Análisis CEDIA® Fenobarbital II

Análisis CEDIA® Fenobarbital II
Para uso diagnóstico in vitro
100003 (kits de 17 mL, 17 mL)
Precauciones y advertencias
Indicaciones
El análisis CEDIA® Fenobarbital II es un dispositivo médico de diagnóstico in vitro concebido
para cuantificar las concentraciones de fenobarbital en suero o plasma humanos.
Resumen y explicación del análisis
El fenobarbital se ha recetado frecuentemente para el tratamiento de la epilepsia, sobre todo
para evitar las crisis motrices o sensoriales focales y las del gran mal.1,2 Tras dosis orales de
entre 2 y 3 mg/kg, el fenobarbital se absorbe casi completamente y alcanza las concentraciones
máximas entre las 12 y las 18 horas.3 Aproximadamente entre un 40 y un 50% del fenobarbital
en circulación está unido a proteínas plasmáticas con constantes de asociación relativamente
bajas.4 La principal vía metabólica del fenobarbital es la hidroxilación del anillo fenilo a
p-hidroxifenobarbital, que no tiene actividad hipnótica y que posteriormente se excreta en
la orina a partes iguales en forma libre y en forma conjugada con ácido glucurónico.4 Por lo
general, las concentraciones de fenobarbital de 15-40 μg/mL se consideran dentro del rango
terapéutico para la máxima prevención de las crisis.5
La necesidad de la vigilancia de las concentraciones de fenobarbital se debe al estrecho rango
terapéutico y a la amplia variabilidad individual de las velocidades de absorción, el metabolismo
y el aclaramiento del fármaco.7 La toxicidad del tratamiento con fenobarbital incluye sedación,
nistagmo, ataxia, excitación paradójica, discrasia sanguínea (lo que incluye defectos de la
coagulación en recién nacidos de madres a las que se ha administrado el fármaco durante
el embarazo), cambios hepáticos no específicos, erupciones cutáneas (que incluyen formas
exfoliativas graves), osteomalacia, síndrome de hombro y mano, y coma.3,8,9,10,11 Combinada
con otra información clínica, la vigilancia de las concentraciones séricas o plasmáticas de
fenobarbital ofrece a los médicos un medio esencial para ajustar la dosificación y conseguir un
efecto terapéutico óptimo, al tiempo que se evitan las concentraciones tanto subterapéuticas
como nocivas del fármaco.
El análisis CEDIA Fenobarbital II emplea la tecnología del ADN recombinante (patente
estadounidense n.º 4708929) para producir un sistema único y homogéneo de
enzimoinmunoanálisis.12
Este análisis se basa en la enzima bacteriana -galactosidasa, que se ha preparado
genéticamente dividiéndola en dos fragmentos inactivos. Estos fragmentos se vuelven a
asociar espontáneamente para formar una enzima totalmente activa que, en el formato del
análisis, descompone un sustrato y genera un cambio de color que puede medirse mediante
espectrofotometría.
El análisis emplea el formato de desplazamiento para mejorar la sensibilidad y la precisión
mediante la reducción del ruido de fondo y el aumento concomitante de la relación señal-ruido.
En el análisis, el fenobarbital de la muestra desplaza una fracción del complejo conjugado de
DE del anticuerpo-fenobarbital. Posteriormente, se añade el reactivo de AE y se incuban los
reactantes para permitir la complementación con el conjugado DE libre-fenobarbital.
La cantidad de enzima activa formada y el cambio de absorbencia resultante son directamente
proporcionales a la cantidad de analito que contenga la muestra.12
Reactivos
1 Tampón de reconstitución de donante enzimático: contiene MOPS (ácido 3-[N-morfolino]
propanosulfónico), sales de tampón y conservante.
1a Reactivo de donante enzimático: contiene 38 μg/L de donante enzimático conjugado
con fenobarbital, 16,1 mg/L de anticuerpos monoclonales antifenobarbital de ratón,
1,64 g/L de rojo de clorofenol- -D-galactopiranósido, sales de tampón, y conservante.
2 Tampón de reconstitución de aceptor enzimático: contiene MOPS (tampón de ácido
3-[N-morfolino] propanosulfónico), sales de tampón, 0,945 g de anticuerpos antirratón
de cabra, estabilizantes y conservante.
2a Reactivo de aceptor enzimático: contiene 0,171 g/L de aceptor enzimático, agente
liberador, sales de tampón y conservante.
Material adicional requerido (pero no suministrado):
100007
Descripción del kit
Calibradores CEDIA Core TDM Multi-Cal
Control o controles comerciales: si desea información sobre el material de control
adecuado, consulte con el servicio de asistencia técnica.
Para uso diagnóstico in vitro solamente.
