Vol.3 Núm. 3
Transcripción
Vol.3 Núm. 3
Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 p. 413-627 1 de mayo - 30 de junio, 2012 REVISTA MEXICANA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS ISSN: 2007-0934 editora en jefa Dora Ma. Sangerman-Jarquín editor asociado Agustín Navarro Bravo editores correctores Dora Ma. Sangerman-Jarquín Agustín Navarro Bravo comité editorial internacional Agustín Giménez Furest. INIA-Uruguay Alan Anderson. Universite Laval-Quebec. Canadá Álvaro Rincón-Castillo. Corporación Colombiana de Investigación. Colombia Arístides de León. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. El Salvador C. A. Bernardo Mora Brenes. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Costa Rica Carlos J. Bécquer. Ministerio de Agricultura. Cuba Carmen de Blas Beorlegui. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. España César Azurdia. Universidad de San Carlos. Guatemala Charles Francis. University of Nebraska. EE. UU. Daniel Debouk. Centro Internacional de Agricultura Tropical. Puerto Rico David E. Williams. Biodiversity International. Italia Elizabeth L. Villagra. Universidad Nacional de Tucumán. Argentina Elvira González de Mejía. University of Illinois. EE. UU. Hugh Pritchard. The Royal Botanic Gardens, Kew & Wakehurst Place. Reino Unido Ignacio de los Ríos Carmenado. Universidad Politécnica de Madrid. España James Beaver. Universidad de Puerto Rico. Puerto Rico James D. Kelly. University State of Michigan. EE. UU. Javier Romero Cano. Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. España José Sangerman-Jarquín. University of Yale. EE. UU. Ma. Asunción Martin Lau. Real Sociedad Geográfica-Madrid. España María Margarita Hernández Espinosa. Instituto Nacional de Ciencias Agrícolas. Cuba Marina Basualdo. UNCPBA. Argentina Moisés Blanco Navarro. Universidad Nacional Agraria. Nicaragua Raymond Jongschaap. Wageningen University & Research. Holanda Silvia I. Rondon. University of Oregon. EE. UU. Steve Beebe. Centro Internacional de Agricultura Tropical. Puerto Rico Valeria Gianelli. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Argentina Vic Kalnins. University of Toronto. Canadá Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas. Vol. 3, Núm. 3, 1 de mayo - 30 de junio 2012. Es una publicación bimestral editada por el Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP). Progreso No. 5. Barrio de Santa Catarina, Delegación Coyoacán, D. F., México. C. P. 04010. www.inifap.gob.mx. Distribuida por el Campo Experimental Valle de México. Carretera Los Reyes-Texcoco, km 13.5. Coatlinchán, Texcoco, Estado de México. C. P. 56250. Teléfono y fax: 01 595 9212681. Editora responsable: Dora Ma. Sangerman-Jarquín. Reserva de derecho al uso exclusivo: 04-2010-012512440200-102. ISSN: 2007-0934. Licitud de título. En trámite. Licitud de contenido. En trámite. Ambos otorgados por la Comisión Calificadora de Publicaciones y Revistas Ilustradas de la Secretaría de Gobernación. Domicilio de impresión: Imagen Digital. Prolongación 2 de marzo, Núm. 22. Texcoco, Estado de México. C. P. 56190. (juancimagen@ hotmail.com). La presente publicación se terminó de imprimir en junio de 2012, su tiraje constó de 1 000 ejemplares. REVISTA MEXICANA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS ISSN: 2007-0934 editora en jefa Dora Ma. Sangerman-Jarquín editor asociado Agustín Navarro Bravo editores correctores Dora Ma. Sangerman-Jarquín Agustín Navarro Bravo comité editorial nacional Alfonso Larqué Saavedra. Centro de Investigación Científica de Yucatán Alejandra Covarrubias Robles. Instituto de Biotecnología de la UNAM Andrés González Huerta. Universidad Autónoma del Estado de México Antonieta Barrón López. Facultad de Economía de la UNAM Antonio Turrent Fernández. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias Bram Govaerts. Centro Internacional de Mejoramiento de Maíz y Trigo Daniel Claudio Martínez Carrera. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas-Campus Puebla Delfina de Jesús Pérez López. Universidad Autónoma del Estado de México Demetrio Fernández Reynoso. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas Ernesto Moreno Martínez. Unidad de Granos y Semillas de la UNAM Esperanza Martínez Romero. Centro Nacional de Fijación de Nitrógeno de la UNAM Eugenio Guzmán Soria. Instituto Tecnológico de Celaya Froylán Rincón Sánchez. Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro Guadalupe Xoconostle Cázares. Centro de Investigación y Estudios Avanzados del IPN Higinio López Sánchez. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas-Campus Puebla Ignacio Islas Flores. Centro de Investigación Científica de Yucatán Jesús Axayacatl Cuevas Sánchez. Universidad Autónoma Chapingo Jesús Salvador Ruíz Carvajal. Universidad de Baja California-Campus Ensenada José F. Cervantes Mayagoitia. Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco June Simpson Williamson. Centro de Investigación y Estudios Avanzados del IPN Leobardo Jiménez Sánchez. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas Octavio Paredes López. Centro de Investigación y Estudios Avanzados del IPN Rita Schwentesius de Rindermann. Centro de Investigaciones Económicas, Sociales y Tecnológicas de la Agroindustria y Agricultura Mundial de la UACH Silvia D. Peña Betancourt. Universidad Autónoma Metropolitana-Xochimilco La Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas es una publicación del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP). Tiene como objetivo difundir los resultados originales derivados de las investigaciones realizadas por el propio Instituto y por otros centros de investigación y enseñanza agrícola de la república mexicana y otros países. Se distribuye mediante canje, en el ámbito nacional e internacional. Los artículos de la revista se pueden reproducir total o parcialmente, siempre que se otorguen los créditos correspondientes. Los experimentos realizados puede obligar a los autores(as) a referirse a nombres comerciales de algunos productos químicos. Este hecho no implica recomendación de los productos citados; tampoco significa, en modo alguno, respaldo publicitario. La Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas está incluida en el Índice de Revistas Mexicanas de Investigación Científica y Tecnológica del Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT). Indizada en: Red de Revistas Científicas de América Latina y el Caribe (REDALyC), Biblioteca electrónica SciELO-México, The Essential Electronic Agricultural Library (TEEAL-EE. UU.), Scopus, Dialnet, Agrindex, Bibliography of Agriculture, Agrinter y Periódica. Reproducción de resúmenes en: Field Crop Abstracts, Herbage Abstracts, Horticultural Abstracts, Review of Plant Pathology, Review of Agricultural Entomology, Soils & Fertilizers, Biological Abstracts, Chemical Abstracts, Weed Abstracts, Agricultural Biology, Abstracts in Tropical Agriculture, Review of Applied Entomology, Referativnyi Zhurnal, Clase, Latindex, Hela, Viniti y CAB International. Portada: lima. REVISTA MEXICANA DE CIENCIAS AGRÍCOLAS ISSN: 2007-0934 editora en jefa Dora Ma. Sangerman-Jarquín editor asociado Agustín Navarro Bravo editores correctores Dora Ma. Sangerman-Jarquín Agustín Navarro Bravo árbitros de este número Ángel Bustamante González. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas Arturo Moreno Hernández. Universidad de Guadalajara C. Edilberto Pozo Velázquez. Centro de Investigaciones Agropecuarias UCLV Eduardo Martínez Herrera. Universidad de Chile, República de Chile Erich Dietmar Rössel Kipping. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas Fernando Carlos Gómez Merino. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas Francisco Camacho Ferre. Universidad de Almería, España Genoveva Barrera Godínez. Universidad Nacional Autónoma de México Iran Alia Tejacal. Universidad Autónoma del Estado de Morelos J. Cruz García Alvarado. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas J. Diego García Paredes. Universidad Autónoma de Nayarit Jaime Gómez Ruíz. El Colegio de la Frontera Sur José Alberto Gallegos Infante. Instituto Tecnológico de Durango José Luis Ramírez Díaz. INIFAP José Luciano Morales García. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo Juan Felipe Martínez Montoya. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas Kris Wyckhuys. Centro Internacional de Agricultura Tropical, Colombia Libia Iris Trejo Téllez. Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas Maribel Gutiérrez Contreras. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo Nuria E. Rocha Guzmán. Instituto Tecnológico de Durango Oscar Daniel Barrera Sánchez. Universidad Autónoma Chapingo Rafael Mora Aguilar. Universidad Autónoma Chapingo Ramón Gerardo Guevara González. Universidad Autónoma de Querétaro Sergio Mejía Kerguelén. Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria, Colombia Sylvia Patricia Fernández Pavía. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo CONTENIDO ARTÍCULOS ♦ CONTENTS ♦ ARTICLES Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo. ♦ Assessment of acetic acid like fumigant of silverleaf whitefly Bemisia tabaci (Gennadious) in laboratory and field. José Alfredo Samaniego Gaxiola, José Emmanuel Amaya Carrillo y José Luis Puente Manríquez. Página 413-426 Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka. ♦ Chemical control of Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) in Persian lime Citrus latifolia Tanaka. Luis Martín Hernández-Fuentes, Mario Alfonso Urias-López, José Isabel López-Arroyo, Rafael Gómez-Jaimes y Néstor Bautista-Martínez. Rendimiento y calidad de híbridos de sorgo con y sin nervadura café. ♦ Yield and quality of sorghum hybrids with and without brown midrib. Eduardo Daniel Bolaños Aguilar, Jean Claude Emile y Guillaume Audebert. 427-439 441-449 Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha. ♦ Determination of some physical properties of Agave tequilana Weber for mechanizing crop. Alberto Saldaña Robles, Ryszard Jerzy Serwatowski Hlawinska, Noé Saldaña Robles, César Gutiérrez Vaca, José Manuel Cabrera Sixto y Salvador García Barrón. 451-465 Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla. ♦ Native beans diversity of different regions from state of Puebla. Ana Rosa Ramírez-Pérez, Ramón Díaz-Ruiz, Carmen Jacinto-Hernández, Juan Alberto Paredes-Sánchez y Ramón Garza García. 467-480 Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales. ♦ Comparison of phenolic content, antioxidant capacity and anti-inflamatory activity of commercial herbal infusions. Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez, Karla Rivas-Díaz, Ma. Guadalupe Flavia Loarca-Piña, Sandra Mendoza-Díaz, Rosalía Reynoso-Camacho y Minerva Ramos-Gómez. Variabilidad espacial de la lámina de agua y rendimiento de la caraota (Phaseolus vulgaris L.) bajo riego por aspersión. ♦ Space variability of water sheet and yield of black bean (Phaseolus vulgaris L.) under sprinkler irrigation. José Nicolás Ortiz Romero, Héctor Alexis Miranda y Samuel Gustavo Ceballos Pérez. Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México. ♦ Irrigated soils in region of Rioverde, San Luis Potosí, Mexico. Hilario Charcas-Salazar, Juan Rogelio Aguirre-Rivera y Héctor Martín Durán-García. 481-495 497-507 509-523 Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz. ♦ Gametophytic incompatibility in Mexican maize breeds. José Miguel Padilla García, José de Jesús Sánchez González, Lino de la Cruz Larios, José Ariel Ruiz Corral, José Ron Parra y Moisés Martín Morales Rivera. 525-537 CONTENIDO ♦ CONTENTS Página El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo. ♦ CaCl2 in gerbera vase life: pigments, phenols, lignin and scape anatomy. Susana González-Aguilar y Araceli Zavaleta-Mancera. Biocontrol de la pudrición de raíz de nochebuena de interior con Trichoderma spp. biocontrol for indoor poinsettia with Trichoderma spp. 539-551 ♦ Root rot Felipe de Jesús Osuna-Canizalez, María Félix Moreno-López, Faustino García-Pérez, Sergio Ramírez-Rojas y Jaime Canul-Ku. 553-564 Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México. ♦ Marketing network and profitability of cut flower for Mexicali Valley, Baja California, Mexico. Blancka Yesenia Samaniego-Gámez, Gloria Virginia Cano-García, María Teresa Beryl Colinas-León, Carlos Sánchez-Abarca y Alejandro Manzo-González. ENSAYO 565-578 ♦ ESSAY Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial. ♦ Jet Biofuel. Production of energy-related crops for commercial aircraft. Ibis Sepúlveda González. NOTAS DE INVESTIGACIÓN 579-594 ♦ INVESTIGATION NOTES Control químico de las enfermedades: una alternativa para la producción de trigo de temporal en Tlaxcala. ♦ Chemical control of diseases: an alternative for rainfall wheat production in Tlaxcala. Héctor Eduardo Villaseñor Mir, René Hortelano Santa Rosa, Eliel Martínez Cruz, Luis Antonio Mariscal Amaro, Santos Gerardo Leyva Mir y Julio Huerta Espino. 595-600 Exploración y caracterización morfológica de poblaciones de la jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) del estado de Guerrero, México. ♦ Morphological exploration and characterization of roselle (Hibiscus sabdariffa L.) populations from state of Guerrero, Mexico. Noé Alarcón-Cruz, Rafael Ariza Flores, Aristeo Barrios Ayala, David H. Noriega Cantú y Juan Porfirio Legaria Solano. Adaptación al cambio climático y la variabilidad: algunas opciones de respuesta para la producción agrícola en Uruguay. ♦ Adaptation to climatic change and variability: some response options to agricultural production in Uruguay. Agustín Giménez y Bruno Lanfranco. Concentración nutrimental en hojas de aguacate ‘Hass’ con síntoma de moteado. concentration in ‘Hass’ avocado leaves with mottled symptom. 601-609 611-620 ♦ Nutrimental Edgardo Federico Hernández-Valdés, Salvador Aguilar-Campoverde, Verónica Aguiera-Taylor y Rosa Elena Pérez-Sánchez. 621-627 Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 413-426 Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo* Assessment of acetic acid like fumigant of silverleaf whitefly Bemisia tabaci (Gennadious) in laboratory and field José Alfredo Samaniego Gaxiola1§, José Emmanuel Amaya Carrillo2 y José Luis Puente Manríquez2 Campo Experimental La Laguna. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias. Boulevard José Santos Valdez Núm. 1200 Poniente. Col. Centro. C. P. 27440, Matamoros, Coahuila. 2Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro - Unidad Laguna. Periférico y carretera a Santa Fe s/n, ejido San Antonio de los Bravos Torreón. C. P. 27000. Torreón, Coahuila. ([email protected]), ([email protected]). §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad del ácido acético (AA) como fumigante en contra de Bemisia tabaci (moquita blanca) que es un plaga de importancia nacional. En el laboratorio, se fumigó el insecto con tres regímenes de dosis - tiempo: (ambos medios), baja - largos y altas - cortos. En el campo, las hojas de calabaza de cuatro variedades fueron fumigadas con 8, 16 y 32 µg ml-1 de AA en tiempos de 20, 40 y 60 min; adicionalmente, se evaluó el daño en las hojas (fitotoxicidad) después de fumigarse. En el laboratorio, tiempo de fumigación > 15 min y 8 µg ml-1 de AA mató 100% de la mosquita, mientras que, su supervivencia se redujo 40% al fumigarla ocho horas con 2 µg ml-1de AA; pero la incubación del testigo (mosquita sin fumigar) por ≥ 16 h también redujo su supervivencia; entretanto, con 8 y 16 µg ml-1 de AA se redujo la supervivencia del insecto desde los cinco minutos (~20-80%). En el campo, la mosquita sobrevivió ~ 40% en las hojas de las cuatro variedades después de fumigarse con AA (8-32 µg ml-1) durante 20 min, pero el insecto prácticamente no sobrevivió al aumentar el tiempo de fumigación a 60 min. Las hojas mostraron un daño severo (fitotoxicidad) > al 50% excepto en la dosis de 8 µg ml-1 a los 20 min con un daño de ~ 20%. Se discuten alternativas del empleo del AA como fumigante. The aim of this work was to assess the capacity of acetic acid (AA) like fumigant against Bemisia tabaci (silverleaf whitefly) which is a pest of national importance. In laboratory, the bug was fumigated with three doses-time regimes: (both media), low dose-long time and high dose-short time. In field, squash leaves of four varieties were fumigated with 8, 16 and 32 µg ml-1 of AA during of 20, 40 and 60 min; additionally, it was assessed damage in foils (phytotoxicity) after fumigation. In laboratory, fumigation time > 15 min and 8 µg ml-1 of AA killed 100% of whitefly, while its survival was reduced 40% when fumigated eight hours with 2 µg ml-1 of AA; but control incubation (whitefly without fumigation) during ≥ 16 h also reduced its survival; meanwhile, with 8 and 16 µg ml-1 of AA the pest survival was reduced since five minutes (~20-80%). In field, the whitefly survived ~ 40% in leaves of four varieties after fumigating withAA(8-32 µg ml-1) during 20 min, but pest practically did not survive when increasing fumigation time to 60 min. The leaves showed severe damage (phytotoxicity) > to 50% except in dose of 8 µg ml-1 at 20 min with damage of ~ 20%. Alternative to use of AA like fumigant are discussed. * Recibido: julio de 2011 Aceptado: marzo de 2012 Key words: biofumigants volatile fatty acids, vegetal protection. José Alfredo Samaniego Gaxiola et al. 414 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Palabras clave: ácidos grasos volátiles biofumigantes, protección vegetal. Introducción El cultivo de calabaza Cucurbita spp., en México, el año 2008, ocupó una superficie de más de 4 mil ha (SIAP, 2010). En La UAAAN Unidad - Laguna (Torreón, Coahuila), se trabaja evaluando variedades de calabaza, producto de la cruza de especies de Cucurbita; sin embargo, estas variedades, al igual que otros cultivos en La Laguna, son a menudo infestadas fuertemente por la mosquita blanca, nombre con el que se le conoce a Bemisia tabaci (Gennadius). Este insecto posee una gran cantidad de biotipos (Brown et al., 1995), que constituyen una plaga presente en todo el mundo, que puede atacar a más de 500 especies de plantas, muchas de ellas cultivos como melón, sandía, tomate, así como plantas ornamentales. La mosquita se alimenta de la savia de las plantas, lo que induce defoliación y menor crecimiento, así como manifiesta una gran capacidad para trasmitir virus a los cultivos que invade. El impacto económico de esta plaga se estimó en más de mil millones de dólares tan sólo en California, Estados Unidos de América (Urias-López et al., 2005; Center for Invasive Species Research, 2010). El ácido acético (AA) destaca entre los ácidos grasos volátiles de cadena corta (AGV), por su bajo costo y por considerarse un compuesto de bajo riesgo para humanos, animales y ambiente (Shafiur, 2007), así como por tener propiedades fungicidas, herbicidas y de ajustar el pH (Pesticide Action Network North América, 2010). Si bien el AA se ha evaluado ampliamente como fumigante principalmente de frutas (Sholberg, 2009), también se ha hecho para desparasitar abejas Apis mellifera L. (Pernal et al., 2010). La necesidad de encontrar nuevos productos para combatir plagas y enfermedades, que sean baratos, no riesgosos en su manejo y no peligrosos al ambiente, nos enfoca a evaluar algunos compuestos como fumigantes o fungicidas, tales como el AA y AGV. Por todo ello, nosotros consideramos que el AA tendrá un efecto fumigante sobre Bemisia que dependerá de la dosis y tiempo de fumigación. Por tanto, los objetivos de este trabajo se dirigieron a: evaluar, en el laboratorio, el AA como fumigante de B. tabaci variando dosis y tiempos de fumigación; en el campo, evaluar el ácido como fumigante en hojas de cuatro variedades de calabaza; y, determinar la fitotoxicidad del ácido sobre las hojas fumigadas. Introduction Sweet potato squash Cucurbita spp., crop in Mexico, during 2008, occupied a surface of more than 4 thousand ha (SIAP, 2010). UAAAN Unit Laguna (Torreón, Coahuila) works assessing squashes cultivars, result of breeding Cucurbita species; however, these cultivars, just like other varieties in La Laguna, are often strongly attacked by Bemisia tabaci (Gennadius), commonly known as silverleaf whitefly. This bug has great amount of biotypes (Brown et al., 1995), which constitutes a pest that exist all around the world, that can attack to more than 500 plants species, many of them in crops like melon, watermelon, tomato, as well as ornamental plants. Whitefly feeds from plant’s sap, which induces defoliation and less growth, as well as great ability to transmit virus to crops that invades. Economical impact of this pest is estimated in one billion dollars just in California, USA (Urias-López et al., 2005; Center for Invasive Species Research, 2010). Acetic acid (AA) outstands among short-chain fatty acids (SCFA) due its low cost and for being considered a compound of low risk for humans, animals and environment (Shafiur, 2007), as well as for having bactericide, fungicide, herbicide properties and for adjusting pH (Goepfert and Hicks, 1969; Pesticide Action Network North America, 2010). Although it has been widely assessed like fumigant mainly for fruits (Sholberg, 2009), it is also made for de-worming bees Apis mellifera L. (Pernal et al., 2010). The need to find new products against plagues and diseases, that are cheap, nonrisk for handling and ambient friendly, leads to assess some compound like fumigants or fungicides, such as AA and SCFA. By all this we consider that AA will have fumigant effect on Bemisia that will depend on fumigation doses and duration. Therefore, the aim of this work was focused on: assess, in laboratory, AA like fumigant of B. tabaci varying fumigation doses and duration; in field, assess acid like fumigant in leaves of four squashes cultivars; and, to define acid phytotoxicity on fumigated leaves. Materials and methods Crop settling On the agricultural field that belongs to UAAAN UL, there were set on April 16th, 2009, four squashes cultivars belonging to Cucurbita moschata Duchesne ex Lam. The Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo Materiales y métodos Establecimiento del cultivo En el campo agrícola que pertenece a la UAAAN UL, se establecieron durante el 16 de abril de 2009, cuatro variedades de calabaza pertenecientes a Cucurbita moschata Duchesne ex Lam. Las variedades de calabaza fueron Bárbara, Sandy, Muzquee de Provence y Kikuza. Durante el mes de septiembre de 2009, se recolectó la mosquita blanca de las hojas de la calabaza. Recolección y manejo de la mosquita Al amanecer, hojas de las cuatro variedades de calabaza infestadas con la mosquita se recolectaron y depositaron en frascos de plástico de 4 L. La tapa de estos frascos, consistieron en una malla de tul que permitía el flujo de aire e impedía que el insecto escapara. Los frascos se transportaron al laboratorio de fitopatología del Campo Experimental La Laguna (INIFAP) en Matamoros, Coahuila, en donde llegaron aproximadamente a la 9 am. La malla en la boca de los frascos se retiró y se les adaptó un embudo de vidrio de 20 cm de diámetro, de tal forma que el embudo embonó con la boca del frasco. El otro extremo del embudo (en forma de tubo recto) se tapó con un algodón para evitar que los insectos escaparan. Luego, al extremo del tubo del embudo se adaptó a una tapa de lámina que enroscaba en una botella de vidrio de 250 ml. A través del tubo del embudo se dejaron pasar aproximadamente 25 mosquitas (Figura 1), luego los frascos de 250 ml se les colocaron tapas sin perforar. Los frascos con las mosquitas permanecieron a temperatura de laboratorio ~ 25 °C por no más de dos horas antes de someter las mosquitas a fumigación. Justo antes de fumigar las mosquitas dentro de los frascos, los frascos con el insecto se colocaron por 45 s en un congelador cuya temperatura fue de -10 °C, ello con la finalidad de que el insecto permaneciera inmóvil temporalmente y no escapara. Inmediatamente después, los frascos se sacaron del congelador y se les añadió AA (fumigó) y fueron cerrados herméticamente e incubados a 28 °C en los tiempos que posteriormente se indicarán. Experimentos en el laboratorio Las cantidades de AA (grado reactivo) usada por frasco de 250 ml se expresan como µg ml-1, debido a que se consideró que la densidad del ácido es próxima a uno, y entonces 1 µL corresponde entonces a 1 mg, el cual se dividió entre el volumen de cada frasco (1 mg /250 ml) y se multiplicó por 415 squashes cultivars were Bárbara, Sandy, Muzquee de Provence and Kikuza. During September 2009, silverleaf whitefly was collected from squashes’ leaves. Collection and handling of silverleaf whitefly In the morning, leaves of four varieties infected with whitefly were collected and put in 4 L plastic flask. Their cap was a mesh that allowed air flow and kept bug in flask. Flasks were taken to phytopathology laboratory of Experimental Field La Laguna (INIFAP) in Matamoros, Coahuila, arriving there around 9 am. Mesh was removed and 20 cm diameter glass funnel was adapted in such way that fit on flask mouth. The other end of funnel (straight tube shaped) was covered with cotton to avoid whiteflies to escape. Then, at the end of funnel tube a metallic cap was adapted to fit in 250 ml glass bottle. Through funnel tube approximately 25 whiteflies were allowed to pass (Figure 1), and then 250 ml flasks were covered with caps with no holes on them. The flasks with whiteflies were kept at laboratory temperature ~ 25 °C during les than two hours before applying fumigation to them. Just before fumigation within flasks, they were put during 45 s in freezer at a temperature of -10 °C, with the purpose to temporary immobilize the bug and avoid its escape. Immediately, flasks were taken from freezer and AA was added (fumigation) and were tightly closed and incubated at 28 °C during time that will be listed later in this paper. Frasco de 250 ml Embudo Frasco de 4 L Figura 1. Dibujo que representa los frascos en donde se recolectó la mosquita blanca (frasco de 4 L) y donde se recolectaron 25 moquitas (frasco de 250 ml) usando un embudo de vidrio. Figure 1. Picture that represent flasks where whitefly was collected (4 L flask) and where 25 specimens were collected (250 ml flask) using glass funnel. José Alfredo Samaniego Gaxiola et al. 416 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 1 000 para expresar entonces µg ml-1. Cuándo se usó en el ácido en dosis > 4 µg ml-1 éste se tomó directamente con una micro pipeta; pero en dosis menores a la referida, se tomaron 10 µL de alguna de las diluciones acuosa donde se añadió AA a razón de 1.25, 2.5, 5 y 10 ml aforando a 100 ml de agua destilada, lo que correspondió a las dosis de 0.5, 1.0, 2.0 y 4.0 µg ml-1, respectivamente. Tres experimentos de fumigación para B. tabaci se realizaron: en el primero, se usaron dosis medias (0.5, 1.0, 2.0, 4.0 y 8.0 µg ml-1) en tiempos medios de incubación a 28 °C (15, 30, 45 y 60 min); en el segundo, las dosis fueron bajas (0, 0.5, 1 y 2 µg ml-1 ) y tiempos largos (4, 8, 16, 24 y 48 h); en el tercero, las dosis fueron altas (8, 12 y 16 µg ml-1) en tiempos cortos (5, 7.5 y 10 min). Al finalizar la incubación de los frascos fumigados, se destaparon y se permitió por 15 min que las mosquitas volaran y escaparan, aquéllas que no lo hicieron y permanecieron sin movimiento alguno en el fondo de los frascos se recolectaron y se observaron al microscopio estereoscópico buscando señales de movimiento. Las mosquitas que no mostraron ningún movimiento y permanecieron rígidas, se consideraron muertas. Cada tratamiento de fumigación de dosis y tiempo tuvo cuatro repeticiones (cuatro frascos). Experimentos en campo Las variedades de calabaza Bárbara, Sandy, Muzquee de Provence y Kikuza pertenecientes a Cucurbita moschata Duch. ex Lam., fueron establecidas en el campo agrícola dentro de la Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro Unidad Laguna. De cada variedad (Bárbara, Sandy, Muzquee y Kikuza) al azar, se tomó cuatro plantas y de cada planta una hoja. Las cuatro hojas de las cuatro plantas por cada una de las variedades, se tomaron como cuatro repeticiones por tratamiento (dosis y tiempos de fumigación que se indicarán). Cada hoja, sin desprenderla de la planta, fue cubierta con una bolsa de plástico de 5 L, enseguida se adicionó ácido acético a razón de 8, 16 y 32 µg ml-1. Por cada dosis del ácido añadida a las bolsas, los tiempos que permanecieron cerradas fueron de 20, 40 ó 60 min. Después, se realizó el recuento de mosquitas vivas y muertas como se indicó previamente. Las hojas donde se aplicó fumigación fueron evaluadas para síntomas de fitotoxicidad, para ello, se implementó una escala de daño (fitotóxico) con los valores siguientes; 1, 2, 3, 4 y 5 correspondieron a 0, 25, 50, 75 y 100% de daño. El daño de la hoja se registró 10 min después de haber concluido el período de fumigación, en donde una hoja no tratada (fumigada) fue el testigo o valor 1, y en donde los subsecuentes valores representaron niveles de desecación (daño) hasta observar una desecación completa valor 5= 100% de daño. Experiments in laboratory AA quantities (reactive grade) used per 250 ml flask are in µg ml-1 units, due it was considered that acid density is near 1, and then 1 µL corresponds to 1 mg, which was divided by each flask volume (1 mg /250 ml) and it was multiplied by 1 000 to finally express µg ml-1. When acid was used in dose > 4 µg ml-1 this was directly taken from micropipette; but in lower doses to the mentioned, 10 µL were taken from some of aqueous dilutions where AA was added at a rate of 1.25, 2.5, 5 and 10 ml mixing with 100 ml of distilled water, which corresponded to doses of 0.5, 1.0, 2.0 and 4.0 µg ml-1, respectively. Three fumigation experiments for B. tabaci were performed: in the first one, mean doses (0.5, 1.0, 2.0, 4.0 and 8.0 µg ml -1) were used in mean incubation times at 28 °C (15, 30, 45 and 60 min); in the second one, doses were low (0, 0.5, 1 and 2 µg ml-1 ) and times were long (4, 8, 16, 24 and 48 h); in the third, the doses were high (8, 12 and 16 µg ml-1) in short times (5, 7.5 and 10 min). When finishing incubation of fumigated flasks, they were open and allowed during 15 min the whiteflies to fly and escape, those that did not and were not moving at the bottom of flasks were collected and were put under stereoscopic microscope searching for movement signals. The whiteflies that show no movement and were still, were considered dead. Each treatment of fumigation doses and times had four repetitions (four flasks). Fields experiments Squash cultivars Bárbara, Sandy, Muzquee de Provence and Kikuza belong to Cucurbita moschata Duch. ex Lam., and were set in agricultural field of Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro - Unidad Laguna. From each cultivar (Bárbara, Sandy, Muzquee and Kikuza) at random, four plants were taken and from each plant one leaf. The four leaves of the four plants per each cultivar, four repetitions were taken per treatment (fumigation doses and times to be indicated). Each leaf, without removing from the plant, was covered with a 5 L plastic bag, then acetic acid was added at a rate of 8, 16 and 32 µg ml-1. Per each acid dose added to the bags, the time they lasted closed were 20, 40 or 60 min. After, counting of live and dead whiteflies was done. The leaves where fumigation was applied were assessed for phytotoxicity symptoms, and for this purpose damage scale (phytotoxic) was implemented with the following values: 1, 2, 3, 4 and 5 corresponding to 0, 25, 50, 75 and Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo Análisis de datos 100% of damage. Leaf damage was recorded 10 min after concluding fumigation period, where non-treated leaf (fumigated) was control or value 1, and following values mean desiccation levels (damage) up to full desiccation value 5= 100% of damage. Cada experimento se estableció con un diseño completamente al azar y un arreglo factorial. A los resultados se les aplicó un análisis de varianza con medias repetidas a través del tiempo. Los datos de supervivencia de la mosquita blanca se expresaron en porcentaje fueron transformados con raíz cuadrada de arco seno antes de su análisis. La separación de medias de los tratamientos se realizó con la prueba de Tukey. Los análisis estadísticos se hicieron usando el paquete estadístico SAS (1999). Los experimentos en laboratorio se repitieron dos veces, mientras que el experimento de campo, sólo una vez. Data analysis Each experiment was set with completely random design and factorial design. To results analysis of variance was applied with means repeated through time. Survival data of silverleaf whitefly were expressed in percentage and were transformed with square root of arch sine before its analysis. Means separation of treatments was made with Tukey test. Statistical analyses were made using SAS software (1999). The experiments in laboratory were repeated twice, while in field only one time. Resultados Dosis y tiempos medios de fumigación de B. tabaci indican que, desde 15 hasta 120 min de fumigación usando 0.5 ó 1.0 µg ml-1 de AA permitieron una supervivencia mayor a 90%; en contraste, el insecto no sobrevivió después de 30 min de fumigarse con 8 µg ml-1. Una supervivencia alrededor de 75% de la mosquita permaneció desde los 45 hasta los 120 min después de fumigarse con 2 µg ml-1; mientras que, al fumigar con 4 µg ml-1 la supervivencia disminuyó conforme aumentó el tiempo de fumigación (Figura 2). 100 a a a a a a a Supervivencia (%) Results Mean fumigation doses and times of B. tabaci indicate that from 15 min up to 120 min of fumigation using 0.5 or 1.0 µg ml-1 of AA allowed survival of more than 90%; in contrast, pest did not survive after 30 min of fumigation a a a a a b b 80 417 b c b b c 60 d 40 e 20 0 15 f 30 f 45 Tiempo (minutos) f 60 f 120 Figura 2. Supervivencia de Bemisia tabaci después de fumigarse con dosis medias a 0.5 , 1 , 2 , 4 y 8 µg ml-1 de ácido acético por ml de aire, durante tiempos medios (hasta 120 min). Las barras de error representan la desviación estándar promedio de dos experimentos, n= 8. Las letras distintas sobre las barras son diferentes según la prueba de comparación de medias Tukey p< 0.05. Figure 2. Survival of Bemisia tabaci after fumigation with mean doses at 0.5 , 1.0 , 2.0 , 4.0 and 8.0 µg ml-1 of acetic acid per ml of air, during mean times (up to 120 min). Error bars represent average standard deviation of two experiments, n= 8. Different letters on bars are different according to means comparison Tukey test p< 0.05. José Alfredo Samaniego Gaxiola et al. 418 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Dosis bajas de 0.5 y 2 µg ml-1 del ácido utilizadas en tiempos de ocho horas de fumigación del insecto permitieron una supervivencia entre 80 a 60%, respectivamente; sin embargo, con un tiempo de 16 o más horas, la mosquita murió en el tratamiento testigo (Figura 3). Es decir, la mosquita, en el tratamiento testigo, fue severamente afectada por las condiciones de confinamiento ≥ 16 h; si bien, con estos tiempos de confinamiento, la fumigación en todas sus dosis indujo una menor supervivencia del insecto que el tratamiento testigo. 100 Supervivencia (%) 80 a a Low doses of 0.5 and 2 µg ml-1 of acid used in times of eight hours of fumigation allowed survival between 80 to 60%, respectively; however, with time of 16 or more hours, whitefly died in control treatment (Figure 3). In other words, the whitefly in control treatment was extremely a a with 8 µg ml-1. A survival around 75% was detected from 45 min to 120 min after treatment with 2 µg ml-1; while when fumigation with 4 µg ml-1 survival decreased as fumigation time increased (Figure 2). b b c c c 60 d d d 40 20 0 e e ef e 4 8 16 Tiempo (horas) 24 f f f f 48 Figura 3. Supervivencia de Bemisia tabaci después de fumigarse con dosis bajas a 0.0 , 0.5 , 1 y 2 µg ml-1 de ácido acético por ml de aire, durante tiempos largos (hasta 48 h). Las barras de error representan la desviación estándar promedio de dos experimentos, n= 8. Letras distintas sobre las barras son diferentes según la prueba de comparación de medias Tukey p< 0.05. Figure 3. Survival of Bemisia tabaci after fumigation with low doses at 0.0 , 0.5 , 1.0 and 2.0 µg ml-1 of acetic acid per ml of air, during long times (up to 48 h). Error bars represent average standard deviation of two experiments, n= 8. Different letters on bars are different according to means comparison Tukey test p< 0.05. Dosis altas de 4 a 16 µg ml-1 del AA en tiempos de fumigación cortos de 5 a 10 min, resultaron en un incremento de la muerte del insecto conforme aumentó la dosis y el tiempo de fumigación, hasta que la supervivencia de la mosquita estuvo alrededor de 20, 10 y 5% después de fumigarse 10 min con 4, 8 y 16 µg ml-1 del ácido, respectivamente (Figura 4). Estos resultados tuvieron una marcada desviación estándar, la cual disminuyó al aumentar la dosis y tiempo de fumigación. En el análisis estadístico, en los experimentos efectuados en el laboratorio respecto a la supervivencia de B. tabaci, el tiempo, dosis y su interacción fueron significativos, affected by confinement conditions ≥ 16 h; although, with these confinement times, fumigation at all doses induced less survival of pest that control treatment. High doses of 4 to 16 µg ml-1 of AA in short fumigation times from 5 to 10 min, resulted in an increase in bug dead as fumigation doses and time increase, up to whitefly survival was around 20, 10 and 5% after fumigation with 4, 8 and 16 µg ml-1 of acid, respectively (Figure 4). These results had strong standard deviation, which diminished when increasing fumigation dose and time. Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo excepto, para la interacción dosis x tiempo en el experimento dosis alta - tiemplo corto. Mientras que, en el experimento en campo, la dosis, tiempo, variedades y la interacción de todas fueron significativas. En el experimento daño provocado por el AA en las hojas de las cuatro variedades de calabaza, la dosis y el tiempo fueron significativos y no así las variedades ni la interacción de tiempo, dosis, variedades (Cuadro 1). 100 419 Statistical analysis, in experiments made in laboratory respect survival of B. tabaci, time, dose and their interaction were significant, except for dose x time interaction in the high dose - short time experiment. While in field experiment dose, time, cultivars and all their interactions were significant. In the experiment the damage caused by AA in leaves of four squash cultivars, the dose and time were significant, but not the interaction time, doses, cultivars (Table 1). a a 80 b Supervivencia (%) 60 b 40 c c c c 20 0 5 7.5 Tiempo (minutos) c 10 Figura 4. Supervivencia de Bemisia tabaci después de fumigarse con dosis altas a 8 , 12 y 16 µg ml-1 de ácido acético por ml de aire, en tiempos cortos (hasta 10 min). Las barras de error representan la desviación estándar promedio de dos experimentos, n= 8. Letras distintas sobre las barras son diferentes según la prueba de comparación de medias Tukey p< 0.05. Figure 4. Survival of Bemisia tabaci after fumigation with high doses at 8.0 , 12.0 and 16.0 µg ml-1 of acetic acid per ml of air, in short times (up to 10 min). Error bars represent average standard deviation of two experiments, n= 8. Different letters on bars are different according to means comparison Tukey test p< 0.05. Cuadro 1. Análisis de varianza para los experimentos de fumigación de B. tabaci con ácido acético y daño del ácido en variedades de cala baza Table 1. Analysis of variance for fumigation experiments of B. tabaci with acetic acid and acid damage in squash cultivars. Variables Dosis Tiempo Dosis x Tiempo Variedad Dos x Tiempo x Variedad Fumigación dosis - tiempo: media-medio baja-largo alta-corto *** *** *** *** *** *** *** *** ns - Fumigación en campo *** *** ** ** ** Daño de calabaza *** *** ns ns ns *** = p< 0.001; ** = p< 0.05; ns = no significativo; - no se consideraron las variables. La fumigación de las hojas de la calabaza infestadas por B. tabaci indica que al aumentar la dosis (8-32 µg ml-1 de AA) y el tiempo (20-60 min) de fumigación el insecto disminuyó su supervivencia (Figura 5). Leaves fumigation of squash attacked by B. tabaci indicates that when increasing doses (8-32 µg ml-1 of AA) and time (20-60 min) of fumigation the pest decreased its survival (Figure 5). José Alfredo Samaniego Gaxiola et al. 420 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Supervivencia (%) 80 60 A a a 0 8 16 32 b c a b d d e e Barbara Sandy Muzquee Variedades 100 B AA ug ml-1 8 16 32 80 b 40 20 100 AA ug ml-1 Supervivencia (%) 100 60 40 c 20 e e d 0 Kikuza c e f Barbara Sandy Muzquee Kikuza Variedades C AA ug ml-1 8 16 32 80 Supervivencia (%) d e f c c d 60 40 20 e 0 Barbara d e f f Sandy f f f Muzquee f f Kikuza Variedades Figura 5. Supervivencia de Bemisia tabaci en hojas de calabaza después de fumigarse con 8 , 16 y 32 µg ml-1 de ácido acético por ml de aire. A, B y C indican 20, 40 y 60 min de fumigación respectivamente. Las barras de error representan la desviación estándar, n= 4. Letras distintas sobre las barras son diferentes según la prueba de comparación de medias Tukey p< 0.05. Figure 5. Survival of Bemisia tabaci in squash leaves after fumigation with 8.0 , 16.0 and 32.0 µg ml-1 of acetic acid by ml of air. A, B and C indicate 20, 40 and 60 min of fumigation, respectively. Error bars represent average standard deviation of two experiments, n= 8. Different letters on bars are different according to means comparison Tukey test p< 0.05. No obstante, el daño causado por el AA fue mayor a 50% en las hojas fumigadas, de todas las variedades, en todos los tiempos y dosis de fumigación, excepto en la dosis más baja usada (8 µg ml-1) y tiempo de fumigación de 20 min, que provocó un daño que osciló de 20 a 30% (Figura 6). Nevertheless, damage caused by AA was greater than 50% in leaves fumigated, of all cultivars, in all fumigation times and doses, except in the lowest dose used (8 µg ml-1) and fumigation time of 20 min, that caused damage that ranged from 20 to 30% (Figure 6). Discusión Discussion El modo de acción del AA sobre organismos implica el modificar el pH intracelular - extracelular (João et al., 1996; Uhre y Arneborg, 1998); afectar proteínas asociadas al ADN (histonas) (Hinnebusch et al., 2002); o irritando tejido como mucosas (Hamilton et al., 1998).Al irritar los tejidos elAApodría romper células provocando muerte necrótica, pero en dosis Action mode of AA over organisms implies modification of intracellular – extracellular pH (João et al., 1996; Uhre and Arneborg, 1998); make affection to associated proteins to DNA (histones) (Hinnebusch et al., 2002); or irritating tissue like mucous membranes (Hamilton et al., 1998). When irritating tissues AA could break cell causing necrotic death, Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo menores, el ácido puede mata células de manera no destructiva o muerte por apoptosis (Phillips et al., 2006). Nuestros resultados indican una muerte rápida de B. tabaci (desde cinco minutos) cuando se fumigó a dosis altas (> 8 µg ml-1) y una muerte lenta (hasta ocho horas) al fumigar con dosis bajas de 0.5 a 2 µg ml-1, lo que podría significar muerte necrótica con las dosis más altas y posiblemente muerte por apoptosis en dosis bajas. 100 A b Daño (%) 80 a b b c c a 60 Daño (%) b a b b b a b b d 20 0 20 40 0 60 C a a a 100 b c 80 b c a b c a a b b d 40 40 20 20 60 60 c 60 40 Tiempo (minutos) 40 d 20 20 D b 60 0 B 40 d 20 80 100 60 40 100 but in lower doses, acid could kill cells in non-destructive way or by apoptosis (Phillips et al., 2006). Our results indicate fast killing of B. tabaci (from five minutes) when fumigated at high doses (> 8 µg ml-1) and slow killing (up to which hours) when fumigated at low doses from 0.5 to 2 µg ml-1, which could mean necrotic death at higher doses and possibly death by apoptosis at low doses. 80 b 421 0 20 40 60 Tiempo (minutos) Figura 6 A-C. Daño en hojas de calabaza después de fumigarse con 8 , 16 y 32 µg ml-1 de ácido acético por ml de aire, hasta por 60 min. A, B, C y D corresponden a las variedades Bárbara, Sandy, Muzquee y Kikuza, respectivamente. Las barras de error representan la desviación estándar, n = 4. Letras distintas sobre las barras son diferentes según la prueba de comparación de medias Tukey p< 0.05. Figure 6 A-C. Damage in squash leaves after fumigation with 8.0 , 16.0 and 32.0 µg ml-1 of acetic acid per ml of air, up to 60 min. A, B, C and D correspond to cultivars Bárbara, Sandy, Muzquee and Kikuza, respectively. Error bars represent average standard deviation of two experiments, n= 8. Different letters on bars are different according to means comparison Tukey test p< 0.05. B. tabaci confinada > 8 h, indujo una disminución drástica de su supervivencia (Figura 4), esto afecta la interpretación de la fumigación después de dicho tiempo. La supervivencia (medias) de la mosquita tanto en testigo como dosis de fumigación fue B. tabaci confined > 8 h, induced a drastic decrease of its survival (Figure 4), this affects interpretation of fumigation after such time. Survival (means) of whitefly as well in control as in fumigation dose was higher at 24 h than at 422 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 mayor a las 24 h que a las 16 h (Figura 4); sin embargo, en ambos casos, las marcadas desviaciones estándar abarcan en varios casos los valores de ambos tiempos de incubación en cada dosis. Ello podría deberse a las características distintas de los insectos, tales como su tamaño, edad, sexo; es decir, en ambos tiempos de confinamiento o fumigación tendríamos algunos individuos que lograron sobrevivir debido posiblemente a las características mencionadas. El volumen reducido de aire, la humedad, el agua disponible y la ingesta de alimento de B. tabaci confinado en los frascos de 250 ml podrían haber afectado su supervivencia en tiempo > 8 h, por ello, futuras evaluaciones deberán de realizar ajustes necesarios al respecto. Al confinar la mosquita > 8 h, un mayor volumen de aire podría ser proporcionado al colocar el insecto en frascos de 1 L o más; también se podría colocar agua antes de cerrar los frascos, aunque habría que hacer cálculos que nos permitiesen estimar la concentración de AA en una atmósfera con una humedad relativa modificada por el agua añadida (Khan et al., 2005); el proporcionar alimento (hojas de calabaza) al insecto durante su confinamiento podría ser factible y ello podría determinar sí la falta de ingesta afecta su supervivencia, pero adicionar hojas en frascos donde se fumigue con AA provocara una captura del ácido por las hojas, pues se sabe que el AA es sumamente reactivo y puede entrar y salir del follaje (Staudt et al., 2000). El AA al gasificarse dentro de los frascos (donde permaneció la mosquita) se combina con el vapor de agua, en nuestro trabajo no medimos la humedad del aire contenido en los frascos; sin embargo, aún una humedad relativa tan baja como 30% que es común en La Laguna (Capel-Molina, 1980) contiene agua a razón de 6.9 g m-3 de aire (TIS, 2011), ésta cantidad equivale (agua - aire) a 6.9 µg ml-1. Cuando se adicionaron ≤ 4 µg ml-1 de AA, se hizo añadiendo 10 µL (ver materiales y métodos) de diluciones acuosas cuyo contenido de agua fue de 90 a 98.75%, lo que equivale a no menos de 36 µg ml-1 de agua. Esta cantidad de agua es suficiente para satura la atmósfera de los 250 ml de aire de los frascos. Por esto, nosotros pensamos que el AA a ≤ 4 µg ml-1 está en disolución y tiene efecto en matar al insecto; en contraste, el ácido adicionado en una cantidad mayor a la señalada actúa principalmente en forma de gas matando al insecto. Sí el AA puede matar a la mosquita en disolución, entonces, podría formularse y evaluarse como un insecticida asperjado. En el campo, el AA fue menos eficiente como fumigante de la mosquita blanca que en las evaluaciones realizadas en el laboratorio, algunas causas pudieron ser cierta pérdida de José Alfredo Samaniego Gaxiola et al. 16 h (Figure 4); however, in both cases the large standard deviations embrace values of both times of incubation in each dose in several cases. This would be due to different bugs characteristics, such as size, age, gender; i. e., in both confinement or fumigation times there would be some individuals that survive possible due to those characteristics. Reduced air volume, humidity, available water and food consumption of B. tabaci confined in 250 ml flasks would affect their survival in time > 8 h, by this reason, in further assessments should make required adjustments in this matter. When confining whitefly > 8 h, greater air volume could be supplied when placing the bug in 1 L flasks or larger; also water can be added before closing flasks, although calculations would be needed to define AA concentration in a modified relative humidity atmosphere by this additional water (Khan et al., 2005); supply food (squash leaves) to bug during its confinement would be feasible, but add leaves in flasks where there is fumigation with AA cause breaking of acid by leaves, since AA is very reactive and can get in and out of foliage (Staudt et al., 2000). AA when gasifies within f lasks (where whitef ly was kept) it combines with water steam, in our study we did not measure air moisture in flasks; however, even at a low relative humidity like 30% that is very common in La Laguna (Capel-Molina, 1980) it contains water at a rate of 6.9 g m-3 of air (TIS, 2011), this is equivalent (water-air) at 6.9 µg ml-1. When there was addition of ≤ 4 µg ml-1 of AA, it was made adding 10 µL (refer to materials and methods) of aqueous dilutions whose water content was of 90 to 98.75 %, which is equal to not less than 36 µg ml-1 of water. Such quantity of water is enough to saturate the atmosphere of 250 ml of air in flasks. By this reason, we think that AA at ≤ 4 µg ml-1 is in dissolution and has effect of killing bug; on the other hand, the acid added in a greater amount to mentioned acts mainly in gas form killing the insect. If AA can kill whitefly in dissolution, then, could formulate and assess like spray insecticide. In field, AA was less efficient like fumigant for whitefly than in assessments done in laboratory, some reasons would be acid loss when handling bags used for wrapping squash leaves, the adsorption of acid by leaf itself and their combination. Mortality of whitefly by variety was statistically different (Table 1), this because the different amount of whitefly actually present in each variety, but the amount and activity of whitefly per variety also could be influenced by time in which leaves were fumigated and the Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo ácido al manipular las bolsas donde se envolvieron las hojas de la calabaza, la absorción del ácido por la misma hoja y la combinación de ambos. La mortandad de la mosquita blanca por variedad fue estadísticamente distinta (Cuadro 1), esto podría deberse a distinta cantidad de mosquita presente en cada variedad, pero la cantidad y actividad de mosquita por variedad también podría estar influenciada por la hora en la que se fumigaron las hojas y el daño previo de las hojas por la mosquita. Por el contario, la fitotoxicidad de las hojas de calabaza fumigadas con AA fue similar para las cuatro variedades evaluadas. La aplicación práctica delAAcomo un fumigante para insectos es aún una posibilidad, particularmente se podría aplicar en sitios cerrados como lo podría ser invernaderos. Sin embargo, es necesario investigar sí dosis tan bajas como 0.5 a 2 µg ml-1 pudiesen ser efectivas al incrementar el tiempo de fumigación. Si bien, en este trabajo, se determinó que al incrementar el tiempo de fumigación hasta ocho horas, la supervivencia de B. tabaci descendió, lo mismo ocurrió al incrementar el tiempo de confinamiento del insecto por más de ocho horas (sin fumigar). Para evitar tiempos largos de confinamiento que afecten la supervivencia de la mosquita, se podría fumigar repetidas ocasiones, usando dosis bajas (0.5 a 2 µg ml-1) en tiempo igual o menor a ocho horas. Otra forma de mantener confinada a la mosquita tiempos mayores a ocho horas sin afectar su supervivencia, como se mencionó, podría ser el incubarla en recipientes de mayor volumen, sí esto funciona, entonces se podría ver el efecto del AA sobre el insecto a mayor tiempo. En contaste, el AA aplicado en un sistema cerrado, semejante al de atmósferas modificadas, podría incrementar la eficiencia de la dosis y disminuir el tiempo de fumigación, es decir, al incrementar la presión atmosférica en un sitio donde se mantenga confinado al insecto y se fumigue con AA, el ácido podría penetrar con mayor eficiencia al insecto y matarlo. Otras formas de aplicar el ácido acético como insecticida podría ser diluido en agua (volátil) y en forma líquida (aspersión). Al diluir 2 µg ml-1 de AA en agua en una proporción 1:10 este se volatilizó en poco más de dos min. Actualmente, las constantes de volatilización del AA y de otros ácidos grasos volátiles diluidos en agua ya se determinado experimentalmente (Khan et al., 1995). Si el AA se aplicara asperjado, se tendría que asegurar que penetrara B. tabaci, por esto, se requeriría por lo menos evaluar algún adherente y un coadyuvante. Los resultados de este trabajo, no determinaron sí la mosquita presenta efectos posteriores a su fumigación en dosis donde ellas lograron sobrevivir, por lo que también sería necesario realizar evaluaciones al respecto. 423 previous leaves damage by whitefly. On the other hand, the phytotoxicity of squash leaves fumigated with AA was similar for the four assessed varieties. The practical application of AA like fumigation system is still a possibility, in particular it could be applied in closed sites like greenhouses. However, is necessary to research if doses as low like 0.5 to 2 µg ml-1 could be effective when increasing the fumigation time. If although in this study, it was defined that when increasing the fumigation time up to eight hours B. tabaci survival decreased, the same occurred when increasing the confinement time by more than eight hours (with no fumigation). To avoid long confinement times that affect whitef ly survival, the process could be repeated several times, using low doses (0.5 to 2 µg ml-1) in time equal or less than eight hours. Another way to confine whitefly time longer than 8 hours without affecting its survival, like it was previously mentioned, would be incubating it in containers with larger volume. In case this works, then effect of AA would be seen on the bug at longer time. In contrast, AA applied in closes system, similar to modified environments, could increase dose efficiency and decrease fumigation time, that is, when increasing atmospheric pressure in a place where bug is confined and where it is fumigated with AA, the acid would penetrate with better efficiency to bug and kill it. Other ways to apply acetic acid would be diluted in water (volatile) and in liquid way (spray). When diluting 2 µg ml-1 of AA in water at 1:10 ratio it was volatilized in less than 2 minutes. Actually, the volatile constants of AA and other acids diluted in water has been experimentally defined (Khan et al., 1995). If AA is applied in spray, it would be sure that penetrates B. tabaci, by this, the need to assess some glue and emulsifier. The results of this study did not define if whitefly has effect after its fumigation in dose where they survived, therefore is necessary to assess this matter. A major limiting for AA like fumigation agent on agricultural products (fruits and vegetables) is its phytotoxicity (Sholberg et al., 2003; Sholberg, 2009), which was also detected in this work; by this reason, is key to use the lowest possible doses, maybe around 1 to 2 µg ml-1 of AA. AA and other AGV or AA in vinegar have been used for fumigation purposes in fruits to protect them from fungi like Botrytis cinerea Pers.:Fr., Monilinia fructicola Honey, José Alfredo Samaniego Gaxiola et al. 424 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Una limitante muy importante del AA como fumigante sobre productos agrícolas perecederos (frutos y verduras) lo es su fitotoxicidad (Sholberg et al., 2003; Sholberg, 2009), lo que también se observó en este trabajo; por tal motivo, es clave usar dosis lo más bajas posible, tal vez alrededor de 1 a 2 µg ml-1 de AA. El AA y otros AGV o el AA contenido en vinagre se han usado como fumigantes de frutos para protegerlos de hongos como Botrytis cinerea Pers.:Fr., Monilinia fructicola Honey, Penicillium expansum L. y Penicillium spp. (Sholberg, 1998; Sholberg et al., 2000). Este ácido también se empieza a utilizar para matar malezas (PANNA, 2010) y es responsable de mantener un buen ensilado (Danner et al., 2003). Por todo ello, el uso de AA como fumigante tiene un potencial importante, aunado a su bajo costo como ácido acético glacial, que de acurdo a nuestra estimación, su uso a 1, 8 y 32 µg ml-1 para fumigar un volumen de un m3 costaría 1, 12 y 50 centavos, respectivamente (sólo el costo de ácido). Adicionalmente, otros grupos de insectos fueron igualmente susceptibles al AA como pulgones; asimismo, este ácido tiene la capacidad de matar a hongos de almacén (Lerma-Valero et al., 2010) así como hongos fitopatógenos que habitan en el suelo (Conn et al., 2005; Samaniego-Gaxiola et al., 2008; Abbasi et al., 2009; Samaniego-Gaxiola, 2010). Por todo ello, la evaluación del AA como fumigante para disminuir las poblaciones de organismos perjudiciales es prometedora, pero requiere más investigación, particularmente encaminada a la manera en la que puede actuar según el ambiente aire o líquido, tanto en la parte aérea como dentro del suelo. Conclusiones El ácido acético mató a Bemisia tabaci en aproximadamente 90% cuando se fumigó con 8 y 12 µg ml-1 por 15 y 10 min, respectivamente. Dosis de AA de 8 µg ml-1 mataron al insecto entre 50-60% en lapsos de fumigación de dos a ocho horas. La supervivencia de la mosquita blanca se afectó (40-60%) después de confinarla entre 16 a 24 h, ello no permitió evaluar apropiadamente el efecto de la fumigación del AA a dosis de 0.5 a 2 µg ml-1. Las hojas de cuatro variedades de calabaza fumigadas para matar B. tabaci mostraron toxicidad al ácido, aunque el insecto murió en función de la dosis usada para fumigar y el tiempo de fumigación. Para obtener las dosis de AA < 8 µg ml-1, el ácido se diluyó en agua, luego se aplicó como fumigante a la mosquita, esto sugiere que el ácido actuó matando al insecto en forma de disolución. Penicillium expansum L. and Penicillium spp. (Sholberg, 1998; Sholberg et al., 2000). This acid is also started to be used to kill weeds (PANNA, 2010) and it is responsible to keep suitable silage (Danner et al., 2003). By all this, use of AA like fumigation agent has an important potential, together with its low cost like glacial acetic acid, which according to our estimation, its use at 1, 8 and 32 µg ml-1 to fumigate 1 m3 volume would cost 1, 12 and 50 cents, respectively (only acid cost). Also, other groups of insects were also susceptible to AA like aphids; besides, this acid has the ability to kill fungi (Lerma-Valero et al., 2010) as well as phytopathogen fungi that live in soil (Conn et al., 2005; Samaniego-Gaxiola et al., 2008; Abbasi et al., 2009; Samaniego-Gaxiola, 2010) y recently this acid has been effective to kill codling moth Cydia pomonella (Randall et al., 2011). By all previously mentioned, AA assessment like fumigation agent for prejudicial organisms is promising, but requires further research, in particular to the way that can be act according to the ambient air or liquid, as well in air as within soil. Conclusions Acetic acid killed Bemisia tabaci in nearly 90% when used at 8 and 12 µg ml-1 during 15 and 10 min, respectively. The dose 8 µg ml-1 of AA killed bug between 50-60% in fumigation times from two to eight hours. Survival of whitefly was affected (40-60%) after confining it between 16 and 24 h, which did not allow to properly assessing effect of AA fumigation at doses from 0.5 to 2 µg ml-1. The leaves of four squash varieties fumigated to kill B. tabaci showed toxicity to acid, although bug died in function to used dose and fumigation time. To obtain doses of AA < 8 µg ml-1, acid was diluted in water, then fumigant was applied to whitefly, this suggest that acid acted killing in dilution shape. End of the English version Literatura citada Abbasi, P. A.; Lazarovits, G. and Jabaji-Hare, S. 2009. Detection of high concentrations of organic acids in fish emulsion and their role in pathogen or disease suppression. Phytopathology. 99:274-281. Evaluación de ácido acético como fumigante de mosquita blanca Bemisia tabaci (Gennadious) en laboratorio y campo Brown, J. K.; Frohlich, D. R. and Rosell, R. C. 1995. The sweetpotato or silverleaf whitef lies: Biotypes of Bemisia tabaci or a species complex? Annual Review of Entomology. 40:511-534. Capel-Molina, J. J. 1980. La humedad relativa en los Estados Unidos Mexicanos. Paralelo 37. 4:175-190. Center for Invasive Species Research, University of California Riverside. 2010. The silverleaf whitefly, Bemisia. URL: http://cisr.ucr.edu/silverleaf_whitefly.html. Conn, K. L.; Tenuta, M. and Lazarovits, G. 2005. Liquid swine manure can kill Verticillium dahliae microsclerotia in soil by volatile fatty acid, nitrous acid, and ammonia toxicity. Phytopathology. 95:28-35. Danner, H.; Holzer, M.; Mayrhuber, E. and Braun R. 2003. Acetic acid increases stability of silage under aerobic conditions. Appl. Environ. Microbiol. 69:562-567. Goepfert, J. M. and Hicks, R. 1969. Effect of volatile fatty acids on Salmonella typhimurium. J. Bacteriol. 97:956-958. Hamilton, T. D. C.; Roe, J. M.; Hayes, C. M. and Webster, A. J. F. 1998. Effects of ammonia inhalation and acetic acid pretreatment on colonization kinetics of toxigenic Pasteurella multocida within upper respiratory tracts of swine. J. Clinical Microbiol. 36:1260-1265. Hinnebusch, F. B.; Meng, S.; Wu, T. J.; Archer, Y. S. and Hodin, A. R. 2002. The effects of short-chain fatty acids on human colon cancer cell phenotype are associated with histone hyperacetylation. J. Nutrition. 132:1012-1017. Khan, I.; Brimblecombe, P. and Clegg, S. L. 1995. Solubilities of pyruvic acid and the lower (C1-C6) carboxylic acids. Experimental determination of equilibrium vapour pressures above pure aqueous and salt solutions. J. Atmos. Chem. 22:285-302. João, S. M.; Miranda, L.; Corte-real, M. and Leâo, C. 1996. Transport of acetic acid in Zygosaccharomyces bailii: effects of ethanol and their implications on the resistance of the yeast to acidic environments. Appl. and Environ. Microbiol. 62:3152-3157. Lerma-Valero, E.; Samaniego-Gaxiola, J. A.; Cueto-Wong, M. C. y Balagurusamy, N. 2010. Fumigación de granos de maíz y algodón con ácido acético. Memoria de resúmenes. XXII Semana Internacional de Agronomía. UJED - FAZ. Gómez Palacio, Durango, México. 1277 p. 425 Pernal, S. F.; Ibrahim, A. and Melathopoulos, A. P. 2010. Disinfection of Nosema ceranae -contaminated comb by irradiation, acetic acid fumigation and heat. Bee Research Conference. Orlando, Fl. January 15th, 2010. URL: http://www.extension.org/pages/ ABRC2010_Disinfection_of_Nosema_ceranae_ Infected _ Comb _ by _ Irradiation _ Acetic _ Acid _ and_Heat. Pesticide Action Network North America Chemical Summary for Acetic acid from. (PANNA, 2010). http://www.pesticideinfo.org/Summary_Chemical. jsp?Rec_Id=PC32883. Phillips, J. A.; Crowe, D. J. and Ramsdale, M. 2006. Ras pathway signaling accelerates programmed cell death in the pathogenic fungus Candida albicans. Proc. Natl. Acad. Sci. 103:723-731. Samaniego-Gaxiola, J. A. 2010. Ácido acético como inductor de muerte de Phymatotrichopsis omnivora Hennebert. Memoria de resúmenes. XXII Semana Internacional de Agronomía. UJED - FAZ. Gómez Palacio, Durango, México. 1277 p. Samaniego-Gaxiola.; J. A.; Cueto-Wong, C. y PedrozaSandoval. 2008. Efecto fungistático y fungicida del ácido acético y aceite de esencial de orégano sobre los esclerocios de Phymatotrichopsis omnivora in vitro. Memoria de resúmenes. XX Semana Internacional de Agronomía. UJED - FAZ. Gómez Palacio, Durango, México. 897 p. Satatistical Analysis System Institute (SAS) 1999. SAS/ STAT. Userʼs Guide. Version 8.1. SAS Publishmg, Cary, N. C. 3848 p. Shafiur, R. M. Food preservation: overview. 2007. In: Shafiur, R. M, (edit.). Handbook of food preservation. 2da ed. CRC Press, USA. 3-18 pp. Sholberg, P. L. 1998. Fumigation of fruit with short-chain organic acids to reduce the potential of postharvest decay. Plant Dis. 82:689-693. Sholberg, P. 2009. Control of postharvest decay by fumigation with acetic acid or plant volatile compounds. In: Sivakumar, D. (Ed.) New trends in postharvest management of fresh produce I. Fresh Produce 3 (Special Issue 1), 80-86. http:// www.globalsciencebooks.info/JournalsSup/ images/0906/FP_3(SI1)80-86o.pdf. Sholberg, P. L.; Haag, P.; Hocking, R. and Bedford, K. 2000. The use of vinegar vapor to reduce post harvest decay of harvested fruit. HortScience. 35:898-903. 426 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Sholberg, P.; Shepard, T. and Moyls, L. 2003. Monitoring acetic acid vapour concentrations during fumigation of fruit for control of post harvest decay. Canadian Biosystems Eng. 45:313-317. Sistema de Información Agroalimentaria y Pesca (SIAP). 2010. Secretaría de Agricultura, Ganadría, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación. http:// www.siap.gob.mx/index.php?option=com_content &view=article&id=286&Itemid=428. Staudt, M.; Wolf, A. and Kesselmeier, J. 2000. Influence of environmental factors on the emissions of gaseous formic and acetic acids from orange (Citrus sinensis L.) foliage. Biogeochemistry. 48:199-216. José Alfredo Samaniego Gaxiola et al. Transport Information Center (TIS.). 2011. Climate/ humidity Table. http://www.tis-gdv.de/tis_e/misc/ klima.htm. Uhre, G. L. andArneborg, N. 1998. Measurement of the effects of acetic acid and extracellular pH on intracellular pH of nonfermenting, individual Saccharomyces cerevisiae cells by fluorescence microscopy. Appl. Environ. Microbiol. 64:530-534. Urias-López, M. A.; Byerly-Murphy, K. F.; Osuna-García, J. A. y García-Berber, A. 2005. Incidencia de (Hemiptera: Aleyrodidae), áfidos (Hemptera: Aphididae) y virosis en melón en Jalisco MéxicoFolia Entomol. Mex. 44:321-337. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 427-439 Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka* Chemical control of Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) in Persian lime Citrus latifolia Tanaka Luis Martín Hernández-Fuentes1§, Mario Alfonso Urias-López1, José Isabel López-Arroyo2, Rafael Gómez-Jaimes1 y Néstor Bautista-Martínez3 Campo Experimental Santiago Ixcuintla- INIFAP. Entronque a Santiago Ixcuintla, km. 6. Carretera Internacional México-Nogales. Santiago Ixcuintla, Nayarit. C. P. 63300. Tel. 01 323 2352031. ([email protected]), ([email protected]). 2Campo Experimental General Terán- INIFAP. General Terán, Nuevo León. A. P. 3. C. P. 67400. Tel. 01 826 2670539. ([email protected]). 3Colegio de Postgraduados-Campus Montecillo. Carretera México-Texcoco, km. 36.5 Montecillo, Texcoco, Estado de México. C. P. 56230. Tel. 01 595 9520200. ([email protected]). §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract A nivel mundial, la citricultura representa una actividad de gran importancia. México ocupa el cuarto lugar mundial en producción. Debido a la introducción y dispersión del vector D. citri en todas las zonas citrícolas de México y la reciente detección de la enfermedad conocida como huanglongbing causada por la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus, es necesaria la evaluación de métodos de control de este insecto. En el año 2010 en Nayarit, México, se realizaron pruebas de efectividad técnica en campo y persistencia de productos químicos de diferente mecanismo de acción contra D. citri en lima persa. Se hicieron dos evaluaciones en fechas distintas. En cada ensayo se evaluó número de ninfas por brote y porcentaje de brotes infestados. De los productos evaluados el dimetoato, imidacloprid y la mezcla de imidacloprid más betaciflutrina ejercieron más de 85% de control de ninfas durante 27 días después de la aplicación. En los árboles tratados con dimetoato e imidacloprid en dosis de 400 mL y 300 mL ha-1, respectivamente, se observó 100% de brotes libres de ninfas de D. citri a los 27 días después de la aplicación. El aceite agrícola en dosis de dos y tres L ha-1 ejerció menor control de ninfas de D. citri. Citrus crops represent an outstanding activity at worldwide level. Mexico ranks fourth place in production. Due introduction and dispersion of D. citri vector in all citric zones from Mexico and the newly detected disease known as huanglongbing (HLB) caused by Candidatus Liberibacter asiaticus bacteria, assessment of control methods for this bug is required. In 2010, technical effectiveness in field and persistence for different action route against Persian lime D. citri chemical products tests were performed in Nayarit, Mexico. Two assessments were made at different dates. The amount of nymphs per shoot and percentage of infested shoots were assessed in each rehearsal. From evaluated products, dimethoate, imidacloprid and the mixture of imidacloprid and β-cyfluthrin exerted more than 85% percent of control against nymphs during 27 days after application. In trees treated with dimethoate and imidacloprid in 400 mL and 300 mL ha-1 dose, respectively, 100% of shoots free of D. citri nymphs at 27 days after application was observed. Agricultural oil in two and three L ha-1 dose exerted less control against D. citri nymphs. Palabras clave: Diaphorina citri, control químico, dítricos. Key words: Diaphorina citri, chemical control, citric. * Recibido: junio de 2011 Aceptado: enero de 2012 Luis Martín Hernández-Fuentes et al. 428 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Introducción En México, la superficie establecida de cítricos supera las 510 mil hectáreas, las cuales producen un promedio anual de 6.97 millones de toneladas de frutas (SIAP, 2008) lo que sitúa al país en el cuarto lugar mundial en producción (FAOSTAT, 2007). De la superficie establecida, 66.56% corresponde a naranja en sus diferentes variedades, 17.41% a limón mexicano, 13.02% a lima persa y el resto a mandarinas, tangerinas y pomelos. En México, diversas plagas se encuentran asociadas a los cítricos, es el caso del psílido asiático de los cítricos (PAC) Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae). Este insecto destaca por su importancia como vector de la bacteria causante de la enfermedad conocida como enverdecimiento de los cítricos o Huanglongbing (HLB) Candidatus Liberibacter asiaticus, la cual fue detectada en el estado de Yucatán en 2009 en muestras del vector (SENASICA, 2009). Hasta el momento la bacteria se ha detectado en 18 municipios de México (SINAVEF, 2010). El HLB es de las enfermedades más destructivas de cítricos, los árboles enfermos se vuelven improductivos y al paso del tiempo estos mueren (Bove, 2006). Las primeras detecciones del PAC se realizaron en 2002 en la Península de Yucatán, actualmente se encuentra en todos los estados productores de cítricos. El PAC se alimenta de especies de la familia Rutácea, ataca especies silvestres y cultivadas, principalmente limas y limones (Aubert, 1987), se le asocia con 56 especies de cítricos (Halbert y Manjunath, 2004); el insecto provoca daños directos al alimentarse del floema de los brotes tiernos y en fuertes infestaciones provoca deformación de los brotes, caída de follaje y flores (Rogers y Stansly, 2006). Las ninfas de cuarto y quinto instar al igual que los adultos son capaces de transmitir la enfermedad (EPPO, 2005). Diversos métodos y estrategias de control se han empleado para enfrentar tanto el vector como la enfermedad, se menciona que el manejo de esta enfermedad estará basado en el control del insecto vector al igual que la eliminación de fuentes de inoculo por medio de la erradicación de los árboles enfermos y el establecimiento de anillos fitosanitarios alrededor de dichos arboles (Chiou, 1998). Sin embargo, hasta el momento no se conoce ningún método de erradicación efectivo para el vector (McFarland y Hoy, 2001). Introduction In México, surface settled with citric fruits overcomes 510 mil hectares, which yield an average of 6.97 millions of tons of fruits (SIAP, 2008), reaching fourth place worldwide production (FAOSTAT, 2007). From settled surface, 66.56% corresponds to orange in its different varieties, 17.41% to Mexican lemon, 13.02% to Persian lime and the remaining portion to mandarines, tangerines and grapefruits. In Mexico, diverse plagues are related to citric trees, like in the case of Asian citrus psyllid (PAC) Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae). This bug outstands as vectored bacteria causing disease known like citrus greening disease or Huanglongbing (HLB) Candidatus Liberibacter asiaticus, which was detected in Yucatán in 2009 in vector samples (SENASICA, 2009). Up to now, bacteria has been detected in 18 municipalities from Mexico (SINAVEF, 2010). HLB is one of the most destructive citric trees diseases, affected trees become unproductive and when time elapses they die (Bove, 2006). First PAC detections were performed in 2002 in Yucatán peninsula, currently it exists in all citric producer states. PAC feeds from species of Rutaceae family, attacks wild and harvested species, mainly limes and lemons (Aubert, 1987), it is related with 56 citric species (Halbert and Manjunath, 2004); bug causes indirect damages when feeding from tender shoots phloem and in strong infections cause shoots deformation, foliage and flowers fall (Rogers and Stansly, 2006). Such as adult, fourth and fifth level nymphs are able to cause transmission of disease (EPPO, 2005). Diverse control methods and strategies have been used to face as well vector as disease, it is informed that this disease’s handling will be based in bug vector control as well as inoculums sources removal by elimination of affected trees and settling of phytosanitary rings around such trees (Chiou, 1998). Nevertheless, up to now any effective vector elimination method is not known (McFarland and Hoy, 2001). Several chemical insecticides and oil based oils have been assessed against PAC with promising results (Dahiya et al., 1994; Childers and Rogers, 2005). Systemic insecticide imidacloprid is one of the most widely used (Llorens, 2007). D. citri effective control without damage Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka Diversos insecticidas químicos y aceites derivados de petróleo han sido evaluados contra PAC con resultados alentadores (Childers y Rogers, 2005; Dahiya et al., 1994). El insecticida sistémico imidacloprid ha sido uno de los más empleados (Llorens, 2007). Un control efectivo de D. citri sin daños a los enemigos naturales se obtuvo con aplicaciones de monocrotofos 10% con ayuda de una brocha en la base de las ramas (Lin et al., 1973). Los aceites derivados de petróleo han demostrado un control efectivo de las ninfas de D. citri en condiciones de campo (Rae et al., 1997). El uso racional de productos químicos contra plagas implica, entre otras acciones, una rotación de estos con diferentes mecanismos de acción. Diversos autores(as) refieren distintos modos de acción de los aceites minerales: la teoría principal es que ejercen su acción por sofocación y obstruye la entrada de aire en los espiráculos (Smith y Pearce, 1948). Por su parte, Stadler y Buteller (2009) indicaron que es más probable que penetre a través de poros en el integumento y el volumen de penetración dependerá de dos factores: la especie de insecto y el tipo de aceite. Una investigación reciente realizada por Najar et al. (2008), pone en entredicho la teoría de anoxia al demostrar que el modo de acción del aceite mineral se asocia con sus propiedades lipofílicas. Cuando el aceite entra en contacto con el insecto se involucran fuerzas capilares y complejos fenómenos físicos, que finalmente provocan desecación y ablandamiento de la cutícula lo cual trae consigo deshidratación y sofocación (Stadler y Buteller, 2009). El imidacloprid se utiliza para el control de plagas en una amplia gama de cultivos y en programas de salud animal; ejerce su acción agonista en los receptores postsinápticos de acetilcolina (IRAC, 2009) sitio muy específico de los insectos que le confiere baja toxicidad para mamíferos (Liu et al., 2005; Phua et al., 2009), existen además fuertes evidencias que actúa en otras proteínas de esta clase (Tomizawa y Casida, 2005). El imidacloprid al aplicarse al follaje, semillas o suelo se mueve hacia los puntos de crecimiento (Tomizawa y Casida 2005). Otro insecticida comúnmente utilizado contra insectos chupadores es el dimetoato, el cual se ha empleado en huertos con baja tasa de infestación de D. citri. Es un producto utilizado desde hace algunos años en México. Inhibe la acción de la acetilcolinesterasa (IRAC, 2009). Un producto de reciente introducción a México, es el espirotetramato. Éste se caracteriza por presentar movimiento acropetala y basipétala dentro de la planta, es un derivado del ácido espirocicliclo tetramico (Bretschneider et al., 2007, citados por Nauen et al., 2008), inhibe la síntesis de lípidos, razón por la cual es particularmente efectivo contra insectos chupadores en las primeras fases de su desarrollo (Nauen et al., 2008). A 429 to natural enemies was obtained in 10% monocrotophos applications with help of brush at bushes base (Lin et al., 1973). Petroleum-based oils had proved effective control against D. citri nymphs in field conditions (Rae et al., 1997). Rational use of chemical products against plagues implies, among other actions, their rotation with different action means. Several authors refer different mineral oils’ action paths: main theory is that exert their action by suffocation and obstructs air intake to spiracles (Smith and Pearce, 1948). On the other hand, Stadler and Buteller (2009) stated that is more likely that they penetrate trough pores in integument and penetration volume will depend on two factors: bug species and oil type. A recent research performed by Najar et al. (2008) rejects anoxia theory proving that mineral oil action path is related to its lipophilic properties. When oil gets in contact with bug capillary forces and another complex phenomena is involved, which finally provoke cuticle desiccation and softening leading to dehydration and suffocation (Stadler and Buteller, 2009). Imidacloprid is used for plagues control in wide range of crops and animal health campaigns; its antagonist activity is exerted by acetylcholine postsynaptic receptors (IRAC, 2009) very specific site in the insects that confers low toxicity to mammals (Liu et al., 2005; Phua et al., 2009), also there are strong evidences that acts in other proteins of this type (Tomizawa and Casida, 2005). When applied to foliage, seeds or soil, imidacloprid moves towards growth points (Tomizawa and Casida, 2005). Another commonly used insecticide against bugs is dimethoate, which has been used in orchards with low D. citri infestation rate. It is a product used since some years ago in Mexico. Inhibits action of acetylcholinesterase (IRAC, 2009). Spirotetramat is a recently introduced product in Mexico. This is characterized by acropetal and basipetal motion within plant. It is a derivative of spirocyclic tetramic acid (Bretschneider et al., 2007, quoted by Nauen et al., 2008), inhibits lipids synthesis, which is very effective against sucking bugs in first development stages (Nauen et al., 2008). At physiological level blocks action of acetyl coenzyme A carboxylase (IRAC, 2009), enzyme responsible for lipids synthesis. The aim of this study was to assess biological efficiency and persistence of chemical products of different path of action against D. citri in Persian lime to obtain more options of chemical control for this plague in Mexico. Luis Martín Hernández-Fuentes et al. 430 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 nivel fisiológico bloquea la acción de la acetilcoenzima A carboxilasa (IRAC, 2009) enzima responsable de la síntesis de lípidos. El objetivo de este estudio fue evaluar la eficacia biológica y la persistencia de productos químicos de diferente modo de acción sobre D. citri en lima persa para contar con mayores alternativas de control químico de esta plaga en México. Materiales y métodos Se realizaron dos ensayos, uno en el periodo de lluvias de julio a agosto y otro al finalizar estas de octubre a diciembre de 2010. La primera evaluación se realizó en un huerto de seis años de edad, ubicado en los terrenos del ejido La Fortuna, en el municipio de Tepic, Nayarit, a una altura de 743 msnm. El diseño de plantación fue de seis metros en marco real con una densidad de 286 árboles por hectárea. La ubicación geográfica del huerto es: 21° 33’ 23’’ latitud norte y 104° 57’ 11’’ longitud oeste. La segunda evaluación se hizo en un huerto de 5 años de edad, con la misma densidad de plantas y en la misma localidad en las siguientes coordenadas: 21° 33’ 33.15” latitud norte y 104° 57’ 23.3” longitud oeste, ubicado a una altura de 717 msnm. Se realizó una poda antes de las aplicaciones con el fin de estimular el desarrollo vegetativo de los árboles y contar con suficientes brotes jóvenes para el muestreo, se eliminaron “chupones”, ramas bajas y enfermas y aquellas internas que se entrecruzaban. En ambos periodos se utilizó el mismo método, excepto que en la segunda evaluación se agregaron dos tratamientos a los utilizados en el primer ensayo (Cuadro 1). Materials and methods Two essays were performed, one in rain season from July to August and other afterwards from October to December 2010. First essay was performed in six years old orchard, located in lands of ejido La Fortuna, in the municipality of Tepic, Nayarit, at 734 masl. Plantation design was six meters in real frame with density of 286 trees per hectare. Its geographical location is: 21° 33’ 23’’ north latitude and 104° 57’ 11’’ west longitude. Second essay was performed in a 5 years old orchard, with the same plants density and same location in the following coordinates: 21° 33’ 33.15” north latitude and 104° 57’ 23.3” west longitude, at a height of 717 masl. Pruning was made before applications with the aim to stimulate vegetal trees development and have enough young shoots for sampling, low and ill branches, and small shoots were removed and those internal with intercross. In both periods the same method was used, except for second assessment in which two treatments were added to the used in the first essay (Table 1). Treatments application. Manual backpack spray with 15 L capacity, 87 psi and extension rod with conic nozzle was used. Spray was made towards tree canopy. In the firs test two applications were made at an interval of 20 d. In the second only one application was performed in order to assess besides efficiency, persistence of each ingredient. Water consumption per tree in both studies was of 0.6 L. Experimental design and statistical analysis. Complete random blocks design with five repetitions per treatment was used. Before making analysis of variance of studied Cuadro 1. Ingredientes activos y dosis de productos comerciales evaluados contra D. citri en lima persa. Table 1. Active ingredients and dose of products assessed against D. citri in Persian lime. *Tratamiento/ingrediente activo (i. a.) aceite mineral aceite mineral espirotetramato espirotetramato Dimetoato Dimetoato Imidacloprid Imidacloprid imidacloprid + betaciflutrina imidacloprid + betaciflutrina Testigo G L-1 de i. a. en producto comercial 980 150 400 350 210 + 90 *Los tratamientos con imidacloprid más betaciflutrina sólo se evaluaron en el segundo periodo. dosis de producto comercial (L ha-1) 2.0 3.0 0.2 0.4 0.2 0.4 0.15 0.3 0.15 0.3 Sólo agua Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka Aplicación de los tratamientos. Se utilizó un aspersor manual de mochila de 15 L de capacidad, 87 libras de presión y lanza de extensión con boquilla de cono lleno. La aspersión se dirigió a la copa del árbol. En la primera evaluación se realizaron dos aplicaciones con un intervalo de 20 días. En la segunda sólo se aplicó en una ocasión con el objeto de evaluar, además de la eficacia, la persistencia de cada ingrediente evaluado. El gasto de agua por árbol en ambos estudios fue de 0.6 L. Diseño experimental y análisis estadístico. Se utilizó un diseño en bloques completos al azar con cinco repeticiones por tratamiento, cada árbol se considero una repetición. Antes de realizar análisis de varianza de las variables examinadas, se verificó homogeneidad de varianza entre tratamientos con la prueba de Levene (Montgomery, 2008) y que los datos se distribuyeran de manera normal (α≥ 0.05). El análisis estadístico se realizó con el programa SAS (2008) versión 9.2. En los muestreos donde se observó diferencias entre tratamientos, se realizó comparación de medias con la prueba de Tukey (α≤ 0.05). Previo a las aplicaciones, se llevó a cabo un muestreo de las variables estudiadas para observar que estas fueran iguales estadísticamente (α≤ 0.05); en caso de existir diferencias estas podrían influir como covariables en los resultados finales; el análisis de covariables y la distribución de tratamientos en bloques al azar son útiles para mejorar la precisión de estos experimentos (Montgomery, 2008). Variables. Brotes infestados y ninfas por brote. En cada punto cardinal del árbol se colectó un brote de 8 centímetros de longitud, en total se colectaron 20 brotes por tratamiento en cada muestreo, aquellos brotes donde se observaron ninfas vivas se consideraron infestados. Se contó el total de ninfas por brote, estos se colocaron bajo un estereoscopio marca Carl Zeiss para diferenciar con mayor facilidad las ninfas vivas de las muertas. Durante las observaciones, se registró temperatura media diaria, humedad relativa y precipitación, los datos se tomaron de la estación climática ubicada en Tepic, Nayarit de la red estatal del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP). Resultados y discusión Primera evaluación Ninfas por brote. En la prueba de igualdad de varianzas y normalidad de las variables observadas en ambos estudios, no ocurrieron diferencias significativas 431 variables, variance homogeneity between treatments was verified with Levene test (Montgomery, 2008) and data were normally distributed (α≥ 0.05). Statistical analysis was made with SAS software (2008) version 9.2. In samples were differences between treatments were detected, Tukey test (α≤ 0.05) to compare average values was performed. Prior to applications, studied variables sampling was made to assure they were statistically different (α≤ 0.05); if differences were found, they can affect as co-variables in final results; co-variables analysis and treatments distribution in random blocks are useful to improve precision of these experiments (Montgomery, 2008). Variables. Infested shoots and nymphs per shoot. In each side of the tree (n, s, w, e) 8 cm length shoot was collected, for a total of 20 shoots per treatment in each sampling, those shoots where live nymphs were detected are considered infested. Total nymphs per shoot were counted, and put under stereoscope Carl Zeiss to easily differentiate live nymphs from dead ones. During observations, daily average temperature, relative humidity and rain were recorded; data were taken from weather station located at Tepic, Nayarit from state network of National Research Institute for Agricultural, Forestry and Livestock (INIFAP). Results and discussion First evaluation Nymphs per shoot. In the test of variance similarity and in normality of observed variables in both studies, there were no significant differences (α≤ 0.05). Quantity of nymphs per shoot in previous sampling to application was statistically equal (Table 2). In first sampling, six days after applications, greatest nymphs population occurred, treatments with spirotetramat in their lower dose, dimethoate in two doses and imidacloprid with higher dose were statistically different to control. Dimethoate and imidacloprid treatment in highest dose were outstanding since compared to control their effectiveness was 98.8 and 90.7%, respectively (Table 2). A statistically similar control at 7 days after application was observed by Ahmed et al. (2004) when assessing dimethoate and imidacloprid with commercial dose of 0.74 L ha-1 and 0.61 kg ha-1, respectively. Luis Martín Hernández-Fuentes et al. 432 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 (α≤ 0.05). El número de ninfas por brote en el muestreo previo a las aplicaciones fue igual estadísticamente (Cuadro 2). In second sampling, 13 days after second application, significant differences were observed between treatments. Dimethoate at assessed dose exerted more than 95.3% of Cuadro 2. Ninfas de D. citri por brote antes y después de la aplicación de diferentes productos químicos en Limón Persa. Nayarit, México. 