Avances en el diagnóstico molecular de distemper y

Avances en el diagnóstico molecular de distemper y

Avances en el diagnóstico molecular de distemper y parvovirus !
canino en Colombia!
!
Paola Barato1, Ricardo Piñeros1,2, Cesar Díaz2, Carlos Venegas2, Henry Benavides3, !
Felipe Pérez-Benavides3, Miguel Montufar1 y Elisabete Martins1*!
1
Corporación Patología Veterinaria, CORPAVET!
2
Programa de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de La Salle!
3
Clínica Veterinaria Dover!
[email protected] !
!
!
INTRODUCCIÓN!
!
RESULTADOS!
!
El diagnóstico molecular ha permitido la detección precoz, rápida, sensible y
!
específica del ARN o ADN del virus de distemper y parvovirus canino,
!
respectivamente. Por el contrario, las limitaciones de las pruebas rápidas de
!
Distemper!
!
153!
!
Parvovirus!
!
15!
detección de antígeno o anticuerpo para el diagnóstico temprano de infección,
reducen la oportunidad de tratamiento y sobrevida de los pacientes. Es por
ello que la implementación y disponibilidad de pruebas moleculares para estos
VIRUS!
que mejoran el pronóstico del caso.!
!
!
!
presentación de casos clínicos de caninos vacunados contra distemper y
parvovirus canino, generó una alerta sobre la emergencia de nuevos genotipos
virales no cubiertos por los planes de vacunación vigentes y que no habían
sido identificados
previamente1,2.!
!
gen de la nucleocápside del virus del distemper canino. Además, implementó
!
un PCR para la detección del gen de la cápside del parvovirus canino que está
!
en proceso de validación.!
!
!
!Parvovirus!
!
MATERIALES Y MÉTODOS!
Muestras de caninos dependiendo del cuadro clínico!
!
!
!
!
100
(65%)!
10 !
(67%)!
22/25
(88%)!
5/5!
(100%)!
15/53!
(28%)!
25/53!
(47%)!
2/5!
(40%)!
Extracción de ácidos nucleicos:!
!
-  FFPE RNA/DNA Purification kit, Norgen!
-  GeneJET Viral DNA and RNA purification kit, Thermo Scientific!
-  Stool DNA isolation kit, Norgen!
!
!
53 !
(35%)!
5!
(33%)!
Estadío de la enfermedad!
0!
Muestra!
Fases tempranas de infección
Sangre en EDTA (1ml)!
(fiebre, letargia, anorexia) o
contacto con animales enfermos!
Hisopo conjuntival en tubo
seco estéril !
Fase respiratoria!
(hisopo estéril poliestireno)!
Orina (5ml)!
!
Fase nerviosa!
LCR (1ml)!
Orina (5ml)!
!
!
Fase digestiva!
!
Sistémica!
Diarrea!
!
!
Orina (5ml)!
Sangre (1ml)!
!
!
Materia fecal (1g)!
!
!
!
DISCUSIÓN!
!
!
-  Parvovirus canino (n=15): materia fecal. Caninos con !
resultado positivo por prueba rápida de detección de !
antígeno IDEXX CPV (n=5)!
!
Positivos
con
vacunación!
!
tejidos. Caninos con resultado positivo por prueba rápida de detección de
antígeno Anigen CDV (n=25).!
!
!
!
0344/2013), implementó y validó un RT-PCR y qRT-PCR para la detección del
!-  Distemper canino (n=153): sangre, orina, hisopado conjuntival, LCR y/o
!
!
!
!
!
!
La Salle y la Clínica Veterinaria Dover, con el apoyo de COLCIENCIAS (Cont.
!
!
!
Teniendo en cuenta estos antecedentes la alianza CORPAVET, Universidad de
!
!
Virus!
!
Distemper!
!
!
Positivos sin
signos
clínicos!
Muestra depende de patogenesis de la enfermedad!
dos agentes virales, permite la toma de decisiones terapéuticas tempranas
Adicionalmente, en Colombia como en otros países suramericanos, la
Negativos! Positivos!
No
muestras!
PCR!
PCR!
Positivos!
prueba
rápida!
!
!
•  Diagnóstico molecular para distemper y parvovirus caninos disponible!
•  Muestra depende de patogenesis de la enfermedad!
•  Sobrediagnóstico de distemper canino por signos clínicos. Hacer
diferenciales con otros agentes que inducen signos respiratorios
(Adenovirus canino tipo 2, herpesvirus canino 1, influenza canina, !
B. bronchiseptica, P. multocida, K. pneumoniae, Streptococcus sp.),
digestivos (parvovirus, coronavirus, Salmonella sp., E. coli, C. perfringens
tipo A y E, C. freundii, parasitismo gastrointestinal severo) y nerviosos
(Toxoplasma sp., Neospora sp., deficiencia tiamina)5!
!
•  Detección de caninos virémicos sin signos clínicos, tratamiento temprano
con rFeIFNω reduce mortalidad y severidad de sintomatología6,7!
•  Casos clínicos de caninos vacunados, emergencia de genotipos regionales
como SA4 para distemper1,2 o ingreso de CPV-2c para parvovirus canino8!
•  Posteriores análisis de epidemiología molecular à Red suramericana de
estudio de enfermedades virales que afectan carnívoros y canes domésticos
!
!
!
!
!
!
!
!
!
!
REFERENCIAS!
Amplificación:!
!
-  RT-PCR para detección del gen N del virus de distemper canino3!
-  qRT-PCR para detección del gen N del virus del distemper canino !
(Primer desingTM Genesig Kit for CDV genomes)!
-  PCR para detección del gen de la cápside del parvovirus canino4!
!
!
2. Espinal M.A., Díaz F.J., Ruiz-Saenz J. (2014) Phylogenetic evidence of a new canine distemper virus lineage
among domestic dogs in Colombia, South America. Veterinary Microbiology, 172:168!
3. Frisk A.L., Köning M., Moritz A., Baumgärtner W. (1999) Detection of canine distemper virus nucleoprotein
Journal of Clinical Microbiology, 37:3634!
4. Desario C., Decaro N., Campolo M., Cavalli A., Cirone F., Elia G., Martella V., Lorusso E., Camero M.,
Buonavoglia (2005) Canine parvovirus infection: Which diagnostic test for virus? Journal of Virological Methods,
!
!
South America. Brisith Journal of Virology, 1:48!
RNA by reverse transcription-PCR using serum, whole blood, and cerebrospinal fluid from dogs with distemper.
!
!
1. Panzera Y., Sarute N., Carrau L., Aldaz J., Perez R. (2014) Genetic diversity of canine distemper virus in
Análisis de la información:!
!
- 
- 
- 
- 
clínico!
Definición de tipo de muestra dependiendo cuadro
Comparación de resultados con otras pruebas diagnósticas!
Banco de amplificados positivos para análisis filogenéticos!
Análisis epidemiológico à prevalencia específica!
126:179 !
5. MacGavin M.D., Zachary J.F. (2007) Pathologic basis of veterinary disease. Mosby-Elsevier Inc., pags.
378-390, 541-546, 894-896.!
6. Lorenzana LC. (2007) Actualización en la terapéutica de moquillos canino, uso de interferon recombinante
felino. Boletín Virbac al día, No. 11!
7. Goddard A., Leisesitz A.L. (2010) Canine parvovirus. Vet Clin Small Animal, 40:1041!
8. Perez R., Francia L., Romero V., Maya L., Lopez I., Hernandez M. (2007) First detection of canine parvovirus
type 2C in South America. Veterinary Microbiology, 124:147!
27/05/2015!