Nitrógeno Líquido
9. Balanza Digital
10. Pinzas de Rodillo
11. Sellador dieléctrico
12. Conector estéril
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PREPARACION DE EQUIPO PARA EL PROCESO
LIMPIEZA Y
DESINFECCIONJ DEL
AREA BLANCA DE
PROCESAMIENTO
VERIFICAR Y LIMPIAR CON
ALCOHOL AL 70% EL
CONGELADOR MINUTADO,
TENER LOS CANESTER A
OCUPAR LIMPIOS Y SECOS
VERIFICAR QUE LAS BOLSAS
CRIOPROTECTORAS TENGAN
BUENA CADUCIDAD Y EL
CASO DE USO DE SEPAX
LIMPIARLO
LIMPIEZA DE CAMPANA DE FLUJO LAMINAR
COMO SE MENSIONA EN ESTE MANUAL EN EL
PUNTO 4.8.2
COLOCAR EL MATERIAL
REQUERIDO PARA EL
PROCESO EN LA CAMPANA Y
COMO JERINGAS GASAS
TUBOS SELLADOR ETC. DEJAR
15 MIN CON UV
CHECAR QUE HAYA
SUFICIENTE NITROGENO PARA
TODO EL PROCESO DE
CONGELACION
LIMPIEZA Y DESINFECCION DE
CENTRIFUGA REFRIGERADA
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RECEPCION Y PROCESO
LA BOLSA OBTENIDA DE CELULAS PROGENITORAS HEMATOPOYETICAS, YA SEA
DE MEDULA OSEA O SANGRE PERIFERICA DEBERA SER ENTREGADA CON NUMERO
DE UNIDAD ASIGNADA POR EL BANCO DE SANGRE, RESULTADOS DE SEROLOGIA,
NOMBRE DE EL DONADOR, NOMBRE DE RECEPTOR, PESO DEL RECEPROR, EDAD,
VOLUMEN DE LA COSECHA, BIOMETRIA HEMÁTICA , VOUMEN OBTENIDO,
NOMBRE DE EQUIPO UTILIZADO PARA SU OBTENCION Y RECUENTO DE CD 34 Y
VIABILIDAD
UN TUBBO DE BH CON MUESTRA DE LA COSECHA
L
ROTULAR FRASCOS DE HEMOCULTIVO, CRIOVIALES, CON NUMERO DE
UNIDAD Y NOMBRE
OBTENER EL PESO DE LA BOLSA VACIA Y DE BOLSA LLENA PARA
CALCULAR EL VOLÚMEN REAL DE LA COSECHA
MEZCLAR BIEN LAS CELULAS CON MOVIMIENTO SUAVE ASI COMO
TAMBIEN LAS LÍNEAS DE LA BOLSA CON AYUDA DE PINZAS, PONER UN
CAMPO ESTÉRIL EN LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR Y LIMPIAR BIEN LAS
VÍAS, DE ESTAS DARLE UN PILOTO A CITOMETRIA Y OTRO
PARABACTERIOLOGIA
SI EL PROCESO SE VA A REALIZAR DE FORMA MANUAL PONER EL
ACOPLADODR A LA BOLSA DE RECOLECION Y CON JERINGA DE 60 ML DE
PEREFERENCIA EXTRAER TODO EL VOLÚMEN Y VACIAR A 2TUBOS FALCON
ESTÉRILES DE 50 ML, TAPAR Y CENTRIFUGAR POR 15 MINUTOS A 4 ° C SIN
FRENO
SACACAR CON MUCHO CUIDADO LOS TUBOS FALCON Y LLEVARLOS A
LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR, EXTRAEER EL PLASMA Y PASARLO A
OROS TUBOS FALCON ESTÉRILES.
MEDIR EL VOLÚMEN DE CÉLULAS QUE NOS QUEDARON CON JERINGA
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PONER EN LA CAMPANA LAS BOLSAS CRIOPROTECTORAS LIMPIARLAS
CON ALCOHOL
CON JERINGAS DE 20 ML EXTRAEER TODAS LAS CELULAS DE LOS TUBOS
FALCON, PONER UN POCO DE PLASMA PARA DEJAR LO MENOS POSIBLE
DE CELULAS EN EL TUBO, CONECTAR A LA LINEA HEMBRA DE LA BOLSA
DE CRIOPRESERVACION Y TRASVASARLAS A LA BOLSA.
