VIASURE. Catálogo general (Español 875 Kb)

VIASURE. Catálogo general (Español 875 Kb)

Compañía
CerTest Biotec es una empresa enfocada en el desarrollo
y fabricación de productos de diagnóstico in vitro con
aplicaciones humanas.
Fundada en 2002, su éxito está asociado con fuerza a tres
pilares básicos: recursos humanos, innovación y orientación
al cliente.
Estas condiciones nos permiten suministrar productos de
diagnóstico clínico con un alto grado de calidad, utilizando
VROXFLRQHV ÁH[LEOHV SDUD JDUDQWL]DU OD WRWDO VDWLVIDFFLyQ GH
nuestros clientes.
Estamos respaldados por nuestra amplia red de distribuidores
en más de 120 países por los 5 continentes.
VIASURE Real Time PCR Detection Kits
Diagnóstico
molecular
La tecnología de qPCR -o PCR a tiempo real- se ha
convertido en los últimos años en el método diagnóstico
PiVGHPDQGDGRSRUVXDOWDVHQVLELOLGDGÀDELOLGDG\EXHQD
reproducibilidad.
3&5 D WLHPSR UHDO SHUPLWH LGHQWLÀFDU ORV SDWyJHQRV
causantes de enfermedades infecciosas mediante el uso
GHFHEDGRUHVHVSHFtÀFRV\XQDVRQGDÁXRUHVFHQWHTXHVH
KLEULGDDXQDUHJLyQHVSHFtÀFDGHOJHQGLDQD
VS - ATV113
ATV113H
código
de producto
placa
ó
tira
VIASURE
bajo (L) / a
alto (H)
SHUÀO
VIASURE® ha sido creado con el propósito de ofrecer, al
usuario de Diagnóstico Molecular, kits de PCR a tiempo real
para la detección de patógenos de interés. VIASURE® ofrece
OD Pi[LPD ÁH[LELOLGDG \ FRPSDWLELOLGDG FRQ ORV SULQFLSDOHV
termocicladores de sistema abierto, así como la última
tecnología para la estabilización de productos.
IC
La gama VIASURE® Real Time PCR Detection Kits se basa en
la actividad 5’ exonucleasa de la Taq DNA polimerasa.
Muestra negativa: sin curva de
DPSOLÀFDFLyQ
*UiÀFDGH
DPSOLÀFDFLyQ
IC
Muestra positiva: curva de
DPSOLÀFDFLyQ
y Control Interno (IC).
Catálogo General
Para llevar a cabo esta reacción, son necesarios dos
cebadores y una sonda complementarios a la secuencia a
DPSOLÀFDU
&RPR UHVXOWDGR GH OD DPSOLÀFDFLyQ VH JHQHUD XQ
LQFUHPHQWR HQ OD VHxDO ÁXRUHVFHQWH SURSRUFLRQDO D OD
cantidad de la secuencia diana presente en la muestra, que
puede ser monitorizada con un amplio rango de equipos de
PCR a tiempo real.
VIASURE® Real Time PCR Detection Kit contiene en cada
pocillo todos los componentes necesarios en formato
estabilizado para realizar el ensayo PCR a tiempo real, lo
que permite su envío y almacenamiento a temperatura
ambiente.
Metodología
Determinar y separar el número de reacciones necesarias incluyendo las muestras y los controles.
En cada serie de muestras a analizar se deben incluir un control positivo y uno negativo. Retirar el
aluminio protector de las placas o tiras.
Paso 1
Paso 2
Paso 3
Paso 4
Añadir 15 Ǎl de
Añadir 5 ǍL de:
Colocar las tiras
Interpretación
solución tampón
· Muestra de DNA/RNA,
en el termociclador
de resultados.
en cada pocillo
· ó Control Positivo,
e iniciar el protocolo
para la rehidratación.
· ó Control Negativo.