Los reactivos contienen menos de un 1% de azida sódica. Evite el contacto con la piel y
las mucosas. En caso de contacto, lave las áreas afectadas con abundante agua. En caso de
contacto con los ojos o de ingestión, consulte inmediatamente con un médico. La azida sódica
puede reaccionar con el plomo o el cobre de las cañerías y formar azidas metálicas que pueden
ser explosivas. Al desechar dichos reactivos, debe enjuagarse siempre con abundante agua
para evitar la acumulación de azidas. Limpie las superficies metálicas expuestas con hidróxido
sódico al 10%.
Este producto contiene productos químicos que el estado de California sabe causantes de
cáncer y defectos de nacimiento u otros daños relacionados con la reproducción.
Preparación y almacenamiento de los reactivos
Consulte las excepciones (si las hay) de las siguientes instrucciones en la hoja de aplicaciones.
Extraiga el kit del almacenamiento refrigerado (entre 2 y 8°C) inmediatamente antes de preparar
las soluciones.
Prepare las soluciones en el orden siguiente para reducir el riesgo de una posible contaminación:
Solución de donante enzimático R1: conecte el frasco 1a (reactivo de DE) al frasco 1 (tampón de
reconstitución de DE) utilizando uno de los adaptadores incluidos. Mezcle los líquidos mediante
una suave inversión y asegúrese de que todo el material liofilizado del frasco 1a pasa al frasco
1. Evite la formación de espuma. Separe el frasco 1a y el adaptador del frasco 1 y deséchelos.
Tape el frasco 1 y déjelo reposar unos 5 minutos a entre 15 y 25°C. Mezcle de nuevo. Anote la
fecha de la reconstitución en la etiqueta del frasco.
Solución de aceptor enzimático R2: conecte el frasco 2a (reactivo de AE) al frasco 2 (tampón de
reconstitución de AE) utilizando uno de los adaptadores incluidos. Mezcle los líquidos mediante
una suave inversión y asegúrese de que todo el material liofilizado del frasco 2a pasa al frasco
2. Evite la formación de espuma. Separe el frasco 2a y el adaptador del frasco 2 y deséchelos.
Tape el frasco 2 y déjelo reposar unos 5 minutos a entre 15 y 25°C. Mezcle de nuevo. Anote la
fecha de la reconstitución en la etiqueta del frasco.
NOTA 1: los componentes suministrados en este kit están concebidos para utilizarse como una
unidad integral. No mezcle componentes de lotes diferentes.
NOTA 2: para evitar la contaminación cruzada de los reactivos, no intercambie los tapones de
los frascos de reactivo. La solución R1 debe presentar un color amarillo naranja. Un color rojo
o rojo púrpura indica que el reactivo está contaminado y debe desecharse.
NOTA 3: antes de realizar el análisis, las soluciones R1 y R2 deben estar a la temperatura de
almacenamiento del compartimiento de reactivos del analizador. Para obtener más información,
consulte la hoja de aplicaciones específica del analizador.
NOTA 4: para garantizar la estabilidad de la solución de AE reconstituido, evite la exposición
continuada y prolongada a luz brillante.
Almacene los reactivos a entre 2 y 8°C. NO LOS CONGELE. Para determinar la estabilidad de los
componentes sin abrir, consulte la fecha de caducidad en las etiquetas de la caja o del frasco.
Solución R1: 60 días refrigerada en el analizador o a entre 2 y 8°C.
Solución R2: 60 días refrigerada en el analizador o a entre 2 y 8°C.
Recogida y manipulación de muestras
El análisis CEDIA Fenobarbital II requiere muestras de suero o plasma (heparina de sodio o litio;
ácido edético [EDTA] con sodio). Debe tenerse cuidado para mantener la integridad química de
la muestra de suero o plasma desde el momento de la recogida hasta el del análisis. Tape las
muestras, almacénelas a entre 2 y 8°C y analícelas en las 24 horas posteriores a la recogida. Si
el análisis no puede realizarse en las 24 horas posteriores a la recogida, o si la muestra debe
enviarse a algún sitio, tape la muestra y manténgala congelada. Almacene las muestras a -20°C
y analícelas en las 2 semanas posteriores. Para proteger la integridad de la muestra, no induzca
la formación de espuma y evite las congelaciones y descongelaciones repetidas. Centrifugue
las muestras que contengan partículas.
Algunas concentraciones terapéuticas del fármaco disminuyen cuando la muestra se almacena
en un tubo separador durante un período prolongado de tiempo (más de dos horas).13
Procedimiento del análisis
Para la realización de este análisis pueden utilizarse analizadores químicos capaces de
mantener una temperatura constante, pipetear muestras, mezclar reactivos, medir índices
enzimáticos y cronometrar la reacción de manera precisa. Con este análisis se emplea una
calibración de dos (2) puntos. Con los analizadores Hitachi, emplee el calibrador bajo CEDIA
Core TDM Multi-Cal como S1 y el calibrador alto CEDIA Core TDM Multi-Cal como S2. Para
obtener los ajustes exactos de los parámetros de aplicación del analizador, consulte la hoja
de aplicaciones específica de cada instrumento, que puede pedirse al servicio de asistencia
técnica al cliente de Microgenics.
