Protocolo recomendado para tinción de proteínas con Coomassie

Comentarios

Transcripción

Protocolo recomendado para tinción de proteínas con Coomassie
Tinción con Coomassie Blue Coloidal
Recomendamos preparar 250 ml de cada solución utilizando reactivos de alta
calidad, libre de queratinas y contaminantes. Utilizar guantes y recipientes
limpios.
Solución Fijadora
30% (v/v) EtOH (también se puede utilizar 50%)
2% (v/v) ácido fosfórico (NB. De stock de 85%, ie 2.35 ml/100ml)
Solución de tinción
18% (v/v) MeOH (también se puede utilizar 34% (v/v)
17% (w/v)(NH4)2SO4
2% (v/v) ácido fosfórico
1- Fijar las proteínas dejando el gel en solución fijadora de 3 hs a overnight
2- Lavar 3 veces durante 30 minutos con H2O destilada
3- Agregar solución de tinción y dejar en agitación durante una hora.
4- Agregar 0.5 g/L Coomassie Blue G-250 en polvo al gel en la solución
teñidora. La solución no debe ponerse azul, ya que es una suspensión
coloidal. Agitar suavemente por 1-2 días. El recipiente debe estar tapado para
evitar evaporación y contaminación. El gel no debe teñirse, solo las proteínas.
5- Lavar el gel con H20 destilada.
6- Guardar el gel en H20 destilada. Cortar las bandas o spots lo antes posible.
7- Se puede realizar un desteñido con una solución 35%MeOH/2% ácido
acético.
Referencias
1. Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D. & Ehrhardt, W. (1988) Improved staining
of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear
background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and
R-250, Electrophoresis. 9, 255-62.
2. Neuhoff, V., Stamm, R., Pardowitz, I., Arold, N., Ehrhardt, W. & Taube, D.
(1990) Essential problems in quantification of proteins following colloidal
staining with coomassie brilliant blue dyes in polyacrylamide gels, and their
solution, Electrophoresis. 11, 101-17.

Documentos relacionados