BIO-FLASH ® BIO-FLASH® Toxo IgM

BIO-FLASH ®
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®
BIO-FLASH Toxo IgM
3000-8554
50 tests
BIO-FLASH Toxo IgM es un inmunoensayo quimioluminiscente de dos pasos totalmente automatizado
para la determinación cualitativa de anticuerpos IgM anti-Toxoplasma gondii en suero o plasma humano
con el instrumento BIO-FLASH.
Sumario
La toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa que afecta tanto a humanos como a animales y que es causada por
el protozoo Toxoplasma gondii.1 La toxoplasmosis adquirida suele ser asintomática y benigna.2 Sin embargo, en las
mujeres embarazadas esta infección es importante ya que el parásito puede entrar en la circulación del feto a través
de la placenta y provocar toxoplasmosis congénita. Diversos estudios han demostrado que el riesgo y la gravedad de
la toxoplasmosis congénita son mayores cuando se adquiere durante los tres primeros meses de embarazo.3-6 Las
consecuencias de la toxoplasmosis congénita abarcan desde el aborto espontáneo y el nacimiento prematuro hasta
síntomas neurológicos y generalizados, que a menudo conllevan complicaciones oculares. Los recién nacidos con
toxoplasmosis congénita también pueden permanecer asintomáticos durante varias semanas tras el nacimiento.
Múltiples estudios han indicado que la presencia de cierta concentración de IgG maternal anti-toxoplasma antes del
embarazo protege al feto contra la infección por el parásito. Las pruebas serológicas también pueden servir para
identificar los embarazos de riesgo; las mujeres seronegativas en el momento de diagnóstico del embarazo pueden
ser controladas durante su transcurso. El análisis de los isotipos de los anticuerpos específicos anti-Toxoplasma
gondii puede ayudar a determinar el momento en que se contrajo la infección.7,8 De esta forma es posible detectar
una infección reciente, tomar las medidas profilácticas necesarias y pautar el tratamiento adecuado. La detección de
IgM específica posibilita el seguimiento de la mujer en estado, ya que las infecciones por toxoplasma no suelen
detectarse clínicamente. El seguimiento serológico debe permitir la detección precoz de una seroconversión y, en
función de la gravedad de la infección congénita del feto, la toma inmediata de las medidas necesarias.
La toxoplasmosis puede ser mortal en pacientes inmunocomprometidos (SIDA, transplante de órganos). En los
pacientes con SIDA, la toxoplasmosis aguda suele sobrevenir como consecuencia de la reactivación de una
infección latente previa, si bien también hay diagnósticos de infecciones primarias.9
Principio
Cuando las micropartículas paramagnéticas de BIO-FLASH Toxo IgM se mezclan e incuban con la muestra, si
ésta presenta anticuerpos específicos anti-toxoplasma, éstos se combinan con los antígenos de Toxoplasma que
recubren las micropartículas. Después de una separación magnética y lavado para eliminar la muestra residual, se
añade un trazador consistente en un anticuerpo monoclonal anti-IgM humana marcado con isoluminol que se une
a los anticuerpos IgM anti-toxoplasma capturados por las micropartículas. Tras una segunda incubación,
separación magnética y otro lavado, se añaden los reactivos que activan la reacción quimioluminiscente. El
luminómetro del BIO-FLASH mide la luz emitida como unidades relativas de luz (URL), que son directamente
proporcionales a la concentración de IgM anti-toxoplasma de la muestra.
El BIO-FLASH utiliza un método de reducción de datos con ajuste a una curva logística de 4 parámetros (4PLC)
para generar una Curva de Calibración Maestra (CCM). Esta curva viene predefinida, depende del lote y se
almacena en el instrumento a través del código de barras del cartucho. Con la medición de los calibradores (que
se suministran en un kit aparte), la CCM predefinida se transforma en una Curva de Calibración de Trabajo (CCT)
nueva y específica para el instrumento. Las concentraciones de los calibradores están incluidas en los códigos de
barras de los tubos de calibradores.
