LA IM MPORTAN CIA DEL CROM BANDEO MOSOMIC “C” EN E CO

LA IM MPORTAN CIA DEL CROM BANDEO MOSOMIC “C” EN E CO

6(4) 2011
LA IM
MPORTANCIA DEL BANDEO “C” EN EL
E ANALIS
SIS
MOSOMIC
CO
CROM
La Euucromatina y Heterocromaatina son lass
dos formas de la cromatina
c
preesente en loss
núcleos en inteerfase y se
s
llamaronn
inicialm
mente así porr su respuestaa diferencial a
la coloración.
La croomatina quee se presentta en mayorr
cantidaad es la Euccromatina (deel griego eu,
verdaddero),
se tiñe débilmente, no see
encuenntra condensaada y es muuy activa enn
cuanto a su exprresión génicca, pudiendoo
contenner
secuen
ncias
exttremadamentee
repetiddas; la cromaatina que tiññe de maneraa
más fuerte
fu
se llam
mó Heterocromatina (dell
griego hetero, difereente) y constaa de fibras dee
nucleoproteína muy
y condensadaas, casi de laa
mismaa manera que los cromosomass
mitóticcos. Esta a su vez puede seer constitutivaa
y facuultativa. La cantidad, estabilidad
e
y
conservvación
ev
volucionaria
de
laa
Heteroocromatina co
onstitutiva suggiere que estaa
debe teener un papel importante desde
d
el puntoo
de vista funcional.
La crom
matina constiituye al menoos el 20% dell
genom
ma humano y fue descrita por Heinz enn
1928. La metodolo
ogía citogenéética utilizadaa
para deeterminar su variación carracterística ess
la de Bandeo C,
C técnica que permitee
vés de unaa coloraciónn
reconoocer a trav
diferenncial, la ubiccación de hetterocromatinaa
en las regionees alrededoor de lass
constriicciones prim
marias de los cromosomas,,
siendo de mayor taamaño en los cromosomass
1, 9, 16
1 y brazo laargo del crom
mosoma Y(1).
En alggunas especcies de mam
míferos, estaa
región se ubica en lo
os telómeros y en regioness
interrsticiales
centrrómeros.
como
tambbién
en
l
los
La metodología para su obbservación fue
f
desccrita por Arrigghi y Hsu en 1971, en la que
q
someetieron las céélulas a un állcali como ess el
hidróóxido de soddio (NaOH) con
c el propóssito
de denaturar
d
el DNA crom
mosómico, paara
posteeriormente inncubarlo en una
u solución de
sal. En
E la metodología descritaa por Sumner en
19722, utilizo coomo álcali el hidróxido de
Bario (Ba[OH]2), mostrando similitudes
s
enntre
las dos
d metodologías, pero teniendo com
mo
ventaja esta últim
ma la de facilitar el conttrol
del proceso
p
de deenaturación.
Se han
h propuesto dos teorías para
p la presencia
de laas bandas C: En la primeraa se postula que
q
el tratamiento alcalino produce tootal
denaaturación dee los crom
mosomas y su
incubbación en la
l solución salina 2xSS
SC
calieente, promuevve la organizzación del DN
NA
altam
mente repetiitivo, y enn la segundda,
Holm
mquist dem
mostró que el DNA es
depuurinado parccialmente duurante el paaso
acidoo y denaturaddo durante el paso
p
alcalino.
Por autorradiograafía se pudo observar quee el
DNA
A es extraído selectivaamente de los
l
crom
mosomas perro una grann cantidad es
retennido en la Heterocromati
H
ina constitutiiva
(2).
