Cultivo de microorganismos anaerobios

TEMA 11
Cultivo de microorganismos
anaerobios
Tema 11. Cultivo de microorganismos anaerobios
1. Microorganismos anaerobios
1.1. Anaerobios estrictos y anaerobios aerotolerantes
1.2. Importancia de la microbiota anaerobia
1.3. Enfermedades producidas por microorganismos anaerobios
2. Tipos de muestras que pueden contener microorganismos anaerobios
2.1. Muestras no adecuadas para el cultivo de anaerobios
3. Recolección de muestras para recuperación de anaerobios
3.1. Con aguja y jeringa
3.2. Con hisopo
4. Transporte de las muestras al laboratorio
5. Examen macroscópico y microscópico de las muestras
6. Pruebas previas al cultivo
7. Medios de cultivo para anaerobios
8. Incubación de microorganismos anaerobios
8.1. Bolsas
8.2. Contenedores
8.3. Jarras
8.4. Estufas
1. Microorganismos anaerobios
1.1. Anaerobios estrictos y anaerobios aerotolerantes
Anaerobios: no utilizan oxígeno en su metabolismo (el aceptor final de electrones
es un compuesto diferente al oxígeno).
• Estrictos (2): crecen en
atmósferas con una tensión
de oxígeno inferior al 0,5%.
Mueren en presencia de
cantidades mayores.
• Aerotolerantes (5): pueden
sobrevivir en presencia de
oxígeno (hasta un 8%), pero
son incapaces de utilizarlo para su metabolismo.
─ La tolerancia viene determinada por la presencia de enzimas:
superoxido dismutasa (SOD), catalasa y peroxidasa que catalizan la
conversión de radicales superóxido a peróxido de hidrógeno, menos
tóxico, y a oxígeno molecular.
1.2. Importancia de la microbiota anaerobia
• Piel: Clostridium, Propionibacterium, Peptostreptococcus.
• Ojos: Propionibacterium, Clostridium.
•
Nasofaringe: Peptostreptococcus,Veillonella, Propionibacterium, Prevotella,
Clostridium, Actinomyces, Eubacterium, Bacteroides, Fusobacterium.
− Boca (3-10:1).
− Surcos gingivales (100-1.000:1).
•
Intestino delgado: Peptostreptococcus. Peptococcus, Lactobacillus (1:1).
•
Intestino grueso: Prevotella, Fusobacterium, Peptostreptococcus, Peptococcus,
Lactobacillus (100-1.000:1).
•
Uretra: Bacteroides, Peptostreptococcus, Peptococcus, Lactobacillus,
Clostridium, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella.
• Vagina: Bacteroides, Propionibacterium, Peptostreptococcus, Peptococcus,
Lactobacillus, Clostridium, Prevotella, Fusobacterium, Veillonella (5-10:1).
1.3. Enfermedades producidas por microorganismos anaerobios
Abcesos en cualquier órgano
Infección periodontal
Otitis media
Sinusitis
Endocarditis, bacteriemia y
septicemia
Empiema torácico
Apendicitis, peritonitis
Endometritis y salpingitis,
absceso ovárico
Osteomielitis
Artritis séptica
Tétanos, gangrena gaseosa
Mionecrosis clostrídica
2. Tipos de muestras que pueden contener microorganismos anaerobios
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•
Orina
– Punción suprapúbica
Heces
Sangre, LCR y otros líquidos
orgánicos
Tracto respiratorio inferior
– Aspiración traslaríngea
– Toracocentesis
– Broncoscopia
Oído
– Timpanocentesis
Cavidad oral y dientes
Aparato genital
– Masculino
– Femenino
¾ Hisopado de endocérvix
¾ Bartolinitis
Pus, exudados y quemaduras
Muestras de cirugía
2.1. Muestras no adecuadas para el cultivo de anaerobios
•
Orina de chorro medio
•
Esputo expectorado
•
Heces (sólo para investigar Clostridium difficile),
ni hisopados rectales
•
Hisopado faríngeo y nasofaríngeo
•
Hisopado de encías
•
Hisopado vaginal
•
Superficie de úlceras
3. Recolección de muestras para recuperación de anaerobios
3.1. Con aguja y jeringa
•
Muestra de orina por
punción suprapúbica
•
Muestra de orina de catéter
•
Sangre
•
LCR
•
Otros líquidos orgánicos
•
Abscesos, flemones, focos
piogénicos
3.1. Con aguja y jeringa
3.2. Con hisopo
Hisopado de endocérvix
Hisopado de heridas, abscesos
4. Transporte de las muestras al laboratorio
Sistema Scott
de doble tubo
Sistema
Port-A-Cult
4. Transporte de las muestras al laboratorio
Sistema
Culturette
Sistema
Vacutainer
5. Examen macroscópico y microscópico de las muestras
Examen macroscópico
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•
•
Olor fétido.
Aspecto purulento.
Tejido necrótico.
Presencia de gas.
Examen microscópico
• Tinción de gram: muchas infecciones
anaerobias pueden ser polimicrobianas.
• Tinción y observación de esporas (puede indicar
Clostridium).
• Observación de ramificaciones en los extremos
de las células o filamentos (puede indicar
Actynomices).
• Observación células fusiformes (puede indicar
Fusobacterium).
6. Pruebas previas al cultivo
•
Cromatografía de gases
7. Medios de cultivo para anaerobios
Agar sangre para anaerobios con L-cistina, hemina y vitamina K
• Medio no selectivo de uso general.
Agar chocolate
• Utilizado principalmente para aislar
especies de Neisseria y Haemophilus; sin
embargo, se puede requerir también para
el aislamiento de anaerobios exigentes.
Agar alcohol fenil etílico con sangre
• Aislamiento de anaerobios obligados Gram positivos.
7. Medios de cultivo para anaerobios
Agar Columbia con colistina y ácido nalidíxico (CNA)
•
Aislamiento de anaerobios obligados Gram
positivos.
Agar KVLB (kanamicina, vancomicina, sangre lacada)
•
Aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos
anaerobios
Caldo tioglicolato (enriquecido con L-cistina, hemina y
vitamina K)
Caldo de carne picada
•
Caldos de enriquecimiento que se pueden usar
como suplemento de medios sólidos
particularmente si la muestra escasa (se
pueden añadir unas gotas de parafina líquida
para mantener mejor la atmósfera anaerobia).
Subcultivar en medio para anaerobios.
8. Incubación de microorganismos anaerobios
Preincubación de los medios en
anaerobiosis
8.1. Bolsas
8.2. Contenedores
8.3. Jarras
8.3. Jarras
8.4. Estufas