Esquema de la reacción:
Activadores
(Triggers)
Activadores
(Triggers)
URL
Partícula magnética
Muestra
Trazador
URL
Emisión de luz
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
3000-8554 R03 06.2015 spa
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Componentes
Cartucho de reactivos
El kit BIO-FLASH Toxo IgM contiene un cartucho de reactivos para 50 determinaciones (REF 3000-8554).
Nota: El diseño del cartucho está protegido por patente (US D565,741 / Diseño CE 000762992-0001)
Composición del cartucho de reactivos:
El cartucho se compone de 4 viales que contienen:
A.
1 vial cilíndrico de suspensión de micropartículas
recubiertas con antígeno de Toxoplasma en
tampón de fosfato. Contiene < 0,1% de azida
sódica.
B.
1 vial de tampón de ensayo. Contiene < 0,1% de
azida sódica.
C.
1 vial opaco de trazador que consiste en
anticuerpo monoclonal murino anti-IgM humana
marcado con isoluminol. Contiene < 0,1% de
azida sódica.
D.
1 vial vacío.
Preparación
Véase la figura siguiente.
Cartucho: las micropartículas sedimentan durante su transporte y almacenamiento, por lo que se tienen que
mezclar para volverlas a resuspender.
•
La primera vez que vaya a utilizar el cartucho, inviértalo suavemente 30 veces sin que se forme espuma
(las burbujas pueden hacer que los sensores de líquido del instrumento den lecturas erróneas).
•
Compruebe que las micropartículas se hayan resuspendido totalmente. Si no es así, siga invirtiendo el
cartucho hasta que se resuspendan en su totalidad.
•
Si las micropartículas no se resuspenden o detecta que el precinto de los reactivos está roto, NO UTILICE EL
CARTUCHO.
•
Una vez resuspendidas las micropartículas, sitúe el cartucho sobre una superficie sólida y retire con cuidado
la lengüeta roja de seguridad para el transporte.
•
Manteniendo el cartucho en la superficie sólida, apriete las dos pestañas situadas a los lados del tapón
perforador (parte gris) y presione la parte superior del cartucho hasta que quede en posición de bloqueo. Una
vez en posición de bloqueo, las pestañas tienen que quedar ocultas. No invierta el cartucho abierto.
•
Deje reposar el cartucho durante 5 minutos antes de cargarlo en el instrumento.
•
Una vez cargado el cartucho, el instrumento mezcla su contenido de forma automática a intervalos periódicos.
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Precauciones
Los reactivos BIO-FLASH son para diagnóstico IN VITRO.
Uso exclusivo para profesionales.
La azida sódica puede reaccionar con tuberías y desagües de plomo o cobre dando lugar a azidas metálicas
altamente explosivas. Al desechar los restos de reactivos, deje correr agua abundante.
ATENCIÓN: MATERIAL DE RIESGO BIOLÓGICO.
Deseche todos los materiales usados en recipientes adecuados para material biocontaminante.
Por favor, no reutilice ni reintroduzca reactivos en los cartuchos o viales.
Clase de peligro
No clasificado.
Indicaciones de peligro
Ninguna.
Consejos de prudencia
P280: Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección.
P305+351+338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios
minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando.
Recolección y conservación de las muestras
Usar suero fresco (también se pueden utilizar tubos con gel separador de suero) o plasma (EDTA, Li-heparina,
Li-heparina en tubo con gel separador, Na-heparina y Na-citrato). Otros anticoagulantes deben ser comprobados
antes de utilizarse. Los anticoagulantes líquidos como el Na-citrato ejercen un efecto de dilución y pueden reducir
la concentración de muestras de pacientes. Las muestras no deben ser inactivadas por calor. Las partículas en
suspensión deben eliminarse por centrifugación. En las directrices CLSI H18-A3 y H21-A5 encontrará más
información sobre la manipulación, el transporte, el procesamiento y la conservación de las muestras.
Suero
Las muestras de suero pueden ser conservadas entre 2-8°C durante 8 días. Si es por un período de tiempo más
largo, deben ser congeladas a una temperatura igual o inferior a -20°C. Las muestras pueden
congelarse/descongelarse un máximo de 3 veces. Mezclar bien después de descongelarlas. Compruebe que no
haya burbujas en las muestras y, en caso contrario, elimínelas en su totalidad antes del análisis.