2010. Table 2. D. citri nymphs per shoot before and alter application of different chemicals products in Persian lemon. Nayarit, Mexico. 2010. Tratamiento (L.ha-1) aceite mineral (2) aceite mineral (3) espirotetramato (0.2) espirotetramato (0.4) dimetoato (0.2) dimetoato (0.4) imidacloprid (0.15) imidacloprid (0.3) Control Valor de F Ninfas/brote ± error estándar 17-jun* 1.2±0.4 9.9± 5.0 7.2±5.9 0.9±0.2 2.2±1.4 1.3±0.8 3.3±1.5 1.1±0.3 2.8±1.9 1.34 6 dda** 14.4±5.6ab 19.5±6.1ab 8.3±5.9b 24.9±5.7ab 6.5±5.9b 0.5±7.4b 19.6±6.4ab 4.1±6.5b 44.4±6.6a 4.25 13 dda 10.8±2.5ab 8.0±2.6bc 5.9±2.0bcd 4.8±2.3bcd 0.8±2.3d 0.3±1.1d 2.2±1.5cd 1.8±1.3cd 17.3±1.3a 16.12 20 dda 6.1±1.9a 2.7±1.7abc 1.95±1.7bc 1.3±0.9bc 1.1±0.8bc 0.0±0.8c 1.6±0.7bc 0.3±0.7c 4.4±0.8ab 6.02 27 dda 1.15±0.4ab 1.8±0.4a 1.0±0.3ab 0.15±0.3b 0.55±0.5ab 0.0±0.5b 0.85±0.5ab 0.0±0.5b 1.95±0.5a 5.52 Media final 8.43±2.01ab 7.89±2.18b 4.28±0.92b 7.79±1.85b 2.23±1.02b 0.2±0.11b 6.06±1.97b 1.54±00.84b 16.99±5.06a 7.21 *Muestreo previo a las aplicaciones. **dda: días después de la aplicación. Medias con distinta letra, difieren significativamente, Tukey (α≤ 0.05). En el primer muestreo, seis días después de las aplicaciones, ocurrió la mayor población de ninfas, los tratamientos con espirotetramato en su dosis menor, dimetoato en las dos dosis e imidacloprid con la dosis mayor fueron diferentes estadísticamente al control. Destacaron los tratamientos con dimetoato e imidacloprid en la dosis mayor, pues comparados con el control ejercieron 98.8% y 90.7% de control, respectivamente (Cuadro 2). Ahmed et al. (2004) al evaluar dimetoato e imidacloprid con dosis de producto comercial de 0.74 L ha-1 y 0.61 kg ha-1, respectivamente, observaron un control estadísticamente igual a los 7 días después de la aplicación. Los tratamientos con espirotetramato en la dosis mayor y dimetoato en la dosis menor, ejercieron un control 81.3% y 85.3%, respectivamente. En el segundo muestreo, 13 días después de la segunda aplicación, se observaron diferencias significativas entre los tratamientos. El dimetoato con las dosis evaluadas, ejerció control de más de 95.3%, seguido por imidacloprid 89.5% de control respecto al testigo. En la penúltima fecha de muestreo, 20 días después de la aplicación ocurrieron diferencias estadísticamente significativas entre tratamientos. El dimetoato con la dosis mayor ejerció 100% de control, los control, followed by imidacloprid with 89.5% of efficiency when compared to control. In second to last date of sampling, 20 days after application, significant statistically differences between treatments occurred. Dimethoate with higher dose exerted 100% effectiveness, treatments with spirotetramat, dimethoate and imidacloprid at lower dose were statistically equal between them and different to control, these exerted nymphs control above 54%; in this sampling mineral oil in lower dose showed statistically same number of nymphs per shoot than control. With oil it was perceived a relatively low effectiveness compared to control, in general showed few effectiveness (50.3% in average) even in sampling after second application (27 days) control was least 41%. Mineral oil control over D. citri nymphs is better on 1st and 2nd instar nymphs and better results are obtained applying it in preventive way, before adults arrive (Rae et al., 1997). At five and 13 days after application of 46.7 L ha-1 of mineral oil at 97% in orange Childers and Rogers (2005) obtained satisfactory control results. Nevertheless, this control was not significant at 13 days alter application. Difference with regards dose used by Childers and Rogers (2005) in this research is very wide. In last sampling date, 27 days after application, number of nymphs on control samples Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka 433 tratamientos con espirotetramato, dimetoato e imidacloprid en la dosis baja fueron iguales estadísticamente entre si y diferentes al control, estos ejercieron control de ninfas de más de 54%; en este muestreo el aceite mineral en la dosis menor presentó estadísticamente igual número de ninfas por brote que el control. Con el aceite se percibió un control relativamente bajo comparado con el control, en general mostró poca efectividad (50.3% en promedio) incluso en el muestreo después de la segunda aplicación (27 días) el control fue menor 41%. El aceite mineral sobre las ninfas de D. citri tiene mayor control sobre ninfas de 1er y 2do instar y se obtienen mejores resultados aplicándolo en forma preventiva, antes de la llegada de los adultos (Rae et al., 1997). Resultados satisfactorios de control obtuvieron Childers y Rogers (2005) a los cinco y 13 días después de la aplicación de 46.7 L.ha-1 de aceite mineral a 97% en naranja. No obstante, este control fue insignificativo a los 13 días después de la aplicación. was lower than previous sampling, which would period from egg to nymph conclusion, which is of 29.6 days at an average temperature of 22 °C (Nava et al., 2007), conditions similar to this study conditions (Figure 1); however, at this population level, significant differences were detected between treatments. Statistically best treatments were the ones with higher doses of dimethoate, imidacloprid and spirotetramat; first two obtained 100% effectiveness, while the latter obtained 90% effectiveness. Bahagabati and Nariani (1983), when applying dimethoate 0.06% and 0.03% in four times every seven days, detected 100% effectiveness against D. citri during 28 days. La diferencia con respecto a la dosis utilizada por Childers y Rogers (2005) esta investigación es muy amplia. En la última fecha de muestreo, 27 días después de la aplicación, el número de ninfas en el control llegó a estar por debajo del muestreo previo, lo cual indicaría la conclusión del periodo de huevo a ninfa el cual es de 29.6 días a una temperatura media de 22 °C (Nava et al., 2007), condiciones similares ocurridas durante este estudio (Figura 1); no obstante, con este nivel poblacional, se observaron diferencias significativas entre los tratamientos. Los tratamientos con las dosis mayores de dimetoato, imidacloprid y espirotetramato fueron, estadísticamente, los mejores tratamientos; los dos primeros ejercieron 100% mientras que el último 90% de control. Bahagabati y Nariani (1983) al aplicar dimetoato 0.06% y 0.03% de producto comercial en cuatro ocasiones cada siete días, observaron controles 100% de D. citri durante 28 días. 40 Porcentaje de brotes infestados con ninfas. Seis días después de las aplicaciones, se observaron diferencias significativas entre tratamientos (Cuadro3). El tratamiento con dimetoato en la dosis mayor fue el mejor tratamiento y ejerció control 70% de brotes respecto al testigo, le siguió el imidacloprid en la dosis mayor con 50% de control; los tratamientos con aceite mineral y espirotetramato con la dosis menor fueron iguales al testigo. En el segundo muestreo, 13 días después de las aplicaciones, ocurrieron diferencias significativas, los tratamientos con dimetoato en las dosis evaluadas e imidacloprid con la dosis mayor, ejercieron un control 85%, 75% y 55%, respectivamente, 90 Temp (°C) Hr (%) Prec (mm) 80 70 60 50 30 20 10 0 Jul Ago Sep Oct Nov Dic Figura 1. Temperatura, humedad relativa y precipitación pluvial media mensual ocurrida durante las observaciones en el sitio de estudio. 2010. Figure 1. Monthly average temperature, relative humidity and rain during observations in site in the study. 2010. Percentage of shoots infested with nymphs. Six days after treatment, significant differences between treatments were detected (Table 3). Dimethoate at higher dose was the best treatment with 70% effectiveness on shoots if compared to control, followed by imidacloprid at higher dose with 50%; mineral oil and spirotetramat at lower dose treatments result similar to control. In the second sampling, 13 days after applying treatment, there were significant differences: treatments with dimethoate at assessed doses and imidacloprid at higher dose, yield 85%, 75% and 55% of effectiveness, respectively, compared to control. Treatments with mineral oil at higher dose and spirotetramat at lowest dose showed same percentage of infested shoots as control. In second to last sampling, there were significant differences between treatments, outstanding treatments with dimethoate and imidacloprid at higher dose with 100% and 85% of effectiveness, respectively. The remaining treatments, except for those Luis Martín Hernández-Fuentes et al. 434 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 comparados con control. Los tratamientos con aceite mineral en la dosis mayor y espirotetramato en la dosis menor presentaron igual porcentaje de brotes infestados que el control. En el penúltimo muestreo, se observaron diferencias significativas entre los tratamientos, destacan los tratamientos con dimetoato e imidacloprid en la dosis mayor con 100% y 85% de control, respectivamente. Los demás tratamientos, excepto aquellos con dimetoato e imidacloprid en las dosis menores, fueron estadísticamente iguales al control. En el último muestreo, 27 días después de las aplicaciones, los tratamientos con dimetoato e imidacloprid en las dosis mayores fueron diferentes al control y ejercieron 100% de control. El espirotetramato con la dosis mayor ejerció 85% de control de brotes. El mayor número de brotes infestados se obtuvo con el aceite mineral, lo cual coincide con un mayor número de ninfas (Cuadro 2). with dimethoate and imidacloprid in lower doses, were statistically equal to control. In the last sampling, 27 days after treatment, dimethoate and imidacloprid at higher dose were different to control and yield 100% effectiveness. Spirotetramat at higher dose yield 85% effectiveness in shoot. Greatest number of infested shoots was with mineral oil, which coincides with higher number of nymphs (Table 2). Second assessment Previous to application treatments, number of nymphs per shoot was statistically different (Table 4), by this reason in comparisons after the application this population level was used as co-variable. In this study, during first 3 samples and up to 21 days after treatment, a significant effect of assessed pesticides was observed (Table 4). Cuadro 3. Porcentaje de brotes infestados por ninfas de D. citri en lima persa tratado con diferentes productos químicos. Nayarit, México, 2010. Table 3. Percentage of shoots infested by D. citri nymphs in Persian lime with different chemical products. Nayarit, Mexico, 2010. Tratamiento (L ha-1) aceite mineral (2) aceite mineral (3) espirotetramato (0.2) espirotetramato (0.4) dimetoato (0.2) dimetoato (0.4) imidacloprid (0.15) imidacloprid (0.3) Testigo Valor de F Porcentaje de brotes infestados ± error estándar 17-jun* 50± 11.2a 85±10.0a 45±22.9a 50±11.2a 35±10.0a 45±9.4a 70±9.4a 40±6.1a 55±14.6a 1.46 6 dda** 100±0a 100±0a 100±0a 90±6.1ab 85±10.0ab 30±14.6c 90±10.0ab 50±22.4bc 100±0.0a 5.4 13 dda 95±5ab 100±0a 100±0a 85±10abc 35±12.7d 15±6.1d 55±14.6bcd 45±12.2cd 100±0.0a 12.54 20 dda 93.75±6.3ab 100±0.0a 100±0.0a 85±10.0ab 30±14.6cd 0.0±0.0c 55±14.6bc 15±10.0cd 100±0.0a 19.9 27 dda 65±15.0ab 70±18.4a 55±12.2ab 15±10.0bc 30±18.4abc 0.0±0.0c 35±6.1abc 0.0±0.0c 80±9.4a 7.7 Media final 87.92±5.8a 92.5±4.6a 88.75±3.1a 68.75±6.3ab 45.0±5.4cd 11.25±5.0d 58.75±9.8b 27.5±8.3cd 95.0±2.39a 26.18 *Muestreo previo a las aplicaciones. **dda: días después de la segunda aplicación. Medias con distinta letra, difieren significativamente según Tukey (α= 0.05). Segunda evaluación Previo a las aplicaciones, el número de ninfas por brote fue diferente estadísticamente (Cuadro 4), razón por la cual en comparaciones posteriores a la aplicación se utilizó este nivel poblacional como covariable. En este estudio, durante los primeros 3 muestreos y hasta los 21 días después de la aplicación, se observó efecto significativo de los plaguicidas evaluados (Cuadro 4). At 3 days alter application, treatments with spirotetramat, dimethoate and mixture of imidacloprid plus β-cyfluthrin in higher doses outstood, compared to control they showed a rate of 92.9%, 96.4% and 94.8%, respectively. Seven days after application, treatments with dimethoate in higher dose, imidacloprid, and mixture of this last one with beta β-cyfluthrin at lower and higher dose were statistically different to control and similar between them. All these products had effectiveness greater than Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka 435 Cuadro 4. Ninfas de D. citri por brote antes y después de la aplicación de diferentes productos químicos en lima persa. Nayarit, México, 2010. Table 4. D. citri nymphs per shoot before and after applying different chemical products in Persian lime. Nayarit, Mexico, 2010. Tratamiento (L ha-1) aceite mineral (2) aceite mineral (3) espirotetramato (0.2) espirotetramato (0.4) dimetoato (0.2) dimetoato (0.4) imidacloprid (0.15) imidacloprid (0.3) imidacloprid + betaciflutrina (0.15) imidacloprid + betaciflutrina (0.3) Testigo Valor de F Promedio de ninfas/brote ±error estándar previo* 3 dda 7 dda 84.4±44.6b 15.6±2.2bcd 26.9±2.4bc 85.8±35.0b 17.2±1.8bc 8.1±3.4cd 70.8±16.9bcd 21±1.78b 14.6±4.4cd 37.9±8.3de 2.8±0.96ef 35±9.6b 40.5±9.1de 13.2±1.0bcde 15.1±0.7bcd 91.8±27.3b 1.5±0.5f 1.1±0.4d 54.6±15.1bcde 11.8±0.8bcdef 5.6±1.6d 82.8±20.3b 4.8±0.6def 3.8±1.1d 21 dda 8.3±2.2b 34.6±8.8a 5.3±2.5b 5.2±3.3b 8.2±2.2b 2.1±0.9b 4.1±0.7b 1.6±0.7b 49 dda 1.4±0.9a 3.4±0.9a 2.2±1.6a 2.9±0.8a 2±0.7a 3.5±0.8a 1.8±0.8a 1.7±0.7a Media final 13.05±1.1bc 15.83±2.3b 10.77±1.1bcd 11.47±2.7bc 9.62±0.9bcde 2.05±0.4e 5.52±0.4cde 2.97±0.5de 25.1±4.6e 6.2±0.9cdef 0.8±0.4d 0.2±0.1b 2.2±0.9a 2.35±0.3e 77.6±33.4bc 2.2±0.3ef 1.5±0.9d 0.6±0.4b 2±0.9a 1.57±0.3e 139±67.4 15.88 42.5±6.7a 17.60 59.7±6.4a 16.71 41.8±12.2a 2.4±1.0a 5.76 0.59 36.6±3.7a 24.01 *Muestreo previo a las aplicaciones. dda: días después de la segunda aplicación. Medias con distinta letra, difieren significativamente según Tukey (α= 0.05). A los 3 días después de la aplicación, destacaron los tratamientos con espirotetramato, dimetoato y la mezcla de imidacloprid más betaciflutrina en las dosis mayores, estos ejercieron un control respecto al testigo 92.9%, 96.4% y 94.8%, respectivamente. Siete días después de la aplicación, los tratamientos con dimetoato en la dosis mayor, imidacloprid y la mezcla de este con betaciflutrina en las dosis baja y alta fueron diferentes estadísticamente al testigo e iguales entre sí. Todos estos productos ejercieron controles mayores a 90%. En el tercer muestreo, 21 días después de la aplicación, todos los tratamientos, excepto la dosis mayor de aceite mineral, redujeron estadísticamente la población de ninfas. Destacaron los tratamientos con dimetoato e imidacloprid con las mayores dosis e imidacloprid más betaciflutrina en las dos dosis evaluadas, estos ejercieron controles más de 94% respecto al testigo. Dikshit y Lal (2002) al evaluar 2.5 mL.litro-1 de agua de imidacloprid, se contempló un control 95.2% de Toxoptera aurantii en Citrus aurantiifolia siete días después de la aplicación, 15 días después este control fue 55.2%. En éste ensayo en el último muestreo, 49 días después de la aplicación, no hubo diferencias significativas entre tratamientos, lo cual indica que la persistencia de los productos en las dosis evaluadas fue de hasta 21 días. En esta segunda evaluación se observó mayor número de ninfas por brote respecto al primer estudio, esta diferencia pudo ser influida por la ocurrencia de lluvias 90%. In third sampling, 21 days after application, all treatments, except mineral oil at higher dose, statistically reduced nymph’s population. Treatments with dimethoate and imidacloprid with higher doses and imidacloprid plus β-cyfluthrin in both assessed doses outstood, which showed rate of 94% regarding control. Dikshit and Lal (2002) when assessing imidacloprid at 2.5 mL.liter-1 of water, showed 95.2% of effectiveness against Toxoptera aurantii in Citrus aurantiifolia seven days after treatment, then, 15 days after treatment, was 55.2%. In this study, in last sampling 49 days after application, there were no significant differences between treatments, i.e. persistence of products at assessed doses was up to 21 days. In this second assessment a higher number of nymphs per shoot regards first assessment was seen, this difference would be inf luenced by rain occurrence during first assessment observations (Figure 1). In both assessments, mineral oil at two and three liters per hectare had least effectiveness against D. citri nymphs, this differs to the result obtained by Rae et al. (1997) who detected a highly significant effect eight days after application on eggs and nymphs at 0.5 L/100 liter of water dose. Luis Martín Hernández-Fuentes et al. 436 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 durante las observaciones del primer ensayo (Figura 1). En ambas evaluaciones, el aceite mineral en dosis de dos y tres litros por hectárea ejerció menor control contra ninfas de D. citri, este resultado difiere a lo mencionado por Rae et al. (1997) quienes observaron efecto altamente significativo ocho días después de la aplicación sobre huevos y ninfas en dosis de 0.5 L/100 litros de agua. Porcentaje de brotes infestados por ninfas de D. citri En el muestreo previo a las aplicaciones, no se observaron diferencias significativas entre tratamientos (Cuadro 5). En el primer muestreo, tres días después de la aplicación, no se observaron diferencias significativas entre tratamientos (Cuadro 5). Siete días después de la aplicación, ocurrieron diferencias estadísticas entre tratamientos, la mezcla de imidacloprid con betaciflutrina en la dosis mayor ejerció 77.7% de control respecto al testigo. En el tercer muestreo, 21 días después de la aplicación, no hubo diferencias estadísticas entre tratamientos. En el último muestreo, se contempló una disminución de brotes infestados y entre tratamientos, incluido el testigo, respecto al muestreo previo. Situación similar ocurrió en la primera evaluación. Los tratamientos con aceite mineral y espirotetramato en las dosis menores fueron menos infestados que el testigo. Percentage of shoots infested by D. citri nymphs In sampling previous to applications, there were not detected significant differences between treatments (Table 5). In the first sampling, three days after application, either were detected significant differences between treatments (Table 5). Seven days after application, statistical differences between treatments occurred, the mixture of imidacloprid with β-cyfluthrin at higher dose exerted 77.7% of effectiveness regarding control. In third sampling, 21 days after application, there was no statistical difference between treatments. In last sampling, a decrease in shoots infested and between treatments was detected, including control, regards previous sampling. Same situation occurred at first assessment. Treatments with mineral oil and spirotetramat at lower doses were less infested than control. Ambient conditions turing assessments. In these studies, highest temperature (23. 5 °C) was in August and lowest during December (17.7 °C), while greatest rain precipitation was in July (90.4 mm) (Figure 1), although the aim of this study did not included to set relationship between ambient factor and studied variables, it is obvious that rain effect rather than temperature is noted, which is verified by population levels in control for both periods. Cuadro 5. Porcentaje de brotes infestados por ninfas de D. citri en lima persa tratado con diferentes productos químicos. Nayarit, México. 2010. Table 5. Percentage of shoots infested by D. citri nymphs in Persian lime treated with different chemicals products. Nayarit, Mexico. 2010. Tratamiento (L ha-1) aceite mineral (2) aceite mineral (3) espirotetramato (0.2) espirotetramato (0.4) dimetoato (0.2) dimetoato (0.4) imidacloprid (0.15) imidacloprid (0.3) imidacloprid + betaciflutrina (0.15) imidacloprid + betaciflutrina (0.3) Testigo Valor de P previo* 100±0.0 100±0.0 100±0.0 100±0.0 100±0.0 90±10.0 100±0.0 100±0.0 100±0.0 3 dda 90±10.0a 90±10.0a 90±10.0a 80±20.0a 80±12.4a 50±15.8a 80±12.2a 80±12.2a 70±12.2a 7 dda 100±0a 60±24.5ab 60±18.7ab 50±15.8ab 80±12.2ab 40±10.0ab 60±18.7ab 50±15.8ab 30±12.2ab 21 dda 50±15.8a 60±18.7a 30±12.2a 30±20.0a 60±18.7a 40±18.7a 60±10.0a 50±22.4a 20±12.2a 49 dda 20±12.2b 50±0.0ab 20±12.2b 80±12.2ab 50±15.8ab 90±10.0a 30±12.2ab 30±12.2ab 50±15.8ab Media final 65±8.3ab 65±8.3ab 50±5.6ab 60±7.3ab 67.5±10.9ab 55±7.5ab 57.5±6.4ab 52.5±12.1ab 42.5±6.4ab 100±0.0 80±12.24 1.77 50±0.0a 90±10.0a 1.48 20±12.2b 90±10.0ab 2.65 20±12.2a 60±18.7a 0.85 30±12.2ab 40±18.7ab 2.92 30±6.4b 70±9.3a 1.94 *Muestreo previo a las aplicaciones. dda: días después de la segunda aplicación. Medias con diferente letra ± error estándar, difieren significativamente según Tukey (α= 0.05). Condiciones ambientales durante la realización de los ensayos. La temperatura más alta (23. 5 °C) fue en agosto y la más baja ocurrió en diciembre (17.7 °C), mientras que la Rain effect would affect effectiveness of mineral oil; however, in second assessment, there were no rain at all and control was deficient. Temperature range in months of Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka mayor acumulación de lluvias fue en julio (90.4 mm) (Figura 1), en estos ensayos, aunque el objetivo no fue hacer alguna correlación entre los factores ambientales y las variables estudiadas, se deduce un efecto de la lluvia más que de la temperatura, lo cual se verifica en los niveles poblaciones observados en el testigo en ambos periodos. El efecto de la lluvia pudo de igual manera influir en la efectividad del aceite mineral; no obstante, en el segundo ensayo, no ocurrieron lluvias y de igual manera el control fue menor. El rango de temperatura en los meses de evaluación fue de 17.7-23.5 °C, al respecto Nava et al. (2007) mencionan un rango óptimo para ninfas de D. citri de 18-30 °C. Urías et al. (2011) al estudiar la fluctuación poblacional de D. citri en Lima Persa en diferentes altitudes y zonas con diferente temperatura, concluyen que la presencia de éste insecto está más relacionada con la disponibilidad de brotes nuevos; lo cual se vería favorecido en el periodo de lluvias. Conclusiones De los productos evaluados, el dimetoato, imidacloprid a las dosis de 200 mL, 400 mL y 300 mL por hectárea, respectivamente, y la mezcla de este con betaciflutrina en dosis de 150 mL y 300 mL de producto comercial por hectárea, fueron los que tuvieron mejor control y mayor efecto residual en ambas evaluaciones. El aceite mineral, en las dosis evaluadas, ejerció menor control contra ninfas de D. citri, respecto a los demás productos evaluados. Con base en los resultados obtenidos, una aplicación de dimetoato e imidacloprid a las dosis de 200 mL, 400 mL ha-1, de producto comercial, respectivamente, es adecuada para proteger los brotes de lima persa durante cuatro semanas y evitar los daños directos de D. citri; no obstante ante la presencia de HLB se tendría que reconsiderar este intervalo. La información actual sobe el control de D. citri en lima persa es escasa, nuevos estudios con diferentes dosis de productos de menor impacto ambiental y modos de aplicación deben realizarse para contar con mayores alternativas de manejo del problema HLB-D. citri. Agradecimientos Este estudio fue financiado por el fondo sectorial SAGARPACONACYT con el proyecto 2009-108591. Se agradece a los productores de Lima Persa en Nayarit por las facilidades otorgadas para la realización de esta investigación. 437 assessment was from 17.7-23.5 °C, on this regards Nava et al. (2007) define an optimum range for D. citri nymphs from 18-30 °C. Urías et al. (2011) when studying D. citri population variation in Persian lime at different heights and zones with different temperature ranges, conclude that presence of this bug is more related to availability of new shoots; which would be favored during rain season. Conclusions From assessed products, dimethoate, imidacloprid at 200 mL, 400 mL and 300 mL per hectare doses, respectively, and the mixture of this with β-cyfluthrin at 150 mL and 300 mL per hectare, had best control and higher residual effect in both assessments. Mineral oil at high dose exerted less effectiveness against D. citri nymphs with regards other assessed products. Based on the obtained results, dimethoate and imidacloprid application at 200 mL and 400 mL ha-1, respectively, is suitable to protect Persian lime shoots during four weeks and avoid direct damages of D. citri; nevertheless, before HLB presence this timeframe needs to be assessed again. Current information about D. citri control in Persian lime is scarce, new studies at different doses of products with lower ambient impact and application ways must be made in order to get more options for controlling HLB-D. citri problem. End of the English version Literatura citada Ahmed, S.; Ahmad, N. and Khan, R. R. 2004. Studies on population dynamics and chemical control of Citrus Psylla. Diaphorina citri. Int. J. Agri. Biol. 6(6):970-973. Aubert, B. 1987. Trioza erytreae Del Guercio and Diaphorina citri Kuwayama (Homoptera: Psylloidea), the two vectors of citrus greening disease: biological aspects and possible control strategies. Fruits 42:149-162. Bahagabati, K. N. and Nariani, T. K. 1983. Chemical control of citrus psylla, a vector of citrus greening disease. J. Res. Assam. Agric. Univ. 4(1):86-88. 438 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Bove, J. M. 2006. Huanglongbing: a destructive, newly emerging, century-old disease of citrus. J. Plant Pathol. 88:7-37. Childers, C. C. and Rogers, E. M. 2005. Chemical control and management approaches of the Asian Citrus Psyllid Diaphorina citri Kuwayama (Homoptera: Psilidae) in Florida Citrus. Proc. Flo. State Hort. Soc. 110:49-53. Chiou, N. C. 1998. Ecology of the insect vectors of citrus systemic diseases and their control in Taiwan. FFTC Publication Database. En sitio web: www.agnet.org/ library/eb/459a/ (consultado: 20-9-2009). Dahiya, K. K.; Lakra, R. K.; Dahiya, A. S. and Singh, S. P. 1994. Bioefficacy of some insecticides against citrus psylla. Diaphorina citri. Crop Res. Hisar. 8:137-140. Dikshit, A. K. and Lal, O. P. 2002. Safety evaluation and persistence of imidacloprid on acid lime (Citrus aurantiifolia Swingle). Bull. Environ. Contam. Toxicol. 68:495-501. Food and Agriculture Organization Corporate Statistical Database (FAOSTAT) 2007. Food and agricultural commodities production. http://faostat.fao.org/ site/339/default.aspx. (consultado 11 de agosto de 2010). European and Mediterranean Plant Protection Organization (EPPO) 2005. Diaphorina citri Kuwayama. European and Mediterranean Plant Protection Organization. Bulletin 35:331-333. Halbert, S. E. H. and Manjunath, K. L. M. 2004. Asian citrus psyllids (Sternorrhyncha: Psyllidae) and greening disease of citrus: a literature review and assessment of risk in Florida. Florida Entomol. 87(3):330-353. International Resistance Action Committee. International Resistance Action Committe (IRAC) 2009. Mode of action and classification. Version 6.3. 14 p. Lin, S. J.; Ke, Y. F. and Tao, C. C. 1973. Bionomics observation and integrated control of citrus psylla, Diaphorina citri Kuwayama. J. Hort. Soc. China. 19(4):234-242. Liu, Z.; Williamson, M. S.; Lansdell, S. J.; Denholm, I.; Han, Z.; and Millar, N. S. 2005. A nicotinic acetylcholine receptor mutation conferring target-site resistance to imidacloprid in Nilaparvata lugens (brown planthopper). The National Academy of Sciences of the United State. 102(24):8420-8425. Llorens, J. M. 2007. Biología de los enemigos naturales de las plagas de cítricos y efectos de los productos fitosanitarios. Dossiers Agraris ICEA Enemics naturals de plagues en diferents cultius a Catalunya. URL http://icea.iec.cat/pdf/Dosier6.pdf. Luis Martín Hernández-Fuentes et al. McFarland, C. and Hoy, M. 2001. Survival of Diaphorina citri (Homoptera: Psyllidae), and its two parasitoids, Tamarixia radiata (Hymenoptera: Eulophidae) and Diaphorencyrtus aligarhensis (Hymenoptera: Encyrtidae), under different relative humidities and temperature regimes. Fla. Entomol. 84(2):227-233. Montgomery, C. D. 2008. Diseño y análisis de experimentos. 2da. Edición. Ed. Limusa. México, D. F. 686 p. Najar, R. A. J.; Lavidis, N. A.; Mensah, R. K.; Choy, P. T. and Walter, G. H. 2008. The toxicological effects of petroleum spray oils on insects: Evidence for an alternative mode of action and possible new control options. Food Chem. Toxicol. 46(9):3001-3014. Nauen, N.; Reckmann, U.; Thomzik, J. and Thielert, W. 2008. Biological profile of spirotetramat (Movento®) a new two-way systemic (ambimobile) insecticide against sucking pest species. Bayer Crop Sci. J. 61(2):245-278. Nava, D. E.; Torres, M. L. G.; Rodríguez, M. D. L.; Bento, J. M. S. and Parra, R. P. 2007. Biology of Diaphorina citri (Hem., Psyllidae) on different hosts and at different temperatures. J. Applied Entomol. 13(910):709-715. Phua, D. H.; Lin, C. C.; Wu, M. L.; Deng, J. F. and Yang, C. C. 2009. Neonicotinoid insecticides: an emerging cause of acute pesticide poisoning. Clinical Toxicol. 47:336-341. Rae, D. J.; Liang, W. G.; Watson, D. M.; Beattie, G. A. and Huang, M. D. 1997. Evaluation of petroleum spray oils for control of the Asian citrus psylla, Diaphorina citri (Kuwayama) (Hemiptera: Psyllidae), in China. Intern. J. Pest Management. 43(1):71-75. Rogers, M. E. and Stansly, P. A. 2006. Biology and management of the asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama, in Florida citrus. Bulletin 739. Institute of Food and Agricultural Sciences of the University of Florida. 7 p. Statistical Analysis System (SAS) Institute 2008. Language and procedures. Release 9.2. SAS Institute. Cary, North Caroline, USA. Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria, Acuícola y Pesquera (SENASICA) 2009. Notificación oficial Núm. 5. México. D. F. Sistema de Información Agrícola Pesquera (SIAP). 2008. Avances de la producción por sistema producto. En sitio web: http://reportes.siap.gob.mx. (consultado el 12 de julio de 2010). Control químico de Diaphorina citri Kuwayama (Hemíptera: Psyllidae) en lima persa Citrus latifolia Tanaka Sistema Nacional de Vigilancia y Epidemiológica Fitosanitaria (SSINAVEF). 2010. Reporte epidemiológico HLB 002. San Luis Potosí, México. Smith, E. H. and Pearce, G. W. 1948. The mode of action of petroleum oils as ovicides. J. Econ. Entomol. 41:173-180. Stadler, T. and Buteller, M. 2009. Modes of entry of petroleum distilled spray-oils into insects: a review. Bulletin of Insectology. 62 (2):169-177. Tomizawa, M. and Casida, J. E. 2005. Neonicotinoid insecticide toxicology: mechanisms of selective action. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 45:247-268. 439 Urias, L. M. A.; Hernández, F. L. M.; López, A. J. I. y García, A. N. C. 2011. Distribución temporal y densidades de población del psílido asiático de los cítricos (Hemíptera: Psyllidae) en Nayarit. 156-160 pp. In: López, A. J. I. y González, L. V. W. (Comp.) Memoria Científica: 2do. Simposio Nacional sobre Investigación para el Manejo del Psílido Asiático de los Cítricos y el Huanglongbing en México. Montecillo, Estado de México. Del 5 al 7 de diciembre, 2011. INIFAP-Centro de Investigación Regional del Noreste. Campo Experimental General Terán. 424 p. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 2 1 de marzo - 30 de abril, 2012 p. 441-449 Rendimiento y calidad de híbridos de sorgo con y sin nervadura café* Yield and quality of sorghum hybrids with and without brown midrib Eduardo Daniel Bolaños Aguilar1§, Jean Claude Emile2 y Guillaume Audebert2 Programa de Forrajes, Campo Experimental Huimanguillo, INIFAP. Carretera Huimanhuillo-Cárdenas km 1. C. P. 86400 Huimanguillo, Tabasco, México. Tel. 01 917 3750397. 2Unidad Experimental de Forrajes y Medio Ambiente del Instituto Nacional de Investigaciones Agronómicas de Francia (INRA), C. P. 86600 Lusignan, Francia. § Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract El objetivo fue comparar el rendimiento de materia seca (RMS) y la calidad de variedades de sorgo de grano y forrajero con o sin nervadura café (bmr), al emplear plantas con concentraciones promedio de 300 g kg-1 de MS. Se estudiaron tres variedades de grano (Solarius, Aralba y Topsilo) y tres forrajeras (Sweet Virginia, Big Kauna y Sucrosorgho). Sweet Virginia and Big Kahuna contienen el gen bmr. El RMS varió de 11.10 t, de Topsilo, a 17.12 t ha-1 de Sweet Virginia, relacionada con la altura de planta y con la proporción tallo/planta. Topsilo tuvo mayor número de rebrotes (1.5 m-1). La relación panícula/planta no fue diferente entre variedades. El número de plantas m-1 varió entre variedades pero no afectó el RMS. La concentración de proteína varió de 75.45 g kg-1 MS en Big Kahuna, a 104.3 g kg-1 MS en Solarius, y tuvo relación inversa con el RMS, con la altura de la planta y con la relación tallo/planta. Las variedades con mayor concentración de proteína (Solarius, Aralba y Topsilo), fueron las de menor RMS, menor altura y menor relación tallo/planta. El área foliar por planta fue la fuente de variación de la proteína entre las variedades de grano. La digestibilidad varió de 596 g kg-1 MS en Aralba, a 720.4 g kg-1 MS en Sweet Virginia, y estuvo relacionada con la concentración de lignina. Esta última variedad junto con Big Kahuna y Solarius fueron las de mayor digestibilidad. La alta digestibilidad de Solarius (no portador de bmr) se debió a su baja proporción (0.35) tallo/planta. La variedad Sweet The aim was to compare yield of dry matter (RMS) and quality of grain and foliage sorghum varieties with and without brown midrib (bmr), by using plants with average concentrations of 300 g kg-1 of DM. Three grain (Solarius, Aralba and Topsilo) and three forage (Sweet Virginia, Big Kauna and Sucrosorgho) varieties were studied. Sweet Virginia and Big Kahuna contain bmr gene. RMS varied from 11.10 t, of Topsilo, to 17.12 t ha-1 of Sweet Virginia, related with plant height and stem/plant proportion. Topsilo had greater number of sprouts (1.5 m-1). Relationship panicle/plant was similar between varieties. Number of plants m-1 had variation between varieties but did not affect RMS. Protein concentration was from 75.45 g kg-1 DM in Big Kahuna, up to 104.3 g kg-1 DM in Solarius, and had inverse relationship with RMS, with plant height and with stem/plant ratio. Varieties with greater protein concentration (Solarius, Aralba and Topsilo), showed least RMS, lower height and lower ratio stem/plant. Foliar area per plant was source of protein variation between grain varieties. Digestibility ranged from 596 g kg-1 DM in Aralba, up to 720.4 g kg-1 DM in Sweet Virginia, and was related with lignin concentration. This last variety with Big Kahuna and Solaris were the best in digestibility. The high digestibility from Solarius (not bmr carrier) was because its low stem/ plant ratio (0.35). Sweet Virginia variety is an important option in animal food since its high RMS and digestibility. * Recibido: marzo de 2011 Aceptado: febrero de 2012 Eduardo Daniel Bolaños Aguilar et al. 442 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Virginia es una importante opción en la alimentación animal dado a su elevado RMS y digestibilidad. Solarius tuvo bajo RMS, pero es útil cuando se requieren altos consumos de materia seca digestible por animal (vacas lecheras), además de contar con la mayor concentración de proteína. Palabras clave: Sorghum bicolor, digestibilidad, proteína, rendimiento de materia seca. Introducción La estacionalidad en la producción animal producto de los periodos secos del año, es un problema latente. Con el ensilado se continúa con la alimentación de calidad de los animales durante todo el año, pero los periodos secos son cada vez más largos, y se requieren forrajes más adaptados a estas condiciones (Emile et al., 2005; Oliver et al., 2005). El maíz forrajero es el más utilizado en conservación de forrajes por su alto valor nutritivo y en particular por su alta digestibilidad (Olivier et al., 2005). Sin embargo, el maíz no es, entre los forrajes utilizados para el ensilado, el más adaptado a los períodos de estrés hídrico, ya que requiere ser irrigado en estas condiciones (Legarto, 2000; Emile et al., 2005; Dehaynin, 2007). Ante la escasez de agua, el sorgo (Sorghum bicolor L. Moench) muestra mayor adaptación que el maíz (Borrell et Hammer, 2000). Una planta de sorgo utiliza de 80 a 100 ml menos de agua que una planta de maíz durante el período productivo (Didier, 1991). Además, las raíces densas y ramificadas, y la menor velocidad de crecimiento del área foliar, hacen que el sorgo sea más eficiente en el uso del nitrógeno del suelo (Legarto, 2000). Sin embargo, el sorgo es menos utilizado que el maíz por su menor digestibilidad dado a su alta concentración de lignina (Traxler et al., 1998) lo que afecta la producción animal (Lusk et al., 1984; Humphreys y Cahpple, 2002; Oliver et al., 2005). En busca de mejorar la digestibilidad de ésta gramínea, se ha observado que la planta de sorgo a una concentración de 300 g kg-1 de MS alcanza una digestibilidad de 650 g kg-1 MS (Barrière et al., 2003). Por otra parte, el control genético de la lignificación a través de la manipulación del gen bmr (brown midrib) o nervadura café, reduce el contenido de lignina, incrementando la digestibilidad del forraje (Cherney et al., 1991; Gerhardt et al., 1994; Vogel y Jung, 2001). Por consiguiente, se han obtenido altas producciones de leche con sorgo que contiene bmr que con sorgo normal (Aydin et al., 1999; Emile et al., Solarius had low RMS, but is useful for high consumption of digestible dry matter (dairy cows), also has better protein concentration. Key words: Sorghum bicolor, digestibility, protein, dry matter yield. Introduction Season in animal production during year drought periods, is an important concern. After ensilage the quality food for animals continues throughout year, but drought periods are every time longer and it is required forage with more adaptation to such conditions (Emile et al., 2005; Oliver et al., 2005). By its high nutrimental value and in particular its high digestibility (Olivier et al., 2005), forage maize is the most used for keeping forages. However, among forages used for ensilage, maize it is not the most adapted to hydric stress, since it requires irrigation under these conditions (Legarto, 2000; Emile et al., 2005; Dehaynin, 2007). Facing water scarcity, sorghum (Sorghum bicolor L. Moench.) shows better adaptation that maize (Borrell et Hammer, 2000). During productive period sorghum plant use at least from 80 to 100 ml less water than maize plant (Didier, 1991).Also, dense and ramified roots, and lower speed of foliar area growth, make sorghum most efficient in soil nitrogen use (Legarto, 2000). However, sorghum is less used than maize due its lower digestibility thanks to its high lignin concentration (Traxler et al., 1998) which affects animal production (Lusk et al., 1984; Humphreys and Cahpple, 2002; Oliver et al., 2005). Searching for improve its digestibility, it has been observed that sorghum plant at 300 g kg-1 of DM concentration reaches 650 g kg-1 DM of digestibility (Barrière et al., 2003). On the other hand, lignification genetic control through manipulating brown midrib gene (bmr), reduces lignin content, increasing forage digestibility (Cherney et al., 1991; Gerhardt et al., 1994; Vogel and Jung, 2001). Therefore, high milk productions have been obtained with sorghum containing bmr than with normal sorghum (Aydin et al., 1999; Emile et al., 2005). Thanks to high variability on sorghum without bmr quality (Lema et al., 2000), there can be found plants with similar quality to those that have bmr gene. Other effort to improve sorghum production and quality has been agronomical practices. It has been detected that sorghum sown at 20 cm between furrows, during hydric Rendimiento y calidad de híbridos de sorgo con y sin nervadura café 2005). Gracias a la alta variabilidad de la calidad del sorgo sin bmr (Lema et al., 2000), pudiera encontrarse plantas con calidad comparable a aquellas que contienen el gen bmr. Otro esfuerzo para mejorar la producción y calidad del sorgo ha sido con prácticas agronómicas. Se ha observado que el sorgo sembrado a 20 cm entre surcos, en periodos de estrés hídrico, supera al maíz en producción de forraje y en proteína, siendo el área foliar la principal fuente de variación de la calidad del sorgo (Bolaños-Aguilar y Emile, 2011). El objetivo del presente estudio fue comparar variedades de sorgo de grano y forrajeros con y sin nervadura café (bmr) en rendimiento y calidad (proteína, digestibilidad y lignina), cuando la planta de sorgo contiene una concentración de 300 g kg-1 de MS, en promedio. Materiales y métodos El estudio se realizó en condiciones de campo en la Estación Experimental de Forrajes y Medio Ambiente del Instituto Nacional de Investigación Agronómica (INRA), en Lusignan, Francia (46° 25’ 07 latitud norte, 0° 07’ 06 longitud oeste, altitud 149 m) en 2009. Se estudiaron seis variedades de sorgo, tres de grano (Solarius, Aralba y Topsilo) y tres forrajeros (Sweet Virginia, Big Kauna y Sucrosorgho). Sweet Virginia y Big Kahuna contienen el gen bmr. Éstas seis variedades son representativas del ensilado en Francia (Emile et al., 2005). El trabajo se estableció en un suelo con pH= 6.8, color café, textura arcillo-limoso, estructura poliédrica, y 3% de materia orgánica (Bolaños-Aguilar et al., 2002). La siembra se realizó el 02 de junio 2009, a 5 cm de profundidad, a 20 cm entre surcos y a densidad convencional de 33 granos m2. Se estableció en parcelas adyacentes de 720 m2 (12 x 60 m) cada una. Cada parcela fue una repetición. No hubo irrigación ni empleo de pesticidas. Para conocer el momento de cosecha (plantas con 300 g kg-1 de MS) se tomaron muestras, a partir de que 50% de las plantas iniciaron floración, dos veces por semana a lo largo de un metro lineal de tres surcos al azar por parcela. La concentración de MS de la planta (MSPL) fue de 320 g kg-1 y se obtuvo el 16 de septiembre en todas las parcelas. Durante el período de crecimiento del sorgo (del 2 de junio al 16 de septiembre) la precipitación pluvial acumulada fue de sólo 163 mm (la precipitación en la región, en el mismo período, es superior a los 300 mm) con temperatura promedio de 18 °C. Una vez alcanzada la MSPL de 320 g kg-1, las plantas y rebrotes fueron cosechados a una altura de 10 cm del suelo, y pesados en verde, a lo largo de un metro lineal de cinco surcos tomados al azar por parcela. Se obtuvo el número 443 stress periods, overcomes to maize in forage production and protein, being foliar area the main source of variation of sorghum quality (Bolaños-Aguilar and Emile, 2011). The aim of this study was to compare grain and forage sorghum varieties with and without bmr in yield and quality (protein, digestibility and lignin), when sorghum plant has in average 300 g kg-1 of DM concentration. Materials and methods Study was made under f ield conditions at Estación Experimental de Forrajes y Medio Ambiente from Instituto Nacional de Investigación Agronómica (INRA), in Lusignan, France (46° 25’ 07 north latitude, 0° 07’ 06 west longitude, height 149 m) in 2009. Six sorghum varieties were studied, three for grain (Solarius, Aralba and Topsilo) and three for forage (Sweet Virginia, Big Kauna and Sucrosorgho). Sweet Virginia and Big Kahuna have bmr gene. These six varieties are representative from ensilage in France (Emile et al., 2005). The work was set in soil with pH= 6.8, brown color, clay-lime texture, polyhedral structure, and 3% of organic matter (Bolaños-Aguilar et al., 2002). Sow was made on June 2nd, 2009, at 5 cm deep, at 20 cm between furrows and conventional density of 33 grains m2. It was set in adjacent plots of 720 m2 (12 x 60 m) each. Each plot was a repetition. No irrigation or pesticide was used. To know harvest time (plants with 300 g kg-1 of DM) samples were taken, after 50% of plants started to flowering, twice per week along one lineal meter of three furrows at random per plot. DM concentration for plant (MSPL) was of 320 g kg-1 and was obtained on September 16th in all plots. During sorghum growth period (from June 2nd to September 16th) accumulated rainfall precipitation was of only 163 mm (rainfall in this region, for the same period, is greater than 300 mm) with average temperature of 18 °C. After reaching MSPL of 320 g kg-1, plants and sprouts were harvested at height of 10 cm from soil, weighed in fresh, along one lineal meter of five furrows randomly selected per plot. Number of plants (NPL) was obtained as well as number of sprouts (NRB) per lineal meter. Foliar area of third leaf was measured (Dejè et al., 2007) for each plant, multiplying length times width and times factor 0.747 (Stickler et al., 1961). Another process was to calculate foliar area per plant (AFPL) multiplying foliar area of third leaf times number of leaves per plant. 444 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 de plantas (NPL) y el número de rebrotes (NRB) por metro lineal. Se midió el área foliar de la tercera hoja (Dejè et al., 2007) de cada planta, multiplicando el largo por el ancho y por el factor 0.747 (Stickler et al., 1961). Oro proceso fue calcular el área foliar por planta (AFPL) multiplicando el área foliar de la tercera hoja por el número de hojas por planta. Posteriormente, todas las plantas de cada metro fueron separadas en: tallos, hojas y panículas, y fueron secados separadamente en estufa de aire forzado a 60 °C durante 48 h, y pesados para calcular la proporción de cada fracción. Con la suma de los pesos secos de tallos, hojas y panículas, se obtuvo el peso seco del material cosechado de un metro, lo cual se dividió por el NPL m-1 para obtener el peso seco de una planta, que junto con su peso verde se estimó el (%) de MS de la planta entera (MSPE). El rendimiento de materia seca por hectárea (RMS) se obtuvo con el peso seco promedio de una planta, multiplicado por el número de plantas por hectárea (Núm. de plantas ha-1= NPL m-1 x 100 m x 500 surcos). Se calculó la relación tallo/ planta y la relación panícula/ planta. Ambas relaciones fueron en base al peso seco de los diferentes componentes. Después del muestreo, todas las parcelas fueron cosechadas en su totalidad, y del forraje cosechado se tomaron tres muestras por parcela para ser molidas a tamaño de partícula de 1 mm y secadas a 60 °C por 48 h. A estas muestras se les determinó el valor nutritivo. Las muestras fueron analizadas por la técnica de absorción de infrarrojo cercano (NIRSystems, Inc., Silver Spring. MD 20904, USA) para predecir los niveles de concentración (en g kg-1 MS) de proteína, digestibilidad y lignina en planta entera. Las ecuaciones fueron desarrolladas para sorgo, basadas en el análisis de 400 muestras de sorgo cosechadas durante el período 2003 a 2007 en Lusignan. El análisis de varianza fue en bloques completos al azar con tres repeticiones con apoyo del programa GLM del SAS (SAS, 2003). La comparación de medias se fue con la prueba de Student Newman Keuls (α= 0.05) y la correlación entre caracteres con proc. CORR (SAS, 2003). Resultados y discusión Componentes del rendimiento de materia secas La concentración de MSPL de sorgo al momento de cosecha fue de 320 g kg-1, y no fue diferente (p> 0.05) entre variedades (Cuadro 1). Las seis variedades requirieron 108 días de Eduardo Daniel Bolaños Aguilar et al. Then, all plants of each meter were divided in: stems, leaves and panicles, and were dried apart in forced air stove at 60 °C during 48 h, and weighed to calculate proportion of each fraction. With the sum of dry weight of stems, leaves and panicles, from harvested 1 meter material dry weight was obtained, which was divided by NPL m-1 to obtain dry weight of one plant, that together with its fresh weight whole plant DM (MSPE) was estimated. Dry matter yield per hectare (RMS) was obtained average dry weight of one plant, times number of plants per hectare (number of plants ha-1 = NPL m-1 x 100 m x 500 furrows). Ratio stem/plant and ratio panicle/ plant were calculated. Both were made based on different components. After sampling, all plots were totally harvested, and from harvested forage three samples per plot were taken to be crushed at a particle size of 1 mm and dried at 60 °C during 48 h. Nutritious value for these samples was determined; they were analyzed by near infrared absorption technique (NIRSystems, Inc., Silver Spring. MD 20904, USA) to predict concentration levels (in g kg-1 DM) of protein, digestibility and lignin in whole plant. The equations were developed for sorghum, based on analysis of 400 sorghum samples harvested during 2003 to 2007 period in Lusignan. The analysis of variance was made at complete random blocks with three repetitions with the help of software GLM from SAS (SAS, 2003). Mean comparison was made with Student Newman Keuls (α= 0.05) test and correlation between characters with procedure CORR (SAS, 2003). Results and discussion Components of dry matter yield Sorghum MSPL concentration at the moment of crop was 320 g kg-1, and was not different (p> 0.05) between varieties (Table 1). Six varieties required 108 days to growth to reach such DM concentration, which indicated homogeneity in plants maturity at the beginning the study. Variety was an important source of variation (p< 0.0001) for RMS, which varied from 11.10 t, on grain variety Topsilo, up to 17.12 t ha-1 on forage variety Sweet Virginia (Table 1). RMS was related to plant height (r2= 0.94; p< 0.01), which in turn was closely related (r2= 0.89; p< 0.05) Rendimiento y calidad de híbridos de sorgo con y sin nervadura café crecimiento para alcanzar dicha concentración de MS, lo que indicó una homogeneidad en la madurez de las plantas al iniciar el estudio. 445 with stem/plant ratio (Table 2). The two varieties with higher height were Big Kahuna and Sweet Virginia, both with an average height of 198 cm and characterized by Cuadro 1. Medias para los componentes del rendimiento y calidad de seis variedades de sorgo en 2009 en Lusignan, Francia. Table 1. Means for yield and quality components of six sorghum varieties in 2009 at Lusignan, Francia. Caracter Media Variedades Solarius Aralba Topsilo Sweet Virginia Big Kahuna Sucro-sorgo Componentes del rendimiento: Materia seca por planta (MSPL), g kg-1 Rendimiento de MS (RMS), t ha-1 Número de plantas m-1 Altura, cm Número de rebrotes, m-1 Área foliar planta-1 Relación tallo/planta Relación Panícula/planta 312.5 13.1 5.53 142.0 0.43 296.1 0.52 0.22 330.7 a 12.3 c 7.0 a 100.9 c 0.75 b 250.3 c 0.38 b 0.32 a 293.0 a 11.25 c 5.0 bc 83.2 c 0.20 b 340 ab 0.47 b 0.26 a 311.8 a 11.1 c 4.5 c 101.0 c 1.5 a 328.6 ab 0.45 b 0.25 a 305.3 a 17.1 a 4.8 c 193.6 a 0.0 b 285.6 bc 0.57 a 0.23 a 266.0 a 16.1 ab 5.6 bc 202.5 a 0.16 b 385.3 a 0.65 a 0.0 b 368.3 a 13.8 bc 6.2 ab 171.0 b 0.0 b 186.6 d 0.61 a 0.26 a Calidad: Proteína, g kg-1 de MS Digestibilidad, g kg-1 de MS Lignina, g kg-1 de MS 87.05 651.0 29.43 104.3 a 667.6 b 31.0 b 99.0 b 90.9 c 596 c 618.1 c 31.5 ab 38.3 a 77.6 d 720.4 a 19.6 c 75.4 e 678.5 b 20.9 c 77.8 d 625.0 bc 36.1 a Medias dentro de una línea seguidas por la misma letra no difieren significativamente de acuerdo a la prueba de Student Newman & Keuls (α= 0.05). La variedad fue una importante fuente de variación (p< 0.0001) del RMS, el cual varió de 11.10 t, de la variedad de grano Topsilo, a 17.12 t ha-1 de la variedad forrajera Sweet Virginia (Cuadro 1). El RMS estuvo relacionado con la altura de la planta (r2= 0.94; p< 0.01), la cual a su vez tuvo estrecha relación (r2= 0.89; p< 0.05) con la proporción tallo/planta (Cuadro 2). Las dos variedades con mayor altura fueron Big Kahuna y Sweet Virginia, ambas con altura promedio de 198 cm y caracterizadas por tener nervadura café (bmr), siendo las variedades Topsilo, Aralba y Solarius las de menor porte con 95 cm, en promedio (Cuadro 1). La variedad Topsilo, presentó también el mayor número de rebrotes por metro lineal (1.5 rebrotes) y baja relación tallo/planta. El efecto negativo del número de rebrotes sobre el RMS del sorgo ya ha sido anteriormente reportado por Caravetta et al. (1990). Lo anterior indica una repartición de la MS entre las plantas principales y los rebrotes, dicha distribución fue en detrimento del RMS por hectárea de la variedad Topsilo. La relación panícula/planta no fue un caracter que originara variación (p> 0.05) entre las variedades, siendo esta relación semejante entre las cinco variedades con panícula. Sin embargo, este caracter tuvo una ligera influencia sobre la MSPL (r= 0.68) y en la altura presence of brown midrib (bmr), and the lowest varieties were Topsilo, Aralba and Solarius with 95 cm in height, in average (Table 1). Topsilo variety also had highest number of sprouts per lineal meter (1.5 sprouts) and low stem/plant ratio. Negative effect of number of sprouts on sorghum RMS has been previously reported by Caravetta et al. (1990). This means distribution of RM between main plants and sprouts, such distribution decreased RMS per hectare for variety Topsilo. Panicle/plant ratio was not character that could cause variation (p> 0.05) between varieties, being this ratio similar between five varieties with panicle. However, this character had slight influence over MSPL (r= 0.68) and in height (r= -60) of plant (Table 2). It is important to note that even when number of plants m-1 varied between variables of 4.5 plants m -1 in variety Topsilo to 7 plants m-1 in variety Solarius, this character had no relationship (p> 0.05) with variations on RMS (Table 2). In a previous study (Bolaños-Aguilar and Emile, 2011), the low number of plants per lineal meter in variations of sorghum RMS per hectare had already been detected. The Eduardo Daniel Bolaños Aguilar et al. 446 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 (r= -60) de la planta (Cuadro 2). Es importante observar que aún cuando el número de plantas m-1 varió entre variedades, de 4.5 plantas m-1 en la variedad Topsilo a 7 plantas m-1 en la variedad Solarius, este caracter no tuvo relación (p> 0.05) con las variaciones del RMS (Cuadro 2). En un estudio previo (Bolaños-Aguilar y Emile, 2011), ya había sido observado la baja participación del número de plantas por metro lineal en las variaciones del RMS por hectárea del sorgo. El mayor RMS fue para los sorgos forrajeros, aún cuando ambos tipos de sorgo (de grano y forrajeros) fueron cosechados a la misma MSPL, siendo la variedad forrajera Sweet Virginia la de mayor RMS por hectárea. highest RMS was for forage sorghum, even when both types (grain and forage) were harvested at same MSPL, being forage variety Sweet Virginia the best in RMS per hectare. Quality Variety is also an important source of variation (p< 0.001) in protein concentration and digestibility of sorghum. Protein varied from 75.45 g kg -1 DM of variety Big Kahuna, to 104.3 g kg-1 DM of variety Solarius (Table 1), and was inversely linked to RMS (r2= -0.79; p< 0.05), to plant height (r2= -0.92; p< 0.01) and to stem/plant Cuadro 2. Coeficientes de correlación de diferentes fuentes de variación para seis variedades de sorgo en 2009 en Lusignan, Francia. Table 2. Correlation coefficients of sources of variations for six sorghum varieties in 2009 at Lusignan, Francia. RMS MSPL NPL Altura NRB PAPL TAPL Proteína DIGEST MSPL NPL Altura NRB PAPL TAPL Proteína DIGEST Lignina -0.24 -0.008 0.46 0.94** -0.12 0.01 -0.64 0.01 -0.19 -0.60 -0.55 0.68 0.17 -0.64 0.27 0.76 -0.17 0.13 0.89* -0.67 -0.73 -0.79* 0.08 0.23 -0.92** 0.49 0.64 -0.94** 0.85* -0.22 0.10 0.69 -0.31 -0.28 0.32 -0.43 -0.83* 0.63 0.09 -0.64 0.58 0.56 -0.49 0.42 -0.79* *, ** niveles de significancia a 0.05 y 0.01, respectivamente; MSPL= concentración de materia seca en la planta; NPL= número de plantas m-1; RB= número de rebrotes m-1; PAPL= relación panícula/planta; TAPL= relación tallo/planta; DIGEST= digestibilidad. Calidad La variedad también es una importante fuente de variación (p< 0.001) en la concentración de proteína y en la digestibilidad del sorgo. La proteína varió de 75.45 g kg-1 MS de la variedad Big Kahuna, a 104.3 g kg-1 MS de la variedad Solarius (Cuadro 1), y estuvo inversamente ligado al RMS (r2= -0.79; p< 0.05) a la altura de la planta (r2= -0.92; p< 0.01) y a la relación tallo/planta (r2= -0.94; p< 0.01) (Cuadro 2). La menor concentración de proteína en variedades con mayor RMS o altura, puede deberse a la mayor dilución del nitrógeno dentro de la planta dado al incremento de la acumulación de MS dentro de ella (Duru, 1994; Gastal y Lemaire, 2002; Reyes et al., 2009). Así, las variedades con más proteína (Solarius, Aralba y Topsilo), fueron las de menor RMS, menor altura y menor relación tallo/planta. La concentración de proteína no tuvo relación positiva con relationship (r 2= -0.94; p< 0.01) (Table 2). The lower protein concentration in varieties with higher RMS or height can be due greater nitrogen dilution inside the plant given by increase of DM accumulation inside it (Duru, 1994; Gastal and Lemaire, 2002; Reyes et al., 2009). Thus, varieties with greater protein conent (Solarius, Aralba and Topsilo), were the lowest in RMS, lowest height and lowest stem/plant relationship. Protein concentration had no positive relationship with any of assessed characters; however, when not considering statistical analysis of variety Big Kahuna, because it is forage without grain production, i.e., of morphology different to remaining varieties, protein concentration has close relationship with foliar area per plant (r2= 0.71; p<0.05) (Figure 1). There results are product of greater protein concentration in sorghum leaves than in their stems (Singh et al., 2007). Rendimiento y calidad de híbridos de sorgo con y sin nervadura café 447 La digestibilidad del forraje varió (p< 0.05) de 596 g kg MS de la variedad Aralba, a 720.4 g kg-1 MS de la variedad Sweet Virginia (Cuadro 1), siendo esta última junto con Big Kahuna (ambas portadoras del gen bmr) y Solarius las de mayor digestibilidad. Solarius es una variedad no portadora del bmr pero con valores también importantes en digestibilidad. Las variaciones en digestibilidad estuvieron ligadas (r2= -0.79; p< 0.05) con las variaciones en lignina de las variedades (Cuadro 2), lo que era de esperarse por ser la lignina esencialmente indigestible. -1 Así, en la variedad de menor digestibilidad Topsilo se registró una concentración en lignina de 18.05 g kg-1 de MS mayor al promedio obtenido de las variedades más digestibles Sweet Virginia y Big Kahuna (Cuadro 1). Para conocer la razón por la que Solarius tuvo mayor digestibilidad que el resto de los sorgos de grano, se repitió el análisis estadístico considerando únicamente los sorgos de grano. Se observó que la alta digestibilidad de Solarius se debió a su menor proporción tallo/planta (0.35 vs 0.45 y 0.47 de Topsilo y Aralba, respectivamente). Esta variedad tuvo bajo RMS pero gracias a su alta digestibilidad se convierte en un forraje importante cuando se requiere el consumo de altas cantidades de MS digestible, demandado por el ganado productor de leche. En este estudio se corrobora el efecto positivo del gen bmr sobre la digestibilidad del forraje de sorgo. Resultados semejantes en sorgo en sorgos con bmr han sido anteriormente observados (Núñez y Cantú, 2000; Oliver et al., 2005). Conclusión Como era de esperarse, el mayor RMS se tuvo en los sorgos forrajeros, lo cual estuvo ligado a su mayor altura y proporción tallo/planta. Aún cuando las variedades Sweet Virginia y Big Kahuna tuvieron alta proporción de tallo mostraron las mayores digestibilidades por contar con el gen bmr, pero esta alta proporción de tallo indujo a menores 120 y= 0.0299x + 45.05 R2= 0.7067 100 Proteína g kg-1 MS ninguno de los caracteres evaluados; sin embargo, al no considerar en el análisis estadístico a la variedad Big Kahuna, por ser un forraje sin producción de grano, i.e., de morfología diferente al resto de las variedades, la concentración de proteína obtiene relación estrecha con el área foliar por planta (r2= 0.71; p<0.05) (Figura 1). Estos resultados son producto de la mayor concentración de proteína en las hojas del sorgo que en sus tallos (Singh et al., 2007). 80 60 40 20 0 0 500 1000 1500 2000 2500 Figura 1. Relación entre área foliar y concentración de proteína en variedades de grano de sorgo (Solarius, Aralba y Topsilo) cosechadas a una concetración de 320 g kg-1 de MS durante 2009. Figure 1. Relationship between foliar area and protein concentration in grain varieties of sorghum (Solarius, Aralba and Topsilo) harvested at concentration of 320 g kg-1 of DM during 2009. Forage digestibility varied (p< 0.05) from 596 g kg-1 DM of variety Aralba, to 720.4 g kg-1 DM of variety Sweet Virginia (Table 1), being this last one together with Big Kahuna (both carriers of bmr gene) and with Solarius the ones with highest digestibility. Solarius is not a bmr gene carrier variety but with values also important in digestibility. The variations in digestibility were related (r2= -0.79; p< 0.05) with lignin variations on varieties (Table 2), which was foreseen since lignin is basically not digestible. In this way, in the variety with lowest digestibility Topsilo it was recorded lignin concentration of 18.05 g kg-1 of DM greater than average obtained in the more digestible varieties Sweet Virginia and Big Kahuna (Table 1). To define why Solarius had better digestibility than the other grain sorghum, statistical analysis was repeated considering only grain types. It was detected that high digestibility of Solarius was due to its lower stem/ plant ratio (0.35 vs 0.45 and 0.47 of Topsilo and Aralba, respectively). This variety had low RMS, but thanks to its high digestibility it becomes important forage when it is required the consumption of high amounts of digestible DM, required by dairy cattle. In this study is tested the positive effect of bmr gene on digestibility of forage sorghum. Similar results in sorghum with bmr have been previously reported (Núñez and Cantú, 2000; Oliver et al., 2005). Eduardo Daniel Bolaños Aguilar et al. 448 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 concentraciones de proteína. Fueron las variedades de grano las de mayor concentración de proteína gracias a su baja relación tallo/planta, pero entre estos sorgos fue el área foliar por planta la fuente de variación de la proteína. Solarius (no portador de bmr) tiene gran potencial en la alimentación de animales de alta demanda (ganado lechero) por su alta concentración de proteína y materia seca digestible. Sweet Virginia no cuenta con altas concentraciones de proteína pero si con los mayores RMS y alta digestibilidad, por lo que se convierte también en un forraje con alto potencial. Literatura citada Aydin, G.; Grant, R. J. and O’Rear, J. 1999. Brown midrib sorghum in diets for lactating dairy cows. J. Dairy Sci. 82:2127-2135. Barrière, Y.; Guillet, C.; Goffner, D. and Fichon, M. 2003. Genetic variation and breeding strategies for improved cell wall digestibility in annual forage crops. A Review. Anim. Res. 52:193-228. Bolaños-Aguilar, E. D.; Huyghe, C.; Ecalle, C.; Hacquet, J. and Julier, B. 2002. Effect of cultivar and environment on seed yield in alfalfa. Crop Sci. 42:45-50. Bolaños-Aguilar, E. D. and Emile, J. C. 2011. Dry matter yield and forage quality of sorghum under different row spacing and sowing density. Agron. J. in press. Borrell, A. K. and Hammer, G. L. 2000. Nitrogen Dynamics and the physiological basis of stay-green in sorghum. Crop Sci. 40:1295-1307. Caravetta, G. J.; Cherney, J. H. and Johnson, K. D. 1990. Within-row spacing influences on diverse sorghum genotypes: II. Dry matter yield and forage quality. Agron. J. 82:210-215. Cherney, J. H.; Cherney, D. J.; R.; Akin, D. E. and Axtell, J. D. 1991. Potential of brown-midrib, low-lignin mutants for improving forage quality. Adv. Agron. 46:157-198. Dehaynin, N. 2007. Utilisation du sorgho en alimentation animale. Thèse Doctorat. Université ClaudeBernard Lyon I. Soutenue le 1er Juin. 108 p. Didier, G. 1991. Culture et utilisation du sorgho grain ensilé en plante entière pour l’engraissement des taurillons. Compte rendu d’essai n° 91093. Institut d l’Elevage et CEESO de Soual. Conclusion As it was expected, greater RMS was obtained in forage sorghum, which was related to its higher height and stem/plant ratio. Even when varieties Sweet Virginia and Big Kahuna had high stem proportion they showed the greatest digestibility due lack of bmr gene, but this high stem ratio caused lower protein concentrations. Grain varieties were the ones with higher protein concentration thanks to its low stem/plant relationship, but between sorghum the foliar area per plant was source of variation in protein. Solarius (non bmr carrier) has great potential for animal food of high demand (dairy cattle) due its high protein concentration and digestible dry matter. Sweet Virginia has no high protein concentrations, but has higher RMS and high digestibility, therefore becomes also in high potential forage. End of the English version Dejè, Y.; Heuertz, M.; Ater, M.; Lefevre, C. and Vekemans, X. 2007. Evaluation de la diversité morphologique des variétés traditionelles de sorgho du Nord-ouest du Maroc. Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 11:39-49. Duru, M. 1994. Mineral nutrition status and botanical composition of pastures. II. Effects on nitrogen concentration and digestibility of herbage. Eur. J. Agron. 3:125-133. Emile, J. C.; Charrier, X.; Do Nacimento, W. G. and Barrière, Y. 2005. Utilisation d’ensilage de sorgho plante entière pour l’alimentation de vaches laitières. In 12e. Rencontres Recherches Ruminantes. Paris, les 7 et 8 décembre. 209 p. Gastal, F. and Lemaire, G. 2002. N uptake and distribution in crops: an agronomical and ecophysiological perspective. J. Exp. Botany. 53:789-799. Gerhardt, R. L.; Fritz, J. O.; Moore, K. J. and Jaster, E. H. 1994. Digestion kinetics and composition of normal and brown midrib sorghum morphological components. Crop Sci. 34:1353-1361. Humphreys, J. M. and Chapple, P. 2002. Rewriting the lignin road-map. Curr. Opin. Plant Biol. 5:224-229. Legarto, J. 2000. L’utilisation en ensilage plante entière des sorghos grains et sucriers: intérêts et limites pour les régions sèches. Fourrages. 163:323-338. Lema, M.; Félix, A.; Salako, S. and Bishnoi, U. 2000. Nutrient content and in vitro dry matter digestibility of silages made from various grain sorghum and sweet sorghum cultivars. J. Sustain. Agric. 17:55-70. Rendimiento y calidad de híbridos de sorgo con y sin nervadura café Lusk, J.; W.; Karau, P. K.; Balogu, D. O. and Gourley, L. M. 1984. Brown midrib sorghum or corn silage for milk production. J. Dairy Sci. 67:1739-1744. Núñez, H. G. y Cantú, B. J. E. 2000. Producción, composición química y digestibilidad del forraje de sorgo x sudán de nervadura café en la región norte de México. Téc. Pecu. Méx. 38 (3):177-187. Oliver, A. L.; Pedersen, J. F.; Grant, R. J. and Klopfenstein, A. 2005. Comparative effects of the sorghum bmr6 and bmr-12 genes: I. Forage sorghum yield and quality. Crop Sci. 45:2234-2239. Reyes, P. A.; Bolaños-Aguilar, E. D.; Hernández, S. D.; Aranda, I. E. M. e Izquierdo, R. F. 2009. Producción de materia seca y concentración de proteína en 21 genotipos del pasto Brachiaria humidicola (Rendle) Schweick. Universidad y Ciencia. Trópico húmedo. 25:213-224. 449 Statistical Analysis System (SAS) Institute. 2003. Release 9.1.3. SAS Institute, Cary, NC. Singh, S. P.; Luthra, Y. P. and Joshi, U. N. 2007. Biochemical differences in some forage sorghum varieties in relation to Pyrilla perpusilla Walker infestation. Acta Phytolopathologica et Entomologica Hungarica. 42:17-23. Stickler, F. C.; Wearden, S. and Pauli, A. W. 1961. Leaf area determination in grain sorghum.Agron. J. 53:187-188. Traxler, M. J.; Fox, D. G.; Van Soest, P. J.; Pell, A. N.; Lascano, C. E.; Lanna, D. P. D.; Moore, J. E.; Lana, R. P.; Vélez, M. and Flores, A. 1998. Predicting forage indigestible NDF from lignin concentration. J. Anim. Sci. 76:1469-1480. Vogel, K. P. and Jung, H. G. 2001. Genetic modification of herbaceous plants for feed and fuel. Crit. Rev. Plant Sci. 20:15-49. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 2 1 de marzo - 30 de abril, 2012 p. 451-465 Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha* Determination of some physical properties of Agave tequilana Weber for mechanizing crop Alberto Saldaña Robles1, Ryszard Jerzy Serwatowski Hlawinska1, Noé Saldaña Robles1, César Gutiérrez Vaca1§, José Manuel Cabrera Sixto1 y Salvador García Barrón1 Departamento de Ingeniería Agrícola. Universidad de Guanajuato. Campus Irapuato-Salamanca. Ex-Hacienda “El Copal”. Carretera Irapuato-Silao, km 9. Irapuato, Guanajuato, México. C. P. 36820. Tel. 52 462 6245215. ([email protected]), ([email protected]), ([email protected]), ([email protected]), (jmcabrera@ugto. mx), ([email protected]). §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract En el estudio realizado se determinaron algunas propiedades físicas (dimensiones y pesos) de la planta de Agave tequilana Weber y de sus elementos por separado (piña, hojas y raíz) empleando instrumentos básicos de medición, así como también se cuantificó la energía unitaria requerida para el corte de las hojas. Estos parámetros se emplearán en el diseño de una cosechadora- troceadora de agave. El estudio se realizó en noviembre de 2010 en la comunidad “El Copal”, municipio de Irapuato, Guanajuato, México. Para cuantificar la energía unitaria se evaluaron dos parámetros. El primer parámetro fue la energía que requiere el corte de la hoja de agave, dicha energía se evaluó en 10 posiciones a lo largo de una hoja de aproximadamente 1 m, realizando 4 repeticiones. Para esto se empleó un dispositivo que aplica caída libre. El segundo parámetro fue el área de la sección transversal, en las mismas posiciones de hoja donde se determinó la energía de corte, para lo cual se empleó visión artificial. De esta información se calculó la energía unitaria, resultando un valor promedio de 2.50 J·cm-2. Las propiedades físicas evaluadas presentan una gran variabilidad. La media de los resultados obtenidos concuerda con lo obtenido por otros autores(as). Se encontró que existe una relación bien definida entre: energía de corte, área de la sección transversal In this study some physical properties (dimensions and weights) of Agave tequilana Weber plant were determined and of their individual elements (pineapple, leaves and root) using basic measuring devices, as well it was measured unitary energy required for leaves cut. These parameters would be used in the design of agave’s harvester-shredder. The study was made at “El Copal”, municipality of Irapuato, Guanajuato, Mexico. To quantify unitary energy two parameters were assessed. The firs parameter was energy used during agave leaf cut this energy was assessed in 10 positions along 1m length leaf, making four repetitions. A device which applies free falling was used. The second parameter was transversal section area, in the same positions were cut energy where made in leaf, using artificial vision. From this information unitary energy was calculated, giving as result an average of 2.5 J·cm-2. The physical properties assessed have high variability. Mean of these results coincides with the values obtained by other authors. It was found that there is well defined relation between: cut energy, leaf transversal section area and position along leaf, in the extent that one of the variables increases the other increases according to second order polynomial. * Recibido: junio de 2011 Aceptado: febrero de 2012 Alberto Saldaña Robles et al. 452 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 de la hoja y la posición de la sección a lo largo de la hoja, a medida que una de las variables aumenta la otra incrementa de acuerdo a un polinomio de segundo orden. Key words: Agave tequilana Weber, harvester, unitary energy, agricultural machinery. Palabras clave: Agave tequilana Weber, cosechadora, energía unitaria, maquinaria agrícola, Introduction Introducción El principal uso del Agave tequilana Weber hoy en día es la producción de tequila que se obtiene a partir de la piña. Sin embargo, existen estudios de investigación que demuestran la factibilidad de obtener bioetanol a partir de las hojas inclusive (González, 2008; Cáceres et al., 2009; Madrigal, 2009). González (2008) manifiesta que la producción de bioetanol es viable en lo biológico, a partir de las hojas y piña de la planta, alcanzando valores de hasta 7 000 l/ha/año superior a lo obtenido para caña de azúcar y maíz, además que estos últimos son considerados fuente alimenticia. La producción de bioetanol cobra importancia pues se está en la búsqueda de nuevas fuentes de energía y donde el Agave parece ser una opción prometedora que supondría beneficios económicos importantes (Sierra, 2011; Davis, et al., 2011). Holtum et al. (2011) y Núñez et al., (2011) recomiendan que para abatir los costos de producción es necesario mecanizar el sistema de cosecha, entre otras ideas, pues es el segundo costo más importante a lo largo de los siete años, en promedio, que tarda en madurar la planta. El diseño de una cosechadora requiere de conocimiento de las propiedades físicas de la planta cosechada, como tamaño y peso, densidad de población, fuerzas y velocidades necesarias para realizar satisfactoriamente las operaciones como corte, extracción, separación, desmenuzado; con lo anterior se procede a dimensionar la máquina y sus órganos de trabajo propuestos, así como estimar la potencia requerida para su accionamiento. Existen estudios publicados sobre las propiedades físicas para gran variedad de productos agrícolas (Irtwange e Igbeka, 2002; Luther et al., 2004; Isik, 2007), como en el caso del agave variedad Sisal donde se determinaron las dimensiones de la hoja, la piña y la energía de corte que eran requeridas para la mecanización de la cosecha del cultivo (Majaja y Chancellor, 1997). Sin embargo, existen otras variedades de agave en los que algunas de las propiedades físicas no han sido determinadas. En el presente trabajo se determinan las dimensiones de las hojas y piña de la planta Main use of Agave tequilana Weber nowadays is tequila production obtained from pineapple. However, there are research studies showing the feasibility to obtain bioethanol even from leaves (González, 2008; Cáceres et al., 2009; Madrigal, 2009). González (2008) states that bioethanol production from plant’s leaves and pineapple is biologically viable, reaching values of up to 7 000 l/ ha per year above to yield obtained from sugar cane and maize, also these last are considered food crops. Bioethanol production is key since now there is a quest for new energy sources and Agave is a promising option that would represent important economical benefits (Davis, et al., 2011; Sierra, 2011). Holtum et al. (2011) and Núñez et al. (2011) recommend that for reducing production costs is required to mechanize harvest system, among other ideas, since is the second contributor cost during 7 years, in average, that plant reaches its maturity. Harvester design involves knowledge about physical properties of harvested plant, like size and weight, plants density, forces and speeds needed for efficiently performing operations such as cutting, extraction, separation, shredding; with this information then is possible to size machine and their proposed working components, as well to calculate power required for driving it. There are published studies about physical properties of many agricultural products (Irtwange and Igbeka, 2002; Luther et al., 2004; Isik, 2007), as in case of agave cultivar Sisal where dimensions for, leaf, pineapple and energy cut required for this crop’s harvest mechanization were determined (Majaja and Chancellor, 1997). However, there are other agave cultivars in which some physical properties have not been determined. In this work the dimensions of leaves and pineapple of Agave tequilana Weber plant are determined; and also leaves, pineapple and root weights. Also the unitary energy for leaf cut is determined and its relationships between cut and position along leaf and with transversal section area. Such parameters will be used with the aim to design an agave harvester-shredder prototype machine. Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha de Agave tequilana Weber; y los pesos de hojas, piña y raíz. Se determina además la energía unitaria para el corte de hoja y sus posibles relaciones con la posición de la sección a lo largo de la hoja y con el área de la sección transversal. Dichos parámetros serán utilizados en el diseño de un prototipo de cosechadora -troceadora de agave. Materiales y métodos Para la realización del presente estudio se emplearon nueve plantas de Agave tequilana Weber de entre 7 y 8 años de edad. Tres fueron extraídas del campo experimental de agave de la División de Ciencias de la Vida (DICIVA) de la Universidad de Guanajuato, las otras seis plantas fueron proporcionadas de las plantaciones de la empresa tequilera Real de Pénjamo S. A. de C. V. Los nueve agaves fueron transportados a las instalaciones de la DICIVA en el municipio de Irapuato, los primeros tres fueron trasladados con piña, hojas y raíz (Figura 1 a) y de los otros seis se trasladó únicamente la piña (Figura 1 b). (a) 453 Materials and methods During its development this study used nine Agave tequilana Weber plants between 7 and 8 years old. Three were supplied by agave experimental field from División de Ciencias de la Vida (DICIVA) of Universidad de Guanajuato, the other six plants were supplied from plantations of tequila company Real de Pénjamo S. A. de C. V. Nine agaves were moved to DICIVA facilities at municipality of Irapuato, the first three were complete with pineapple, leaves and root (Figure 1 a) and the other six only the pineapple (Figure 1 b). Determination of dimensions and weights in complete plant. Before jimar (remove leaves to keep pineapple) the three plants the following physical characteristics were determined: plant height without root, root length, maximum diameter taking into account the longest leaves, plant weight without root and root weight. 5m ± 0.5 mm measuring tape was used to measure height, plant diameter, (b) (c) Figura 1. Materia prima y equipo agrícola para ensayos; (a) planta completa de la DICIVA; (b) piñas de tequilera “Real de Pénjamo”; y (c) báscula de dinamómetros montada sobre pluma agrícola. Figure 1. Raw material and agricultural equipment for tests; (a) complete plant from DICIVA; (b) pineapples from tequila company “Real de Pénjamo”; and (c) dynamometers mounted on agricultural mower. Determinación de dimensiones y pesos de la planta completa. Antes de jimar las tres plantas se determinaron las siguientes propiedades físicas: altura de la planta sin raíz, longitud de la raíz, diámetro máximo tomando en cuenta las hojas más extendidas, peso de planta sin raíz y peso de la raíz. El instrumento de medición empleado para obtener la altura, el diámetro de la planta, así como la profundidad de la raíz fue un flexómetro de 5 m ± 0.5 mm. La lectura se realizó colocando la planta en una superficie horizontal and root depth. The measuring was made placing plant horizontally and with an element in its upper portion, and its horizontality was verified making measurement of each extreme of element that was the same. Each plant was measured using the same process. To obtain weight of all plant and root a specially made weighing scale was used, which consisted of an array in parallel four 50 kgf ± 0.5 kg dynamometers (Figure 1 c), the bascule was put in agricultural mower coupled and driven by 454 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 y con un elemento en la parte superior de la planta, cuya horizontalidad se verificó realizando la medición de cada extremo del elemento para que fuese la misma. Se siguió el mismo proceso para cada una de las plantas. Para obtener el peso de la planta completa y la raíz se empleó una báscula fabricada especialmente para esta aplicación que fue un arreglo en paralelo de cuatro dinamómetros de 50 kgf ± 0.5 kg cada uno (Figura 1 c), la báscula se colocó en una pluma agrícola acoplada y accionada por un tractor New Holland 5610S de potencia mediana (78 hp). El dispositivo con los dinamómetros se colocó en el gancho de la pluma agrícola, y la planta de agave se sujetó de su base mediante una cuerda que posteriormente se colocó en el dispositivo con los dinamómetros Determinación de dimensiones y peso de la piña. Se jimaron las plantas separando las hojas y piñas. Las propiedades físicas que se determinaron para cada piña en las nueve plantas, fueron el peso, la altura y el diámetro máximo, para lo cual se emplearon los mismos instrumentos de medición y procedimiento que en la planta completa. Determinación de dimensiones y peso de la hoja. Las propiedades a determinar en las hojas fueron: número de hojas por planta, longitud, el ancho máximo, espesor máximo y peso. Para determinar longitud, ancho y espesor se empleó el flexómetro antes mencionado. Para determinar los pesos de cada hoja se empleó una balanza analítica ScoutTM Pro con precisión de ± 1 g. Los parámetros anteriormente mencionados se determinaron en 30 hojas seleccionadas al azar de tres plantas, un total de 90 hojas. Una vez obtenidas las mediciones para las distintas propiedades de la planta así como de cada uno de sus elementos (hojas y piña) se obtuvo el valor medio y la desviación estándar. Estimación de la energía de corte por sección (relación posición-energía). Se diseñó y construyó un dispositivo (Figura 2 a) para evaluar la energía de corte. Dicho elemento está formado de un par de marcos en “U” invertida que están soldados en una placa de metal, ambos marcos tienen en su parte media superior un tubo soldado de 6 cm de largo y 0.5 plg de diámetro nominal, el cual sirve como guía. En el primer marco la guía permite el movimiento de una varilla lisa que en un extremo cuenta con una base rectangular y en el otro tiene una cuchilla tipo “Y” (Figura 2 b), la cual realiza el corte de la hoja de agave. Similar a la del prototipo que se pretende diseñar, el tipo de cuchilla, es la más empleada en máquinas agrícolas (trituradoras, desmenuzadoras, molinos, etc.). Alberto Saldaña Robles et al. New Holland 5610S tractor of intermediate power (78 hp). The device with dynamometers was put in the agricultural mower hook and agave plant was held from its base by rope and this was used to put it in the dynamometers device. Determination of pineapple dimensions and weight. Plant was divided in leaves and pineapples. The physical properties that were determined for each pineapple in the nine plants were weight, height and maximum diameter, for which the same measuring instruments and procedure for complete plant were used. Determination of leaves dimensions and weight. The properties to assess in leaves were: number of leaves per plant, length, maximum width, maximum thickness and weight. To determine length, width and thickness the previously mentioned measuring tape was used. To determine the weights of each leaf a ScoutTM Pro analytical balance with ± 1 g precision was used. These parameters were taken from 30 leaves randomly selected from three plants, giving a total of 90 leaves. Once measurements for different plant properties as well as each of its components (leaves and pineapple) were taken as well as mean value and standard deviation. Estimation of energy per section cut (relationship position-energy). A device was designed and built (Figure 2 a) to assess cut energy. Such element is comprised by two inverted “U” frames welded to metallic plate, both frames have in the middle of upper section one welded 6 cm length and 0.5 inches diameter tube as guide. In the first frame the guide allows motion of a blade with rectangular shape in one end and Y type blade in the other end (Figure 2 b), which makes leave cut. Similar to prototype for design, knife type is the most used in agricultural machines (crushers, shredder, mills, etc.). The blade was supplied with smooth edge and 30° angle of attack and was made from 1.5 in x 0.25 in ASTM-A36 commercial beam, recommended values that require less force to make cut in agave plant (Sierra et al., 2010) assuring resistance and sharp rigidity of knife. In the second frame (which is approximately 4 times taller than first one) the tube serves like guide for weight holder. In the metallic plate were blade rests wood base was put to mitigate loss of sharp effect, by impact of blade on metal. The aim of device is to transform potential energy into kinetic by free fall, to make leaf cut by blade. Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha (a) (b) 455 (c) Figura 2. Dispositivo de prueba (a) vista general; (b) detalle cuchilla tipo “Y”; y (c) ensayo a 0.1 m. Figure 2. Test device: (a) general overview; (b) “Y” type blade detail; and (c) test at 0.1 m. La cuchilla se proveyó de un borde liso con un ángulo de ataque de 30° y se fabricó de solera comercial ASTM-A36 de 1.5 plg. X 0.25 plg., valores recomendados que precisan la menor fuerza para realizar el corte de la planta de agave (Sierra et al., 2010) asegurando resistencia y rigidez del filo de la navaja. En el segundo marco (que es aproximadamente 4 veces más alto que el primero) el tubo sirve de guía a un porta-pesas. En la placa de metal donde se apoya la cuchilla se colocó una base de madera para mitigar el efecto de la pérdida de filo, por el impacto de la cuchilla sobre la base de metal. El objetivo del dispositivo es transferir energía potencial a cinética empleando caída libre, para realizar el corte de la hoja con la cuchilla. Se preparó el material para las pruebas seleccionando al azar cinco hojas de una planta de agave, las cuales fueron marcadas cada 10 cm comenzando de la espina en la punta de la hoja, con un total de 10 marcas por hoja, la longitud de las hojas en promedio fue de alrededor de un 1 m. Las marcas fueron identificadas como la posición de corte en la hoja, iniciando con la posición cero en la punta de la hoja y terminando en la posición diez cerca del extremo que estaba unido a la piña de agave. Al porta-pesas se le agregaron pesas de 4, 6, 10 y 20 kg en diferentes combinaciones. Para cortar las posiciones de la hoja con menos espesor se emplearon pesos pequeños, a medida que el grosor y ancho de la hoja aumentó se manejaron pesos más grandes. Sobre la base de madera del dispositivo de prueba se colocó una hoja tres centímetros atrás de la primera marca (0.1 m de la punta) apoyando la cuchilla tipo “Y” ligeramente. Una vez logrado el corte completo se repitió en la sección indicada The material was prepared for tests selecting at random five leaves of agave plant, which were identified each 10 cm starting in the thorn and finishing in leaf tip, with a total of 10 marks per leaf, the average length of leaves was around 1 m. The mark were identified like cut position in leaf, starting in position zero in leaf tip and finishing in position ten near the end that was joint to agave pineapple. The weight holder was prepared with weights of 4, 6, 10 and 12 kg in different combinations. To cut positions in leaf with less thickness small weights were used, as thickness and leaf width increased bigger weights were used. Over wood base of testing device a 3 cm plate was put first mark (0.1m) slightly supporting “Y” type blade. Once achieving full cut it was repeated in the indicated section to determine cut energy, recording mass values of used weights and height of falling of weight holder. Cut energy (ECS) in such section was calculated using the following simplified equation. ECS= mP gh (1) Where: m P = is mass of weight holder plus mass of weights (kg); g = gravity force at Irapuati city (m/s2); and h= height of weight holder (m). To determine gravity value at Irapuato it was used an equation recommended by Organización Internacional de Metrología Legal (OIML) with a precision of 0.01% (Thulin, 1992). This is the equation. gl= ge * (1 + ƒ * sen2 ø - (5.8X10-6 * sen22 ø) - 3.086X10-6 * H (2) 456 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Alberto Saldaña Robles et al. a determinar la energía de corte, registrando los valores de masa de las pesas empleadas y altura de caída del portapesas. La energía de corte en dicha sección (ECS) se calculó empleando la siguiente ecuación simplificada. Where: gl= at local gravity (m/s2); ge= acceleration of gravity at sea level (9.7803 m/s2); f= constant of gravitation crushing with a value of 0.0053024; ø= latitude in degrees; and H= orthometric altitude over average sea level. ECS= mP gh The previous equation use coeff icients adopted by Asociación Internacional de Geodesia (IAG) in the system GRS80 (Geodetic Reference System of 1980), such coefficients represent earth’s size, shape and gravitational fields (Moritz, 1988). Altitude of municipality of Irapuato is 1 730 m and north latitude is 20.6° (INEGI, 2010), giving a value of gravitational acceleration of 9.7814 m/s2. (1) Donde: mP= es la masa del porta-pesas más masa de pesas (kg); g= a la gravedad en la ciudad de Irapuato (m/s2); y h= a la altura de elevación del porta-pesas (m). Para determinar el valor de la gravedad en el municipio de Irapuato se empleó la ecuación recomendada por la Organización Internacional de Metrología Legal (OIML) que presume una precisión de 0.01% (Thulin, 1992). La ecuación se presenta a continuación. gl= ge * (1 + ƒ * sen2 ø - (5.8X10-6 * sen22 ø) - 3.086X10-6 * H (2) Dónde: gl= a la aceleración de la gravedad local (m/s2); ge= a la aceleración de la gravedad a nivel del mar (9.7803 m/ s2); f= a la constante de aplastamiento gravitacional con un valor de 0.0053024; ø= a la latitud en grados; y H= a la altitud ortométrica sobre el nivel medio del mar. La ecuación anterior utiliza los coeficientes adoptados por la Asociación Internacional de Geodesia (IAG) en el sistema GRS80 (Geodetic Reference System of 1980), dichos coeficientes representan el tamaño, forma y campos gravitacionales de la tierra (Moritz, 1988). La altitud para el municipio de Irapuato es de 1730 m y la latitud Norte de 20.6° (INEGI, 2010), resultando un valor de aceleración gravitacional de 9.7814 m/s2. Una vez realizada la prueba de corte a 0.1 m desde la espina, (Figura 2 c) y habiendo calculado la energía con la ecuación (1), se repitió el mismo procedimiento anterior para las siguientes 9 posiciones sobre la hoja; la misma metodología se efectuó para las otras 4 hojas, calculando un total de 50 energías de corte. Una vez realizadas las pruebas en las cinco hojas se obtuvo el valor medio y la desviación estándar de la energía para cada posición en la hoja. Con los datos medios obtenidos de la energía en cada sección de la hoja se buscó la regresión que ajustase mejor a los datos empleando para ello Microsoft Excel 2010. Se verificaron cuatro modelos estadísticos de regresión: lineal, polinomial de orden dos, exponencial y logarítmica, de ellas se escogió la que mejor predijo el fenómeno en función del máximo coeficiente de Pearson. Determinación del área transversal de la hoja por posición (relación área-energía, energía unitaria). Se define a la energía unitaria, como la cantidad de energía necesaria para Once the cut test was made at 0.1 m from thorn, (Figure 2 c) and after calculating energy with equation (1), the same procedure was repeated for the following 9 positions on the leaf; the same methodology was used for the other four leaves, calculating a total of 50 cut energies. Once the tests were made in the five leaves mean value and standard deviation was obtained from energy at each leaf position. With the data obtained from energy in each section of leaf, the best regression adjusted to data was found using Microsoft Excell 2010. Four statistical models for regression were verified: lineal, second order polynomial, exponential and logarithmic, from them it was selected the one that best predicted the function of Pearson’s maximum coefficient. Determination of leaf transversal area per position (relationship area-energy, unitary energy). Unitary energy is defined as amount of energy required for leaf cut per unit of transversal area. Cut energy was previously estimated each 0.1 m of leaf along 1m, obtaining 10 estimations, therefore it was suitable to determine transversal area in those same sections. To determine area image digital analysis (IDA) was used. The IDA method consisted in estimate transversal area from digital images taken by Intel CS120 Web Cam configured at 320 x 240 pixels resolution. A computer routine was developed with software MATLAB 8a using IDA library. This routine allows to define area of white / black re-masterized image. The Intel CS120 web cam was mounted in a structure (Figure 3 b) specially built for IDA. This structure counts with several devices that play an important role for proper image analysis. Uniform illumination on sample of transversal area of agave leaf is very important to avoid shadows in transversal area; with this purpose the structure has two StockerYale lamps (Figure 3 a) at a height of 45 cm away from the objective (area sample), with inclinations Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha el corte de la hoja por unidad de área transversal. La energía de corte fue estimada anteriormente cada 0.1 m de la hoja a lo largo de 1m, obteniendo 10 estimaciones, por lo que fue conveniente determinar el área transversal en estas mismas secciones. Para determinar el área se empleó análisis digital de imagen (ADI). El método de ADI consistió en estimar el área de la sección transversal de la hoja de agave cada 0.1 m, a partir de imágenes digitales tomadas por una Cámara Web Intel CS120 (Figura 3 a) configurada para una resolución de 320 x 240 pixeles. En el programa MATLAB 8a se elaboró una rutina empleando la librería de ADI. La rutina elaborada permite determinar el área de una imagen remasterizada en blanco y negro. La Cámara Web Intel CS120 fue montada en una estructura (Figura 3 b) construida especialmente para el ADI. La estructura cuenta con varios aditamentos que juegan un papel importante para el adecuado análisis de las imágenes. La iluminación uniforme sobre una muestra de área transversal de la hoja de agave es de gran importancia para eliminar las sombras del área transversal; para ello la estructura cuenta con un par de Lámparas StockerYale (Figura 3 a) acomodadas a una altura de 45 cm del objetivo (muestra de área), con ángulos de inclinación de 25 grados respecto de la horizontal. A la base donde la cámara toma las imágenes se colocó una hoja de papel color rosa (PANTONE Rhodamine Red) para contrastar el color del área transversal de la hoja de agave (Figura 3 c). (a) 457 angles of 25 degrees regards horizontal axis. The base where camera takes images a pink colored paper sheet (PANTONE Rhodamine Red) was put to make contrast with agave leaf transversal area color (Figure 3 c). Intel CS120 web cam takes an image and MATLAB routine process it at gray level with 8 bits resolution (Figure 4 a). Conversion is made averaging digital levels of each RGB color channel also at 8 bits. Then it was used bias factor of 0.7 for obtain processed black and white images (Figure 4 b). Bias factor was found at test and error for supplied illumination, background used and objective color and texture characteristics. With black and white image of transversal area of agave leaf shown by white pixels and the rest of image in black color, the MATLAB routine counted the amount of white pixels and converts them into area using a conversion factor fed to software routine. To obtain conversion factor a calibration is required. For this study the calibration was performed to set conversion factor using software routine, putting 2 white square papers with different area; 1 cm2, 9 cm2 and 36cm2. After calibration, images were taken from agave leaves cuts. Procedure to determine transversal area at every 10 cm of agave leaf is described in the following lines. Five agave plant leaves were randomly cut, and were marked (b) (c Figura 3. Equipo de visión artificial; (a) cámara Web Intel CS120 y lámparas StockerYale; (b) estructura de soporte; y (c) ensayo de lectura de área a 0.1 m de la hoja 1. Figure 3. Equipment for artificial vision; (a) Intel CS120 web cam and StockerYale lamps; (b) support structure; and (c) test for measuring area at 0.1m away from leaf 1. La Cámara Web Intel CS120 toma una imagen y la rutina en MATLAB posteriza a un nivel de grises con una resolución de 8 bits (Figura 4 a). La conversión se realiza promediando los niveles digitales de cada canal de color RGB también de 8 bits. En seguida se empleó un factor de umbralización every 10 cm and using a knife they were shredded at the corresponding positions, obtaining a total of 10 parts per leaf (Figure 5 a). From each section a sample of transversal section with a maximum thickness of 2 mm (Figure 5 b). Alberto Saldaña Robles et al. 458 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 de 0.7 para obtener imágenes posterizadas en blanco y negro (Figura 4 b). El factor de umbralización se encontró a prueba y error para la iluminación proporcionada, el fondo empleado y las características de color y textura del objetivo. Con la imagen en blanco y negro el área transversal de la hoja de agave representada por pixeles blancos y el resto de la imagen en color negro, la rutina hecha en MATLAB se encargó de contar el número de pixeles blancos y convertirlos en área mediante un factor de conversión que se alimentó a la rutina del programa. Para obtener el factor de conversión se requiere realizar una calibración. Para el presente estudio se realizó una calibración para establecer el factor de conversión empleado en la rutina del programa, colocando 3 cuadros de papel blanco con diferente área; 1 cm2, 9 cm2 y 36cm2. Una vez calibrado se procedió a realizar la toma de imágenes de los recortes de las hojas de agave. El procedimiento para determinar el área transversal a cada 10 cm de la hoja de agave se describe a continuación. Se cortaron al azar cinco hojas de una planta de agave, las cuales fueron marcadas cada 10 cm y empleando una navaja fueron troceadas a estas respectivas posiciones, obteniendo un total de 10 trozos por hoja (Figura 5 a). De cada trozo se obtuvo una muestra de la sección transversal con un espesor máximo de 2 mm (Figura 5 b). Se colocó la primera muestra de la hoja 1 sobre el fondo empleado en la toma de imágenes, centrándola. Posteriormente se tomó la imagen con la Cámara Web Intel CS120 y se ejecutó la rutina, calculando y registrando el área de la muestra. Esto se repitió para todas las muestras de la hoja 1 (Figura 6). De la misma manera se determinó el área de las muestras de las otras cuatro hojas, registrando todos los valores de área. (a) Figura 6. Imágenes de muestras a (a) 0.1 m; (b) 0.4 m; y (c) 1.0 m. Figure 6. Images of samples at (a) 0.1 m; (b) 0.4 m; and (c) 1.0 m. (a) (b) Figura 4. Posterización de imágenes; (a) nivel de grises con resolución de 8 bits; (b) blanco y negro. Figure 4. Images processing; (a) gray levels at 8 bits resolution; and (b) white and black. (a) (b) Figura 5. Hoja de agave; (a) seccionada en 10 partes de 0.1m; y (b) sección transversal a 0.7 m. Figure 5. Agave leaf; (a) cut in 10 parts of 0.1m; and (b) transversal section at 0.7 m. The first sample of leaf 1 was put over background used during image taking and centering it. Then image was taken with Intel CS120 web cam and routine was run, calculating and recording sample area. This was repeated for all samples of leaf 1 (Figure 6). This same procedure was used to determine areas from samples of other four leaves, recording (b) (c) Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha Una vez obtenidas las 10 áreas de cada una de las 5 hojas, se calculó el área media y la desviación estándar a las diferentes posiciones de la hoja de agave. Con el valor medio del área de la sección transversal de la hoja de agave y el valor de la energía de corte, ambos parámetros a las mismas posiciones de la hoja, se evaluó el valor promedio de la energía unitaria así como la relación de la energía con el área transversal (área- energía) en función de su posición en la hoja mediante una regresión polinomial elaborada en Microsoft Excel 2010. Resultados y discusión Determinación de dimensiones y pesos de la planta. En la Figura 7 se resumen las dimensiones encontradas a partir de las mediciones realizadas a las plantas de agave, sus valores medios se presentan en el Cuadro 1, junto con los valores mínimos, máximos y las desviaciones estándar. 459 all area values. Once 10 areas from each one of five leaves were obtained, mean area and standard deviation were calculated at different positions of agave leaf. With mean value of area from transversal section of agave leaf and energy cut value, both parameters at same leaf position, it was calculated average value of unitary energy as well as relationship of energy with transversal area (area - energy) in function of its position in leaf by polynomial regression done in Microsoft Excel 2010. Results and discussion Determination of dimension and weights of plant. The Figure 7 summarizes dimensions found from measurements made to agave plants, their mean values are shown in Table 1, together with minimum, maximum and standard deviation values. Cuadro 1. Propiedades físicas determinadas de la planta de agave. Table 1. Physical properties determined from agave plant. Figura 7. Dimensiones de la planta de agave y la piña. Figure 7. Dimensions of agave plant and pineapple. De los nueve valores registrados de peso de plantas sin raíz se obtuvo un valor medio de 132 kg, el valor máximo registrado fue de 143 kg y el mínimo de 125 kg con una desviación estándar de 6.9 kg. El valor medio obtenido del peso de la raíz fue de 29 kg con un máximo de 38 kg y un mínimo de 20 kg con una desviación estándar de 7.3 kg. Al extraer las plantas éstas presentaron suelo y piedras adheridas en diferentes proporciones. El valor medio, mínimo, máximo y desviación estándar del diámetro y altura de la piña se muestra de igual manera en el Cuadro 1. El valor medio del peso de la piña de agave fue 50 kg registrando un valor mínimo de 41 kg y un valor máximo de 60 kg con una desviación media de 6.6 kg. Determinación de dimensiones y peso de la hoja. El número de hojas (considerando las hojas secas cerca de la base de la piña) máximo encontrado para una planta fue de Propiedad física (m) A: diámetro máximo planta B: altura de la planta C: profundidad de raíz D: altura de la piña E: diámetro máximo piña Valor Desviación Mínimo Máximo medio estándar 2.43 2.20 2.75 0.22 1.54 1.40 1.69 0.11 0.51 0.31 0.60 0.12 0.56 0.46 0.51 0.43 0.60 0.50 0.04 0.03 From nine recorded values of plants weight without root it was obtained mean value of 132 kg, the maximum recorded value was 143 kg and the minimum of 125 kg with a standard deviation of 6.9 kg. The mean value obtained for root weight was 29 kg with maximum of 38 kg and minimum of 20 kg with standard deviation of 7.3 kg. When extracting plants they had soil and stones adhered at different rates. The mean, minimum, maximum and standard deviation value of pineapple diameter and height are also shown in Table 1. Mean value of agave pineapple weight was 50 kg recording a minimum value of 41 kg and maximum value of 60 kg with standard deviation of 6.6 kg. Alberto Saldaña Robles et al. 460 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 136 y el mínimo de 86 con un valor medio de 115 hojas y una desviación estándar de 19. La hoja tuvo un peso medio de 0.768 kg con un máximo de 0.862 kg y un mínimo de 0.666 kg con una desviación estándar de 0.091 kg. El Cuadro 2 muestra los valores obtenidos para las dimensiones determinadas a la hoja. Existen pocos trabajos que reportan las dimensiones y pesos del Agave tequilana Weber; sin embargo, estos permiten comparar, corroborar o contrastar las diferencias o similitudes. Moreno et al. (2011) evaluó agaves de 16 parcelas y reportó un rango de pesos de 30 a 60 kg para Agave tequilana Weber y una desviación estándar en los datos reportados de 8.3 kg, con edades entre 6 y 8 años contra el rango reportado en este trabajo de 41 a 60 kg y desviación estándar de 6.6 kg para el mismo agave con edades entre 7 y 8 años. Los agaves de 6 años pudieran presentarse con menor peso, de lo anterior puede derivarse la diferencia en los rangos de peso y la menor desviación estándar en este trabajo. Asimismo, Háuad et al. (2010) presenta una descripción del Agave tequilana Weber en el cual reporta la altura de la planta, el largo de la hoja y el máximo ancho, los valores reportados son de entre 1.5 a 1.8 m, 1 a 1.45 m y 7 a 11 cm respectivamente, comparado con los valores reportados en este artículo de entre 1.40 a 1.69 m, 1 a 1.25 m y 7 a 11 cm respetivamente. Los valores entre los rangos de las variables descritas por Háuad et al. (2010) y los valores del presente estudio se traslapan coincidiendo con el mismo rango para el ancho de la hoja. Granados (1993) citado por Bautista et al. (2001) y Sierra et al. (2010) reporta un valor aproximado de la longitud de la hoja de 1.25 m, y un ancho entre 8 y 10 cm, valores similares a los encontrados en el presente trabajo. Cuadro 2. Propiedades físicas determinadas de las hojas de agave. Table 2. Physical properties of agave leaves. Propiedad física A: largo (m) B: ancho máximo (cm) C: espesor máximo (cm) Valor Desviación Mínimo Máximo medio estándar 1.08 1.00 1.25 0.05 9.3 7.0 11.0 0.9 2.7 2.0 4.0 0.5 Estimación de la energía de corte por sección (relación posición-energía). Una vez determinado el valor de la energía de corte cada 0.1 m a lo largo de cada una de cinco hojas se determinó el valor medio de energía en cada sección y la desviación estándar, lo anterior se muestra en el Cuadro 3. Determination of leaf dimensions and weight. Maximum number of leaves (considering dry leaves near pinneapple base) for one plant was 136 and minimum was 86 with mean value of 115 leaves and standard deviation of 19. Leaf had mean weight of 0.768 kg with maximum of 0.862 kg and minimum of 0.666 kg with a standard deviation of 0.091 kg. Table 2 shows values obtained for determined leaf dimensions. There are few works reporting dimensions and weights of Agave tequilana Weber; however, these allow to compare, to prove or to show differences or similarities. Moreno et al. (2011) assessed agaves from 16 plots and reported weight range from 30 to 60 kg for Agave tequilana Weber and standard deviation of reported data of 8.3 kg, with ages between 6 and 8 against range reported in this work mfr 41 to 60 kg and standard deviation of 6.6 kg for same agave with ages between 7 and 8 years. Agaves of 6 years could have less weight, and this could be the reason of difference in weight ranges and less standard deviation in this work. Also, Háuad et al. (2010) showed a description for Agave tequilana Weber in which reports plant height, leaf length and maximum width, at values between 1.40 to 1.69 m, 1 to 1.25 m and 7 to 11 cm, respectively. Values between ranges of variables described by Háuad et al. (2010) and values from this study are overlapped coinciding with the same range for leaf width. Granados (1993) quoted by Bautista et al. (2001) and Sierra et al. (2010) reports an approximate value of leaf length of 1.25 m, and a width between 8 and 10 cm, values similar to the ones found in this work. Estimation of cut energy per section (relationship position-energy). Once is defined cut energy value every 0.1 m along each one of five leaves mean energy value in each section was determined and also the standard deviation, this is seen in Table 3. Table 3 shows mean height and mean weight used to make proper cut at different positions, it is also seen that position and mean energy relationship is polynomial level 2 (Figure 8). At greater position of section in leaf the greater energy quantity required to make cut, this is because thickness increases when moving from tip to other end near pineapple. Statistical regression model that had correlation coefficient near to 1 (R2= 0.9836), was second order polynomial, which is shown bellow. E= 20.341P2 + 11.395P + 1.5017 (3) Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha 461 Cuadro 3. Energía media en función de la posición de la sección a lo largo de la hoja de agave. Table 3. Energy measured in function of position along agave leaf. Altura pesa (m) Pesa (kg) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 0.07 0.08 0.12 0.08 0.08 0.10 0.11 0.13 0.15 0.16 6 6 4 10 20 20 20 20 20 20 Hoja 1 4.1 4.7 4.7 8.8 15.7 19.6 23.5 25.5 27.5 29.4 Hoja 2 4.7 5.3 5.9 7.1 8.2 10.8 18.6 21.6 32.4 34.3 El Cuadro 3 muestra la altura media y el peso medio utilizados para realizar un corte satisfactorio en las diferentes posiciones de la hoja, también se observa que la relación de la posición y la energía media es polinomial de grado dos (Figura 8). A mayor posición de la sección a lo largo de la hoja se requiere de una mayor cantidad de energía para realizar el corte, esto se debe a que el grosor aumenta al moverse de la punta de la hoja hacia el extremo unido a la piña. El modelo estadístico de regresión que presentó el coeficiente de correlación más cercano a 1 (R2= 0.9836), fue el polinomial de segundo orden, que se muestra a continuación. E= 20.341P2 + 11.395P + 1.5017 (3) Donde: E= a la energía necesaria para el corte medida en Joules y P es la posición de la hoja medida a partir de la punta en centímetros. La ecuación anterior puede emplearse para determinar la energía que requiere el corte de la hoja en cualquier posición propuesta. Es importante destacar que a partir de los 0.3 m los valores de energía en función de la posición de la hoja muestran una tendencia lineal (R2= 0.994), muy probablemente las posiciones de 0.1 y 0.2 m presentaban un grosor y área pequeños y muy parecidos. Determinación del área transversal de la hoja por sección (relación área- energía y posición-área). En el Cuadro 4 se muestran las áreas obtenidas de cada una de las 10 secciones a lo largo de cada una de las cinco Energía (J) Hoja 3 Hoja 4 4.7 4.1 5.3 4.4 5.3 4.3 6.5 7.8 7.7 15.7 13.7 19.6 19.6 21.6 21.6 25.5 29.4 29.4 30.4 31.4 Hoja 5 3.5 4.1 4.7 7.8 13.7 17.7 21.6 25.5 29.4 31.4 Media 4.2 4.8 5.0 7.6 12.2 16.3 21.0 23.9 29.6 31.4 Desviación estándar 0.5 0.5 0.6 0.9 4.0 3.9 1.9 2.1 1.8 1.8 35 Energía media de corte (J) Distancia en hoja (m) 30 25 20 15 10 5 0 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Posición de la sección a lo largo de la hoja (m) 1.2 Figura 8. Relación posición de la sección a lo largo de la hojaenergía media de corte. Figure 8. Relationship position of section along leaf-mean cut energy. Where: E= energy required for cut measured in Joules and P is position of leaf measured from tip in centimeters. This equation can be used to define energy required to cut leaf at any given position. It is important to mention that from 0.3 energy values in function of leaf position had a lineal trend (R2= 0.994), it is likely positions 0.1 and 0.2 m had small and similar thickness and area. Determination of transversal area of leaf per section (relationship area-energy and position-area). Table 4 shows areas obtained from each one of ten sections along five agave leaves, as well mean area and standard deviation. In this table it can also be seen that from 0.9 m of distance standard deviation increases considerably if compared with the rest of the values; this could be due Alberto Saldaña Robles et al. 462 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 hojas de agave, así mismo el área media y la desviación estándar. En dicho cuadro también se puede observar que a partir de los 0.9 m de distancia la desviación estándar aumenta considerablemente comparada con los demás valores; lo anterior se puede deber a que no todas las hojas tienen exactamente la misma longitud y por ende en las hojas más cortas se empieza a exhibir la unión de la hoja con la piña. not all leaves have exactly the same length and therefore in shorter leaves becomes more evident the bond with pineapple. The equation that rules transversal area behavior in function of position in the leaf is the following. A= 26.875P2 - 10.948P + 2.51420582 (4) Cuadro 4. Área de la sección transversal a lo largo de la longitud de las hojas. Table 4. Transversal section area along leaves length. Posición de sección a lo largo de la hoja (m) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 Área (cm2) Hoja 1 0.7971 1.5558 2.2441 3.3829 4.0838 5.5002 6.8521 9.6948 13.4025 21.1527 Hoja 2 0.6978 1.4245 2.3115 3.4983 4.1123 5.2801 7.4236 9.9158 13.2066 16.9723 Hoja 3 0.7716 1.5388 2.3621 3.5820 4.4692 5.6239 7.3065 9.9413 12.3403 20.6078 La ecuación que rige el comportamiento del área transversal en función de la posición de la sección a lo largo de la hoja se presenta a continuación. A= 26.875P2 - 10.948P + 2.51420582 (4) Donde: A= a el área transversal de la hoja en centímetros cuadrados y P es la posición de la sección a lo largo de la hoja en metros. La función tiene un comportamiento polinomial de segundo orden con una R2 de 0.975, al aumentar la posición de la hoja el valor de área transversal incrementa. Empleando los valores medios del área de la sección transversal de la hoja de agave (Cuadro 4) y los valores medios de la energía de corte (Cuadro 3), ambos parámetros a las mismas posiciones en la hoja, se evaluó el valor promedio de la energía unitaria, resultando un valor de 2.50 J cm-2. La relación área- energía se puede observar en la Figura 9, donde se aprecia un comportamiento polinomial de orden 2 con una R2 de 0.9789; al aumentar el área en la posición de la hoja el valor de energía incrementa. La ecuación que rige el comportamiento de la energía media de corte en función del área de la sección transversal se presenta a continuación. Hoja 4 0.7211 1.5259 2.3421 3.5332 4.3374 5.0766 6.9691 10.1597 13.7107 18.0891 Hoja 5 0.7284 1.3767 2.3623 3.6699 4.5421 5.6391 7.8093 9.6612 14.2707 23.4263 Media 0.7432 1.4843 2.3244 3.5333 4.3090 5.4240 7.2721 9.8746 13.3862 20.0496 Desviación estándar 0.0403 0.0790 0.0495 0.1059 0.2063 0.2416 0.3811 0.2033 0.7096 2.5614 Where: A= transversal area of leave in square centimeters and P is position throughout leave in meters. Function has second order polynomial behavior with R2 of 0.975, when position increases transversal area increases too. Using mean values of transversal section of agave leaf (Table 4) and mean values of cut energy (Table 3), both parameters at same leaves position, it was assessed average value of unitary energy, resulting a value of 2.50 J cm-2. Relationship area-energy can be seen in Figure 9, where second order polynomial behavior is detected with an R2 of 0.9789; when increasing area in leaf position, energy increases. The equation that rules mean energy behavior in function of transversal section area is the following. E= -0.0903A2 + 3.4185A - 0.5566 (5) Where: E= required energy for cut measured in Joules; and A= transversal section area in square centimeters. The growth bellow linear behavior in relationship energy/ area can be due decrease in relationship perimeter/area of leaf section. In the extent the section increases, the Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha (5) Donde: E= a la energía necesaria para el corte medida en Joules; y A= a el área de la sección transversal respectiva en centímetros cuadrados. El crecimiento menor al lineal en la relación energía/área puede deberse al decremento de la relación perímetro/área de la sección de la hoja. Conforme aumenta la sección se va reduciendo el contenido relativo de la piel, más dura para el corte que el interior de la hoja. Calculando con los datos del cuadro 3 y 4 la energía unitaria del corte para la distancia de 1m, es decir para una sección a 8 cm de la base de la hoja, resulta el valor de 1.56 J cm-2. Este valor puede compararse con los resultados obtenidos por Majaja y Chancellor (1997) para el corte de hojas de sisal a 7 cm de la base, de los cuales puede deducirse el valor de la energía unitaria de corte de 0.59 J cm-2 empleando cuchilla de hoja delgada y hasta 1.32 J cm-2 con herramientas cortantes tipo cizalla, comúnmente utilizadas en la poda de árboles. Es notable la similitud de los resultados, tomando en cuenta que las propiedades de cada especie, la geometría de las herramientas cortantes, así como las velocidades de corte proporcionadas por los dispositivos de prueba empleados influyen en los valores de energía de corte determinados. Conclusiones Las dimensiones y pesos determinados de la planta de agave así como de cada uno de sus elementos presentan una cierta variabilidad que se debe a los factores de desarrollo propio de cada planta. Sin embargo, pueden considerarse característicos para una planta de agave de 7 a 8 años de edad. Se propuso y validó una metodología para determinar la energía requerida para el troceado de las hojas de agave. Existe una relación bien definida entre la posición de la sección a lo largo de la hoja y la energía de corte que puede ser explicada en términos de cambio del área de la sección transversal de la hoja, es decir, a medida que la distancia aumenta partiendo de la punta de la hoja hacia la unión de ésta con la piña el área incrementa de acuerdo a un polinomio de orden 2 y lo mismo se puede observar en la mediciones hechas para la energía de corte. El valor de la energía unitaria determinada muestra que requiere de 2.50 J para cortar transversalmente un centímetro cuadrado de hoja de agave usando la geometría de las cuchillas relative skin content reduces, being harder for cut than leaf internal part. Calculating with data from Table 3 and 4 cut unitary energy for 1m distance, in other words for a section at 8 cm from leaf base, gives the value of 1.56 J cm-2. This value can be compared with results obtained by Majaja and Chancellor (1997) for leaves cut of sisal at 7 cm from base, from which can be defined unitary cut energy value of 0.59 J cm-2 using thin sheet knife and up to 1.32 J cm-2 with cutting tools like shear, commonly used in trees prune. It is remarkable the similar results, taking into account that each species properties, geometry of cutting tools, as well as cut speeds used by test devices affect in a given cut energy value. 35 Energía media de corte (J) E= -0.0903A2 + 3.4185A - 0.5566 463 30 25 20 15 10 5 0 0 5 10 15 Área de la sección transversal (cm2) 20 25 Figura 9. Relación área de sección transversal - energía media de corte. Figure 9. Relationship transversal section area-mean cut energy. Conclusions Dimensions and weights determined for agave plant as well as each one of its elements have some variability due plant development factors. However, they can be considered characteristic for a 7 to 8 years age agave plant. A methodology to determine required energy for agave leaves shredding was proposed and validated. There is a well defined relationship between section positions in leaf and cut energy that can be explained in terms of change of leaf transversal area, this means, in the extent distance increases from tip to bond with pineapple the area increases according to a second order polynomial and this same effect can be seen in measurements done for cut energy. Unitary energy value determined shows that it requires 2.50 J to cut one square inch of agave leaf using geometry of commonly used knives in this type of 464 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 comúnmente empleadas en esta clase de maquinaria. Los valores obtenidos en el presente trabajo pueden aplicarse en el diseño de maquinaria para la mecanización de la cosecha y procesamiento del Agave tequilana Weber. Alberto Saldaña Robles et al. machinery. Obtained values herein can apply in the design of mechanization machine for harvest and processing of Agave tequilana Weber. End of the English version Agradecimientos A los organismos de financiamiento: Consejo de Ciencia y Tecnología (CONACYT) y al Consejo de Ciencia y Tecnología del estado de Guanajuato (CONCYTEG) por la aportación de recursos para el desarrollo del proyecto “Diseño y construcción de una cosechadora- trituradora de agave”, (GTO-2009-02-118718) del cual emerge el presente estudio y la formación de recursos humanos en licenciatura y posgrado. A la División de Ciencias de la Vida (DICIVA) y a la tequilera “Real de Pénjamo” por su valiosa aportación de recursos humanos, materia prima (agave) y maquinaria agrícola para la realización del presente trabajo. Literatura citada Bautista, J. M.; García, O. L.; Barboza, C. J. E. y Parra, N. L. A. 2001. El agave Tequilana Weber y la producción de tequila. Acta Universitaria. 11(2):26-34. Cáceres, F. M.; Lappe, O. P.; Larqué, S. A.; Magdub, M. A. y Barahona, P. L. 2009. Producción de etanol a partir de jugo de henequén (Agave fourcroydes Lem.) y melaza utilizando una mezcla de levaduras. XIII Congreso Nacional de Biotecnología y Bioingeniería. VII Simposio Internacional de producción de alcoholes y levaduras. Acapulco, Guerrero, México del 21 al 25 de junio 2009. Davis, S. C.; Dohleman, F. G. and Long, S. P. 2011. The global potential for Agave as a biofuel feedstock. GCB Bioenergy. 3(1):68-78. González, P. G. 2008. Producción potencial de bioetanol a partir de diferentes especies de agave en el estado de Guanajuato. Tesis de licenciatura. Instituto de Ciencias Agrícolas de la Universidad de Guanajuato. 62 p. Granados, S. D. 1993. Los Agaves en México. Universidad Autónoma de Chapingo. México. 256 p. Háuad, M. L. A.; Rodríguez, P. C.; Franco, M.; Castillo, P.; Vázquez, A. R. y Rojas, M. A. 2010. Propiedades terapéuticas de Agave tequilana. Weber. Toctli RICTB 2010. Holtum, J. A. M.; Chambers, D.; Morgan, T. and Tan, D. K. T. 2011. Agave as a biofuel feedstock in Australia. GCB Bioenergy. 3(1)58-67. Instituto Nacional de Estadística Geográfica e Informática (INEGI) 2010. Distribución de localidades, según su altitud sobre el nivel del mar. www.inegi.gob. mx/. 25 de noviembre de 2010. Irtwange, S. V. and Igbeka, J. C. 2002. Some physical properties of two African yam bean (Sphenostylis stenocarpa) accessions and their Interrelations with Moisture Content. J. Appl. Eng. Agric. ASAE. 18 (5): 567-576. Isik, E. 2007. Some physical and mechanical properties of round red lentil grains. J. Applied Eng. Agric. ASAE. 23(4):503-509. Luther, R. W.; Suter, D. A. and Brusewitz, G. H. 2004. Physical properties of food materials. Chapter 2 in Food and Process Engineering Technology. 23-52. St. Joseph, Michigan: ASAE. Ame. Soc. Agric. Eng. Madrigal, L. R. 2009. Agaves para producir bioetanol. Seminario: México después del petróleo, ¿Serán los biocombustibles y geotermia una alternativa?, México, D. F. 21 de septiembre 2009. Majaja, B. A. and Chancellor, W. J. 1997. The potential for mechanical harvest of sisal. Ame. Soc. Agric. Eng. 13(6):703-708. Moreno, H. A.; Estrella, C. N.; Escobedo, G. S.; Bustamante, G. A. y Gerritsen, P. W. 2011. Prácticas de manejo agronómico para la sustentabilidad: características y medición en agave Tequilana Weber en la región. Tropical and Subtropical Agroecosystems. 14(1):59-169. Moritz, H. 1988. Geodetic reference system 1980. Geodesist handbook, bulletin Geodesique. 62(3). Determinación de algunas propiedades físicas de Agave tequilana Weber para mecanizar la cosecha Núñez, H. M.; Rodríguez, L. F.; and Khanna, M. 2011. Agave for tequila and biofuels: an economic assessment and potential opportunities. GCB Bioenergy. 3(1):43-57. Owolarafe, O. K. and Shotonde, H. O. 2004. Some physical properties of fresh okro fruit. J. Food Eng. 63(3):299-302. Sierra, S. L. A. 2011. Estudio y diseño del mecanismo desfibrador de una cosechadora- trituradora de agave. Tesis de licenciatura. División de Ciencias de la Vida de la Universidad de Guanajuato. 198 p. 465 Sierra, S. L. A.; Gutiérrez, V. C.; Saldaña, R. A. y Serwatowski, H. R. 2010. Energía necesaria para el corte de la piña de agave con cuchillas de diferente borde cortante. Memorias del XIX Congreso Nacional de Ingeniería Agrícola. Saltillo, Coahuila, México del 8 al 10 de septiembre de 2010. Thulin, A. 1992. A “standardized” gravity formula. Bulletin OIML- N° 127- June 1992- MIML. Whitney, G. K.; Lioutas, S. T.; Henderson, W. L. and Combs, L. Inventors. August 29 of 2002. Production for tequila. United States Patent US 2002/0119217 A1. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 467-480 Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla* Native beans diversity of different regions from state of Puebla Ana Rosa Ramírez-Pérez1, Ramón Díaz-Ruiz1§, Carmen Jacinto-Hernández2, Juan Alberto Paredes-Sánchez1 y Ramón Garza García3 Colegio de Postgraduados, Campus Puebla, Carretera Federal México-Puebla, km 125.5. 72760, Puebla, Puebla. México. Tel: 01 (22) 2 85 00 13. (anarosa_rmz@yahoo. com.mx), ([email protected]). 2Campo Experimental Valle de México, INIFAP. Carretera Los Reyes-Texcoco, km 13.5. A. P. 10, Chapingo, México. (jacinto.carmen@ inifap.gob.mx). 3Ex-investigador del Campo Experimental Valle de México, INIFAP. ([email protected]). §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract El frijol común representa un cultivo básico en México con una gran variabilidad en sus características morfológicas. En estudios sobre la diversidad genética se han usado marcadores moleculares, entre los que se encuentran los RAPD. El presente trabajo tuvo como objetivo caracterizar mediante caracteres morfológicos, agronómicos, de calidad y marcadores RAPD, variedades de frijoles nativos cultivadas en diferentes comunidades del estado de Puebla. La extracción de ADN se realizó en una muestra de hojas jóvenes de las variedades sembradas bajo invernadero. Se utilizaron 7 iniciadores RAPDs de la serie OPERON Technologies. Las bandas polimórficas se codificaron por presencia y ausencia. Con el programa NTSYS pc 2.2 se generó un dendograma empleando el índice de similitud de Dice, con nivel de corte a un valor de 0.48, donde se definieron 13 grupos. Seis grupos estuvieron integrados por una variedad, 4 grupos por 2 variedades, 2 grupos por 3 variedades y un grupo formado por 7 variedades. Los grupos definidos se integraron por colores de grano distintos y coincidieron en otras características morfológicas como días a floración, tiempo de cocción y contenido de proteína. Common bean is basic crop in Mexico with great variability in its morphological characteristics. RAPD is among molecular markers, which have been used in studies about genetic diversity. The aim of this work was to characterize by morphological, agronomical, quality characters and RAPD markers the varieties harvested in different localities from state of Puebla. DNA extraction was made from sample of young leaves of varieties planted under greenhouse. 7 RAPDs starters from OPERON Technologies were used. Polymorphical bands were coded by presence and absence. With NTSYS pc 2.2 software dendrogram was created using Dice's similarity index, with cut level at value of 0.48 where 13 groups were defined. Six groups were comprised by single variety, 4 groups by 2 varieties, 2 groups by 3 varieties and one group by 7 varieties. The defined groups were comprised by different grain colors and coincided in other morphological characteristics like days to f lowering, cooking time and protein content. Palabras clave: Phaseolus vulgaris L., calidad culinaria, marcadores moleculares, variedades nativas. Key words: Phaseolus vulgaris L., food quality, molecular markers, native varieties. * Recibido: julio de 2011 Aceptado: enero de 2012 Ana Rosa Ramírez-Pérez et al. 468 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Introducción Introduction La conservación y utilización de los recursos genéticos es de importancia estratégica para la humanidad. Las regiones centro y sudamérica son consideradas como los centros de mayor diversidad biológica del mundo; de hecho varias especies de importancia agrícola, agroindustrial, medicinal y farmacológica se han originado en estas regiones En las últimas décadas esta diversidad se ha visto severamente reducida por las exigencias del mercado y la disminución de los suelos cultivados. Ante esta situación, uno de los desafíos actuales es buscar la manera de incentivar la conservación y uso racional de los recursos genéticos (Becerra y Paredes, 2000). Conservation and exploitation of genetic resources are strategically important for mankind. Central and South America regions are considered the most biologically diverse centers at worldwide level; in fact several species of agricultural, industrial, medicine and pharmacological importance come from these regions. In the last decades such diversity has been drastically reduced due market demands and decrease of harvested lands. Facing this scenario, one of the current challenges is the quest for conservation and rational exploitation of genetic resources (Becerra and Paredes, 2000). En nuestro país la diversidad de frijoles es amplia y este cultivo es básico en la alimentación de los mexicanos. Puebla es uno de los estados con mayor diversidad (Cárdenas, 1989), la cual requiere ser caracterizada con el fin de aprovecharla para satisfacer las necesidades de los productores y consumidores. Recientemente, la caracterización morfológica se ha reforzado con la utilización de marcadores moleculares. La descripción de las variedades a nivel de ADN proporciona información al fitomejorador para que seleccione progenitores que contengan genes de interés. Los marcadores moleculares tienen ventajas sobre los marcadores morfológicos tales como la abundancia en una población segregante, son neutros y no son afectados por el ambiente (Nuez et al., 2000). Entre los marcadores genéticos moleculares utilizados en los estudios de caracterización se encuentran los RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) los cuales son marcadores dominantes y el polimorfismo entre los individuos resulta de los cambios en las secuencias en uno o ambos lados del genoma reconocidos por un iniciador lo cual se traduce en la presencia o ausencia de bandas (Rafalski et al., 1994). Uno de los usos de los RAPDs es estimar el grado de similitud entre genotipos, con lo cual se pueden estimar relaciones genéticas (Beebe et al., 1995; Skroch et al., 1998; Beebe et al., 2000; Emygdio et al., 2003; Guachambala y Rosas, 2010); lo anterior resulta de gran utilidad para conocer la diversidad que existe aún entre genotipos con caracteres morfológicos semejantes, así como también se ha buscado asociarlo con otros atributos de interés para una posible selección asistida (Kelly y Miklas, 1998; Jacinto et al., 2003) y que podría ser aprovechada en los programas de mejoramiento. In Mexico beans diversity is wide and this crop is basic in Mexican’s diet. Puebla is one of the states with more diversity (Cárdenas, 1989), which needs to be characterized with the aim to satisfy producer and consumer’s needs. Recently, morphological characterization has been reinforced with molecular markers use. Varieties description at DNA level provides helpful information for plant breeding in order to select progenitors that contain genes of interest. Molecular markers had advantages over morphological markers such as abundance in a segregating population, they are neutral and are not affected by environment (Nuez et al., 2000). RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) belong to molecular genetic markers used in characterization studies; they are dominant markers and polymorphism among individuals results from changes in sequences in one or both sides of genome acknowledged by one starter which means presence or absence of bands (Rafalski et al., 1994). One of RAPDs uses is to estimate degree of similarity between genotypes, therefore genetic relationships can be defined (Beebe et al., 1995; Skroch et al., 1998; Beebe et al., 2000; Emygdio et al., 2003; Guachambala and Rosas, 2010); this is very useful to know diversity that still exist among genotypes with similar morphological characters, as well as making associations with other attributes of interest for possible assisted selection (Kelly and Miklas, 1998; Jacinto-Hernández et al., 2003) and that would be seized in breeding programs. Another important parameter in bean germplasm characterization is grain quality for consumption. Fast cook, with thick broth are the preferred varieties. Also, it is necessary to consider genotypes’protein content, since although legume are good protein sources, to count with varieties that have high protein content allows to improve daily requirement Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla Otro parámetro importante en la caracterización del germoplasma de frijol es la calidad del grano para consumo. Se prefieren variedades de rápida cocción, con caldo espeso. Asimismo, es necesario considerar el contenido de proteína de los genotipos, pues aunque en general las leguminosas son buenas fuentes de proteína, el contar con variedades de alto contenido permite mejorar el aporte diario a los consumidores(as) de este grano básico. La importancia del frijol común (Phaseolus vulgaris L.) en tiempos precortesianos era tal que, de acuerdo con el Códice Mendocino, los aztecas lo incluían en los tributos exigidos a otros pueblos y nunca desapareció de la dieta nacional durante los 500 años que siguieron. De ese modo ha sido, junto con el maíz, el alimento básico de México y, además de su importante contenido de carbohidratos y minerales, se considera la principal fuente de proteínas vegetales en la dieta. Su papel es aún más significativo para las clases de menores recursos que, al no tener acceso a proteínas de origen animal, hallan en el frijol esos nutrimentos esenciales (Muñoz, 2010) En el pasado, los programas de mejoramiento genético del frijol enfocaban sus esfuerzos a la obtención de materiales con buenas características agronómicas, como alto rendimiento por hectárea, resistencia a condiciones ambientales adversas y patógenos, de ciclo vegetativo corto y uniformidad de planta y grano (Navarro, 1983). Sin embargo, la demanda de los consumidores ha motivado el desarrollo de variedades con mejor calidad nutrimental y de cocción (Jacinto et al., 2002).Las características físicoquímicas del grano, como tamaño, color y uniformidad, sabor, tiempo de cocción, y contenido de proteína, se relacionan con mejor calidad culinaria y nutricional del frijol y son importantes para los consumidores en México (Castellanos et al., 1997). El objetivo del presente estudio fue caracterizar el germoplasma de frijol existente en diferentes regiones de Puebla, mediante la utilización de caracteres morfológicos, agronómicos, calidad de cocción y contenido de proteína, así como por marcadores moleculares RAPD. Materiales y métodos De cien variedades previamente evaluadas en campo, se seleccionaron 36 que expresaron mejor rendimiento de grano (mayor a 1 t ha-1). Estas variedades se sembraron 469 for consumer(s) of this basic grain. Importance of bean (Phaseolus vulgaris L.), according to Codex Mendoza in years of Spanish conquest in Mexico, was such that Aztecs included it in tribute demanded to other towns and never vanished from national diet during the following 500 years. In this way, together with maize, it has been basic food in Mexico and, besides its important carbohydrate and mineral content, it is considered the main source of vegetable proteins in diet. Its role is even more important for people with scarce resources that, facing lack of access to animal proteins sources, they find in bean these essential nutriments (Muñoz, 2010) In past, bean genetic breeding programs focused their efforts to obtain material with good agronomical characteristics, such as yield per hectare, resistance to adverse environment conditions and to pathogens, short vegetative cycle and plant and grain uniformity (Navarro, 1983). However, consumers demand has promoted development of varieties with better nutrimental quality and of cooking (Jacinto et al, 2002). The physicochemical characteristics of grains, such as size, color and uniformity, favor, cooking time and protein content, are related to better quality and nutrimental food for bean and are important for consumers in Mexico (Castellanos et al., 1997). The aim of this study was to characterize bean germplasm from different regions of Puebla, by using morphological, agronomical characters, cooking quality and protein content, as well as RAPD markers. Materials and methods From 100 varieties previously assessed in field, 36 that showed best grain yield (greater than 1 t ha-1) were selected. These varieties were planted under greenhouse conditions; from 27 of them vegetal tissue was obtained for RAPD markers study and 25 resulted in satisfactory development and grain for study was obtained. Greenhouse set in field Experimental array was made under 10 x 10 lattice design with three repetitions. Experimental unit was comprised of four 5 m length furrows separated at 0.7 m. Each test embraced 3 000 m2 of surface. Fertilization was made with 40-40-00 formula in two parts, the first one was in sow throwing all phosphorus and half of nitrogen and the second one was made in the first part adding the remaining nitrogen. Ana Rosa Ramírez-Pérez et al. 470 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 bajo condiciones de invernadero; de 27 de ellas se obtuvo tejido vegetal para el estudio de marcadores RAPD y 25 se desarrollaron satisfactoriamente y se obtuvo grano para el estudio. Vivero establecido en campo El arreglo experimental se realizó bajo un diseño de látice 10 x10 con tres repeticiones. La unidad experimental se integró por cuatro surcos de cinco metros de largo separados a 0.70 m. Cada ensayo abarcó 3 000 m2 de superficie. La fertilización se hizo con la fórmula 40-40-00 en dos partes, la primera fue en la siembra tirando todo el fósforo y la mitad del nitrógeno y la segunda se realizó en la primera labor agregando el resto de nitrógeno. Se sembraron las 100 variedades colectadas, en las cuales se eligieron las semillas más comunes en tamaño, forma y color de cada una de las colectas para evitar un efecto de tales caracteres en el desarrollo de las plantas. Variables de estudio Las variables que se cuantificaron fueron: número de vainas, longitud de las vainas: ancho y grosor de vainas, peso de vainas totales y peso de grano. Vivero establecido en invernadero De las 100 variedades evaluadas en campo se seleccionaron las que expresaron mejor los caracteres agronómicos de interés para los agricultores como son la precocidad y el rendimiento de grano y sus componentes. Así también, se consideraron los caracteres culinarios de los frijoles mayor y menor contenido de proteína, menor y mayor tiempo de cocción del grano, alta y baja cantidad de proteínas. Estos análisis fueron realizados a las colectas previamente. La descripción morfológica de las variedades se realizó en invernadero cubierto por una malla antiáfidos con el objeto de tener mayor control del experimento y un registro continuo de las variables de estudio. Las variedades seleccionadas se sembraron en macetas con capacidad para 6 kg de suelo a una profundidad de 3 cm. En cada maceta se depositaron dos semillas con el fin de asegurar la siembra y después de la emergencia se dejó solo una plántula. Antes de la siembra, se aplicó el fungicida Carbendazim (Prozycar®) al suelo, para prevenir el daño por enfermedades en las plántulas. Para prevenir el daño por 100 collected varieties were planted, from which seeds most common in size, shape and color of each one of the collections were selected to avoid effect of such characters in plants development. Study variables Quantified variables were: number of pods, length of pod, width and thick of pods, weight of total pods and grain weight. Greenhouse set in garden From 100 varieties assessed in field the ones that showed best agronomical characters of interest for farmers, like earliness and grain yield and its components, were selected. Also, cooking characters of beans with lowest and highest protein content, shortest and longer cooking time of grain, higher and lowest protein content were considered. These analyses were previously made to collections. Morphological description of varieties was made in greenhouse covered by anti-aphid net with the aim to obtain better control of experiment and continuous record of study variables. The selected varieties were planted in container with 6 kg capacity of soil at a deep of 3 cm. In each pot two seeds were put with the aim to assure sow and after emergence only one seedling was left. Before sow, fungicide Carbendazim (Prozycar®) was applied to soil, to prevent damage by diseases in seedlings. To prevent damage by aphid pyrethroid insecticide Zeta-cypermethrin (Arrivo®) was applied. The experimental design was completely random (DCA). Each variety had 10 repetitions giving a total of 330 containers representing an experimental design. The study variables considered were the following: Days to emergence, length of hypocotyl and epicotyl, diameter of hypocotyl, total height of plant, growing habit. It was recorded by observation according to the four growing habits listed in descriptors guide for bean (IPGRI, 1982), age to first appearing of flower button, first flower opening, age at formation of first fruit, flowers size, length, thickness and width of pods -width and thickness was taken at the central portion of fruit- number of pods, number of grains per pod and per plant, number of branches, number of buds and internodes, dry weight of buds and of grains, flowers colors, color intensity in flowers and buds, bud shape, grain color and grain shape. Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla pulgón se aplicó el insecticida piretroide Zeta-cipermetrina (Arrivo®). El diseño experimental fue completamente al azar (DCA). Cada variedad tuvo 10 repeticiones generando un total de 330 macetas donde cada una representa la unidad experimental. Las variables de estudio consideradas fueron las siguientes: Días a emergencia, longitud del hipocótilo y epicótilo, diámetro del hipocótilo, altura total de la planta, hábito de crecimiento. Se registró por observación de acuerdo a los cuatro hábitos de crecimiento presentados en la guía de descriptores para frijol, IPGRI, 2001, edad a la aparición del primer botón floral, apertura de la primera flor, edad a la formación del primer fruto, tamaño de las flores, longitud, grosor y ancho de vainas -el ancho y grosor fue tomado en la parte central del fruto- número de vainas, número de granos por vaina y por planta, número de ramas, número de nudos y entrenudos, peso seco de las vainas y de granos, color de flores, intensidad del color en flores y vainas, forma de la vaina, color del grano y forma del grano. Caracteres culinarios Tiempo de cocción. Se determinó colocando muestras de 25 granos, las cuales fueron previamente remojadas durante 18 h en 70 ml de agua destilada. La cocción se realizó en vasos tipo Berzelius con agua destilada hirviendo. El tiempo se registró a partir del reinicio de la ebullición, después de haber colocado los frijoles y hasta que el grano alcanzó una textura granular suave percibida a través de una prueba sensorial entre los dedos índice y pulgar. La determinación se realizó por duplicado. Porcentaje de sólidos en el caldo de cocción. Se determinó por duplicado, colocando una alícuota de 10 ml de caldo en vasos de precipitado con capacidad para 50 ml, los cuales fueron llevados previamente a peso constante. Una vez pesado el vaso con la alícuota, se colocó en un horno a 60 °C, en donde se evaporó el líquido y se pesó el vaso con los sólidos, ya secos. El porcentaje de sólidos se estimó por diferencia de peso mediante la siguiente fórmula propuesta por Guzmán-Maldonado et al. (1995). (%) sólidos= (peso de vaso c/sólidos- eso de vaso vacío) *100 (peso de vaso c/líquido- eso de vaso vacío) 471 Cooking characters Cooking time. It was defined placing samples of 25 grains, which were previously soaked during 18 h in 70 ml of distilled water. Cooking was made in Berzelius glass with boiling distilled water. Time was recorded starting from boiling re-start, after placing beans and up to when grain reached soft grain texture perceived through sensory test between forefinger and thumb. This was made twice. Percentage of solids in cooking broth. It was defined twice, placing an aliquot of 10 ml of broth in beakers with 50 ml capacity, which then were taken to constant weight. Once the glass was weighed with aliquot, it was put in oven at 60 °C, in which liquid was evaporated and glass was weighed with solids, already dried. Percentage of solids was calculated by the difference in weights by the following formula proposed by Guzmán-Maldonado et al. (1995). (weight of glass with solids – weight of empty glass) *100 (%) solids= (weight of glass with liquid–weight of empty glass) Protein content. It was determined by Kjeldahl (AOAC 1984) method, using semi-automatic equipment Kjeltec-1030. To samples of 400 mg of milled bean sulfuric acid was added and like catalyst, reactive mixture of selenium. They were put in 250 ml tubes, which were placed in the digestion module of Kjeltec device, with an aluminum block and fumes extraction system. Digestion time was one hour at 360 °C. The digested samples were diluted in water and then titration was applied in the equipment’s distillation module with 0.1 N hydrochloric acid. Percentage of protein was calculated with the following formula. (1.401 x normality value x 6.25) x (ml of titrating - ml of target) (%) of protein= mg of sample DNA Amplification DNA extraction was performed on young leaves according to technique used by Torres et al. (1993). In each accession DNA was extracted from three bean plants with the aim to confirm polymorphisms. By estimating absorbance by spectrophotometry at 260 nm the DNA concentration was measured. Purity was defined verifying that optical density index 260/280 ranged between 1.8 and 2. Also, DNA integrity was assessed when testing in agar-agar gels at 1%. Ana Rosa Ramírez-Pérez et al. 472 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Contenido de proteína. Se determinó de acuerdo al método Kjeldahl (AOAC 1984), utilizando el equipo semiautomatizado Kjeltec-1030. A las muestras de 400 mg de frijol molido se les agregó ácido sulfúrico y como catalizador, mezcla reactiva de selenio. Se colocaron en tubos de 250 ml, los cuales se acomodaron en el módulo de digestión del equipo Kjeltec, el cual consta de un block de aluminio y un sistema de extracción de vapores. El tiempo de digestión fue de una hora a 360 °C. Las muestras digeridas se diluyeron con agua y posteriormente, en el módulo de destilación del equipo, fueron tituladas con ácido clorhídrico 0.1 N. El porcentaje de proteína se calculó con la siguiente fórmula. 13 RAPD starts from the OPERON Technologies (Alameda Calif.) series with length of 10 pairs of bases were used. Amplification conditions were based on method proposed by Williams et al. (1990). (1.401 x valor de normalidad x 6.25) x (ml de titulante-ml del blanco) (%) de proteína = mg de muestra Cuadro 1. Programa de de amplificación para los marcadores RAPDs. Table 1. Schedule of amplification for RAPDs markers. Amplificación de ADN Fase La extracción de ADN se realizó en hojas jóvenes de acuerdo a la técnica utilizada por Torres et al. (1993). En cada accesión se extrajo ADN proveniente de tres plantas de frijol con la finalidad de confirmar los polimorfismos. Se midió la concentración del ADN extraído al estimar la absorbancia por espectrofotometría a 260 nm. La pureza se determinó comprobando que el índice de la densidad óptica 260/280 nm estuviese entre 1.8 a 2. Asimismo, se evaluó la integridad del ADN al correrlo en geles de agarosa al 1%. Se utilizaron 13 iniciadores RAPDs de la serie OPERON Technologies (Alameda Calif.) con longitud de 10 pares de bases. Las condiciones de amplificación se basaron en la metodología propuesta por Williams et al. (1990). Las reacciones de PCR se hicieron en un volumen final de 20μL. La mezcla de reacción para RAPD consistió de 32 ng de ADN genómico, 0.9 U de enzima Taq DNA polimerasa (Amplificasa®) y buffer IX, 0.8μM de iniciador, 200μM de dNTPs (Invitrogen) y 1.8mM de MgCl2. La amplificación se realizó en un termociclador Techne TC-520 con el programa presentado en el Cuadro 1. La separación de los fragmentos amplificados se hizo por electroforesis en geles de agarosa al 1.4%. El revelado de las bandas se hizo con bromuro de etidio y se observaron bajo luz ultravioleta en un transiluminador Upland modelo TS-20. La imagen se capturó con un fotodocumentador Gel Logic de Kodak®. PCR reactions were made in a final volume of 20μL. The reaction mixture for RAPD consisted of 32 ng of genomic DNA, 0.9 U of enzyme Taq DNA polymerase (Amplificasa®) and buffer IX, 0.8μM of starter, 200μM of dNTPs (Invitrogen) and 1.8mM de MgCl2. Amplification was made in Techne TC-520 thermal cycler with schedule showed in Table 1. Desnaturalización Hibridación Extensión Extensión final Temperatura (°C)Tiempo (min) Ciclos 94 36 72 72 1 1 1 8 40 The separation of amplified fragments was done by electrophoresis in agar-agar gels at 1.4%. Bands print was done with ethidium bromide and submitted under ultraviolet light in Upland model TS-20 transilluminator. The image was taken in Kodak® Gel Logic documentation system. Results and discussion Agronomical and cooking characteristics When grouping accessions by grain color the interval of days to flowering was from 44 to 49 days, yellow and cream colored beans were with most earliness and the latest mixtures were brown and pink color (Table 2). Black beans were intermediate with a value of 45 days. The flowering interval for all accessions ranged between 41 and 57 days, where variety V93, brown color, was the latest and varieties V8 and V62, yellow color, were the earliest ones. Brown beans showed higher 100 grains weight (45.5 g), in comparison to other colors; cream color (26.8 g) and pink (26.3 g) showed lowest value (Table 2). The weight interval in bean Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla Resultados y discusión Características agronómicas y culinarias Al agrupar las accesiones por color de grano el intervalo de días a floración fue de 44 a 49 días, los frijoles amarillos y crema fueron más precoces y las mezclas las más tardías, seguidas del color castaño y rosa (Cuadro 2). Los frijoles negros fueron intermedios por presentar un valor de 45 días. El intervalo de floración de todas las accesiones fluctuó entre 41 y 57 días, donde la variedad V93, de color de grano castaño, fue la más tardía y las variedades V8 y V62, de color amarillo, fueron las más precoces. 473 population was from 18.2 to 58.8 g corresponding to varieties V13 and V91 of yellow color and brown, respectively. Also, grain yield by plant was higher in brown color (21.0 g) and lower in mixed beans (3 g). Black and yellow beans stand out after brown types with yield of 14 and 13 g per plant, respectively. In bean population, the variety with less grain yield per plant was V3 (3.0 g) belonging to mixture and V76 of brown color showed highest yield (33.2 g). The accessions of black, yellow, cream and pink grain showed indeterminate bush type 2growth habit; while brown color and mixture of color accessions showed type 3 habit, of prostrated indeterminate growth. Type 3 habit beans showed best 100 grains weight. Cuadro 2. Características agronómicas, culinarias y contenido de proteína de los frijoles colectados, en el estado de Puebla, por color de grano. Table 2. Agronomical, cooking characteristics and protein content of collected beans, in the state of Puebla, by grain color. Color de grano Número de variedades Días a floración 100 granos (g) Rendimiento planta-1 (g) Hábito de crecimiento Amarillo Castaño Crema Mezcla Negro Rosa 11 4 1 3 5 1 44 48 44 49 45 48 33.0 45.5 26.8 39.2 30.0 26.3 13.0 21.0 8.7 3.0 14.0 6.8 2 3 2 3 2 2 Los frijoles castaños presentaron un peso mayor en 100 granos (45.5 g), en comparación a los demás colores; los colores crema (26.8 g) y rosa (26.3 g) mostraron los pesos menores (Cuadro 2). El intervalo de peso en la población de frijoles fue de 18.2 a 58.8 g correspondientes a las variedades V13 y V91 de color amarillo y castaño respectivamente. De igual forma, el rendimiento de grano por planta fue mayor en el color castaño (21.0 g) y menor en frijoles mezclados (3 g). Los frijoles negros y amarillos destacan después los castaños con rendimiento de 14 y 13 g por planta respectivamente. En la población de frijoles, la variedad con menor rendimiento de grano por planta fue la V3 (3.0 g) perteneciente a las mezclas y la V76 de color castaño presentó mayor rendimiento (33.2 g). Las accesiones de grano negro, amarillo, crema y rosa mostraron hábito de crecimiento tipo 2, indeterminado arbustivo; mientras que las accesiones de color castaño y las mezclas de color mostraron hábito tipo 3, de crecimiento indeterminado postrado. Los frijoles de hábito tipo 3 fueron los que presentaron un mayor peso de 100 granos. Cooking time interval ranged between 21 and 107 min, brown beans were had the longest cooking time and the shortest were cream colored beans (Table 3). 83% of accessions showed softness to cooking according to scale shown by Jacinto et al. (2002); in other words, cooking time less than 70 min, only brown color showed hardness to cooking (107 min). Varieties more soft to cooking were V52 yellow color and V100, which is a mixture, with a time of 50 min. Also, the harder varieties were V93 (141 min) and V91 (132 min) both brown color. Quantity of solids in broth was different for each grain color. Brown outstand with 0.61% and the ones with least quantity were pink (0.30%) and cream (0.33%) (Table 3). In beans population, varieties with greater quantity of solids correspond to brown color identified like V91 (0.91%) and V93 (0.78%). These varieties also showed higher hardness to cooking, apparently in brown accessions the longest cooking time allows bean to release more solids to broth, resulting in thicker broth. Varieties with least solids content were V77 (0.22%) and V13 (0.24%) of yellow color, with cooking time of 61 and 59 min, respectively. Ana Rosa Ramírez-Pérez et al. 474 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 El intervalo en tiempo de cocción fluctuó entre 51 y 107 min, los de mayor tiempo de cocción fueron los frijoles castaños y los más rápidos los color crema (Cuadro 3). El 83% de las accesiones presentó suavidad a la cocción de acuerdo a la escala mostrada por Jacinto et al. (2002); es decir, tiempo de cocción menor a 70 min, sólo los de color castaño presentaron dureza a la cocción (107 min). Las variedades de la población más suaves al cocimiento fueron la V52 de color amarillo y V100, que es una mezcla, con un tiempo de 50 min. Asimismo, las de mayor dureza fueron la V93 (141 min) y V91 (132 min) ambas de color castaño. La cantidad de sólidos en el caldo fue diferente en cada color de grano. Sobresalieron los castaños con 0.61% y los de menor cantidad fueron los frijoles rosa (0.30%) y crema (0.33%) (Cuadro 3). En la población de frijoles, las variedades con mayor cantidad de sólidos pertenecen al color castaño identificadas como V91 (0.91%) y V93 (0.78%). Estas variedades presentaron también mayor dureza a la cocción, aparentemente en las accesiones de color castaño el mayor tiempo de cocción permite al frijol liberar más sólidos al caldo, dando por resultado un caldo más espeso. Las variedades con menor contenido de sólidos fueron la V77 (0.22%) y la V13 (0.24%) de color amarillo, con tiempos de cocción de 61 y 59 min respectivamente. En contenido de proteína, el intervalo fue de 17.9 a 25% por color de grano. Los frijoles negros presentaron mayor cantidad (25%), seguidos del color amarillo (Cuadro 3). El menor contenido se registró en el color rosa (17.9%). En general, los demás colores contienen más de 20%, lo que significa que están en el promedio reportado para frijol (Nadal et al., 2004). En la población de frijoles, las variedades con mayor contenido de proteína fueron la V90 (29.3%) de color negro y la V8 (27.2%) de color amarillo, mientras que las de menor contenido fueron la V3 (16.3%) que es una mezcla y V118 (17.7%) de color amarillo. In protein content, interval was from 17.9 to 25% per grain color. Black beans had highest quantity (25%), followed by yellow color (Table 3). Least content was recorded in pink color (17.9%). In general, rest of colors had more than 20%, which means are within average reported for bean (Nadal et al., 2004). Varieties with greater protein content were V90 (29.3%) of black color and V8 (27.2%) of yellow color, while smaller content were V3 (16.3%) which is a mixture and V118 (17.7%) of yellow color. Correlations between agronomical and cooking characteristics In the correlations obtained with statistical software SAS, grain color did not had significant correlation with any agronomical or cooking characteristics (Table 4). Days to beginning of flowering had highly negative significant correlation with yield of grain per plant (r= -0.59**), with growing habit correlation was positive (r= 0.56**), the same than with time for cooking (r= 0.54**). This means that early varieties trend to show better yield than the late varieties and tend to use less time for grain cooking. In 100 grains weight showed positive significant correlation with growing habit (r= 0.43*) and time for cooking (r= 0.45*) and with solids content was highly significant and positive (r= 0.83**). Grain cooking time showed positive correlation with solids content and highly significant (r= 0.70**) (Table 4), this means that larger grains require more time for water get to the interior and cook grain. Also, when kept more time in boiling water allows to release greater solids concentration in broth (Jacinto et al., 2002). Grain yield was correlated with growing habit with highly significant negative correlation (r= -0.67**) (Table 4). There was no relation between grain yield and protein Cuadro 3. Características culinarias y contenido de proteína de los frijoles colectados por color de grano. Table 3. Cooking characteristics and protein content for beans collected by grain color. Color de grano Amarillo Castaño Crema Mezcla Negro Rosa Núm. de accesiones 11 4 1 3 5 1 Cocción (min) Promedio 59.8 106.7 51.0 55.6 66.0 63.0 intervalo 50-70 67-141 51 50-62 61-79 63 Sólidos (%) Promedio 0.37 0.61 0.33 0.40 0.42 0.30 Intervalo 0.22-0.51 0.26-0.91 0.33 0.28-0.51 0.35-0.52 0.30 Proteína (%) Promedio 23.1 21.9 22.7 21.1 25.0 17.9 Intervalo 17.7-27.2 18.9-24.6 22.8 16.3-25.7 21.2-29.2 17.9 Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla Correlaciones entre características agronómicas y culinarias En las correlaciones obtenidas con el paquete estadístico SAS, el color de grano no presentó correlación significativa con ninguna característica agronómica o culinaria (Cuadro 4). Los días a inicio de floración tuvieron correlación negativa altamente significativa con el rendimiento de grano por planta (r= -0.59**), con el hábito de crecimiento la correlación fue positiva altamente significativa (r= 0.56**), al igual que con el tiempo de cocción (r= 0.54**). Esto indica que las variedades precoces tendieron a presentar rendimiento mayor que las tardías y la tendencia a consumir menos tiempo en el cocimiento del grano. 