La técnica de bandeo C es utilizaada
espeecialmente para
p
reconoocer varianntes
polim
mórficas de los
l cromosom
mas (aumentoo o
dism
minución de taamaño de las regiones Bannda
C poositivas), así como para la identificaciión
cromosom
o
de
mas
supernnumerarios
marccadores cromosómicos. Laas variacioness
1
REG-R
R01.001.5040-0023
CITOGENTICA
CLÍNICA
Círculo de calidad
Esta publicación se distribuirá
con cada entrega del informe
de
resultados
para
los
participantes en el programa
de Evaluación Externa del
Desempeño
del
Instituto
Nacional de Salud, para
citogenética clínica
Correspondencia:
AJ Bermúdez
Genética Salud Pública
Instituto Nacional de Salud
Avenida El dorado N° 51-20
Bogotá Colombia
Fax. 2207700 – 1265 Bogotá
[email protected]
Editor
Antonio José Bermúdez
Comité Editorial
Cecilia Crane
Diana P Martinez
Asistencia
Dayssy Durán
En el año 2006 el gobierno de
Colombia por medio del
decreto 2323 establece la
estructura de la Red Nacional
de Laboratorios. El Instituto
Nacional de Salud tiene la
responsabilidad de velar por la
organización de la red,
decreto 272 de 2004 y los
laboratorios de citogenética
hacen parte de la misma, por
su
importancia
en
el
diagnostico
especializado,
aplicado a la asistencia, a la
investigación y a la salud
pública. Con la filosofía de los
“Circulos de calidad”, esta
publicación tiene como fin
proveer información sobre
citogenética clínica y socializar
los resultados del programa
de evaluación externa del
desempeño.
ISSN:
CONTENIDO
1. La importancia del bandeo “c” en el
análisis cromosómico.
3. Resultados del ejercicio de evaluación
externa del desempeño cuarto ensayo
2011
9. Nota técnica:
10.Cronograma
extremas en su tamaño no afectan el fenotipo, y generalmente
se convierten en marcadores.
Existen dos variaciones de la técnica de Bandeo C, en la
primera las bandas Cd, descritas por Einberg en 1974, se
colorean dos cuerpos parecidos a manchas en la región de la
constricción primaria, los cuales son denominados kinetocoros,
o manchas centroméricas, y cada una de ellas representa
organelos asociados con las fibras del huso o al complejo
proteína y es resistente al álcali. La segunda corresponde a las
bandas G-11, estas revelan el segmento heterocromático del
cromosoma 9qh con tinción rojo púrpura y el resto de los
cromosomas se observan azul pálido. La región que más se
colorea es la 9qh, pero se puede observar coloración
yuxtacentromerica en los cromosomas 1q, 4p, 5q, 7p, 10q, 17p,
20q, Yqh y los centrómeros de los grupos G y D, siguiendo un
patrón de herencia mendeliana (3).
La aplicación de estas metodologías de bandeo C, Cd y G-11
constituyen una herramienta importante de diagnóstico y
definición citogenética, en casos en los que se presenten
observaciones de cambios en la posición y tamaño en la zona
pericentromérica cromosómica, modificaciones a nivel de tallos
y satélites de cromosomas acrocéntricos, o cambios en el
tamaño del cromosoma Y humano.
Referencias
1.Verma RS, Babu A. Human chromosomes. Principles and
Techniques. Second edition. New York: McGraw Hill;1994. p.78-80.
2.Barch M, Knutsen T, Spurbeck J. The AGT Cytogenetics
Laboratory Manual. Third
edition. Philadelphia-New York:
Lippincott-Raven; 1991. p283,364-365.
3.Miller. O, Therman. E. Human chromosomes. Fourth edition. New
York: Springer; 2000. p81-83.
Informado por:
Cecilia Crane. Grupo de Genética. Red Nacional de
Laboratorios, Instituto Nacional de Salud. Bogotá. 2207700 ext
1266, FAX 2207700 ext1265, [email protected]
REGISTRO DE ANOMALÍAS CONGENITAS POR
LABORATORIO
NOMBRE
NUMERO DE HISTORIA CLINICA
PROCEDENCIA (MUNICIPIO, DEPARTAMENTO)
IPS
CARIOTIPO
DIAGNOSTICO CLINICO
EDAD AL DIAGNOSTICO
Cuando encuentre un cariotipo anormal, reportelo, así contribuímos a
fortalecer el SIVIGILA para la Vigilancia de Anomalias Congênitas.