Plasma
Las muestras de plasma pueden ser conservadas entre 2-8°C durante 8 días. Si es por un período de tiempo más
largo, deben ser congeladas a una temperatura igual o inferior a -20°C. Descongelar el plasma a 37°C.
Descongelar las muestras sólo una vez. Mezclar bien después de descongelarlas. Compruebe que no haya
burbujas en las muestras y, en caso contrario, elimínelas en su totalidad antes del análisis.
Volumen de muestra
El volumen de muestra necesario para realizar una única prueba con BIO-FLASH Toxo IgM varía en función del
tipo de recipiente que se utilice. Una prueba requiere al menos 15 µL más el volumen muerto, que es de 200 µL si
se utiliza la copa de muestra recomendada (REF 3000-8209).
Otros materiales
Los siguientes materiales no se suministran con el cartucho de reactivos y se tienen que comprar aparte.
REF 3000-8555
BIO-FLASH Toxo IgM Calibrators (Calibradores)
REF 3000-8556
BIO-FLASH Toxo IgM Controls (Controles)
Lea detenidamente las instrucciones correspondientes si desea más información.
No utilice otros calibradores. La información que necesita el instrumento BIO-FLASH para calibrar el ensayo
BIO-FLASH Toxo IgM está incluida en los códigos de barras de los viales.
Utilizar controles de otros fabricantes puede dar lugar a resultados imprevistos.
Asegúrese de que en el instrumento BIO-FLASH haya una cantidad suficiente de los siguientes consumibles
antes de procesar muestras, calibradores o controles:
REF 3000-8206
BIO-FLASH Cuvettes (Cubetas)
Nota: El diseño de las cubetas está protegido por patente (US D560,816 / Diseño CE 000762984-0001)
REF 3000-8204
BIO-FLASH Triggers (Activadores)
REF 3000-8205
BIO-FLASH System Rinse (Solución del sistema)
REF 3000-8207
BIO-FLASH Sample Diluent (Diluyente de las muestras)
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Instrumento / realización del ensayo
En el Manual del Usuario del BIO-FLASH encontrará las instrucciones completas para realizar el ensayo.
Calibración
El código de barras del cartucho contiene una Curva de Calibración Maestra (CCM) que es válida para el lote de
reactivos. Sin embargo, para todos los reactivos se necesita una Curva de Calibración de Trabajo (CCT), que es
específica para cada lote y válida hasta la fecha de caducidad de éste. Se debe obtener una nueva CCT cuando los
resultados de los controles salgan fuera del rango de aceptación o cuando se hayan realizado ajustes en el instrumento.
Lea detenidamente el Manual del Usuario del BIO-FLASH para configurar una CCT.
Control de calidad
Para realizar un programa completo de control de calidad se recomiendan dos niveles de control. Los controles
BIO-FLASH Toxo IgM negativo y positivo se han diseñado para dicho programa. Se recomienda que cada
laboratorio establezca su propia media y desviación estándar y un programa de control de calidad para monitorizar
sus resultados. Los controles se deben analizar al menos cada 24 horas por día de utilización. Si los controles
están fuera de rango, puede resultar necesario recalibrar el instrumento. En el Manual del Usuario del instrumento
encontrará más información. Para la identificación y resolución de situaciones anormales de control de calidad,
consulte Westgard et al.10
Conservación y estabilidad
Los reactivos que no se hayan abierto se mantienen estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
del cartucho si se conservan entre 2-8°C en posición vertical.
Una vez abierto, la estabilidad del cartucho cargado en el instrumento BIO-FLASH o guardado a 2-8°C es de
8 semanas.
Interpretación de resultados
La cantidad de analito en cada muestra se determina a partir de la luz emitida (URL), mediante interpolación en la
Curva de Calibración de Trabajo almacenada. Los resultados de BIO-FLASH Toxo IgM se expresan como S/CO
(Señal de la muestra/Valor de corte). Como el ensayo es cualitativo, el valor numérico del resultado sólo es
indicativo de la cantidad de anticuerpo presente.