RETIRAR LAS JERINGAS Y CERRAR LA LÍNEA
ES IMPORTANTE TOMAR EN CUENTA EL VOLÚMEN QUE SE TIENE Y
REPARTIRLO EN LAS BOLSAS QUE SEAN NECESARIAS TOAMDO EN
CUENTA EL VOLUMEN QUE SE AÑADIRÁ DE SOLUCION
CRIOPROTECTORA DE MANERA QUE NO VAYAN A QUEDAR MUY LLEAS
PUES SE CORRE EL RIESGO DE QUE SE ROMPAN A LA HORA DE
CRIOPRESERVAR O DESCONGELAR
PREPARAR LA SOLUCION CRIOPROTECTORA EN HIELO O EN UN MEDIO QUE
ESTÉ A 4 ° C
Prepa en un tubo Falcon de 50 ml la solución crioprotectora
DMSO al 10 % -------------------------------------------------10 ml
HEST (Hidroxietilalmidon) si es al 10 %…………….……30 ml
Albúmina Humana al 20% o 25%--------------------------10 ml
En el caso que el HEST sea del 6% ------------------------35ml
Albúmina Humana del 20% o 25% -----------------------5 ml
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ENCENDER EL CONGELADOR MINUTADO EN UTILIZANDO EL PROGRAMA # 6 PARA QUE
LLEGUE A UNA TEMPERATURA DE – 4 °C, MIENTRAS SE PREPARA LA SOLUCION Y SE
ENFRIA
PONER EN EL REFRIGERADOR LOS TUBOS CON LA SOLUCION DE DMSO POR 15 MIN A 4 °C
PUES DEBE DE ESTAR FRIO A LA HORA DE PONERLO A LAS CÉLULAS
SUPONIENDO QUE SE OBTIENEN 2 BOLSAS CON 25 ML DE CÉLULAS CADA UNA SE
ADICIONARAN 25 ML DE SOLUCION CRIOPROTECTORA A CADA BOLSA
SE PONEN LAS BOLSAS DE LAS CÉLULAS ENTRE 2 BOLSAS DE GEL CONGELDO
PARA ADICIONAR LENTAMENTE CON UNA JERINGA LA SOLUCION
CRIOPROTECTORA LENTAMENTE Y MOVIENDO LAS BOLSAS SUAVEMENTE PARA
MEZCLAR, SE ADICIONAN DE 2EN 2 ML HASTA TERMIAR LA SOLUCION SIEMPRE
MEZCLANDO
LAVAR LAS JERINGAS SIN DESCONECTAR CON LA MUESTRA DE TAL MODO QUE
EN LAS LÍNEAS NO QUEDE SOLO SOLCION.
CON LA MISMA JERINGA Y LAS CÉLULAS YA MEZCLADAS DEJAR ALRREDEDOR DE
5 ML DE MUESTRA PARA PONER:
EN 4 CRIOVIALES PONER 500 MICROLITORS DE MUESTRA, UNO PARA CITOMERIA,
3 PARA CRIOPRESERVAR, DOS JUNTO CON LAS BOLSAS Y OTRO PARA CONTROL
LOS OTROS 3 ML VACIAR EN FRASCO DE HEMOCULTIVO
DAR A EL AREA DE CTOMETRIA UN CRIOVIAL O TUBO CON LA MUESTRA PARA
QUE REALICE DETERMINACI0N DE CD 34 Y VIAVILIDAD PARA ASI OBTENER EL
VUMERO FINAL DE CELUALS A CRIOPRESERVAR ASÍ COMO CONTOL DEL
MANEJO CON LOS CRIOPROTECTORES
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ANTES DE DESCONECAR LAS JERINGAS SACAR TODO EL AIRE DE LAS BOLSAS DE
TAL MANERA QUE NO QUEDE NADA DE AIRE DENTRO Y SEGUIR MANTENIENDOLAS
EN FRIO
YA LISTO EN CONGELADOR PONER LAS BOLSAS EN LAS PRENSAS PARA
CONGELAR JUNTO CON UN CRIOBIAL PROCURANDO QUE EL SENSOR DE
EL EQUIPO QUEDE ENTRE UNO DE LAS PRENSAS PARA QUE MIDA LA
TEMPERATURA REAL DE CONGELACION DE LA BOLSA Y TAMBIEN
PONER LOS 3 CRIOVIALES EN EL CONGELADOR HASTA QUE TERMINE EL
PROCESO A LOS – 80°C
SACAR Y DESPEGAR CON CUIDADO LAS BOLSAS, COLOCARLAS EN LOS
CANESTER RESPECTIVOS JUNTO CON EL CRIOVIAL QUE DEBE ESTAR LO
MAS FRIO POSIBLE
EL CRIOVIAL DE CONTROL PONERLO EN LA CAJA DE CONTROLES
PONER EL CANESTER EN EL PORTACANESTER E INTRODUCIRLO EN EL
TANQUE DE CRIOPRESERVACION QUE ESTARÁ A – 196 °C
LLENAR LA HOJA DE REGISTRO CON TODOS LOS DATOS TANTO DE
UBICACIÓN EN EL TANQUE, BH, CONTEO CELULAR, CD34, VIAVILIDAD
NOMBRE Y EDAD DE PACIENTE DIAGNOSTICO PESO FECHA DE PROCESO
TAMBIEN SE DEBE TENER EL REGISTRO EN ELECTRONICO LA
UBICACIÓN EN EL TANQUE CON FECHA Y NOMBRE
Todos los datos que resultan de este procedimiento se concentran en la Bitácora CAL77-A, que se muestra a continuación:
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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Bitácora CAL-77-A HOJA DE REGISTRO DE CÉLULAS TALLO
CRIOPRESERVADAS
NUM DE UNIDAD ---------------
FECHA PROCESO: ___________________
TIPO DE TRANSPLANTE ------------------------------------------------NOMBRE DE RECEPTOR---------------------------------------------------------------- NUM. DE EXPEDIENTE ------------EDAD DE RECEPTOR-------------------------------------
PESO DE RECEPTOR---------------------------
NOMBRE DE DONADOR----------------------------------------------------
PARENTESCO-----------------------------
DIAGNOSTICO ----------------------------------------------------------------------
GRUPO SANGUINEO DONADOR------------------GRUPO SANGUINEO RECEPTOR--------------------------
SEROLOGIA
HCV--------------
AgSHB -----------------
HIV----------------
CMV-IgM-------------------
NAT: HIV:-_________