Analizador Hitachi 911: si el analizador no lee el código de barras, puede introducirse
manualmente la secuencia numérica de la etiqueta del código de barras mediante el teclado.
Linealidad
Para evaluar la linealidad del análisis, se diluyó una muestra de alta concentración con el
calibrador bajo Core TDM Multi-Cal. A continuación se determinó el porcentaje de recuperación
dividiendo el valor obtenido con el análisis por el valor esperado.
Control de calidad y calibración
Las prácticas correctas de laboratorio recomiendan efectuar al menos dos niveles (puntos alto y
bajo de decisión médica) de control de calidad cada día que se analicen muestras de pacientes,
y cada vez que se realice una calibración. Vigile los valores de los controles para comprobar
si muestran tendencias o cambios. Si se detectan tendencias o cambios, o si el control no se
recupera dentro del rango especificado, revise todos los parámetros de funcionamiento. Si
desea más información y recomendaciones sobre el material de control adecuado, póngase en
contacto con el servicio de asistencia técnica de Microgenics. Todos los requisitos de control
de calidad deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de acreditación locales,
estatales o federales. NOTA: vuelva a evaluar los objetivos y los rangos de los controles cuando
cambie de lote de reactivo.
% Muestra de Alta
Concentración
Valor Esperado
(μg/mL)
Valor Obtenido
(μg/mL)
% Recuperación
100,0
-
84,6
-
90,0
78,4
75,6
96,4
80,0
69,8
66,0
94,6
70,0
61,1
60,4
98,8
Frecuencia de calibración. Se recomienda realizar una calibración de dos puntos:
•
tras cambiar el frasco de reactivo,
•
tras cambiar el lote de reactivo, y
•
cuando lo requieran los procedimientos de control de calidad.
60,0
52,5
52,9
101,9
50,0
43,8
44,6
101,9
40,0
35,2
34,7
98,8
30,0
26,5
26,6
100,4
Resultados y valores esperados
20,0
17,8
14,7
99,1
En la mayoría de los pacientes se obtiene una respuesta terapéutica con concentraciones
de fenobarbital que varían entre 15 y 40 μg/mL (entre 65 y 172 μmol/L).5 Algunos pacientes
pueden necesitar concentraciones de fenobarbital fuera de este rango para conseguir evitar
eficazmente las crisis. Por lo tanto, el rango terapéutico sólo se indica a modo de guía, y
los resultados de pacientes individuales deben interpretarse junto con otros síntomas y
antecedentes clínicos.
10,0
9,2
9,1
99,1
0,0
-
0,6
-
Recuperación
Para evaluar la recuperación del análisis, se añadió fenobarbital a una muestra con baja
concentración de fenobarbital y, a continuación, se diluyó con una muestra sin analito. A
continuación se determinó el porcentaje de recuperación dividiendo el valor obtenido con el
análisis por el valor esperado.
El análisis CEDIA Fenobarbital II está diseñado para cuantificar las concentraciones de
fenobarbital de entre 1,2 y 80 μg/mL (calibrador alto CEDIA TDM Multi-Cal) en muestras de
pacientes. Las muestras que obtengan resultados que estén fuera de este rango deben
clasificarse como > 80 μg/mL o < 1,2 μg/mL (límite de sensibilidad del análisis).
% Muestra de Alta
Concentración
En las muestras que obtengan valores de más de 80 μg/mL, también puede diluirse una parte de
la muestra con una parte de calibrador bajo Multi-Cal y volverse a analizar. El valor obtenido en
el segundo análisis debe hallarse de la forma siguiente:
Valor real = (2 x valor diluido) - valor del calibrador bajo Multi-Cal
Utilice el siguiente factor de conversión para convertir μg/ml a μmol/L:
μg/mL x 4,31 = μmol/L
μmol/L x 0,232 = μg/mL
Limitaciones
1. El rendimiento del análisis CEDIA Fenobarbital II sólo se ha determinado con suero y
plasma humanos tratados con heparina de sodio o litio, o con ácido edético (EDTA)
con sodio.
2. La incidencia de pacientes que tienen anticuerpos anti- -galactosidasa de E. coli
es bajísima. No obstante, con algunas muestras que contengan dichos anticuerpos
pueden obtenerse resultados artificialmente altos que no se ajusten al perfil clínico. En
esos casos, consulte con el servicio de asistencia técnica al cliente.