3
REG-R01.001.5040-023
Citogenética Clínica
Programa de Evaluación Externa del Desempeño
Evaluación externa de desempeño
Citogenética clínica
Informe del cuarto ensayo de 2011
INTRODUCCIÓN
Informe correspondiente al decimoquinto ensayo, realizado con muestra de sangre para incluir en
el proceso rutinario del laboratorio, correspondiente al cuarto ensayo del periodo 2011. Contiene
el análisis de resultados de 11 laboratorios que cumplieron con el procedimiento solicitado.
MATERIALES DE CONTROL DE CALIDAD
Se utilizó la metodología de muestra individual, para evaluación de producto intermedio y resultado
final. Se solicitó que enviaran dos láminas del cultivo procesado, y el informe de resultado de
acuerdo con los procedimientos de rutina. En el laboratorio de referencia se realizaron las lecturas
por dos observadores (duplicado) y los resultados se contrastaron con los remitidos por el
laboratorio participante.
En las láminas se evalúa el desempeño técnico, teniendo en cuenta las características de calidad
establecidas en cuanto a número de bandas, entrecruzamientos, resolución y oportunidad en la
entrega. El desempeño analítico y el desempeño interpretativo se evaluaron de acuerdo con el
resultado obtenido del análisis de la muestra, el informe con la evidencia y los requisitos
establecidos de calidad.
La evaluación se realizó con el acompañamiento del grupo de expertos. Se pueden hacer las
reclamaciones que se considere pertinente, dentro del plazo de una semana después de recibido el
informe. También se realizará una reunión para discutir resultados, en el Instituto Nacional de
Salud.
RESULTADOS
A partir de los resultados de los laboratorios, se construyó una base de datos en la que se utiliza el
código asignado. (Tabla 1). La revisión de resultados y la calificación fue realizada siguiendo las
recomendaciones del grupo de expertos, de las cuales se dejó constancia en acta.
Se tuvieron en cuenta los tres aspectos, de desempeño técnico, analítico e interpretativo. El
desempeño técnico debe ser de 6 puntos para el 100% (Tabla 2), lo cuál se logra al cumplir con los
mínimos recomendados para cada parámetro. El desempeño técnico representa el 40% de la
calificación final.
El desempeño analítico esperado es de 18 puntos. De este valor se resta el puntaje asignado
cuando se evidencia algún error y el puntaje obtenido se expresa en porcentaje. Igualmente se
maneja el desempeño interpretativo, con esperado es de 15 puntos, valor del cuál se resta un
puntaje cuando se evidencia error y se expresa en porcentaje. Cada uno representa el 30% de la
calificación final.
Para obtener la calificación, frente a cada parámetro se estableció un puntaje único, que se obtiene
cuando se cumple la condición especificada, sin valores intermedios. El puntaje esperado se
encuentra en la primera columna de la tabla dos y el valor obtenido para cada laboratorio
participante en la columna correspondiente a su código.
3
REG-R01.001.5040-023
Para el porcentaje final se aplica la formula:
% Final = Desempeño Técnico % x0.4 + Desempeño Analítico% x0.3 + Desempeño Interpretativo % x 0.3
Por ejemplo:
•
•
•
Un laboratorio obtiene 100% en el desempeño técnico por cumplir con todos los requisitos
de calidad
Obtiene 4 puntos en el desempeño analítico por tener un error en la nomenclatura ISCN y
un error en la identificación de cromosomas normales. Esto representa que perdió el 22%,
por eso el puntaje logrado es 78%.
Obtiene 100% en el desempeño interpretativo porque no tuvo errores.
93 =
100x0.4 + 78x0.3 +100x0.3
La escala de interpretación se estableció por el grupo de expertos, con base en la gravedad del
problema. Solamente se pueden aceptar errores que no afecten la interpretación clínica del
resultado, pero de ninguna manera errores con equivocación grave.