475 content, even there are studies that point out that at greater yield the less protein content (Osborne, 1988 and Bollini et al., 1999). Accessions of type 3 habit tend to show greater solids content (r= 0.45*). There was no relation between growth type and protein content (Table 4). Protein content in grain did not show relation with studied agronomical and cooking characteristics, in contrast with Allende et al. (2006) who found negative correlation between raw protein content and days to flowering in improved bean varieties. Protein is a character to which genetic selection can be developed in, due its importance in nutrition; for look or create varieties with high protein content. Cuadro 4. Correlaciones estimadas entre los caracteres agronómicos, culinarios y contenido de proteína. Table 4. Correlations between agronomic, cooking characters and protein content. Co Flo 100gra Ren Ha Coc So Pro Co Flo 100 g Ren Ha Coc So Pro 1.00 0.28 1.00 0.14 0.01 1.00 -0.11 -0.59** 0.40 1.00 0.13 0.56** 0.43* -0.67** 1.00 0.04 0.54** 0.45* 0.06 0.35 1.00 -0.01 0.26 0.83** 0.37 0.45* 0.70** 1.00 -0.03 -0.15 0.18 0.28 -0.01 0.08 0.28 1.00 Co= color de grano; Flo= días a floración; Ren= rendimiento por planta; Ha= hábito de crecimiento; Coc= tiempo de cocción; So= contenido de sólidos; Pro= contenido de proteína. El peso de 100 granos expresó correlación significativa y positiva con el hábito de crecimiento (r= 0.43*) y el tiempo de cocción (r= 0.45*) y con el contenido de sólidos fue altamente significativa y positiva (r= 0.83**). El tiempo de cocción del grano expresó correlación positiva con la cantidad de sólidos en el grano la cual fue altamente significativa (r= 0.70**) (Cuadro 4), esto significa que los granos más grandes requieren más tiempo para que el agua penetre al interior y cueza el grano.Asimismo el permanecer más tiempo en el agua en ebullición les permite liberar una mayor concentración de sólidos en el caldo de cocción (Jacinto et al., 2002). El rendimiento de grano se correlacionó con el hábito de crecimiento con una tendencia negativa altamente significativa (r= -0.67**) (Cuadro 4). Entre el rendimiento de grano y el contenido de proteína no existió asociación, aun cuando existen estudios que señalan que a mayor rendimiento menor contenido de proteína (Osborne, 1988 y Bollini et al., 1999). Analysis with RAPDs markers From 13 starters that were assessed, only seven revealed polymorphism, which represents 53.8%. Such starters were OPC-19, OPN-13, OPL-11, OPF-06, OPG-17, OPF-10 and OPAE-19. There were identified 21 polymorphic bands distributed in the following way: six bands for OPL-11 and OPF-10, three bands for OPN-13, two bands for OPC-19 and OPF-06, while for OPG-17 and OPAE-19 there were monomorphic. With the obtained electrophoretic patterns a presence-absence matrix with polymorphic bands was created. Varieties grouping With software NTSYS pc 2.2, using Dice coefficient, with cut level equal to 0.48, dendrogram was plotted in which 13 groups were defined (Figure 1). Ana Rosa Ramírez-Pérez et al. 476 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Las accesiones de hábito 3 tendieron a mostrar mayor contenido de sólidos (r= 0.45*). No se detectó asociación entre el hábito de crecimiento con el contenido de proteína (Cuadro 4). La cantidad de proteína en el grano no presentó correlación alguna con las características agronómicas y culinarias estudiadas, a diferencia de Allende et al. (2006) quienes detectaron correlación negativa entre el contenido de proteína cruda y los días a floración en variedades mejoradas de frijol. La proteína es un carácter que amerita trabajo de selección genética, por su importancia en la nutrición para buscar o formar variedades con alto contenido de proteína. Análisis con marcadores RAPDs De los 13 iniciadores que se ensayaron, solamente siete revelaron polimorfismo, lo cual representa 53.8%. Los iniciadores que detectaron polimorfismo fueron OPC-19, OPN-13, OPL-11, OPF-06, OPG-17, OPF-10 y OPAE-19. Se identificaron 21 bandas polimórficas distribuidas de la siguiente manera: seis bandas para OPL-11y OPF-10, tres bandas para OPN-13, dos bandas para OPC-19 y OPF-06, mientras que OPG-17 y OPAE-19 fueron monomórficos. Con los patrones electroforéticos obtenidos se construyó una matriz de presencia-ausencia con las bandas polimórficas. Agrupamiento de variedades Con el programa NTSYS pc 2. 2, empleando el coeficiente de Dice, con nivel de corte igual a 0.48, generó un dendograma donde se definieron 13 grupos (Figura 1). El grupo I se integró por la V3 perteneciente a una mezcla de frijoles y la V118. Estas variedades son similares en bajo contenido de proteína (16.3 y 17.7% respectivamente), en tiempo de cocción rápido (55 y 67 min respectivamente) y en peso de 100 granos igual a 24.6 g en promedio. El grupo II se formó también con dos variedades similares en tiempo de cocción igual a 83 min en promedio, por lo que son considerados frijoles de cocción intermedia. El grupo III presentó el mayor número de variedades (7), las cuales fueron similares en los caracteres días a floración y tiempo de cocción. La diferencia en floración entre estas variedades fue de 2 días. Las variedades de este grupo mostraron corto tiempo de cocción; en promedio 61 min. En el grupo IV se ubicó únicamente la V93 que sobresalió por mostrar el tiempo de cocción más prolongado (141 min); por lo que se considera un frijol duro al cocimiento (Jacinto et al, 2002). Asimismo, fue de los más tardíos en días a V3 V118 V28 V90 V73 V79 BAYO-CP V80 V77 V103 V105 V93 V52 V74 V100 V13 V69 V76 V30 V91 V116 V8 V114 V19 V62 V54 PERUANO 0.00 0.18 0.36 Coeficiente de similitud 0.54 0.72 Figura 1. Agrupamiento de 27 genotipos de Phaseolus vulgaris L., basado en una matriz de similitud genética construida a partir del coeficiente de Dice. Figure 1. Grouping of 27 genotypes of Phaseolus vulgaris L., based on genetic similarity matrix built from Dice coefficient. Group I was comprised by V3, a mixture of beans and V118. These varieties are similar in low protein content (16.3 and 17.7%, respectively), in fast cooking time (55 and 67 min, respectively) and in 100 grains weight in average are 24.6 g. Group II was also created with two similar varieties in cooking time with 83 min in average, which corresponds to intermediate values. Group III showed the greatest number of varieties (7), which were very similar in characters days to flowering and cooking time. The difference in flowering was 2 days. The varieties in this group showed short cooking time; in average 61 min. In group IV only variety V93 was included, which outstands to show the longest cooking time (141 min); then is considered a hard to cook bean (Jacinto et al, 2002). Also, it was one of the most late in days to flowering (57 days), although outstood in greater 100 grains weight (50.1 g). In group V there were three varieties: V52, V74 and V100 related by characters such as days to flowering (from 43 to 50 days), 100 grains weight (35.3 to 38.5 g), intermediate cooking time (50 to 70 min) and average protein content (21.4 to 23.4 %). Group VI is comprised by varieties V13 and V69 which had similarity in days to flowering (44 and 48 days, respectively) and are soft to cooking with an average time of 61min. Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla floración (57 días) pero sobresalió en un mayor peso de 100 granos (50.1 g). En el grupo V se registraron tres variedades la V52, V74 y V100 unidas por los caracteres como días a floración (de 43 a 50 días), peso de 100 granos (35.3 a 38.5 g), tiempo de cocción intermedia (50 a 70 min) y contenido de proteína promedio de (21.4 a 23.4 %). El grupo VI está conformado por las variedades V13 y V69 las cuales tienen similitud en días a floración (44 y 48 días respectivamente) y son suaves a la cocción con un tiempo de 61min en promedio. En el grupo VII se ubica únicamente a la V76, la cual presentó 42 días a floración, peso en cien semillas de 47.4 g, es suave a la cocción (en 67 min) y contiene 21.9% de proteína. En el grupo VIII se ubicaron las variedades V30, V91 y V116, con características similares en días a floración (de 44 a 45 días) y en contenido de proteína de (de 22.7 a 24.7%). El grupo IX únicamente lo integra la variedad V8, la cual llega a floración a los 41 días, el peso de cien semillas es 37.2 g, se incluye entre los frijoles blandos con tiempo de cocción igual a 61 min y contiene 27.1% de proteína. Es probable que su alto contenido de proteína la aisle como un grupo. La V114 integra el grupo X, se caracteriza por llegar a floración a los 43 días, cien semillas pesan 36.7 g, es suave a la cocción (61 min) y tiene 24.3% de proteína. Integran el grupo XI las variedades V19 y V62, con similitud en las características edad a floración a los 46 y 41 días en promedio, 39.2 g en promedio de peso en cien semillas, ambas son suaves a la cocción (58 min en promedio), contenido de proteína de 25y 23.8% respectivamente y ambas son de color de semilla amarillo. Este grupo fue el que abarcó más características similares. El grupo XII está formado por la variedad V54, la cual a los 44 días está en floración, tiene un peso 26.8 g en cien semillas, es suave a la cocción (58 min) y su contenido de proteína es 25.2%. En el grupo XIII lo integra solamente la variedad Peruano, de color se semilla amarilla, floración a los 42 días y con contenido de proteína de 21.83%. La integración como un grupo se puede deber a que es una variedad comercial con características propias. En la conformación de los grupos de variedades de frijol mediante el coeficiente de Dice, no fue determinante el lugar geográfico donde se realizaron las colectas ni el color del grano. Las características que más influyeron en la integración de los grupos fueron la edad a floración, tiempo de cocción y contenido de proteína. Sin embargo en los grupos con mayor número de variedades hay un color de grano predominante. Esta tendencia ha sido reportada por Miranda et al. (2006) en frijoles criollos de Cuba. Sin embargo, también encontraron agrupamientos de frijoles de diferentes colores. En otras regiones de México, 477 In group VII is formed only by V76, which showed 42 days to flowering, 100 grains weight of 47.4 g, is soft to cooking (in 67 min) and contains 21.9% of protein. In group VIII there were located the varieties V30, V91 and V116, with similar characteristics in days to flowering (from 44 to 45 days) and in protein content (from 22.7 to 24.7%). Group IX was only formed by variety V8, which takes 41 to flowering, 100 grains weight is 37.2 g, is in soft beans with cooking time of 61 min and contains 27.1% of protein. Is probably that its high protein content isolates it as one group. Variety V114 conforms group X, characterized for flowering at 43 days, 100 grains weight is 36.7 g, it is soft to cooking (61 min) and it has 24.3% of protein. Varieties V19 and V62 are part of group XI, with similarity in days to flowering at 46 and 41 in average, 39.2 g in average for 100 grains weight, both are soft to cooking (58 min in average), protein content of 25% and 23.8% respectively and both are of yellow color seed. This group was the one with most similar characteristics. Group XII is comprised by variety V54, which at 44 days is in flowering, has a weight of 26.8 g in 100 grains, is soft to cooking (58 min) and its protein content is 25.2%. Group XIII is comprised only by variety Peruvian, of yellow seed color, flowering at 42 days and protein content of 21.83%. The integration as one group can be due is a commercial variety with own characteristics. Geographic location where collection was made either grain color was not relevant for group creation of bean varieties by Dice coefficient. However, in groups with higher number of varieties there is a predominant color. This trend has been reported by Miranda et al. (2006) in creole beans from Cuba. Nevertheless, also there were found beans grouping of different color. In other regions of Mexico, like Hidalgo, there have been differences in native beans, mainly on cooking time and protein content (Muñoz et al., 2009). In the states of Mexico, Veracruz and Puebla it is reported the greater genetic diversity attributed to wide ecological background and diversity of existing climatic and edaphic conditions (Avendaño et al., 2004). On the other hand, Vidal et al. (2006) showed the existence of little genetic variability within black beans genotypes in Tabasco, according to the authors is because it is a region considered of little diversity of bean in the country. Studies made with isoenzymes in black beans coming from different regions of Mexico defined 68.7% of polymorphism (Avendaño et al., 2004), which means that grain color is not important for a specie similarity, but that there are other Ana Rosa Ramírez-Pérez et al. 478 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 como Hidalgo se han registrado diferencias en los frijoles nativos en tiempo de cocción y contenido de proteínas principalmente (Muñoz et al., 2009). En los estados de México, Veracruz y Puebla se reporta mayor diversidad genética atribuida a la amplitud de nichos ecológicos y a la diversidad de condiciones climáticas y edáficas existentes (Avendaño et al., 2004). Por el contrario, Vidal et al. (2006) mostraron la existencia de poca variabilidad genética dentro de genotipos de frijol negro en Tabasco, de acuerdo con los autores se debe a que es una zona considerada con poca diversidad de frijol en el país. Estudios realizados con isoenzimas en frijoles negros provenientes de regiones distintas de México determinaron 68.7% de polimorfismo (Avendaño et al., 2004), lo cual indica que el color de grano no es determinante en la similitud de una especie, sino que también hay otros caracteres implicados en la variabilidad genética de los genotipos. De igual forma, Vidal et al. (2006) encontraron agrupamientos de variedades de frijol realizados mediante RAPD-ISSR que no mostraron asociación con características morfológicas. En una evaluación morfoagronómica y molecular realizada por Balarezo et al. (2009) se generó un dendograma generado a partir de RAPDs y tampoco se formaron grupos según la procedencia de los frijoles. Resultados con la misma tendencia reportados por Gómez et al. (2004) analizando la diversidad genética en frijoles de Nicaragua con marcadores microsatélite y morfológicos, las variaciones a nivel molecular fueron explicadas por diferencias dentro y entre razas no entre las zonas agroecológicas. Este caso puede ser aplicado a los resultados obtenidos en la presente investigación principalmente en los grupos formados por una variedad (grupos VII, IX, X y XII). Guachambala y Rosas (2010), en el dendograma generado del análisis molecular de frijol en Honduras encontraron dos situaciones contrastantes en similitud genética y lugares de recolección, en un caso forman un grupo con un coeficiente de similitud de 0.95 donde las accesiones fueron colectadas de comunidades muy cercanas y que son muy similares y otro caso donde forman otro grupo accesiones que presentan alta similitud genética con un coeficiente de similitud de 0.96, pero son de origen distante. En la presente investigación, el uso de marcadores RAPD permitió identificar grupos de frijoles con características culinarias que los productores de frijol desean encontrar characters implied in genetic variability of genotypes. Also, Vidal et al. (2006) found bean varieties groupings made by RAPD-ISSR that did not show association with morphological characteristics. In a morphological-agronomical and molecular assessment made by Balarezo et al. (2009) a dendrogram was made starting from RAPDs and either group was formed according to beans origin. Results in the same condition are reported by Gómez et al. (2004) analyzing genetic diversity of beans in Nicaragua with microsatellite markers and morphological, the variations at molecular level were explained by differences within and between races and not on agroecological zones. This case can be applied to results herein obtained mainly in groups formed by one variety (groups VII, IX, X and XII). Guachambala and Rosas (2010), in the dendrogram created with molecular analysis of bean in Honduras found two contrasting scenarios in genetic similarity and collection locations, in one case they create a group with a coefficient of 0.95 in similarity where accessions were collected in very near places and that are very similar, and other case where they create another accessions group that has high genetic similarity with a coefficient of 0.96, but are from distant origin. In this research, the use of RAPD markers allowed to identify beans groups with cooking characteristics that bean producers wish to find in the product they harvest. In this way, is possible to select beans with significant earliness, soft to cook and high protein content. Studies at different localities will be made and quality characteristics will be assessed to confirm results herein obtained and be in position to select native varieties to start breeding program that in the future can be focused to assisted selection with molecular markers. Conclusions Diversity of accessions was recorded in days to flowering, 100 grains weight and yield per plant. Brown beans were the latest (48 days), had higher 100 grains weight (45.5 g) and better yield per plant (21 g). Pink color bean showed lowest 100 grains weight. The studied accessions showed variation in protein content, where black color beans showed highest content (25%) and pink color lowest quantity (17.9%). In cooking time brown Diversidad de frijoles nativos de diferentes regiones del estado de Puebla en los frijoles que cultivan. De esta manera, se está en condiciones de seleccionar los frijoles con precocidad significativa, blandos al cocimiento y contenido de proteína alto. Se realizarán ensayos en diferentes localidades y se medirán los atributos de calidad para confirmar los resultados obtenidos en esta investigación y poder así seleccionar variedades nativas para iniciar un programa de mejoramiento que futuro pueda orientarse hacia la selección asistida con marcadores moleculares. Conclusiones La diversidad de las accesiones se registró en los días a floración, peso de 100 granos, y rendimiento por planta. Los frijoles castaños fueron los más tardíos (48 días), tuvieron el mayor peso de 100 granos (45.5 g) y el mayor rendimiento por planta (21 g). El frijol de color rosa mostró el menor peso de 100 granos. Las accesiones estudiadas mostraron variación en el contenido de proteína, donde los frijoles de color negro mostraron mayor contenido (25%) y el color rosa la menor cantidad (17.9%). En tiempo de cocción los frijoles castaños fueron los más duros (107 min) y con mayor contenido de sólidos en el caldo de cocción, mientras que el de color rosa fue el más suave (51 min) y caldo menos espeso.. La técnica RAPD, resultó eficiente en la formación de grupos de variedades con caracteres morfológicos similares. Se formaron en total 13 grupos con distinto número de variedades que fue desde una hasta siete. Los grupos tuvieron similitud en precocidad, tiempo de cocción, contenido de proteína y peso de 100 granos. Literatura citada Association of Oficial Analytical Chemists (AOAC) (1984) Official Methods of Analysis. 14th Ed. Horwitz W. Washington D C, USA. 1141 p. Allende, A. G.; Acero, G. Ma. G.; Padilla, R. J. S. y Mayek, P. N. 2006. Comportamiento agronómico y características físico-químicas del grano de frijol en Aguascalientes, México. Rev. Fitotec. Mex. 29(1):89-93. 479 beans were the longest (107 min) and with most solids content in broth, while pink color was the softest (51 min) and broth less thick. RAPD technique was efficient to create varieties groups with similar morphological characters. 13 groups were comprised with different number of varieties, from one to seven. Groups had similar characteristics in earliness, cooking time, protein content and 100 grains weight. End of the English version Avendaño, A, C. H.; Ramírez, V, P.; Castillo, G. F; Chávez, S, J. L. y Rincón, E. G. 2004. Diversidad isoenzimática en poblaciones nativas de frijol negro. Rev. Fitotec. Méx. 27(1):31-40. Balarezo, J. C.; Camarena, M. F.; Baudoin, J. P.; Huaringa, J. A.; Blas, S. R. 2009. Evaluación agromorfológica y caracterización molecular de la ñuña (Phaseolus vulgaris L.) IDESIA 27(1):29-40. Becerra, V. V. y Paredes, C. M. 2000. Uso de marcadores bioquímicos y moleculares en estudios de diversidad genética. Agric. Téc. Méx. 60(3):270-281. Beebe, S.; Ochoa, I.; Skroch, P. W.; Nienhuis, J. and Tivang, J. 1995. Genetic diversity among common bean breeding lines developed for Central America. Crop Sci. 35(4):1178-1183. Beebe, S.; Skroch, P. W.; Thome, J.; Duque, M. C.; Pedraza, F. and Nienhuis, J. 2000. Structure of genetic diversity among common bean landraces of Middle American origin based on correspondance analysis of RAPD. Crop Sci. 40(1):264-273. Bollini, R.; Carnovale, E. and Campion, B. 1999. Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 3(4):217-219. Castellanos, J. Z.; Guzmán. M. H.; Jiménez, A.; Mejía, C.; Muñoz, R. J. J.; Acosta, G. J. A.; Hoyos, G.; López, S. E.; González, E. D.; Salinas, P. R.; González, A. J.; Muñoz, V. J. A.; Fernández, H. P. y Cázares, B. 1997. Hábitos preferenciales de los consumidores de frijol común (Phaseolus vulgaris L.) en México. Arch. Latinoamericam. Nutr. 47:163-167. Cárdenas, R. F. A. 1989. El banco de germoplasma de frijol en México. In: Memorias del Taller Internacional del Mejoramiento Genético en Frijol. Temas Actuales en Mejoramiento Genético de Frijol. Centro Internacional de Agricultura Tropical. Cali, Colombia. 45-77 pp. 480 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Emygdio, B.; Antunes, IF.; Choer, E. y Nedel, JL. 2003. Eficiencia de coeficientes de similaridade em genotipos de feijao mediante marcadores RAPD. Pesquisa Agropecuaria Brasileira. Brasilia 38(2):243-250. Gómez, O. J.; Blair, M. W; Frankow, L. B. E. and Gullberg, U. 2004. Molecular and phenotypic diversity of common bean landraces from Nicaragua. Crop Sci. 44:1412-1418. Guachambala, C. M. S. y Rosas, S. J. C. 2010. Caracterización molecular de acceciones cultivadas y silvestres de frijol común de Honduras. Agro. Mesoamericana. 21(1):51-61. Guzmán-Maldonado, H.; Jacinto-Hernández, C. y Castellanos, Z. J. 1995. Manual de metodologías para evaluar calidad de grano de frijol. Tema didáctico Núm. 2. SAGARPA, INIFAP, Centro de Investigación Regional del Centro. México. 77 p. International Plant Genetic Resources Institute. (IPGRI). 2001. Descriptores para Phaseolus vulgaris. Rome. Jacinto, H. C.; Hernández, S. H.; Azpíroz, R. S.; Acosta, J. A. y Bernal, L. I. 2002. Caracterización de una población de líneas endogámicas de frijol común por su calidad de cocción y algunos componentes nutrimentales. Agrociencia 36:451-459. Jacinto-Hernández, C.; Hernández-Sánchez, H.; AzpírozRivero, S.; Acosta-Gallegos, J. A. and Bernal-Lugo, I. 2003. Genetic analysis and randomly amplified polymorphic DNA markers associated with cooking time in common beans. Crop Sci. 43:329-332. Kelly, J. D. and Miklas, P. N. 1998. The role of RAPD markers in breeding for disease resistance in common bean. Mol Breed. 4:1-11. Miranda, L. S.; Rosas, S. J. C.; Aranda, R. L. L.; Ortiz, P. R.; Ponce, B. M. y Ríos, L. H. 2006. Análisis molecular de la diversidad genética de frijol común manejada por campesinos en Cuba. Agron. Mesoamericana. 17(3):369-382. Muñoz, S. R. 2010. Rica fuente de proteínas. CONABIO. Biodiversitas. 89:7-11. Ana Rosa Ramírez-Pérez et al. Muñoz, V. E. E.; Rubio, H. D.; Bernal, L. I; Garza, G. R. y Jacinto, H. C. 2009. Caracterización de genotipos nativos de frijol del estado de hidalgo, con base a calidad del grano. Agric. Téc. Méx. 35(4):426-435. Nadal, M. S.; Moreno, Y. Ma. T. y Cubero, S. J. I. 2004. Las leguminosas grano en la agricultura moderna. Mundi-Prensa. España. Navarro, S. F. J. 1983. Marco de referencia del área, In: frijol en el noroeste de México (tecnología de producción). Lépiz, I. R. y Navarro, S. F. J. (Eds.). SARH, INIA, CIAPAN, CAEVAC. Comisión Permanente para la Investigación y ExperimentaciónAgrícola en Sinaloa. Primera Edición. Culiacán, Sinaloa. México. 1-28 pp. Nuez, F.; Carrillo, J. M. y De Ron, A. M. 2000. Introducción. In: los marcadores genéticos en la mejora vegetal. Nuez, F. y Carrillo J. M. (eds.). Sociedad Española de Genética y Universidad Politécnica de Valencia. Editorial U. P. V. Valencia, España. 23-89 pp. Osborn, T. C. 1988. Genetic control of bean seed protein. Crit. Rev. Plant Sci. 7:93-116. Rafalski, J. A.; Hanafey, M. K.; Tingey, S. V. and Williams, J. G. K. 1994. Technology for molecular breeding: RAPD markers, microsatellites and machines. In: plant genome analysis. Gresshoff P. M. (ed.) CRC Press, Inc. Boca Raton. 19-27 pp. Skroch, P; Nienhuis, J; Beebe, S; Tohme, J. and Pedraza, F. 1998. Comparison of Mexican common bean (Phaseolus vulgaris L.) core and reserve germplasm collection. Crop Sci. 38(2):488-496. Torres, A. M.; Weeden, N, F. and Martín, A. 1993. Linkage among isozyme, RFLP and RAPD markers in Vicia faba. Theor. Appl. Genet. 85:937-945. Vidal, B. A.; Lagunes, E. L. D. C.; Valadéz, M. E. y Ortiz, G. C. F. 2006. Variabilidad morfológica y molecular de cultivares criollos y mejorados de frijol común en Tabasco, México. Rev. Fitotec. Mex. 29(4):273-281. Williams, J. G. K.; Kubelik, A. R.; Livak, K. J.; Rafalski, J. A. and Tingey, S. V. 1990. DNA polimorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res. 18: 6531-6535. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 481-495 Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales* Comparison of phenolic content, antioxidant capacity and anti-inflamatory activity of commercial herbal infusions Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez, Karla Rivas-Díaz, Ma. Guadalupe Flavia Loarca-Piña, Sandra Mendoza-Díaz, Rosalía Reynoso-Camacho y Minerva Ramos-Gómez§ Programa en Alimentos del Centro de la República (PROPAC). Facultad de Química. Universidad Autónoma de Querétaro, C. U. Cerro de las Campanas s/n, Querétaro, Querétaro, 76010. Tel: (442) 192-1307. Ext. 5577. Fax: (442)192-1304. §Autora para correspondencia: [email protected]. Resumen Abstract En la actualidad, hay un incremento en el consumo de infusiones debido a sus propiedades benéficas, las cuales se atribuyen a la presencia de compuestos fenólicos. Por lo anterior, el objetivo de este estudio fue evaluar el contenido fenólico, la capacidad antioxidante y la actividad antiinflamatoria de infusiones comerciales de hierbabuena (Mentha piperita L.), limón (Cymbopogon citratos), manzanilla (Matricaria chamomilla L.), árnica (Heterotheca inuloides) y boldo (Peumus boldus Molina) obtenidas en un supermercado en 2009. El contenido de fenoles y la capacidad antioxidante se determinaron por técnicas espectrofotométricas. Adicionalmente, la identificación y cuantificación de compuestos fenólicos también se llevó a cabo por HPLC. La actividad antiinflamatoria se evaluó mediante la inhibición de la enzima ciclooxigenasa-2 (COX2). La infusión de boldo presentó el mayor contenido de compuestos fenólicos y la mayor capacidad antioxidante medida por la técnicas ABT, seguida de las infusiones de hierbabuena por el método de FRAP. En las infusiones evaluadas se identificaron diez diferentes compuestos, encontrándose en mayor concentración los compuestos catequina, epigalocatequina galato, ácido rosmarínico y eriocitrina. En cuanto a la capacidad inhibitoria sobre Actually there is an increase on infusion consumption due their beneficial properties, which are attributable to the presence of phenolic compounds. By this reason, the aim of this study was to assess phenolic content, antioxidant capacity and anti-inflammatory capacity of commercial infusions of peppermint (Mentha piperita L.), lemon grass (Cymbopogon citratos), chamomile (Matricaria chamomilla L.), arnica (Heterotheca inuloides) and boldo (Peumus boldus Molina) obtained in supermarket in 2009. Phenols content and antioxidant capacity were defined by spectrophotometry techniques. Also, identification and quantification of phenolic compound was made by HPLC. The anti-inflammatory activity was assessed by inhibition of ciclooxigenasa-2 (COX-2) enzyme. Boldo infusion had greatest content of phenolic compounds and greater antioxidant capacity measured by ABT techniques, followed by chamomile infusions by FRAP method. In assessed infusions ten different compounds were identified, finding in higher concentration the compounds catechin, epigallocatechin gallate, rosmarinic acid and eriocitrin. As for inhibitory capacity on COX-2, chamomile and lemon samples had higher percentages of inhibition, followed by boldo infusion. In general, results * Recibido: agosto de 2011 Aceptado: febrero de 2012 Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez et al. 482 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 COX-2, las muestras de manzanilla y limón presentaron los mayores porcentajes de inhibición, seguida de la infusión de boldo. En general, los resultados sugieren que las infusiones comerciales de boldo y hierbabuena muestran propiedades biológicas con beneficios potenciales a la salud. Palabras clave: Peumus boldus, Mentha piperita L., Matricaria chamomilla L., capacidad antioxidante, inhibición de COX-2. Introducción La inflamación es un proceso dinámico que se inicia en respuesta a daños mecánicos, quemaduras, infecciones microbianas y otros estímulos que pueden afectar el bienestar del individuo (Abbas y Lichtman, 2003; Sikora et al., 2008). Este proceso involucra la síntesis de mediadores locales inflamatorios como las prostaglandinas (PGs) inducidas por la enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2). La biosíntesis de PGs está regulada por la fosfolipasa A2 (PLA2), la cual cataliza la hidrólisis de fosfolípidos de la membrana, permitiendo la formación de ácidos grasos libres, como el ácido araquidónico (AA) y lisofosfolípidos. Ambos metabolitos fosfolipídicos actúan como precursores de mediadores inflamatorios como los eicosanoides (Meyer et al., 2005). Éstos compuestos están asociados con desórdenes inflamatorios de tipo agudo, así como crónico, por lo que la identificación de inhibidores de COX-2 con propiedades antiinflamatorias más seguras está en continuo desarrollo (Wiart, 2007). En varios modelos animales se ha demostrado que algunos flavonoides inhiben la inflamación crónica a través de diversos mecanismos (Rahman et al., 2006; Singh et al., 2010). Dichos compuestos han mostrado actividad antioxidante y de barrido de radicales, así como la capacidad de regular diversas actividades celulares, como la actividad enzimática de COX. Por lo anterior, el efecto inhibitorio de los flavonoides sobre esta enzima se considera uno de los mecanismos antiinf lamatorios celulares más importantes (Surh et al., 2001). Por lo tanto, es importante la identificación de fuentes con alto contenido de flavonoides que sean aceptadas por la población en general. A este respecto, el consumo de bebidas, como las infusiones, es una opción accesible para proveer de este tipo de compuestos (Høstmark, 2010). suggest that boldo and peppermint commercial infusions show biological properties with potential benefits for health. Key words: Peumus boldus, Mentha piperita L., Matricaria chamomilla L., antioxidant capacity, COX-2 inhibition. Introduction Inflammation is a dynamic process that starts in response to mechanical damages, burns, microbic infections and other stimulations that can affect individual’s wellbeing (Abbas and Lichtman, 2003; Sikora et al., 2008). This process involves synthesis of inflammatory local mediators like prostaglandins (PGs) induced by cyclooxygenase-2 enzyme (COX-2). PGs biosynthesis is ruled by phospholipase A2 (PLA2), which catalyzes the hydrolysis of phospholipids from the membrane, allowing formation of free fatty acids, like arachidonic acid (AA) and lysophospholipids. Both phospholipids metabolites act like precursors of inflammatory mediators like eicosanoids (Meyer et al., 2005). These compounds are associated with acute type inflammatory disorders, as well as chronic; therefore identification of COX-2 inhibitors with safer anti-inflammatory properties is continuously developing (Wiart, 2007). In several animal models has been proven that some flavonoids inhibit chronic inflammation through several mechanisms (Rahman et al., 2006; Singh et al., 2010). Such compounds have shown antioxidant activity and radicals’ removal, as well as capacity to rule several cell activities, like COX enzymatic activity. By this reason, the flavonoids inhibitory effect on this enzyme is considered one of the most important anti-inflammatory cell mechanisms (Surh et al., 2001). Therefore, identification of sources with high flavonoids content that are accepted by population in general is important. In this matter, beverage consumption, like infusions, is a feasible option to supply this kind of compounds (Høstmark, 2010). An infusion is a beverage obtained from aerial parts (dried leaves, flowers and fruits) from several herbs or aromatic plants to which water near boiling point is added and let rest during some time (Wiseman et al., 1997). In the last years, consumption of this kind of beverages has increased considerably among Mexican population (Rivera et al., 2008), Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales Una infusión es una bebida que se obtiene de las partes áreas (hojas secas, flores y frutos) de varias hierbas o plantas aromáticas a las cuales se vierte agua a punto de hervir y se deja reposar durante un tiempo (Wiseman et al., 1997). En los últimos años, el consumo de este tipo de bebidas se ha incrementado considerablemente entre la población mexicana (Rivera et al., 2008), destacando las infusiones preparadas con manzanilla (Matricaria chamomilla L.), limón (Cymbopogon citratus), hierbabuena (Mentha piperita L.), árnica (Heterotheca inuloides) y boldo (Peumus boldus Molina). La preferencia en el consumo de estas hierbas se atribuye a su sabor agradable, mientras que adicionalmente proveen efectos benéficos a la salud, entre los que se encuentran la actividad antimicrobiana, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria aguda, entre otros, los cuales se han relacionado a su contenido de compuestos fenólicos (McKay y Blumberg, 2006; Wiart, 2007; Pereira et al., 2009). Debido a la importancia del consumo de estas infusiones por la población mexicana, quienes están en la búsqueda de beneficios para su salud, existe actualmente un gran número de marcas comerciales disponibles en el mercado. Sin embargo, estas hierbas se cultivan en diversas regiones (ecofisiología), lo que afecta el contenido de polifenoles, entre otros compuestos. Debido a que la cantidad de polifenoles en el té se considera como un indicador de calidad del mismo, el objetivo de este estudio fue comparar el contenido de compuestos fenólicos (fenoles totales y flavonoides totales), la capacidad antioxidante (evaluada por lo métodos ABTS, FRAP y actividad quelante) y la actividad antiinflamatoria (inhibición de la enzima COX-2) de las infusiones comercialmente disponibles de manzanilla, limón, hierbabuena, árnica y boldo, con el propósito de identificar algunas de las marcas y tipos de infusiones con mayor beneficio para los consumidores(as) en México. Materiales y métodos Materiales Material biológico: las bolsas de té se obtuvieron de las cuatro principales compañías comercializadoras (marcas A-D) en los supermercados locales en el año de 2009. Las hierbas de estudio fueron: manzanilla (Matricaria chamomilla L.) marcas A-D, limón (Cymbopogon citratus) marcas A-D, hierbabuena (Mentha piperita l.) marcas A-D, árnica (Heterotheca inuloides) marca A y boldo (Peumus 483 outstanding infusions prepared with chamomile (Matricaria chamomilla L.), lemon grass (Cymbopogon citratus), peppermint (Mentha piperita L.), arnica (Heterotheca inuloides) and boldo (Peumus boldus Molina). The preference of consumption in these herbs is attributable to their pleasant taste, while additionally they supply beneficial effects on health, among them are anti-microbial activity, antioxidant capacity and acute anti-inflammatory activity, among others, which are related to their phenolic compounds content (McKay and Blumberg, 2006; Wiart, 2007; Pereira et al., 2009). Due importance of consumption of these infusions by Mexican population, who are searching health benefits, there is actually huge number of commercial brands available in the market. However, these herbs are harvested in several regions (ecophysiology), which affects polyphenols content, among other compounds. Due the amount of phenols in tea is considered quality indicator, the aim of this study was to compare phenolic compounds content (total phenols and total flavonoids), the antioxidant capacity (assessed by ABTS, FRAP methods and chelant activity) and the anti-inflammatory activity (inhibition of COX-2 enzyme) of commercially available infusions of chamomile, lemon grass, peppermint, arnica and boldo, with the purpose to identify some infusion brands and types with better benefit for consumers in Mexico. Materials and methods Materials Biological material: tea bags were obtained from the four main marketing companies (brands A-D) in local supermarkets in year 2009. Herbs in study were: chamomile (Matricaria chamomilla L.) brands A-D, lemon grass (Cymbopogon citratus) brands A-D, peppermint (Mentha piperita L.) brands A-D, arnica (Heterotheca inuloides) brands A, and boldo (Peumus boldus Molina) brand A. With comparative ends a sample of green tea (Camellia sinensis L. Kuntze) was included from commercial brand B. For all samples total weight of bag and lot numbers were recorded. Infusions were prepared adding 200 mL of distilled water near at boiling point to each tea bag (adjusting volume of 1 g of tea material), which let rest for 10 minutes protected from light with aluminum paper and with slight stirring every 2 minutes; tea bags were removed and infusions were cooled at ambient temperature. Immediately after Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez et al. 484 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 boldus Molina) marca A. con fines comparativos, se incluyó una muestra de té verde (Camellia sinensis L. Kuntze) de la marca comercial B. Para todas las muestras se registró el peso total de cada bolsita y los números de lote. Las infusiones se prepararon añadiendo 200 mL de agua destilada a punto de hervir a cada bolsa de té (ajustando el volumen a 1 g de material de té), las cuales se dejaron reposar durante 10 minutos protegidas de la luz con papel aluminio y con una agitación ligera cada 2 min; se retiraron las bolsas de té y las infusiones se enfriaron a temperatura ambiente. Inmediatamente después se determinó el contenido de fenoles y flavonoides totales, así como las propiedades antiinflamatorias y antioxidantes. Para el análisis de HPLC, las infusiones se liofilizaron previamente. Métodos Determinación de fenoles y f lavonoides totales. El contenido de fenoles totales de las infusiones se determinó por el método de Folin-Ciocalteu (Dewanto et al., 2002), empleando diluciones apropiadas de cada infusión. La absorbancia de las muestras se midió a 760 nm en un lector de microplacas modelo Spectra Max (marca Molecular Devices Co., Sunnyvale, CA, EUA). Los resultados se expresaron como µg equivalentes de ácido gálico (AG) por mL (µg eq. AG/mL). El contenido total de flavonoides se determinó por el método descrito por Liu et al. (2002), empleando diluciones adecuadas de cada infusión. La absorbancia de las muestras se midió a 510 nm en un lector de microplacas; incluyéndose además un blanco. Los resultados se expresaron como µg equivalentes de (+)-catequina por mL de infusión (µg eq. (+)-catequina/mL). Los análisis se realizaron por triplicado y los datos se reportaron como la media ± el error estándar de la media (EE). Identificación y cuantificación de compuestos fenólicos por HPLC. Debido a la dificultad para identif icar los compuestos fenólicos directamente, se procedió primero a concentrar las infusiones por liofilización, para posteriormente disolverlas en metanol y filtrarlas a través de una membrana con poro de 0.2 mm. Para la separación de los compuestos se inyectaron 20 µL de cada muestra, por triplicado, a una columna de fase reversa (Prep-Nova Pack HR-C19, 60A, 6 µm, 300 x 3.9 mm) empleando un sistema de HPLC (Waters Corporation, Milford, MA, EUA), el cual consistió de una bomba cuaternaria (modelo 600), un detector de arreglos de fotodiodos (modelo 996) y un inyector manual modelo Rheodyne (7725i). Tanto el control de las condiciones y manejo del equipo, como la total phenols and flavonoids content was calculated, as well as anti-inflammatory and antioxidant properties. For HPLC analysis, lyophilization was previously applied to infusions. Methods Determination of total phenols and flavonoids. Total phenols content in infusions was determined by FolinCiocalteu method (Dewanto et al., 2002), using proper dilutions of each infusion. Absorbance of samples was measured at 760 nm in Spectra Max model microplate reader (brand Molecular Devices Co., Sunnyvale, CA, EUA). Results were expressed like µg equivalent of de gallic acid (AG) per mL (µg eq. AG/mL). Total flavonoids content was determined by method described by Liu et al. (2002), using proper dilutions of each infusion. Absorbance of samples was measured at 510 nm in microplate reader; including besides a target. Results were expressed like µg equivalent of (+)-catechin per mL of infusion (µg eq. (+)-catechin/ mL). The analyses were made by triplicate and the data were reported like mean ± mean’s standard deviation (SD). Identification and quantification of phenolic compounds by HPLC. Due to complexity to directly identify phenolic compounds, it proceeded first to make the infusions more concentrated by means of lyophilization, to then dissolve them in methanol and filter them through strain with 0.2 mm mesh. For segregating the compounds 20 µL of each sample, in triplicate, to reverse phase column (Prep-Nova Pack HRC19, 60A, 6 µm, 300 x 3.9 mm) were added using HPLC system (Waters Corporation, Milford, MA, EUA), which consisted in one quaternary pump (model 600) and manual injector model Rheodyne (7725i). As well conditions control and equipment handling, as data acquisition and processing was made by software Empower (Waters). Mobile phase consisted in solvent A (acetonitrile) and solvent B (acetic acid 0.0125 N) using flow of 1 mL/min. The elution of compounds was made under isocratic conditions up to min 27: from 0 to 2 min with 10% A and 90% B; from min 2 to 7 with 20% A and 80% B; from min 7 to 27 with 50% A and 50% B; subsequently, gradient was applied from min 27 to 30 starting with 50% A and finishing with 5% A. Method ABTS. Determination of antioxidant capacity equivalent in Trolox (TEAC) was assessed using method of 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) or ABTS described by Nenadis et al., (2004). The method was modified to be adapted to 96 holes microplates (Nalge Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales adquisición y procesamiento de los datos se realizó a través del software Empower (Waters). La fase móvil consistió en el solvente A (acetonitrilo) y el solvente B (ácido acético 0.0125 N), empleándose un flujo de 1 mL/min. La elución de los compuestos se realizó bajo condiciones isocráticas hasta el min 27: de 0 a 2 min con 10% A y 90% B; del min 2 al 7 con 20% A y 80% B; del min 7 al 27 con 50% A y 50% B; posteriormente, se aplicó un gradiente desde el min 27 al 30 comenzando con 50% A y terminando con 5% A. MétodoABTS. La determinación de la capacidad antioxidante equivalente en Trolox (TEAC) se evalúo utilizando el método del ácido 2,2`-azino-bis (3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico) (ABTS, por sus siglas en inglés) descrito por Nenadis et al., (2004). El método se modificó para ser adaptado a microplacas de 96 pozos (Nalge Nunc International, NY, EUA). Los controles incluyeron todos los reactivos excepto la infusión o el reactivo de Trolox. La absorbancia se registró a los 0 y 6 min de reacción en un lector de microplacas modelo SpectraMax a una longitud de onda de 730 nm. El porcentaje de inhibición de la absorbancia se calculó de acuerdo a la ecuación (1). Inhibición (%)= 100 x (1- Amuestra/Acontrol) (1) Donde: Amuestra es la absorbancia de la muestra y Acontrol es la absorbancia del control (sin antioxidante). Método FRAP. La capacidad antioxidante por el ensayo del poder reductor férrico (FRAP, por sus siglas en inglés) se realizó de acuerdo a la metodología descrita por Firuzi et al. (2005), usando sulfato ferroso (FeSO4) como estándar y modificado para realizarse en microplacas de 96 pozos. Se incluyó un control con metanol y la absorbancia se midió a 595 nm en un lector de microplacas modelo SpectraMax. Los datos se analizaron mediante el software SoftMax Pro (Molecular Devices, LLC, CA, EUA) y los resultados se expresaron como µg equivalente de sulfato ferroso por mL de infusión (µg eq. FeSO4/mL). Los análisis se realizaron por triplicado y los datos se reportaron como la media ± EE. Actividad quelante. La actividad quelante del ion Fe2+ se realizó por el método descrito por Hinneburg et al. (2006), adaptado a microplacas de 96 pozos. La absorbancia de la muestras de reacción se midió a 562 nm y la actividad quelante del ion Fe2+ se calculó de acuerdo a la ecuación (1), expresándose como µg equivalentes de EDTA por mL (μg eq EDTA/mL). Los análisis se realizaron por triplicado y los datos se reportaron como la media ± EE. 485 Nunc International, NY, EUA). Controls included all reagents except infusion or Trolox reagent. Absorbance was recorded at 0 and 6 min of reaction with microplate reader model Spectra Max at a wavelength of 730 nm. Percentage of inhibition of absorbance was calculated according to equation (1). Inhibition (%)= 100 x (1- Asample/Acontrol) (1) Where: Asample is the absorbance of the sample and Acontrol is the absorbance of the control (no antioxidant). FRAP method. Antioxidant capacity determined by ferric ion reducing antioxidant power (FRAP) was made according to methodology described by Firuzi et al., (2005), using iron (II) sulfate (FeSO4) like standard and modified for using it in 96 holes microplates. Control with methanol was included and absorbance was measured at 595 nm in SpectraMax microplate model. Data were analyzed by software SoftMax Pro (Molecular Devices, LLC, CA, USA) and results were expressed like µg equivalent of iron (II) sulfate per mL of infusion (µg eq. FeSO4/mL). Analysis were made by triplicate and data were reported like mean ± SE. Chelant activity. Chelant activity of Fe2+ ion was made by method described by Hinneburg et al., (2006), adapted to 96 holes microplates. Absorbance of reaction samples was measured at 562 nm and chelant activity of Fe2+ ion was calculated according to equation (1), expressed like µg equivalent of EDTA per mL (μg eq EDTA/mL). The analyses were made by triplicate and data were reported like mean ± SE. Determination of inhibition percentage of COX-2 enzyme. The anti-inflammatory activity of infusions was determined using a commercial kit of COX-2 inhibition (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA). The results were processed according to software EIA version Triple 2008D235 supplied by company Cayman (www. caymanchem.com/analysis/eia) and were expressed like inhibition percentage (%). Statistical analysis. Experimental values are shown like mean of data ± mean’s standard error (SE) of analysis by triplicate. For all determinations, data were analyzed by ANOVA method in one way with significant level p< 0.05, followed by means comparison using Tukey test. Analyses were processed with statistical software JMP V 5.0.1 (SAS Institute Inc., Cary, NC, USA). Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez et al. 486 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Determinación del porcentaje de inhibición de la enzima COX-2. La actividad antiinflamatoria de las infusiones se determinó empleando un kit comercial de inhibición de COX-2 (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, EUA). Los resultados se procesaron de acuerdo al programa EIA versión Triple 2008D235 proporcionado por la compañía Cayman (www.caymanchem.com/analysis/eia) y se expresaron como porcentaje de inhibición (%) inhibición. Análisis estadístico. Los valores experimentales se muestran como la media de los datos ± el error estándar de la media (EE) de un análisis por triplicado. Para todas las determinaciones, los datos se analizaron por el método ANOVA de una sola vía con un nivel de significancia p< 0.05, seguido de comparación de medias usando la prueba de Tukey. Los análisis se procesaron en el paquete estadístico JMP V 5.0.1 (SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). Resultados Contenido de fenoles totales y f lavonoides en las infusiones comerciales Los compuestos fenólicos son los metabolitos secundarios más abundantes en las plantas y poseen diversas actividades biológicas, como la capacidad antioxidante y antiinflamatoria (Halliwell et al., 2005; Wiart, 2007; Carlsen et al., 2010); por lo anterior, se llevó a cabo la determinación del contenido de fenoles totales y flavonoides en las infusiones bajo estudio (Cuadro 1). El contenido de fenoles totales osciló entre 61.84 a 1628.05 µg eq. AG/mL, con un orden de ascendencia: manzanilla = limón < árnica < hierbabuena < boldo < té verde. El contenido de flavonoides también varió dentro de un intervalo de 44.36 a 426.30 µg eq. (+)-catequina/mL, con un orden de ascendencia similar al contenido de fenoles totales: manzanilla= limón < árnica < hierbabuena < té verde < boldo. En cuanto a las muestras de manzanilla y limón no se observaron diferencias estadísticas en los contenidos de fenoles totales y flavonoides entre las marcas comerciales A - D; mientras que, la marca A de hierbabuena mostró un mayor contenido de fenoles y flavonoides comparada con las otras marcas comerciales B - D. Los resultados para las infusiones de manzanilla y hierbabuena son similares a lo informado por Guzmán et al. (2005), quienes reportan valores de 70 y 250 µg eq. AG/mL, respectivamente. Sin embargo, la variación en el contenido de Results Total and flavonoids phenols content in commercial infusions The phenolic compounds are the most abundant secondary metabolites in plants and have several biological activities, like antioxidant and anti-inflammatory capacity (Halliwell et al., 2005; Wiart, 2007; Carlsen et al., 2010); by this reason, determination of total and flavonoids phenols content in the studied infusions was performed (Table 1). Cuadro 1. Contenido de fenoles totales y flavonoides en las infusiones comerciales. Table 1. Total phenols and flavonoids content in commercial infusions. Infusión Flavonoides totales Marca μg eq. comercial µg eq. AG/mL (+)-catechin/mL Manzanilla Marca A 69.28 ± 0.75f 46.18 ± 2.69e Marca B 61.84 ± 2.79f 61.35 ± 3.34e Marca C 62.61 ± 0.74f 44.36 ± 1.82e Marca D 66.72 ± 0.79f 51.48 ± 2.35e Marca A 71.69 ± 1.07f 48.31 ± 5.85e Marca B 69.91 ± 2.00f 68.39 ± 2.23e Marca C 72.66 ± 1.32f 74.37 ± 3.80e Marca D 75.66 ± 1.20f 59.42 ± 5.01e Limón Hierbabuena Fenoles totales Marca A 231.85 ± 4.17c 321.39 ± 9.71b Marca B Marca C Marca D Árnica Marca A Boldo Marca A Té verde* Marca B 150.80 ± 10.37e 203.85 ± 4.07d 201.93 ± 1.48d 173.31 ± 1.87e 312.71 ± 4.44b 1628.05 ± 18.17a 182.64 ± 15.62d 253.86 ± 5.67c 255.36 ± 1.51c 227.37 ± 8.48c 426.30 ± 20.00a 320.53 ± 5.19b Los resultados son el promedio de 3 experimentos independientes con réplicas por triplicado ± EE. a,b,c,d,e,f valores con letra diferente dentro de cada columna indican diferencia estadística significativa (p< 0.05). AG= ácido gálico. *La infusión de té verde se incluyó para fines comparativos. Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales fenoles entre las 4 marcas de hierbabuena se puede atribuir a variabilidad genética de las plantas, la composición del suelo, el clima, el método de cosecha, almacenamiento poscosecha, así como al muestreo y las prácticas de elaboración (Friedman et al., 2009). De forma similar, Moraes de Souza et al., (2008) encontraron un orden de compuestos fenólicos para algunas de las infusiones evaluadas en el presente estudio (manzanilla < hierbabuena < té verde). Capacidad antioxidante En el presente estudio se emplearon los ensayos in vitro ABTS y FRAP para evaluar la capacidad antioxidante de las infusiones a través de la actividad quelante sobre radicales libres y el poder reductor total, respectivamente. Los resultados indicaron que todas las infusiones tuvieron la capacidad de barrido del radical monocatión ABTS y los valores de TEAC se muestran en el Cuadro 2. Aunque existe un amplio intervalo de variación entre los datos (0.55 - 4.90 μmol eq. Tx/mL), las infusiones de té verde y boldo mostraron la mejor actividad antirradical, seguida de las cuatro marcas de hierbabuena; mientras que, las infusiones de limón y manzanilla mostraron la actividad antirradical mas baja, sin diferencia significativa entre las diferentes marcas evaluadas. 487 Total phenols content ranged between 61.84 and 1628.05 µg eq. AG/mL, in ascending order as follows: chamomile= lemon grass < arnica < peppermint < boldo < green tea. Flavonoids content also had an interval from 44.36 to 426.30 µg eq. (+)-catechin/mL, with an ascending order similar to the one of total phenols content: chamomile= lemon grass < arnica < peppermint < green tea < boldo. As for chamomile and lemon samples there were no detected statistical differences in total and flavonoids phenols content between commercial brands A - D; while brand A of chamomile showed higher content of phenols and flavonoids than compared with other commercial brands B - D. Results for chamomile and peppermint infusions are similar to informed by Guzmán et al. (2005), who reported values between 70 and 250 µg eq. AG/mL, respectively. However, variation in phenols content between 4 peppermint brands can be attributable to the genetic variability of plants, soil composition, climate, harvest method, post-harvest storage, as well as sampling and fabrication practices (Friedman et al., 2009). Similarly, Moraes de Souza et al. (2008) found an order for phenolic compounds for some of the infusions assessed herein (chamomile < peppermint < green tea). Cuadro 2. Capacidad antioxidante de infusiones comerciales. Table 2. Antioxidant capacity of commercial infusions. Infusión Manzanilla Limón Hierbabuena Árnica Boldo Té verde* Marca comercial Marca A Marca B Marca C Marca D Marca A Marca B Marca C Marca D Marca A Marca B Marca C Marca D Marca A Marca A Marca B ABTS μmol eq. Tx/mL FRAP μmol eq. FeSO4/mL Actividad quelante μg eq. EDTA/mL 0.55 ± 0.010f 0.52 ± 0.020f 0.60 ± 0.010f 0.57 ± 0.010f 0.63 ± 0.009f 0.69 ± 0.010f 0.63 ± 0.003f 0.70 ± 0.006f 2.04 ± 0.070c 1.28 ± 0.060e 1.55 ± 0.020de 1.72 ± 0.050d 1.47 ± 0.010de 3.61 ± 0.100b 4.90 ± 0.180a 1.33 ± 0.007fg 1.37 ± 0.003f 1.11 ± 0.008h 1.12 ± 0.003h 1.25 ± 0.006g 1.08 ± 0.008h 0.86 ± 0.006i 1.26 ± 0.006g 5.39 ± 0.017c 3.69 ± 0.019d 3.59 ± 0.013e 5.57 ± 0.016b 1.32 ± 0.006fg 1.28 ± 0.004fg 14.10 ± 0.058a 135.71 ± 1.87a 119.43 ± 1.35c 110.64 ± 1.02d 100.56 ± 1.29e 29.52 ± 0.59 j 27.20 ± 0.97j 20.15 ± 1.70k 28.36 ± 0.99j 127.59 ± 1.40b 74.03 ± 2.02g 83.44 ± 0.58f 112.76 ± 1.02cd 72.21 ± 1.19gh 85.15 ± 1.56f 66.66 ± 2.23h Los resultados son el promedio de 3 experimentos independientes con réplicas por triplicado ± EE. a,b,c,d,e,f,g,h valores con letra diferente dentro de cada columna indican diferencia estadística significativa (p< 0.05). Tx= Trolox. *La infusión de té verde se incluyó para fines comparativos. Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez et al. 488 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 En cuanto a los valores del poder reductor total, como una alternativa de ensayo para evaluar la actividad antioxidante total de las infusiones (Benzie y Szeto, 1999), los datos indican una variación significativa entre la capacidad de cada infusión para reducir el ion Fe3+ a Fe2+, con valores de FRAP que oscilaron entre 0.86 a 14.1 µmol eq. FeSO4/ mL. En general, las infusiones de hierbabuena mostraron la mayor actividad antioxidante, con diferencias significativas entre las marcas comerciales A - D. Se ha sugerido que la capacidad antioxidante de los compuestos fenólicos, así como de los flavonoides, también se puede llevar a cabo a través de la quelación de iones metálicos de transición que participan en la producción de radicales libres (Mira et al., 2002). Por lo tanto, las propiedades de quelación de las infusiones se determinaron por el ensayo de quelación del ion Fe2+ y los resultados se muestran en el Cuadro 2. Las infusiones de manzanilla mostraron la mayor actividad quelante, seguidas de las infusiones de hierbabuena; en ambos casos con diferencia significativa entre las cuatro marcas evaluadas. Por el contrario, las infusiones de limón mostraron la menor actividad antioxidante, sin diferencia significativa entre las marcas comerciales, excepto la marca C. En base al análisis de correlación, la capacidad antioxidante medida por el método de ABTS mostró una correlación significativa con el contenido fenoles (p< 0.001, r= 0.866) y flavonoides totales (p< 0.001, r= 0.852); mientras que los valores de FRAP se relacionaron únicamente con el contenido de fenoles totales (p< 0.001, r= 0.921); encontrándose, por lo tanto, una correlación significativa entre ambos métodos antioxidantes (p< 0.001, r= 0.788). Por el contrario, la actividad quelante no mostró correlación significativa ni con el contenido de fenoles ni con el contenido de flavonoides totales (p> 0.05). En general, los resultados indican que las infusiones muestran varios grados de eficacia o capacidad antioxidante para cada ensayo. Si bien estos ensayos valoran la capacidad de transferencia electrónica, el pH bajo el cual se realizan las mediciones es diferente, el ensayo FRAP requiere de un pH ácido, mientras que el ensayo de ABTS se realiza a un pH cercano al neutro. Al incrementarse el pH del medio, los grupos ionizables donan radicales hidrógeno a un determinado valor de pka, e implícitamente permiten la transferencia de electrones más fácilmente (HerreroMartínez et al., 2005). De manera adicional, se evaluó la capacidad de las infusiones para quelar los iones Fe2+, lo cual depende de las interacciones intermoleculares entre el ión Antioxidant capacity In this study in vitro ABTS and FRAP tests were used to assess antioxidant capacity of infusions through chelant activity on free radicals and total reducing power, respectively. The results indicate that all infusions had capacity of swapping ABTS radical monocation and TEAC values are shown in Table 2. Although there is a wide variation interval between data (0.55 - 4.90 μmol eq. Tx/mL), green tea and boldo infusions showed better antiradical activity, followed by four brands of peppermint; while lemon and chamomile infusions showed the lowest antiradical activity, without significant differences between the assessed brands. As for values of total reducing power, like alternative to test for assessing total antioxidant activity of infusions (Benzie and Szeto, 1999), data show significant variation between capacity of each infusion to reduce Fe3+ ion to Fe2+, with FRAP values that ranged between 0.86 to 14.1 µmol eq. FeSO4/mL. In general, peppermint infusions showed higher antioxidant activity, with significant differences between commercial brands A - D. It has been suggested that antioxidant capacity of phenolic compounds, as well as flavonoids, can also be made through chelation of metallic transition ions that participate in generating free radicals (Mira et al., 2002). Therefore, chelation properties of infusions were defined by test of chelation of ion Fe2+ and the results are shown in Table 2. Chamomile infusions showed higher chelant activity, followed by peppermint infusions; in both cases with significant difference between four brands. On the other hand, lemon infusions showed lowest antioxidant activity, with no significant difference between commercial brands, except C. Based on correlation analysis, antioxidant capacity measured by ABTS method showed a significant correlation with phenols content (p< 0.001, r= 0.866) and total flavonoids (p< 0.001, r= 0.852); while FRAP values were only related with total phenols content (p< 0.001, r= 0.921); finding a significant correlation between both antioxidant methods (p< 0.001, r= 0.788). On the other hand, chelant activity did not show significant correlation either phenols content nor total flavonoids content (p> 0.05). In general, results indicate that infusions show several levels of efficacy or antioxidant capacity for each test. Although these tests proved electronic transference capacity, pH Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales y los metabolitos secundarios contenidos en las infusiones (Mira et al., 2002). Otros factores que contribuyen a la diferencia observada entre los ensayos es el uso de diferentes estándares y la reactividad del mono catión radical ABTS•+. Asimismo, el método FRAP evalúa la capacidad de diversos compuestos, como los flavonoides, de atrapar el radical u oxidante, debido principalmente a la presencia de un grupo catecol en el anillo B del flavonoide, un grupo hidroxilo en el anillo C y una doble ligadura en los carbonos 2, 3 del anillo C. En este sentido, las infusiones comerciales de hierbabuena muestran las mejores propiedades antioxidantes a través de las tres técnicas empleadas en el presente estudio, con los valores más altos obtenidos para la marca A. Las variaciones entre las marcas de hierbabuena podría atribuirse a las diferentes especies de Mentha que se emplean comercialmente, las más usadas son Mentha viridis, Mentha piperita y Mentha spicata, esta última denominada “menta nativa” y las dos primeras especies son el resultado de proceso de hibridación, por lo que se puede suponer que las variaciones en la capacidad antioxidante se deben a manipulaciones genéticas, las cuales se enfocan principalmente en intereses agronómicos (resistencia a herbicidas y patógenos) (Jullien, 2007). Caracterización de compuestos fenólicos por HPLC En la Figura 1 se muestran cromatogramas representativos de las infusiones comerciales de hierbabuena y té verde, con sus respectivos estándares. En las infusiones de manzanilla de las marcas D y C se identificaron el ácido cafeico, umbeliferona, apigenina y herniarina; mientras que para las marcas A y B, la quercetina también estuvo presente, además de los compuestos encontrados en las marcas D y C; sin embargo, hay que destacar que la mayoría de estos compuestos se encontraron en cantidades traza (Cuadro 3). La ausencia de quercetina en las infusiones de manzanilla de las marcas D y C pudo deberse al proceso al que son sometidas para su comercialización y durante la elaboración de la infusión. Crozier et al. (1997) reportan una pérdida de 75- 80% en el contenido de quercetina después ebullir muestras de cebolla y jitomate por 15 min. Por otro lado, los compuestos eriocitrina, hesperidina y ácido rosmarínico se identificaron en todas las marcas de hierbabuena (Figura 1), siendo el ácido rosmarínico el mayor constituyente (Cuadro 3). Estos resultados coinciden con los de Fecka y Turek (2007), quienes reportaron a la eriocitrina, el ácido rosmarínico y los derivados del ácido cafeico (dímero de cafeato), como los principales compuestos en la infusión de hierbabuena; 489 under which measurements are made is different, FRAP test requires acid pH, while ABTS test is made with pH near to neutral. When pH of medium is increased, ionizable groups donate hydrogen radicals at a given pka value, and it is implicit that allow electron transference more easily (Herrero-Martínez et al., 2005). Also, the capacity of infusions to make chelation on Fe2+ ions was tested, which depends on intermolecular interactions between ion and secondary metabolites contained in infusions (Mira et al., 2002). Other factor that contribute to detected difference in tests is the use of different standards and the reactivity of radical mono cation ABTS•+. Also, FRAP method assesses the capacity of several compounds, like flavonoids, of catching the radical or oxidant, due mainly to presence of catechol group in ring B of flavonoid, an hydroxyl group in C ring and double bond in carbons 2, 3 of C ring. In this sense, commercial infusions of peppermint show the best antioxidant properties through three used techniques in this study, with highest values obtained for brand A. Variations between peppermint brands could be due to different species of Mentha that are commercially used, the most used are Mentha viridis, Mentha piperita and Mentha spicata, this last called “native mint” and the two first species are result of hybridation process, then is reasonable to say that variations in antioxidant capacity is due genetic manipulation, which are focused mainly in agronomical interests (resistance to herbicides and pathogens) (Jullien, 2007). Characterization of phenolic compounds by HPLC In Figure 1 is shown the representative chromatograms of commercial infusions of peppermint and green tea, with their corresponding standards. In chamomile infusions of brands D and C are identified the caffeic acid, umbelliferone, apigenin and herniarin; while for brands A and B, the quercetin was also detected, besides of compound found in brands D and C; however, it is important to mention that most of these compounds are found in trace quantities (Table 3). The absence of quercetin in chamomile infusions of brands D and C could be due the process they are subject for their commercialization and during elaboration of infusion. Crozier et al. (1997) report loss of 75- 80% in content of quercetin after boiling samples of onion and tomato during 15 min. On the other hand, the compounds eriocitrin, hesperidin and rosmarinic acid are detected in peppermint brands (Figure 1), being rosmarinic acid the main constituent (Table 3). Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez et al. 490 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 sin embargo, la concentración de estos compuestos son superiores a los encontrados en este estudio (18.9 mg/g de eriocitrina, 5.3 mg/g de ácido rosmarínico y 1.7 mg/g de hesperidina). De manera similar, en un extracto acuoso (Ex) obtenido de las hojas de hierbabuena (Mentha x piperitae folium) se identificaron compuestos fenólicos como la eriocitrina, luteolina-7-O-rutinosida, diosmina, hesperidina, narirutina, isoroifolina, ácido rosmarínico y ácido cafeico; donde el contenido de polifenoles en el Ex fue: eriocitrina 38%, luteolina-7-O-rutinosida 3.5%, hesperidina 2.9%, diosmina 0.8%, isoroifolina 0.6%, narirutina 0.3%, ácido rosmarínico 3.7% y ácido cafeico 0.05% (Sroka et al., 2005). 1.20 These results coincide with the results from Fecka and Turek (2007), who reported that eriocitrin, rosmarinic acid and byproducts of caffeic acid (caffeate dimer) are the main compounds in peppermint infusion; however, the concentration of these compounds are superior to the ones found in this study (18.9 mg/g of eriocitrin, 5.3 mg/g of rosmarinic acid and 1.7 mg/g of hesperidin). In the same way, in an aqueous extract (Ex) obtained from peppermint leaves (Mentha x piperitae folium) phenolic compounds like eriocitrin, luteolin-7-O-rutinoside, diosmin, hesperidin, narirutin, isoroifolin, rosmarinic acid and caffeic acid were identified; in which polyphenols content in Ex was: eriocitrin 3 1.00 (a) 1 2 AU 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 0.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 Minutes 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 3 28.00 30.00 (b) 1 2 AU 0.20 0.18 0.16 0.14 0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0.00 2.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 (c) 1.20 2 2.00 1.80 1.60 1.40 1.20 1.00 0.80 0.60 0.40 0.20 0.00 0.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 (d) 2 AU 1.00 0.80 18.00 AU 0.60 0.40 1 0.20 0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 3 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 1.00 (e) 1 0.80 3 AU 0.60 0.40 2 0.20 0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 Minutes 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00 28.00 30.00 Figura 1. Cromatogramas representativos de infusiones herbales concentradas. a) mezcla de estándares para las muestras de hierbabuena (1 eriocitrina, 2 hesperidina, 3 ácido rosmarínico); b) infusión de hierbabuena de la marca comercial A. c y d) mezcla de estándares para la muestra de té verde (1 catequina, 2 ácido cafeico, 3 EGCG); y e) Infusión de té verde de la marca comercial B. Figure 1. Chromatograms representing herbal infusions in concentration. a) mixture of standards for samples of peppermint (1 eriocitrin, 2 hesperidin, 3 rosmarinic acid); b) peppermint infusion of commercial brand A. c and d) mixture of standards for sample of green tea (1 catechin, 2 caffeic acid, 3 EGCG); and e) infusion of green tea of commercial brand B. Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales 491 Cuadro 3. Cuantificación de compuestos fenólicos presentes en infusiones por HPLC. Table 3. Quantification of phenolic compounds that exist in infusions by HPLC. Infusión Marca comercial Manzanilla Marca A Marca B Marca C Marca D Hierbabuena Marca A Marca B Marca C Marca D Té verde Marca B mg/mL Ácido cafeico Umbeliferona Quercetina Apigenina Herniarina 0.017 Traza Traza Traza Eriocitrina 0.41 ± 0.04a 0.36 ± 0.10a 0.38 ± 0.02a 0.50 ± 0.07a Ácido cafeico 0.41 ± 0.09a 0.049 Traza Traza Traza Hesperidina 0.25 ± 0.05a 0.31 ± 0.05a 0.26 ± 0.01a 0.24 ± 0.03a EGCG 2.84 ± 0.42a Traza Traza ND ND Ácido rosmarínico 0.63 ± 0.12a 0.57 ± 0.06a 0.41 ± 0.02a 0.60 ± 0.12a Catequina 6.85 ± 0.86a Traza Traza Traza Traza 0.029 ± 0.005a 0.019 ± 0.003a 0.015 ± 0.004a 0.016 ± 0.007a ND= no detectado. Los resultados son el promedio de 3 experimentos independientes ± EE. a,b valores con la misma letra dentro de cada columna no son significativamente diferentes una de la otra (p< 0.05). En las infusiones de té verde se identificaron los compuestos catequina, EGCG y ácido cafeico (Figura 1), siendo la catequina el compuesto principal (6.85 mg/ml), seguido de EGCG (2.84 mg/ml). Borse et al. (2007) reportaron el perfil de HPLC de extractos acuoso y metanólico del té verde (sin concentrar por liofilización), identificando únicamente ácido gálico y cafeína en el extracto acuoso y catequina, EGCG, galato de galocatequina (GCG), galato de epicatequina (ECG) y cafeína en el extracto metanólico, siendo el GCG el mayor compuesto (0.31 mg/ mg) seguido de la catequina y EGCG (0.0645 y 0.1774 mg/mg, respectivamente). Los diferentes resultados en cuanto a la concentración de catequina en el té verde puede deberse al método de preparación de la muestra (Wang y Ho, 2009). En general, los resultados indican que entre las diferentes marcas comerciales de las infusiones evaluadas, las muestras de boldo y hierbabuena presentan el contenido más alto de compuestos fenólicos y la mayor capacidad antioxidante, sugiriendo el alto potencial de estas infusiones en la prevención de enfermedades crónico degenerativas. Inhibición de la enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2) A nivel celular, el estrés oxidativo puede dañar proteínas, lípidos y otras biomoléculas causando eventualmente inflamación sistemática crónica, implicada en diversas enfermedades crónicas (Halliwell et al., 2005; Hwang et al., 2008). Los proceso inflamatorios están regulados por diversos mediadores a través de diferentes mecanismos de acción; uno de estos mediadores es la enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2), la cual se encuentra sobreexpresada durante 38%, luteolin-7-O-rutinoside 3.5%, hesperidin 2.9%, diosmin 0.8%, isoroifolin 0.6%, narirutin 0.3%, rosmarinic acid 3.7% and caffeic acid 0.05% (Sroka et al., 2005). In the green tea infusions the compound catechin, EGCG and caffeic acid were identified (Figure 1), being catechin the main compound (6.85 mg/ml), followed by EGCG (2.84 mg/ ml). Borse et al. (2007) reported HPLC profile for aqueous and methanolic extract from green tea (without concentrate by lyophilization), identifying only gallic acid and caffeine in the aqueous extract and catechin, EGCG, gallocatechin gallate (GCG), epicatechin gallate (ECG) and caffeine in the methanolic extract, being GCG the main compound (0.31 mg/mg), followed by catechin and EGCG (0.0645 and 0.1774 mg/mg, respectively). The different results as for catechin concentration in green tea can be due preparation method of sample (Wang and Ho, 2009). In general, the results indicate that between different commercial brands of assessed infusions, the samples of boldo and peppermint show the highest content of phenolic compounds and the highest antioxidant capacity, suggesting the high potential of these infusions for preventing chronic degenerative diseases. Inhibition of enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2) At cell level, oxidative stress can damage proteins, lipids and other biomolecules eventually causing chronic systemic inflammation, implied in several chronic diseases (Halliwell et al., 2005; Hwang et al., 2008). The inf lammatory Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez et al. 492 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 la inflamación (Anant y Sureban, 2007). Además, se ha observado un incremento en su expresión en etapas tempranas de la tumorogénesis, incluyendo las etapas tempranas de la formación de adenomas (Hao et al., 1999). La capacidad de las infusiones comerciales para inhibir COX-2 se muestra en la Figura 2, donde el compuesto EGCG se incluyó como un control positivo. Las muestras de manzanilla y té verde, ambas de la marca B, así como las muestras de limón marcas B y D, tuvieron el mayor porcentaje de inhibición sobre COX-2 (48, 43, 45 y 45%, respectivamente), resaltando la actividad antiinflamatoria de estas infusiones; mientras que las muestras de hierbabuena de la marca B mostraron el porcentaje de inhibición mas bajo (24%). Las diferencias significativas entre las diferentes infusiones pueden atribuirse principalmente a la composición de compuestos fenólicos (ácidos fenólicos, flavonoides y cumarinas). processes are ruled by diverse drivers through several action mechanisms; one of these drivers is enzyme ciclooxigenasa-2 (COX-2), which is saturated during inflammation (Anant and Sureban, 2007). Also, it has been seen an increase in its expression in early stages of tumorigenesis, including early stages of adenomas formation (Hao et al., 1999). The capacity of commercial infusions to inhibit COX-2 is shown in Figure 2, where EGCG compound was included like positive control. Samples of chamomile and green tea, both from brand B, as well as samples of lemon brand B and D, had higher percentage of inhibition over COX-2 (48, 43, 45 and 45%, respectively), outstanding the anti-inflammatory activity of these infusions; while samples of peppermint from brand B showed the lowest percentage of inhibition (24%). The significant differences between infusions can be attributable mainly to composition of phenols (phenoloic acids, flavonoids and coumarine). Marca A Marca B Marca C Marca D 80 60 40 20 C D C D Hierbabuena BB CC rd e EG CG * B B Marca Marca Té verde EGCG* Muestra Ve Limón D D AA Té C a C en BB bu Manzanilla A DD A Hi er ba C ón C Lim Ma n za Árnica Boldo Bo AA BB la Ar nic A A nil A A ldo 0 a INHIBICIÓN COX-2 INHIBICIÓN COX-2(%) (%) Inhibición COX-2 (%) 100 Muestra Figura 2. Efecto de las infusiones comerciales sobre la inhibición de la enzima ciclooxigenasa-2 (COX-2). *EGCG= epigalocatequina galato a una concentración de 50 µg/mL se incluyó como un control para la inhibición de COX-2. MUESTRA Figure 2. Effect of commercial infusions on inhibition of enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2). *EGCG= epilagocatequina gallate at a concentration of 50 µg/mL was included as a control for inhibition the COX-2. Se ha sugerido que la capacidad antioxidante de polifenoles presentes en los tés herbales juega un papel importante en la actividad antiinflamatoria de las mismas. Por otro lado, estudios donde se han usado diversos ensayos de capacidad antioxidante muestran incrementos significativos en la capacidad antioxidante de plasma de humano una hora después de haber consumido cantidades moderadas de té (Rietveld y Wiseman, 2003). Diversos compuestos fenólicos presentes en el té poseen propiedades antiinflamatorias, tanto en estudios in vitro como en modelos animales, particularmente durante el estrés oxidativo (Rahman et al., 2006). It has been suggested that antioxidant capacity of polyphenols existing in herbal teas play an important role in their anti-inflammatory activity. On the other hand, studies where several tests have been used for antioxidant capacity show significant increases in antioxidant capacity of human blood plasma an hour after taking moderate amounts of tea (Rietveld and Wiseman, 2003). Diverse phenolic compounds that exist in tea have antiinflammatory properties, as well during in vitro studies like in animals, in particular during oxidative stress (Rahman et al., 2006). In this regard it has been detected that compound EGCG, main component of green tea, is related with the Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales En particular, se ha observado que el compuesto EGCG, el mayor constituyente del té verde, está relacionado con la disminución en la expresión de las enzimas COX-2 y óxido nítrico sintasa (NOS) a través del bloqueo de la activación del factor nuclear NF-κB (Surh et al., 2001). Beltz et al., (2006) demostraron que los polifenoles del té verde y negro inhiben la sobrevivencia de células cancerosas y propusieron que la inhibición de la actividad de COX-2 (62-73%) es el principal mecanismo involucrado en esta propiedad. También, se ha demostrado in vitro que la quercetina promueve la inhibición de las enzimas COX y lisil oxidasa (LOX), esta última importante en el proceso metastásico (Laughton et al., 1991; Kim et al., 1998). En este sentido, la ausencia de compuestos como la quercetina y EGCG en las muestras de hierbabuena podría explicar la falta de inhibición de COX-2 (Cuadro 3); sin embargo, estos compuestos tampoco se detectaron en las muestras de limón, por lo que en un futuro sería importante realizar un estudio más detallado del perfil de compuestos en estas muestras. Conclusiones El presente estudio aplicó diversos ensayos in vitro de capacidad antioxidante para proveer un perfil más completo de las propiedades antioxidantes de las infusiones herbales comerciales, así como de la actividad antiinflamatoria. Los resultados demostraron que, a pesar de que la capacidad antioxidante (principalmente la actividad antirradical y el poder reductor) está estrechamente relacionada con los compuestos fenólicos, también cuantificados por HPLC, se observaron claras diferencias entre las diversas infusiones y sus marcas comerciales. En este sentido, la infusión de boldo de la marca comercial A presentó el mayor contenido de compuestos fenólicos, seguida de las infusiones de hierbabuena marcas A - D. De manera similar, la infusión de boldo de la marca A mostró la mayor capacidad antioxidante por la técnica ABTS, seguida de las infusiones de hierbabuena marcas A - D por el método FRAP; mientras que, las cuatro marcas comerciales de las infusiones de manzanilla y hierbabuena mostraron la mayor actividad quelante. Por otro lado, la marca comercial B de las infusiones de manzanilla y limón presentaron la mayor actividad antiinflamatoria medida por la inhibición de COX2. En general, los resultados sugirieron que las infusiones herbales aquí evaluadas, basadas en la preferencia de consumo entre la población mexicana, tienen propiedades biológicas con un potencial benéfico para la salud humana. 493 decrease of expression of COX-2 enzymes and nitric oxide synthase (NOS) through blocking activation of nuclear factor NF-κB (Surh et al., 2001). Beltz et al., (2006) proved that green tea polyphenols inhibit survival of carcinogen cells and proposed that inhibition of COX-2 (62-73%) activity is the main process involved in this property. Also, it has been proven in vitro that quercetin promotes inhibition of COX and lysyl oxidase (LOX) enzymes, being this last one key in metastasis process (Laughton et al., 1991; Kim et al., 1998). In this sense, absence of compounds like quercetin and EGCG in peppermint samples could explain lack of inhibition of COX-2 (Table 3); however, these compounds either were detected in lemon samples, then in the future would be important to perform a more detailed study about compounds profile in these samples. Conclusions This study applied several in vitro tests regarding antioxidant capacity with the purpose to supply a comprehensive profile of commercial herbal infusions, as well as anti-inflammatory activity. The results showed that, despite antioxidant capacity (mainly antiradical activity and reducing power) is closely related with phenolic compounds, also quantified by HPLC, there were detected clear differences between the diverse infusions and their commercial brands. In this sense, boldo infusion from commercial brand A had highest phenolic compounds content, followed by peppermint infusions brands A - D. Similarly, boldo infusion brand A showed the highest antioxidant capacity by ABTS technique, followed by peppermint infusions brands A - D by FRAP method; while four commercial brands of chamomile and peppermint infusions showed the highest chelant activity. On the other hand, commercial brand B of chamomile and lemon infusions had the highest anti-inflammatory activity measured by COX-2 inhibition. In general, the results suggested that herbal infusions herein assessed, based in consumption preference among Mexican population, had biological properties with beneficial potential for human health. End of the English version 494 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Agradecimientos Los autores(as) agradecen al Fondo Mixto de Fomento a la Investigación Científica y Tecnológica (CONACYT) Gobierno del estado de Querétaro, QRO-2008-CO2-10 090, por el financiamiento otorgado para la realización de este trabajo. Literatura citada Abbas, A. K.; and Lichtman, A. H. 2003. Cellular and molecular immunology. 