HAV IgM SUERO/PLASMA - Diagnóstica Internacional

HAV IgM SUERO/PLASMA
USO DESTINADO
HAV IgM es un inmunoensayo rápido cromatográfico de flujo lateral para
la detección cualitativa de anticuerpos IgM contra el virus de Hepatitis A
(HAV) en suero o plasma humano. Sirve como prueba de tamizaje para
ayudar al diagnóstico de la infección al HAV. Cualquier muestra reactiva
con HAV IgM debe ser confirmada por otro método alternativo y correlacionarlo con los hallazgos clínicos.
INTRODUCCIÓN
HAV es un virus RNA positivo, es el único miembro de la familia Picornaviridae. Su transmisión depende principalmente del contagio serial de
persona a persona por vía fecal-oral. Aunque la hepatitis A no suele ser
una enfermedad de transmisión sexual, la tasa de infección es alta entre
los hombres homosexuales, como resultado cuando existiese contacto
oral-anal
La presencia de anticuerpos específicos anti-HAV IgM en muestras de
sangre sugiere infección por HAV aguda o reciente. El anticuerpo IgM
aumenta rápidamente en el titulo durante un periodo de 4-6 semanas de
la infección y luego declina a niveles no detectables dentro de los 3 a 6
meses en la mayoría de los pacientes.
HAV IgM es utilizado para detectar anticuerpos IgM anti-HAV en menos
de 15 minutos por personal no calificado o calificado mínimamente, sin
necesidad de equipos pesados de laboratorio.
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
HAV IgM es un inmunoensayo inmunocromatográfico de flujo lateral. La
prueba en casete consta de: 1) Una almohadilla de conjugado de color
burdeos que contienen anticuerpo de ratón anti IgM humana conjugado
con oro coloidal (conjugados de IgM) y 2) Una tira de membrana de nitrocelulosa que contiene una banda de prueba (T) y un grupo control (C). La
banda T esta pre-recubierta con antígeno recombinante HAV y la banda
C esta pre-recubierta con anticuerpos IgM de cabra anti-conejo.
Cuando se dispensa un volumen de muestra adecuado en el casete, la
muestra migra por acción capilar a través del casete. Si están presentes
anticuerpos IgM anti HAV en el espécimen se unen a los conjugados
IgM. El inmunocomplejo es capturado en la membrana por el antígeno
pre-recubierto HAV, formando una banda de color borgoña indicando un
resultado positivo para HAV IgM. La ausencia de la banda T sugiere un
resultado negativo.
La prueba contiene un control interno (banda C), que debe presentar una
banda de color borgoña del inmunocomplejo de anticuerpos IgM de cabra anti-ratón /conjugado IgM-oro independientemente del desarrollo del
color en la banda T. De lo contrario, el resultado de la prueba no es valida
y es necesario que la prueba se realice de nuevo con otro dispositivo.
REACTIVOS
Materiales abastecidos con el equipo de prueba
1. Cada kit contiene 30 dispositivos de prueba, cada uno sellado en
una bolsa de aluminio con tres elementos en su interior:
a) Un casete dispositivo.
b) Una pipeta o gotero.
c) Un desecante.
2. Un instructivo.
Cat. IID-1064
VER.1
Materiales requeridos pero no abastecidos
1. Reloj o Timer
2. Control positivo
3. Control negativo
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES PARA LOS USUARIOS
Para uso diagnóstico In vitro
1. Este instructivo debe leerse por completo antes de realizar la prueba. Si no se sigue el inserto da resultados inexactos.
2. No abra la bolsa sellada, a menos que este listo para llevar a cabo
el ensayo.
3. No utilice dispositivos vencidos.
4. Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente (15-30 °C) antes
de su uso.
5. No use los componentes en cualquier otro tipo de equipo de prueba
como un sustituto para los componentes de ese kit.
6. No utilizar muestras de sangre hemolizadas para la prueba.
7. Usar ropa protectora y guantes desechables durante la manipulación de los reactivos del kit y muestras clínicas. Lávese bien las
manos después de realizar la prueba.
8. Usuarios de esta prueba deberán seguir las precauciones universales US CDC para la prevención de transmisión de HIV, HBV y
otros patógenos.
9. No fumar, ni beber, ni comer en áreas donde las muestras o reactivos del kit están siendo manejado.
10. Deseche todas las muestras y los materiales utilizados llevados a
cabo en la prueba como residuos de riesgo biológico.
11. Maneje Control Positivo y Negativo en la misma forma que las
muestras de pacientes.
