Protocolo recomendado para tinción de proteínas con Coomassie

Tinción con Coomassie Blue Coloidal
Recomendamos preparar 250 ml de cada solución utilizando reactivos de alta
calidad, libre de queratinas y contaminantes. Utilizar guantes y recipientes
limpios.
Solución Fijadora
30% (v/v) EtOH (también se puede utilizar 50%)
2% (v/v) ácido fosfórico (NB. De stock de 85%, ie 2.35 ml/100ml)
Solución de tinción
18% (v/v) MeOH (también se puede utilizar 34% (v/v)
17% (w/v)(NH4)2SO4
2% (v/v) ácido fosfórico
1- Fijar las proteínas dejando el gel en solución fijadora de 3 hs a overnight
2- Lavar 3 veces durante 30 minutos con H2O destilada
3- Agregar solución de tinción y dejar en agitación durante una hora.
4- Agregar 0.5 g/L Coomassie Blue G-250 en polvo al gel en la solución
teñidora. La solución no debe ponerse azul, ya que es una suspensión
coloidal. Agitar suavemente por 1-2 días. El recipiente debe estar tapado para
evitar evaporación y contaminación. El gel no debe teñirse, solo las proteínas.
5- Lavar el gel con H20 destilada.
6- Guardar el gel en H20 destilada. Cortar las bandas o spots lo antes posible.
7- Se puede realizar un desteñido con una solución 35%MeOH/2% ácido
acético.
Referencias
1. Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D. & Ehrhardt, W. (1988) Improved staining
of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear
background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and
R-250, Electrophoresis. 9, 255-62.
2. Neuhoff, V., Stamm, R., Pardowitz, I., Arold, N., Ehrhardt, W. & Taube, D.
(1990) Essential problems in quantification of proteins following colloidal
staining with coomassie brilliant blue dyes in polyacrylamide gels, and their
solution, Electrophoresis. 11, 101-17.