5 th ed. Ed. Saunders. Philadelphia, PA. 490 pp. Anant, S. and Sureban, S. M. 2007. Cyclooxygenase-2 gene expression. In: R. Srivastava (eds). Apoptosis, cell signaling, and human diseases: Molecular mechanisms, volume 2. Ed. Humana Press Inc. Totowa, New Jersey. 197-210 pp. Beltz, L. A.; Bayer, D. K.; Moss, A. L., and Simet, I. M. 2006. Mechanisms of cancer prevention by green and black tea polyphenols. Anti-Cancer Agents Med. Chem. 6:389-406. Benzie, I. F. F., and Szeto, Y. T. 1999. Total antioxidant capacity of teas by the ferric reducing/antioxidant power assay. J. Agric. Food Chem. 47:633-636. Borse, B. B.; Kumar, H. V. and Rao, L. J. M. 2007. Radical scavenging conserves from unused fresh green tea leaves. J. Agric. Food Chem. 55:1750-1754. Carlsen, H. M.; Halvorsen, B. L. Holte, K.; Bohn, S. K.; Dragland, S.; Sampson, L.; Willey, C.; Senoo, H.; Umezono, Y.; Sanada, C.; Barikmo, I. E.; Berhe, N.; Willett, W. C.; Phillips, K. M.; Jacobs, D. R. and Blomhoff, R. 2010. The total antioxidant content of more than 3100 foods, beverages, spices, herbs and supplements used worldwide. Nutr. J. 9:3-13. Crozier, A.; Lean, M.; McDonald, M. and Black, C. 1997. Quantitative analysis of the flavonoid content of commercial tomatoes, onions, lettuce and celery. J. Agric. Food Chem. 45:590-595. Dewanto, V.; Wu, X.; Adom, K.; and Lui, R. 2002. Thermal processing enhances the nutritional value of tomatoes by increasing total antioxidant activity. J. Agric. Food Chem. 50:3010-3014. Fecka, I. and Turek, S. 2007. Determination of water-soluble polyphenolic compounds in commercial herbal teas from Lamiaceae: peppermint, Melissa and sage. J. Agric. Food Chem. 55:10908-10917. Erika Elizabeth Muñoz-Velázquez et al. Firuzi, O.; Lacanna, A.; Petrucci, R.; Marrosu, G. and Saso, L. 2005. Evaluation of the antioxidant activity of flavonoids by “Ferric reducing antioxidant power” assay and cyclic voltammetry. Biochim. Biophys. Acta. 1721:174-184. Friedman, M.; Levin, C. E.; Lee, S. U. and Kozukue, N. 2009. Stability of green tea catechins in commercial tea leaves during storage for 6 months. J. Food Sci. 74(2):47-51. Guzman, M. S. H.; Torres, P. I.; Mora, A. A.; Acosta, G. J. A.; Miranda, L. R. y Guevara, L. R. 2005. Potencial de plantas de uso común en México como fuente de compuestos fenólicos, hierro y vitamina C. Agric. Téc. Méx. 31(2):115-123. Halliwell, B.; Rafter, J. and Jenner, A. (2005): Health promotion by f lavonoids, tocopherols, tocotrienols, and other phenols: direct or indirect effects? Antioxidant or not? Am. J. Clin. Nutr. 81:268S-276S. Hao, X.; Bishop, A. E. and Wallace, M. 1999. Early expression of cyclooxygenase-2 during sporadic colorectal carcinogenesis. J. Pathol. 187:295-301. Herrero-Martínez, J. M.; Sanmartin, M.; Rosés, E. and Ràfols, C. 2005. Determination of dissociation constants of flavonoids by capillary electrophoresis. Electrophoresis. 26:1886-1895. Hinneburg, I.; Dorman, H. J. D. and Hiltunen, R. 2006. Antioxidant activities of extracts from selected culinary herbs and spices. Food Chem. 97:122-129. Høstmark, A. T. 2010. The oslo health study: a dietary index estimating high intake of soft drinks and low intake of fruits and vegetables was positively associated with components of the metabolic syndrome. Appl. Physiol. Nutr. Metab. 35:816-825. Hwang, J. S.; Wu, T. L.; Chou, S. C.; Ho, C.; Chang, P. Y.; Tsao, K. C.; Huang, J. Y.; Sun, C. F. and Wu, J. T. 2008. Development of multiple complications in type 2 diabetes is associated with the increase of multiple markers of chronic inflammation. J. Clin. Lab. Anal. 22(1):6-13. Jullien, F. 2007. Mint. In: Pua, E-C. and Davey, M. R. (eds). Biotechnology in Agriculture and Forestry. Volume 59. Ed. Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. Germany. 435-466 pp. Kim, H. P.; Mani, I.; Iversen, L. and Ziboh, V. A. 1998. Effects of naturally-occurring f lavonoids and biflavonoids on epidermal cyclooxygenase and lipoxygenase from guinea-pigs. Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 58(1):17-24. Comparación del contenido fenólico, capacidad antioxidante y actividad antiinflamatoria de infusiones herbales comerciales Laughton, M. J.; Evans, P. J.; Moroney, M. A.; Hoult, J. R. and Halliwell, B. 1991. Inhibition of mammalian 5-lipoxygenase and cyclo-oxygenase by flavonoids and phenolic dietary additives. Relationship to antioxidant activity and to iron ion-reducing ability. Biochem. Pharmacol. 42(9):1673-1681. Liu, M.; Li, X. Q.; Weber, C.; Lee, C. Y.; Brown, J. and Liu, R. H. 2002. Antioxidant and antiproliferative activities of raspberries. J. Agric. Food Chem. 50:2926-2930. McKay, D. L. and Blumberg, J. B. 2006. A review of the bioactivity and potential benefits of chamomile tea (Matricaria recutita L.). Phytother. Res. 20:519-530. Meyer, M. C.; Rastogi, P.; Beckett, C. S. and McHowat, J. 2005. Phospholipase A2 inhibitors as potential antiinf lammatory agents. Curr. Pharm. Des. 11:1301-1312. Mira, L.; Fernández, M. T.; Santos, M.; Rocha, R.; Florencio, M. H. and Jennings, K. R. 2002. Interactions of flavonoids with iron and copper ions: A mechanism for their antioxidant activity. Free Radic. Res. 36:1199-1208. Moraes de Souza, R. A.; Oldoni, T. L. C.; Regitano d’Arce, M. A. B.; and Alencar, S. M. 2008. Antioxidant activity and phenolic composition of herbal infusions consumed in Brazil. Ciencia Tecnol. Alimentaria. 6(1):41-47. Nenadis, N.; Wang, L. F.; Tsimidou, M. and Zhang, H. Y. 2004. Estimation of scavenging activity of phenolic compounds using the ABTS•+ Assay. J. Agric. Food Chem. 52:4669-4674. Pereira, R. P.; Fachinetto, R.; Prestes, A. S.; Puntel, R. L. and Heinzmann, B. M. 2009. Antioxidant effects of different extracts from Melissa officinalis, Matricaria recutita and Cymbopogon citratus. Neurochem. Res. 34:973-983. Rahman, I.; Biswas, S. K. and Kirkham, P. A. 2006. Regulation of inflammation and redox signaling by dietary polyphenols. Biochem. Pharmacol. 72:1439-1452. 495 Rietveld, A. and Wiseman, S. 2003. Antioxidant effects of tea: evidence from human clinical trials. J. Nutr. 133:3285-3292. Rivera, J. A.; Muñoz-Hernández, O.; Rosas-Peralta, M.; Aguilar-Salinas, C. A.; Popkin, B. M. y Willett, W.C. 2008. Consumo de bebidas para una vida saludable: recomendaciones para la población mexicana. Salud Pública de México. 50(2):173-195. Sikora, J. P.; Chlebna-Soko´ł, D.; Andrzejewska, E.; Chrul, S.; Polakowska, E.; Wysocka, A. and Sikora, A. 2008. Clinical evaluation of proinflammatory cytokine inhibitors (sTNFR I, sTNFR II, IL-1 ra), antiinf lammatory cytokines (IL-10, IL-13) and activation of neutrophils after burn-induced inflammation. Scand. J. Immunol. 68(2):145-152. Singh, R.; Akhtar, N. and Haqqi, T. M. 2010. Green tea polyphenol epigallocatechin-3-gallate: inflammation and arthritis. Life Sci. 86(25-26):907-918. Sroka, Z.; Fecka, I. and Cisowski, W. 2005. Antiradical and anti-H2O2 properties of polyphenolic compounds from an aqueous peppermint extract. Naturforsch, C. Z. 60(11-12):826-832. Surh, Y. J.; Chun, K. S.; Cha, H. H.; Han, S. S.; Keum, Y. S. and Park, K. K. 2001. Molecular mechanisms underlying chemopreventive activities of antiinflammatory phytochemicals: down-regulation of COX-2 and iNOS through suppression of NF-kappa B activation. Mutat. Res. 480-81:243-268. Wang, Y. and Ho, C.T. 2009. Polyphenolic chemistry of tea and coffee: a century of progress. J. Agric. Food Chem. 57(18):8109-8114. Wiart, C. 2007. Anti-inflammatory plants. In: ethnopharmacology of medicinal plants: Asia and the Pacific. Ed. Humana Press Inc. Totowa, New Jersey. Chapter 1. 1-56 pp. Wiseman, S. A.; Balentine, D. A. and Frei, B. 1997. Antioxidants in tea. Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 37:705-718. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 2 1 de marzo - 30 de abril, 2012 p. 497-507 Variabilidad espacial de la lámina de agua y rendimiento de la caraota (Phaseolus vulgaris L.) bajo riego por aspersión* Space variability of water sheet and yield of black bean (Phaseolus vulgaris L.) under sprinkler irrigation José Nicolás Ortiz Romero1, Héctor Alexis Miranda1 y Samuel Gustavo Ceballos Pérez1§ Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado (UCLA). Decanato de Agronomía. Departamento de Ingeniería Agrícola. A. P. 400 Barquisimeto 3001, Venezuela. ([email protected]), ([email protected]). §Autor para correspondencia: [email protected]. Resumen Abstract Para evaluar la variabilidad y dependencia espacial de la lámina de riego aplicada y del rendimiento obtenido en el cultivo de caraota (Phaseolous vulgaris L.), bajo riego por aspersión, se llevó a cabo un experimento durante 2010. Para ello se seleccionó, en la parte central de toda el área irrigada, una superficie de 10 m x 1 m con un aspersor en sus respectivos vértices. Dentro de ésta área, de manera sistemática, se ubicaron puntos de muestreo en forma de cuadrícula de 2 m x 2 m y en cuyo centro se colocaba un pluviómetro para colectar las láminas de agua aplicadas por los aspersores. El área de influencia de cada pluviómetro era 4 m2 ésta fue cosechada para evaluar el rendimiento del cultivo. Los datos fueron analizados bajo procedimientos geostadísticos. Para la lámina de riego recibida durante el ciclo, se obtuvo un semivariograma esférico donde se refleja, por su efecto nugget mínimo, poca variabilidad entre láminas vecinas y el límite de dependencia se extiende hasta 5.70 m. Respecto al rendimiento, resultó un semivariograma exponencial, demostrando variabilidad entre muestras vecinas evidenciadas por la mayor proporción del efecto nugget, el límite de dependencia se extiende hasta una distancia de 7.84 m. To assess variability and space dependence of applied irrigation sheet and yield obtained in black bean (Phaseolous vulgaris L.) crop, under sprinkler irrigation, during 2010 an experiment was performed. For this purpose it was selected, in the central portion of irrigated area, a surface of 10 m x 1 m with sprinkler in their corresponding vertexes. Within this surface, in systematic way, sampling points were located in 2m x 2m square matrix and in each center a pluviometer was put to collect water sheets applied by sprinklers. Influence surface of each pluviometer was 4 m2 and was harvested to asses crop yield. Data were analyzed under geostatistical procedures. For irrigation sheet received during cycle, spherical semivariogram was obtained where is reflected, by its minimum nugget effect, little variability between neighbor sheets and dependence limit is extended up to 5.7 m. About yield, it resulted an exponential semivariogram, demonstrating variability between neighbor samples evidenced by greater proportion of nugget effect, the dependence limit is extended up to a distance of 7.84 m. Palabras claves: Phaseolus vulgaris L., dependencia espacial, lámina de riego, rendimiento, variabilidad especial. Key word: Phaseolus vulgaris L., space dependence, irrigation sheet, yield, space variability. * Recibido: agosto de 2011 Aceptado: marzo de 2012 José Nicolás Ortiz Romero et al. 498 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Introducción Introduction Según (Matheron, 1963) la geoestadística es una rama tanto de las ciencias exactas como naturales, actualmente existen múltiples aplicaciones en determinadas áreas como agrícola, forestal, salud pública, entomología, entre otras. En riego la aplicación de dicha técnica es de mucha utilidad al momento de tomar cualquier decisión dado que el investigador desea conocer cómo se distribuye espacialmente una lámina de riego, si hay dependencia entre ellas y cómo puede afectar el crecimiento, desarrollo y rendimiento del cultivo, las áreas de terreno que reciben mayor o menor cantidad de agua. According to Matheron (Matheron, 1963) geostatistic is a branch as well from science as from natural areas, actually there are multiple applications in given areas like agricultural, forestry, public health, entomology, among others. In irrigation the application of this technique is very useful when taking decision since researcher needs to know how an irrigation sheet is spatially distributed, if there is dependence between them and how can affect growth, development and yield of crop, the land areas that receive more or less water quantity. El agua es un factor que limita la producción, por lo tanto un buen riego debe caracterizarse por presentar alta eficiencia y uniformidad para garantizar un uso racional del recurso hídrico. En el campo existen muchos factores que afectan la uniformidad del riego, unos inherentes al suelo principalmente sus propiedades físicas, químicas y características topográficas, otros dependientes de elementos del clima y por otro lado las características propias de los diseños de riego. En riego por aspersión, el viento, principalmente su velocidad y dirección es muy importante investigarlos y conocer cómo afectan la distribución de las láminas aplicadas. Esto permitirá generar acciones que minimicen los riesgos de pérdidas en cultivos. Water is a production limiting factor, therefore a good irrigation must characterize by having high efficiency and uniformity to guarantee its rational use. In field there are many factors that affect irrigation uniformity, ones are inherent to soil mainly its physical, chemical properties and topographic characteristics, other depend on elements like weather and, on the other hand, characteristics by the irrigation design itself. In sprinkler irrigation, wind, especially speed and direction, is very important to research and to know how affects the applied sheets distribution. This will allow create actions that minimize risk of loss in crops. El uso de herramientas geoestadísticas permitirá determinar si existe dependencia o correlación en el espacio dentro y entre variables inherentes a la aplicación del riego (Guimaraes, 2000). Es importante además destacar que el estimador de Krigin produce los mejores resultados usando la interpolación lineal (Burguess y Webster 1980). Todas estas técnicas surgen con aplicaciones de variabilidad espacial en suelo donde existen variaciones continuas en el espacio físico, luego para controlar o mejor dicho manipular esas variaciones, se crea el concepto matemático de semivariograma originando así una serie de puntos discretos que corresponde a la semivarianza para los diferentes puntos muestreados. Para observar gráficamente la variabilidad y tener una mejor apreciación visual del problema planteado bajo un enfoque analítico; es decir, teórico matemático. Es bajo estas premisas que se utilizaran estas técnicas para estudiar la variabilidad espacial del riego, en éste caso el método de aspersión. La presente investigación tuvo como objetivo analizar la variabilidad espacial de la lámina de riego bajo el método de aspersión, así como construir un mapa geográfico que The use of geostatistical tools will allow to determine if there is dependence or correlation in space within and between variables inherent to irrigation application (Guimaraes, 2000). Also, it is important to mention that Krigin estimator gives the best results using lineal interpolation (Burguess and Webster 1980). All these techniques arise with applications of space variability in soil where there are continuous variations in physical space, then for controlling or manipulate these variations, it is created the mathematical concept known as semivariogram giving a series of discrete points that corresponds to semivariance for different sampled points. To graphically observe variability and have better visual approach of problem proposed under analytical approach; that is to say, theoretical mathematical. It is under these premises that these techniques were used to study irrigation space variability, in this case the sprinkler method. The aim of this research was to analyze space variability for irrigation sheet under sprinkler method, as well to build a geographical map that identifies areas where such variability exists through isolines and graphic material. Also it is assessed space variability of crop yields and their correlation with applied sheets. Variabilidad espacial de la lámina de agua y rendimiento de la caraota (Phaseolus vulgaris L.) bajo riego por aspersión Los aspersores tenían un caudal nominal de 0.2 l/s a una presión de operación de 30 PSI y eran accionados por una bomba de 3 HP. Por ocasión del experimento se estaba cultivando caraota, este fue plantado a una separación entre hileras de 50 cm y 5 cm entre plantas. Los pluviómetros fueron colocados sobre soportes a 40 cm sobre el suelo de tal manera que el follaje del cultivo no interfiriera con su área de captación la cual era 81.07 cm2. El área de influencia correspondiente a cada pluviómetro fue cosechada y el rendimiento se expresó en kilogramos por hectárea. El cultivo fue regado con una frecuencia de 7 días y la lámina de agua a ser aplicada se determinó por el método de la tina de evaporación (Dorenbos y Pruit, 1977). Para ello la evapotranspiración del cultivo de referencia (ETo) fue determinada multiplicando la evaporación (Ev) por un coeficiente de tina (Kp) que para la zona de Tarabana ya fue determinado 0.78. Luego la ETo era multiplicada por el coeficiente del cultivo (Kc) que estaba en función de la fase de desarrollo del cultivo y de esta manera se determinaba la evapotranspiración del cultivo (ETc) que es igual a la necesidad hídrica del cultivo. Ésta se calculaba diariamente y se acumulaba para un periodo de 7 días, si por ocasión ocurrían algunas lluvias éstas se restaban y luego mediante riego se reponía la lámina de agua faltante. N Aspersor 5,00m 10,00m 10,00m Tubería principal ø= 50 mm 1,00m 2,00m 2,00m 1,00m El experimento fue realizado en el área experimental de riego del Decanato de Agronomía en el Núcleo Tarabana de la Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado, para ello se dispuso de la instalación de un sistema de riego por aspersión estacionario fijo que estaba a una separación entre aspersores y laterales (SaSl) de 10 m x10 m (Figura 1). De ésta se seleccionó el área central conformada por cuatro aspersores adyacentes y se colocaron los pluviómetros conformando una cuadrícula de 2 m x 2 m, donde cada uno tenía un área de influencia de 4 m2, siendo así se ubicaron un total de 25 pluviómetros. The experiment was performed at the experimental irrigation area from Decanato de Agronomía at Núcleo Tarabana from Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado, for this a stationary sprinkler irrigation system installation was set, which was at 10 m x 10 m separation between sprinklers and laterals (SaSl) (Figure 1). From this it was selected the central area conformed by four adjacent sprinklers and measuring pluviometers were put forming a 2 m x 2 m square, where each one had an influence surface of 4 m2, finally installing 25 pluviometers. 10,00m Materiales y métodos Materials and methods 10,00m identifique las zonas donde existe dicha variabilidad a través de las isolíneas y material gráfico. También se evalúa la variabilidad espacial de los rendimientos del cultivo y la correlación de estos con las láminas aplicadas. 499 2,00m 2,00m Publiómetro ø= 4¨ Tubería lateral ø= 32 mm Figura 1. Disposición de los aspersores y pluviómetros en el campo. Figure 1. Arrangement of sprinklers and pluviometers in field. Sprinklers had nominal rate of 0.2 l/s at operation pressure of 30 PSI and were driven by 3 HP pump. Black bean was harvested due experiment, sowed at 50 cm separation between furrows and 5 cm between plants. The pluviometers were put on supports at 40 cm over soil in such way crop foliage did not interfere with the application area which was of 81.07 cm2. The influence area corresponding to each pluviometer was harvested and yield was in kilograms per hectare. Crop was irrigated at a frequency of 7 days and water to be applied was defined by vase evaporation method (Dorenbos and Pruit, 1977). For this matter crop evotranspiration reference (ETo) was calculated multiplying evaporation (Ev) by vase coefficient (Kp) that for Tarabana region was determined 0.78. Then ETo was multiplied by crop coefficient (Kc) which was in function of crop’s development phase and in this way crop evotranspiration (ETc) was José Nicolás Ortiz Romero et al. 500 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 El total de agua recibida durante el ciclo fue acumulado en cada pluviómetro. El área de influencia de cada pluviómetro fue cosechada y así fueron presentados los datos de distribución de láminas y rendimientos en la cuadricula evaluada y fueron sometidos a análisis geoestadístico. determined and is equal to crop’s hydric requirement. This was calculated in daily basis and was accumulated during 7 days, if there were rain precipitations they were removed and then missing water was replaced by irrigation. Estimación. Según (Pierce, 2007) la estimación se realiza a través de valores desconocidos, a partir de valores conocidos siguiendo su estructura de continuidad espacial teniendo en cuenta los supuestos del modelo. Total amount of water received during cycle was accumulated in each pluviometer. The inf luence surface of each pluviometer was harvested and sheets distribution and yield were shown in the assessed matrix and were subject to geostatistical analysis. Ecuaciones del Kriage. Se dispone de los valores muestrales Z(Xi) i=1,..., n y deseamos estimar un valor de la característica observada en el panel Z(v) para ello se escribe la combinación lineal Z(xi-): Estimation. According to Pierce ( 2007) estimation is done through unknown values, starting from known values following a space continuity structure taking into account the assumptions of each model. n Ẑ(v)= Σ λi Z(xi) i=1 Ẑ(v) son los valores estimados y λi pesos del Kriage (Arik, 1990), de modo que los λi sean obtenidos de tal forma que proporcione un estimador insesgado E(Ẑ(v) - Z(v))= 0 y de varianza mínima Var (Ẑ(v) - Z(v)). Kriage simple Estimador: n nn nn n Zˆ (Ẑ(v)= vZˆ)(= λiλZλi (Z(x xi ()xi+)i )+ m 1− λλi iλi =∑ +m −∑ v )∑ m 1∑ 1iZ i =1i=1 1 i =1 i =1 i =i=1 Σ Σ Kriage equations. There are sample values Z(Xi) i=1,..., n and to estimate a value of observed characteristic in panel Z(v) for this the lineal combination is written Z(xi-): n Ẑ(v)= Σ λi Z(xi) i=1 Ẑ(v) are estimated values and λi weights of Kriage (Arik, 1990), in such way that λi are obtained in such way that provides an unbiased estimator E(Ẑ(v) - Z(v))= 0 and of minimum variance Var (Ẑ(v) - Z(v)). Kriage simple Donde: E(Ẑ(v))= m es un valor conocido. Estimator: n nn nn n Zˆ (Ẑ(v)= vZˆ)(= λiλZλi (Z(x xi ()xi+)i )+ m 1− λλi iλi =∑ +m −∑ v )∑ m 1∑ 1iZ i =1i=1 1 i =1 i =1 i =i=1 n Σ Sistema: C(xj - v)= Σ λi C(xi - xj), j= 1,...n i=1 n Σ Varianza de Kriage: σk2= C(0) - Σ λi C(xi - v) Where: E(Ẑ(v))= m is a known value. Kriage simple ordinario Σ λi C(xi - xj), j= 1,...n System: C(xj - v)= i=1 En función de la covariazna Σ λi C(xi - v) Variance of Kriage: σk2= C(0) - i=1 i=1 n n n Σ λi Z(xi) Estimador: Ẑ(v)= i=1 Kriage simple ordinary n Sistema: C(xj - v)= Σ λi C(xi - xj) - ρ, j= 1...,n In function of covariance i=1 n Donde: ρ es un multiplicador de Lagrange, y Σ λi = 1 i=1 n n Estimator: Ẑ(v)= Σ λi Z(xi) i=1 n Σ λi C(xi - v) + ρ Varianza del Kriage: σ2k= C(0) - i=1 Σ λi C(xi - xj) - ρ, j= 1...,n System: C(xj - v)= i=1 En términos del semivariograma se tiene: Where: ρ is a Lagrange multiplier, and n Σ λi = 1 i=1 Variabilidad espacial de la lámina de agua y rendimiento de la caraota (Phaseolus vulgaris L.) bajo riego por aspersión n 501 n Estimador: Ẑ(v)= Σ λi Z(xi) Variance of Kriage: σ2k= C(0) - Σ λi C(xi - v) + ρ i=1 i=1 n In terms of semivariogram there is that: Sistema: γ (xj - v)= Σ λi γ (xi - xj) + ρ, j= 1...,n i=1 n Σ λi Z(xi) Estimator: Ẑ(v)= i=1 n Donde: ρ es un multiplicador de Lagrange y Σ λi = 1 i=1 n n Varianza del Kriage: σk2= Σ λi γ (xj - v) + ρ. Σ λi γ (xi - xj) + ρ, j= 1...,n System: γ (xj - v)= i=1 Matricialmente se pude escribir de acuerdo con los casos expuestos en las expresiones (Bivand- Enzer, 2008): Where: ρ is a Lagrange multiplier and Σ λi = 1 i=1 Г0 γo= γ0 (1) Donde: γ0= (γ1, γ2,..., γn, ρ), ρ es un multiplicador de Lagrange n n i=1 n Variance of Kriage: σk2= Σ λi γ (xj - v) + ρ. i=1 The matrix can be written according to exposed cases in expressions (Bivand- Enzer, 2008): λi = 1 y γ0= (γ(v - x1),..., γ(v - xn), 1)´ y asegura que Σ i=1 Г0 γo= γ0 Г´0= γ (x1 - xj) si i= 1,...,n j= 1...,n 1, si i=n + 1, j=1,...,n 0, si i=n + 1, j=n +1 Where: γ0= (γ1, γ2,..., γn, ρ), ρ is a Lagrange multiplier and n assures that Σ λi = 1 and γ0= (γ(v - x1),..., γ(v - xn), 1)´ Г0(n+1)x(n+1) y simétrica La ecuación (1) es equivalente a la expresión: λλλλ11 λ −−(−x1xxx1-x222−x2)))2x)2 L γγγγ((vv(vv−γ−−-−(xxxvx1x1−)1)))x1 ) 0000 0 γγγγ((xγ(xx1x11γ(x )L L ... L γγγγγ((x (x(xxx11γ111−-−(−−xxxxx1nxnnn)−n)))x1n1111)λ1λλ112 1 (γ(v L 1− 1 λ λ γγ (xxγ −(x 2 2 λ γγ(vv(v−γ−-−(xxvx−)))x ) 2 2 -.−)1)x)x11)) 00000. 0 L ... (x xxx2xnxn)n−n)))x1n1111).1.. 2 (γ(v γ ( L x γ − − x γ x 2x 22 -− ( ( γ x x γ ( ( L γ x γ L − − x x 2 1 ( ( 2 1 2 γ x x γ L ( 2 γ v x − − x − 2) 2 2 2 . . 2 1. 2 . . . n .MMM. M .. 22 2 MMMM .M ==== MMM.M M MMMM . M MMMM . M M.MMM M MMMM.MM.. == 0 1MMMM. M (γ(v - x ) x-xnxx22x−2))2))x 2 M)MMM M −(−−xxnxnx1x1-1−)1)x)x1γγγ)1γ()(γx(xxxn(x − 0 1 − 0 1 ( x − 0 1 0 nγ − 0 1 1λλλ γγγγ((vv(vv−γ−−−(xxvxxnnnn−n))x n ) γγγγ((x(xxxγnnγnn−(x n n n 2 0λλnnnnnλn 1111 1 111 11 ... L L 1111 11 1111 11 L L 00000 L ρρ 1 1 ρρρ Por último tenemos el intervalo de predicción que viene dado por la expresión: ˆZ (ˆv()v−) −ZZ σσ; Z;ˆZ(ˆv()v−) −ZZ σσ AA = = Z A= Ẑ(v) - Zαα2/α22σk k;k Ẑ(v) - Zαα2/α22σkkk Donde: A= al intervalo de confianza de 95% con α= 5%, bajo el supuesto de normalidad. P(Z(v)∈A)= 1 - α. Análisis estadístico Para el análisis de datos se emplearon las técnicas (David, 1977) y para conocer el rendimiento se utilizaron: 1. Análisis exploratorio de los datos, esta sección se analizaron los datos para hallar la distribución de probabilidad que siguen las variables rendimiento y lámina total en el área geográfica. 2. El análisis estructural se realizó tomando en cuenta la distribución espacial de las variables rendimiento y lámina total. (1) i=1 Г´0= γ (x1 - xj) si i= 1,...,n j= 1...,n 1, si i=n + 1, j=1,...,n Г0(n+1)x(n+1) and symmetric 0, si i=n + 1, j=n +1 The equation (1) is equivalent to expression: λλλλ11 λ −−(−x1xxx1-x222−x2)))2x)2 L γγγγ((vv(vv−γ−−-−(xxxvx1x1−)1)))x1 ) 0000 0 γγγγ((xγ(xx1x11γ(x )L L ... L γγγγγ((x (x(xxx11γ111−-−(−−xxxxx1nxnnn)−n)))x1n1111)λ1λλ112 1 (γ(v L 1− 1 λ λ γγ (xxγ −(x 22 λ γγ(vv(v−γ−-−(xxvx−)))x ) 2 2 2 x 0 ... (x x ) 1 γ x ) ( ) L x γ x L − − 0 x 1 γ x 1 .. 2x 1) ) 0 22 -− nx (γ(v ( ) ( ) γ x x γ ( ( ) L γ x x γ x L − − 0 x 1 − − 0 x 1 2 1 n ( ) ( ) 2 1 2 n γ x x γ x L ( 2 γ v x − − 0 x 1 − .. .. ..MM . . 222) 2 22 2 1..1 1 2.2 2 nn n .. M M .. . . . MMMM M ==== MMMM M MMMM M MMMM M MMMM M MMMM.MM.. == 0 1MMMM. M (γ(v −(−−xxnxnx1x1-1−)1)x)x1γγγ)1γ()(γx(xxxn(x −−(n−xx-xnxx22x2−2))2))x 2 M)MMM M 0000 0 11111 γγγγ((vv(vv−γ−−-−(xxxvxxnnnn−n)))x n ) nγ γγγγ((x(xxxγnnγnn−(x nn − λλλλnnnλ 0 nn n 1111 1 111 11 ... 1 1 0 L L 1 1 0 1 1 0 L L 1 1 0 1 1 L 1 1 1 0 1 ρρ ρρρ Finally there is the prediction interval that is given by the expression: ˆZ (ˆv()v−) −ZZ σσ; Z;ˆZ(ˆv()v−) −ZZ σσ AA = = Z A= Ẑ(v) - Zαα2/α22σk k;k Ẑ(v) - Zαα2/α22σkkk Where: A= to trust interval of 95% with α= 5%, under normality assumption. P(Z(v)∈A)= 1 - α. Statistical analysis For data analysis there were used techniques proposed by David (1977) and to know yield the following were used: 1. Data exploratory analysis, this section analyzed data to find probability distribution that follow both variable yield and total sheet in the geographic area. José Nicolás Ortiz Romero et al. 502 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 3. Predicciones: consistió en conocer el máximo y mínimo en el rendimiento combinando con la superficie generada por valores del estimador Krigeage (Waller, 2004). Para los análisis descriptivo y estructural se utilizó el ArcGis ver 9.3.1. Resultados y discusión Laminas total recibida durante el ciclo. El histograma de frecuencia muestra la normalidad de los datos (BerensonLevine 2001), presentando un ligero sesgo hacia la derecha y una mayor concentración de los datos hacia la izquierda. Vista la distribución presentada se puede considerar que es normal y por lo tanto se puede proseguir con el análisis geoestadístico. Los diagramas de caja muestran una ligera asimetría positiva, pero también se puede considerar que los datos se distribuyen normalmente (Figura 2). 2. Structural analysis was done taking into account space distribution of both variable yield and total sheet. 3. Forecasts: consisted in knowing maximum and minimum in combined yield with surface created by values of Krigeage estimator (Waller, 2004). For descriptive and structural analysis software ArcGis ver 9.3.1 was used. Results and discussion 12 Total sheets obtained during cycle. Frequency histogram shows data normality (Berenson-Levine 2001) with little bias towards right and higher data concentration to the left. This distribution can be considered like normal and therefore the geostatistical analysis can continue. Box diagrams show slight positive asymmetry, but also can be considered that data are normally distributed (Figure 2). 10 Total yield Frequencies histogram shows data normality with slight bias to the left and greater data concentration to the right. Box diagram shows slight negative asymmetry, but keeps normality (Figure 3). The studied distribution can be defined like data have normality therefore from this point of view the geostatistical analysis can continue. Frecuencia 8 6 4 2 0 190 190 210 210 230 Total_mm 230 250 250 270 270 Rdto total (kg/ha) Figura 2. Histograma de frecuencias y diagrama de caja para el total de lámina aplicada (mm). Figure 2. Frequencies histogram and box diagram for total applied sheet (mm). Values of normal probability, run by quartil method (Q-Q), have an adjustment very near to straight line as well as for total sheet as for yield (Figure 4). Stationarity. The stationarity can be of first or second order, in this case the estimated mean for total sheet (mm) as well as for yield (hg ha -1 ) are constant around data and second order momentum (variance) guarantees that covariance is the same between two points at the same distance (Chan-Cryer, 2008), for stationarity semivariograms it is assumed that variance of difference is the same between two points that are at the same distance no matter which points are selected. For the experiment, since CV of variation is less than unit it guarantees that fulfill the assumption of stationarity in total sheet (mm) and in yield (hg ha -1) (Table 1) (Cressie, 1986). Variabilidad espacial de la lámina de agua y rendimiento de la caraota (Phaseolus vulgaris L.) bajo riego por aspersión Rendimiento total 503 For total (mm) the average is 222.55; 50% of data is less than 220.89, the other 50% is greater, there is no value that can maximize data distribution. Asymmetry coefficient and kurtosis coefficient correspond to results in normality plot (Figure 4), variation coefficient indicates that relative variability of data with respect mean is 7.53%, and sample size is 25. For yield (hg ha-1) average is 1 451.50; 50% of data is less than 1 462.42; the remaining 50% is greater, there is no value that maximizes yield data distribution. Asymmetry coefficient and El histograma de frecuencias muestra la normalidad de los datos presentando un ligero sesgo hacia la izquierda y una mayor concentración de los datos hacia la derecha. El diagrama de caja muestra una ligera asimetría negativa pero se conserva la normalidad (Figura3). Vista la distribución presentada se puede considerar que los datos tienen normalidad por lo tanto desde este punto de vista se puede proseguir con el análisis geoestadístico. 8 Frecuencia 6 4 2 0 1000 1200 1400 1600 Rdto_total_kg_ha 1800 1000 1200 1400 1600 Rdto total (kg/ha) 1800 Figura 3. Histograma de frecuencias para el rendimiento (kg h-1). Figure 3. Frequencies histogram for yield (kg h-1). Los valores de probabilidad normal, corridos por el método de los cuartiles (Q-Q), presentan un ajuste muy próximo a una línea recta tanto para la variable lámina total como rendimiento (Figuras 4). Data source #2 Quantle . 10-1 2,5 kurtosis coefficient reflects what is indicated in the plot (Figure 4), el variation coefficient indicates that relative variability of data with respect mean is 13.03% and sample size is 25. Data source #2 Quantle . 10-1 2,5 2,02 2,02 1,54 1,54 1,06 1,06 0,58 0,58 0,1 1,58 1,68 1,78 1,87 1,96 2,05 2,15 2,24 2,33 2,42 2,51 Data source #1 Quantle 0,1 0,61 0,66 0,7 0,75 0,79 0,84 0,89 0,93 Data source #1 Quantle . 10-1 Figura 4. Probabilidad normal para la variable lámina total (mm) y variable rendimiento (kg ha-1). Figure 4. Normal probability for variable total sheet (mm) and variable yield (kg ha-1). 0,98 1,02 1,07 José Nicolás Ortiz Romero et al. 504 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Estacionariedad. La estacionariedad puede ser de primer y segundo orden, para este caso la media estimada tanto para la lámina total (mm) y el rendimiento (hg ha -1) son constantes alrededor de los datos y el momento de segundo orden (varianza) garantiza que la covarianza es la misma entre dos puntos que están en la misma distancia (Chan-Cryer, 2008), para los semivariogramas la estacionariedadse supone que la varianza de la diferencia es la misma entre dos puntos que están en la misma distancia sin importar los puntos que se elijan. Para el experimento dado que el CV de variación es menor a uno garantiza que cumple el supuesto de estacionariedad en la lámina total (mm) y en el rendimiento (hg ha-1) (Cuadro 1) (Cressie, 1986). Para el total (mm) el promedio es 222.55; 50% de los datos es menor a 220.89 el otro 50% es mayor, no hay un valor que maximice la distribución de los datos. El coeficiente de asimetría y el coeficiente de curtosis refleja lo indicado en el gráfico de normalidad (Figura 4), el coeficiente de variación indica que la variabilidad relativa de los datos con respecto a la media 7.53%, y el tamaño de muestra es 25. Para el rendimiento (hg ha-1) el promedio es 1 451.50; 50% de los datos es menor a 1 462.42 el otro 50% es mayor, no hay un valor que maximice la distribución de los datos de rendimiento. El coeficiente de asimetría y el coeficiente de curtosis refleja lo indicado en el gráfico (Figura 4), el coeficiente de variación indica que la variabilidad relativa de los datos con respecto a la media es 13.03% y el tamaño de muestra es 25. Análisis estructural Dependencia espacial Cuadro 1. Estadística descriptiva para lámina total (mm) y rendimiento (kg ha-1). Table 1. Descriptive statistic for total sheet (mm) and yield (kg ha-1). Lámina total (mm) 222 55 3 35 220 89 16 76 280 89 -0 02 67 0 07 Media Error típico Mediana Desviación estándar Varianza de la muestra Curtosis Coeficiente de asimetría CV Rendimiento (hg ha-1) 1 451 50 37 83 1 462 42 189 18 358 42 0 98 0 31 0 13 Structural analysis Space dependence Total sheet. Preliminary exploration was made by calculating of a mean semivariogram because the h vectors direction was not considered. In an implicit way isotropy is assumed, same variability in all directions, because is useless to explore anisotropy when there is no space dependence in mean (Guimarães, 2000). A clear space structure is shown in the mean semivariogram with absence of nugget effect (Figure 5). This means very low variation between observations obtained from total water sheet in mm received during cycle; in other words, there was much similarity between neighbor sheets and therefore high space dependence. Spherical model is the one that best fits to data with minimum values less than or equal to 308.51, when h is less or equal to 5.70 and zero nugget. The selected model is: Lámina total. Se hizo una exploración preliminar mediante el cálculo de un semivariograma medio porque no se consideró la dirección de los vectores h. Implícitamente se asume isotropía, variabilidad idéntica en todas las n n n n n 3n hn n 1 nh n3 direcciones, porque es inútil explorar anisotropía todos h ≤ 5.70 )∑ + −m x m (λ)vii+ (∑ = + Zˆiλ 1λ−i ∑ λipara − Zˆ (cuando v ) =Zˆ∑ x 1 λx− )i∑ (vZZˆ)ˆλ((= )(+ Z 1 ((m + − viv)Z)= Z)λ xixiZ mλ 1 λ)1 308.51 γ(= (h)= ∑ ∑ i m iZ ii ∑ ∑ i ∑ i - λ 2 5.70 2 5.70 i =1 1 i =1 i = i =1 i = i =1 i =1 i =1 1 i =1 i =1 no existe dependencia espacial en la media (Guimarães, 308.51 para todo h > 5.70 2000). Se muestra una clara estructura espacial en el semivariograma medio con ausencia de efecto nugget Therefore the semivariogram has a scope or dependence (Figura 5). Esto significa una variación muy baja entre distance of 5.70 m which means that measurements las observaciones obtenidas de lámina de agua total en made at higher distances to scope have a random space mm recibida durante el ciclo; es decir, que había mucha distribution and are independent. On the other hand similitud entre laminas vecinas y por lo tanto una alta distances shorter than scope are correlated between dependencia espacial. Zˆ (v ) = ∑ λi Z ( xi ) + m1 − ∑ λi i =1 i =1 n n Variabilidad espacial de la lámina de agua y rendimiento de la caraota (Phaseolus vulgaris L.) bajo riego por aspersión El modelo esférico es el que mejor se ajusta a los datos con valores mínimos menores o igual que 308.51, cuando h se hace menor o igual que 5.70 y cero pepita. El modelo seleccionado es: n n n n n 3n hn n 1 nh n3 todos h ≤ 5.70 )∑ + −m x m (λ)vii+ (∑ = + Zˆiλ 1λ−i ∑ λipara =Zˆ∑ − x 1 λx− )i∑ (vZZˆ)ˆλ((= )(+ Z 1 ((m + − viv)Z)= Z)λ xixiZ mλ 1 λ)1 308.51 γ(= (h)= ∑ ∑ i m iZ ii ∑ ∑ i ∑ i - λ 2 5.70 2 5.70 i = 1 i = 1 i =1 1 i =1 i = i =1 i = i =1 i =1 1 i =1 Zˆ (v ) = ∑ λi Z ( xi ) + m1 − ∑ λi i =1 i =1 n n 308.51 para todo h > 5.70 Por lo tanto el semivariograma presenta un alcance o distancia de dependencia de 5.70 m lo que significa que mediciones realizadas a distancias superiores al alcance tienen distribución espacial aleatoria y son independientes. Por otro lado distancias menores que el alcance están correlacionadas unas a las otras lo que permite que se hagan interpolaciones para distancias menores que los muestreados. Los resultados obtenidos en este semivariograma eran esperados, puesto que los sistemas de riego por aspersión son diseñados para una alta uniformidad de aplicación, de ahí la no existencia de efecto nugget. Cualquier variabilidad observada, probablemente puede ser atribuida a efectos del viento y a variaciones en la presión de operación del sistema de riego. Variaciones por efecto del suelo se descartan ya que las láminas eran colectadas antes que estas alcanzasen el suelo. Modelo esférico ajustado a los datos del semivariograma omnidireccional. La escala de colores a la derecha del semivariograma empírico (Figura 5). Obsérvese que en la barra de colores, el azul y verde claro son los valores bajos del semivariograma y los colores marrón y crema son los valores altos esto indica la poca variabilidad entre láminas de agua medidas considerando un radio de 5.70 m. El mapa geográfico muestra (Campagna, 2005) cómo se distribuyen las láminas de riego aplicadas en el cuadrado conformado por cuatro aspersores adyacentes (Figura 6). Las partes más obscuras corresponden a áreas que recibieron mayor lámina de agua durante el ciclo del cultivo. En los vértices del cuadrado estaban localizados los aspersores, la variabilidad que se aprecia en la lámina aplicada probablemente se deba a variaciones en la presión de operación de los aspersores por efecto de pérdidas de carga en tuberías y desniveles del terreno. Por otro lado el viento, probablemente tuvo alguna influencia en el patrón de distribución de las láminas de riego. 505 them which allow to make interpolations for distances shorter than the samples. The results obtained in this semivariogram are foreseen, since sprinkler irrigation systems are designed for high uniformity application, hence there is no nugget effect at all. Any observed variability can be probably attributed to wind effects or to variations in operation pressure for irrigation system. Variations due soil effect are discarded since sheets were collected before they reach soil. Spherical model adjusted to data from omnidirectional semivariogram. The colors scale at the right of empiric semivariogram (Figure 5). Note that in colors bar, blue and clear green are the low values of semivariogram and brown and cream color are high values meaning low variability between water sheets measured considering a 5.7 m radius. γ 10 -2 4,45 3,56 2,67 1,78 0,89 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Distancia h Figura 5. Semivariograma para lámina total recibida en el ciclo del cultivo. Figure 5. Semivariogram for total sheet received during crop cycle. The geographic map (Campagna, 2005) shows how irrigation sheets are distributed applied in a square formed by four adjacent sprinklers (Figure 6). The darkest portions correspond to areas that received higher water sheet during crop cycle. In the square vortexes the sprinklers were located, the variability that is seen in the applied sheet is probably due to operation pressure variations of sprinklers by effect of load losses in pipes and land variations. On the other hand, the wind probably had some influence in the distribution pattern of irrigation sheets. Crop yield (kg ha -1). The mean semivariogram has clear space structure in which its characteristics patterns can be detected, such as nugget effect, top and scope (Figure 7). Exponential model is the best to fit to data, being: José Nicolás Ortiz Romero et al. 506 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 γ (h)= 1 - -3h 7.8458 N 199.06 - 208.18 208.18 - 214.17 214.17 - 218.11 218.11 - 220.70 220.70 - 222.40 222.40 - 224.99 224.99 - 228.92 228.92 - 234.92 234.92 - 244.04 244.04 - 257.91 Contours 208.18 214.17 218.11 220.70 222.40 224.99 228.92 234.92 244.04 Figura 6. Mapa geográfico y líneas de contorno para la variable lámina total (mm). Figure 6. Geographic map and contour lines for variable total sheet (mm). Rendimiento del cultivo (kg ha-1). El semivariograma medio presenta una clara estructura espacial donde se pueden apreciar sus parámetros característicos, como lo son el efecto nugget, la meseta y el alcance (Figura 7). El modelo exponencial es el que mejor se ajusta a los datos, siendo: γ (h)= 1 - -3h 7.8458 para todos h ≤ 7.8458 Del modelo y gráficamente se puede extraer que el efecto nugget es 1.5810, y el alcance 7.8458. El efecto nugget revela la discontinuidad del semivariograma para distancias menores que las muestreadas. Parte de esa discontinuidad puede ser debida a errores de medicion y a variabilidad en una escala menor que la muestreada. El hecho es que existe una variabilidad espacial entre medidas de rendimiento en hg ha-1 debido al efecto pepita y al mismo tiempo se mantiene una dependencia espacial hasta valores de h≤ 7.8458 m. los colores azul y verde claro son los valores bajos del semivariograma y los colores marrón y crema son los valores altos, se nota que a medida que los cuadritos se alejan del origen los valores del semivariograma de superficie aumentan esto indica que los valores se hacen más desiguales a medida que aumenta la distancia. para todos h ≤ 7.8458 From the model and graphically it can be defined that nugget effect is 1.5810, and scope is 7.8458. Nugget effect shows the discontinuity of semivariogram for distance shorter than samples. Part or this discontinuity can be due measurements errors and to variability at a scale lower than sampled. The fact is that there is sapce variability between yield measurements in hg ha-1 due nugget effect and at the same time space dependance is kept up to values of de ≤ 7.8458 m. Blue and clear green colors are the low values of semivariogram and brown and cream color are high values, it is seen that in the extent the squeres get away from origin surface semivariogram values increase, which means that values are more uneven as the distance increases. γ 10 -4 5,12 4,09 3,07 2,05 1,02 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Distancia h Figura 7. Semivariograma para rendimiento del cultivo (kg ha-1). Modelo exponencial ajustado a los datos del semivariograma omnidireccional. Figure 7. Semivariogram for crop yield (kg ha-1). Exponential model adjusted to data of omnidirectional semivariogram. The geographic map shows how yields are distributed in the square formed by four adjacent sprays (Figure 8). The darkest portions correspond to areas with highest yields. Probably many uncontrolled soil-related factors affected this distribution pattern, besides variability in applied water sheet distribution. Conclusions Space variability between total sheet (mm) from received irrigation was minimum and its dependence is in a radius of 5.70 m. Variabilidad espacial de la lámina de agua y rendimiento de la caraota (Phaseolus vulgaris L.) bajo riego por aspersión El mapa geográfico muestra como se distribuyen los rendimientos en el cuadrado conformado por cuatro aspersores adyacentes (Figura 8). Las partes más obscuras corresponden a áreas que registraron los más altos rendimientos. Probablemente muchos factores inherentes al suelo, no controlados inf luyeron en éste patrón de distribución además de la variabilidad en la distribución de la lámina de agua aplicada. 507 Yields (hg ha-1) have higher space variability according to value shown in nugget effect and its dependence has a radius of 7.84 m. For future researches is advisable to consider other factors such as soil variability with the aim to find a better explanation of such variability. End of the English version Literatura citada N 1.092 - 1.150.7 1.150.7 - 1.212.7 1.212.7 - 1.278.4 1.278.4 - 1.348.3 1.348.3 - 1.422.5 1.422.5 - 1.492.3 1.492.3 - 1.558.1 1.558.1 - 1.620.0 1.620.0 - 1.678.4 1.678.4 - 1.733.4 Contours 1.150.7 1.212.7 1.278.4 1.348.3 1.422.5 1.492.3 1.558.1 1.620.0 1.678.4 Figura 8. Mapa geográfico e isolíneas para la variable rendimiento (kg ha-1). Figure 8. Geographic map and isoline for variable yield (kg ha-1). Conclusiones La variabilidad espacial entre lámina total (mm) de riego recibida fue mínima y su dependencia está en un radio de acción de 5.70 m. Los rendimientos (hg ha-1) presentan mayor variabilidad espacial de acuerdo con el valor presentado en el efecto pepita y su dependencia tiene un radio de acción de 7.84 m. Para futuras investigaciones es recomendable adicionar otros factores como la variabilidad del suelo con el objetivo de encontrar una mejor explicación a dicha variabilidad. ArcGis ver 9.3.1. Copyright© 2001, 2003-2008. ESRI USA. Arik, A. 1990. Effects of search parameters on kriged reserve estimates. Int. J. Mining Geol. Engin. 8(12) 305-318. Berenson, L. y David, M. 2001 Estadística para administración. 2da Edición. Editorial Alambra Mexicana, S. A. México, D. F. 203-213 pp. Bivand, R. S. and Enzer, J. P. 2008. Application spatial data analysis with R. 2nd. Springer Science + Bussine media. LLC. EEUU. 185-205 pp. Burguess, T. M. and Webster, R. 1980. Optimal interpolation and isarithmic mapping of soil properties I. The semi-variogram and punctual kriging, J. Soil Sci. 31:315-331. Campagna, M. 2005. Gis for sustainable developmen. Universita delgi studi di cagiliari. Italy. CRC Press, Augut 29. 93-105 pp. Chan, K. S. and Cryer, J. D. 2008. Time series analysis with applications in R. 2nd. Springer Science + Bussine media. LLC. USA. 155-157 pp. Cressie, N. 1986. Kriging nonstationary data. Journal of the American Statistical Association. 81:625.634. David, M.1977. Geostatistical ore reserve estimation. Elsevier. Amsterdan. 68 p. Dorenbos, J. and Pruitt, W. O. 1977. Crop water requeriments. Irrigation and Drainage Paper 24. FAO, Roma. 144 p. Guimaraes, T. C. 2000. Analise de datos espaciais utilizando a metodología geoestadística. UNEXP Departamento de Engenharia Rural. Campusche Botucatu. Botucatu-SP. Abril- Mayo, 2000. Matheron, G.1963. Traité de géoestatistique appliquée. Ediciones Technip, París. 63-96 pp. Waller, L. G. 2004. Applied spatial statistics for public health data, chaper appendix. Wiley. URL: http://www. sph.emory.edu/Iwaller/WGindex.htm. 3 p. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 509-523 Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México* Irrigated soils in region of Rioverde, San Luis Potosí, Mexico Hilario Charcas-Salazar1, Juan Rogelio Aguirre-Rivera2 y Héctor Martín Durán-García2§ Facultad de Ingeniería, Universidad Autónoma de San Luis Potosí. Dr. Manuel Nava 8, Zona Universitaria, C. P. 78290, San Luis Potosí, S L P, México. (charcassalazar@ yahoo.com.mx). 2Instituto de Investigación de Zonas Desérticas, Universidad Autónoma de San Luis Potosí. C. Altair 200, Fraccionamiento del Llano, C. P. 78377, San Luis Potosí, S L P. México. Tel. 01 444 8421146. Ext. 105. ([email protected]) §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract La región de Rioverde, San Luís Potosí, México, tiene 15 132 ha de riego; los suelos irrigados corresponden a Phaeozems, Vertisoles, Chernozems y Solonchaks. Durante más que 20 años, el laboratorio del Distrito de Desarrollo Rural 130 ha acumulado datos del análisis de dichos suelos; sin embargo, se carece de análisis de tal información, que permita conocer la variación de las propiedades físicas y químicas y la fertilidad de los suelos de la región, así como las repercusiones del riego en dichas propiedades. El objetivo de este estudio fue caracterizar los suelos agrícolas irrigados de dicha región, con base en la información de laboratorio existente. La información se procesó con el paquete Excel 97 para Windows 98, y se sometió a un análisis multivariable de ordenación mediante componentes principales. Los suelos se caracterizan con base en textura, materia orgánica, reacción, conductividad eléctrica, porcentaje de sodio intercambiable, fósforo y potasio asimilables. Se concluye con base en el análisis multivariable de las muestras de suelo que con sólo la determinación de los porcentajes de arena, arcilla y materia orgánica se puede conocer el estado actual de los suelos del área de estudio y las prácticas de manejo requeridas para su aprovechamiento racional. The region of Rioverde, San Luis Potosí, Mexico, has 15 132 ha of surface for irrigation; irrigated soils correspond to phaeozems, vertisols, chernozems and solonchaks. For more than 20 years, the laboratory from Rural Development District 130 has accumulated information from analysis of such soils; however no analysis of this data exists which would allow to know variation in physical and chemical properties and soils fertility from the region, as well as repercussions of irrigation on these properties. The aim of this study was to characterize irrigated agricultural soils in such region, based on available laboratory information. It was processed with Excel 97 software for Windows 98 and multiple variable analysis of sorting by main components was applied. Soils are characterized with base to texture, organic matter, reaction, electric conductivity, percentage of interchangeable sodium, available phosphorus and potassium. It is concluded that only when defining percentages of sand, clay and organic matter, the current state of soils from study area and the handling procedures required for its rational exploitation can be known. Palabras clave: suelos agrícolas, suelos irrigados, propiedades físicas y químicas, fertilidad de suelos. Key words: agricultural soils, irrigated soils, physical and chemical properties, and soils fertility. * Recibido: agosto de 2011 Aceptado: febrero de 2012 Hilario Charcas-Salazar et al. 510 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Introducción Introduction La región agrícola de Rioverde es una de las más importantes de México y posiblemente la más importante del estado de San Luís Potosí. Es una llanura que se extiende 60 km de norte a sur y 35 km de este a oeste (Figura 1), y comprende una superficie de labor de 49 495 ha, de las cuales 15 132 cuentan con agua para riego (INEGI, 1994). El agua para el riego proviene de manantiales que brotan de la formación caliza El Doctor y de perforaciones sobre un acuífero de medio granular. Las aguas de estas dos fuentes se caracterizan por presentar una fuerte variación en la composición y concentración de las sales que llevan disueltas (Charcas et al., 2002). El uso de estas aguas afecta de manera distinta las propiedades físicas y químicas de los suelos, lo cual finalmente se refleja en el rendimiento y la rentabilidad de su cultivo. Durante más que 20 años, en el laboratorio del Distrito de Desarrollo Rural (DDR) 130 (localizado en el área de estudio) se han acumulado datos de análisis de 492 muestras de diferentes suelos de la región. Agricultural region of Rioverde is one of the outstanding regions in Mexico and it is possibly the most important from San Luis Potosí. It is a plain that extends 60 km from north to south and 35 km from east to west (Figure 1), and embraces labor surface of 49 495 ha, from which 15 132 have water for irrigation (INEGI, 1994). Irrigation water comes from wells emerging from El Doctor, a limestone formation, and from drillings on granular intermediate aquifer. The water from these two sources have strong variation in composition and concentration of salts they have dissolved (Charcas et al., 2002). The use of these waters affects differently to chemical and physical properties of soils, which finally affects crop yield and profitability. During more than 20 years, in the laboratory from Rural Development District (DDR) 130 (located in study area) data from analysis of 492 samples of different soils in the region has been recorded. Cuando se dispone de mucha información o de muchas variables de estudio, resulta difícil encontrar los patrones de asociación entre localidades de muestreo con base en los atributos medidos. Las técnicas de análisis multivariable permiten encontrar las semejanzas entre sitios, basadas en los valores de los atributos, y al mismo tiempo encontrar los pesos relativos de dichos atributos para definir ejes que expresen en forma resumida la mayor variación posible de los datos (Ter Braak, 1987). Así, es factible reconocer las variables más importantes que permitan definir clases de unidades de estudio, en este caso, los suelos agrícolas de la región de Rioverde, San Luis Potosí. Con base en lo anterior, el objetivo de este trabajo fue caracterizar los suelos agrícolas irrigados de la región de Rioverde, San Luís Potosí, México, con base en la información histórica de laboratorio existente y reconocer sus patrones de variación regional. Descripción del área de estudio Agua de riego. Con base en la ubicación geográfica y la calidad del agua de riego, los manantiales y pozos pueden agruparse en dos zonas (Charcas et al., 2002): 1) Zona Norte; comprende el área entre los poblados de San Bartolo y San Francisco, en su límite septentrional, y los de la Colonia Veinte de Noviembre y Miguel Hidalgo, en su límite meridional. Las aguas de esta zona presentan las características siguientes: a) alta concentración de sales, con Áreas irrigadas Pozos MÉXICO Manantiales Figura 1. Ubicación de la región de Rioverde y sus áreas irrigadas. Figure 1. Location of Rioverde region and irrigated surfaces. When there is much information or from several variables study, is difficult to find association patterns between sampling locations based on measured attributes. Multiple variable analysis techniques allow to find such relationships between locations based on attributes values and at the same time to find relative weights of such attributes to define Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México valores de conductividad eléctrica mayores que 2 000 µmhos cm-1 a 25 ºC; b) relaciones de adsorción de sodio (RAS) menores que 2.0; y c) pH ligeramente alcalino (7.2 a 8.1). De acuerdo con Fipps (1996) y Hoffman y Shalhevet (2007), estas aguas pueden usarse siempre y cuando se siembren cultivos tolerantes a las sales, se aplique agua en abundancia y el drenaje del subsuelo sea adecuado; 2) Zona Sur; abarca el área localizada entre la margen derecha del río Verde y el borde de las serranías del oeste y suroeste, así como la franja de la margen izquierda del río, que se extiende desde Labor Vieja hasta la colonia Veinte de Noviembre. Las aguas de esta zona se caracterizan por: a) menor concentración de sales, con valores de conductividad eléctrica de 250 a 2 000 µmhos cm-1 a 25 ºC; b) la RAS es menor que 1; y c) el pH varía desde ligeramente ácido a ligeramente alcalino (6.5 a 7.4). Estas aguas pueden usarse en suelos con buen drenaje y prácticas especiales de control de la salinidad; se deben utilizar en cultivos tolerantes a las sales (Palacios y Aceves, 1994; Fipps, 1996; Hoffman y Shalhevet, 2007). Geología. Los sedimentos lacustres alternan espacialmente con el travertino. En la porción Zona Norte, los sedimentos están compuestos de arcillas, tobas silíceas porosas y clásticos de caliza y caliche. En la Zona Sur (y suroeste), los materiales de relleno consisten de una alternancia de capas de arcillas, arenas y gravas, con una cobertura de tobas areno arcillosas y pumíticas. En estos sedimentos se han desarrollado los suelos más fértiles (Phaeozems) de la región de estudio (Alvarado, 1973; Montañez, 1992). Materiales y métodos Se recopilaron y revisaron los datos disponibles del análisis de suelos del laboratorio del DDR 130. Luego, se utilizaron las cartas geológica, edafológica y de uso del suelo (CETENAL, 1973) para ubicar los lugares donde fueron tomadas las muestras de suelo, y de esta forma obtener información acerca de la presencia, distribución y uso de las clases de suelos agrícolas existentes. Con la información anterior, se hicieron recorridos de campo para localizar los lugares de muestreo y obtener información adicional, tal como relieve, topografía, drenaje superficial y manejo del suelo. La información obtenida se procesó con el paquete Excel 97 para Windows 98. La caracterización de los suelos se hizo con base en los atributos evaluados y calificaciones asignadas en el laboratorio del DDR 130, así como en los criterios usuales publicados en la literatura agronómica. 511 axes that in resume give the greatest variation possible on such data (Ter Braak, 1987). Thus, is feasible to identify the most important variables that allow to define types of study units, in this case, agricultural soils from region of Rioverde, San Luis Potosí. Based on this, the aim of this work was to characterize irrigated agricultural soils from region of Rioverde, San Luis Potosí, Mexico, based in the existing laboratory historical records and to identify their regional variation patterns. Study area description Water for irrigation. Based on geographical location and quality of irrigation water, springs and wells can be grouped in two zones (Charcas et al., 2002): 1) north zone; comprises surface between cities of San Bartolo and San Francisco, in its northern limit, and from neighborhoods Veinte de Noviembre and Miguel Hidalgo, in its southern limit. Water from this zone has the following characteristics: a) high salts concentration, with electric conductivity values greater than 2 000 µmhos cm-1 at 25 ºC; b) sodium adsorption ratio (RAS) less than 2.0; and c) slightly alkaline pH (7.2 to 8.1). According to Fipps (1996) and Hoffman & Shalhevet (2007), such water can be used if planted crops are tolerant to salt, water is applied in plenty and subsoil drainage is suitable; 2) south zone; embraces the surface located between the right shoreline of Rioverde river and the limit with the west and southeast mountains, as well as the strip on the left shoreline, from Labor Vieja up to Veinte de Noviembre neighborhood. Its water is characterized by: a) lower salt concentration, with electric conductivity values from 250 to 2 000 µmhos cm-1 at 25 ºC; b) RAS is less than 1; and c) pH varies slightly from acid to slightly alkaline (6.5 to 7.4). Such water can be used in soils with good drainage and special salinity control practices; salt tolerant crops must be used (Palacios and Aceves, 1994; Fipps, 1996; Hoffman and Shalhevet, 2007). Geology. The lacustrine sediments spatially alternate with travertine. In the north zone, sediments are composed by clays, porous silica tufas and clastic limestone and caliche. In the south zone (and southwest), refill materials consist in alternating layers of clays, sands and gravels, with coverage of sandy clay and pumice tufa. In the studied region, more fertile (phaeozems) soils have developed in these sediments in the studied region (Alvarado, 1973; Montañez, 1992). Hilario Charcas-Salazar et al. 512 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Las 492 muestras para el estrato de 0 a 30 cm de suelo que contaban con datos completos y congruentes de textura, conductividad eléctrica, RAS, pH, materia orgánica, N, P y K, se sometieron a un análisis de ordenación de componentes principales con la versión desarrollada por Ter Braak (1988) incluida en su programa CANOCO. Resultados y discusión Con base en la procedencia geográfica, la calidad del agua de riego y el tipo de suelo, las muestras se agruparon en tres zonas (Figura 1): 1) norte; se ubica entre los poblados de San Francisco, en el límite oriental, y Diego Ruiz, en el límite occidental. Es una zona que se riega con aguas que presentan valores de conductividad eléctrica > 2000 µmhos cm-1 a 25 ºC, valores de la RAS < 2 y valores del pH ligeramente alcalinos (7.2 a 8.1). Las clases de suelo predominantes son Phaeozems cálcicos, Vertisoles eútricos y Solonchaks háplicos; 2) margen izquierda del RíoVerde; abarca una franja de terrenos que se extiende desde el poblado de la Boquilla, en el límite oriental, hasta el poblado de La Noria, en el límite occidental. En la porción oriental, las aguas tienen valores de conductividad eléctrica > 2 000 µmhos cm-1 a 25 ºC, mientras que en la occidental los valores son menores; en ambas porciones, los valores de la RAS son < 2 y los del pH son ligeramente alcalinos (7.2 a 8.1). Por otra parte, hacia el oriente predominan los suelos de las unidades Chernozems cálcicos y Solonchaks_háplico, pero en el occidente sólo se presenta Vertisol_éutrico; y 3) sur; incluye toda la margen derecha del RíoVerde, hasta las estribaciones de las serranías del occidente. Esta zona comprende las dos áreas agrícolas más importantes: a) El Refugio; sus aguas se caracterizan por presentar valores de conductividad eléctrica que varían de 250 a 2 000 µmhos cm-1 a 25 ºC, valores de la RAS < 1 y pH ligeramente alcalino (7.2 a 8.1); sus suelos corresponden a Phaeozems_háplico; y b) Distrito de Riego 049 (manantial de la Media Luna y manantiales menores); sus aguas tienen valores de conductividad eléctrica que varían de 1650 a 1980 µmhos cm-1 a 25 ºC, valores de la RAS < 1 y pH desde ligeramente ácido a ligeramente alcalino (6.5 a 7.8); sus suelos pertenecen a las clases Phaeozems_háplico y Chernozems cálcicos. La calidad del agua de riego y el tipo de suelo presentes en las tres zonas descritas, históricamente han condicionado la conformación agrícola de la región de Rioverde. Así, en la zona norte, ha predominado la cría en agostaderos de Materials and methods Available data about soils analysis from DDR 130 laboratory was collected and reviewed. Then, geological, edaphologic and soil use maps (CETENAL, 1973) were used to locate places where soil samples were taken, and finally obtain information about presence, distribution and use of existing types of agricultural soils. With the previous information, field surveys were made to locate sampling places and get additional information such as relief, topography, surface drainage and soil handling. The obtained information was processed with Excel 97 software for Windows 98. Soils characterization was made based on assessed attributes and qualifications assigned in DDR 130 laboratory, as well as usual criteria published in agronomic literature. The 492 samples for strata 0 to 30 cm of soil that have complete data and according to texture, electric conductivity, RAS, pH, organic matter, N, P, and K, were submitted to sorting analysis of main components with version developed by Ter Braak (1988) bundled in his CANOCO software. Results and discussion Based on geographical origin, irrigation water quality and soil type, samples were grouped in three zones (Figure 1): 1) north; located between cities of San Francisco, at west limit, and Diego Ruiz, at east limit. This zone is irrigated with water showing electric conductivity values > 2 000 µmhos cm-1 at 25 ºC, RAS values < 2 and slightly alkaline pH values (7.2 to 8.1). Predominant soil types are calcic phaeozems, eutric vertisols and haplic solonchaks; 2) left shoreline from Rioverde; embraces a portion of lands that extends from city of Boquilla, in the west limit, up to city La Noria, in the east limit. In the west portion, water has electric conductivity values > 2 000 µmhos cm-1 at 25 ºC, while in east portion values are lower; in both portions, RAS values are < 2 and pH values are slightly alkaline (7.2 to 8.1). On the other hand, to the west the predominant soils are from calcic chernozems and haplic solonchaks units, but in east only eutric vertisol is detected; and 3) south; includes the right shoreline of Rioverde, up to limits from western mountains. This zone embraces the two most important agricultural zones: a) El Refugio; its water is characterized by electric conductivity Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México 513 équidos, caprinos y vacunos; mientras que en las zonas de la margen izquierda y derecha del Rioverde, se ha desarrollado la producción de cosechas de regadío (Charcas et al., 2002). values that vary from 250 to 2 000 µmhos cm-1 at 25 ºC, RAS values < 1 and slightly alkaline pH (7.2 to 8.1); its soils corresponds to haplic phaeozems; and b) Irrigation District 049 (Media Luna spring and other ones); its water has electric conductivity values that vary from 1650 to 1980 µmhos cm-1 at 25 ºC, RAS values < 1 and pH from slightly acid up to slightly alkaline (6.5 to 7.8); its soils belong to haplic phaeozems and calcic chernozems types. Textura. En general, las muestras de suelo se agruparon en tres clases de textura: arcillosa, franco arcillosa y franco arcillo arenosa. La importancia de cada clase depende del área geográfica donde fueron tomadas las muestras de suelo. Así, en la zona norte predomina, en orden decreciente: arcillosa> franco arcillosa> franco arcillo arenosa. En ambas márgenes del Rioverde, prevalece la secuencia de texturas arcillosa> franco arcillo arenosa> franco arcillosa. En relación con la fracción arcilla, se presentan dos gradientes: uno de norte a sur, relacionado con la pendiente general de la planicie, la cual es consecuencia de los eventos geológicos que dieron origen al valle; y otro de este a oeste, relacionado con la pendiente perpendicular al Rioverde, resultante de los procesos de erosión y drenaje (Cuadro 1). La información anterior es similar a la de los puntos de verificación de la carta edafológica de CETENAL (1973). The existing irrigation water quality and soil type in described zones, historically had conditioned agricultural application in Rioverde region. Thus, in north zone, equine, caprine and cattle breeding are the predominant activities in north region; while in zones to the left and right shoreline of Rioverde, irrigation crops production has been developed (Charcas et al., 2002). Texture. In general, soils samples were grouped in three types of texture: clay, loam clay and loam sandy clay. The importance of every type depends on the geographical Cuadro 1. Porcentaje de muestras para las principales clases de textura en los suelos irrigados (capa superficial 0-30 cm). Table 1. Percentage of samples for main texture types in irrigated soils (surface layer 0-30 cm). Zona geográfica Norte Pastora San Francisco Margen izquierda del Rioverde Reforma-20 nov. Norte de Rioverde Sur El Refugio Distrito de Riego 049 n Franco arcillo arenosa Franco arcillosa Arcillosa Otras 81 22 8.6 0.0 13.6 13.6 72.8 81.8 5.0 4.6 332 109 21.7 15.6 14.8 16.6 53.0 56.0 10.5 11.8 242 306 30.6 16.0 13.6 14.0 41.7 56.9 14.1 13.1 De acuerdo con Russell (2000), Porta et al. (1993) y Brady y Weil (2008), los tres tipos de textura señalados comparten, con diferente grado de intensidad, las propiedades de la fracción arcilla; es decir, superficie específica muy elevada, y partículas con carga eléctrica superficial y comportamiento coloidal. Estas características tienen, entre otras, las implicaciones agrícolas siguientes: a) capacidad de intercambio catiónico alta. Cuanto más arcilla hay en un suelo, tanto más elevada es su capacidad de intercambio de cationes. Los suelos de la clase franco arcillosa tienen de 15 a 20 cmol (+) kg-1, mientras que los suelos de la clase arcillosa exceden por lo general de 20 cmol (+) kg-1; b) capacidad zone where soil samples were taken. Thus in north zone in decreasing order the predominant ones are: clay > loam clay > loam sandy clay. In both shorelines of Rioverde, prevails the texture sequence clay > loam sandy clay > loam clay. With regards clayey fraction, there are two gradients: one from north to south, related with the general slope of the plain, which is consequence of geological events that give place to the valley; and other from east to west, related to slope perpendicular to Rioverde, resulting from erosion and drainage processes (Table 1). The previous information is similar to the verification points on the edaphologic map from CETENAL (1973). 514 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 de retención y suministro de agua elevada. A medida que aumenta la cantidad de arcilla, también aumenta la capacidad para retener el agua; así, el suministro de agua a la planta es mayor en los suelos arcillosos que en los arenosos; c) permeabilidad baja. Al incrementarse el contenido de arcilla, disminuye la tasa de movimiento del agua y del aire a través del suelo, lo cual puede ocasionar problemas de encharcamiento y falta de oxígeno; y d) dificultad de laboreo. En los suelos arcillosos dura poco tiempo el tempero, por lo que resulta difícil realizar las labores en el momento oportuno. Cuando el suelo está muy húmedo, la arada no lo disgrega, sino que forma grandes prismas invertidos; por el contrario, cuando está seco, esta labor requiere gran tracción y forma muchos terrones, que algunas veces no se destruyen con la rastra, sino que se hunden en el suelo (Russell, 2000; Porta et al., 1994; Brady y Weil, 2008). Materia orgánica. Con base en el contenido (%) de materia orgánica (MOR), las muestras de suelo agrícola se suelen agrupar en tres niveles: pobre (0.0-2), medio (2.1-3) y rico (> 3) (Navarro, 1957). En general, en la región estudiada predominan los suelos con niveles pobre y medio de MOR. En la zona norte, en el área de Pastora (porción occidental), poco menos que la mitad de las muestras corresponde a suelos ricos en MOR; sin embargo, en el área de San Francisco (porción oriental), las dos terceras partes pertenecen a suelos pobres en este respecto. En la margen izquierda del río Verde, tanto en el área de La Reforma (porción occidental) como en el norte de Rioverde (porción oriental) los porcentajes de suelos con los tres niveles de MOR son similares. En la zona sur, en el área de El Refugio, casi dos terceras partes de las muestras son de suelos pobres en MOR; mientras que en el Distrito de Riego 049, a cada nivel de MOR le corresponde alrededor de una tercera parte (Cuadro 2). Estos resultados son reflejo de las prácticas de cultivo en la región, las cuales se caracterizan por la aplicación de fertilizantes químicos, incorporación escasa de residuos de cosecha y nula aplicación de estiércol. Cabe destacar que el área hortícola más importante de la región, El Refugio, es una de las dos áreas que cuentan con la mayor proporción de suelos pobres en materia orgánica. Esto adquiere relevancia debido a que en ella se obtienen altos rendimientos mediante la aplicación excesiva y desproporcionada de fertilizantes químicos, y que por ello, es considerada regionalmente como el ejemplo a seguir. La información anterior coincide con la que se ha obtenido para los suelos Phaeozems y Vertisols de otras regiones de México (Morazzani y Ortega, 1972; RamírezSilva y Pérez-Zamora, 1990; Venegas et al., 1991; Alvarado y Cruz, 1993; Pérez, 1993; Osuna et al., 1994; Pérez, 1996; Hilario Charcas-Salazar et al. According to Russell (2000), Porta et al. (1993) and Brady and Weil (2008), the three types of texture share, at different intensity degree, the properties of clayey fraction; e. g., very high specific surface, and particles with electrical surface charge and colloidal behavior. These characteristics have, among others, the following agricultural implications: a) high cation exchange capacity. The greater clay content in soil, the greater cation exchange capacity. Clayey type soils have from 15 to 20 cmol (+) kg-1, while clayey type soils exceed in general by 20 cmol (+) kg-1; b) retention capacity and higher water supply. In the extent clay content increases, water retention capacity also increases; thus, water supply to the plant is greater in clayey soils than in sandy soils; c) low permeability. When clay content increases, water and air motion rate through soil decreases, which can cause stagnation and lack of oxygen issues; and d) difficult plow. The tempering last little in clayey soils, then is difficult to make work on time. When soil is too wet, plow does not disintegrate it, but makes large inverted prismatic shape formations; on the other hand, when it is dry, this work requires great traction and makes many clods, which some times are not destroyed with plow, but they sink in soil (Russell, 2000; Porta et al., 1994; Brady and Weil, 2008). Organic matter. Based on organic matter (MOR) content (%), agricultural soil samples can be grouped in three levels: poor (0.0-2), medium (2.1-3) and rich (> 3) (Navarro, 1957). In general, in the studied region MOR poor and medium soils are the predominant ones. In north zone, on Pastora section (western side), little less than half of samples correspond to soils rich in MOR; however, in San Francisco section (eastern side), two thirds of lands correspond to soil poor in MOR. In the left shoreline of Rioverde, as well in the western side (La Reforma area) as in the eastern side (north of Rioverde) the percentages of soils with the three MOR levels are similar. In south zone, in El Refugio area, almost two thirds of samples correspond to soils poor in MOR; while in Irrigation District 049 each MOR level is detected around one third (Table 2). These results reflect harvest practices in the region, in which use of chemical fertilizers, very scarce addition of harvest remains, and null manure application is common practice. It is worth to mention that largest horticultural section of region, El Refugio, is one of the zones with greatest proportion of soils poor in organic matter. This becomes important since in this zone high yields are obtained by excessive and limitless application of chemical fertilizers, and by this reason is regionally used as example. Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México 515 Pérez et al., 1998; Salgado-García et al., 2000). En los manuales de agronomía, se señala que el bajo contenido de materia orgánica en los suelos, disminuye notablemente la eficacia de los fertilizantes químicos y dificulta las labores de labranza; por ello se recomienda la rotación de cultivos con requerimientos nutricionales y de labranza contrastantes, además de la incorporación de residuos de cosechas y abonos verdes, aplicación de estiércol y disminución de labores de labranza, esto es, las prácticas apropiadas de manejo de suelos (Russell, 2000; Lampkin, 1998). This information coincides with the data obtained for phaeozems and vertisols soils from other regions of Mexico (Morazzani and Ortega, 1972; Ramírez-Silva and PérezZamora, 1990; Venegas et al., 1991; Alvarado and Cruz, 1993; Pérez, 1993; Osuna et al., 1994; Pérez, 1996; Pérez et al., 1998; Salgado-García et al., 2000). In agronomy manuals, low content of organic matter in soils makes that chemical fertilizers efficiency diminishes dramatically and makes harder to work on tilling; then it is recommended crop rotation with contrasting nutritional requirements and Cuadro 2. Proporción (%) de muestras de suelo según contenido de materia orgánica (%) (capa superficial 0-30 cm). Table 2. Rate (%) of soils samples according to organic matter content (%) (surface layer 0-30 cm). Zona geográfica Norte Pastora San Francisco Margen izquierda del Rioverde Reforma-20 nov. Norte de Rioverde Sur El Refugio Distrito de Riego 049 n ≤2.0 (Pobre) 2.1-3.0 (Medio) >3.0 (Rico) 104 21 26.9 66.7 26.9 14.3 46.2 19.0 267 132 46.1 42.4 26.6 31.1 27.3 26.5 203 219 60.1 37.0 22.2 29.7 17.7 33.3 pH. Las muestras de suelo corresponden principalmente a cuatro clases en cuanto a su reacción: neutros (6.6-7.5), ligeramente alcalinos (7.6-8.0), medianamente alcalinos (8.18.5) y fuertemente alcalinos (> 8.5). En la zona norte, los suelos ligeramente alcalinos y medianamente alcalinos comprenden más del 84% de las muestras consideradas para las porciones occidental y oriental. En la margen izquierda del río Verde, las tres primeras clases de pH ocurren en proporciones similares. En la región sur del área de El Refugio predominan suelos medianamente alcalinos, mientras que en el Distrito de Riego 049 dominan los suelos ligeramente alcalinos (Cuadro 3). La información anterior concuerda con la obtenida en otras regiones de México para Phaeozems (Pérez, 1993, 1996; Pérez et al., 1998) y Vertisoles (Osuna et al., 1994) y con los datos generalizados para las unidades de suelos registrados para la región de estudio (FAO-UNESCO, 1991). Algunos efectos esperables en suelos ligeramente alcalinos y medianamente alcalinos, son: 1) disminución de la disponibilidad de fósforo, pues con valores de pH mayores de 7.5 el fósforo se encuentra en forma poco soluble (fosfato tricálcico); 2) deficiencias de hierro, manganeso, zinc, cobre, boro y cobalto; particularmente destacan problemas de clorosis; y 3) supresión de organismos benéficos; los organismos fijadores de nitrógeno disminuyen su actividad rápidamente a valores de pH superiores a 7.4; y of tilling, also it is recommended to add residue from harvest and green compost, manure application and decrease of tilling work, this means, proper handling practices of soils (Russell, 2000; Lampkin, 1998). pH. According to their reaction, soils samples correspond mainly to four types: neutral (6.6-7.5), slightly alkaline (7.6-8.0), moderately alkaline (8.1-8.5) and highly alkaline (> 8.5). In north zone, slightly and moderately alkaline soils comprise more than 84% of samples considered for western and eastern sides. In the left shoreline of Rioverde, the three first pH types have similar proportions. In the south region from El Refugio area, moderately alkaline soils are the predominant ones, while slightly alkaline soils are the predominant in Irrigation District 049 (Table 3). The previous information coincides with the one obtained in other regions of Mexico for phaeozems (Pérez, 1993, 1996; Pérez et al., 1998) and vertisols (Osuna et al., 1994) and with generalized data for soil units recorded for the study region (FAO-UNESCO, 1991). In slightly and moderately alkaline soils some prospected effects are: 1) decrease of phosphorus availability, since with pH values greater than 7.5, phosphorus is found in a variety Hilario Charcas-Salazar et al. 516 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 4) se favorecen organismos causantes de enfermedades en las plantas; tal es el caso del marchitamiento por Verticillium en el jitomate y otras solanáceas (Worthen yAldrich, 1956;Allaway, 1957; Russell, 2000; Porta et al., 1993; Brady y Weil, 2008). little soluble (tricalcium phosphate); 2) deficiencies of iron, manganese, zinc, copper, boron and cobalt; in particular chlorosis issues arise; and 3) suppression of beneficial organisms; nitrogen fixer organisms quickly decrease their Cuadro 3. Porcentajes de muestras de suelos irrigados de acuerdo con su tipo de reacción (capa superficial 0-30 cm). Table 3. Percentages of samples of irrigated soils according to reaction type (surface layer 0-30 cm). Zona geográfica Norte Pastora San Francisco Margen izquierda del Rioverde Reforma-20 Nov. Norte de Rioverde Sur El Refugio Distrito de Riego 049 n Neutro (6.6-7.5) Ligeramente alcalino (7.6-8.0) Medianamente alcalino (8.1-8.5) Fuertemente alcalino (>8.5) 153 33 5.2 15.2 48.4 66.7 41.8 18.1 4.6 0.0 335 228 35.5 38.6 23.6 30.7 37.0 27.2 3.9 3.5 261 396 32.9 34.8 23.7 42.7 42.1 19.7 1.3 2.8 Salinidad. Con base en los valores de conductividad eléctrica (dS m-1 a 25 ºC), las muestras de suelo se agruparon sólo en dos clases: suelos normales (0.0-4.0) y suelos salinos (> 4.0). En general se presentaron dos gradientes, uno de norte a sur, y otro de este a oeste, en coincidencia con los gradientes del contenido de arcilla (Cuadro 4). En la zona norte, las muestras del área de San Francisco provienen de Solonchaks háplico, mientras que las de Pastora proceden principalmente de Phaeozems cálcicos y Vertisoles éutricos. En esta zona, los suelos en forma natural han estado sujetos a un ciclo anual de inundación y secamiento, lo cual ha conducido a la acumulación de sales. En la margen izquierda del Ríoverde, las muestras proceden principalmente de Vertisoles_éutricos, Chernozems cálcicos y Solonchaks háplicos. Aunque esta zona también está bajo la influencia de los ciclos anuales de inundación y secamiento, el problema de acumulación de sales se atenúa por el drenaje natural hacia el Ríoverde. En la zona sur se registra la menor proporción de suelos salinos; las muestras del área de El Refugio corresponden a Phaeozems_háplicos y las del Distrito de Riego 049, provienen de Chernozem cálcicos y Phaeozems háplico. Esta zona presenta buen drenaje, debido a la red de drenes que se construyó al establecerse el Distrito de Riego, a principios de los años ochenta. Los suelos con problemas de sales en la región se localizan principalmente en pequeñas depresiones que se han abierto al cultivo recientemente. activity at pH values greater than 7.4; and 4) there is opportunity to favor organisms that cause diseases in plants; in this case we can list wilting by Verticillium in tomato and other solanaceae (Worthen and Aldrich, 1956; Allaway, 1957; Russell, 2000; Porta et al., 1993; Brady and Weil, 2008). Salinity. Based non electric conductivity values (dS m-1 at 25 ºC), soil samples were grouped only in two types: normal soils (0.0-4.0) and saline soils (> 4.0). In general, two gradients emerged, one from north to south, and other from east to west, coinciding with gradients of clay content (Table 4). In north zone, samples from San Francisco area are haplic solonchaks, while samples from La Pastora mainly are calcic phaeozems and eutric vertisols. In this zone, soils have been naturally subject to floods and droughts annual cycle, which has led to salt accumulation. In the left shoreline of Rioverde, samples are mainly from eutric vertisols, calcic chernozems and haplic solonchaks. Although this zone is also under the influence of floods and droughts annual cycle, the problem of salt accumulation is worsened due natural drainage towards Rioverde. In south region exists the least proportion of saline soils, samples from El Refugio area correspond to haplic phaeozems and the samples from Irrigation District 049, are from calcic chernozems and haplic phaeozems. This zone has good drainage, due the drain network build to set Irrigation Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México 517 Con base en la información anterior y en el historial de uso de las áreas de riego señaladas, se puede afirmar que el problema de salinidad de los suelos de la región de estudio, es el resultado de la transformación en regadío de terrenos impropios para el cultivo. En la zona norte y en la porción oriental de la margen izquierda del río Verde, el problema de los suelos salinos se ha agravado por el uso de aguas con alto contenido de s ales y la falta de prácticas favorables de manejo de suelos. District at the beginning of the decade of 1980. In the region, soils with salt issues are located mainly in small depressions that are recently used for harvest. Sodificación. Con excepción del área de San Francisco (donde se registraron 13 muestras con valores promedio 14%), el porcentaje de sodio intercambiable (PSI) de la mayoría de los suelos es menor que 5%; esto es, por debajo del valor máximo a partir del cual se pierden las propiedades físicas favorables de los suelos arcillosos (Dudal, 1967; Porta et al., 1993). Así, casi no se registraron PSI cercanos a 15%, con lo cual los suelos ya presentan serias dificultades para mantener su permeabilidad (Russell, 2000; Brady y Weil, 2008). Zona geográfica Nitrógeno. Los datos del contenido de nitrógeno en las muestras de suelo están calculados con base en los de materia orgánica, por lo que sería redundante mostrarlos; así, sólo se presenta la información correspondiente a fósforo y potasio. Fósforo. Respecto al contenido de fósforo (mg kg -1), las muestras de suelo se suelen agrupar en cuatro niveles: pobre (≤ 4.0), medio (4.1-8), rico (8.1-18) y muy rico (> 18.0) (Navarro, 1957). En toda la región de estudio, la mayoría de las muestras analizadas corresponde a los niveles muy rico y rico (Cuadro 5). Esta abundancia de fósforo se puede explicar por la aplicación de altas cantidades de fertilizantes fosfóricos a las hortalizas que se siembran en rotación anual con el maíz. Sin embargo, como ya se señaló anteriormente, la mayoría de los suelos presenta valores de pH que varían entre 7.6 y 8.5, por lo que gran parte del fósforo puede estar en forma poco asimilable. Este problema se puede resolver con prácticas de fertilización más racionales, la aplicación combinada de fertilizantes fosfóricos con nitrogenados de residuo ácido, o bien, con la incorporación periódica de residuos de cosecha y de estiércol (Tisdale y Nelson, 1970; Porta et al., 1993; Lampkin, 1998). Cuadro 4. Proporción de muestras de suelos irrigados según su nivel de conductividad eléctrica (dS m-1 a 25 o C) (capa superficial 0-30 cm). Table 4. Samples proportion of irrigated soils according to electric conductivity level (dS m-1 at 25 oC) (surface layer 0-30 cm). Norte Pastora San Francisco Margen izquierda del Rioverde Reforma-20 nov. Norte de Rioverde Sur El Refugio Distrito de Riego 049 n 0.0-4.0 >4.0 (Normal) (Salino) 153 33 52.3 9.1 47.7 90.9 335 228 74.9 65.8 25.1 34.2 262 396 92.4 82.3 7.6 17.7 Also based on this information and the historical usage of irrigation areas, it can be stated that salinity issue in soils from this region is the result of transforming land not suitable for harvest into plantations. In north zone and eastern side from left shoreline of Rioverde, this problem has worsen due use of water with high content of salt and lack of proper practices of soils handling. Sodication. Except for San Francisco area (where 13 samples with average value of 14% were recorded), the percentage of exchangeable sodium (PSI) from most of soils is less than 5%;in other words, bellow the maximum value from which there is no good physical properties for clayey soils (Dudal, 1967; Porta et al., 1993). Thus, there were almost null records for PSI near 15%, meaning that soils already have issues to keep their permeability (Russell, 2000; Brady and Weil, 2008). Nitrogen. Data about nitrogen content in soil samples are calculated based in the ones of organic matter, therefore it is redundant to show them and only information for phosphorus and potassium is presented. Hilario Charcas-Salazar et al. 518 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Cuadro 5. Proporción de muestras de suelo de acuerdo al contenido de fósforo (mg kg-1) (capa superficial 0-30 cm). Table 5. Proportion of soil samples according to phosphorus content (mg kg-1) (surface layer 0-30 cm). n Zona geográfica Norte Pastora San Francisco Margen izquierda del Rioverde Reforma-20 nov. Norte de Rioverde Sur El Refugio Distrito de Riego 049 ≤4.0 (Pobre) 4.1-8.0 (Medio) 8.1-18 (Rico) >18.0 (Muy rico) 104 22 10.6 4.5 6.7 0.0 21.1 4.5 61.60 91.00 324 118 7.4 8.5 4.9 4.2 14.8 17.8 72.90 69.50 206 246 4.4 1.6 3.4 2.8 14.1 7.3 78.10 88.30 Potasio. De acuerdo con el contenido de potasio (mg kg-1), los suelos agrícolas se agrupan en cuatro clases: pobre (≤ 102.0), medio (102.1-146.0), rico (146.1-222.0) y muy rico (>222.0) (Navarro, 1957). Las muestras analizadas corresponden principalmente a los niveles medio y muy rico (Cuadro 6). Los suelos con riqueza media de potasio predominan en las áreas de riego de manantiales, con mayor antigüedad de cultivo; en cambio, los suelos muy ricos en potasio corresponden a las áreas de bombeo de pozos, habilitadas más recientemente. Lo anterior indica que los suelos de la región de estudio pueden encontrarse en un proceso de agotamiento de su reserva de potasio, debido a que: a) las prácticas usuales de fertilización excluyen la aplicación de este nutriente; b) es nula la incorporación de estiércol y residuos de cosecha; y c) se cultivan especies que requieren altas cantidades de potasio. Por lo tanto, deben tomarse medidas para mantener o mejorar el contenido actual de potasio de los suelos de la región de estudio. En el área de manantiales, lo procedente es la aplicación de fertilizantes potásicos para aumentar el rendimiento de los cultivos; mientras que en el área de bombeo, la aplicación debe estar orientada al mantenimiento del nivel natural de riqueza de este nutriente, tal como se recomienda (Tisdale y Nelson, 1970; Porta et al., 1993; Brady y Weil, 2008). Phosphorus. About phosphorus content (mg kg-1), soil samples are usually grouped in four levels: poor (≤ 4.0), moderate (4.1-8), rich (8.1-18) and very rich (> 18.0) (Navarro, 1957). In all studied region, most of analyzed samples corresponds to very rich and rich levels (Table 5). This excess of phosphorus can be due application of high amounts of phosphorus-based fertilizers to the crops that use maize in annual rotation. However, as previously mentioned, most of soils have pH values that vary between 7.6 and 8.5, so most of phosphorus would be in variety with little assimilation. This problem can be solved with more rational fertilizing practices, the combined application of phosphorus and nitrogen-based acid residuals fertilizers, or the periodic addition of harvest residuals and manure (Tisdale and Nelson, 1970; Porta et al., 1993; Lampkin, 1998). Potassium. According to potassium content (mg kg-1), agricultural soils are grouped in four types: poor (≤ 102.0), moderate (102.1-146.0), rich (146.1-222.0) and very rich (>222.0) (Navarro, 1957). Analyzed samples mainly correspond to moderate and very rich levels (Table 6). Moderate content soils are predominant in areas irrigated Cuadro 6. Proporción de muestras de suelos irrigados, según su contenido de potasio (mg kg-1) (capa superficial 0-30 cm). Table 6. Proportion of samples of irrigated soils, by potassium content (mg kg-1) (surface layer 0-30 cm). Zona geográfica Norte Pastora San Francisco Margen izquierda del Rioverde Reforma-20 nov. Norte de Rioverde Sur El Refugio Distrito de Riego 049 n ≤102.0 (Pobre) 102.1-146.0 (Medio) 146.1-222.0 (Rico) >222.0 (Muy rico) 104 22 1.9 0.0 21.1 100.0 1.0 0.0 76.00 0.00 324 118 0.1 0.0 42.6 42.4 0.0 4.2 57.30 53.40 206 246 3.9 2.0 38.3 67.1 4.4 5.7 53.40 25.20 Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México Análisis multivariable de las propiedades físicas y químicas del suelo. -Los resultados del análisis de componentes principales (ACP) para 10 atributos en los 30 cm superficiales de las 492 muestras de suelo estudiadas, indican que los cuatro primeros componentes explican 70.02% de la variación total (Cuadro 7). El primer componente recoge 29.06% de dicha variación y, por los pesos de las variables en su definición, ordena las muestras de suelo de acuerdo con los contenidos de arena, materia orgánica, potasio y nitrógeno. Así los perfiles de suelo con valores negativos en el eje 1 y 2 se ordenan en función de sus contenidos de arena, ya que esta variable tiene un peso de -0.6805 en la definición del eje 1 de componentes principales (Figura 2). El segundo componente resume 16.77% de la variación y las variables con más peso en su definición son los contenidos de arcilla y arena. De esta manera ambos ejes de componentes poseen un peso negativo del contenido de arena. Por su parte, el contenido de arcilla, y en menor medida el PSI y la CE, imprimen valores positivos en ambos componentes (Cuadro 7, Figura 2). El tercer componente da cuenta de 13.05% de la variación y está definido por los pesos, en este caso positivos, que aportan el PSI y la CE. Por último, el cuarto componente principal explica 11.14% de la variación y la variable que predomina en la ordenación de las muestras es el contenido de limo. 519 by springs, with older time of crop; in contrast, soils very rich in potassium correspond to areas with well’s irrigation, enabled more recently. This means that soils in the region of study can be found in a process of potassium depletion, because: a) usual fertilization practices exclude adding this nutrient; b) null addition of manure and harvest residuals; c) there are harvested varieties that demand high quantities of potassium. Therefore, measures must be taken to keep or improve current content level. In spring areas, the recommendation is to apply potassium-based fertilizers to increase crops yield; while in wells zones, application must be focused on keeping natural level of this nutrient, as recommended (Tisdale and Nelson, 1970; Porta et al., 1993; Brady and Weil, 2008). Analyses of multiple variables of physical and chemical properties of soils. The main component analysis (ACP) results for 10 attributes in 30 cm surface of 492 samples of soil studied indicate that first four components explain 70.02% of total variation (Table 7). The first component takes 29.06 of such variation and, by weight of variables in their definition, sorts soil samples according to sand, organic matter, potassium and nitrogen content. In this way soil profiles with negative values in axe 1 and 2 Cuadro 7. Peso de los atributos del suelo en los cuatro primeros componentes principales (CP) y 10 variables físicas y químicas de suelos irrigados y los porcentajes de variación explicados por cada eje. Table 7. Weight of soils attributes in the first four main components (CP) and 10 physical and chemical variables from irrigated soils and the variation percentages explained by each axe. Variable Conductividad eléctrica PSI PH Materia orgánica Arena Limo Arcilla Nitrógeno Fósforo Potasio CP1 (29.06) 0.5178 0.2128 0.4835 0.6359 -0.6805 0.3997 0.5186 0.6035 0.5512 0.6153 Para explicar la disposición de las muestras de suelo en el gráfico de ordenación conviene relacionar las Figuras 2 y 3. Las regiones de ambos gráficos definidas por los dos componentes están relacionadas como sigue. Los vectores representan las variables edáficas (Figura 3) e indican la ubicación de las muestras que se relacionan más con dicha CP2 (16.77) 0.1709 0.3838 -0.1324 -0.2992 -0.6267 -0.0647 0.7109 -0.5180 -0.3675 -0.3294 CP3 (13.05) 0.6605 0.7069 0.0727 -0.1617 0.2571 0.2823 -0.4227 -0.0432 -0.1524 -0.0197 CP4 (11.14) 0.0971 -0.1880 -0.5241 0.1746 -0.2380 0.7852 -0.1727 0.0495 -0.1174 -0.2244 are sorted in function of their sand contents, since this variable has weight of -0.6805 in definition of axe 1 of main components (Figure 2). The second component takes 16.77% of variation and the variables with most weight in their definition are clay and sand content. In this way both component axes have negative weight of sand content. In 520 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 variable edáfica. Así, la disposición espacial de las muestras de suelo sobre los primeros dos componentes (Figura 2) sugiere su disposición en un gradiente de contenido de materia orgánica (las muestras 335 y 369 del extremo inferior derecho presentaron los valores más altos de MOR, mientras que las muestras 307 y 317 del extremo inferior izquierdo presentaron los valores más bajos de MOR). El segundo eje representa un gradiente de contenido de arcilla (las muestras 225 y 283 en el extremo superior tuvieron los valores más altos, y las 335 y 476 en el otro extremo los más bajos). +1.0 CP2 317 303 307 115 189 481 473 476 387 447 372 418 361 336 420 334 369 362 419 410 413 360 358 335 +1.0 CP1 -1.0 -1.0 42 103 96 199 160 33 309 158 37 36 283225 282 227 179 229 145 228 461 13 390 331 333 348 Figura 2. Ordenación de 492 muestras de suelo con base en diez atributos físicos y químicos, sobre los dos primeros componentes principales. Figure 2. Sorting of 492 soil samples based on ten physical and chemical attributes, on the first two main components. El grado de asociación de las variables edáficas con los ejes de ordenación o componentes principales y entre ellas mismas, se expresa mediante la longitud de los vectores correspondientes (Figura 3) y el ángulo entre ellos, respectivamente (Ter Braak, 1988). De hecho en la Figura 3 se puede reconocer una representación gráfica de la matriz de correlaciones entre las variables y de éstas con los ejes de componentes principales. De esta manera en la Figura 3 destacan la arcilla y la arena como variables correlacionadas negativamente. La arena, por su longitud del vector y el cuadrante de componentes en que se ubica, indica los pesos negativos similares para ambos componentes (Cuadro 7). De igual manera la arcilla tiene una relación estrecha con el porcentaje de sodio intercambiable y la conductividad eléctrica, de acuerdo con el ángulo que se forma entre sus vectores. La materia orgánica y los tres nutrientes mayores están muy correlacionados, de acuerdo con la disposición y semejanza de sus vectores; aunque el Hilario Charcas-Salazar et al. the case of clay content, and in least extent PSI and CE, they contribute with positive values in both components (Table 7, Figure 2). The third component takes 13.05% of variation and is defined by weights, positive in this case, that add PSI and CE. Lastly, the fourth main component explains 11.14% of variation and the predominant variable for sorting samples is silt content. To explain disposition of soil samples in sorting graphic it helps to make a relationship of Figures 2 and 3. The regions of both graphics defined by two components are related as follows. Vectors represent edaphic variables (Figure 3) and they mean the samples’ location that is more related with such edaphic variable. Then, spatial arrangement of soil samples on the first two components (Figure 2) suggest its arrangement in a gradient of organic matter content (samples 335 and 369 of the lower right end showed the highest values of MOR, while samples 307 and 317 of the lower left end showed the lowest values of MOR). The second axe represents a gradient of clay content (samples 225 and 283 in the upper end had the highest values, and samples 335 and 476 in the opposite end, the lowest). The association degree of edaphic variables with sorting axes or main components and between themselves, is expressed by length of corresponding vectors (Figure 3) and the angle between them, respectively (Ter Braak, 1988). In fact in Figure 3 can be identified a graphic representation of correlation matrix between variables and from these with the main component axes. In this way, in Figure 3 clay and sand outstand as negatively correlated variables. By its vector length and the components quadrant where is located, sand defines the alike negative weights for both components (Table 7). Similarly clay has close relationship with percentage of interchangeable sodium and electric conductivity, according to the angle created between their vectors. Organic matter and three main components are very correlated, according to disposition and likeness of their vectors; although nitrogen vector has more length and in the quadrant is equidistant, because is a variable calculated from MOR, can be selected as the most important of the four ones. According to the data shown in Figure 3, soils have a main variation defined by texture, in the sense that sand and clay vectors that afterwards is perpendicularly split by fertility variables, mainly by organic matter. In this way, clay, sand and organic matter Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México Conclusiones percentages become the most significant attributes for soils characterization in the region, according to current prevailing conditions for crops and handling practices. The assessment of these three attributes can easily give the schedule of changes in crop current practices to keep or improve soil fertility at proper profitability and persistent level. CP2 +1.0 vector del nitrógeno presenta mayor longitud y equidistancia en el cuadrante, por ser una variable calculada a partir de la MOR se puede elegir á esta como la más importante de las cuatro. De acuerdo con lo mostrado en la Figura 3, los suelos presentan una variación principal dictada por la textura, en el sentido de los vectores de arena y arcilla, que luego es separada perpendicularmente por las variables de fertilidad, principalmente por la materia orgánica. De esta forma, los porcentajes de arcilla, arena y materia orgánica resultan ser los atributos más significativos para la caracterización de los suelos de la región, de acuerdo con las condiciones dominantes actuales, de cultivos y de prácticas de manejo. La evaluación de estos tres atributos puede orientar fácilmente los cambios programables en las prácticas actuales de cultivo para mantener o mejorar la fertilidad del suelo en un nivel apropiado de rentabilidad y persistencia. 521 ARC1 PSI 1 -1.0 coel 1 +1.0 Lim 1 pH 1 CP1 MOR 1 Pot 1 Fosf 1 NIT 1 Los suelos irrigados de la región de Rioverde, San Luís Potosí, se caracterizan por: Predominio de la fracción arcilla en dos gradientes, uno de norte a sur, relacionado con la pendiente general de la planicie, y otro de este a oeste, relacionado con la pendiente dominante. Las clases de textura principales son: arcilla, franco arcillo arenosa y franco arcillosa. Contenido de materia orgánica (%) en los niveles pobre (0.0-2.0) y medio (2.1-3.0). pH en los niveles neutro (6.6-7.5), ligeramente alcalino (7.6-8.0) y medianamente alcalino (8.1-8.5). Conductividad eléctrica en dos gradientes, coincidentes con los gradientes de la fracción arcilla. En las zonas margen izquierda del río Verde (porción occidental) y sur, los suelos con una conductividad eléctrica ≤ 4 dS m-1 a 25 ºC, profundos y con buen drenaje, regados con aguas de conductividad eléctrica ≤ 2 000 µmhos cm-1 a 25 ºC, no presentan acumulación de sales. Por el contrario, en las zonas norte y margen izquierda del río Verde (porción oriental), los suelos salinos, poco profundos y con mal drenaje, y regados con aguas con conductividad eléctrica > 2 000 µmhos cm-1 a 25 ºC, muestran acumulación de sales. Porcentaje de sodio intercambiable en general < 5%. -1.0 Are 1 Figura 3. Ordenación de las diez variables físicas y químicas evaluadas en 492 muestras de suelo de la región de Rioverde, S L P. PSI1: porcentaje de sodio intercambiable; Arc1: arcilla; coel1: conductividad eléctrica; Lim1: limo; pH1: pH; MOR1: materia orgánica; Pot1: potasio; Fosf1: fósforo; NIT1: nitrógeno; Are1: arena. Figure 3. Sorting of ten physical and chemical variables assessed in 492 soil samples from Rioverde region, San Luis Potosí. PSI1: exchangeable sodium percentage;Arc1: clay; coel1: electric conductivity; Lim1: silt; pH1: pH; MOR1: organic matter; Pot1: potassium; Fosf1: phosphorus; NIT1: nitrogen; Are1: sand. Conclusions The irrigated soils from Rioverde region, San Luis Potosí, are characterized by: Prevalence of clay fraction in two gradients, one from north to south, related with general slope of the plain, and another from east to west, related with dominant slope. The main types of texture are: clay, sand clay loam and clay loam. 522 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Hilario Charcas-Salazar et al. Fósforo asimilable (mg kg-1) en niveles de muy rico (8.118.0) y rico (> 18.0), debido probablemente a prácticas inadecuadas de fertilización, mientras que su potasio asimilable (mg kg-1) aún se encuentra de manera natural en niveles medio (102.1-146.0) y muy rico (> 222.0). Organic matter content (%) in poor (0.0-2.0) and moderate (2.1-3.0) levels. Los resultados del análisis multivariable de las 492 muestras de suelo de la región, indican que con sólo la determinación de los porcentajes de arena, arcilla y materia orgánica se podría conocer el estado actual de un suelo del área de estudio, y programar evaluar el efecto de las prácticas de manejo requeridas para su aprovechamiento racional. Electric conductivity in two gradients, coinciding with gradients of clay fraction. In the left shoreline of Rioverde (western side) and south, soils with electric conductivity ≤ 4 dS m-1 at 25 ºC, deep and with good drainage, irrigated with water of electric conductivity ≤ 2 000 µmhos cm-1 at 25 ºC, there is no salt built up. On the contrary, in the north zone and left shoreline of Rioverde (estern side), saline soils, little deep and with deficient drainage, and irrigated with water of electric conductivity > 2 000 µmhos cm-1 at 25 ºC, show salt build up. Literatura citada pH in neutral (6.6-7.5), slightly alkaline (7.6-8.0) and moderately alkaline (8.1-8.5) levels. Exchangeable sodium percentage in general < 5%. Alvarado, A. R. 1973. Estudio geohidrológico de la cuenca del Rioverde, estado de San Luís Potosí, Trabajo recepcional. Escuela de Ingeniería. Universidad Autónoma de San Luis Potosí, San Luis Potosí, D. F., México. 40 p. Alvarado, L. J. y Cruz, D. J. 1993. Relaciones cantidadintensidad (Q/I) de potasio en suelos tropicales, Terra. 11(2):127-134 pp. Allaway, W. H. 1957. pH, soil acidity, and plant growth. In: soil, the yearbook of agriculture USDA. Washington, D. C. 67-71 pp. Brady, N. C. and Weil, R. R. 2008. The nature and properties of soils. 14th ed. Pearson Prentice Hall. Upper Saddle River, New Jersey. USA. 975 p. Cartas Edafológica, Geológica y Uso del Suelo (CETENAL). 1973. Escala 1:50000, hojas angostura F-14-A-86. San Francisco F-14-A-87. El Refugio F-14-C-16 y Rioverde F-14-C-17. Charcas, S.; Olivares, H. E. y Aguirre, J. R. 2002. Agua de riego en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México. Ingeniería Hidráulica en México. 17(4)37-56. Dudal, R. 1967. Suelos arcillosos oscuros de las regiones tropicales y subtropicales. Cuadernos de Fomento Agropecuario Núm. 83. FAO. Roma, Italia. 169 p. Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura (FAO). Organización de las Naciones Unidas para la Ciencia, la Educación y la Cultura (UNESCO). 1991. Mapa mundial de suelos, leyenda revisada, informes sobre recursos mundiales de suelos 60. FAO. Roma, Italia. 142 p. Available phosphorus (mg kg-1) in very rich (8.1-18.0) and rich (> 18.0) levels, probably due to fertilization unsuitable practices, while available potassium (mg kg -1) is still naturally found in moderate (102.1-146.0) and very rich (> 222.0) levels. Multiple variable analysis results from 492 soil samples from region indicate that current state of soil would be known only with calculation of percentages of sand, clay and organic matter, and schedule assessment of handling practices effect required for its rational exploitation. End of the English version Fipps, G. 1996. Irrigation water quality standards and salinity management strategies, Texas Agricultural Extension Service, Texas, A&M University System, College Station, Texas. B-1667. 19 p. Hoffman, G. J. and Shalhevet, J. 2007. Controlling salinity. In: Hoffman, G. J.; Evans, R. G.; Jensen, M. E.; Martin, D. L. and Elliott, R. L. (Eds.). Design and operation of farm irrigation systems. 2nd ed. ASABE. St. Joseph, Michigan. USA. 160-207 pp. Instituto Nacional de Geografía e Informática (INEGI). 1994. San Luis Potosí, resultados definitivos, VII. Censo agrícola-ganadero. Tomo I. D. F., México. 505 p. Lampkin, N. 1998. Agricultura ecológica. Mundi-Prensa. Madrid, España. 724 p. Suelos irrigados en la región de Rioverde, San Luis Potosí, México Montañez, C. P. 1992. Hidrogeoquímica del municipio de Rioverde, San Luis Potosí. Trabajo recepcional. Facultad de Ingeniería. Universidad Autónoma de San Luis Potosí, San Luis Potosí. D, F., México. 91 p. Morazzani, H. R. y Ortega, T. E. 1972. Contenido de las distintas formas de potasio en suelos tropicales y subtropicales de México. Agrociencia. 7:37-46. Navarro, C. A. 1957. Métodos de análisis de suelos agrícolas y aguas para riego. Ingeniería Hidráulica en México. 4:55-67. Osuna, C. F. J.; Turrent, F. A. y Moreno, D. R. 1994. Respuesta de la nueva variedad de arroz (Oryza sativa L.) Morelos A-92 a la densidad de población, a la fertilización, y a la fecha de transplante en condiciones de riego, en dos localidades del estado de Morelos. Terra. 12(2):225-239. Palacios, O. y Aceves, E. 1994. Instructivo para el muestreo, registro de datos e interpretación de la calidad del agua para riego agrícola. Centro de Hidrociencias. Colegio de Postgraduados, en Ciencias Agrícolas. Montecillo, Estado de México. 49 p. Pérez, Z. O. 1993. Colección e interpretación de datos climatológicos del Campo Experimental Tecomán. Terra. 11(2):158-165. Pérez, Z. O. 1996. Caracterización de los suelos de la llanura costera norte de Tecomán, Colima, Terra. 14(3):229-240. Pérez, N. J.; Volke, H. V.; Martínez, M. M y Estrella, Ch. E. 1998. Erosión, productividad y rentabilidad de dos suelos del estado de Oaxaca, Agrociencia. 32(2):113-118. 523 Porta, J.; López, A. M. y Roquero, C. 1993. Edafología. Mundi-Prensa. Madrid, España. 807p. Ramírez-Silva, J. H. y Pérez-Zamora, O. 1990. Efecto de plataformas elevadas (planches) en la producción de maíz de temporal en Vertisoles típicos y gleicos del estado de Quintana Roo, México. Terra. 8(1):36-44. Russell, E. W. 2000. Soil conditions and plant growth, 10th. Edition, Longman, New York. 849 p. Salgado-García, S.; Núñez-Escobar, R.; Peña-Cabriales, J. J.; Etchevers-Barra, J. D.; Palma-López, D. J. y Soto-Hernández, R. M. 2000. Respuesta de la soca de caña de azúcar a la fertilización NPK, Agrociencia. 34(6):689-698. TerBraak, C. J. F. Ordination. 1987. Data analysis in community and landscape ecology. In: Jongman, R. H. G. TerBraak, C. J. F.; van Tongeren, O. F. and Pudoc, R. Wageningen. The Netherlands. 90-73 pp. TerBraak, C. J. F. 1988. CANOCO - a FORTRAN program for Canonical Community Ordination. Microcomputer Power. Ithaca, New York, USA. 95 p. Tisdale, S. L. y Nelson, W. L. 1970. Fertilidad de los suelos y fertilizantes. Traducción al español de Balasch, J. y Piña, C. (Ed.). Montaner y Simón, Barcelona, España. 760 p. Venegas, G. J.; Velázquez, M. M. y Pimentel, E. J. L. 1991 Respuesta del maíz al fósforo en la Ciénega de Chapala. Terra 2:197-203. Worthen, E. L. and Aldrich, S. R. 1956. Farm soils. Their fertilization and management, 5th. Edition, Wiley, New York, USA. 439 p. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 525-537 Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz* Gametophytic incompatibility in Mexican maize breeds José Miguel Padilla García1§, José de Jesús Sánchez González1, Lino de la Cruz Larios1, José Ariel Ruiz Corral2, José Ron Parra1 y Moisés Martín Morales Rivera1 Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CUCBA). Universidad de Guadalajara. Carretera Guadalajara-Nogales, km. 15.5. A. P. 129. C. P. 45110. Las Agujas, Nextipac, Zapopan, Jalisco, México. Tel. y Fax.: (33)3682 - 0743. 2Campo Experimental Centro Altos de Jalisco. Centro de Investigación Regional del Pacífico Centro. Carretera Tepatitlán-Lagos de Moreno, km 8. INIFAP. A. P. Núm. 56. Tepatitlán de Morelos 47600, Jalisco. Tel. 33-36413575 Ext. 114. §Autor para correspondencia: ([email protected]). 1 Resumen Abstract La incompatibilidad esporofítica y gametofítica evitan la autofecundación o la fecundación cruzada, y es una forma de aislamiento reproductivo. Los genes de incompatibilidadcruzada en maíz de los loci ga1 y tcb1, son causantes del reconocimiento o rechazo entre el estigma y el polen, y de ellos depende la presencia o ausencia de grano en la mazorca del maíz. El presente estudio tuvo como objetivo detectar alelos de incompatibilidad-cruzada de ga1 y tcb1 en colecciones representativas de grupos raciales de maíz de México. El trabajo se realizó en el Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias de la Universidad de Guadalajara, ubicado en Zapopan, Jalisco, México durante los ciclos agrícolas de primavera-verano 2007 a 2009. Se evaluaron, en condiciones de temporal, 184 accesiones de razas mexicanas de maíz con base en porcentaje de llenado de grano de mazorca en sus cruzas con probadores macho recesivos (sin factores de incompatibilidad) y probadores hembra dominantes (con factores de incompatibilidad). En el análisis de varianza hubo diferencias altamente significativas tanto entre razas como entre accesiones dentro de razas para el locus ga1. Con relación al locus tcb1 sólo se encontraron diferencias altamente significativas entre razas. El alelo Ga1-S, responsable de la incompatibilidad no-recíproca, se detectó 53.8% de las accesiones, mientras que el alelo Sporophytic and gametophytic incompatibility avoids self-fecundation or cross-fertilization, and it is a form of reproductive isolation. The cross-incompatibility genes in maize from loci ga1 and tcb1, cause recognition or reject between stigma and pollen, and from them depends presence or absence of grain in maize ear. The aim of this study was to detect alleles of cross-incompatibility of ga1 and tcb1 in collections representing maize breeds groups from Mexico. The work was made at Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias from Universidad de Guadalajara, located in Zapopan, Jalisco, Mexico during agricultural spring-summer 2007 to 2009 cycles. Under rainfall conditions 184 accessions of Mexican maize breeds were assessed based in percentage of grain filling in ear in their crosses with recessive male testers (without incompatibility factors) and dominant female testers (with incompatibility factors). The analysis of variance suggested highly significant differences as well between breeds as between accessions within breeds for locus ga1. With regards locus tcb1 there were found only highly significant differences between breeds. Allele Ga1-S, responsible of non-reciprocal incompatibility, was detected in 53.8% of accessions, while neutral allele Ga1-m and recessive allele ga1 was identified in 55.43 and 15.76%, * Recibido: septiembre de 2011 Aceptado: enero de 2012 José Miguel Padilla García et al. 526 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 neutro Ga1-m y el alelo recesivo ga1 se identificaron 55.43 y 15.76%, respectivamente. El alelo Tcb1-S fue detectado en muy bajas proporciones, concentrado principalmente en las razas de Elotes-Occidentales y Maíz-Dulce. Palabras clave: Zea mays L., factores gametofíticos, flujo genético, incompatibilidad-cruzada. Introducción En especies alógamas una característica esencial de la autoincompatibilidad es evitar la autofecundación, como un medio para reducir los efectos deletéreos de la endogamia (Castric y Vekemans, 2004; Pickup y Young, 2008). Asimismo, la incompatibilidad-cruzada causa restricción del flujo de genes, aislamiento reproductivo y la prevención de híbridos inadaptados (Matsubara et al., 2003; Kermicle et al., 2006). Se conocen dos tipos de incompatibilidad, el tipo heteromórfico, que se caracteriza por las diferencias morfológicas entre genotipos. Por ejemplo las diferencias en la longitud o la forma de los estilos, y el tipo homomórfico, en donde los genotipos incompatibles no se distinguen morfológicamente; éste último también se clasifica en gametofítico y esporofítico. En el sistema gametofítico, el fenotipo del polen es codificado por su propio genoma haploide, mientras que en el sistema esporofítico, el fenotipo del polen está determinado por el esporofito (de los padres diploides del polen) y puede involucrar interacciones de dominancia entre los alelos (Glémin et al., 2005). En la mayoría de los sistemas de incompatibilidad están presentes factores adicionales, referidos como modificadores, porque influyen en la respuesta de dichos sistemas; la especificidad de la incompatibilidad sólo puede determinarse bioquímicamente (Cruz-García et al., 2003). Los factores de incompatibilidad-cruzada en el género Zea causantes del reconocimiento o rechazo entre el estigma y el polen son heredados de manera mendeliana simple. Nelson (1996) identificó diez regiones cromosómicas influidas por estos factores. El locus ga1 ha sido muy estudiado, pues el alelo Ga1-S causa esterilidad no-recíproca; una planta Ga1-S/Ga1-S no es receptiva al polen ga1; sin embargo, el polen Ga1-S induce un llenado de grano completo en la mazorca de plantas homocigotas ga1/ga1. Un tercer alelo, Ga1-m, desde el punto de vista de la compatibilidad, se ha definido como alelo de acción neutral dado que fertiliza todos los genotipos incluyendo a Ga1-S/Ga1-S y las plantas respectively. Allele Tcb1-S was detected at very low rates, mainly found in breeds Elotes-Occidentales and MaízDulce. Key words: Zea mays L., gametophytic factors, genetic flow, cross-incompatibility. Introduction In allogamic species an essential characteristic is selfincompatibility to avoid self-fecundation, as mean to reduce detrimental effects of endogamy (Castric and Vekemans, 2004; Pickup and Young, 2008). Also, the cross-incompatibility causes restriction of genes flow, reproductive isolation and prevents unadapted hybrids (Matsubara et al., 2003; Kermicle et al., 2006). There are two types of incompatibility, heteromorphic type, which is characterized by morphological differences between genotypes. For instance, differences in length and shape of carpels, and the homomorphic type, where incompatible genotypes can not morphologically differentiate; this last is also classified like gametophytic and sporophytic. In gametophytic system, pollen phenotype is coded by its own haploid genome, while in sporophytic system, pollen phenotype is defined by sporophyte (from pollen’s diploid parents) and can involve interactions of dominance between alleles (Glémin et al., 2005). In most of incompatibility systems exist additional factors, referred like modifiers, because affect response of such systems; the specificity of incompatibility can only be biochemically determined (Cruz-García et al., 2003). Factors of cross-incompatibility in genera Zea that cause recognition or reject between stigma and pollen are inherited in a simple Mendelian way. Nelson (1996) identified then chromosomal regions influenced by these factors. Locus ga1 has been widely studied, since allele Ga1-S causes nonreciprocal sterility; a plant Ga1-S/Ga1-S it is not receptive to pollen ga1; however, pollen Ga1-S induces complete grain filling in ears of homozygous plants ga1/ga1. A third allele, Ga1-m, from the compatibility point of view, has been defined like neutral action allele since it fertilizes all genotypes including to Ga1-S/Ga1-S and the homozygous plants for this allele are receptive to pollen with any of the three alleles from locus ga1 (Kermicle and Allen 1990). Kermicle and Allen (1990) found a genetic factor that limits crossing of maize with teosinte (Zea spp.) and they called it Teosinte Incompatibility Complex (TIC); then, Evans and Kermicle Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz homocigotas para este alelo son receptivas al polen con cualquiera de los tres alelos del locus ga1 (Kermicle y Allen 1990). Kermicle y Allen (1990) encontraron un factor genético que limita el cruzamiento del maíz con el teocintle (Zea spp.) y lo denominaron Complejo de Incompatibilidad del Teocintle (TIC); posteriormente, Evans y Kermicle (2001) y Kermicle y Evans (2005) lo denominaron como el locus teosinte crossing barrier-1 (tcb1). Los mismos autores en 2010 identificaron el alelo de incompatibilidad Ga2-S encontrado predominantemente en poblaciones de teocintle. La acción génica del alelo Ga1-S es parcialmente dominante sobre el alelo ga1, mientras que el alelo Tcb1-S es completamente dominante sobre tcb1 (Kermicle y Allen, 1990; De la Cruz et al., 2008b). El maíz tiene su centro de origen y diversidad genética en México (Wellhausen et al., 1952; Sánchez et al., 2000), y ha sido ampliamente estudiado en aspectos evolutivos, de diversidad y f lujo genético. Los estudios incluyen caracteres morfológicos, fisiológicos (Sánchez et al., 1993), citológicos, bioquímicos, análisis de izoenzimas (Sánchez et al., 2000), moleculares (Matsuoka et al., 2002; Rice et al., 2006), adaptación climática y descriptores ecológicos (Ruíz et al., 2008). Sin embargo, en México, el estudio de los sistemas de incompatibilidad-cruzada en el género Zea es escaso sobresaliendo el estudio de Cíntora (1963) realizado en algunas razas Mexicanas de maíz, y los trabajos de De la Cruz (2007) y De la Cruz et al. (2007 y 2008a) en razas de maíz, teocintle y en híbridos comerciales de maíz. Se considera que el uso de sistemas de incompatibilidad entre especies o variedades es uno de los mecanismos más efectivos que podrían utilizar los agricultores que producen maíces para usos especiales como: maíz dulce, palomero, de alta lisina, y maíz orgánico libre de organismos genéticamente modificados (OGM); ya que previenen la hibridación indiscriminada del maíz comercial de siembras adyacentes y de plantas voluntarias (Palaudelmàs et al., 2009) y evita el f lujo genético no deseado. Asimismo, en regiones de México en donde todavía se encuentran variedades nativas de maíz y poblaciones de teocintle se requiere obtener información de su constitución genética, respecto a la incompatibilidad, con el propósito de tener una buena planeación en los programas de monitoreo y de conservación in situ. El objeto de la presente investigación fue detectar la presencia y distribución geográfica de alelos de incompatibilidad-cruzada gametofítica de los loci ga1 y tcb1 en colecciones representativas de las razas de maíz de México. 527 (2001) and Kermicle and Evans (2005) called it like locus teosinte crossing barrier-1 (tcb1). Same authors in 2010 identified the incompatibility allele Ga2-S predominantly found in populations of teosinte (Kermicle and Evans, 2010). Gene action of allele Ga1-S is partially dominant over allele ga1, while allele Tcb1-S is completely dominant over tcb1 (Kermicle and Allen, 1990; De la Cruz et al., 2008b). Maize has its origin and genetic diversity in Mexico (Wellhausen et al., 1952; Sánchez et al., 2000), and has been widely studied in evolution, diversity and genetic flow matters. Studies included morphological and physiological characters (Sánchez et al., 1993), cytological, biochemical, izoenzymes analysis (Sánchez et al., 2000), molecular (Matsuoka et al., 2002; Rice et al., 2006), climatic adaptation and ecological descriptors (Ruíz et al., 2008). However, in Mexico the study of cross-incompatibility system in genera Zea is scarce, outstanging study made by Cíntora (1963) in some of Mexican maize breeds, and works from De la Cruz (2007) and De la Cruz et al. (2007 y 2008a) in maize, teosinte breeds and in commercial maize hybrids. It is considered that use of incompatibility systems between species or cultivars is one of the most effective mechanisms that could use maize producer farmers for special uses like: sweet corn, pop corn, with high lisin and organic maize free of genetically modified organisms (GMO); since they come from irrational hybridation of commercial maize of adjacent crops and voluntary plants (Palaudelmàs et al., 2009) and avoids the unwanted genetic f low. Also, in regions from Mexico where still exist native maize cultivars and teosinte populations is required to obtain information about its genetic constitution, regarding incompatibility with the purpose to have good planning for supervision and conservation in situ programs. The aim of this research was to detect presence and geographic distribution of gametophytic cross-incompatibility alleles of loci ga1 and tcb1 in collections representative in maize breeds from Mexico. Materials and methods Site of study and materials handling The study was performed during agricultural spring-summer 2007 to 2009 cycles, in the experimental field from Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias José Miguel Padilla García et al. 528 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Materiales y métodos Sitio de estudio y manejo de los materiales El estudio se efectúo en los ciclos agrícolas de primaveraverano 2007 a 2009 en condiciones de temporal, en el campo experimental del Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias (CUCBA) de la Universidad de Guadalajara, ubicado en Nextipac, Zapopan, Jalisco, México, a 20º 44’42.5” latitud norte y 103º 30’52.5” longitud oeste, con una altitud de 1 650 m, temperatura media de 23.6 ºC en los meses de junio-octubre y precipitación media anual de 816 mm. Material genético Para el estudio del locus ga1 se sembraron 184 accesiones y para el locus tcb1 122, todas representativas de 54 razas mexicanas de maíz (Cuadro 1). Nótese en el Cuadro 1, que para ciertas razas el número de accesiones fue mayor que en otras debido a que en las razas donde se habían detectado los genes de incompatibilidad (Cíntora, 1963; De La Cruz, 2007) se amplió el muestreo dentro de ellas. Adicionalmente, se usaron los probadores hembra NC-348xW22-P4830 y NC-348xW22-P5270, para evaluar el locus ga1, ambos son homocigotes dominantes (Ga1-S/Ga1-S), y fueron identificados por De la Cruz et al. (2008b). En el caso del locus tcb1 se usó la cruza simple LUG03xW22-TIC-1.1 en estado heterocigote (Tcb1-S/-). Además se utilizaron los probadores macho G-8327A y P-32R21 sin factores de incompatibilidad (ga1/ga1, tcb1/tcb1), seleccionados a partir del estudio realizado por De la Cruz et al. (2008a). (CUCBA) of Universidad de Guadalajara, located in Nextipac, Zapopan, Jalisco, México, at 20º 44’ 42.5” north latitude and 103º 30’ 52.5” west longitude, at a height of 1 650 m, average temperature of 23.6 ºC in months from June-October and yearly average precipitation of 816 mm. Genetic material For study of locus ga1 184 accessions were planted and for locus tcb1 122, all representing 54 Mexican maize breeds (Table 1). In Table 1 can be seen that for certain breeds the number of accessions was higher than in others because in breeds where incompatibility genes were detected (Cíntora, 1963; De La Cruz, 2007) sampling was widen within them. Also, female testers NC-348xW22-P4830 and NC-348xW22-P5270 were used, to assess locus ga1, both with dominant homozygotes (Ga1-S/Ga1-S), and were identified by De la Cruz et al. (2008b). In case of locus tcb1 LUG03xW22-TIC-1.1 simple cross in heterozygous state (Tcb1-S/-) was used. Also male testers G-8327A and P-32R21 without incompatibility factors (ga1/ga1, tcb1/ tcb1) were used, selected from study made by De la Cruz et al. (2008a). Study variables Studied variable was grain filling in ear, which was quantified with presence or absence of grain from crossings of maize breeds with each type of tester, and in individual plants from each breed grain filling percentage was calculated, obtained with three testers applying methodology proposed by Kermicle and Allen (1990). The Cuadro 1. Razas y número de accesiones estudiadas por raza. Table 1. Breeds and number of accessions studied per breed. Raza Ancho Apachito Arrocillo Amarillo Azul Bofo (Coreño) Bofo Bolita Cacahuacintle Celaya Chalqueño Chapalote Comiteco Acc. 1 1 1 1 2 11 6 1 2 2 9 1 Raza Dulcillo del Noroeste Dzit Bacal Elotero de Sinaloa Elotes Cónicos Elotes Occidentales Gordo Harinoso de Ocho Jala Maíz Blando de Sonora Maíz Dulce Motozinteco Mountain Yellow Acc. 10 1 3 2 40 1 1 2 1 28 1 1 Raza Olotón Onaveño Palomero de Chihuahua Palomero Toluqueño Pepitilla Ratón Reventador Tablilla de Ocho Tabloncillo Tabloncillo Perla Tehua Tepecintle Acc. 1 1 5 2 1 1 14 1 2 1 1 1 Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz 529 Cuadro 1. Razas y número de accesiones estudiadas por raza (Continuación). Cuadro 1. Razas y número de accesiones estudiadas por raza (Continuation). Raza Complejo Serrano de Jalisco Conejo Coscomatepec Cristalino de Chihuahua Cónico Cónico Norteño Acc. 1 1 1 1 3 1 Raza Mushito Nal Tel Nal Tel de Altura Negrito Negro Chimaltenango Olotillo Variables de estudio La variable estudiada fue el llenado de grano de la mazorca, que se cuantificó con la presencia o ausencia de grano de los cruzamientos de las razas de maíz con cada tipo de probador, y en las plantas individuales de cada cruza se estimó el porcentaje del llenado de grano, obtenido con tres probadores aplicando la metodología propuesta por Kermicle y Allen (1990). La estimación del llenado de grano se hizo visualmente redondeando con aproximación a 10%. Esto es, llenado abajo 5% se designó 0%, de 5 a 15% el valor fue 10% y así sucesivamente hasta alcanzar 95% al cual se asignó 100%. Diseño y manejo de experimentos Las accesiones se sembraron en el campo con base en su clasificación racial en dos surcos de 5 m de longitud y 0.77 de ancho con 17 plantas por surco. El manejo agronómico fue el recomendado por el INIFAP para esta zona. Se llevó a cabo un análisis de varianza en donde se consideraron como fuentes de variación a las razas y a las accesiones dentro de razas. En los casos en que se detectaron diferencias significativas, se utilizó la prueba de medias de Dunnett al 0.05 de probabilidad. En ambos análisis se utilizó el procedimiento GLM del paquete estadístico SAS versión 8.2 (SAS Institute, 1992). Los testigos de comparación para la prueba de Dunnett fueron tomados de los mismos materiales incluidos en el estudio. El procedimiento GLM calculó para cada comparación el valor de Dunnett debido a que hubo diferencias entre razas para el número de accesiones. Para el caso del probador macho recesivo sin factores de incompatibilidad, se eligió un material con valores de 100% de llenado de grano en mazorca, mientras para el caso de probadores hembra dominantes con factores de incompatibilidad se usaron materiales con valores de 0% de llenado de grano. Acc. 1 1 1 2 1 1 Raza Tuxpeño Tuxpeño Norteño Vandeño Zamorano Amarillo Zapalote Chico Zapalote Grande Acc. 3 1 1 1 2 1 calculation of grain filling was made visually with approximation at 10%. This is, filling bellow 5% was designed 0%, from 5 to 15% value was 10%, and so on up to 95% which was assigned 100%. Experimental design and handling Accessions were sown based in their breed classification in two 5m length furrows and 0.77 m wide with 17 plants per furrow. INIFAP’s agronomical handling recommended for this region was used. Where variation sources were considered breeds and accession within breeds, analysis of variance was performed. In cases in which significant differences were detected, Dunnett means test at 0.05 of probability was used. In both analyses GLM procedure from statistical software SAS version 8.2 (SAS Institute, 1992) was used. Comparison controls for Dunnet test were taken from same materials included in study. GLM procedure calculated for each comparison Dunnet value due there were differences between breeds for number of accessions. For the case of recessive male tester without incompatibility factors, while in case of female dominant testers with incompatibility factors materials with 0% of grain filling values were used. Dominant female testers from locus ga1 (Ga1-S/Ga1-S) and from locus tcb1 (Tcb1-S/tcb1), received pollen from each studied accession and each accession received pollen from recessive male tester (ga1/ga1, tcb1/tcb1). Plants from female tester with incompatibility factors and plants from accessions were come to ear before stigmas emergence. Spikes from male testers and accessions were covered the day previous to pollination; the pollination were done manually between 12:00 and 14:00 h, time in which pollen is viable in Nextipac, Zapopan, Jalisco (Rodríguez et al., 2006). The design was completely randomized blocks with one repetition. In the first two cycles were assessed 184 accessions with locus José Miguel Padilla García et al. 530 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Los probadores hembra dominante del locus ga1 (Ga1-S/ Ga1-S) y del locus tcb1 (Tcb1-S/tcb1), recibieron polen de cada accesión bajo prueba, y cada accesión recibió polen del probador macho recesivo (ga1/ga1, tcb1/tcb1). Las plantas del probador hembra con factores de incompatibilidad y las plantas de las accesiones se jilotearon antes de la emergencia de los estigmas. Las espigas de los probadores macho y de las accesiones se cubrieron el día anterior a la polinización; las polinizaciones se realizaron manualmente entre las 12:00 y 14:00 h, horario en que el polen es viable en Nextipac, Zapopan, Jalisco (Rodríguez et al., 2006). El diseño fue de bloques completos al azar con una repetición. Los dos primeros ciclos fueron evaluados 184 accesiones con el locus ga1 y en el último ciclo 122 accesiones con el locus tcb1. Los probadores hembra se sembraron en tres fechas de siembra, y los probadores macho tuvieron hasta cinco fechas de siembra para lograr la coincidencia con la floración de las accesiones en estudio. Criterios para detectar los alelos de incompatibilidad Para detectar los alelos de los loci ga1 y tcb1 se utilizaron los promedios de llenado de grano en mazorca con ambos tipos de probadores, macho recesivo y hembra dominante. Se ejecutaron tres etapas: Etapa 1. Probador macho recesivo (sin alelos de incompatibilidad): cuando la accesión se polinizó con el probador macho recesivo y no hubo llenado de grano y además, los valores determinados con la prueba de Dunnett fueron estadísticamente iguales al control (0% de llenado de grano en la mazorca), se identificó la presencia de algún alelo de incompatibilidad (Ga1-S, Tcb1-S). En el caso de formación de grano en la mazorca y cuando la prueba de Dunnett señaló valores estadísticamente iguales al control, con 100% de llenado de grano en la mazorca, se identificó la presencia de los alelos neutros (Ga1-m, Tcb1-m) o recesivos (ga1, tcb1), y se continuó con la etapa 2. Etapa 2. Cruzamientos al probador hembra dominante Ga1-S/Ga1-S: una vez excluidas las accesiones con presencia de los alelos Ga1-S o Tcb1-S, el siguiente paso fue llevar polen del material seleccionado a los probadores hembra dominantes. Cuando en el material de prueba se observó 100% de llenado de grano y fue estadísticamente igual al control se identificó la presencia del alelo Ga1-m. Si el llenado de grano fue 0% y fue estadísticamente igual al control, se interpretó como accesión sin alelos de incompatibilidad. ga1 and in the last cycle 122 accessions with locus tcb1. Female testers were planted in three planting dates, and male testers had up to five planting dates to achieve coincidence with flowering of studied accessions. Criteria to detect incompatibility alleles To detect alleles from loci ga1 and tcb1 se averages of grain filling in ear were used with both types of markers, recessive male and dominant female. They were done in three stages: Stage 1. Recessive male tester (without incompatibility alleles): when the accession was pollinated with male recessive tester and there was no grain filling and also, the values calculated with Dunnett test were statistically equal to control (0% of grain filling in ear), it was identified the presence of any incompatibility allele (Ga1-S, Tcb1-S). In case of grain formation in ear and when Dunnett test pointed values statistically equal to control, with 100% of grain filling in ear, it was identified the presence of neutral alleles (Ga1-m, Tcb1-m) or recessive (ga1, tcb1), and it continued with stage 2. Stage 2. Crossings to dominant female tester Ga1-S/Ga1-S: once the accessions with presence of alleles Ga1-S or Tcb1-S were excluded, the following step was to take pollen from selected material to dominant female testers. When in test material was observed 100% of grain filling and it was statistically equal to control it was identified the presence of allele Ga1-m. If grain filling was 0% and was statistically equal to control, it was interpreted like accession without incompatibility alleles. Stage 3. Crossings to dominant heterozygous female tester (Tcb1-S/-): without considering the accessions with alleles Ga1-S or Tcb1-S from Stage 1, then if grain filling was 0% and it was statistically equal to control, it was identified the presence of recessive allele tcb1. On the other hand, if grain filling was 100% and it was statistically equal to control, it was identified presence of allele Tcb1-m. Results and discussion In the analysis of variance of grain filling variable, the following results were obtained: in crossings with recessive testers (ga1/ga1, tcb1/tcb1) and dominant female testers (Ga1-S/Ga1-S) there were highly significant differences as well in breeds as in accessions within breeds; while in Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz 531 Etapa 3. Cruzamientos al probador hembra heterocigote dominante (Tcb1-S/-): sin considerar las accesiones con alelos Ga1-S o Tcb1-S de la Etapa 1, entonces si el llenado de grano fue 0% y fue estadísticamente igual al control, se identificó la presencia del alelo recesivo tcb1. En cambio, si el llenado de grano fue 100% y fue estadísticamente igual al control, se identificó la presencia del alelo Tcb1-m. Resultados y discusión En el análisis de variación de la variable llenado de grano, se obtuvieron los resultados siguientes: en las cruzas con los probadores recesivos (ga1/ga1, tcb1/tcb1) y los probadores hembra dominantes (Ga1-S/Ga1-S) hubo diferencias altamente significativas tanto entre razas como entre accesiones dentro de razas; mientras que en las cruzas con el probador hembra Tcb1-S/- las diferencias sólo fueron significativas entre razas (Cuadro 2). Los valores altos del coeficiente de variación para el caso del locus tcb1 son debidos a que los porcentajes de llenado de grano son predominantemente ceros, con pocos casos cercanos a 50% (Cuadro 3). Los coeficientes de determinación fueron superiores a 0.8, valores que son considerados como reflejo de un modelo apropiado. crossings with female tester Tcb1-S/- the differences were only significant between breeds (Table 2). And high values of variation coefficient for case of locus tcb1 are due grain filling percentages are predominantly zero, with little cases near to 50% (Table 3). The determination coefficients were greater than 0.8, values that are considered like result of suitable model. General average of grain filling in maize breeds with recessive male testers ga1/ga1, tcb1/tcb1 and dominant female Ga1-S/Ga1-S was high, at 85 and 72% respectively (Table 3), while crossings with female tester Tcb1-S/- general average was very low (6%). In crossings of maize breeds with female tester Ga1-S/Ga1-S, very little breeds had grain filling in ear averages less than 20%, among them Azul, Bofo (Coreño), Cristalino de Chihuahua, Gordo, Harinoso de Ocho, Jala, Ratón, Tabloncillo, Tuxpeño Norteño and Zamorano Amarillo, while in crossings with female tester Tcb1-S/-, only breeds Elotes Occidentales and Maíz Dulce, had grain filling average greater than 20%. With base in averages of grain filling from Table 3 and Dunnett tests, it was determined the presence of both incompatibility systems (Ga1-S and Tcb1-S) in six maize breeds: Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Cuadro 2. Análisis de varianza de los sistemas de incompatibilidad ga1 y tcb1 en razas mexicanas de maíz con el probador macho recesivo y los probadores hembra dominantes (Ga1-S y Tcb1-S), durante los ciclos 2007 a 2009. Zapopan, Jalisco, México. Table 2. Analysis of variance of incompatibility systems ga1 and tcb1 in maize Mexican breeds with recessive male tester and the dominant female testers (Ga1-S and Tcb1-S), during 2007 to 2009 cycles. Zapopan, Jalisco, Mexico. FV Raza Accesiones(Raza) Error Total CV R2 GL 57 155 419 631 34.18 Locus ga1 Probador hembra (Ga1-S/Ga1-S) GL CM 56 4 241.3 ** 154 508.62 ** 156 180.76 366 16.18 0.9 0.9 Probador macho recesivo CM 12 408.74 1 620.74 268.63 ** ** Locus tcb1 Probador hembra (Tcb1-S/-) GL CM 54 0.5267 ** 67 0.0498 83 0.1018 204 89.35 0.8 FV= fuente de variación; GL= grados de libertad; CM= cuadrado medio; CV= coeficiente de variación; R2= coeficiente de determinación; ** valor altamente significativo de 0.01 de probabilidad. El promedio general de llenado de grano en las razas de maíz con los probadores macho recesivo ga1/ga1, tcb1/ tcb1 y hembra dominante Ga1-S/Ga1-S fueron altos, del Maíz Dulce, Negrito and Reventador (Table 3), and in the remaining breeds there were detected any of the three variants of alleles from locus ga1. José Miguel Padilla García et al. 532 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 orden de 85 y 72% respectivamente (Cuadro 3), mientras que las cruzas con el probador hembra Tcb1-S/- el promedio general fue muy bajo (6%). En las cruzas de las razas de maíz con el probador hembra Ga1-S/Ga1-S, muy pocas razas tuvieron promedios de llenado de grano en mazorca menores que 20%, entre ellas Azul, Bofo (Coreño), Cristalino de Chihuahua, Gordo, Harinoso de Ocho, Jala, Ratón, Tabloncillo, Tuxpeño Norteño y Zamorano Amarillo, mientras que en cruzas con el probador hembra Tcb1-S/-, sólo las razas Elotes Occidentales y Maíz Dulce, tuvieron promedios de llenado de grano mayores que 20%. Con base en los promedios de llenado de grano del Cuadro 3 y las pruebas de Dunnett, se determinó la presencia de ambos sistemas de incompatibilidad (Ga1-S y Tcb1-S) en seis razas de maíz: Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce, Negrito y Reventador (Cuadro 3), y en el resto de las razas se detectaron cualquiera de las tres variantes de los alelos del locus ga1. The proportional presence of allele Ga1-S, responsible of non-reciprocal incompatibility, was 53.8% of 184 accessions assessed from 54 breeds; in neutral allele Ga1-m, compatible with any genotype of locus ga1; 55.43% of accessions, and 15.76% with the allele ga1 (Table 4). Only two breeds from all accessions, Elotes Occidentales and Maíz Dulce, contain the dominant allele in homozygous state (Ga1-S), together with other five breeds from at least one of their accessions Bofo, Chapalote, Dulcillo del Noroeste, Palomero de Chihuahua and Reventador. In eight breeds, all accessions were recessive homozygous (without incompatibility alleles) and they were: Azul, Bofo (Coreño), Cristalino de Chihuahua, Gordo, Ratón, Tabloncillo, Tuxpeño Norteño and Zamorano Amarillo; also in other breeds were recessive homozygous in at least one of their accessions Jala, Palomero de Chihuahua and Reventador (Table 3). De la Cruz (2007) reported in 71 accessions that 48% were Ga1-m/Ga1-m; 18% recessive and only 21% with allele Ga1-S, also in heterozygous state Ga1-m/ga1 with 13% versus 6.52% from this study (Table 4). Cíntora (1963), from 229 Cuadro 3. Presencia de alelos de incompatibilidad de los loci ga1 y tcb1 en las razas mexicanas evaluadas (en porcentajes del llenado de grano en mazorca). Table 3. Presence of incompatibility alleles from loci ga1 and tcb1 in assessed Mexican breeds (in percentages of grain filling in ear). Probador macho Probador Probador recesivo hembra Ga1-S hembra Tcb1-S/100 56 0 Ancho 83.3 26.7 0 Apachito Arrocillo Amarillo 100 75 0 Azul 89.4 0 0 62.5 2.5 Bofo (Coreño) 76.5 92.3 0 Bofo Bolita 59.8 95.6 16.4 Cacahuacintle 100 91 Celaya 98.5 67.5 0 Chalqueño 87.2 100 2.5 Chapalote 39.2 97.3 0 100 94 0 Comiteco 84 93.3 Complejo Serrano Jalisco 100 100 Conejo Cónico 96.1 90.4 0 90 100 0 Cónico Norteño 93.3 100 0 Coscomatepec Cristalino Chihuahua 85.8 0 0 31 94.3 16 Dulcillo del Noroeste Dzit Bacal 100 83.3 0 Elotero de Sinaloa 73.4 83.3 0 Elotes Cónicos 68.1 100 0 Elotes Occidentales 15.6 98.7 28.9 100 0 0 Gordo Harinoso de Ocho 86.7 18 0 Raza ne= no evaluado. Alelos detectados locus ga1 locus tcb1 Ga1-m Ga1-m, ga1 Ga1-m ga1 ga1 Ga1-m, Ga1-S Ga1-m, Ga1-S Ga1-m Ga1-m, ga1 Ga1-m Ga1-S, Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m ga1 Ga1-S, Ga1-m Ga1-m Ga1-m, Ga1-S Ga1-m Ga1-S, Ga1-m ga1 ga1, Ga1-m tcb1 tcb1 tcb1 tcb1 n.e. tcb1 Tcb1-S, tcb1 n.e. tcb1 tcb1 tcb1 tcb1 ne ne tcb1 tcb1 tcb1 tcb1 Tcb1-S, tcb1 tcb1 tcb1 tcb1 Tcb1-S, tcb1 tcb1 tcb1 Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz 533 Cuadro 3. Presencia de alelos de incompatibilidad de los loci ga1 y tcb1 en las razas mexicanas evaluadas (en porcentajes del llenado de grano en mazorca) (Continuación). Table 3. Presence of incompatibility alleles from loci ga1 and tcb1 in assessed Mexican breeds (in percentages of grain filling in ear) (Continuation). Raza Jala Maíz Blando de Sonora Maíz Dulce Motozinteco Mountain Yellow Mushito (Michoacan) Nal Tel Nal Tel de Altura Negrito Negro Chimaltenango Olotillo Olotón Onaveño Palomero de Chihuahua Palomero Toluqueño Pepitilla Ratón Reventador Tablilla de Ocho Tabloncillo Tabloncillo Perla Tehua Tepecintle Tuxpeño Tuxpeño Norteño Vandeño Zamorano Amarillo Zapalote Chico Zapalote Grande Promedios ne= no evaluado. Probador Probador Probador hembra macho recesivo hembra Ga1-S Tcb1-S/95.3 16.7 0 97 56.7 0 2.4 98.7 98.2 97.8 100 95.8 84.7 100 90.5 96.7 100 0 100 100 0 59.8 97.9 71 100 90 0 86.7 100 0 100 83.3 0 100 80 42.5 75.5 0 97.9 98.7 0 97.2 100 0 100 10 0 68.7 84.8 34.2 91.1 100 0 98.3 5 0 96.7 30 0 100 100 92.1 100 0 95.6 41.1 0 92.6 10 0 100 74 96.3 0 0 93.3 97.5 0 100 100 0 85.45 71.93 6.07 La presencia proporcional del alelo Ga1-S, responsable de la incompatibilidad no-recíproca, fue 53.8% de las 184 accesiones evaluadas de las 54 razas; en el alelo neutro Ga1-m, compatible con cualquier genotipo del locus ga1; 55.43% de las accesiones, y 15.76% con el alelo ga1 (Cuadro 4). Sólo dos razas en casi la totalidad de sus accesiones, Elotes Occidentales y Maíz Dulce, contienen el alelo dominante en estado homocigoto (Ga1-S), junto con otras cinco razas en al menos una de sus accesiones Bofo, Chapalote, Dulcillo del Noroeste, Palomero de Chihuahua y Reventador. En ocho razas, todas las accesiones fueron homocigotas recesivas (sin alelos de incompatibilidad) y fueron: Azul, Bofo (Coreño), Cristalino de Chihuahua, Gordo, Ratón, Tabloncillo, Alelos detectados locus ga1 ga1, Ga1-m Ga1-m, ga1 Ga1-S Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m, Ga1-S Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-S, Ga1-m, ga1 Ga1-m Ga1-m ga1 Ga1-m, Ga1-S, ga1 Ga1-m ga1 ga1, Ga1-m Ga1-m Ga1-m Ga1-m, ga1 ga1 Ga1-m, ga1 ga1 Ga1-m Ga1-m locus tcb1 tcb1 tcb1 Tcb1-S ne ne ne tcb1 tcb1 Tcb1-S tcb1 tcb1 tcb1 n.e. tcb1 tcb1 tcb1 tcb1 Tcb1-S, tcb1 tcb1 tcb1 tcb1 ne tcb1 tcb1 tcb1 ne tcb1 tcb1 tcb1 studied accessions, informed that detected 74% for Ga (probably Ga1-m/Ga1-m); 17% ga1/ga1 recessive and only 3% for Ga1-S/Ga1-S. The results obtained in this research show that in maize Mexican breeds there is high presence of neutral allele Ga1-m, which breaks reproductive isolation from those populations of homozygous maize for allele Ga1-S. Dominant allele Tcb1-S from locus tcb1 was present in breeds Elotes Occidentales and Maíz Dulce; as well in some accessions of breeds: Bolita, Dulcillo del Noroeste, Negrito and Reventador. The remaining breeds showed percentages lower than 3% of grain filling ear for recessive homozygous allele tcb1 (Table 3). José Miguel Padilla García et al. 534 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Tuxpeño Norteño y Zamorano Amarillo; además en otras tres razas fueron homocigotas recesivas en al menos una de sus accesiones Jala, Palomero de Chihuahua y Reventador (Cuadro 3). De la Cruz (2007) reportó en 71 accesiones que 48% fueron Ga1-m/Ga1-m; 18% recesivas y sólo 21% con el alelo Ga1-S, además en estado heterocigoto Ga1-m/ga1 con 13% contra 6.52% del presente estudio (Cuadro 4). Cíntora (1963) de 229 accesiones estudiadas, informó que 74% para Ga (probablemente Ga1-m/Ga1-m); 17% recesivas ga1/ga1 y sólo 3% para Ga1-S/Ga1-S. Los resultados obtenidos en esta investigación muestran que en las razas Mexicanas de maíz existe una alta presencia del alelo neutro Ga1-m, el cual rompe el aislamiento reproductivo de aquellas poblaciones de maíz homocigotas para el alelo Ga1-S. El alelo dominante Tcb1-S del locus tcb1 estuvo presente en las razas Elotes Occidentales y Maíz Dulce; así como en algunas accesiones de las razas: Bolita, Dulcillo del Noroeste, Negrito y Reventador. El resto de las razas presentó porcentajes menores a 3% de llenado de grano en mazorca para el alelo homocigoto recesivo tcb1 (Cuadro 3). En estudios anteriores Kermicle y Allen (1990), Kermicle (2006), Evans y Kermicle (2001) y Kermicle y Evans (2005) informaron la presencia de factores genéticos que limitaban el cruzamiento del maíz con el teocintle y lo denominaron Complejo de Incompatibilidad del Teocintle (TIC), responsable de la incompatibilidad no-recíproca. Asimismo, indicaron que TIC es único en teocintle y “podría estar jugando un papel muy importante en el aislamiento reproductivo entre el maíz y el teocintle”. Con base en el muestreo amplio de accesiones de maíz de todo México y la utilización de probadores apropiados, el sistema de incompatibilidad TIC se encontró en las razas de maíz: Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce, Negrito y Reventador. Las bases bioquímicas y genéticas para los sistemas de incompatibilidad en el género Zea son aún muy poco conocidas; no hay claridad si son genes individuales, o grupos de genes estrechamente ligados, e incluso existe la idea de que la fecundidad del grano de polen se ve afectada por genes expresados por ambos sistemas, tanto esporofítico como gametofítico (Bedinger y Fowler, 2009). Evans y Kermicle (2001) y Kermicle y Evans (2005) reportan que los genes de incompatibilidad conocidos en maíz y teocintle actúan independientemente y que la sola existencia de un alelo incompatible es suficiente para bloquear la fertilización, lo cual concuerda con este estudio, en que se las accesiones de maíz reaccionaron Cuadro 4. Alelos detectados del locus ga1 y su representatividad proporcional del total de accesiones de las razas de maíz evaluadas. Table 4. Alleles detected from locus ga1 and its proportional portion from total accessions of assessed maize breeds. Combinación Accesiones de alelo(s) ga1 Ga1-m, ga1 Ga1-m Ga1-m, Ga1-S Ga1-S, ga1 Ga1-S Totales 13 12 60 30 4 65 184 Porcentajes en las accesiones 7.07 6.52 32.61 16.31 2.17 35.33 100% Presencia proporcional de alelos (%)1/ 15.76 ga1 55.44 Ga1-m 53.81 Ga1-S 125 % = suma total del alelo individual y combinado por accesiones. 1/ In previous studies Kermicle and Allen (1990), Kermicle (2006), Evans and Kermicle (2001) and Kermicle and Evans (2005) informed the presence of genetic factors that limit maize crossing with teosinte and it was called Teosinte Incompatibility Complex (TIC), responsible of non-reciprocal incompatibility. Also, indicated that TIC is only in teosinte and “could be playing an important role in reproductive isolation between maize and teosinte”. Based in wide sampling of maize accessions from Mexico and usage of suitable testers, TIC incompatibility system was found in maize breeds: Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce, Negrito and Reventador. Biochemical and genetic bases for incompatibility systems in genera Zea are still little known; there is no certainty if are individual genes or grouped genes tightly related, and even there is the idea that pollen grain fecundity is affected by genes expressed by both systems, as well sporophytic as gameotphytic (Bedinger and Fowler, 2009). Evans and Kermicle (2001) and Kermicle and Evans (2005) report that the known incompatibility genes in maize and teosinte act independently and that the simple presence of one incompatible allele is enough for blocking fertilization, which coincides with this study, in which maize accessions reacted to recognition or rejection of pollen grain, such reaction depends on genotype studied and from recessive male tester alleles (ga1/ga1, tcb1/tcb1). Kermicle et al. (2006) pointed out that incompatibility gametophytic Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz al reconocimiento o rechazo del grano de polen, este reacción depende del genotipo en estudio y del los alelos del probador macho recesivo (ga1/ga1, tcb1/tcb1). Kermicle et al. (2006) señalaron que los factores gametofíticos de la incompatibilidad, además de ser agentes de aislamiento reproductivo, previenen la formación de híbridos mal adaptados y, además, mantienen la identidad de las razas, específicamente las razas Elotes Occidentales y Maíz Dulce de este estudio. Kermicle (2006) señaló que la presencia del gene Tcb1-S, con potencial de dispersión y fijación, podría añadir diversidad genética en las poblaciones de maíces locales, que concuerdan con los resultados del estudio reflejada en la variación existente entre razas como entre accesiones dentro de razas. Los sistemas de incompatibilidad presentan un patrón definido dentro de los complejos raciales del maíz, especialmente en las razas Elotes Occidentales y Maíz Dulce (Figura 1); el origen de este sistema de incompatibilidad pudiera ser diferente al complejo de incompatibilidad del teocintle (TIC); sin embargo, se requerirán pruebas de alelismo detalladas y ubicación y secuencia de las regiones del genoma involucradas con dicho sistema a fin de considerarlo como de novo. Las razas mexicanas que presentaron en la misma accesión los alelos Tcb1-S como Ga1-S fueron: Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce y Reventador. Kermicle et al. (2006) señalaron que es posible que el alelo Ga1-S, responsable de la incompatibilidad no-recíproca, sea en si un modificador para el fortalecimiento de otros sistemas de barrera de incompatibilidad como el locus tcb1 de manera independiente o de forma interactiva, faltan estudios adicionales para sustentar si el alelo Ga1-S per se, un alelo modificador del alelo Tcb1-S, ya que los probadores de ambos locus del presente estudio fueron trabajados en forma separada y se obtuvo respuestas individuales por locus probado. 535 factors, besides being reproductive isolation agents, prevent formation of hybrids with miss-adaptation and, also, keep breeds identity, specifically Elotes Occidentales and Maíz Dulce breeds from this study. Kermicle (2006) also mentioned that presence of gene Tcb1-S, with potential for dispersion and fixing, could add genetic diversity in local maize populations, which coincides with study results reflected in existing variation between breeds as well between accessions within breeds. Incompatibility systems have a defined pattern within maize breed complexes, specially in breeds Elotes Occidentales and Maíz Dulce (Figure 1); the origin of this incompatibility system could be different to the origin of teosinte incompatibility complex (TIC); however, detailed allelic tests will be required and location and sequence from genome regions involved in such system in order to consider it de novo. Conclusiones Figura 1. Distribución geográf ica de los alelos de incompatibilidad Ga1-S (●), TIC/-(●), TIC en Elotes Occidentales (■), TIC en Maíz Dulce (■) y de las accesiones sin alelos de incompatibilidad (●) en México. Figure 1. Geographical distribution of incompatibility alleles Ga1-S (●), TIC/- (●), TIC in Elotes Occidentales (■), TIC in Maíz Dulce (■) and from accessions without incompatibility alleles (●) in Mexico. Los genes responsables de la incompatibilidad no recíproca Ga1-S y Tcb1-S fueron encontrados en seis de las razas mexicanas de maíz evaluadas con ambos sistemas de incompatibilidad en al menos una accesión de maíz (Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce, Negrito y Reventador), pero debido a la presencia en altas Mexican breeds that showed in same accession the alleles Tcb1-S as well as Ga1-S were: Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce and Reventador. Kermicle et al. (2006) mentioned that is possible that allele Ga1-S, responsible of non-reciprocal incompatibility, is in itself a modifier for strengthening of other systems for José Miguel Padilla García et al. 536 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 proporciones del alelo neutro Ga1-m, las barreras existentes en las razas de maíz y del teocintle basadas únicamente en el alelo Ga1-S pueden no ser suficientes para evitar el flujo genético no deseado. Se identificaron 16 accesiones de maíz de las razas Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce, Negrito y Reventador, con frecuencias altas del alelo Tcb1-S; las cuales se localizan especialmente en el Occidente de México; resultados que demuestran que el sistema TIC no está presente sólo en el teocintle de México. Literatura citada Bedinger, P. A. and Fowler, J. E. 2009. The maize male gametophyte. In: handbook of maize: its biology. Bennetzen, J. and Hake, S. (eds.). Springer. 57-75 pp. Castric, V. and Vekemans, X. 2004. Plant self-incompatibility in natural populations: a critical assessment of recent theoretical and empirical advances. Mol. Ecol. 13:2873-2889. Cíntora, O. C. 1963. Incompatibilidad no-recíproca en algunas colecciones mexicanas de maíz. Tesis de Maestría en Ciencias. Facultad del Colegio de Graduados de la E. N. A. Chapingo, Estado de México. 39 p. Cruz-García F.; Hancock, C. N. and McClure, B. 2003. S-RNase complexes and pollen rejection. J. Exp. Bot. 54:123-130. De la Cruz, L. L. 2007. Sistemas de incompatibilidad genética en maíz y teocintle (Zea spp.) en México. Tesis de Doctorado. Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias. Universidad de Guadalajara. México. 81 p. De la Cruz, L. L.; Sánchez, G. J. J.; Rodríguez, G. E.; Ron, P. J. y Santacruz, R. F. 2007. El factor gametofítico-1 (ga1) en Teocintle (Zea spp.) en México. ScientiaCucba 9:129-141. De la Cruz, L. L.; Sánchez, G. J. J.; Ron, P. J.; Santacruz, R. F.; Baltazar, M. B.; Ruíz, C. J. A. y Morales, R. M. M. 2008a. El factor gametofítico-1 (ga1) en híbridos comerciales de maíz en México. Rev. Fitotec. Mex. 31:57-65. De la Cruz, L. L.; Sánchez, G. J. J.; Ron, P. J.; Santacruz, R. F.; Rodríguez, G. E.; Ruíz, C. J. A. y Morales, R. M. M. 2008b. Probadores de maíz para factores de incompatibilidad gametofítica. Rev. Fitotec. Mex. 31:341-349. incompatibility barrier like locus tcb1 in an independent or interactive way. There are missing additional studies to prove if allele Ga1-S per se, a modifier allele for Tcb1-S, since testers of both loci from this study were developed apart one from each other and individual responses per assessed locus were obtained. Conclusions Genes responsible of non reciprocal incompatibility Ga1-S and Tcb1-S were found in six maize Mexican breeds assessed with both incompatibility systems in at least one maize accession (Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce, Negrito and Reventador), but due presence in high rates of neutral allele Ga1-m, the existing barriers in maize breeds and in teosinte based only in allele Ga1-S could not be enough to avoid unwanted genetic flow. 16 maize accessions from breeds Bolita, Dulcillo del Noroeste, Elotes Occidentales, Maíz Dulce, Negrito and Reventador were identified, with high frequencies of allele Tcb1-S; which in particular are located in Western Mexico; the results show that TIC system is not only present in teosinte from Mexico. End of the English version Evans, M. M. S. and Kermicle, J. L. 2001. Teosinte crossing barrier-1, a locus governing hybridization of teosinte with maize. Theor Appl. Genet. 103:259-265. Glémin, S.; Gaude, T.; Guillemin, M. L.; Lourmas, M.; Olivieri, I. and Mignot, A. 2005. Balancing selection in the wild: testing population genetics theory of self-incompatibility in the rare species Brassica insularis. Genetics 171:279-289. Kermicle, J. L. and Allen, J. O. 1990. Cross-incompatibility between maize and teosinte. Maydica 35:399- 408. Kermicle, J. L. and Evans, M. M. S. 2005. Pollen-pistil barriers to crossing in maize and teosinte result from incongruity rather than active rejection. Sex Plant Reprod 18:187-194. Kermicle, J. L. 2006. A selfish gene governing pollenpistil compatibility confers reproductive isolation between maize relatives. Genetics 172:499-506. Incompatibilidad gametofítica en las razas mexicanas de maíz Kermicle, J. L.; Taba, S. and Evans, M. M. S. 2006. The gametophyte-1 locus and reproductive isolation among Zea mays subspecies. Maydica 51:219-226. Kermicle, J. L. and Evans, M. M. S. 2010. The Zea mays sexual compatibility gene ga2: naturally occurring alleles, their distribution, and role in reproductive isolation. J. Heredity 101:1-13. Matsuoka, Y.; Vigourous, Y.; Goodman, M. M.; Sánchez, G. J.; Buckler, E. S. and Doebley, J. F. 2002. A single domestication for maize shown by multilocus microsatellite genotyping. Proceedings of the National Academy of Sciences 99:6080-6084. Matsubara, K.; Thidar, K. and Sano, Y. 2003. A gene block causing cross-incompatibility hidden in wild and cultivated rice. Genetics 165:343-352. Nelson, O. E. 1996. The gametophyte factors of maize. In: the maize handbook. Freeling, M. and Walbot, M. (Eds.). Springer-Verlag. New York/Berlín. 496-453 pp. Palaudelmàs, M.; Peñas, G.; Melé, E.; Serra, J.; Salvia, J.; Pla, M.; Nadal, A. and Messeguer, J. 2009. Effect of volunteers on maize gene flow. Transgenic Research 18:583-94. Pickup, M. and Young, A. G. 2008. Population size, selfincompatibility and genetic rescue in diploid and tetraploid races of Rutidosis leptorrhynchoides (Asteraceae). Heredity 100:268-274. 537 Rice, E. B.; Smith, M. E.; Mitchell, S. E. and Kresovich, S. 2006. Conservation and change: a comparison of In situ and ex situ conservation of Jala maize germplasm. Crop Sci. 46:428-436. Rodríguez, F. J. G.; Sánchez, G. J. J.; Baltazar, B. M.; De la Cruz, L. L.; Santacruz, R. F.; Ron, P. J.; Schoper, J. B. 2006. Characterization of floral morphology and synchrony among Zea species in Mexico. Maydica 51:383-398. Ruiz, C. J. A.; Durán, P. N.; Sánchez, G. J. J.; Ron, P. J.; González, E. D. R.; Holland, J. B. and Medina, G. G. 2008. Climatic adaptation and ecological descriptors of 42 Mexican maize races. Crop Sci 48:1502-1512. Sánchez, G. J. J.; Goodman, M. M. and Rawlings, J. O. 1993. Appropriate characters for racial classification in maize. Econ. Bot. 47:44-59. Sánchez, G. J. J.; Goodman, M. M. and Stuber, C. W. 2000. Isozymatic and morphological diversity in the races of maize of Mexico. Econ. Bot. 54:43-59. Statistical Analysis System (SAS Institute Inc). 1992. SAS/ STAT software: changes and enhancements. SAS Institute Inc., Cary, N. C: SAS Institute Inc. Wellhausen, E. J.; Roberts, L. M.; Hernández, X. E. and Mangelsdorf, P. C. 1952. Races of maize in Mexico: their origin, characteristics and distribution. The Bussey Institution of Harvard University. 223 p. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 539-551 El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo* CaCl2 in gerbera vase life: pigments, phenols, lignin and scape anatomy Susana González-Aguilar1 y Araceli Zavaleta-Mancera2§ Facultad de Ciencias, Universidad Autónoma del Estado de México. Instituto Literario Núm. 1000 Toluca, C. P. 5000. Estado de México, México. 