Rango
100%
=90, <100
>70, <90
=70 o menos
0
Valoración
Excelencia
Aceptable
Aceptable para revisión
No aceptable
No participa
En la tabla uno se presentan los resultados de todos los participantes por códigos. En la tabla dos,
se muestran los resultados según cada una de las áreas de desempeño, y el indicador de
porcentaje final obtenido. En la tabla tres se establece un ordenamiento del primer lugar hacia
abajo, independientemente de que se logre una calificación final aceptable.
En la gráfica uno se presenta en gráfica de dispersión de puntos para cada laboratorio,
marcadores en cada área de desempeño en el % correspondiente.
los
A cada laboratorio se le envía un informe individual con la secuencia temporal de desempeño en
los ensayos a la fecha y en el recuadro la calificación actual. También se adjuntan las
observaciones para seguimiento.
.
INFORMACIÓN Y MATERIAL SOLICITADO:
En este ensayo se evaluara material de rutina en proceso, propio de cada laboratorio, que permita
observar la calidad técnica del trabajo citogenético. Para este fin se solicitan dos láminas
bandeadas y una copia del resultado emitido al paciente; el criterio de selección será establecido
mediante comunicación telefónica con cada laboratorio.
RESULTADO ESPERADO:
Se establece consenso del análisis pareado en el laboratorio de referencia y se contrasta con el
informe del laboratorio participante.
4
REG-R01.001.5040-023
Tabla 1. Resultados por laboratorio según código
Código
Resultado por laboratorio
Laboratorio
2230609
2430905
2570604
2860806
2870631
2880714
3240603
3441016
3460707
4580602
4890610
5420617
7460611
7850715
8320601
NO ENVIA MATERIAL
46,XY[25]
46,XX[25]
NO ENVIA MATERIAL
46,XY[50]
46,XX[25]
NO ENVIA MATERIAL
NO ENVIA MATERIAL
NO ENVIA MATERIAL
46,XY[25]
Obs: 21ps+
46, XY[50]
NO ENVIA MATERIAL
46,XY[25]
46,XY[25]
8370630
8470613
8620608
46,XY[25]
46,XY[25]
Resultado INS
2 lecturas
2 lecturas
2 lecturas-Una lámina Giemsa
2 lecturas
2 lecturas
2 lecturas-18 metafases
2 lecturas
46,XY[100]
Obs: 5 metafases fra(X)(q27)
2 lecturas
2 lecturas
5
REG-R01.001.5040-023
Tabla 2.- Indicadores por área de desempeño, según código del laboratorio participante
DESEMPEÑO TÉCNICO
Cumple
No cumple
Número de bandas mínimo para el tipo de muestra.
1
0
1
1
0
1
1
1
0
0
0
1
1
Número de solapamientos máximo de uno.
Calidad de las bandas en definición.
1
1
0
0
0
1
1
1
0
0
1
1
1
1
1
1
1
0
0
0
1
0
0
1
1
1
Número mínimo de células examinadas según el caso
1
0
1
1
0
1
1
1
1
0
0
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
Suma
%
5
83
Tinciones o bandeamientos aplicados según
indicación.
Oportunidad de entrega de resultados en el plazo
establecido
DESEMPEÑO ANALÍTICO
Sin error
Nomenclatura ISCN con errores menores que no
afecten la interpretación
Nomenclatura ISCN con error significativo, como
orden incorrecto de descripción de anomalías
1
1
1
1
6
100
2
33
6
100
0
1
1
0
0
0
6
100
1
0
0
0
6
100
0
0
0
1
1
4
67
2
33
1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
3
3
1
1
3
50
0
0
5
83
6
100
0
0
0
0
0
0
0
0
100
0
0
0
100
0
100
0
0
0
0
0
2
3
Nomenclatura ISCN con errores que afectan la
interpretación clínica
Asignación errónea de puntos de ruptura
Falla en la obtención del cariotipo correcto
4
5
3
Suma
%
DESEMPEÑO INTERPRETATIVO
0
0
Puntaje
asignado
0
Identificación incorrecta de los cromosomas normales
Sin error
Carece de alguno de los elementos establecidos en
la norma técnica Colombiana[1], sin afectar la
interpretación.