HVSHFtÀFR
Componentes
Reactivo / Material
Descripción
Cantidad
8-well strips
Una mezcla de enzimas, cebadores-sondas, tampón, dNTPs,
estabilizadores y Control interno en formato estabilizado
6/12 x tiras
de 8 pocillos
96-well plate
Una mezcla de enzimas, cebadores-sondas, tampón, dNTPs,
estabilizadores y Control interno en formato estabilizado
1 placa
Rehydration Buffer
Solución para la reconstitución del producto estabilizado
1 vial x 1,8 mL
Positive Control
'1$F'1$VLQWpWLFROLRÀOL]DGRQRLQIHFFLRVR
1 vial
Negative Control
Control Negativo
1 vial x 1 mL
Water RNAse/DNAse
free
Agua libre de RNAsa/DNAsa
1 vial x 1 mL
Tear-off 8-cap strips
Tapones ópticos para sellar los pocillos durante el ciclo
térmico
6/12 x tiras de 8
tapones
Shell Frame Grid
Adaptador de la placa
1ó2
Componentes
incluidos en cada
VIASURE Real Time
PCR Detection Kit.
Referencias
Referencia
Descripción
VS - XXX106L
VIASURE (nombre del producto5HDO7LPH3&5'HWHFWLRQ.LW[ZHOOVWULSVORZSURÀOH
VS - XXX106H
VIASURE (nombre del producto5HDO7LPH3&5'HWHFWLRQ.LW[ZHOOVWULSVKLJKSURÀOH
VS - XXX112L
VIASURE (nombre del producto5HDO7LPH3&5'HWHFWLRQ.LW[ZHOOVWULSVORZSURÀOH
VS - XXX112H
VIASURE (nombre del producto5HDO7LPH3&5'HWHFWLRQ.LW[ZHOOVWULSVKLJKSURÀOH
VS - XXX113L
VIASURE (nombre del producto5HDO7LPH3&5'HWHFWLRQ.LWZHOOSODWHORZSURÀOH
VS - XXX113H
VIASURE (nombre del producto5HDO7LPH3&5'HWHFWLRQ.LWZHOOSODWHKLJKSURÀOH
VIASURE Real Time PCR Detection Kits
Cambiar “XXX” por el
código de referencia
del kit deseado.
Ventajas
\EHQHÀFLRV
‡ Kits “Listos-para-usar”. Contienen todos los componentes necesarios para el ensayo.
‡ Transporte y almacenamiento a temperatura ambiente.
‡ Caducidad: 24 meses -en toda nuestra gama de productos qPCR-.
‡ Fácil de usar. Reducción del número de manipulaciones y, por tanto, de la posibilidad de error.
‡ $OWDVHQVLELOLGDGHVSHFLÀFLGDG\UHSURGXFLELOLGDG3HUPLWHODLGHQWLÀFDFLyQGHSDWyJHQRVHQ
etapas tempranas de la infección.
‡ Versátil. Es posible analizar desde 1 a 96 muestras por ensayo.
‡ Flexible. Adaptable a un amplio rango de termocicladores del mercado.
‡ Evaluado y validado según norma ISO 13485 y marcado CE.
Compatibilidades
7HUPRFLFODGRUHVFRQEORTXHGHEDMRSHUÀO
7HUPRFLFODGRUHVFRQEORTXHGHDOWRSHUÀO
Fabricante
Modelo
Fabricante
Modelo
Qiagen
Rotor-Gene® Q*
Qiagen
Rotor-Gene® Q*
Cepheid
SmartCycler® *
Cepheid
SmartCycler® *
DNA-Technology
DTprime Real-time Detection Thermal Cycler
DNA-Technology
DTprime Real-time Detection Thermal Cycler
DTlite Real-time PCR System
DNA-Technology
DTlite Real-time PCR System
DNA-Technology
Applied Biosystems
7500 Fast Real-time PCR System
Applied Biosystems
7300 Real-time PCR System
Applied Biosystems
7500 Fast Dx Real-Time PCR System
Applied Biosystems
7500 Real-Time PCR System
Applied Biosystems
QuantStudioTM 12K Flex 96-well Fast
Applied Biosystems
7900 HT Real-Time PCR System
Applied Biosystems
QuantStudioTM 6 Flex 96-well Fast
Applied Biosystems
ABI PRISM 7000
Applied Biosystems
QuantStudioTM 7 Flex 96-well Fast
Applied Biosystems
ABI PRISM 7700
Applied Biosystems
QuantStudioTM 3 Real-Time PCR System
Applied Biosystems
QuantStudioTM 12K Flex 96-well