La determinación de las IgM anti-toxoplasma con el ensayo BIO-FLASH Toxo IgM ayuda en el diagnóstico de una
infección reciente.
•
•
•
Las muestras con un resultado < 0,80 S/CO se consideran no reactivas (negativas).
Las muestras con un resultado ≥ 0,80 y < 1,00 S/CO se consideran indeterminadas (zona gris). Las muestras
que se interpreten como indeterminadas deben reanalizarse. Si al reanalizarse se obtiene un resultado
indeterminado, se debe reportar como tal y debe realizarse otro ensayo con un método alternativo o debe
obtenerse y analizarse una segunda muestra.
Las muestras con un resultado ≥ 1,00 S/CO se consideran reactivas (positivas).
Como en todos los inmunoensayos sensibles, existe la posibilidad de obtener resultados positivos que no se
repitan. Un resultado negativo no excluye la posibilidad de infección por toxoplasma. Una posible seroconversión
debe confirmarse mediante determinación cuantitativa de las IgG específicas con, por ejemplo, BIO-FLASH Toxo
IgG REF 3000-8551, analizando muestras pareadas tomadas en un intervalo de 2-3 semanas.
Limitaciones
El resultado de una única muestra no es suficiente para diagnosticar una infección primaria por toxoplasma. Por
tanto, además de los resultados de BIO-FLASH Toxo IgM deben tenerse en cuenta otros datos como, por
ejemplo, la sintomatología, la historia clínica, los resultados de otras pruebas y demás información relevante.
Los anticuerpos heterófilos presentes en suero humano pueden reaccionar con inmunoglobulinas de los reactivos
y causar interferencias en los inmunoensayos in vitro.11 Los datos obtenidos pueden indicar que la presencia de
anticuerpos heterófilos en la muestra puede dar lugar a falsos positivos.
Resultados esperados
Aproximadamente un tercio de la población mundial posee anticuerpos anti-toxoplasma, si bien hay diferencias
notables en su prevalencia entre países e incluso en cada uno de ellos. En Inglaterra y Gales la prevalencia
aumenta con la edad un 0,5% - 1,0% al año hasta alcanzar alrededor del 30% en sujetos de 40 años. Sin
embargo, en Francia el 80% - 90% de la población da positivo para anticuerpos a esa edad.12
En un estudio multicéntrico llevado a cabo en más de 16000 muestras de suero de mujeres embarazadas en
Barcelona (España), el 28,6% presentaba anticuerpos anti-toxoplasma. Se detectaron anticuerpos específicos IgM
en el 2,2% de las mujeres con anti-toxoplasma.13
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En un estudio realizado en Noruega entre 1992 y 1994 en que participaron 35940 embarazadas, el 10,9% eran
positivas de anticuerpos anti-toxoplasma antes del inicio del embarazo. El 0,17% de las mujeres previamente no
infectadas demostraron evidencia de infección primaria durante el embarazo.14
Características funcionales
Nota: los datos siguientes son representativos; los resultados en experimentos aislados pueden variar respecto a
estos datos.
Comparación de métodos
BIO-FLASH Toxo IgM se evaluó en estudios comparativos con otros ensayos comerciales.
Evaluaciones
Se realizó una evaluación interna y otra externa en el Servei de Microbiologia del Hospital de la Santa Creu i Sant
Pau de Barcelona (España). En la evaluación interna se analizaron con BIO-FLASH Toxo IgM 154 muestras de
distinta procedencia que incluían sueros positivos y negativos de anticuerpos IgM anti-toxoplasma y los resultados
se compararon con los obtenidos con un método de EIA Toxo IgM comercial. En la evaluación externa se
analizaron con BIO-FLASH Toxo IgM 426 muestras de distinta procedencia que incluían sueros positivos y
negativos de anticuerpos IgM anti-toxoplasma y los resultados se compararon con los obtenidos con un método de
MEIA Toxo IgM comercial. Se presentan los resultados globales. En los cálculos no se tuvieron en cuenta los
resultados indeterminados.