Carece de evidencia documental del cariotipo
Falla para proveer una correcta interpretación clínica
del hallazgo citogenético.
3441016
2430905
7850715
3460707
2880714
2860806
4670632
4580602
2870631
8720612
8470613
8370630
8620608
7460611
3240603
2230609
4890610
5420617
2570604
4320633
15
8320601
Código
Ensayo
0
100
0
0
Puntaje
asignado
0
0
100
4
78
0
0
100
0
0
0
100
0
0
0
100
0
0
0
100
5
9
50
0
0
0
0
0
0
0
0
0
1
1
1
1
3
3
4
3
3
Falla en la inclusión de recomendaciones apropiadas
con base al resultado, como requerimiento de otra
muestra, muestra de confirmación, muestras de
parientes y otras pertinentes.
2
2
Falla en la interpretación correcta del cariotipo
5
3
3
3
2
5
5
Suma
%
10
33
0
0
0
100
3
80
0
100
0
0
3
80
0
0
1
93
0
0
6
60
9
40
0
0
0
0
0
0
0
0
0
100
0
0
0
100
3
80
0
0
% final
73
0
100
61
100
0
94
0
98
0
75
40
0
0
0
0
80
0
93
94
0
6
REG-R01.001.5040-023
Tabla 3.- Indicadores por área de desempeño y posición relativa ocupada en el ejercicio según el % final.
Posición
relativa
Código
Desempeño
Técnico
Desempeño
Analítico
Desempeño
Interpretativo
%
final
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
2570604
4890610
8620608
3240603
2430905
7850715
2880714
8470613
8320601
5420617
8720612
4320633
2230609
7460611
8370630
2870631
4580602
4670632
2860806
3460707
3441016
100
100
100
100
100
83
50
67
83
33
33
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
100
100
100
100
100
100
100
100
100
78
50
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
100
100
93
80
80
100
100
60
33
80
40
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
100
100
98
94
94
93
80
75
73
61
40
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
7
REG-R01.001.5040-023
Grafica 1
Gráfico posicional por códigos
cuarto ensayo, ejercicio 2011 - EEDDCARIO
120
%
100
80
60
40
20
Desempeño Técnico
Desempeño Analitico
Desempeño Interpretativo
3441016
3460707
2860806
4670632
4580602
2870631
8370630
7460611
2230609
4320633
8720612
5420617
8320601
8470613
2880714
7850715
2430905
3240603
8620608
4890610
2570604
0
% final
Gráfica comparativa entre los laboratorios, por código, según los indicadores por área de
desempeño. Para cada laboratorio se ubica en su línea de abscisa cada uno de los cuatro
indicadores. La situación ideal es lograr 100% en el desempeño final.
8
REG-R01.001.5040-023
NOTA TECNICA
SELECCIÓN DE SUPLEMENTOS QUE PERMITEN OPTIMIZAR LA CANTIDAD
Y CALIDAD DE METAFASES OBTENIDAS EN CULTIVO
Dentro de la práctica de laboratorio deben seleccionarse medios de cultivo que optimicen, a
través de su formulación, el número de células en división dentro del mismo. Los medios
empleados para cultivo de linfocitos tienen en su composición aminoácidos, azucares,
polisacáridos, vitaminas, micro elementos y otros componentes que facilitan el crecimiento
y división celular. Sin embargo, este requerimiento no es suficiente y existen diferentes
suplementos que optimizan esta condición, siendo los más empleados el suero fetal bovino
y la L-glutamina. El suero fetal bovino contiene factores de crecimiento fetal y varías
proteínas que estimulan las poblaciones linfocitarias des diferenciadas para su división; éste
componente puede suplementarse en proporción del 5 al 30%(1), cantidad qué debe ser
estandarizada por cada laboratorio para asegurar un óptimo índice mitótico. Por otra parte,
la L-glutamina, aminoácido esencial inestable en medio líquido, se convierte en Dglutamina después de 3 semanas a 4°C, con lo que su utilización se imposibilita por parte
de las células. Es por esta razón, que suplementar los cultivos al momento de la siembra
con este aminoácido a razón de 200mM, puede mejorar la cantidad de metafases en un
cultivo.