3. Este análisis se validó en analizadores con lavado de pocillos incorporado. Si el
analizador utilizado no tiene lavado de pocillos incorporado, póngase en contacto con
el representante local de Microgenics para obtener un método alternativo.
Valor Obtenido
(μg/mL)
% Recuperación
100,0
-
85,4
-
90,0
83,0
78,1
94,0
80,0
73,8
71,6
97,1
70,0
64,5
63,5
98,6
60,0
55,3
55,8
100,8
50,0
46,0
46,7
101,4
40,0
36,8
37,0
100,6
30,0
27,6
27,7
100,6
20,0
18,3
17,9
97,7
10,0
9,1
8,9
98,5
0,0
-
0,1
-
Especificidad
Se ha comprobado la reactividad cruzada de los siguientes compuestos en el análisis CEDIA
Fenobarbital II.
Concentración
Analizada (μg/mL)
% Reactividad Cruzada
Ácido 1,3-dimetilbarbitúrico
1.000
< 0,12
2-fenil-2-etilmalonamida
1.000
< 0,12
5-(p-hidroxifenil)-fenilhidantoína
1.000
< 0,12
Amitriptilina
1.000
< 0,12
Aporobarbital
1.000
5,3
Barbital
2.000
1,6
Butabarbital
1.000
2,3
Carbamazepina-10,11-epóxido
1.000
< 0,12
Carbamazepina
1.000
< 0,12
Clorazepato
2.000
< 0,12
Clorpromazina
1.000
< 0,12
Compuesto
Características específicas de rendimiento
A continuación se muestran los datos de rendimiento típicos obtenidos con el analizador Hitachi
911.13 Los resultados obtenidos en su laboratorio pueden ser distintos a estos datos.
Precisión
Los estudios de la precisión que emplearon reactivos envasados, sangre humana combinada
y sueros de control arrojaron los siguientes resultados en μg/mL con un analizador Hitachi
911 y siguiendo las pautas modificadas de la NCCLS para la realización de repeticiones de
experimentos:
Precisión Intraserial
Valor Esperado
(μg/mL)
Precisión Total
N
120
120
120
120
120
120
Diazepam
1.000
< 0,12
x¯ (μg/mL)
9,4
25,9
52,7
9,4
25,9
52,7
Etosuximida
1.000
< 0,12
SD (μg/mL)
0,2
0,5
0,9
0,5
1,0
1,9
Etotoína
1.000
< 0,12
%CV
2,1
1,9
1,7
5,3
3,8
Fenitoína
3,6
Comparación de métodos
Al comparar los resultados del análisis CEDIA Fenobarbital II (y) con los de un inmunoanálisis
de polarización de fluorescencia comercial (x), se obtuvo la siguiente correlación (en μg/mL):
Regresión de Deming
y = -2,01 + 1,08x
r = 0,988
Sy.x = 1,79
Regresión lineal
y = -1,69+1,06x
r = 0,988
Sy.x = 2,63
Número de muestras medidas: 126
Las concentraciones de la muestra estuvieron entre 1,7 y 73,3 μg/mL.
2
400
0,9
Fentobarbital
1.000
< 0,12
Glutetimida
1.000
< 0,12
Imipramina
2.000
< 0,12
Mefenitoína
1.000
< 0,12
Metsuximida
1.000
< 0,12
p-hidroxifenobarbital
2.000
< 0,12
Primidona
1.000
0,5
Prometazina
1.000
< 0,12
Secobarbital
2.000
2,2
Sultiame
1.000
< 0,12
Tiopental
2.000
0,7
Ácido valproico
2.000
0,7
No se observaron interferencias en el análisis CEDIA Fenobarbital II con:
Compuesto
Bilirrubina
Factor reumatoideo
Hemoglobina
Concentración
≤ 66 mg/dL
≤ 180 IU/mL
Compuesto
Proteinas totales
Triglicérido
Concentración
≤ 13 g/dL
≤ 1000 mg/dL
≤ 1000 mg/dL
El amobarbital (> 20%) y el mefobarbital (> 100%) muestran una interferencia significativa en el
análisis CEDIA Fenobarbital II.
Sensibilidad
La concentración mínima detectable del análisis CEDIA Fenobarbital II es de 1,2 μg/mL
(5,2 μmol/L). Este valor se determinó calculando la concentración de fenobarbital que provocaba
una respuesta igual a dos desviaciones estándar por encima de la del calibrador bajo Core
TDM Multi-Cal.
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Therapeutic Drugs by Barrier Gels in Serum Separator Blood Collection Tubes.
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13. Datos archivados en Microgenics Corporation, parte de Thermo Fisher Scientific.
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 EE.UU.
Servicio al cliente y de
asistencia técnica en EE.UU:
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CEDIA es una marca registrada de Roche Diagnostics.
10003630-4-ES
2014 08
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