Applied Biosystems
QuantStudioTM 5 Real-Time PCR System
Applied Biosystems
QuantStudioTM 6 Flex 96-well
Applied Biosystems
StepOne Plus
Applied Biosystems
QuantStudioTM 7 Flex 96-well
Applied Biosystems
StepOne
Real-Time PCR System
Applied Biosystems
QuantStudioTM 3 Real-Time PCR System
Applied Biosystems
ViiA
7 Fast Real-Time PCR System
Applied Biosystems
QuantStudioTM 5 Real-Time PCR System
TM
TM
TM
Real-Time PCR System
Bio-Rad
CFX96 TouchTM Real-Time PCR Detection System
Applied Biosystems
ViiaTM 7 Real-Time PCR System
Bio-Rad
Mini OpticonTM Real-Time PCR Detection System
Bio-Rad
CFX96 TouchTM Deep Well Real-Time PCR Detection System
Roche
LightCycler® 480 Real-Time PCR System
Bio-Rad
iCycler iQTM Real-Time PCR Detection System
Roche
LightCycler® 96 Real-Time PCR System
Bio-Rad
iCycler iQTM 5 Real-Time PCR Detection System
Agilent Technologies
AriaMx Real-Time PCR System
Bio-Rad
MyiQTM Real-Time PCR Detection System
Bio-Rad
MyiQTM 2 Real-Time PCR Detection System
Eppendorf
MastercyclerTM ep realplex
Stratagene / Agilent
Technologies
Mx3000PTM Real-Time PCR System
Stratagene / Agilent
Technologies
Mx3005PTM Real-Time PCR System
BIONEER
Listado para kits VIASURE
monoplex.
3DUDYHULÀFDUFRPSDWLELOLGDG
con kits multiplex, consultar
instrucciones de uso.
Catálogo General
Exicycler
TM
96 (Fast block)
* El producto se debe
reconstituir siguiendo
el procedimiento
adecuado y transvasar
DORVWXERVHVSHFtÀFRV
Rotor-Gene®,
ó SmartCycler®.
Analytik Jena Biometra
TOptical
Analytik Jena Biometra
qTOWER 2.0
Abbott
Abbott m2000 RealTime System
BIONEER
ExicyclerTM 96 (Normal block)
Protocolo de iniciación
PCR a tiempo real
VIASURE Real Time PCR Detection Kits
El objetivo de este protocolo es facilitar la formación de personal técnico de laboratorio en la realización
de pruebas diagnósticas moleculares basadas en la técnica PCR a tiempo real, o qPCR, a partir de
muestras clínicas. El uso de los test “RNA-DNA VIASURE Extraction Kit” y “VIASURE Pathogen Real Time
PCR Detection Kit”, en combinación con los signos y síntomas presentados por los pacientes, permitirá
al personal sanitario especializado establecer un diagnóstico clínico.
Para desarrollar de manera correcta las actividades mencionadas es necesario adaptar las
instalaciones con el equipamiento adecuado y establecer áreas diferenciadas donde se realizarán
ODVGLIHUHQWHVHWDSDVGHOSURFHVR(VUHFRPHQGDEOHPDQWHQHUXQÁXMRGHWUDEDMRXQLGLUHFFLRQDO
La unidad de diagnóstico molecular se compone de 4 zonas:
Área de extracción
de ácidos nucleicos
Área Pre-PCR
Área “Set-up” PCR
Procesamiento de
muestras.
Reconstituir el número
de pocillos necesarios.
Reconstituir control
SRVLWLYROLRÀOL]DGR
Extracción de
DNA/RNA con kit
Añadir control
negativo.
Añadir DNA/RNA
extraído de cada
muestra, añadir control
positivo y sellar los
pocillos con tapones
ópticos.
comercial manual o
sistema automático
(opcional).
1
2
3
ÉUHDGHDPSOLÀFDFLyQ
e interpretación de
resultados
Colocar las tiras en
el equipo de PCR a
tiempo real.
Programar el
termociclador e iniciar
4
el protocolo. Análisis de
resultados con software
propio del equipo.