1.- Rooney D.E. Human Cytogenetics: constitutional analysis. A practical approach. London:
Oxford University Press, 2001. p. 35.
Grupo asesor de expertos para el cuarto ensayo ejercicio 2011
NOMBRES Y APELLIDOS
CORREO ELECTRONICO
OLGA MARIA MORENO
GLORIA OSORIO
JAVIER LÓPEZ R
Universidad Javeriana
Universidad Javeriana
Asociación Colombiana de
Genética
9
[email protected]
[email protected]
[email protected]
REG-R01.001.5040-023
Instituto
Nacional de
Salud
PROGRAMA DE ACTIVIDADES DE ____________________________________________________
PROCESO PLANEACION INSTITUCIONAL
ENERO
ACTIVIDAD A DESARROLLAR
Semana
Inicio
Semana
Fin
Responsable
11
11
Laboratorio
Genética INS
11
11
Laboratorio
Genética INS
14
14
Laboratorios
participantes
17
17
Laboratorio
Genética INS
Reunión de citogenética y vigilancia de anomalías
congénitas
17
17
Laboratorio
Genética INS
Caso extra 2012-1
18
18
21
21
24
24
25
25
Laboratorio
Genética INS
Envio informe de analisis de resultados segundo ensayo
2012
27
27
Laboratorio
Genética INS
Caso extra 2012-2
30
30
Laboratorio
Genética INS
33
33
Laboratorio
Genética INS
35
35
Laboratorio
Genética INS
36
36
Laboratorios
participantes
40
40
Laboratorio
Genética INS
Caso extra 2012-3
40
40
Reunión Virtual Casos Extra 2012
42
42
Envio cuarto ensayo 2012
44
44
Recepción resultados cuarto ensayo 2012
47
47
49
49
Caso extra 2012-4
49
49
Consolidación informe 2012
52
52
1
52
Envio informe de analisis de resultados cuarto ensayo 2011
Envio primer ensayo 2012
Recepción resultados primer ensayo 2012
Envio informe de analisis de resultados primer ensayo 2012
Envio segundo ensayo 2012
Recepción resultados segundo ensayo 2012
Reunión Virtual Análisis Casos Extra 2012
Envio tercer ensayo 2012
TALLER ANUAL PROGRAMA EEDDCARIO
Recepción resultados tercer ensayo 2012
Envio informe de analisis de resultados tercer ensayo 2012
Envio informe de analisis de resultados cuarto ensayo 2012
Inscripciones año 2012
ELABORÓ: DIANA PATRICIA MARTÍNEZ H
Versión: 00
Código: REG-D02103-0001
1
2
3
FEBRERO
4
5
6
7
MARZO
8
9
10
11
12
12
12
ABRIL
13
14
15
16
MAYO
17
18
19
20
JUNIO
21
22
23
24
25
JULIO
26
27
28
29
Fecha próxima revisión: 2011/04
AGOSTO
30
31
32
33
34
SEPTIEMBRE
35
36
37
38
39
41
42
NOVIEMBRE
43
44
45
46
47
DICIEMBRE
48
49
50
51
X
X
52
3
25
26
Laboratorio
Genética INS
Laboratorio
Genética INS
3
24
Laboratorios
participantes
14
20
5
26
13
30
3
1
Laboratorio
Genética INS
Laboratorio
Genética INS
Laboratorio
Genética INS
Laboratorios
participantes
Laboratorio
Genética INS
Laboratorio
Genética INS
Laboratorio
Genética INS
Laboratorios
participantes
OCTUBRE
40
4
16
29
20
7
10
28
X
X
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X
X
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Marzo 1 de 2012
FECHA APROBACION
APROBÓ: ANTONIO JOSÉ BERMUDEZ F
10
REG-R01.001.5040-023