12. Los resultados de las pruebas deben ser leídos dentro de los 10
minutos después de que se aplica una muestra al pozo de muestra o
almohadilla del dispositivo. La lectura después de 10 minutos puede
dar resultados erróneos.
13. No lleve a cabo la prueba en una habitación con flujo de aire fuerte,
es decir ventilador eléctrico o aire acondicionado fuerte.
PREPARACION DE REACTIVOS Y ALMACENAMIENTO
Todos los reactivos están listos para utilizar como fueron provistos. Almacene los dispositivos sin utilizar a temperaturas de 2-30 ºC. Los controles
positivos y negativos deben guardarse a 2-8 ºC, asegúrese que el dispositivo de prueba se encuentra en temperatura de interior antes de abrir.
El dispositivo de prueba es estable hasta la fecha de expiración impresa
en el sobre laminado. No congele el kit ni lo exponga a temperaturas
mayores a 30 ºC.
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DEL ESPÉCIMEN
Considere la posibilidad de cualquier material de origen humano como
infecciosos y manejarlos utilizando los procedimientos de bioseguridad
estándar
PLASMA
1. Recolecta la muestra de sangre en un tubo con tapón lavanda, azul
o verde (que contiene EDTA, Citrato o Heparina, respectivamente en
Distribuido por:
DIAGNÓSTICA INTERNACIONAL S.A. de C.V.
Rudyard Kipling 4886 Col. Jardines de la Patria
CP 45110 Zapopan, Jalisco, México
Lada sin costo: 01 800 440 0404 c/ 10 líneas
Tel: 01 (33) 3770 1940 c/ 10 líneas
1
2.
3.
Vacutainer ®) por venopunción.
Separar el plasma por centrifugación.
Con cuidado, coloque el plasma en un tubo nuevo pre-etiquetado.
SUERO
1. Recolecte la muestra de sangre en un tubo con tapón rojo (que no
contiene anticoagulantes en Vacutainer ®) por venopunción.
2. Permita que la sangre coagule.
3. Separar el suero por centrifugación.
4. Con cuidado, coloque el suero en un nuevo tubo pre-etiquetado.
NOTA:
• Las muestras deben ser ensayadas tan pronto como sea posible
después de su recolección. Almacenar las muestras si no van a ser
ensayadas inmediatamente entre 2-8°C.
• Almacenar las muestras entre 2-8°C por 5 días. Para tiempos mas
largos las muestras deben congelarse a -20°C.
• Evite múltiples ciclos de congelación-descongelación. Antes de la
prueba, lleve las muestras congeladas a temperatura ambiente y
mezcle suavemente. Las muestras que contengan partículas visibles, deberán ser aclaradas por centrifugación antes de la prueba.
CONTROL DE CALIDAD
El uso de los casetes individuales de prueba de HAV IgM se describe en
el procedimiento de ensayo, haga un control positivo y un control negativo (provistos bajo requerimiento si los controles de calidad no están disponibles en laboratorio) bajo las siguientes circunstancias para
monitorear el desempeño del casete.
1.
2.
3.
4.
5.
Un operador usa el kit por primera vez, antes de probar con especímenes.
Un nuevo kit se va a utilizar.
Un nuevo embarque de kits de va a utilizar.
La temperatura utilizada durante el almacenaje esta fuera de 2-30 °C
La temperatura del cuarto de pruebas esta fuera de 15-30°C
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
RESULTADO NEGATIVO: Si solo se desarrolla la banda “C”, la prueba
indica que no presenta anticuerpos IgM anti-HAV en la muestra. El resultado es negativo.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
• Paso 1: Lleve los componentes del kit y las muestras a temperatura
ambiente si son refrigeradas o congeladas. Mezcle la muestra antes
del ensayo, una vez descongelada.
•
Paso 2: Cuando este listo para el ensayo, abra la bolsa en la muesca y retire el dispositivo. Coloque el dispositivo de prueba en una
superficie limpia y plana.
•
Paso 3: Asegúrese de identificar el dispositivo con el numero de
identificación de la muestra.
•
Paso 4: Llene la pipeta gotero con la muestra. Sosteniendo el gotero
verticalmente, dispensar 2-3 gotas (60 a 90 µL) de la muestra en el
pocillo de muestra y asegúrese de que no existan burbujas de aire.
RESULTADO POSITIVO: Si se desarrollan las bandas “C” y “T”, la prueba
indica la presencia de anticuerpos IgM anti-HAV en la muestra. El resultado es positivo.
Las muestras con resultados positivos deben ser confirmadas con un método de ensayo alternativo y resultado clínico antes de una determinación
positiva.