Recomendaciones
Es importante destacar que la PCR a tiempo real, o qPCR, es una herramienta de diagnóstico
PROHFXODUDOWDPHQWHVHQVLEOH\HVSHFtÀFDSRUORTXHHVHVWULFWDPHQWHQHFHVDULRPDQWHQHUXQDV
QRUPDVGHKLJLHQHRUGHQ\VHJXULGDGFRQHOÀQGHHYLWDUSRVLEOHVFRQWDPLQDFLRQHVTXHSRGUtDQ
afectar gravemente al desarrollo de la prueba.
El personal del laboratorio de biología molecular debe contar con una indumentaria exclusiva en
cada una de las zonas de trabajo.
Es recomendable la desinfección al inicio del proceso y tras el uso de los equipos.
‡ Soluciones desinfectantes comerciales.
‡ Etanol 70%.
Catálogo General
1
Área de extracción
de ácidos nucleicos
Esta primera área tiene como objetivo el procesamiento de muestras potencialmente infecciosas y su posterior
H[WUDFFLyQ\SXULÀFDFLyQGHiFLGRVQXFOHLFRVFRQHONLW´9,$685(51$'1$([WUDFWLRQ.LWµ3RUHOORVHHVWDEOHFHFRPR
zona de riesgo biológico y se recomienda situar todos los equipos en cercanía para minimizar los desplazamientos.
El proceso de extracción de DNA/RNA puede ser manual o automático. Siga las instrucciones del proveedor de su
kit de extracción, o consúltenos sobre el protocolo de extracción de DNA/RNA en ensayos qPCR.
2 Área Pre-PCR
Se recomienda mantener el Área Pre-PCR libre de cualquier tipo de material biológico, para evitar así posibles
FRQWDPLQDFLRQHVTXHLQWHUÀHUDQHQORVUHVXOWDGRVGHOWHVW
Equipamiento básico:
‡ &DPSDQDGHÁXMRODPLQDU
‡ Material EPI: guantes
desechables (sin polvo), bata,
mascarilla, gorro.
‡ Micropipeta (2 - 20 μL)
(uso exclusivo para la
rehidratación de los pocillos y
adición del control negativo).
‡ 3XQWDVFRQÀOWUR
‡ Tijeras.
‡ Gradillas tubos 0,1 - 0,2 ml.
En esta área utilizaremos el test
“VIASURE Pathogen Real Time
PCR Detection Kit”.
‡ Separar el número de reacciones/pocillos
necesarios (incluyendo las muestras y los dos
pocillos reservados para el control positivo y
negativo que deben ser siempre incluidos en
cada ensayo).
‡ En caso necesario, recortar con unas tijeras
el número de pocillos requeridos.
‡ Retirar el aluminio protector.
‡ Reconstituir cada pocillo con 15 μL del
tampón de rehidratación (vial azul).
‡ Añadir 5 μL del control negativo (vial
morado) en el pocillo reservado para control
negativo.
Tras este proceso trasladaremos los pocillos
rehidratados al Área “Set-up” PCR.
VIASURE Real Time PCR Detection Kits
3 Área “Set-up” PCR
El Área “Set-up” PCR es la zona donde se realizan dos procesos independientes:
A. Rehidratación del control positivo.
B. Adición a los pocillos rehidratados de los ácidos nucleicos y el control positivo.
El riesgo biológico no es potencialmente infeccioso para el personal del laboratorio, pero se aconseja mantener
esta zona limpia y desinfectada para evitar contaminaciones que comprometan el resultado del test.
Aunque es recomendable mantener zonas diferenciadas (Extracción de ácidos nucleicos, Pre-PCR y “Setup” PCR), esta área podría ser compartida con el Área Pre-PCR manteniendo la precaución de limpiar
correctamente la campana entre ambos procesos y diferenciar el uso de pipetas (1ª pipeta, 2 - 20 μL: uso para
el tampón de rehidratación y control negativo; 2ª pipeta, 2 - 20 μL: uso para ácidos nucleicos y control positivo).
Equipamiento básico
‡ &DPSDQDGHÁXMRODPLQDU
‡ Material EPI: guantes
desechables (sin polvo), bata,
mascarilla, gorro.