Método de referencia
BIO-FLASH
Toxo IgM
IND
NEG
POS
Total
IND
0
1
2
3
NEG POS Total
18
415
33
466
5
12
94
111
23
428
129
580
Se obtuvieron los siguientes resultados iniciales de sensibilidad y especificidad relativas y concordancia global:
N
554
Sensibilidad relativa
Valor
IC del 95%
88,7% 81,1% a 94,0%
Especificidad relativa
Valor
IC del 95%
92,6% 89,8% a 94,9%
Concordancia global
Valor
IC del 95%
91,9% 89,3% a 94,0%
Las muestras discrepantes se analizaron con un método de ELFA Toxo IgM comercial. Tres de ellas se resolvieron
a favor de BIO-FLASH Toxo IgM. Tras el ensayo adicional se obtuvieron los siguientes resultados finales de
sensibilidad, especificidad y concordancia global:
N
555
Sensibilidad final
Valor
IC del 95%
89,6% 82,2% a 94,7%
Especificidad final
Valor
IC del 95%
92,9% 90,1% a 95,1%
Concordancia global final
Valor
IC del 95%
92,3% 89,7% a 94,3%
Noventa y dos (92) de las muestras de la evaluación externa provenían de mujeres embarazadas. Las cifras de
sensibilidad y especificidad se mantuvieron similares a las de la población general.
Panel CDC
El panel de sueros humanos Toxoplasma 1998 de la CDC compuesto por 32 muestras de suero positivas y
65 muestras de suero negativas fue analizado con el ensayo BIO-FLASH Toxo IgM con un resultado de
sensibilidad del 96,9% y una especificidad del 93,8%.
Precisión
Se evaluó, conforme a las directrices CLSI EP05-A, la precisión intra-ensayo y total (ensayo a ensayo y día a día)
en múltiples ensayos. Los resultados se resumen en la tabla siguiente:
Control negativo
Control positivo
Alrededor del valor de corte
Media (S/CO)
0,23
2,53
0,82
Intra-ensayo
0,031 SD
4,9% CV
4,4% CV
BIOKIT, S.A. - Can Malé s/n - 08186 Lliçà d’Amunt - Barcelona - SPAIN
Total
0,032 SD
7,8% CV
6,6% CV
3000-8554 R03 06.2015 spa
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Interferencias
Estudios conforme a las directrices CLSI EP7-A han demostrado que las siguientes sustancias potencialmente
interferentes no alteran los resultados de BIO-FLASH Toxo IgM:
Sustancia potencialmente interferente
Hemoglobina
Bilirrubina indirecta
Bilirrubina directa
Triglicéridos
Factor reumatoide
Concentración
500 mg/dL
18 mg/dL
18 mg/dL
1300 mg/dL
800 UI/mL
% Interferencia
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
≤ 10
Reactividad cruzada
Cuando se analizaron 202 muestras con potencial de producir reacción cruzada con el ensayo BIO-FLASH Toxo IgM
y se compararon los resultados con ensayos comerciales de Toxo IgM, se evidenció la siguiente concordancia:
Reacción cruzada potencial
IgM frente a rubéola
Anti-CMV IgM (anticuerpos frente a citomegalovirus)
Anti-HIV (anticuerpos frente al virus de la inmunodeficiencia humana)
HAMA (anticuerpo humano antimurino)
SLE (Lupus eritematoso sistémico)
ANA (anticuerpos antinucleares)
Anti-EBV (anticuerpos frente al virus Epstein-Barr)
Anti-PV B19 (anticuerpos frente a Parvovirus B19)
Anti-HSV 1 (anticuerpos frente al virus Herpes simplex tipo 1)
Anti-VZV (anticuerpos frente al virus de la Varicela Zoster)
Paraproteínas IgG e IgM
IgG e IgM elevadas
Anticuerpos heterófilos
RF (Factor Reumatoide)
Mujeres embarazadas (multíparas incluidas)
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Concordancia
5/5
5/5
9/9
3/3
8/10
11/11
4/4
10/10
4/5
4/4
6/6
6/6
2/4
10/10
96/110
3000-8554 R03 06.2015 spa
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