NOTA: Agregue 1 gota de buffer salino o fosfato salino en la ranura
de la muestra si no se observa migración de flujo dentro de 30 segundos en la ventana de resultados, lo cual puede ocurrir con especimenes altamente viscosos.
•
Paso 5: Configurar el cronometro
•
Paso 6: Los resultados se pueden leer en 10 minutos. Resultados
positivos pueden ser visibles en tiempos cortos como en un minuto.
INVALIDO: Si no se desarrollo la banda “C”, el ensayo no es valido independientemente del desarrollo de color en la banda “T” como se indica a
continuación. Repita el ensayo con un nuevo dispositivo.
No lea el resultado después de 10 minutos. Para evitar confusiones,
deseche el dispositivo de prueba después de interpretar el resultado.
2
REFERENCIAS
1.
Minor P. Picornaviridae. In: Francki RIB, Fauquet CM, Knudson DL, et al., eds.
Classification and nomenclature of viruses (Arch Virol Supp 2). Wien: SpringerVerlag, 1991: 320-326.
2.
Keeffe EB. Clinical approach to viral hepatitis in homosexual men. Med Clin
North Am. 1986;70(3):567-86.
3.
Ballesteros J, Dal-Re R, Gonzalez A, del Romero J. Are homosexual males a
risk group for hepatitis A infection in intermediate endemicity areas? Epidemiol
Infect. 1996; 117(1):145-8.
CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO
DESEMPEÑO CLINICO
Un total de 200 muestras de sujetos susceptibles fueron probadas por
HAV IgM prueba rápida y por un equipo comercial de ensayo de EIA. Los
resultados se muestran en la siguiente tabla:
4.
Bradley DW, Maynard JE, Hindman SH, et al: Serodiagnosis of viral hepatitis
A: Detection of acute-phase immunoglobulin M anti-hepatitis A virus by radioimmunoassay. J Clin Microbiol 1977; 5: 521-530.
5.
Decker RH, Kosakowski SM, Vanderbilt AS, et al: Diagnosis of acute hepatitis
A by HAVAB-M : A direct radioimmunoassay for IgM anti-HAV. Am J Clin Pathol
1981;76:140-147.
6.
HAV IgM
EIA
POSITIVO
NEGATIVO
TOTAL
POSITIVO
21
1
22
NEGATIVO
0
178
178
TOTAL
21
179
200
Locarnini SA, Ferris AA, Lehman NI, et al: The antibody response following
hepatitis A infection. Intervirology 1974; 4:110-118.
7.
Skinhoj P, Mikkelsen F, Hollinger FB. Hepatitis A in Greenland: Importance of
specific antibody testing in epidemiologic surveillance. Am J. Epidemiol 1977;
105: 104-147
Sensibilidad Relativa 95.5%, Especificidad Relativa 100%, Acuerdo Global 99.5%
PRECISIÓN
La precisión fue determinada por examinaciones de 15 replicas con 3
tipos de muestras: una negativa, una débilmente positiva, y una fuertemente positiva. Los 3 tipos de muestras fueron correctamente identificas
en cada una de las pruebas en cada ocasión.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. El procedimiento del análisis y la interpretación de resultados del ensayo deben ser seguidos muy de cerca cuando se prueba la presencia de IgM anti-HAV en el suero o plasma de los sujetos individuales.
Si no se sigue el procedimiento puede obtener resultados inexactos.
2. El HAV IgM prueba rápida se limita a la detección cualitativa de IgM
anti-HAV en el suero o plasma humano. La intensidad de la banda
de prueba no tiene correlación lineal con el titulo de anticuerpos en
la muestra.
3. Un resultado negativo para un sujeto individual indica la ausencia
de anticuerpos IgM anti-HAV. Sin embargo, un resultado negativo no
excluye la posibilidad de exposición o la infección con el HAV.
4. Un resultado negativo puede ocurrir si la cantidad de IgM anti-HAV
presente en la muestra está por debajo de los límites de detección
del ensayo, o los anticuerpos que se detectan no son presentes durante la etapa de la enfermedad en la que se recoge una muestra.
5. Algunas muestras que contienen títulos inusualmente altos de anticuerpos heterófilos o factor reumatoide pueden afectar los resultados esperados.
6. Los resultados obtenidos con esta prueba sólo deben interpretarse
en conjunto con otros procedimientos de diagnóstico y los hallazgos
clínicos.
FABRICADO POR:
CTK BIOTECH, INC.
6748 NANCY RIDGE DRIVE,
SAN DIEGO, CA 92121, USA
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