‡ Micropipeta (2 - 20 μL) (uso
exclusivo para la adición
de los ácidos nucleicos y el
control positivo).
‡ 3XQWDVFRQÀOWUR
‡ Tijeras.
‡ Gradillas tubos 0,1 - 0,2 ml.
En esta área utilizaremos el test
“VIASURE Pathogen Real Time
PCR Detection Kit”.
A. Rehidratación del control positivo.
El test “VIASURE Pathogen Real Time PCR
Detection Kit” suministra un control positivo
que es necesario rehidratar para su posterior
uso en cada ensayo. Debido a que contiene
una gran cantidad de copias molde del
patógeno, se recomienda abrirlo y manipularlo
antes de comenzar el ensayo. Posteriormente,
limpiar la zona con soluciones desinfectantes
comerciales y/o etanol 70%.
‡ Reconstituir el control positivo (vial rojo) con
100 μL de agua libre de RNAsa/DNAsa (vial
blanco) y mezclar con la ayuda del vórtex.
‡ Separar en alícuotas para minimizar los ciclos
de congelación y descongelación.
‡ Almacenar a -20ºC tras su re-suspensión.
B. Adición a los pocillos rehidratados de los
ácidos nucleicos y el control positivo.
‡ Añadir 5 μL del DNA/RNA extraído de cada
muestra en los pocillos rehidratados (a
excepción de los dos pocillos reservados
para añadir el control negativo y positivo).
‡ Añadir 5 μL del control positivo reconstituido
(vial rojo) en el pocillo reservado para
control positivo.
‡ Separar el número de tapones ópticos
necesarios y cerrar los pocillos.
‡ En caso necesario, recortar con unas tijeras
el número de tapones ópticos requeridos
con la precaución de no tocar la parte
interna con los guantes.
Tras este proceso trasladaremos nuestra placa/
tira, ya cerrada, al equipo de qPCR.
Catálogo General
4
ÉUHDGHDPSOLÀFDFLyQ
e interpretación de resultados
(OÉUHDGHDPSOLÀFDFLyQHLQWHUSUHWDFLyQGHUHVXOWDGRVHVOD]RQDGRQGHVHHQFXHQWUDQXELFDGRVHOHTXLSR
y sus componentes asociados. Se recomienda situarlo en cercanía al Área “Set-up” PCR para minimizar los
desplazamientos.
Equipamiento básico:
‡ Colocar la tira/placa en el termociclador.
‡ Equipo PCR a tiempo real.
‡ Ordenador.
‡ Se recomienda colocar el mismo número de tiras/pocillos a ambos lados
GHOEORTXHGHOWHUPRFLFODGRUFRQHOÀQGHFRPSHQVDUHOHTXLSR
‡ Programar el termociclador e iniciar el protocolo.
En esta área utilizaremos el test
“VIASURE Pathogen Real Time
PCR Detection Kit”.
PROTOCOLO TÉRMICO RNA
PROTOCOLO TÉRMICO DNA
Nº ciclos
Tiempo
Temperatura
Nº ciclos
Tiempo
Temperatura
1
2 min
95 ºC
1
15 min
45 ºC
10 s
95 ºC
1
2 min
95 ºC
50 s
60 ºC *
45
45
* Recolección de datos
10 s
95 ºC
50 s
60 ºC *
Análisis de los resultados
con el software propio del equipo
Patógeno
Control
Interno
Control
negativo
Control
positivo
+
+/- *
-
+
Patógeno positivo
-
+
-
+
Patógeno negativo
+
+
+
+
Inválido
-
-
-
-
Inválido
Interpretación
* La detección del control interno no es necesaria en caso de
muestras altamente positivas. Un elevado número de copias del
patógeno presentes en la muestra puede conducir a una señal
débil o ausente en el control interno.
VIASURE Real Time PCR Detection Kits
CerTest Biotec, S.L.
Pol. Industrial Río Gállego II · Calle J, Nº1
50840, San Mateo de Gállego, Zaragoza (Spain)
www.certest.es
VIASURE online
Real Time PCR Detection Kits · Versión SP 1605