2Colegio de Postgraduados, Botánica. Carretera México-Texcoco, Montecillo, km 36.5. C. P. 56230. Estado de México, México. §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract Gerbera jamesonii presenta una vida f lorero corta caracterizada por el doblado del tallo floral (escapo). Con el objetivo de alargar la vida florero de gerbera se probaron tres concentraciones de CaCl2 (0.1, 0.5 y 1.0%) en las variedades Duela y Shirlaine. Las concentraciones 0.5% y 1.0% redujeron la pérdida de peso de la flor entera y lígulas en comparación con el testigo. La concentración 0.5% fue el mejor tratamiento, aumentó la vida media florero (25 d Duela y 24 d Shirlaine). Los tallos florales tratados con CaCl2 acumularon más Ca+2 en el ápice (25.33 μg g-1 Duela y 64.0 μg g-1 Shirlaine), permaneciendo erectos por más tiempo que el testigo (9.67 μg g-1 Duela y 13.67 μg g-1 Shirlaine). Con la concentración 0.5% se hizo un segundo experimento para evaluar los cambios en concentración de carotenos, antocianinas (pelargonidina, cianidina) y fenoles totales de las lígulas. Las antocianinas de Shirlaine, no cambiaron entre tratamientos. Los fenoles aumentaron 21% en Shirlaine y 40% en Duela con respecto a su concentración inicial, en contraste los carotenos disminuyeron al fin de la vida florero 60% y 35%. En Duela el tejido interfascicular es más lignificado que en Shirlaine confiriéndole mayor resistencia. El área relativa (%) lignificada de la región media del escapo fue mayor en Duela (7%) que en Shirlaine (4%). La mayor Gerbera jamesonii has short vase life characterized by bending of floral stem (scape). With the purpose to extend gerbera vase life, three different CaCl2 concentrations (0.1, 0.5 and 1.0%) were tested in Duela and Shirlaine varieties. Weight loss of whole flower and ligules was less than in control with 0.5% and 1.0%concentrations. Whole flower and ligules weight was reduced with 0.5% and 1.0% concentrations when compared to control. 0.5% concentration was best treatment; it increased average vase life (25 d for Duela and 24 d for Shirlaine). Floral stems treated with built up CaCl2 more Ca+2 in apex (25.33 μg g-1 for Duela and 64.0 μg g-1 for Shirlaine), lasting erect longer than control (9.67 μg g-1 for Duela and 13.67 μg g-1 for Shirlaine). With 0.5% concentration a second experiment was performed to assess total carotenes, anthocyanins (pelargonidin, cyanidin) and phenols concentration changes in ligules. Shirlaine’s anthocyanins did not change in treatments. Phenols increased 21% in Shirlaine and 40% in Duela with regards their initial concentration, in contrast carotenes decreased 60% and 35% at the end of vase life, respectively. Interfascicular tissue is more lignified in cv Duela than in cv Shirlaine, giving it more resistance. The lignified relative area (%) on scape’s medium region * Recibido: agosto de 2011 Aceptado: enero de 2012 Susana González-Aguilar y Araceli Zavaleta-Mancera 540 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 resistencia del tallo de Duela es explicada por su anatomía y lignificación pero el CaCl2 fue efectivo para retrasar la senescencia y el doblado del escapo en las dos variedades. Palabras clave: calcio, gerbera, senescencia, solución preservativa. Introducción En poscosecha la vida útil de las flores varía dependiendo de la especie y caracteres de senescencia que presente. La vida de florero de la mayoría de las flores cortadas es regulada por el etileno. Cuando las flores entran a su etapa de senescencia, la mayoría de los pétalos adquieren una apariencia traslúcida, seguido de la pérdida de turgencia y después una ligera desecación (Van Doorn, 2001). En gerbera (Germena jamesonii H. Bolus ex Hook. F., la senescencia se relaciona con la maduración de las flores de la cabezuela, el fin de la vida útil en florero es caracterizado por el doblado del escapo, deshidratación de las flores liguladas y pérdida de 10% del peso fresco (Baas et al., 1995). La curvatura del escapo entre 45 y 90° de su plano vertical, es el principal indicador del fin de la vida útil en florero y según algunos autores(as) está asociado a la calidad de las inflorescencias (Mentcarelli et al., 1995). La finalidad de las soluciones preservativas es incrementar la vida útil de las flores; la mayoría de éstas contienen sustratos, bactericidas y antimicóticos (Wounter et al., 1994). En los pétalos el contenido de azúcar disminuye durante la vida florero, causando marchitamiento (Amariutei et al., 1986). En clavel el azúcar en la solución preservativa disminuye los efectos de la senescencia (Acock y Nichols, 1979). El calcio es un nutrimento esencial, ya que reduce o retrasa el deterioro de la pared celular, ayuda a mantener las funciones de la membrana, en el citosol actúa como segundo mensajero para eventos metabólicos y es componente esencial de la pared celular y lámina media confiriéndole firmeza y rigidez mecánica (Conway et al., 1995; Serrano, 2002). El uso de calcio en soluciones florero aumenta el flujo de agua a través de los tallos por la asociación con la pectina de las paredes celulares del xilema (Van Leperen y Van Gelder, 2006). El Ca2+ afecta la calidad y vida de florero en tulipán (Tulipa gesneriana L.); mostrado mejor respuesta de crecimiento y calidad poscosecha, cuando la relación K+/Ca es la óptima en la solución nutritiva (Ramírez-Martínez et al., 2010). Con el objeto de contribuir a la solución del problema del doblado del escapo en poscosecha de esta especie de importancia was greater in Duela (7%) than in Shirlaine (4%). Greater stem resistance in Duela is explained by its anatomy and lignification, but in both varieties CaCl2 was effective to delay senescence and scape’s bent. Key words: calcium, gerbera, senescence, preserving solution. Introduction In postharvest, flowers’ service life varies depending on species and their senescence characters. Vase life for most of cut flowers is ruled by ethylene. Most of petals acquire translucent appearance, followed by loss of turgidity and then slight desiccation (Van Doorn, 2001) when flowers reach senescence stage. In gerbera (Gerbera jamesonii H. Bolus ex Hook. F.) senescence is related to maturity of head’s flowers, the end of vase life is characterized by scape bent, ligulated flowers dehydration and loss of 10% of fresh weight (Baas et al., 1995). The main indication about end of service life in vase is scape bent, which varies between 45 and 90° from vertical plane, and according to some authors, is related to inflorescence’s quality (Mentcarelli et al., 1995). The aim of preserving solutions is to increase flower’s vase life; most of them contain substrates, bactericides and antimycotics (Wounter et al., 1994). In petals, sugar content decreases during vase life, causing wilting (Amariutei et al., 1986). Sugar in preserving solution diminishes senescence effects in carnation (Acock and Nichols, 1979). Calcium is an essential nutriment, since reduces or delays cell wall decay, helps to keep membrane functions, and cytosol becomes secondary carrier for metabolic events and is an essential component in cell wall and middle lamella giving mechanical stiffness and rigidity (Conway et al., 1995; Serrano, 2002). The use of calcium in vase solutions increases water flow through stems by association with pectin from xylem’s cell walls (Van Leperen y Van Gelder, 2006). Ca2+ affects tulip (Tulipa gesneriana L.) vase life and quality; when K+/Ca relationship is optimum in nutrimental solution, it shows better growth response and postharvest quality (Ramírez-Martínez et al., 2010). With the aim to help on this economically important species scape bent problem in postharvest, this research was proposed to study CaCl2 addition to vase solution effect in flower service life, scape bent, changes in pigments El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo 541 económica, se planteo la presente investigación en la que se estudia el efecto de CaCl2 agregado a la solución florero, en la vida útil de la flor, doblado del escapo, cambios en pigmentos (antocianinas, cianidinas y carotenos) y fenoles en las lígulas de dos variedades (Shirlaine y Duela) así como su relación con la anatomía del tallo. (anthocyanins, cyanidins and carotenes) and phenols in ligules of two varieties (Shirlaine and Duela) as well as its relationship with stem anatomy. Materiales y métodos Biological material Material biológico Se usaron las variedades Duela (de color amarillo) y Shirlaine (de color púrpura) de gerbera provenientes de la empresa COXFLOR del municipio de Villa Guerrero, Estado de México. Todas la flores se cortaron el mismo día, cuando el capítulo mostró dos anillos de flores masculinas en antesis. Las flores se colocaron en agua y no recibieron ningún tratamiento químico por parte de la empresa. Experimento 1 El objetivo de este experimento fue comparar el efecto de tres concentraciones de CaCl2 (0.1, 0.5 y 1%) con el testigo (solución base sin CaCl2) en la vida media florero, pérdida de peso fresco de la inflorescencia, anillos del disco central y pérdida de peso fresco del capítulo, lígulas y escapo para seleccionar la mejor solución preservativa. Se usaron 10 inflorescencias para las variables de peso y 15 para la medición de calcio. Experimento 2 Una vez seleccionado el mejor tratamiento de CaCl2 (0.5%) el objetivo de este experimento fue comparar los cambios en pigmentos (antocianinas, cianidinas, carotenos y xantofilas) y fenoles entre tratamientos y en el tiempo (0, 10, 20, 30 d), se usaron tres repeticiones (flores) por tratamiento. Además se evaluó la incidencia (%) de los síntomas al final de su vida útil, en 20 flores por variedad. Soluciones florero y tratamientos Se probaron tres concentraciones de CaCl2 (0.1, 0.5 y 1.0%) como fuente de Ca2+ en una solución florero base (0.1% de sacarosa en agua deionizada). El testigo fue la solución base sin calcio. De cada variedad se usaron 20 flores por tratamiento. Cada inflorescencia se colocó en un florero Materials and methods Gerbera’s Duela (from yellow color) and Shirlaine (from purple color) varieties were used. They came from company COXFLOR of municipality Villa Guerrero, Estado de Mexico. All flowers were cut the same day, when capitulum showed two rings of masculine flowers in anthesis. The flowers were put in water and they receive no chemical treatment at all in the company. Experiment 1 The aim of this experiment was to prove effect on average vase life, inflorescence fresh weight loss, central disc rings and capitulum, ligules and scape fresh weight loss for three different CaCl2 concentrations (0.1, 0.5 and 1%) against control (basic solution without CaCl2) to select best preserving solution. 10 inflorescences were used for weight variables and 15 for calcium measurement. Experiment 2 Once best CaCl2 treatment was selected (0.5%) the aim of this experiment was to compare changes in pigments (anthocyanins, cyanidins, carotenes and xanthophylls) and phenols between treatments and Turing time (0, 10, 20, 30 d), three repetitions (flowers) per treatment were used. Also, symptoms incidence (%) was evaluated at the end of service life, in 20 flowers by variety. Vase solutions and treatments Three CaCl2 concentrations were tested (0.1, 0.5 and 1%) like Ca2+ source basic vase solution (0.1% of sacarose in deionized water). Control was basic solution without calcium. From each variety 20 flowers per treatment were used. Each inflorescence was put in an individual 20 cm tall glass vase with 100mL of solution. They were put under indirect light (300 µmol m-2 s-1 PAR), with photoperiod of 14 h light (19-22 °C) and 10 h of dark (14-16 °C). Susana González-Aguilar y Araceli Zavaleta-Mancera 542 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 individual de vidrio de 20 cm de altura con 100 mL de la solución. Se colocaron bajo luz indirecta (300 µmol m-2 s-1 PAR), con un fotoperiodo de 14 h luz (19-22 °C) y 10 h oscuridad (14-16 °C). Vida media florero En el presente estudio se propone el concepto de “vida media florero” el cual corresponde a la fecha en d cuando 50% de las flores en el florero o en el experimento presentaron al menos uno de los siguientes síntomas de senescencia: marchitamiento de lígulas; doblado del escapo >90º; ahorcamiento del tallo caracterizado por adelgazamiento debajo de la cabezuela, pudrición en la base del escapo; ruptura del escapo. Este concepto da una idea objetiva de la vida media de la flor. La incidencia de estos síntomas (%) en cada variedad, se comparo entre el mejor tratamiento CaCl2 (0.5%) y el testigo (n= 20). Pérdida de peso fresco Las inflorescencias se etiquetaron individualmente. Cada 5 d se midieron los cambios en peso fresco de la flor entera (peso inicial-peso final) (n= 10) y también se pesó el escapo, la cabezuela y 20 lígulas para estimar los cambios en peso fresco de las partes (n= 3). Asimismo, se contaron el número de anillos de flores masculinas en antesis como un indicador de senescencia. Calcio en el escapo La concentración de Ca2+ se midió en tallos sin tratamiento (al corte) y en los tratamientos CaCl2 (0.1%, 0.5%, 1%) y testigo al final de su vida útil (n= 15). Los escapos se dividieron en dos regiones (basal y apical) y de cada región se obtuvieron 0.2 g de tejido seco el cual se trituró y se procesó en 5 mL de ácido nítrico (HNO3) concentrado en microondas por periodos de 10 min a 75% de potencia y 5 min al 100%. Las muestras frías se filtraron por una membrana de 0.45 µm de poro, y se aforaron con agua de-ionizada. Las muestras se leyeron mediante espectrometría de emisión óptica de inducción por plasma acoplado (ICP-OES) en un espectrofotómetro 400 ‘Perkin Elmer’ el cual se calibró con un estándar de calcio. Antocianinas, carotenos y xantofilas en lígulas Los cambios en la concentración de fenoles, antocianinas, carotenos y xantofilas se midieron a los 0, 10, 20, 30 d en el testigo y el tratamiento con CaCl2 (0.5%). Las antocianinas Average vase life In this study “average vase life” term is proposed, and corresponds to date in days when 50% of flowers in vase or in experiment showed at least one of the following senescence symptoms: ligules wilting, scape bent > 90º; stem hanging characterized by slimming below head, rot at scape’s base; scape rupture. This concept means an objective measure about flower average life. Symptoms incidence (%) in each variety, was compared between best CaCl2 treatment (0.5%) and (n= 20). Fresh weight loss Inflorescences were individually labeled. Changes in fresh weight of whole flower (initial weight-final weight) (n= 10) were measured each 5 d and also, in order to estimate changes in fresh weight of parts (n= 3); scape, head and 20 ligules were weighted. Also, as senescence indicator, amount of rings from male flowers in anthesis were counted. Calcium in the scape Ca 2+ concentration was measured in stems without treatment (at moment of cut) and in CaCl2 treatments (0.1%, 0.5%, 1%) and control at the end of service life (n= 15). Scapes were divided in two regions (basal and apical) and from each region 0.2 g of dry tissue were obtained, which were crushed and processed in 5mL of nitric acid concentrated in microwave by 10 min periods at 75% of power and by 5 min at 100% of power. By means of induction coupled plasma optic emission spectrometry (ICP-OES) in a 400 ‘Perkin Elmer’ spectrophotometer, which was calibrated with a calcium standard, samples were analyzed. Anthocyanins, carotenes and xanthophylls in ligules Changes in phenols, anthocyanins, carotenes and xanthophylls concentration were measured at 0, 10, 20, 30 d in control and treatment with CaCl2 (0.5%). The anthocyanins were measured by Wrolstad colorimetry technique (1976), method called anthocyanins differential of pH. Three inflorescences were used per treatment, from each head six ligules were taken; three ligules were macerated in KCl-HCl buffer (pH 1, 50 mL of KCl 0.2 M and 97 mL de HCl 0.2 M diluted in 200 mL) and other three in acetate buffer (pH 4.5, 30.5 mL of acetic acid 0.2 El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo se cuantificaron mediante la técnica colorimétrica de Wrolstad (1976), método denominado diferencial del pH de antocianinas. Se usaron tres inflorescencias por tratamiento, de cada cabezuela se tomaron seis lígulas; tres lígulas se maceraron en el amortiguador de KCl-HCl (pH 1, 50 mL de KCl 0.2 M y 97 mL de HCl 0.2 M se afora a 200 mL) y otras tres en un amortiguador de acetato (pH 4.5, 30.5 mL de ácido acético 0.2 M y 19.5 mL de acetato de sodio 0.2 M se afora a 100 mL ajustando el pH con ácido acético 0.2 M. Posteriormente cada extracto y centrifugó (4 000 g), y el sobrenadante se midió en un espectrofotómetro a 520, 530 y 700 nm. La concentración de la pelargonidina (PGD-3glu) y de cianidina se calculó de acuerdo a la fórmula de Wrolstad (1976). Los carotenos y xantofilas (ca+xa) se cuantificaron en extractos cetónicos 80% en un espectrofotómetro (Hach Dr/4 000U) a 470, 676, y 663 nm, y la concentración se calculó con la fórmula de Lichtenthaler y Wellburn (1983). Considerando que durante la senescencia las lígulas sufren una marcada pérdida de peso fresco por marchitez y que la percepción del color de la inflorescencia es por unidad morfológica (lígula), los resultados de pigmentos se expresaron por lígula (µg lígula-1). Fenoles en lígulas Los fenoles se midieron en las mismas fechas y tratamientos que los pigmentos totales con un espectrofotómetro (Hach Dr/4 000U) a 760 nm, mediante la reacción con el reactivo Follin-Ciocalteu, modificado por Singleton y Rossi (1965). Los resultados de fenoles también se expresaron por unidad morfológica (µg lígula-1). Histología del escapo Con la finalidad de conocer si la estructura del tallo contribuye a la resistencia al dolado del escapo, se usaron cinco escapos por variedad después del corte, al inicio de la vida florero. Se cortaron fragmentos de 1 cm, de la parte basal, media y apical de los tallos. Los fragmentos se fijaron en FAA (10% formadehído (al 36%), 50% etanol, 5% ácido acético en agua desionizada) por 48 h. Posteriormente se deshidrataron e incluyeron en parafina y se obtuvieron cortes transversales (15 µm) y se tiñeron con safranina y verde fijo (FCF) según Zavaleta-Mancera y Engleman (1994). Histoquímica para lignina Con el objeto de conocer la abundancia y distribución de los tejidos lignificados que sirven de sostén al escapo se estudiaron 5 escapos por variedad después del corte. Se 543 M and 19.5 mL of sodium acetate 0.2 M is diluted in 100 mL adjusting pH with acetic acid 0.2 M). Then each extract was centrifuged (4 000 g), and supernatant was measured in spectrophotometer at 520, 530 and 700 nm. Pelargonidin (PGD-3glu) and cyanidin concentration was calculated according to the Wrolstad equation (1976). Carotenes and xanthophylls (ca+xa) were quantified in cetonic extracts 80% in spectrophotometer (Hach Dr/4 000U) a t470, 676, and 663 nm, and concentrations was determined by Lichtenthaler and Wellburn equation (1983). Considering that during senescence ligules suffer a strong loss of fresh weight due wilting and that determination of inflorescence color is by morphologic unit (ligule), pigments results were defined by ligule (µg ligule-1). Phenols in ligules Phenols were measured in same dates and treatments than total pigments with spectrophotometer (Hach Dr/4 000U) at 760 nm, by reaction using Follin-Ciocalteu reactive, modified by Singleton and Rossi (1965). Phenols results were also defined by morphologic unit (µg ligule-1). Scape histology With the purpose to know if stem structure contributes with the resistance to scape bent, five scapes per variety were used after cut, at the beginning of vase life. 1 cm portions were cut from stem’s basal, medium and apex section. Fragments were fixed in FAA (10% formaldehyde (at 36%), 50% ethanol, 5% acetic acid in deionized water) during 48 h. Afterwards, they were dehydrated and were put in wax and transversal cuts (15 µm) were obtained and staining with safranin and fast green (FCF) according to ZavaletaMancera and Engleman (1994). Histochemistry for lignin With the aim to know abundance and distribution of lignified tissues that work as support for scape, 5 scapes per variety were studied after cut. 40 µm transversal cuts were taken by hand microtome at basal, medium and apex section. Lignin was detected with phloroglucinol 2% and HCl at 25% according to Zavaleta-Mancera and Engleman (1994). Red color in tissue shows lignin presence. Pictures were taken from cuts in optic microscope, Axioscop 2 Plus (Carl Zeiss) with digital camera Cyber Shot DSC25 (Sony). From each image, relative area (%) if lignified tissue was calculated with Susana González-Aguilar y Araceli Zavaleta-Mancera 544 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 obtuvieron cortes trasversales de 40 µm con un micrótomo de mano de la parte basal, media y ápical. La lignina fue detectada con fluroglucinol 2% y HCl al 25% según Zavaleta-Mancera y Engleman (1994) el color rojo en el tejido indicó la presencia de lignina. Los cortes se observaron y fotografiaron en un microscopio óptico, Axioscop 2 Plus (Carl Zeiss, Alemania) equipado con una cámara digital Cyber Shot DSC25 (Sony, Japón). De cada imagen se calculó el área relativa (%) del tejido lignificado con respecto al área transversal del escapo con el programa UTHSCSA Image Tool 1.28 (University of Texas Health science Center, San Antonio, TX, USA). Análisis estadísticos El diseño experimental fue completamente al azar, los datos se expresaron como valores promedios ± el error estándar y se analizaron mediante un ANOVA. En el experimento 1 las medias de los tratamientos para las variables de peso fresco (capitulo, lígulas y escapo) y concentración de calcio se analizaron mediante la prueba de Tukey (p≤ 0.05). En el experimento 2 se usó la prueba t de Student (p≤ 0.05) para comparar los datos de pigmentos y fenoles de flores tratadas con 0.05% de CaCl2 y el testigo. La cantidad relativa de lignina entre variedades se comparó con la prueba t de Student (p≤ 0.05) y entre partes del escapo mediante la prueba de Tukey (p≤ 0.05). Resultados Experimento 1. Efecto del CaCl2 en la vida media florero El 50% de las flores mantenidas en la solución base (testigo) terminaron su vida útil a los 20 d en Duela y a los 13 d en Shirlaine, en contraste, las tres concentraciones CaCl2 retrasaron la senescencia siendo la concentración de 0.5% la que mayormente alargo la vida de la flor (25 d en Duela, y 24 d en Shirlaine). La mayor pérdida de peso se observó en la concentración 0.1% en las dos variedades. En contraste las concentraciones 0.5% y 1.0% redujeron la pérdida de peso en comparación con el testigo. No obstante la concentración de calcio afecto retrasando la apertura de anillos (Cuadro 1). En el caso de las lígulas estas siguieron la misma tendencia que la flor completa mientras que el capítulo y escapo mostraron variación, incluyendo algunas ganancias de peso (Cuadro 1). regards transversal area from scape using software UTHSCSA Image Tool 1.28 (University of Texas Health Science Center, San Antonio, TX, USA). Statistical analysis Experimental design was completely random, data are expressed as average values ± standard error and were analyzed by ANOVA. In the experiment 1, treatments averages for fresh weight variables (capitulum, ligules, and scape) and calcium concentration were analyzed by Tukey test (p≤ 0.05). In experiment 2, Student’s t test (p≤ 0.05) was used to compare data of pigments and phenols from flowers treated with 0.05% of CaCl2, and from control. Student’s t test (p≤ 0.05) was used to compare relative amount of lignin between varieties and Tukey test (p≤ 0.05) was used to compare between scape’s parts. Results Experiment 1. CaCl2 effect in average vase life 50% of flowers kept in basic solution (control) ended their service life at 20d in cv Duela and at 13 d in Shirlaine, on the contrary, the three CaCl2 concentrations delayed senescence, being the 0.5% concentration the one that better lengthened flower life (25 d in Duela, and 24 d in Shirlaine). The greatest loss was detected at 0.1% concentration in both varieties. In contrast, 0.5% and 1% concentrations diminished weight loss if compared to control. Nevertheless, calcium concentration affected delaying rings opening (Table 1). Ligules had same trend than complete flower while capitulum and scape showed variation, including some weight increases (Table 1). Calcium concentration in scape Ca+2 concentration at cut showed no change between varieties. The greatest Ca+2 concentration in scape were for flowers treated with 0.5% and 1% of CaCl2, specially in apex region, outstanding cv Shirlaine with 9 times more concentration than control. In cv Duela, 0.1% and 0.5% concentrations showed no important differences between scape regions, while with 1% concentration they did (Table 2). El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo 545 Cuadro 1. Efecto del CaCl2 en la vida florero, pérdida del peso fresco de la inflorescencia, capítulo, lígulas, escapo y anillos del disco central en antesis en Duela y Shirlaine. Table 1. CaCl2 effect in vase life, fresh weight loss of inflorescence, capitulum, ligules, scape and central disk rings in anthesis for Duela and Shirlaine. Vida media Variedades floreroz (días) Duela 0.1% 0.5% 1.0% Testigo Shirlaine 0.1% 0.5% 1.0% Testigo 24 25 21 20 19 24 20 13 Pérdida de peso fresco de la inflorescencia (%) 31.28 +1.68 a 22.01 +2.72 b 17.65 +1.95 c 26.80 +0.86 b 25.15 +0.93 a 18.79 +1.32 c 20.29 +1.33 b 20.50 +1.92 b Anillos del disco central en antesis X (No.) Pérdida de peso fresco (g) Capítulo 6.70 +0.23 a 6.33 +0.58 a 4.83 +0.41 b 6.93 +0.14 a 7.78 +0.37 a 6.00 +0.31 b 5.00 +0.23 c 5.50 +0.33 c LígulasY Y EscapoY 0.34 +0.24 a 0.57 +0.06 a ¶ 0.66 +0.88 b 0.32 +0.12 b ¶ 1.80 +0.35 c 0.09 +0.09 c 0.39 +0.12 a 0.60 +0.03 a ¶ 0.78 +0.24 d 0.58 +0.06 a 0.26 +0.44 b 0.41 +0.07 b ¶ 0.28 +0.26 c 0.33 +0.05 c 1.96 +0.42 a ¶ 0.61 +0.08 a 0.62 +0.54 d ¶ 0.30 +0.68 a 0.10 +0.12 b 0.47 +0.10 c ¶ 0.17 +0.31 b 1.49 +0.32 c ¶ 0.28 +0.15 a 0.12 +0.32 b Vida media florero fue el día cuando 50% de las flores terminaron su vida útil; YLos datos son promedios de 10 inflorescencias y de 20 lígulas por inflorescencia ± EE; Número de anillos con flores masculinas en antesis, al término de la vida florero. Letras diferentes indican diferencias significativas entre tratamientos (Tukey, p≤0.05). ¶ indica ganancia de peso. Z X Concentración de calcio en el escapo Experiment 2. Effect of 0.5% CaCl2 treatment in vase life La concentración Ca +2 al corte no presentó variación entre variedades. Las flores que acumularon mayor concentración de Ca+2 en los escapos fueron las tratadas con 0.5% y 1.0% de CaCl2 especialmente en la región apical, siendo más marcada esta tendencia en Shirlaine; la cual acumuló nueve veces más Ca+2 que el testigo. En Duela las concentraciones de 0.1% y 0.5% no presentaron diferencias significativas entre regiones del escapo, en tanto que en la concentración de 1.0% si se presentaron (Cuadro 2). Due 0.5% CaCl2 concentration was the better, a second experiment was performed, in which senescence, pigments and phenols incidence was assessed. The most frequent symptoms in senescence for cv Shirlaine were scape bent (30%) and ligules wilting (70%), while for cv Duela, hanging below capitulum was main senescence symptom, and scape bent holds 24%. When compared to control, scape bent reduction effect becomes the main one: 20% in cv Duela and 10% in cv Shirlaine (Table 3). Cuadro 2. Concentración de calcio en la región basal y apical de escapo de Duela y Shirlaine al fin de su vida útil. Table 2. Calcium concentration in scape’s basal and apex region for Duela and Shirlaine at the end of its service life. Tratamientos 0.1% 0.5% 1% Testigo Al cortez Duela Ápice 21.67 +0.51 b 25.33 +4.19 b 62.67 +4.17 a 9.67 +0.51 d 14.33 +0.19 c Concentración de calcio (µg g-1) Shirlaine Base Ápice 22.67 +0.19 b 22.67 +0.84 c 25.67 +1.68 b 64 +4.36 b 41.67 +8 a 114 +5.55 a 13.33 +0.51 c 13.67 +0.39 d 14 +0.88 c 12.67 +0.51 d Base 19.67 +0.77 c 36.33 +8 b 49 +5.51 a 1 +0.33 d 13 +1.45 d Permite conocer la concentración inicial de calcio en el escapo. Los datos son promedio de 15 repeticiones ± error estándar. Letras diferentes indican diferencias significativas entre tratamientos (Tukey, p≤ 0.05). z Susana González-Aguilar y Araceli Zavaleta-Mancera 546 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Experimento 2. Efecto del tratamiento de 0.5% CaCl2 en la vida de florero Debido a que la concentración de 0.5% de CaCl2 fue la mejor, se realizó un segundo experimento, en el que se evaluó la incidencia de los síntomas de senescencia, pigmentos y fenoles. Los síntomas más frecuentes en la senescencia de Shirlaine fueron el doblado del escapo (30%) y el marchitamiento de las lígulas (70%), mientras que en Duela el ahorcamiento debajo del capítulo fue el principal síntoma de senescencia, y el doblado del escapo fue 25%. El principal efecto del calcio fue en la reducción del doblado del escapo con respecto al control; 20% en Duela y 10% en Shirlaine (Cuadro 3). Pigments and phenols In Duela, anthocyanins presence was not detected, therefore only carotenes and phenols are reported. In CaCl2 treatments, carotenesconcentrationinliguleswassignificantlyreduced.These results show that CaCl2 speed up degradation of these pigments, in Shirlaine decreased 40% and in Duela 65% at end of vase life. CaCl2 treatment had null effect in anthocyanins concentration for cv Shirlaine, and along time either important differences were detected. CaCl2 promoted phenols build up in both varieties at end of vase life (30 d) with regards initial concentration, but there were no significant differences in control. Treated Duela increased 40% and Shirlaine 21.66% (Table 4). Cuadro 3. Efecto de 0.5% de CaCl2 en la incidencia (%) de síntomas al fin de la vida florero de Duela y Shirlaine. Table 3. Effect of 0.5% CaCl2 in symptoms incidence (%) at end of vase life in Duela and Shirlaine. Variedades Vida media floreroz (días) Marchitamiento de las lígulas (%) Doblado del escapo (%) Ahorcamiento debajo del capítulo Pudrición de la base del escapo (%) Duela (0.5%) Testigo 25 20 45 20 5 25 50 50 --5 Shirlaine (0.5%) 24 60 20 --- 20 Testigo 13 70 30 --- --- La vida media florero es el día cuando 50% de las flores terminaron su vida útil. (---) Indica ausencia del síntoma. Las observaciones fueron realizadas en 20 repeticiones por tratamiento. Pigmentos y fenoles Histology of scape and lignin En Duela no se detectó presencia de antocianinas, por lo cual, sólo se reportan carotenos y fenoles. La concentración de carotenos en las lígulas se redujo significativamente en los tratamientos con CaCl2. Estos resultados indican que el CaCl2 aceleró la degradación de estos pigmentos, en Shirlaine disminuyó 40% y en Duela 65% al fin de la vida florero. Stems of studied varieties showed typical anatomy of herbaceous stem from dicotyledon; collateral vascular bundles (internal xylem and external phloem) arranged in central ring. Both varieties’ stem showed acropetal maturity. Base (mature tissue) showed largest bundles with lignified interfascicular tissue, in scape’s middle portion interfascicular tissue was found scarcely lignified and apex scape (youngest tissue) showed small bundles and non-lignified interfascicular tissue (Figure 1). El tratamiento de CaCl2 no tuvo efecto en la concentración de antocianinas en Shirlaine, ni se detectaron diferencias significativas en el tiempo. El CaCl2 promovió la acumulación de fenoles en las lígulas de las dos variedades al fin de su vida florero (30 d) con respecto a la concentración inicial pero en el testigo no se detectaron diferencias significativas. Duela tratada aumentó 40% y Shirlaine 21.66% (Cuadro 4). Shirlaine scape was thicker than Duela’s and showed greater number of vascular bundles, but smaller with incipient lignifications of interfascicular tissue. In contrast, Duela scape, despite being thinner, showed larger vascular bundles connected by lignified interfascicular tissue conforming solid cylinder of hard tissue which gave El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo 547 Cuadro 4. Efecto de 0.5% CaCl2 en el contenido de pigmentos y fenoles de Duela y Shilaine, en el tiempo. Table 4. Effect of 0.5% CaCl2 in pigments and phenols content in Duela and Shirlaine, in time. Duela Shirlaine Ca+Xa Fenoles Ca+Xa Fenoles Cianidina Días (µg lígula-1) -1 -1 -1 (µg lígula ) (µg lígula ) (µg lígula ) (µg lígula-1) Testigo CaCl2 Testigo CaCl2 Testigo CaCl2 Testigo CaCl2 Testigo CaCl2 0.5% 0.5% 0.5% 0.5% 0.5% 0 4.4 aA 4.4 aA 1.29 aA 1.29 bA 3.25 aA 3.25 aA 1.88 aA 1.88 bA 45.21aA 45.21 aA 10 4.73 aA 1.71cB 1.4 aA 1.01 bA 3.33 aA 2.71 bB 2.07 aA 1.71 bB 48.62 aA 45.60 aA 20 3.01 aA 2.91 bB 0.67 bB 1.12 bA 3.3 aA 1.23 c B 1.16 aA 1.06 bA 43.03 aA 37.76 bB 30 3.38 aA 2.86 bB 1.73 aB 2.13 aA 1.30 c 2.4 a 50.58 a Pelargonidina (µg lígula-1) Testigo CaCl2 0.5% 55.39 aA 55.39 aA 50.44 aB 52.24 aA 47.49 aA 45.23 aA 63.22 a Letras minúsculas diferentes en columnas indican diferencias significativas en el tiempo (Tukey, p≤ 0.05). Letras mayúsculas en hileras indican diferencias significativas entre tratamientos (t de Student p≤ 0.05). Los datos son promedio de tres repeticiones (flor) con tres replicas por tratamiento (n= 3). Ca+Xa= carotenos + xantofilas. (-) No se incluyen los datos del testigo de Shirlaine porque duró sólo 20 d. Histología del escapo y lignina Los tallos de las variedades estudiadas presentaron la anatomía típica de un tallo herbáceo de dicotiledónea; haces vasculares colaterales (xilema interno y floema externo) arreglados en un anillo central. El tallo de las dos variedades presentó una maduración acropeta. La base (tejido maduro) presentó los haces mayores con tejido interfascicular lignificado, en la parte media del escapo el tejido interfascicular se encontró escasamente lignificado y el escapo apical (tejido más joven) presentó haces pequeños y tejido interfascicular no lignificado (Figura 1). higher rigidity to stem and support to head. The lignified relative surface from Duela scape was 7% and from Shirlaine 4% (Figure 2). El escapo de Shirlaine fue más grueso que el de Duela, y presentó un mayor número de haces vasculares pero más pequeños con incipiente lignificación del tejido interfascicular. En contraste el escapo de Duela, a pesar de ser más delgado, presentó haces vasculares mayores conectados por tejido interfascicular lignificado formando un cilindro sólido de tejido duro que dio mayor rigidez al tallo y soporte a la cabezuela. El área relativa lignificada del escapo de Duela fue 7% y en Shirlaine 4% (Figura 2). Discusión En el presente estudio la adición de 0.5% CaCl 2 a la solución preservativa demostró ser efectiva para alargar la vida florero de Duela y Shirlaine reduciendo el doblado del escapo. Se ha observado que el CaCl2 puede alargar la vida florero en otras especies; Gladiolus cv. ‘Happy End’ (Pruthi et al., 2001), Rosa hybrida cv. Kiss (Capdeville et al., 2005), Chrysanthemumm indicum y Tagetes erecta (Patel Figura. 1. Anatomía transversal del escapo de gerbera en la región apical, media y basal de las variedades Duela (A, B, C) y Shirlaine (D, E, F) respectivamente. Tinción con safranina y verde fijo. Ti, tejido interfascicular; f, floema; ff, fibras del floema; x, xilema; m, médula, pc, parénquima cortical. Barra: 50 µm. Figure. 1. Gerbera’s scape transversal anatomy in apical, middle and basal region of varieties Duela (A, B, C) and Shirlaine (D, E, F) respectively. Staining with safranin and fast green. Ti, interfascicular tissue; f, phloem; ff, phloem fibers; x, xylem; m, pith, pc, cortical parenchyma. Bar: 50 µm. Susana González-Aguilar y Araceli Zavaleta-Mancera 548 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 El calcio (Ca+2) es un ion relacionado con la estabilidad y fuerza mecánica de la pared celular, ésta propiedad se atribuye a la unión cooperativa de las cadenas poligalacturónicas con los iones calcio para formar pectatos en la lámina media (Conway et al., 1995; Halevy et al., 2001). Un estudio realizado por (Albino-Garduño et al., 2008), demostró la importancia del Ca en el cultivo hidropónico de Gerbera jamesonii, y reportó que bajas concentraciones (6 meq Ca+2L-1) reducían la producción, diámetro de la cabezuela y calidad (longitud y firmeza) del escapo con respecto a 9 y 12 meq Ca++L-1. Tratamientos con calcio mantuvieron la firmeza del fruto en poscosecha; melón “Campsol” (Rinaldi, et al., 2004) y en manzanas (Poovaiah, 1988; Dilmaghani et al., 2005). Los escapos de Duela y Shirlaine tratados con CaCl 2 acumularon significativamente Ca+2 en la región apical, lugar donde comúnmente el tallo se dobla; así los tallos tratados se mantuvieron erectos por más tiempo en contraste con el testigo; en Duela se redujo 10% y en Shirlaine 20%. La presencia de lignina estuvo asociada a los elementos de vaso del xilema, fibras floemáticas y tejido interfascicular. Estos datos indican una mayor rigidez del escapo de Duela. La anatomía y lignificación del tallo entre variedades son indicadores importantes que pueden determinar la 9 Área lignificada (%) en corte trnsversal y Mankad, 2002). La evidencia del retraso de la senescencia en flores por CaCl2 se ha demostrado en pétalos de rosas, ya que mantiene la integridad de membranas celulares, reduce la producción de etileno y promueve el transporte de solutos (Torre et al., 1999); tratamiento con CaCl2+sacarosa+HQS, aumentó en 7 días la vida florero, retrasando la pérdida de peso fresco, turgencia de los pétalos y hojas, así como mayor porcentaje de flores abiertas (Cortes et al., 2011). Un estudio demostró el efecto positivo de aplicaciones de CaCl2 pre y postcosecha en cuatro variedades de gerbera (Campitano, Dino, Sangría y Testarossa) encontrando que la inyección de los escapos con CaCl2 1% en precosecha incrementó la vida florero (Gerasopoulos y Chebli, 1999). No obstante las diferencias en la vida florero de las variedades de gerbera del presente estudio, estas duraron más tiempo (24 d) que el reportado para esta especie, estimado en 15 d (Gerasopoulos y Chebli, 1999). La adición de CaCl2 a la solución preservativa mejoró significativamente la vida poscosecha de Shirlaine; variedad que presentó en el testigo una mayor incidencia al doblado asociado a una baja proporción de tejido lignificado en contraste con Duela. Éstos resultados demuestran el efecto particularmente positivo del ion Ca+2 en variedades con tallos poco lignificados y de vida de florero corta. 8 Duela Shirlaine 7 a a a 6 5 4 b 3 2 1 0 c c ápice media base Figura 2. Área lignificada del escapo de Duela y Shirlaine, (n= 5 ± EE) medida como área relativa del escapo ocupada por las células lignificadas en cortes transversales del ápice (5cm debajo de la cabezuela), parte media y la base. Letras diferentes indican diferencias significativas entre partes del escapo (Tukey p≤ 0.05). (*). Indica diferencias significativas entre variedades (t de Student p≤ 0.05). Figure 2. Duela and Shirlaine scape lignified area, (n= 5 ± EE) measured like relative area of scape occupied by lignified cells in apical (5cm below head), medium section and base transversal cuts. Different letters means important differences beween scape’s part (Tukey p≤ 0.05). (*). Significant average differences between varieties (Student’s t p≤ 0.05). Discussion In this study addition of 0.5% CaCl2 to preserving solution proved to be effective in extending vase life for Duela and Shirlaine reducing scape bent. It has been observed that CaCl2 can extend vase life in other species; Gladiolus cv. ‘Happy End’ (Pruthi et al., 2001), Rosa hybrida cv. Kiss (Capdeville et al., 2005), Chrysanthemumm indicum and Tagetes erecta (Patel and Mankad, 2002). Evidence of senescence delay in flowers by CaCl2 has been probed in rose petals, since it keeps integrity of cell membranes, reduces ethylene production and promotes solutes transport (Torre et al., 1999); treatment with CaCl2+sacarosa+HQS increased in 7 vase flower, delaying fresh weight loss, petals and leaves turgence, as well as greater percentage of open flowers (Cortes et al., 2011). A study showed positive outcome when using CaCl2 applications previous to crop and postharvest in four gerbera varieties (Campitano, Dino, Sangria and Testarossa) finding that addition of CaCl2 1% previous to harvest in scapes increased vase life (Gerasopoulos and Chebli, 1999). Despite El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo resistencia del tallo, independientemente del tratamiento en la solución preservativa. Así la baja incidencia del doblado en Duela estuvo asociada a una mayor abundancia relativa de lignina en la parte media del tallo y lignificación del tejido interfascicular. El CaCl2 en las dos variedades aceleró la degradación de carotenos pero promovió la acumulación de fenoles. En el caso particular de la flor roja de Shirlaine, CaCl2 promovió la acumulación de cianidina y pelargonidina a los 30 d, los testigos sólo duraron 20 d; las lígulas se observaron oscurecidas. Esto podría estar asociado al fenómeno denominado copigmentación en el que las antocianinas con compuestos fenólicos forman uniones no covalentes por enlaces Van der Waals, en presencia de glucosa, hecho que limita la interacción de la antocianina con H2O evitando su degradación y perdida de color (Brouillard et al., 1989; Boulton, 2001). Adicionalmente los compuestos fenólicos tienen actividad antioxidante, que contrarresta el efecto de los radicales libres (Vinson y Hontz, 1995; Proestos et al., 2005). Durante la senescencia las células producen una gran cantidad de radicales libres (ROS) que oxidan las membranas y producen daño celular como se ha demostrado en gerbera (Trujillo-Villagarcía et al., 2006) y trigo (Zavaleta-Mancera et al., 2007). Se considera que el aumento de fenoles en las lígulas de gerbera tratadas con CaCl2 pudo proteger las células del daño oxidativo, promoviendo el retraso de la senescencia. Conclusiones La aplicación de CaCl 2 a la solución f lorero retrasó la senescencia de las dos variedades de gerbera; la concentración de 0.5% de CaCl2 fue la que produjo mayor vida florero. El Ca+2 se acumuló significativamente en la región apical del escapo de las dos variedades, favoreciendo el endurecimiento del tejido y reduciendo la incidencia al doblado preferentemente en Shirlaine. Uno de los elementos que determinó las diferencias en la vida florero entre Duela y Shirlaine fue la anatomía y el grado de lignificación del escapo, características establecidas genéticamente. Así la menor incidencia al doblado del escapo observado en Duela, sería explicado por su mayor proporción de tejido lignificado y una temprana lignificación del tejido interfascicular en la parte del tallo donde se presenta la ruptura y el retraso de la senescencia entre tratamientos dentro de la misma variedad estaría explicado por el efecto del CaCl2 en la solución florero. 549 differences in vase life for gerbera varieties in this study, they last longer (24 d) than reported for this species, estimated in 15 d (Gerasopoulos and Chebli, 1999). CaCl2 addition to preserving solution improved significantly postharvest life on Shirlaine; variety that in control showed greater bent incidence associated to lower proportion of lignified tissue than cv Duela. These results show the positive effect of Ca+2 ion in varieties with few lignified stems and short vase life. Calcium (Ca+2) is a ion related with cell wall stability and mechanical strength, property that is attributable to cooperative bonds between polygalacturonic chains and calcium ions to create pectates in medium lamellae (Conway et al., 1995; Halevy et al., 2001). A study performed by Albino-Garduño et al., 2008, proved Ca importance in hydroponic culture of Gerbera jamesonii, and reported that low concentrations (6 meq Ca+2L-1) reduced production, head diameter and scape quality (length and rigidity) with regards 9 and 12 meq Ca+2L-1. Treatments with calcium kept fruit rigidity in postharvest; “Campsol” watermelon (Rinaldi, et al., 2004) and in apples (Poovaiah, 1988; Dilmaghani et al., 2005). Scapes from Duela and Shirlaine treated with CaCl2 significantly built up Ca+2 in apical region, place where usually stem bends; thus stems treated kept rise longer than control; in cv Duela it reduced 10% and in Shirlaine 20%. Presence of lignin was associated with elements of xylem vase, phloem fibers and interfascicular tissue. These data reveals greater rigidity of Duela scape. Stem anatomy and lignification between varieties are important indicators that can define stem resistance, independently of preserving solution treatment. Thus low incidence of bent in cv Duela was associated to greater relative content of lignin in middle section of stem and lignification of interfascicular tissue. CaCl2 in two varieties accelerated carotenes degradation, but promoted phenols built up. In the case of Shirlane red flower, CaCl2 promoted accumulation of cyanidin and pelargonidin at 30 d, control only last 20 d; ligules were detected darkened. This could be associated to process known as co-pigmentation in which anthocyanins with phenolic compound create non covalent bonds by Van der Waals bonds en presence of glucose, fact that limits interaction of anthocyanin with H2O avoiding its degradation and color loss (Brouillard et al., 1989; Boulton, 2001). Also, phenol compounds give antioxidant activity, which counteract effect of free radicals (Vinson and Hontz, 1995; Proestos et al., 2005). During senescence cells produce great amount of free radicals (ROS) that oxidize membranes and produce Susana González-Aguilar y Araceli Zavaleta-Mancera 550 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Agradecimientos Las autoras agradecen al doctor Humberto López Delgado del programa nacional de papa, del Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP) por las facilidades de laboratorio brindadas, y a Miguel Vega Zúñiga por la asistencia técnica en la elaboración de los cortes histológicos en el Laboratorio de Anatomía e Histoquímica Vegetal del Colegio de Postgraduados en Ciencias Agrícolas, Campus Montecillo. Literatura citada Acock, B. and Nichols, R. 1979. Effects of sucrose on water relations of cut, senescing, carnations flower. Ann. Bot. 44:221-230. Albino-Garduño, R.; Zavaleta-Mancera, H. A.; RuizPosadas, L. M.; Sandoval-Villa, M.; CastilloMorales, A. 2008. Response of gerbera to calcium in hydroponics. J. Plant Nutr. 31:91-101. Amariutei, A.; Burzo, I.; Alexe, C. 1986. Researches concerning some metabolism aspects of cut gerbera flowers. Acta Hort. 181:331-337. Baas, R.; Nijssen, H. M. C.; Van Den Berg, T. J. M. and Warmenhoven, M. G. 1995. Yield and quality of carnation and gerbera in a closed nutrient system as affected by sodium chloride. Sci. Hort. 61:273-284. Boulton, R. 2001. The copigmentation of anthocyanins and its role in the color of red wine: a critical review. Am. J. Enol. Vitic. 52:67-87. Brouillard, R.; Mazza, G.; Sad, Z.; Albrecht-Gary, A. M. and Cheminat, A. 1989. The copigmentation reaction of anthocyanins: a microprobe for structural study of aqueous solutions. J. Am. Chem. Soc. 111:2604-2610. Capdeville, G.; Maffia, L. A.; Finger, L. A. and Batista, U. G. 2005. Pre-harvest calcium sulfate applications affect vase life and severity of gray mold in cut roses. Sci. Hort.103:329- 338. Conway, W. S.; Sams, C. E. and Watada, A. E. 1995. Relationship between total and cell bound calcium in apples following postharvest pressure infiltration of calcium chloride. Acta Hortic. 398:31-39. cell damage like has been demonstrated in gerbera (TrujilloVillagarcía et al., 2006) and wheat (Zavaleta-Mancera et al., 2007). It is considered that increase of phenols in ligules of gerbera treated with CaCl2 could protect cells from oxidative damage, promoting senescence delay. Conclusions CaCl2 addition to vase solution delayed senescence in two gerbera varieties; concentration of 0.5 CaCl2 was the one that gave best vase life. Significantly build up in apical region of scape in both varieties, favoring tissue hardening and reducing incidence to bent specially in Shirlaine. Scape anatomy and degree of lignification are key to define differences in vase life between cv Duela and cv Shirlaine. Then, lower incidence to scape bent seen in Duela, would be explained by its greater rate of lignified tissue and an early lignification of interfascicular tissue in stem portion where tends to break and delaying senescence between treatments within same variety would be explained by CaCl2 in vase solution. End of the English version Cortés, M. H.; Frías, A. A.; Moreno, S. G.; Piña, M. M.; Guzmán, G. H. and Sandoval, S. G. 2011. The effects of calcium on postharvest water status and vase life of Rosa hybrida cv. Grand gala. Int. J. Agr. Biol. 13:233-238. Dilmaghani, M. R.; Malakouti, M. J.; Neilsen, G. N. and Fallahi, E. 2005. Interactive effects of potassium and calcium on K/Ca ratio and its consequences on apple fruit quality in calcareous soils of Iran. J. Plant Nutr. 27:1149-1162. Gerasopoulos, D. and Chebli, B. 1999. Effects of pre and postharvest calcium applications on the vase life of cut gerberas. J. Hort. Sci. Biotech. 74:78-81. Halevy, A. H.; Torre, S.; Borochov, A. and Porat, R. 2001. Calcium in regulation of postharvest life on flowers. The Hebrew University of Jerusalem. Department of Horticulture Rehovot 76100. Israel. Acta Hort. 543:345-351. Lichtenthaler, H. K. and Wellburn,A. R. 1983. Determination of total carotenoids and chlorophylls a and b in leaf extracts in different solvents. Biochem. Soc. Trans. 11:591-592. El CaCl2 en la vida florero de gerbera: pigmentos, fenoles, lignina y anatomía del escapo Mentcarelli, F.; Agostini, R. R.; Botondi, R. and Massantini, R. 1995. Ethylene production, ACC content, PAL and POD activities in excised section of straight and bent gerbera scapes. J. Hort. Sci. 70:09-416. Patel, A. and Mankad, A. 2002. Studies on postharvest shelf life of cut Chrysanthemum indicum and Tagetes erecta flowers. Indian J. Plant Physiol. 7(3):292-294. Poovaiah, B.W. 1988. Molecular and cellular aspects of calcium action in plants. Hort. Sci. 23(2):267-271. Proestos, C.; Chorianopoulos, N.; Nychas, G. J. E. and Komaitis, M. 2005. RP- HPLC analysis of the phenolic compounds of plant extracts. Investigation of their antioxi-dant capacity and antimicrobial activity. J. Agri. Food Chem. 53:1190-1195. Pruthi, V.; Godara, R. K. and Bhatia, S. K. 2001. Effect of different pulsing treatments on postharvest life of Gladiolus cv. Happy and Haryana. J. Hort. Sci. 30(3-4):196-197. Ramírez-Martínez, M.; Trejo-Téllez, L.; Merino, F. C. G. y Sánchez, G. P. 2010. La relación de K+/Ca2+ de la solución nutritiva afecta el crecimiento y calidad poscosecha del tulipán. Rev. Fitotec. Mex. 33(2):149-156. Rinaldi, R.; Amodio, M. L. and Colelli, G. 2004. Effects of calcium treatment and modified atmosphere on postharvest life of fresh-cut ‘Campsol’ melons. Adv. Hort. Sci. 18(2):85-88. Serrano, M. 2002 .Effect of calcium deficiency on melon (Cucumis melo L.) texture and glassiness incidence during ripening. Food Sci. Technol. Inter. 8(3):147-154. Singleton, V. L. and Rossi, J. A. 1965. Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic-phosphotungstic acid reagents. Am. J. Enol. Vit. 16:44-58. 551 Torre, S.; Borochov, A. and Halevy, A. 1999. Calcium regulation of senescence in rose petals. Physiol. Plantarum 107(2):214-219. Trujillo-Villagracía, B. A.; Zavaleta-Mancera, H. A.; MoraHererra, M. E. and López-Delgado, H. A. 2006. Efecto del CaCl2 sobre la actividad enzimática antioxidante durante la vida florero de Gerbera (Gerbera jamesonni H. Bolux Ex Hook F.) Rev. Chapingo. Serie Hort. 12(2):203-209. Van Doorn, W. G. 2001. Role of soluble carbohydrates in flower senescence: a survey. Acta Hort. 543(1):179-183. Van Leperen, W. and Van Gelder, A. 2006. Ion-mediated flow changes suppressed by minimal calcium presence in xylem sap in Chrysanthemum and Prunus laurocerasus. J. Exp. Bot. 57(11):2743-2750. Vinson, J. and Hontz, B. 1995. Phenol antioxidant index: comparative antioxidant effectiveness of red and white wines. J. Agr. Food Chem. 43 (2):401-403. Wounter, G.; Doorn, V. and Yke, D. W. 1994. Effect of bacteria on scape bending in cut Gerbera jamesonii flowers. J. Am. Soc. Hort. Sci. 119:568-571. Wrolstad, R. E. 1976. Colorimetric determination of total anthocyanins pH differential method. Color and pigment analysis in fruit products. Station Bull. 621. Agric. Exp. Oregon State. University. Zavaleta-Mancera, H.A. and Engleman, E. M. 1994.Anatomy of the ovule and seed of Manilkara zapota (L.) van Royen (Sapotaceae). Phytomorphology. 44:169-175. Zavaleta-Mancera, H. A.; López-Delgado, H. H.; LozaTavera, M.; Mora-Herrera, C.; Trevilla-García, M.; Vargas-Suarez, and Ougham. H. J. 2007. Cytokinin promotes catalase and ascorbate peroxidase activities and preserves the chloroplast integrity during darksenescence. J. Plant. Physiol. 164:1572-1582. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 553-564 Biocontrol de la pudrición de raíz de nochebuena de interior con Trichoderma spp.* Root rot biocontrol for indoor poinsettia with Trichoderma spp. Felipe de Jesús Osuna-Canizalez1§, María Félix Moreno-López1, Faustino García-Pérez1, Sergio Ramírez-Rojas1 y Jaime Canul-Ku1 Campo Experimental Zacatepec-INIFAP. Carretera Zacatepec-Galeana, km. 0.5. C. P. 62780. Zacatepec, Morelos, México. Tel. 7341103906. (garcia.faustino@inifap. gob.mx), ([email protected]), ([email protected]). §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract En Morelos, la pudrición de la raíz causada por Fusarium spp., es una de las principales enfermedades de la nochebuena de interior. Por su efecto devastador, en su prevención o control se realizan aplicaciones frecuentes de productos químicos, con los riesgos inherentes a la salud humana y al ambiente. En la búsqueda de alternativas bioracionales al manejo de esta enfermedad, se realizó un ensayo en el que se evaluaron tres cepas comerciales de Trichoderma spp., en tres diferentes sustratos: S1= “tierra de hoja” (70% v/v)+tezontle grueso (15% v/v)+tezontle fino (10% v/v)+agrolita (5% v/v); S2= turba (80% v/v)+ fibra de coco (20% v/v); S3= “tierra de hoja” (70%) + “tepojal” (30%), en las variedades comerciales más comunes, Freedom Red y Prestige Red. Se utilizó un diseño factorial de tratamientos 4 x 3 x 2 y los tratamientos resultantes se evaluaron en un diseño completamente al azar con seis repeticiones. Respecto a la incidencia de pudrición de la raíz, las cepas comerciales de Trichoderma spp., no mostraron diferencias entre sí ni con el testigo químico. La pudrición de la raíz estuvo asociada con S2, debido a una baja capacidad de aireación, y sólo se presentó en Prestige Red. La población (UFC g-1) de Trichoderma spp., en el sustrato al término del ciclo, fue igual (p≤ 0.05) entre cepas comerciales y entre estas y el testigo químico In Morelos, root rot caused by Fusarium spp., is one of the main diseases of indoor poinsettia. In order to prevent or control its devastating effect, frequent applications of chemical products are performed, with inherent risks to human health and environment. In quest for alternative biorational options, an essay in which three commercial strains of Trichoderma spp., was done, in three different substrates: S1= “organic soil” (70% v/v)+thick tezontle (15% v/v)+thin tezontle (10% v/v)+agrolita (5% v/v); S2= peat moss (80% v/v)+ coconut fiber (20% v/v); S3= “organic soil” (70%)+“tepojal” (30%), in most common commercial varieties, Freedom Red and Prestige Red. A factorial design of 4 x 3 x 2 treatment was used and resulting treatments were evaluated in a completely random design with six repetitions. Regards root rot incidence, commercial strains of Trichoderma spp., did not show differences between them, either with chemical control. Root rot was associated with S2, due low aeration capacity, and only it was seen in Prestige Red. Population of Trichoderma spp.,(UFC g-1) in the substrate at end of cycle was the same (p≤ 0.05) between commercial strains and between them and the control (without inoculation), due presence of native strains of Trichoderma in organic components of substrates (“organic soil”, peat moss and coconut fiber). * Recibido: septiembre de 2011 Aceptado: marzo de 2012 Felipe de Jesús Osuna-Canizalez et al. 554 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 (sin inoculación), debido a la presencia de cepas nativas de Trichoderma en los componentes orgánicos de los sustratos (“tierra de hoja”, turba y fibra de coco). Key words: Euphorbia pulcherrima, Fusarium spp., native strains, substrates, varieties. Palabras clave: Euphorbia pulcherrima, Fusarium spp., cepas nativas, sustratos, variedades. Introduction Introducción En México se producen anualmente alrededor de 14 millones de plantas de nochebuena de interior; Morelos es el estado productor más importante, con 5.85 millones de plantas (Anónimo, 2009). En Morelos, uno de los problemas fitosanitarios más importante en este cultivo es la marchitez de la planta causada por pudrición de la raíz (García et al., 2009), la cual se presenta durante cualquier etapa del ciclo de desarrollo, aunque su incidencia es mayor en etapas avanzadas, al inicio del proceso de pigmentación; los síntomas de la enfermedad son los siguientes: las hojas pierden gradualmente turgencia, se debilitan, adquieren tonalidades que van del verde claro al amarillo verdoso, finalmente empardecen, se desprenden y la planta muere. Estudios previos permitieron identificar al hongo Fusarium sp., como el principal agente causal de esta enfermedad de la raíz en nochebuena (García et al., 2009). Tradicionalmente, los métodos para controlar la pudrición de raíz en nochebuena se basan en aplicaciones frecuentes de productos agroquímicos (García, 2008), los cuales incrementan tanto el costo de producción como los riesgos a la salud humana, por exposición directa a los productos o por contaminación de aire y agua con los mismos. En Morelos, dicho riesgo se incrementa por el hecho de que la mayoría de viveros comerciales de producción de nochebuena se localizan en zonas urbanas o periurbanas, con alta densidad poblacional. El uso de agentes de control biológico para prevenir o controlar enfermedades en plantas cultivadas, es una alternativa sustentable que ha mostrado efectividad en amplio número de casos (Harman, 2000). El hongo Trichoderma spp., es uno de los agentes de biocontrol más eficaces debido a que posee una serie de mecanismos contra agentes patógenos, como micoparasitismo, producción de antibióticos, estimulación de mecanismos de defensa de las plantas y competencia efectiva por espacio en la rizosfera (Lorito et al., 2010; Shoresh et al., 2010); esto último se debe a sus altas tasas de crecimiento y a su habilidad para adaptarse a condiciones de estrés, como el de temperatura alta (Montero-Barrientos et al., 2010). In Mexico there are produced around 14 millions of plants of indoors poinsettia; being Morelos the most important producer state, with 5.85 millions of plants (Anonymous, 2009). In Morelos, in this crop one of the most important phytosanitary problems is plant wilting caused by root rot (García et al., 2009), which is seen during any stage of development cycle, although its incidence is higher in advanced stages, at the beginning of pigmentation process; disease symptoms are the following: leaves gradually loss turgence, they weaken and acquire tones ranging from clear green to greenish yellow, they finally got darkened, detached and the plant dies. Previous studies allowed identification of fungi Fusarium sp., as main causing agent for this root disease in poinsettia (García et al., 2009). Normally, methods to control root rot in poinsettia are based on frequent application of agrochemical products (García, 2008), which increase as well production costs as human health risks, by direct contact with them or air and water pollution. In Morelos, such risk is increased by the fact that most greenhouses for poinsettia commercial production are located in high population density urban or semi-urban areas. Use of biological control agents to prevent or control diseases in cultivated plants, is a sustainable alternative that has proven effectiveness in wide number of cases (Harman, 2000). Fungi Trichoderma spp., is on of the most effective biocontrol agents due it has a number of mechanisms against pathogen agents, like microparasitism, antibiotic production, stimulation of plants defense mechanisms and effective competence by space in rhizosphere (Lorito et al., 2010; Shoresh et al., 2010); the latter is because its high growing rates and its capacity to adapt under stressing conditions like high temperature (Montero-Barrientos et al., 2010). Poinsettia for indoors is cultivated in containers or flowerpots of diverse capacities. The most common used substrates include like organic component to “organic soil” and “ocochal”, which consist in vegetable remains built up in surface of forest soils located in Villa del Carbón, State of Biocontrol de la pudrición de raíz de nochebuena de interior con Trichoderma spp. La nochebuena de interior se cultiva en contenedores o macetas de diversas capacidades. Los sustratos más comúnmente empleados incluyen como componente orgánico a la “tierra de hoja” y al “ocochal”, que consisten en residuos vegetales acumulados en la superficie de suelos forestales ubicados en Villa del Carbón, Estado de México, compuestos principalmente por hojas de encino y acículas de pino; los componentes inorgánicos de las mezclas incluyen materiales como el “tezontle” y el “tepojal”, ambos de origen volcánico, obtenidos localmente, en el caso del primero, y en la localidad de Calimaya, estado de México, el segundo; el tercer componente inorgánico comúnmente empleado es la agrolita, producida mediante un proceso industrial que involucra la expansión de la perlita a altas temperaturas. En el cultivo de plantas en contenedor, la selección de un sustrato con propiedades físicas y químicas adecuadas es fundamental, debido al volumen reducido en el que desarrollan las raíces (Caron y Rivière, 2003), en comparación a cuando desarrollan en suelo. Desde el punto de vista microbiológico, diversos reportes señalan interacciones significativas entre la naturaleza del sustrato y el desarrollo de microorganismos benéficos, en términos positivos en algunos casos (Callejas-Ruiz et al., 2009) o negativos en otros (Vestverg y Kukkonen, 2007). En diversos estudios se reportan efectos supresivos de sustratos sobre el desarrollo de patógenos de la raíz, especialmente con la adición de composta (Yogev et al., 2006; Raviv, 2007; Pane et al., 2011). En Morelos, actualmente las dos variedades de nochebuena de interior más demandadas son Freedom Red y Prestige Red, ambas reportadas como susceptibles a la secadera por pudrición de raíz. Por ello, los objetivos del presente estudio fueron: a) determinar la factibilidad del biocontrol de pudrición de la raíz de nochebuena de interior en las dos variedades, mediante la inoculación de cepas comerciales de Trichoderma spp.; y b) definir el efecto del sustrato sobre variables del crecimiento y calidad de planta terminada de nochebuena de interior y su interacción con las cepas comerciales de Trichoderma spp. Materiales y métodos 555 Mexico, comprised mainly by oak leaves and pine acicular; inorganic components of mixtures include material such as “tezontle” and “tepojal”, both from organic origin, locally obtained in the case of first, and in locality of Calimaya, Estate of Mexico, the latter; the third inorganic component commonly used is agrolita, produced by industrial process which involves perlite expansion at high temperatures. During plants cultivation in container, is fundamental selection of substrate with suitable physical and chemical properties, due reduced volume in which roots develop (Caron and Rivière, 2003), in comparison when they develop in soil. From microbiological point of view, several reports give significant interactions between substrate nature and development of beneficial microorganisms, in some cases in positive way (Callejas-Ruiz et al., 2009) or negative in others (Vestverg and Kukkonen, 2007). In diverse studies suppressive effects of substrates on development of root pathogens are reported, specially with compost addition (Yogev et al., 2006; Raviv, 2007; Pane et al., 2011). Currently, in Morelos, the most demanded two varieties of poinsettia for indoors are Freedom Red and Prestige Red, both reported as susceptible to wilting by root rot. In this way, aims of this study were: a) define biocontrol feasibility on indoors poinsettia root rot in both varieties, by inoculation of commercial Trichoderma spp., strains; and b) to define effect of substrate on growth and plant quality variables for indoors poinsettia and its interaction with commercial Trichoderma spp., strains. Materials and methods Experiment site Essay was performed in greenhouse located in Tetela del Monte, Cuernavaca, Morelos, at 2 200 masl, 18° 58' 0" northern latitude and 99° 15' 0" west longitude. Structure is metallic, with white polyethylene on roof, 30% transferability and shade net with 50% transferability in walls. Sitio experimental Design of treatments and experimental design El ensayo se llevó a cabo en un vivero ubicado en la localidad de Tetela del Monte, Cuernavaca, Morelos, a 2 200 msnm, 18° 58' 0" latitud norte y 99° 15' 0" longitud oeste. La It was used a complete 4 x 3 x 2 factorial treatments design. The first factor had four levels: three commercial strains of Trichoderma spp., locally available, a) c1= FithanMR, c2= Felipe de Jesús Osuna-Canizalez et al. 556 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 estructura es metálica, con polietileno blanco-lechoso en el techo, con transmisividad 30% y malla sombra con 50% de transmisividad, en las paredes. Diseño de tratamientos y diseño experimental Se utilizó un diseño de tratamientos factorial completo 4 x 3 x 2. El primer factor constó de cuatro niveles: tres cepas comerciales de Trichoderma spp., disponibles localmente, a) c1= FithanMR, c2= Trico-BioMR, c3= BactivaMR; el testigo químico fue el cuarto nivel, en el que se realizaron cuatro aplicaciones de fungicidas químicos (1) Carbendazim; 2) Metalaxil; 3) Captan; y 4) Carbendazim). El factor dos fueron los sustratos, con tres niveles: S1= “tierra de hoja” (70%) + tezontle grueso (15%) + tezontle fino (10%) + agrolita (5%); S2= turba + fibra de coco (80% y 20%, respectivamente); y S3= “tierra de hoja” (70%) + “tepojal” (30%) (sustrato tradicional); en todos los casos, la proporción se expresa en términos de v/v. El tercer factor correspondió a las dos variedades más comunes en el estado de Morelos, Freedom Red y Prestige Red, ambas de flor roja. Los 24 tratamientos formados se evaluaron en un diseño completamente al azar con seis repeticiones. La unidad experimental constó de una maceta con 1.8 L de sustrato y una planta. Sustratos Una vez mezclados los diferentes componentes, los sustratos se analizaron en laboratorio para determinar algunas propiedades físicas como densidad aparente, densidad real, espacio poroso total, así como proporción de agua, aire y material sólido a capacidad de contenedor; las determinaciones se llevaron a cabo en un medidor de tres fases del suelo, marca Daiki, modelo DIK 1120, con modificaciones al protocolo para adaptarlo a sustratos; dicha modificación consistió en tomar la muestra de cada sustrato a capacidad de contenedor, mediante el cilindro metálico de volumen conocido que normalmente se usa para tomar muestras de suelo en campo, para de ahí determinar en el equipo las proporciones de aire, sólidos y agua presentes en la muestra de sustrato. Las propiedades químicas evaluadas fueron pH y conductividad eléctrica, usando una proporción sustrato: agua de 1:1.5. Los sustratos no se esterilizaron previo a su uso. También se determinó la presencia de Trichoderma spp., en los sustratos previo a su utilización, mediante la técnica de dilución en placa, usando PDA(39 g L-1) y rosa de bengala (50 ppm) más sulfato de estreptomicina (48 ppm) para prevenir crecimiento de bacterias, ajustando el medio a pH= 3.5 con ácido láctico. Las cajas con cada sustrato en medio de cultivo se incubaron Trico-BioMR, c3= BactivaMR; chemical control was fourth level, in which four application of chemical fungicides were performed: 1) Carbendazim; 2) Metalaxil; 3) Captan; and 4) Carbendazim. Second factor was substrates, with three levels: S1= “organic soil” (70%) + thick tezontle (15%) + thin tezontle (10%) + agrolita (5%); S2= peat moss + coconut fiber (80% and 20%, respectively); and S3= “organic soil” (70%) + “tepojal” (30%) (normal substrate); in all cases, proportion is expressed in terms of v/v. Third factor was two most common varieties in state of Morelos: Freedom Red and Prestige Red, both have red flowers. 24 treatments were assessed in completely random design with six repetitions. Experimental unit consisted in a pot with 1.8 L of substrate and a plant. Substrates Once different components are mixed, substrates were analyzed in laboratory to determine some physical properties like apparent density, real density, total porous space, as well as water, air and solid material proportion at container capacity; calculations were made in a three phase soil device, Daiki model DIK 1120, with modifications to protocol to adapt it to substrates; such modification consisted in taking each sample of substrate at container capacity, by means of known volume metallic cylinder normally used in field, for defining in equipment air, solids and water proportions existing in substrate sample. Chemical properties assessed were pH and electric conductivity, using proportion substrate:water 1:1.5. Substrates were not sterilized previous to use. Also presence of Trichoderma spp., in substrates previous to its use, by plate dilution technique, using PDA (39 g L-1) and rose bengal (50 ppm) plus streptomycin sulfate (48 ppm) to prevent bacteria growth, adjusting medium at pH= 3.5 with lactic acid. Boxes with each substrate in culture medium were incubated at 25 ºC in darkness; after 48 hours observations started to morphologically identify colonies, and then see structures in microscope, and with help of Barnet and Hunter guides (1972), determine presence of Trichoderma spp.; finally substrate UFC g-1 were quantified. Substrates properties are listed in Table 1. Vegetable material Rooting cuts of Freedom Red and Prestige Red poinsettia cultivars of 32 days of age were used, which were developed in the same site of experiment. Biocontrol de la pudrición de raíz de nochebuena de interior con Trichoderma spp. a 25 ºC en la oscuridad; transcurridas 48 horas se iniciaron las observaciones para identificar morfológicamente las colonias, para después observar estructuras en el microscopio, y con el auxilio de las claves de Barnet y Hunter (1972), determinar la presencia de Trichoderma spp.; finalmente se cuantificaron las UFC g-1 de sustrato. Las propiedades de los sustratos se muestran en el Cuadro 1. 557 Cuadro 1. Propiedades químicas y físicas (a capacidad de contenedor) de los sustratos evaluados. Table 1. Chemical and physical properties (at pot capacity) of assessed substrates. Material vegetal Se utilizaron esquejes enraizados de los cultivares de nochebuena Freedom Red y Prestige Red, de 32 días de edad, desarrollados en el mismo sitio experimental. Inoculación y reinoculación de Trichoderma spp. La inoculación inicial se llevó a cabo tres días después del trasplante (ddt), en dosis de 1 ml L-1 de agua en el caso de FithanMR y Trico-BioMR y 1 g L-1 en el caso de BactivaMR; esta y las siguientes inoculaciones se hicieron durante los riegos. Se realizaron cuatro reinoculaciones de las cepas comerciales, en las dosis indicadas; la decisión de reinocular se tomó con base en muestreos periódicos de sustrato, mediante el siguiente procedimiento: se invertía la maceta y se extraía la planta con cepellón, tomando cuidadosamente alrededor de 15 g de sustrato en total, de tres partes del cepellón. En el último muestreo se tomaron tres repeticiones por tratamiento y se analizaron por separado para realizar análisis estadístico; en todos los muestreos previos se formaron muestras compuestas, considerando el sustrato de cada repetición como una submuestra. Se decidía reinocular cuando en el sustrato de alguno de los tratamientos de biocontrol se presentaba conteos bajos, con tendencia a cero, de UFC de Trichoderma. Variables del crecimiento y color de brácteas Se midieron las variables altura de planta en seis repeticiones, así como el número de tallos, hojas y brácteas, en tres repeticiones por tratamiento; el color se midió en una bráctea totalmente pigmentada, con un espectrofotómetro X-Rite, Modelo 3960. Debido a su ciclo más corto, en Freedom Red las mediciones se hicieron a los 161 ddt, mientras que en Prestige Red se realizaron a los 189 ddt. pH CE (dS m-1) Da (g cm-3)y CA (%)x EPT (%)w MS (%)v Sustrato 1z 5.33 0.28 0.33 63.49 85.67 14.33 Sustrato 2 6.0 0.62 0.12 25.68 90.38 9.62 Sustrato 3 6.23 2.08 0.52 41.76 77.66 22.33 Sustrato 1: “tierra de hoja” (70% v/v); tezontle grueso (15% v/v), agrolita (10% v/v); tezontle fino (5% v/v); sustrato 2: turba (Sunchine Mix 1, 80% v/v); fibra de coco (20% v/v); sustrato 3: “tierra de hoja” (70% v/v); “tepojal” (30% v/v); yDa= densidad aparente; xcapacidad de aireación; wEPT= espacio poroso total; vmaterial sólido. Propiedades físicas a capacidad de contenedor. z Inoculation and re-inoculation of Trichoderma spp. Initial inoculation was performed three days after transplant (ddt), at a dose of 1 ml L-1 of water in case of FithanMR and Trico-BioMR; and 1 g L-1 in case of BactivaMR; this and the following inoculations were made during irrigations. Four re-inoculations of commercial strains were made, at indicated doses; decision to inoculate was taken based on periodic samples of substrate, by the following procedure: pot was put upside down and plant was extracted with plug, carefully taking 15 g of substrate, from three portions of plug. In the last sampling three repetitions per treatment were taken and analyzed individually to make statistical analysis; in all previous sampling compound samples were formed, considering each substrate of each repetition as sub-sample. It was decided to re-inoculate when substrate of any of biocontrol treatments showed low count, with trend to null, of UFC of Trichoderma. Variables of growth and bracts color In six repetitions height plant variables were measured, as well as number of stems, leaves and bracts, in three repetitions per treatment; color was measured in a totally pigmented bract, by X-Rite, model 3960 spectrophotometer. Due its shorter cycle, in cv Freedom Red measurements were made at 161 ddt, while in cv Prestige Red were made at 189 ddt. Evaluación de pudrición de la raíz Assessment of root rot Se realizaron observaciones semanales para detectar síntomas de pudrición de la raíz (García et al., 2009). Cuando aparecieron plantas enfermas, se llevaron a laboratorio y Weekly observations were made to detect root rot symptoms (García et al., 2009). When ill plants emerged, they were taken to the laboratory and a standard procedure was Felipe de Jesús Osuna-Canizalez et al. 558 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 se siguió un procedimiento estándar mediante el cual se colocaron trozos de raíz en un medio con PDA, se incubó por 72 h a 25 °C en la oscuridad, después de lo cual, las colonias desarrolladas se identificaron morfológicamente y microscópicamente con base en las claves de Barnett y Hunter (1972) y Toussoun y Nelson (1976). Análisis estadístico Se realizó un análisis de varianza a los resultados de las variables evaluadas, utilizando el procedimiento GLM del paquete estadístico SAS 2000, versión 8.1. En función de los resultados del análisis de varianza, se realizaron comparaciones de medias de tratamientos, de acuerdo con la prueba de Tukey, con el mismo paquete estadístico. Resultados followed, in which portions of root were put in medium with PDA, it was incubated during 72 h at 25 °C in darkness, then the developed colonies were morphologically identified based on Barnett and Hunter (1972) and Toussoun and Nelson (1976) guides. Statistical analysis To results of assessed variables an analysis of variance is applied, using GLM procedure of SAS 2000, versión 8.1, statistic software. In function of anova results, comparisons of treatments average were made, according to Tukey test, with the same software. Results Growth of Trichoderma spp. Crecimiento de Trichoderma spp. No se presentaron diferencias significativas en el número de UFC g -1 de sustrato, entre las diferentes cepas evaluadas, ni entre estas y el testigo químico, en el que no se inoculó artificialmente a Trichoderma spp. (Cuadro 2). There were no significant differences in value of UFC g-1 of substrate, between different assessed strains, either between them and chemical control, in which Trichoderma spp. was not artificially inoculated (Table 2). In samples of different substrates, taken before assessment and analyzed in laboratory, presence of Trichoderma spp., was detected in “organic soil” (69 UFC g-1), in peat moss Cuadro 2. Población de Trichoderma en el sustrato, en función de la cepa comercial inoculada (muestreo al final del ciclo del cultivo). Table 2. Population of Trichoderma in the substrate, in function of inoculated commercial strain (sampling at end of crop cycle). Cepa comercial FithanMR Trico-BioMR BactivaMR Testigo químico UFC g-1 1 558 az 1 614 a 1 633 a 1 400 a Medias con la misma letra son iguales (Tukey, p≤ 0.05). z En las muestras de los diferentes sustratos, tomadas antes del establecimiento del ensayo y analizadas en laboratorio, se detectó la presencia de Trichoderma spp., en la “tierra de hoja” (69 UFC g-1), en la turba (1 400 UFC g-1) y en la fibra de coco (100 UFC g-1); en los sustratos inorgánicos (tezontle en sus dos granulometrías, tepojal y agrolita) no se detectó la presencia de Trichoderma. En lo que respecta al efecto del sustrato sobre la población de Trichoderma al final del ciclo del cultivo, no hubo diferencias estadísticas significativas (Cuadro 3). (1 400 UFC g-1) and in coconut fiber (100 UFC g-1); in the inorganic substrates (tezontle in its two granulometries, tepojal and agrolita) presence of Trichoderma was not detected. About effect of substrate on Trichoderma population at the end of crop cycle, there were no significant statistical differences (Table 3). Finally, Trichoderma populations in the substrate were not affected by used variety (Table 4). Biocontrol de la pudrición de raíz de nochebuena de interior con Trichoderma spp. Cuadro 3. Población de Trichoderma en el último muestreo, en función del sustrato utilizado. Table 3. Trichoderma population in last sampling, in function of used substrate. Sustratoz UFC g-1 S1 1543 aby S2 1225 b 559 Cuadro 4. Población de Trichoderma en el sustrato, en función de la variedad cultivada. Table 4. Trichoderma population in the substrate, in function of cultivated variety. S3 1906 a S1: “tierra de hoja” (70% v/v); tezontle grueso (15% v/v); agrolita (10% v/v); tezontle fino (5% v/v); S2: turba (Sunchine Mix 1, 80% v/v); fibra de coco (20% v/v); S3: “tierra de hoja” (70% v/v); “tepojal” (30% v/v). b) medias con la misma letra son iguales (Tukey, p≤ 0.05). z Finalmente, las poblaciones de Trichoderma en el sustrato no fueron afectadas por la variedad utilizada (Cuadro 4). Pudrición de raíz En general, se tuvo una incidencia baja de plantas con pudrición de la raíz (Cuadro 5); la enfermedad se presentó solamente en la variedad Prestige Red y se asoció con el sustrato de turba+fibra de coco, debido probablemente a su elevada retención de humedad (Cuadro 1). Variedad Freedom Red Prestige UFC g 1604 a 1512 a -1 z Medias con la misma letra son iguales (Tukey, p≤ 0.05). z Root rot In general, low incidence of plants with root rot was obtained (Table 5); disease only emerged in cv Prestige Red and it was related with peat moss+coconut fiber substrate, probably due its high humidity retention (Table 1). In roots with ill plants Fusarium sp., and Trichoderma spp., were the predominant ones; Fusarium spp., was detected in all ill plants of essay (5 of 5), while Trichoderma was found in 3 of 5 ill plants. Cuadro 5. Efecto de los factores evaluados sobre la presencia de plantas con pudrición de la raíz y patógenos identificados. Table 5. Effect of assessed factors on plants with presence of root rot and identified pathogens. Factor Plantas con pudrición de raíz Hongos identificados FithanMR Trico-BioMR BactivaMR 1 1 2 Fusarium spp., Trichoderma spp., Rhizopus oryzae Fusarium spp., Trichoderma spp. Fusarium spp., Rhizopus oryzae Testigo químico Sustratoz S1 1 Fusarium spp., Trichoderma spp., Rhizopus oryzae Cepa comercial 1 Fusarium spp., Trichoderma spp. S2 3 Fusarium spp., Rhizopus oryzae S3 Variedad Freedom Red Prestige Red 1 Fusarium spp., Rhizopus oryzae, Trichoderma spp. 0 5 S1= tierra de hoja (70% v/v); tezontle grueso (15% v/v); agrolita (10% v/v); tezontle fino (5 % v/v); S2= turba (Sunchine Mix 1, 80% v/v), fibra de coco (20% v/v); S3= tierra de hoja (70% v/v); tepojal (30% v/v). z En las raíces de plantas enfermas predominaron Fusarium sp., y Trichoderma spp., Fusarium spp., se detectó en todas las plantas enfermas del ensayo (5 de 5), mientras que Trichoderma se encontró en 3 de 5 plantas enfermas. Growth variables and bracts color No significant effect was found on inoculated Trichoderma strains, on variables of plant growth nor color; the components of color, chromatic and luminosity, got Felipe de Jesús Osuna-Canizalez et al. 560 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Variables del crecimiento y color de brácteas No se encontró efecto significativo de las cepas de Trichoderma inoculadas, sobre variables del crecimiento de la planta ni sobre el color; los componentes de color, croma y luminosidad, tuvieron valores más altos (p≤ 0.05) en el testigo químico, comparado con los tratamientos que incluyeron inoculación artificial (Cuadro 6). higher values (p≤ 0.05) in chemical control, compared to treatments that included artificial inoculation (Table 6). Substrate 1 got higher values (p≤ 0.05) of variables plant height and number of leaves, regards the other two substrates; substrate 3 (commercial control), got lower values (p≤ 0.05) from all growth variables, while in substrate 2 there were no found Cuadro 6. Efecto de los factores evaluados sobre variables del crecimiento y componentes del color de las brácteas. Table 6. Effect of assessed factors on variables growth and bracts color components. Factor Altura cm Núm. tallos Color Núm. hojas Núm. brácteas Luminosidad Croma Hue Cepa comercial FithanMR 31.11 az 12.41 a 83.75 a 170.46 a 30.36 b 53.66 b 24.85 a Trico-BioMR 32.21 a 13.04 a 87.16 a 173.00 a 30.28 b 53.14 b 25.62 a Bactiva 32.72 a 13.33 a 88.16 a 179.92 a 30.76 b 54.75 b 25.27 a 12.91 a 91.04 a 186.38 a 31.93 a 55.38 a 24.98 a MR Testigo químico 31.42 a Sustratoy S1 34.20 a 13.06 a S2 30.93 b 13.18 a S3 30.45 b Freedom Red Prestige Red 104.81 a 181.78 a 30.86 a 53.79 a 25.37 a 80.93 b 202.66 a 31.48 a 55.11 a 25.05 a 12.53 b 76.84 b 147.88 b 30.16 a 53.80 a 25.19 a 36.69 a 12.10 b 78.22 b 210.06 a 32.36 a 54.93 a 24.89 a 27.15 b 13.75 a 96.83 a 144.81 b 29.24 b 53.40 b 25.51 b Variedad Dentro de columnas, medias con la misma letra son iguales (Tukey, P≤ 0.05). yS1= tierra de hoja (70% v/v); tezontle grueso (15% v/v), agrolita (10% v/v); tezontle fino (5% v/v); S2= turba (Sunchine Mix 1, 80% v/v); fibra de coco (20 % v/v); S3= tierra de hoja (70% v/v); tepojal (30% v/v). z El sustrato 1 tuvo valores más altos (p≤ 0.05) de las variables altura de planta y número de hojas, respecto a los otros dos sustratos; el sustrato 3 (testigo comercial), tuvo los valores más bajos (p≤ 0.05) de todas las variables del crecimiento, mientras que en el sustrato 2 no se encontraron diferencias significativas con el sustrato 1 en las variables número de tallos y número de brácteas (Cuadro 6). Ningún componente del color fue afectado significativamente por el factor sustratos (Cuadro 6). Entre variedades, Freedom Red presentó valores más altos (p≤ 0.05) en las variables altura y número de brácteas, así como en todos los componentes del color; Prestige Red tuvo mayor número de tallos y hojas en comparación con Freedom Red (Cuadro 6). significant differences with substrate 1 in variables number of stems and number of bracts (Table 6). None color components were significantly affected by factor substrates (Table 6). Between varieties, Freedom Red showed higher values (p≤ 0.05) in variables height and number of bracts, as well in all color components; Prestige Red got higher number of stems and leaves if compared to Freedom Red (Table 6). Discussion The obtained results show that is possible improve root rot issue handling on indoors poinsettia by inoculation of Trichoderma commercial strains, without using chemical Biocontrol de la pudrición de raíz de nochebuena de interior con Trichoderma spp. Discusión Los resultados obtenidos muestran que es posible manejar el problema de pudrición de la raíz de nochebuena de interior mediante la inoculación de cepas comerciales de Trichoderma, sin recurrir al uso de productos químicos. Las tres cepas comerciales evaluadas se pueden obtener sin problemas en las empresas que distribuyen agroquímicos localmente y la facilidad de su aplicación hace viable su utilización a nivel comercial. El uso indiscriminado de agroquímicos es una práctica común en los viveros de producción de nochebuena de interior (García, 2008); ésta práctica se ve agravada por el hecho de que las plantas se producen en ambientes cerrados o semicerrados y porque la mayoría de las zonas productoras se ubican en áreas urbanas o periurbanas. El uso de agentes de biocontrol en el manejo de diversas enfermedades de plantas, así como otras estrategias bioracionales como el uso de extractos botánicos para el control de plagas, son alternativas que deben explorarse para reducir los riesgos del uso de agroquímicos en la salud humana y en los ecosistemas. En este sentido, la utilización de Trichoderma spp., en el manejo de enfermedades que atacan a las raíces de las plantas se ha documentado con amplitud (Harman, 2000; Harman et al., 2004). A pesar de que en los últimos años se ha incrementado el número de agentes biológicos de control disponibles en el mercado, éstos sólo representan 0.02% (Paulitz, 2001) al 1% (Fravel, 2005) de las ventas totales a nivel mundial, en comparación con los agroquímicos. En todos los componentes orgánicos de los sustratos evaluados se encontraron cepas nativas de Trichoderma sp., en las pruebas de laboratorio realizadas antes del inicio de los ensayos. En la “tierra de hoja” ya se tenían antecedentes de este hecho, en evaluaciones previas realizadas por nuestro grupo (no publicadas); al respecto, Callejas-Ruiz et al. (2009), reportan la presencia de cepas nativas de micorriza en la “tierra de hoja”, en un ensayo con nochebuena cv. Supjibi. Por otro lado, no se esperaba encontrar Trichoderma en turba o en fibra de coco, tal como ocurrió, ya que se asegura por parte de las empresas productoras, que estos sustratos son esterilizados, regularmente con vapor de agua, previo a su venta. Al respecto cabe señalar reportes sobre la tolerancia de Trichoderma a altas temperaturas (Montero-Barrientos et al., 2007; 2008) y otros estreses abióticos (Montero et al., 2010), lo cual podría explicar su presencia en el material original previo al ensayo. 