HCV:_____________
SIFILIS----------------- BRUCELLA-------CHAGAS----------HBV:__________
LEUCOCITOS TOTALES = WBC K/min L X 1000 X VOL DE BOLSA-------------------------------8
DOSIS DE LEUCOS = LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg DE DONADOR -----------------------------------CMN% = LINFOCITOS% + MONOCITOS % ----------------------------------------------------8
DOSIS DE CMN = CMN% X LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg / 100 --------------------------------------------
CAL-02-B
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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CD 34 Cel / µl -----------------------------------VIABILIDAD -------------------------------------
DOSIS DE CD 34 X DILUCION X 1000X VOL / PESO DE RECEPTOR =--------------------X 10
VOL STEM CELLS CONCENTRADAS EN mL. --------------------------------------------------------
VOL SOL. CRIOPRESERVADORA-------------------------------------------------------------------VOL TOTAL DE BOLSA CRIOPRESERVADA-----------------POSICION DE CRIOVIALES--------------------------------´POSICION DE BOLSA EN TANQUE ----------CULTIVO BACTERIOLOGICO:
HEMOCULTIVO PRE CRIOPRESERVACION----------------HEMOCUTIVO POS CRIOPRESERVANTES---------------------VIABILIDAD POS DMSO----------------VIABILIDAD POST- DESCONGELACION-------------------FECHA DE DESCONGELACION Y ENVIO: ______________
CD 34--------------------REALIZO ------------------------------
CAL-02-B
6
Banco de Sangre
Código: CAL- 77
ISBN: 978-968-9170-17-4
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PRODUCTO NO CONFORME
Producto no conforme debido a mala operación o mal manejo del producto durante el
proceso
 Producto entregado con bolsa rota, fuga en las líneas
 Mal sellado de líneas
 Células tallo para Trasplante Alogénico con células CD 34+ < 2 x 106 / Kg de
peso de receptor.
 Células tallo para Trasplante Autólogo con células CD 34+ < 1.5 x 106 / Kg
de peso del receptor
REGISTROS
Bitácora CAL-77-A hoja de registro de células tallo criopreservadas
CAL-02-B
NUM DE UNIDAD --------------FECHA
PROCESO:_______________________
TIPO DE TRANSPLANTE ------------------------------------------------NOMBRE DE RECEPTOR---------------------------------------------------------------- NUM. DE
EXPEDIENTE ------------EDAD DE RECEPTOR------------------------------------PESO DE
RECEPTOR--------------------------NOMBRE DE DONADOR----------------------------------------------------PARENTESCO---------------------------DIAGNOSTICO ---------------------------------------------------------------------GRUPO SANGUINEO DONADOR------------------GRUPO SANGUINEO RECEPTOR-------------------------SEROLOGIA
HCV--------------
AgSHB -----------------
SIFILIS----------------- BRUCELLA-------
HIV----------------
CMV-IgM-------------------
NAT: HIV:-_________
HCV:_____________
CHAGAS-----------
HBV:__________
LEUCOCITOS TOTALES = WBC K/min L X 1000 X VOL DE BOLSA------------------------------DOSIS DE LEUCOS = LEUCOCITOS TOTALES X 10⁸ / Kg DE DONADOR ----------------------------------CMN% = LINFOCITOS% + MONOCITOS % ----------------------------------------------------DOSIS DE CMN = CMN% X LEUCOCITOS TOTALES X 10 ⁸ / Kg / 100 -------------------------------------------
CAL-02-B
CD 34 Cel / µl -----------------------------------VIABILIDAD -------------------------------------
DOSIS DE CD 34 X DILUCION X 1000X VOL / PESO DE RECEPTOR =--------------------X
10⁶
VOL STEM CELLS CONCENTRADAS EN mL. -------------------------------------------------------
VOL SOL. CRIOPRESERVADORA-------------------------------------------------------------------VOL TOTAL DE BOLSA CRIOPRESERVADA-----------------POSICION DE CRIOVIALES--------------------------------´POSICION DE BOLSA EN TANQUE ----------CULTIVO BACTERIOLOGICO:
HEMOCULTIVO PRE CRIOPRESERVACION----------------HEMOCUTIVO POS CRIOPRESERVANTES---------------------VIABILIDAD POS DMSO----------------VIABILIDAD POST- DESCONGELACION-------------------DESCONGELACION Y ENVIO:______________
CD 34--------------------REALIZO ------------------------------
CAL-02-B
FECHA DE

16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968 - Instituto Nacional de Pediatría

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