Cuantificación e interpretación de la carga viral VIH por metodología

Cuantificación e interpretación de la carga viral VIH por metodología

agosto 2015
Cuantificación e interpretación de la carga viral VIH por
metodología kPCR
La cuantificación del virus de la inmunodeficiencia
humana tipo 1 (VIH-1) en plasma por medio de la carga
viral, tiene variados usos tanto diagnósticos como de
seguimiento de la infección: contribuye a la decisión del
inicio de tratamiento y seguimiento de los pacientes
infectados por VIH/SIDA; es un gran apoyo en el
diagnóstico inicial de infección aguda antes de la
seroconversión; y también permite comprobar el fallo
virológico al régimen antirretroviral en uso.1,7
Para el control en el tratamiento antirretroviral, la carga
viral plasmática (CVP) combinada con el recuento de
linfocitos CD4 determinado por la técnica de citometría
de flujo, han mostrado ser marcadores eficaces en el
pronóstico de infección producida por el VIH-1. 1,2,7
El rango dinámico de replicación del virus generalmente
comprende varios órdenes de magnitud por lo que se
suelen emplear escalas logarítmicas para expresar los
resultados. La mayoría de las técnicas expresan los
datos en escala lineal y logarítmica. 2,6
El objetivo del tratamiento antirretroviral es reducir la
CVP de modo rápido por debajo de los límites de
detección (< 50 copias/mL) y mantenerla suprimida el
mayor tiempo posible, ya que con este nivel de carga
viral se ha demostrado que no se seleccionan mutaciones
de resistencia. Una vez instaurado el tratamiento, la
carga viral disminuye rápidamente (1-2 log10) en las
primeras semanas y un poco más a partir del primer
mes de tratamiento si el régimen no incluye un inhibidor
de la integrasa, hasta conseguir un nivel estable por
debajo del límite de detección que se correlaciona con
una mayor duración de la respuesta virológica. 6,7
Se recomienda una determinación de CVP al comienzo
del tratamiento, 4-8 semanas hasta conseguir la
supresión. El seguimiento posterior se debería realizar
cada 3-4 meses durante al menos el primer año. Una
vez la replicación viral es suprimida, los intervalos de
monitorización se pueden extender hasta los 6 meses
entre los pacientes que permanecen virológicamente
suprimidos y tienen un nivel de recuento de CD4 por
encima de los 350 células/μl. Se requiere una
monitorización más estrecha en aquellos pacientes en
los que se requiera cambiar su tratamiento debido al
fracaso virológico. 2,6,7
Se presenta un fracaso virológico cuando la CVP es
detectable comenzado el tratamiento antirretroviral, o si
tras alcanzar la indetectabilidad ésta vuelve a ser
detectable lo que considerara la falta de adherencia al
tratamiento o el desarrollo de mutaciones de resistencia
a los antiretrovirales, lo cual implica la realización de
pruebas de genotipificación. 6,7
En la progresión natural de la infección, la CVP puede
aumentar durante situaciones en las que se produce un
estímulo inmunológico, que aumenta la producción de
partículas víricas por los linfocitos infectados. Esta
situación se ha descrito en infecciones oportunistas
activas y tras la administración de vacunas. 3,4
Se han descrito episodios cortos de aumento de la CVP
conocidos como “Blips”, en pacientes con tratamiento
antirretroviral y con buen control virológico que mantienen
CVP indetectable y presentan ocasionalmente viremia
detectable de bajo nivel. Estos episodios aparecen en
determinaciones aisladas y se limitan sin cambios en el
tratamiento. Para que un incremento de la CVP sea
considerado como blip debería ser inferior a 500-1.000
copias/mL y en la siguiente determinación debería ser
de nuevo indetectable.1,3,7
Las concentraciones plasmáticas de RNA de VIH
pueden cuantificarse mediante tecnologías de
amplificación del ácido nucleico o de amplificación de
señales. 5,7
El principal objetivo de las técnicas de amplificación de
ácidos nucleicos in vitro, es mejorar la sensibilidad de
los test basados en ácidos nucleicos y simplificarlos
mediante el uso de la automatización y la incorporación
de sistemas de detección no radiactivos; sistemas de
amplificación de la diana, incluye la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR). 8
En el Laboratorio Médico Echavarría, contamos con la
más avanzada tecnología para la determinación de
carga viral para HIV en el analizador VERSANT HIV-1
RNA 1.0 Assay (kPCR) Siemens® utilizando la técnica
de reacción cinética en cadena de la polimerasa
(kPCR) de transcripción inversa (RT) la cual permite
detectar VIH-1 grupo M (subtipos A-H) y O; el límite de
detección es de 35 a 11´000.000 copias/ml. 5,9
El analizador VERSANT HIV-1 RNA 1.0 Assay (kPCR)
Siemens®, ofrece eficiencia en la extracción y amplificación en la detección de carga viral para HIV la técnica
es sensible, específica, maneja un control interno de
PCR y control de contaminación. 9
BIBLIOGRAFIA
1. Buttó S, Suligoi B, Fanales-Belasio E, Raimondo M. Laboratory
diagnostics for HIV infection. Ann Ist Super Sanitá. 2010; 46:24-33.
2. Tebourski F, Slim A, Elgaaied A. The significance of combining World
Health Organization and Center for Disease Control criteria to resolve
indeterminate human immunodeficiency virus tipe-1 Western blot
results. Diagn Microbiol Infect Dis. 2004; 48:59-61.
3. Fanales-Belasio E, Raimondo M, Suligoi B, Butto S. HIV virology and
pathogenetic mechanisms of infection: a brief overview. Ann Ist Super
Sanitá. 2010; 46:5-14.
4. Weber B. Screening of HIV infection: role of molecular and immunological assays. Expert Rev Mol Diagn. 2006; 6:399-411.
5. Ruelle J, Jnaoui K, Lefèvre I, Lamarti N, Goubau P. Comparative
evaluation of the VERSANT™ 440® HIV-1 RNA 1.0 kinetic PCR
molecular system (kPCR) for the quantification of HIV-1 plasma viral
load Journal of Clinical Virology 44 (2009) 297–301
6. Guidelines for the use of Antiretroviral Agents HIV.1 Infected Adults
and adolescents, 2012. Department of Health and Human Services.
7. Documento de consenso de GeSIDA/Plan Nacional sobre el Sida
respecto al tratamiento antirretroviral en adultos infectados por el virus
de la Inmunodeficiencia humana (Actualización enero 2014).
8. Jhoan Fibla Palazon, Departamento de Ciencias. Estratégicas en el
diagnóstico Molecular de las enfermedades hereditarias.
9. Evaluation of the New VERSANT™ kPCR Molecular System , Gorrin
G, Li H, Battersby T, Surtihadi J, Canchola J, Sherman. Siemens
Medical Solutions Diagnostics, Tarrytown, NY, US.
Realizado por:
Andrea Milena González Ortíz
Bacterióloga, Sección Biología Molecular
Revisado por:
Comité Interdisciplinario Médico Operatt