561 products. In companies that locally distribute agrochemicals the three assessed commercial strains can be in easy obtained, and its simple handling makes viable its use at commercial level. Indiscriminate use of agrochemicals is a common practice in greenhouses producing indoor poinsettia (García, 2008); this practice is worsen by the fact that plants are harvested in closed or semi-closed environments and because most of producing areas are located in urban or periurban zones. Biocontrol agents used for handling diverse plant diseases, as well as other biologic rational strategies like botanic extracts for plague control, are alternatives that would be explored to reduce agrochemical application risk for human health and ecosystems. In this sense, Trichoderma spp., use for handling diseases that attack plant’s root as been widely documented (Harman, 2000; Harman et al., 2004). Despite in last year number of available biological control agents in the market has increased, compared to agrochemicals, they only represent from 0.02% (Paulitz, 2001) to 1% (Fravel, 2005) of total worldwide sales. In the laboratory tests performed before beginning essays, in all organic components of assessed substrates native strains of Trichoderma sp., were found. Previous assessments not published made by our team about this issue were already recorded for “organic soil”; Callejas-Ruiz et al. (2009), report presence of native Straits of mycorrhiza in “organic soil”, in an assessment with poinsettia cv. Supjibi. On the other hand, it was not expected to find Trichoderma in peat moss or coconut fiber, like it did, since producer companies assure that such substrates are regularly sterilized with water steam pervious to sale. In this regard, there are reports about Trichoderma tolerance to high temperatures (Montero-Barrientos et al., 2007; 2008) and to other abiotic stress (Montero et al., 2010), which would explain its presence in material previous to assessment. Under assessment conditions, native strains apparently grew in suitable way, since their populations in the substrate in the treatments without inoculation of commercial strains were the same (p≤ 0.05) as the quantified in treatments where artificial inoculation was made (Table 2 and Table 3). Root rot incidence was clearly related with variety and substrate (Table 5). Variety Prestige Red is expected to take part of market share of cv Freedom Red, the most popular Felipe de Jesús Osuna-Canizalez et al. 562 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Bajo las condiciones del ensayo, las cepas nativas al parecer crecieron adecuadamente, ya que sus poblaciones en el sustrato, en los tratamientos sin inoculación de cepas comerciales, fueron iguales (p≤ 0.05) a las cuantificadas en los tratamientos en que se realizó la inoculación artificial (Cuadros 2 y 3). La incidencia de pudrición de la raíz se asoció claramente con la variedad y con el sustrato (Cuadro 5). Prestige Red es una variedad de nochebuena de interior que se espera ocupe parte del mercado de Freedom Red, la variedad más popular en Morelos; los resultados obtenidos en el estudio muestran una mayor susceptibilidad de Prestige Red a la pudrición de la raíz, lo que motiva una alerta a los productores. De hecho, en los tratamientos que incluyeron Freedom Red no se presentó ninguna planta con pudrición de la raíz. Por otro lado, en la mezcla de turba y fibra de coco se presentó el mayor número de plantas con problemas de secadera (Cuadro 5), lo cual probablemente se debió a la baja capacidad de aireación de este sustrato (Cuadro 1). La planta de nochebuena se considera como demandante intermedia de porosidad de aireación (Johnson, 1968) y probablemente la proporción de poros de aire fue insuficiente en este sustrato. En el caso de turba, se reporta que tiene baja supresividad de patógenos asociados a la raíz (Bonanomi et al., 2007), por lo que regularmente se deben utilizar fungicidas para prevenir damping-off o “secadera”, tanto en la producción de plántulas como en sistemas de cultivo sin suelo en invernadero (Pane et al., 2011). A nivel internacional, la turba es el sustrato orgánico más ampliamente utilizado (Carlile, 2009); la producción anual se estima en 25 millones de m3 (Caron y Rivière, 2003). Por otro lado, la fibra de coco es un sustrato emergente que se pretende sustituya parcialmente a la turba, debido al agotamiento de las reservas mundiales de ésta y a la amplia y sostenida disponibilidad de la fibra de coco (Nichols, 2007); a nivel mundial, se estima que la disponibilidad anual de fibra de coco es alrededor de 8 millones de toneladas con las que pueden cultivarse unas 350 000 ha de invernadero (Nichols y Savidov, 2009). En Morelos y los otros estados productores de ornamentales en la región central de México, los componentes orgánicos más utilizados en la producción en contenedor, son “tierra de hoja” y “ocochal”, los cuales provienen del Estado de México y se obtienen en bosques manejados por comuneros y ejidatarios, con supervisión de variety in Morelos. Results obtained in the study show greater susceptibility to root rot for cv Pretige Red, rising alert to producers. Indeed, in treatments that included cv Freedom Red there was no plant with root rot. On the other hand, in mixture of peat moss and coconut fiber, greater number of plants with wilting issues (Table 5) was seen, probably due to low aeration capacity of this substrate (Table 1). Poinsettia is considered like intermediate aeration porosity requirement plant (Johnson, 1968) and probably the rate of air pores was not enough in this substrate. In the case of peat moss, it is reported that has low suppressive action of root related pathogens (Bonanomi et al., 2007), therefore fungicides should be regularly used in order to prevent damping-off or wilting, as well in seedling productions as in greenhouse harvest systems without soil (Pane et al., 2011). At international level, peat moss is the most widely used organic substrate (Carlile, 2009); yearly production is ca. 25 millions of m3 (Caron and Rivière, 2003). On the other hand, coconut fiber is an emerging substrate that is expected to replace peat moss, due to its worldwide reserves depletion and to the wide and sustained availability of coconut fiber (Nichols, 2007); at world level, it is estimated that yearly availability of coconut fiber is around 8 million of tons which would yield around harvest of 350 000 ha in greenhouse (Nichols and Savidov, 2009). In Morelos and other ornamental plants producer states in Central Mexico, the most used organic components for production in container are “organic soil” and “ocochal”, which come from state of Mexico and come from forest managed by common landers and ejidatarios, under supervision of Federal Attorney for Environmental Protection (PROFEPA). Results of this study show that organic soil is a competitive organic component in poinsettia production, since in suitable proportions, contributes with good physic and microbiologic properties to substrate, such as high total porous space, aeration capacity and native strains of beneficial microorganisms. Conclusions The obtained results showed feasibility of root rot biocontrol for indoor poinsettia by inoculation of substrate with Trichoderma spp., commercial strains. Biocontrol de la pudrición de raíz de nochebuena de interior con Trichoderma spp. Procuraduría Federal de Protección al Medio Ambiente (PROFEPA). Los resultados del presente estudio muestran que la tierra de hoja es un componente orgánico competitivo en la producción de nochebuena, ya que en proporciones adecuadas, aporta buenas propiedades físicas y microbiológicas al sustrato, tales como elevada proporción de espacio poroso total, capacidad de aireación y cepas nativas de microorganismos benéficos. 563 High incidence of root rot was seen in the substrate with peat moss (80% v/v) + cocount fiber (20%), which was related to low aeration capacity of mixture. Native strains of Trichoderma spp., were detected in “organic soil”, peat moss and coconut fiber. Variety Prestige Red showed higher susceptibility to root rot, in comparison to Freedom Red, which had null incidence. End of the English version Conclusiones Los resultados obtenidos mostraron la factibilidad del biocontrol de pudrición de la raíz de nochebuena de interior mediante inoculación del sustrato con las cepas comerciales de Trichoderma spp. La mayor incidencia de pudrición de la raíz se presentó en el sustrato con turba (80% v/v) + fibra de coco (20%), lo cual se asoció con una baja capacidad de aireación de la mezcla. Se detectaron cepas nativas de Trichoderma spp., en la “tierra de hoja”, la turba y fibra de coco. La variedad Prestige Red mostró mayor susceptibilidad a pudrición de la raíz, en comparación con Freedom Red, que tuvo cero incidencia. Literatura citada Anónimo. 2009. Estadísticas de producción: nochebuena. (SAGARPA-SIAP). Barnet, H. L. and Hunter, B. B. 1972. Ilustrated genera of imperfect fungi. 3rd. Edition. Burgess Publishing Co. Minneapolis, Minnesota. USA. 214 p. Bonanomi, G.; Antignani, V.; Pane, C. and Scala, F. 2007. Suppression of soilborne fungal diseases with organic amendments. J. Plant Pathol. 89:311-324. Callejas-Ruíz, B. A.; Castillo-González, A. M.; ColinasLeón, M. T.; González-Chávez, M. Del C.; PinedaPineda, J. y Valdez-Aguilar, L. A. 2009. Sustratos y hongos micorrízicos arbusculares en la producción de nochebuena. Rev. Chapingo Serie Hortic. 15(1):57-66. Carlile, B. 2009. Organic materials for growing media in Europe: current and future scenarios. Proceedings of the 18th Symposium of the International Scientific Centre of Fertilizer. Rome, Italy. 8-12 pp. Caron, J. and Rivière, L. M. 2003. Quality of peat substrates for plants grown in containers. In: organics soils and peat materials for sustainable agriculture. Parent, L.-E. and Ilnicki, P. (eds.). CRC Press LLC (eBook ISBN: 978-1-4200-4009-8, DOI: 10.1201/9781420040098.ch4). Fravel, D. R. 2005. Commercialization and implementation of biocontrol. Annual Review of Phytopathology 438:337-359. García, A. 2008. Producción de nochebuena planta terminada. M emoria del 7º . S impos ium Internacional de Viverismo. Casasano, Cuautla, Morelos. 63-77 pp. García, P. F.; Ramírez, R. S.; Osuna, C. F. J. y Ocampo, T. 2009. Enfermedades de las principales ornamentales en Morelos. SAGARPA. INIFAP. Campo Experimental Zacatepec. Folleto técnico Núm. 39. 30 p. Harman, G. E. 2000. Myths and dogmas of biocontrol: changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T-22. Plant Dis. 84:377-393. Harman, G. E; Lorito, M. and Lynch, J. M. 2004. Uses of Trichoderma spp. to alleviate or remediate soil and water pollution. Adv. App. Microbiol. 56:313-30. Johnson, P. 1968. Horticultural and agricultural uses of sawdust and soil amendments. Paul Johnson, National City, CA. 46 p. Lorito, M.; Sheridan, L. W.; Harman, G. E. and Monte, E. 2010. Translational research on Trichoderma: from ‘omics to the field. Ann. Rev. Phytopathol. 48:395-417. Montero-Barrientos, M; Cardoza, R. E.; Gutierrez, S.; Monte, E. and Hermosa, R. 2007. The heterologous overexpression of hsp23, a small heat-shock protein gene from Trichoderma virens, confers thermotolerance to T. harzianum. Current. Genetics 52:45-53. 564 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Montero-Barrientos, M.; Hermosa, R.; Nicolas, C.; Cardoza, R. E.; Gutiérrez, S. and Monte, E. 2008. Overexpression of a Trichoderma HSP70 gene increases fungal resistance to heat and other abiotic stresses. Fungal Gen. Biol. 45:1506-13. Montero-Barrientos, M; Hermosa, R.; Cardoza, R.; Gutiérrez, S.; Nicolás, C. and Monte, E. 2010. Transgenic expression of the Trichoderma harzianum hsp70 gene increases Arabidopsis resistance to heat and other abiotic stresses. J. Plant Physiol. 167:659-65. Nichols, M. A. 2007. Coir - a XXIst Century sustainable growing medium. Acta Hortic. 747:91-95. Nichols, M. A. and Savidov, N. A. 2009. Recent advances in coir as a growing medium. Acta Hortic. 843:333-336. Pane, C.; Spaccini, R.; Piccolo, A.; Scala, F. and Bonanom; G. I. 2011. Compost amendments enhance peat suppressiveness to Pythium ultimum, Rhizoctonia solani and Sclerotinia minor. Biological Control 56:115-124. Paulitz, T. C. 2001. Biological control in greenhouse systems. Ann. Rev. Phytopathol. 39:103-133. Felipe de Jesús Osuna-Canizalez et al. Raviv, M. 2007. Recent advances in soil-borne disease control using suppressive media. Acta Hortic. 819:125-134. Statistical Analysis System (SAS). 2000. User´s Guide Release 8.1. (Eds.). SAS Institute, Inc. Cary, NC. Shoresh, M.; Harman, G. E. and Mastouri, F. 2010. Induced systemic resistance and plant responses to fungal biocontrol agents. Ann. Rev. Phytopathol. 48:1-23. Toussoun, T. A. and Nelson, P. E. 1976. Fusarium. A pictorial guide to the identification of Fusarium species according to the taxonomic system of Snyder and Hansen. 2nd Edition. Pennsylvania State University. USA. 39 p. Vestberg, M. and Kukkonen, S. 2007. Microbiologically mproved peat-based media for nursery production by addition of arbuscular mycorrhizal fungi. Acta Hortic. 819:403-410. Yogev, A.; Raviv, M.; Hadar, Y.; Cohen, R. and Katan, J. 2006. Plant waste-based composts suppressive to diseases caused by pathogenic Fusarium oxysporum. Europ. J. Plant Pathol. 116:267-278. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 2 1 de marzo - 30 de abril, 2012 p. 565-578 Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México* Marketing network and profitability of cut flower for Mexicali Valley, Baja California, Mexico Blancka Yesenia Samaniego-Gámez1, Gloria Virginia Cano-García2, María Teresa Beryl Colinas-León2, Carlos Sánchez-Abarca2 y Alejandro Manzo-González2 Instituto de Ciencias Agrícolas. Universidad Autónoma de Baja California. Carretera a Delta s/n C. P. 21705. Tel: 6861715001. Ejido Nuevo León, Baja California, México. Departamento de Fitotecnia. Universidad Autónoma Chapingo. Carretera México-Texcoco, km 38.5.Chapingo, C. P. 56230, Estado de México. Tel. 595 95 21500. (gloria. [email protected]), ([email protected]), ([email protected]), ([email protected]). §Autora para correspondencia: [email protected]. 1 2 Resumen Abstract La comercialización de flor de corte para Baja California aportó durante 2004 poco más de 122 millones de pesos, considerando semilla para flor y producción de flor de corte. Debido a la exportación de casi la totalidad de la producción estatal de flor cortada, el mercado local representa una oportunidad para la introducción de productos de calidad a precios competitivos de empresas nacionales, siendo Mexicali una ciudad cercana Estados Unidos de América, y aunado al poder adquisitivo de la población es la rentabilidad de las producciones de algodón y hortalizas del Valle de Mexicali, una de las principales zonas productoras del país. Por lo anterior y aunado al importante número de florerías localizadas en la zona se planteó como objetivo describir la red de mercadeo y rentabilidad de la flor de corte en el Valle de Mexicali. Se realizó un estudio de mercado y el diagnóstico para elaborar el análisis FODA, se determinaron las estrategias para el aprovechamiento del potencial económico. El sistema de redes de distribución y mercadeo actual consiste en trasladar las flores de corte desde los centros de producción, Córdoba, Veracruz y distrito de Coatepec Harinas, Estado de México, hasta el Valle de Mexicali, Baja California conservando la calidad y óptima vida de florero hasta su consumo final, asimismo, se requiere de una adecuada planeación de la cadena Cut flower commercialization for Baja California contributed during 2004 with more than 122 million pesos, considering flower seed and cut flower production. Most of cut flowers produced in state of Baja California Norte is for export market, by this reason local market means an opportunity for introducing quality products at market prices from national companies. Mexicali city, by being near USA and together with its population economic wealth thanks to profitability of cotton and orchards production in Mexicali Valley, is one or the main producer region in the country. By this reason and thanks to great amount of flower shops located in the region the aim of describing marketing network and profitability for cut flower in Mexicali Valley is proposed. Market study and diagnose to make FODA analysis were developed, defining strategies in order to seize economic potential. Actual distribution networks and marketing system consist in moving cut flowers from production centers, Córdoba, Veracruz and Coatepec de Harinas district, state of Mexico, up to Mexicali Valley, Baja California, keeping quality and optimum vase life for final customer, also proper planning for production chain due not covered demand along year it is required, the population has economical potential and tradition to give f lowers guaranteeing good profitability. Roses (Rosa gigantea and * Recibido: junio de 2011 Aceptado: febrero de 2012 Blancka Yesenia Samaniego-Gámez et al. 566 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 productiva debido a la presencia de una demanda insatisfecha a lo largo del año, la población cuenta con el potencial económico y la tradición de obsequiar flores lo cual garantiza una buena rentabilidad. Las especies de mayor interés de los consumidores son rosas (Rosa gigantea y R. chinensis L.), lilis asiáticas (Lilium spp.), polar [Dendranthema x grandiflorum (Ramat) Kitamura c. v. Polaris White], clavel (Dianthus caryophyllus), gerbera (Gerbera jamesonii H. Bolux ex Hook F.) y lilis orientales (Lilium spp.). R. chinensis L.), asian lilies (Lilium spp.), chrysanthemum [Dendranthema x grandiflorum (Ramat) Kitamura c. v. Polaris White], carnation (Dianthus caryophyllus), gerbera (Gerbera jamesonii H. Bolux ex Hook F.) and oriental lilies (Lilium spp.) are species with more consumers’ interest. Palabras clave: análisis FODA, cadena productiva, comercialización, potencial económico, producción de flores. Introduction Introducción Las flores de corte -y los productos derivados de su cultivoson bienes suntuarios, cuyo consumo está relacionado con el nivel de ingresos, tendencias de la moda, hábitos, gustos y preferencias de las personas; haciendo que su demanda sea inestable y variable en el tiempo, destacándose como uno de los detonadores económicos más importantes del sector agrícola (Chedid, 2008; Gómez y Jiménez, 2008; Rubí et al., 2009). Esta dinámica también provoca la entrada en el mercado de nuevos actores que ven en las flores de corte un potencial de exportación y de mejora en los niveles de ingreso, especialmente para los países en desarrollo. No obstante los notables cambios tecnológicos y económicos que ha enfrentado la industria durante los últimos 30 años, el mercado mundial de flores ha mantenido una estructura relativamente rígida en lo referente a los centros de consumo. La demanda por flores de corte y productos afines se concentra principalmente en tres regiones: Europa Occidental, América del Norte y Japón (Oficina de Estudios y Políticas Agrarias, 2007). México posee una gran variedad de condiciones ambientales adecuadas para el desarrollo de la floricultura, se encuentran un amplio número de climas y suelos que permiten el cultivo de innumerables especies ornamentales, siendo comercializadas en mercados interno y externo. Sin embargo, con la entrada en vigor del Tratado de Libre Comercio (TLC) con Estados Unidos de Américas y Canadá surgieron una serie de barreras a la comercialización que evidenciaron la necesidad de estrategias para aprovechar el potencial productivo y aumentar la participación del sector a nivel internacional, mismo que ha sido partícipe en la economía nacional (Mosquera et al., 2010). El cultivo de flores en México ocupó una superficie agrícola para el año Key words: FODA analysis, productive chain, marketing, economical potential, flower production. Cut flowers -and their byproducts- are sumptuous goods, whose consumption is related to income level, fashion trends, habits, preferences and tastes of people; thus making demand unstable and variable along time, outstanding as one of most important triggers for agricultural sector (Chedid, 2008; Gómez and Jiménez, 2008; Rubí et al., 2009). This process also causes introduction of new participants that see cut flowers with export potential and improvement on income levels, especially for countries in development. Despite the remarkable technological and economical changes in the last 30 years, world flowers market has kept a relatively unmodified structure about consumption market. Cut flowers and similar products demand is focused mainly in three regions: Western Europe, North America and Japan (Oficina de Estudios y Políticas Agrarias, 2007). Mexico has great diversity of proper environmental conditions for development of flower horticulture, there are wide number of climates and soils that allow to harvest many ornamental species, being marketed in internal and external markets. However, with the introduction of NAFTA with USA and Canada some marketing barriers arose and showed the need of strategies to seize productive potential and increase share at international level, has it has been in national market (Mosquera et al., 2010). In 2006 flowers crop in Mexico used an agricultural surface of 11 703 hectares, for cut flower production, managed by approximately 10 000 producers (Rijk, 2008), outstanding state of Mexico with a contribution near to 86% of total national surface (Orozco, 2007). For year 2009, national cut flowers production contributed to national economy with $ 2 930 million pesos (SIAP, 2011). Such value includes income by exportation of 12% of production volume, from which 96% go to United States of America and around 4% to Canada (Rijk, 2008). This activity produces in Mexico 225 000 jobs, as well direct as indirect jobs (Orozco, 2007). During 2004 cut flower marketing for Baja Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México 2006 de 11 703 hectáreas, para la producción de flor de corte, generadas por aproximadamente 10 000 productores (Rijk, 2008), destacándose el Estado de México con una aportación cercana a 86% de la superficie total nacional (Orozco, 2007). Para el año 2009, la producción nacional de flores de corte aportó a la economía nacional $ 2 930 millones de pesos (SIAP, 2011). Dicho valor incluye divisas generadas por la exportación de 12% del volumen de la producción, de las cuales 96% se dirigen hacia Estados Unidos de América y alrededor de 4% a Canadá (Rijk, 2008). Esta actividad genera en México 225 000 empleos, tanto directos como indirectos (Orozco, 2007). La comercialización de flor de corte para Baja California aportó durante 2004 poco más de 122 millones de pesos, considerando la semilla para flor y la producción de flor de corte. Debido a la exportación de casi la totalidad de la producción estatal de flor cortada, el mercado local representa una oportunidad para la introducción de productos con buena calidad a precios competitivos de otras empresas nacionales. Mexicali es una de las principales ciudades industrializadas del estado de Baja California y del país, por su cercanía a los Estados Unidos de América un gran número de empresas se han asentado en su territorio, y actualmente es una de las principales ciudades con gran cantidad de maquiladoras a nivel nacional. Asimismo, otro factor que aumenta el poder adquisitivo de la población es la rentabilidad de las producciones de algodón y otras hortalizas en el Valle de Mexicali, una de las principales zonas productoras del país (Consejo Mexicano de la Flor, 2008). La importancia de la producción de hortalizas del Valle de Mexicali radica en la generación de: a) valor, al aportar 42.60 % del total de la producción; b) divisas, al orientarse a la exportación alrededor de 90% de la producción; y c) empleo, ya que genera cerca de 15 000 empleos directos, principalmente durante el ciclo agrícola otoño-invierno (Avendaño y Schwentesius, 2005; Avendaño y Varela, 2010). Por lo anterior y el importante número de florerías localizadas en esta ciudad y en los ejidos del Valle de Mexicali el presente estudio tuvo como objetivo describir la red de mercadeo y rentabilidad de la flor de corte en el Valle de Mexicali, con el fin de determinar su potencial económico. Materiales y métodos El trabajo se realizó en el Valle de Mexicali, el cual pertenece al municipio del mismo nombre, en el estado de Baja California, y se ubica al noroeste de México, dentro 567 California contributed with more than 122 millions of pesos, considering flower seed and cut flower production. Due exportation of almost whole state production, local market is an opportunity for introducing good quality products at competitive prices from other national companies. Mexicali is one of the main industrialized cities in the state of Baja California and in the country, for being near USA many companies have settled within its region, and currently is one of the main cities with many maquila plants at national level. Also, another factor that increases population’s purchasing power is profitability from production of cotton and other orchards in Mexicali valley, one of the main producing zones in the country (Consejo Mexicano de la Flor, 2008). The importance of orchards production in Mexicali valley is based on the creation of: a) value, when contributing with 42.60 % of total production; b) foreign currencies, when focused on exporting around 90% of production; and c) employment, since creates near 15 000 direct jobs, mainly during autumnwinter agricultural cycle (Avendaño and Schwentesius, 2005; Avendaño and Varela, 2010). By this and the great number of flower shops located in the city and in ejidos from Mexicali valley this study had as objective to describe marketing network and profitability for cut flower in Mexicali valley, with the aim to determine its economical potential. Materials and methods The work was performed at Mexicali valley, which belongs to the municipality of the same name, in the state of Baja California, and is located in the northwest of Mexico, within 2009 to 2010 period. Methodology. The following cut flowers species were selected to identify the most selling ones in the market: roses, asian lilies, western lilies, gerberas, peruvian lilies, tulips, chrysanths and carnation. A questionnaire was made for interviews (Bernal-Torres, 2006), based in the following criteria: a) production; b) post-harvest and packing; c) suppliers and localization; d) local and national offer; and e) demand and feasibility of crop growth. Sample size was determined according with formula of finite population (Vargas, 2008). Interviews were done (Tlahuextl et al., 2005) to target wholesalers (6); retailers (flower shops, street sellers, social events organizers) (50); direct consumers (44) also, visits were made to cut f lower distributors on Mexicali city, where interviews were made to target wholesalers and direct Blancka Yesenia Samaniego-Gámez et al. 568 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Canal 1 Canal 2 Canal 2 Canal 1 Canal 1 Canal 2 Canal 1 Canal 2 Canal 3 Figura 1. Canal de comercialización de flor de corte. Figure 1. Commercialization channel for cut flower. CONSUMIDOR Producer sends flower to target wholesaler who sell it directly to final consumer. In this channel origin wholesalers create the highest profits from all channels, since despite offering flowers in packages and not in flower bouquets, it is a product with few cut days then has greater postharvest life, and can be sell to higher price. However, it is done in less percentage in contrast with the other commercialization channels (Figure 1). Minorista Canales de comercialización. La flor de corte distribuida en la ciudad de Mexicali llega allí mediante 3 canales (Figura 1), iniciando por el productor y finalizando con el consumidor final, similares a los reportados en otras zonas de México (Ávila y Calderón, 2009): canal 1: representa 43% del mercadeo de flor de corte realizado en la ciudad. Los productores venden la flor de corte a empresas mayoristas de origen que fungen como acopiadoras de una gran diversidad de especies de flores de corte, las cuales a su vez la distribuyen hacia los mayoristas de destino de la ciudad de Mexicali, mismos quienes la venden a minoristas o florerías, encargados de darle un valor agregado y venderla al consumidor final. Canal 2. Integra 43% del mercadeo en Mexicali, donde el productor comercializa directamente al mayorista de destino la flor, quien la distribuye a los minoristas de la ciudad para ser llevado al consumidor final. En dicho canal, los mayoristas de destino obtienen porcentajes de utilidades mayores a los generados mediante la comercialización del canal 1, debido a la eliminación del costo de venta de los mayoristas de origen; sin embargo, ofrecen sus productos a los minoristas al mismo precio final que en el Canal 1. Canal 3. Representa 14% de la comercialización. Commercialization channel. Cut flower distributed in Mexicali city arrives by three channels (Figure 1), starting with producer and ending with final consumer, similar to reported in other zones of Mexico (Ávila and Calderón, 2009): channel 1: represents 43% of cut flower market done in the city. Producers sell cut flower to wholesaling companies that make stockpiling from great diversity of cut flower species, which in turn distribute towards wholesalers target in Mexicali city, who sell to retailers or flower shops in charge of giving added value and sell them to final consumer. Channel 2. Means 43% of Mexicali market, where producer directly markets to target wholesaler, who distribute them to retailers from the city to be taken to final consumer. In this channel, target wholesalers get profit percentages greater to the ones created by commercialization of channel 1, due elimination of sale cost of origin wholesalers; however, they offer their products to retailers at the same final price that in channel 1. Channel 3. It represents 14% of commercialization. Mayorista de destino Resultados y discusión Results and discussion Mayorista de origen Se realizaron entrevistas (Tlahuextl et al., 2005) a mayoristas de destino (6); minoristas (florerías, vendedores ambulantes, organizadores de eventos sociales) (50); consumidores directos (44) asimismo, se visitaron las distribuidoras de flor de corte de la ciudad de Mexicali, en donde se realizaron las entrevistas a mayoristas de destino de flor y a consumidores directos. Los datos obtenidos se capturaron en el programa EXCEL® para Windows V. 2007, se elaboraron gráficas y cuadros del comportamiento de la comercialización mensual. Se elaboró el análisis FODA con la participación del total de personas entrevistadas, mediante el proceso deductivo. customers. Data obtained were transferred to software EXCEL® for Windows Ver. 2007, graphics were plotted and behavior tables for monthly marketing. FODA analysis was made with contribution of all people interviewed, by deduction process. PRODUCTOR del periodo 2009 a 2010. Metodología. Se seleccionaron las siguientes especies de flores de corte para identificar las de mayor venta en el mercado: rosas, lilis asiáticas, lilis orientales, gerberas, alstroemerias, tulipanes, polares y clavel. Se elaboró un cuestionario para la realización de entrevistas (BernalTorres, 2006), en base a los siguientes criterios: a) producción; b) poscosecha y empacado; c) proveedores y localización; d) oferta local y nacional; y e) demanda y factibilidad de crecimiento del cultivo. El tamaño de la muestra se determinó de acuerdo con la fórmula de población finita (Vargas, 2008). Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México El productor envía la flor al mayorista de destino mismo que vende directamente al consumidor final. En este canal los mayoristas de origen generan las mayores utilidades de todos los canales, ya que a pesar de ofrecer las flores en paquetes y no en arreglos florales, es producto con pocos días de corte por lo que posee una mayor vida poscosecha, y puede ser vendido a precio mayor. Sin embargo, se realiza en porcentaje menor a diferencia del resto de los canales de comercialización (Figura 1). Red de distribución de flor de corte. Por su localización dentro de la república mexicana, la ciudad de Mexicali se encuentra alejada de los principales centros de producción de flor de corte, siendo su mayor abastecedor el estado de México, el cual ha sido reportado como uno de los principales sitios de producción a nivel nacional (Orozco y MendozaMartínez, 2003; Betancourt et al., 2005; Rijk, 2008), debido a lo anterior, para trasladar el producto hasta este mercado se requiere de una logística capaz de conservar la calidad del producto desde su centro de producción hasta su consumo, así como la rentabilidad de la actividad. Los integrantes de dicha red poseen en común al productor, siendo el origen de la materia prima a comercializar, comportamiento similar a lo reportado en redes de comercialización de la Central de Abastos del Distrito Federal, principal centro distribuidor de diversos productos en México (Ávila y Calderón, 2009). Las flores de corte son producidas en Coatapec de Harinas, Villa Guerrero, Tenancingo y Chiltepec, Estado de México, así como en Córdoba, Veracruz, trasladándose de estos sitios a la Central de Abastos de la Ciudad de México y el Mercado de Tenancingo, Estado de México, lugares donde se encuentran establecidos los mayoristas de origen que acopian la flor de corte para ser trasladada hacia los mayoristas de destino a lo largo del país (Orozco, 2007). Red de valor de flor de corte en Mexicali, B. C. N. La red de valor de flor de corte en Mexicali (Figura 2) inicia desde que el productor decide la especie para establecer la producción, generando toda una planeación del cultivo hasta ser entregado al consumidor final. El productor adquiere la semilla, bulbo o esqueje en casas especializadas dedicadas a la venta de material de propagación en Villa Guerrero, Tenancingo, Estado de México. Asimismo, algunos utilizan la importación desde otros países como Holanda para el cultivo de rosas, alstroemerias (Alstroemeria spp. L.), gerberas, anthurios (Anthurium andreanum), tulipanes (Tulipa spp.), orquídeas (Phalaenopsis spp. y Cymbidium spp.), lilis asiáticas y orientales); Perú para la producción de 569 Distribution network for cut flower. Because of its localization in the country, Mexicali city is located far from main cut flower production centers, being state of Mexico the largest supplier, which has been reported like one of the main production sites at national level (Orozco and Mendoza-Martínez, 2003; Betancourt et al., 2005; Rijk, 2008). By this reason, to move product up to this market a logistic system able to keep product quality from its production center to final consumer is required, as well for activity profitability. The actors in this network have in common to producer, who is the source of raw material for this market, behavior similar to reported in commercialization networks from Supply Center at Distrito Federal, main distributing center for several products in Mexico (Ávila and Calderón, 2009). Cut flowers are produced in Coatapec de Harinas, Villa Guerrero, Tenancingo and Chiltepec, state of Mexico, as well in Córdoba, Veracruz, moving from these locations to Supply Center in Mexico City and Tenancingo Market, state of Mexico, places where are set the origin wholesalers who made stockpiling for cut flowers to move them towards target wholesalers along the country (Orozco, 2007). Value network for cut flower in Mexicali, B. C. N. Value network for cut flower in Mexicali (Figure 2) begins when producer decides which species to produce, creating whole crop planning up to delivering to final customer. Producer gets seed, bulb or cutting in specialized stores dedicated to sell propagation material in Villa Guerrero, Tenancingo, state of Mexico. Also, some make importing from other countries like Netherlands for crops of roses, alstroemerias (Alstroemeria spp. L.), gerberas, anthuriums (Anthurium andreanum), tulips (Tulipa spp.), orchids (Phalaenopsis spp. and Cymbidium spp.), asian lilies and western); Perú for production of proteas (Protea spp.), safaris (Leucadendron spp.) and United States supplies gerbera and mini-gerbera (Gerbera jamesonni Bolus). Mexican imports for sow material has considerably increased in the last years. Imports value of cut flowers cuttings has increased from 0.4 million euros in 1996 to 2.6 million euros in 2006. In the same period flower bulbs imports increased from 3.4 to 21 million euros. The variety plant breeder rights are verified only in export product, in Mexico most of production is for local market, which favors illegal appearance of varieties (Rijk, 2008). Blancka Yesenia Samaniego-Gámez et al. 570 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 proteas (Protea spp.), safaris (Leucadendron spp.) y en Estados Unidos se adquiere gerbera y minigerbera (Gerbera jamesonni Bolus). Las importaciones mexicanas de material de siembra se han incrementado considerablemente en los últimos años. El valor de las importaciones de esquejes para flores de corte se incrementó de 0.4 millones de euros de 1996 a 2.6 millones de euros en 2006. En el mismo periodo las importaciones de bulbos de flores aumentaron de 3.4 a 21 millones de euros. Los derechos de obtentor de variedad son verificados sólo en producto para exportación, en México la mayoría de la producción se destina al mercado local, lo cual favorece la multiplicación ilegal de las variedades (Rijk, 2008). El material vegetativo de importación es trasladado hacia la zona de producción después de haber realizado una serie de documentación y cumplido requisitos tales como pedimento de importación que indica la empresa que generó la variedad, así como las características, y certificado de origen expedido por Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación (SAGARPA), donde se verifica que el material se encuentra libre de organismos fitopatógenos de importancia cuarentenaria en nuestro país. Posteriormente llega a los ranchos para dar inicio a la producción, de acuerdo a los calendarios de cultivo planificados por especie y en base a fechas de mayores ventas -14 de febrero, 10 de mayo, graduaciones en junio, bodas y XV Años en octubre, día de muertos y 12 de diciembre- por tradición en nuestro país (Betancourt et al., 2005). Debido a que el tamaño o condición de las flores no mejora después de su cosecha, es indispensable calcular el momento óptimo del punto de corte, para conservar la apertura del botón floral hasta su llegada al consumidor final (Bonarriv et al., 2003). Teniendo ya la flor en el punto de corte requerido, es cosechada y se coloca en empaques de acuerdo a las características propias de cada especie; para la rosa se utilizan materiales como cartón corrugado para alinear los botones, se envuelve desde el botón hasta una altura de 10 cm hacia el tallo en cartón corrugado, y se coloca un celofán grueso encima del último cartón donde lleva el logotipo de la empresa, nombre de la variedad y las indicaciones de cuidados poscosecha para el mantenimiento del producto. Se corta el tallo y se coloca en contenedores previamente desinfectados, con agua tratada con productos que alargan la vida poscosecha y evitan el desarrollo enfermedades como “Botritis” Botrytis cinerea (Leyva et al., 2009) y plagas tales como “araña roja” Tetranychus urticae ((Bonarriv et al., 2003; Forero et al., 2008). Productor Mayorista de origen (Estado de México y Veracruz) Distribuidoras de flor de corte y articulos para florerias por mayoreo Consumidor final Florerias Vendedores ambulantes Supermercados Figura 2. Red de valor de flor de corte en Mexicali, Baja California Norte. Figure 2. Value network for cut flower in Mexicali, Baja California Norte. Imported vegetal material is moved to production region after accomplished a number of documents and fulfill requisites such as import documents stating company that created variety, as well as characteristics and certificate of origin released by Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación (SAGARPA), where it is verified that material is free of phytopathogen organisms of quarantine concern in our country. Then it arrives to farms to start production, according to crop schedules planned per species and based in highest sale dates -February 14th, May 10th, June’s proms, weddings and XV years, in October Day of the Dead and December 12th -traditionally in our country (Betancourt et al., 2005). Due size or condition of flowers does not improve after harvest, it is mandatory to calculate the optimum moment for cutting them, to keep flower button opening when arrives to final consumer (Bonarriv et al., 2003). When flower it is in its required cut point, is harvested and put in packages according to characteristics of each species; materials like corrugated board is used to align buttons in rose handling, then is wrapped from button up to 10 cm height of stem in corrugated board and is put in wrapping film in the last board with company logo printed on it, variety name and care instructions for post-harvest maintenance of product. Stem is cut and put in previously disinfected containers, with water treated with products that increase post-harvest life and avoid development of diseases like “Botritis” Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México Las f lores que presentan mayor sensibilidad a daños por deshidratación son colocadas en wet packs con agua combinada con productos químicos para aumentar vida poscosecha, asimismo son empacadas en un cartón de longitud variable según la altura de cada especie para ajustar los paquetes (Figura 3), resguardándose el producto con una cubierta de plástico, se fleja para sellar el wet pack, y finalmente es colocada una etiqueta con las especificaciones del producto: especie, color, cantidad y destinatario. Las especies con menor sensibilidad a daño por deshidratación durante el envío son colocadas en cajas diseñadas de acuerdo al tamaño de cada especie. Es de suma importancia manejar adecuadamente cada caja, debido a la existencia de variedades de menor peso y dimensiones, pudiendo presentarse daños mecánicos por diferencias en pesos. A 571 Botrytis cinerea (Leyva et al., 2009) and plagues such as “red spider mite” Tetranychus urticae (Bonarriv et al., 2003; Forero et al., 2008). Flowers that have higher sensibility to damages by dehydration are put in wet packs with water added with chemical products to increase post-harvest life, as well are packed in carton board of variable length depending on height of each species to adjust packages (Figure 3), saving product with plastic cover, and sealed to fix wet pack, and finally a label is put with product specifications: specie, color, quantity and destination. The species with lowest sensibility to damage by dehydration during freight are put in boxes designed according to size of each species. It is important to properly handling B C Figura 3. Flores de corte empacadas: A). Tallos de clavel (Dianthus caryophyllus L.) empacados por gruesas; B). Tallos de gerbera (Gerbera jamesonii Bolus) empacados en charolas de cartón denominadas “raquetas”; y C). Tallos de polares (Dendranthema cv. Polaris White) empacados por docenas. Figure 3. Cut flowers packaged: A). Pink clover stems (Dianthus caryophyllus L.) by packs; B). Gerbera stems (Gerbera jamesonii Bolus) packaged in board trays called “racquets”; and C). Chrysantemus stems (Dendranthema cv. Polaris White) packed by dozens. Estudio de mercado Mayoristas de destino. Se localizan en la ciudad de Mexicali, B. C. N. 6 mayoristas de flor de corte, Accyflor S. A. de C. V., B Floral S. A. de C. V., Floralmex S. A. de C. V., Flores de Chiltepec S. A. de C. V., Centenario Floral y Florecer S. A. de C. V. El 67% está integrado por sucursales de empresas con presencia a nivel nacional dedicadas a la producción, compra y distribución de flor de corte, originarias del Estado de México y 33% son empresas originarias de Mexicali, Baja California que no poseen otras sucursales a lo largo del país, adquieren los productos directamente de los productores del Estado de México, de Ensenada, Baja California, y en menor cantidad de la Central de Abastos del D. F y San Diego. each box, since there are varieties of less weight and dimensions, and mechanical failures could arise by weight differences. Market study Target wholesalers. 6 cut flower wholesalers are located in Mexicali city, B. C. N.: Accyflor S. A. de C. V., B Floral S. A. de C. V., Floralmex S. A. de C. V., Flores de Chiltepec S. A. de C. V., Centenario Floral and Florecer S. A. de C. V. 67% is comprised by companies’ branches with presence at national level dedicated to cut flower production, purchasing and distribution, that come from state of Mexico and 33% are companies from Mexicali, Baja California, that do not have 572 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 El transporte para trasladar las flores hasta la ciudad es 83% rentado hacia otras empresas dedicadas a logística y envíos con tráileres refrigerados, 17%, posee su propia línea de trasporte. El costo de flete en temporadas de venta normal sin incluir las de alta demanda, es de $ 112 000 para Accyflor y Floralmex, $ 95 000 para Flores de Chiltepec S. A. de C. V. y de $ 60 000 para B Floral, correspondiente a la recepción de dos viajes vía terrestre cada semana durante un mes. Las fechas festivas por tradición son similares a las del resto del país y a nivel mundial (Juárez et al., 2008), generando la comercialización de los mayores volúmenes a lo largo del año, siendo principalmente el 14 de febrero y 10 de mayo, ambas con 29% cada una, de la venta total anual. La presencia de altas temperaturas en época de verano disminuye la demanda de flor de corte teniéndose, de esta manera, los meses de menor venta julio, agosto y septiembre, recuperándose el mercado desde inicios de octubre generando 21% de volumen del total de comercialización anual para el mes de octubre, debido a la realización de numerosos eventos sociales y a la celebración de Día de Muertos, debido a la distribución de las flores a minoristas los días 28 y 29 de octubre. El mes de diciembre genera 14%, con la demanda del 12 de diciembre y flor que se utiliza en arreglos para Posadas. Las principales especies comercializadas por mayoristas de destino son Rosa spp. 23% y Lilí asiática 20% (incluidos todos los canales de comercialización); se presenta una menor demanda en tulipán 6% y alstroemeria 8% (Figura 4), debido al mayor costo por tallo de estas especies. 14% 10% Clavel Gerbera Lilí oriental Lilí asiática 6% 9% Polar 8% Tulipan 10% Rosa other branches throughout the country, and acquire products directly from state of Mexico producers, from Ensenada, Baja California, and in less quantity from Central de Abastos at Distrito Federal, Mexico and San Diego. Transport used to move flowers to the city is 83% rented from other logistic and refrigerated trucks freight companies; whereas 17% has its own freight lines. Shipment cost in normal sale seasons without adding high demand is $ 112 000 for Accyflor and Floralmex, $ 95 000 for Flores de Chiltepec S. A. de C. V. and of $ 60 000 for B Floral, corresponding to reception of two land shipments every week during one month. Holidays are traditionally similar to other in the rest of Mexico and at worldwide level (Juárez et al., 2008), resulting in commercialization of highest volumes throughout year mainly on February 14th and May 10th, both with 29% each one, from the total yearly sale. The presence of high temperatures during summer decreases cut flower demand, giving July, August and September as the lowest sales volume months. The market recovers beginning October with 21% of total yearly sales volume due many events and the Day of the Dead holiday, due flower distribution to retailers on 28th and 29th of October. December contributes with 14% of demand, being flowers used on December 12th and on bouquets for Posadas holidays the main market. The main species per target wholesaler are Rosa spp. 23% and asian lilies 20% (including all commercialization channels); less demand is reported for tulip 6% and alstroemeria 8% (Figure 4), due higher cost per stem of these species. 29% Alstroemeria 23% Blancka Yesenia Samaniego-Gámez et al. Figura 4. Principales especies de flores de corte comercializadas en Mexicali, Baja California. Figure 4. Main cut flower species marketed in en Mexicali, Baja California. El volumen de venta aumenta en temporadas de mayor demanda (Cuadro 1) pero la preferencia por cada una de ellas se mantiene a lo largo del año, siendo similares a las reportadas a nivel nacional (Orozco, 2007; Rubí et al., 2009). Sale volume increases in higher demand seasons (Table 1), but preference by each one of them keeps constant throughout year, being similar to the values reported at national level (Orozco, 2007; Rubí et al., 2009). The preferences by a given flower type for each season are found in function of traditions and stationary trends, except for Rosa spp., which keeps stable volume demand, slightly decreasing during Day of the Dead season, due preference for lower cost flowers. During this season participation of people at outdoor events is scarce due presence of high temperatures, either activities on auditoriums are held since people are out of city during vacation holidays. The credit system used causes that during low demand months cash flow decreases, this occurs because retailers have no income then they do not pay or cover their credits, and in most of the cases sales occur only using Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México Las preferencias por cierto tipo de flor para cada temporada se encuentran en función de las tradiciones y tendencias de modas, siendo solamente la excepción la Rosa spp., misma que mantiene estable el volumen de su demanda, disminuyendo ligeramente en la temporada del Día de Muertos, debido a las preferencias por flores de menor costo. 573 credit; this means that retailers make purchases only where they have credit available, and they almost do not buy in cash, therefore there is risk of having past due and becomes difficult to cover those credits, sometimes lawsuits are issued, but takes longer than 12 months to solve them and then chances to recover money are very low. Cuadro 1. Comportamiento del volumen de las principales flores de corte comercializadas en el Valle de Mexicali, Baja California, por temporada de mayor demanda. Período enero-diciembre 2009. (Porcentaje). Table 1. Volume behavior of main cut flowers marketed in Mexicali valley, Baja California, per highest demand season. 2009 January-December period (percentage). Temporada 14 de feb. Rosa L. asiáticas L. orientales Gerberas Alstroemeria Tulipán Polar Clavel 19 22 22 31 28 40 0 22 10 de may. 19 22 22 31 28 40 12 11 Graduaciones (jul.) 19 17 0 8 14 0 0 0 Bodas y XV Años (oct.) 14 17 34 8 0 20 12 11 Día de muertos (1 de nov.) 6 0 0 0 28 0 50 45 Día de la Virgen de Gpe (12 de dic.) 14 11 0 14 0 0 0 0 Día del padre Total anual 8 100 11 100 22 100 8 100 0 100 0 100 25 100 11 100 En esta estación del año es escaza la participación de la población en eventos al aire libre debido a la presencia de altas temperaturas, asimismo, tampoco se realizan en salones ya que gran parte de la población sale de vacaciones fuera de la ciudad. El sistema de crédito que se maneja ocasiona en meses de poca demanda disminución del flujo de efectivo, ya que si los minoristas no tienen ingresos no liquidan o abonan a sus créditos, y es costumbre que la mayoría de las ventas sean a crédito, los minoristas compran sólo donde se les otorga crédito, muy poco a contado, por lo que existe siempre el riesgo de caer a cartera vencida siendo muy difícil recuperar esos créditos, en ocasiones se recurre a la demanda, tardándose en algunas ocasiones más de un año en dictar sentencia y pocas probabilidades de recuperar el dinero. Minoristas. El 82% del total de minoristas está integrado por personas propietarias de florerías establecidas legalmente, en su mayoría poseen una sola florería, de las personas entrevistadas sólo 2 poseen más de una. Pertenecen al 10 % las personas dedicadas al comercio ambulante, vendiéndolas de 3 formas al consumidor: en los semáforos, colocando contendores con agua en alguna esquina (Figura 5) y en centros de diversión. Retailers. 82% of retailers are comprised by owners which legally settled flower shops; in most of the cases they own one single flower shop. From people interviewed, only 2 have more than one. They belong to 10% of people working as street vendor, selling in three different ways to consumer: under street lights, placing containers with water in each corner (Figure 5) and in amusement parks. 8% are people dedicated to organization of several social events. From retailers, 54% have been in the cut flower business for more than 15 years in the city of Mexicali, Baja California; while 17% are in the range between 5 to 10 years, 15% has from 1 to 5 years of commercialization and the remaining 14% has from 10 to 15% years, therefore in the last years has been little the beginning of new retailers for cut flower in Mexicali, due several factor, mainly market monopoly, 2009 worldwide economic crisis, since it is not a basic product, and also the presence of limiting climatic conditions. Cut flower consumption is based in three characteristics, being products quality the main one with 53% of preferences, followed by their price with 46%, and species variety has only 1%. Main species used for making flower bouquets 574 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Blancka Yesenia Samaniego-Gámez et al. Figura 5. Minoristas en comercio ambulante de flores de corte. A). Comercialización en semáforos de avenidas; y B). Mercadeo de tallos de rosa colocados en contenedores de agua esquinas. Figure 5. Retailers in cut flowers street vendor. A). Commercialization in street lights; and B). Rose stems marketing placed in water container. El 8% lo incluyen personas dedicadas a la organización de eventos sociales diversos. Del total de minoristas 54% llevan más de 15 años en el giro comercial de flor de corte en la ciudad de Mexicali Baja California; mientras tanto 17% se encuentran en el intervalo de 5 a 10 años, 15% presenta de 1 a 5 años iniciándose en la comercialización y el restante 14% tiene de 10 a 15 años, por lo que en los últimos años ha sido poca la incursión de nuevos minoristas en el giro de flor de corte en Mexicali, debido a diversos factores, siendo principalmente el acaparamiento del mercado, la crisis económica mundial de 2009, ya que no es un producto básico, y además, la presencia de condiciones climáticas son limitantes. El consumo de flor de corte se basa en tres características, siendo la principal la calidad de los productos con 53% de preferencias, seguido por el precio de los mismos con 46%, y la variedad de especies presenta sólo el 1 %. Las principales especies utilizadas para la elaboración de arreglos florales son rosas, polar o crisantemo y clavel con preferencias de 32, 20 y 17% respectivamente, (Figura 6) siendo similares a las de mayor demanda a nivel nacional y mundial (Bonarriv, 2003; Flores et al., 2005; Oficina de Estudios y Políticas Agrarias, 2007). 50% 0% 32% 20% 17% 15% 11% Ro sas P olar Clavel Lilis as iaticas Gerbera 5% Lilis ori entales Figura 6. Flores de corte usadas en los arreglos en Mexicali B. C. N. Figure 6. Cut flowers used in bouquets in Mexicali, B. C. N. are roses, polar or chrysanthemums and carnation with preferences of 32, 20 and 17% respectively, (Figure 6) being similar to national and worldwide demand (Bonarriv, 2003; Flores et al., 2005; Oficina de Estudios y Políticas Agrarias, 2007). With regards species most used like refill flower, there is goldenrod with 47%, white aster with 40% and alstroemeria with 13% of consumption, since greater cost that it means in general is used in bouquets with higher sale prices. Foliage most used is mini-cambray, with 26%, palma camedor with 25%. With 20% there are several foliages, such as mini-tulia, ceriman, dracenia, myrtus, pine, tulia, podocarpus, israeli ruscus, among others. Japanese clavo and leather with 15 and 13% respectively, thanks to their higher cost if compared to the already mentioned. Main limiting factor for cut flower retailers marketing is decrease of customers’ income, due their amount of money dedicated for buying flower bouquets has diminished, and has converted them in sumptuary and not basic need (Figure 7). Other limiting factor is extreme weather, temperatures in summer can reach up to 47 °C during day and 36° during night, affecting flowers postharvest lifetime, these ranges of temperatures are kept during July and August months, therefore the consumption is reduced up to 50% during this season. Final consumers. According with results of surveys it was found an increase in prices of wholesalers of destination to consumers 50% higher than given to retailers, to avoid competence by price for retailers main customers. Figure 8 shows main species demand by final consumers. Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México Referente a las especies de mayor uso como flor de relleno, se tiene el solidago con 47%, aster blanco con 40 % y alstroemeria con 13% en el consumo, dado el costo mayor que presenta, por lo regular se emplea en arreglos con precios de venta más elevados. El follaje de mayor uso es el minicambray, con 26%, camedor con 25%. Con 20% se encontró a follajes diversos, tales como minitulia, piñanona, dracenia, mirto, pino, tulia, podocarpus, ruscus israelí, entre otros. El clavo japonés y leather con 15 y 13% respectivamente, por su mayor costo en comparación con los anteriores. El principal factor limitante en la comercialización de minoristas de flor de corte es la disminución del ingreso de los consumidores, debido a la reducción del dinero destinado a la compra de arreglos florales, teniéndolos como un lujo y no una necesidad básica (Figura 7). Otro factor limitante es el clima extremoso, las temperaturas en verano suelen llegar a 47 °C durante el día y 36 °C durante la noche, disminuyendo la vida pos cosecha de las flores, estas temperaturas se mantienen durante los meses de julio y agosto, por lo que se reduce su consumo hasta 50% en esta época del año. 575 47% 25% 7% El clima 7% 2% 12% Abastecimiento Competencia de Caída de los Disminución del ingreso de los de las especies los productos precios consumidores demandadas por el importados de San mercado Diego, Cal. EU Otros Figura 7. Principales problemas de minoristas en el proceso de comercialización. Figure 7. Main issues retailers face in marketing process. Alstroemerias 2% Clavel 7% Rosas 7% Gerberas 21% Lilis orientales 10% Consumidores finales. En concordancia con los resultados de las encuestas se encontró un alza en los precios de mayoristas de destino para consumidores 50% mayor que el otorgado a minoristas, para evitar competencias por precio al ser los minoristas los clientes principales. La Figura 8 muestra las principales especies demandadas por consumidores finales: Figura 8. Especies de flores de corte de mayor demanda por consumidores(as). Figure 8. Cut f lowers species with highest demand by customers. La rosa oscila entre $180 a 280 cada paquete de 25 tallos, a lo largo del año, alcanzando su mayor precio para el 14 de febrero. El costo por paquete de gerbera fluctúa entre $ 80 a 100 cada paquete de 10 tallos. Las lilis asiáticas poseen un precio que oscila entre $ 120 a 130 por paquete de 10 tallos. Las lilis orientales generalmente poseen un costo de $ 200 a 220 por paquete de 10 tallos a lo largo del año. El clavel presenta un valor de $ 300 la gruesa de 144 tallos. La alstromeria se comercializa $ 40 a 50 cada paquete de 10 tallos. De las características principales observadas por los consumidores al seleccionar el producto resaltan el tamaño de botón floral y color de flor, ambas con 21% (Figura 9). Rose varies between $180 and $280 each package with 25 stems, throughout year, reaching its highest cost on February 14th. The asian lilies have a cost between $120 and $130 per package with 10 stems. The western lilies generally have a cost from $200 to $220 per package of 10 stems throughout year. Carnation has a value of $ 300 the pack of 144 stems. Alstroemeria is marketed $ 40 to 50 each package of 10 stems. From main characteristics observed, by consumers when selecting product size of flower button and color outstand, both with 21% (Figure 9). Diagnóstico Diagnose El mercado interno mexicano de flores de corte ha sido relativamente favorable en los últimos años. Se espera que la demanda interna continúe creciendo debido al aumento del nivel de vida en México (Rijk, 2008). In last years, internal Mexican market of cut flowers has been profitable. It is expected that internal demand keeps growing trend due increase in standard of living in Mexico (Rijk, 2008). Lilis asiáticas 16% Blancka Yesenia Samaniego-Gámez et al. 576 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Margen de comercialización Conclusiones El sistema de redes de distribución y mercadeo actual traslada las flores de corte desde los centros de producción, Córdoba, Veracruz, Tenancingo, Villa Guerrero, Coatepec de Harinas y Chiltepec, Estado de México, hasta el Valle de Mexicali, Baja california conservando la calidad y óptima vida de florero de las especies hasta su consumo. Este sistema genera opciones de venta al consumidor final que reducen el intermediarismo lo cual aumenta la rentabilidad de los integrantes de la red. Las principales especies de flores de corte demandadas en la ciudad de Mexicali a lo largo del 15% 9% Color de la flor Forma de la flor Duración de la floración Tamaño del botón 2% Color y forma del follaje 0.19 pesos de ganancia. Gittinger, 1983, señala que el criterio de aceptación de la relación beneficio /costo, debe ser mayor a uno, con el resultado obtenido garantiza que esta actividad es rentable. El interés económico que ha alcanzado la flor de corte en el mundo la ha convertido en un negocio competitivo, en la actualidad los tres grandes centros de demanda en el mundo son la Unión Europea, Estados Unidos de América y Japón. México basa su potencial florícola en las ventajas climáticas y su cercanía con Estados Unidos de América, segundo consumidor mundial de flor (Orozco y Mendoza-Martínez, 2003; Ramos y Merino, 2004). Colindando la ciudad de Mexicali, Baja California con el segundo consumidor mundial de flor de corte, Estados Unidos de América, y aunado al nivel medio y medio alto de ingresos económicos de la mayoría de la población se tiene la cultura del consumo de flores, por lo que la producción y mercadeo es viable. 17% 15% Botón cerrado Relación Beneficio/ Costo (R B/C). Con base a los resultados obtenidos, se obtiene el valor de 1.19 lo que indica que por cada peso invertido en costos durante el mes de mayo se obtiene 21% Botón abierto Por cada peso que paga el consumidor final, 0.1816 pesos le corresponden al productor; 0.1616 pesos se le quedan al mayorista de destino; y 0.656 pesos son para el detallista. Por lo anterior, se observa que este último agente obtiene un porcentaje de ganancia mayor, en relación a los otros, pues su venta es al menudeo, misma que depende del valor agregado dado o la escases del producto de la competencia lo puede vender el forma inmediata, o bien tener pérdida por las inclemencias climáticas o la falta de liquidez de los consumidores (Cuadro 2). 21% Figura 9. Principales características de flor de corte para consumidores finales. Figure 9. Main characteristics of cut f lowers for final consumers. Marketing margin By each peso that f inal consumer pays, 0.1816 pesos correspond to producer; 0.1616 pesos for wholesaler; and 0.656 pesos for retailer. Therefore, is seen that the latter gets highest profit if compared with other two, since they sale on retail basis, which depends on added value or product scarcity from competitors allows to sell product immediately, or to get losses due weather conditions or lack of cash flow from consumers (Table 2). Cuadro 2. Precio de venta de arreglo con una docena de rosas en base de madera. Table 2. Sale price per bouquet with dozen of roses in wood basement. Precio de Precio de M M (%) de compra ($) venta ($) ($) (%) participación Productor 109 18.16 Mayorista 109 206 105 96 16.16 de destino Minorista 206 600 394 191 65.66 Consumidor 600 99.99 final Agente Nota: el arreglo incluye: Aster; Lilis; Astroemerias; ladrillo de espuma floral y base de madera. Red de mercadeo y rentabilidad de flor de corte en el Valle de Mexicali, Baja California, México año son rosas, lilis asiáticas, polar, clavel, gerbera y lilis orientales, por lo que la demanda se sujeta a la programación de producción de estas especies, generando una demanda insatisfecha cuando la oferta disminuye. De acuerdo al diagnóstico realizado para flores de corte y el Valle de Mexicali se encontró que existe un nicho de mercado con demanda a lo largo del año, debido al poder económico de la población y la tradición de obsequiar flores, representa fortalezas y oportunidades de la actividad ornamental por lo que se obtiene una estrategia de tipo ofensiva. La Relación Beneficio Costo (1.19) indica que el mercadeo de flores de corte es una actividad rentable a lo largo del año debido a las condiciones económicas de la población que permiten establecer precios de venta altos que cubren los costos de producción y operación de la actividad, quedando un margen de ganancia aceptable. Agradecimientos A la Universidad Autónoma Chapingo (UACH) por otorgar las bases necesarias para el desarrollo de esta investigación. A la Universidad Autónoma de Baja California (UABC), en especial al Instituto de Ciencias Agrícolas, por el tiempo destinado para la redacción de este artículo. A todas aquellas personas que directa e indirectamente participaron con su experiencia y conocimientos para que la presente investigación sea un documento de consulta y aporte los productores y comercializadores de ornamentales. Literatura citada Avendaño, R. B. y Schwentesius, R. R. 2005. Factores de competitividad en la producción y exportación de hortalizas: el caso del Valle de Mexicali, B. C., México. Problemas del desarrollo. Rev. Latinoam. Econ. 36(140):165-192. Avendaño, R. B. y Varela, Ll. R. 2010. La adopción de estándares en el sector hortícola de Baja California, México. Estudios fronterizos, nueva época. 2111):171-202. Ávila, C. G. y Calderón, S. F. 2009. Redes de mercadeo de las principales f lores de corte en el centro de la república mexicana. Tesis profesional. Departamento de Fitotecnia. UACh. Chapingo, Estado de México. 140 p. 577 Cost/Benefit Relationship (R C/B). Based on obtained results, there is a value of 1.19 which means that for every peso invested in costs during May there are 0.19 pesos of profit. Gittinger, 1983, reports acceptance criteria for this activity is profitable. Economical interest that has obtained cut flower around the world has turned it into competitive business, and actually three great demand centers worldwide are European Union, United States of America and Japan. Mexico has it foundation of f lower potential in the weather advantages and being so near to USA, second biggest market for cut flower (Orozco and Mendoza-Martínez, 2003; Ramos and Merino, 2004). Bordering Mexicali city, Baja California with second worldwide consumer of cut f lower, and thanks to the intermediate and intermediate high level of income from most of population there is a market for cut flowers, therefore production and marketing are viable. Conclusions Actual distribution and marketing network moves cut flowers from production centers like Córdoba, Veracruz, Tenancingo, Villa Guerrero, Coatepec de Harinas and Chiltepec, state of México, up to Mexicali valley, Baja California, keeping quality and optimum flower vaselife of species to final consumer. This system gives sales option to final consumer which reduces intermediate players and increases profitability of network members. Main cut flower species that have demand in Mexicali city throughout year are roses, asian lilies, chrysanthemum, carnation, gerbera and western lilies, therefore demand is subjected to the production of these species, resulting in a not covered demand when offer decreases. According to diagnose made for cut flowers is found that there is market with demand along the year, due population’s economic wealth and culture of giving flowers, meaning strength and opportunities for ornamental activity giving a strong sale strategy. The Cost-Benefit Relationship (1.19) means that cut flowers market is profitable activity along the year due economical status of people allow to set high sale prices that can cover production and operative costs for this activity, giving an acceptable profit. End of the English version 578 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Bernal-Torres, C. A. 2006. Metodología de la investigación para administración, economía, humanidades y ciencias sociales. Pearson Educación. México. 209-230 pp. Betancourt, O. M.; Rodríguez, M. M. N.; Sandoval, V. M. y Gaytán, A. E. A. 2005. Fertilización foliar una herramienta en el desarrollo del Cultivo de Lilium spp. cv. Stargazer. Rev. Chapingo. Serie Hortic. 11(002):371-378. Bonarriv, J.; Tanner, O. D.; Chairman, J. A. H.; Chairman, V.; Bragg, L. M.; Miller, M. E. and Koplan, S. 2003. Industry and trade commission: cut flowers. United States International Trade Commission. Washington, DC. 45 p. Chedid, M. B. A. 2008. Protección a la propiedad intelectual de las variedades vegetales ornamentales en México: propuestas y soluciones. Investigación agropecuaria. 1(5):17-26. Consejo Mexicano de la Flor A. C. 2008. Plan rector de sistema producto flor. Baja California. http:// www.conmexflor.org/. Consultada el 25 de febrero de 2010. Flores, R. J. S.; Becerril, R. A. E.; González, H. V. A.; Tijerina, Ch. L. y Vázquez, R. T. 2005. Crecimiento vegetativo y floral del crisantemo [Dendranthema X Grandiflorum (Ramat) Kitamura] en respuesta a la presión osmótica de la solución nutritiva. Rev. Chapingo. Serie Hortic. 2(11):241-249. Forero, G.; Rodríguez, M.; Cantor, F.; Rodríguez, D. y Cure, J. R. 2008. Criterios para el manejo de Tetranychus urticae Koch (Acari: Tetranychidae) con el ácaro depredador Amblyseius (Neoseiulus) sp. (Acari: Phytoseiidae) en cultivos de rosas. Colombia. Agron. Colom. 1(26):78-86. Gómez, G.A.A. y Jiménez, H. E. M. 2008. La comercialización de “Lilis” del municipio de Texcoco, Estado de México. México. Investigación agropecuaria 1(5):61-65. Gittinger, P. J. 1983. Análisis económico de proyectos agrícolas. Segunda Edición, Completamente Revisada y Ampliada. Publicado para el Instituto de Desarrollo Económico del Banco Mundial. Editorial Tecno. Madrid, España. 369-375 pp. Blancka Yesenia Samaniego-Gámez et al. Juárez, H. P.; Colinas, L. M. T.; Valdéz, A. L. A.; Espinoza, F. A. Castro, B. R. y Cano, G. G. V. 2008. Soluciones y refrigeración para alargar la vida poscosecha de Rosa cv. ‘Black magic’. Rev. Fitotec. Mex. 3(31):73-77. Leyva, M. S. G.; López, H. Y.; Tlapal, B. B. y Flores, M. R. 2009. Etiología del tizón descendente de las ramas de azucena híbrida (Lilium spp.) En villa guerrero, Estado de México. México. Rev. Chapingo Serie Hortic. 1(15):5-8. Mosquera, A. V.; Argumedo, M. A. y Morales, J. J. 2010. Competitividad de la pequeña empresa del sector ornamental enAtlixco, México. Entramado. 6(2):26-35. Oficina de Estudios y Políticas Agrarias (ODEPA) 2007. Ministerio de Agricultura. Estudio de Evaluación del Potencial Interno de las Flores. Santiago de Chile, diciembre de 2007. http://www.odepa.gob. cl. Consultada el 10 de diciembre de 2009. Orozco, H. M. E. y Mendoza- Martínez, M. 2003. Competitividad local de la agricultura ornamental en México. Cienc. Ergo Sum. 10(1): 29-42. Orozco, H. M. E. 2007. Between local and global competitiveness: commercial floriculture in the State of Mexico. Convergencia. 45:100-160. Rijk, P. A. L. 2008. The ornamental sector in México. Office of the Agricultural Counsellor Royal Netherlands Embassy. Página consultada: http://edepot.wur. nl/118595. Fecha de consulta 24 de junio de 2011. 138 p. Rubí, A. M.; Olalde, P. V.; Reyes, R. B. G.; González, H. A. y Aguilera, L. I. 2009. Influencia de Glomus fasciculatum en el crecimiento y desarrollo de Lilium spp. cv. Orange pixie. México. Agric. Téc. Méx. 2(35):201-210. Servicio de Información Agrícola y Pesquera. SAGARPA. 2011. Cierre de la producción agrícola. http://www. siap.sagarpa.gob.mx. Tlahuextl, T. C.; Ávila, S. J. M. y Leszczyñska, B. H. 2005. Flores de corte y follaje en florerías y mercados de Puebla. Rev. Chapingo Serie Hortic. 2(11):323-327. Vargas, A. L. A. 2008. Proyecto de inversión para la instalación de un beneficio húmedo de café (Coffea arabica L.) y mercadeo en Agua Linda, Jalpan, Puebla. Departamento de Fitotecnia. UACh. Chapingo, Estado de México. 69-70 pp. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 579-594 Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial* Jet Biofuel. Production of energy-related crops for commercial aircraft Ibis Sepúlveda González1§ Posgrado del Departamento de Sociología Rural. Universidad Autónoma Chapingo. Carretera México-Texcoco km 38.5, Chapingo, Estado de México. C. P. 56230. Autora para correspondencia: [email protected]. 1 § Resumen Abstract Las más grandes compañías de fabricación de aviones, entre ellas Boeing y Airbus y la asociación internacional de líneas aéreas International Air Transport Association (IATA), decidieron jugar un doble papel: contribuir en la disminución de emisiones de gases efecto invernadero y asegurar la disponibilidad de combustible barato. Para ello se ha hecho un plan para agregar a la turbosina una fracción creciente de bioturbosina. En México esto se trabajó en el “plan de vuelo para los biocombustibles sustentables”, convocado por ASA entre junio de 2010 y marzo de 2011. La bioturbosina debe reducir la emisión de GEI en más 50% en su ciclo de vida, con respecto a la turbosina. También se espera que, gracias a la tecnología, en el tiempo baje el costo de la bioturbosina mientras, por escasez, suba el del petróleo (Herrera y Morgan, 2010; García, 2010). De esta manera, a nivel mundial estas compañías han establecido que para 2015 se debe adicionar 1% de bioturbosina a la turbosina, para 2017; 10%, para 2020; 15% y así sucesivamente hasta cambiar al menos 50% del origen del combustible aéreo para 2050. En México se vende 2% del combustible aéreo del mundo. Esto significa una demanda inicial de 40 millones de litros de bioturbosina para 2015 y de unos 700 millones de litros para 2020. El grupo encargado de la promoción del biocombustible aéreo a nivel mundial (Roundtable on Sustainable Biofuels- RSB, con sede en la École Politechnique Federale de Lausanne) estableció The largest aircraft making companies, among them Boeing and Airbus, and International Air Transport Association (IATA), decided to take double role: to contribute on greenhouse gas emissions effect decrease and to ensure economic fuel availability. In order to add to jet fuel an increasing mixture of biofuel, a plan was developed. In Mexico this plan was set under “Flight Plan Towards Sustainable Biofuels” agenda, convoked by ASA between June 2010 and March 2011. When compared to jet fuel, jet biofuel must reduce greenhouse gas emission in more than 50% during its life cycle. It is also expected that when time elapses, thanks to technology, jet biofuel cost will be cut down, while petroleum will rise due its scarcity (Herrera and Morgan, 2010; García, 2010). In this way, at global level these companies had established that for year 2015 it must add 1% of jet biofuel to jet fuel, for 2017; 10%, for 2020; 15%, and so on up to 50% as minimum to replace source of aircraft fuel for year 2050. Mexico shares 2% of aircraft fuel sales at worldwide level. This means a starting 40 millions liters demand of jet biofuel for year 2015 and around 700 millions litters for year 2020. The body in charge of promoting worldwide aircraft biofuel (Roundtable For Sustainable Biofuels - RSB, headquartered in École Politechnique Federale from Lausanne) established 12 principles to fulfill in * Recibido: abril de 2011 Aceptado: marzo de 2012 Ibis Sepúlveda González 580 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 12 principios que deben cumplirse para ser aceptados como proveedores de aceites para bioturbosina. Estos tienen que ver con sustentabilidad ecológica y equidad social. En la ponencia se analizan las condiciones de México para responder a esta primera demanda real de biocombustibles, así como sus probables efectos. Introducción La inquietud mundial por combustibles en 2011, está muy fundamentada. Las reservas probadas de petróleo van a la baja y esto se combina con los problemas políticos y sociales en Medio Oriente y un invierno 2010-2011 excepcionalmente frío en el Hemisferio Norte. Todo esto está dando como resultado un alza en los precios del petróleo, que llegó a US$ 108.00 por barril de Brent. Hay muchas fuentes de energía alternativas, pero que, por el momento, resultan más caras, o difíciles de manejar y riesgosas, o que requieren cambios en el tipo de motores hoy en uso. Por eso, las miradas se han volcado a los biocombustibles etanol, biodiesel y bioturbosina -el 11 de julio de 2011, la ASTM international, anteriormente conocida como la Sociedad Americana para Pruebas y Materiales (ASTM), que es un líder reconocido a nivel mundial en el desarrollo y la entrega de las normas internacionales de consenso voluntario, aprobó la mezcla de hasta 50% de bioturbosina en motores de aviones comerciales y militares.Por supuesto, los biocombustibles, sobre todo los agrocombustibles de primera generación, compiten y competirán por suelo y otros recursos productivos con la producción de alimentos. A nivel mundial hay escasez de biocombustibles. Salvo Brasil, que lleva más de 40 años trabajando en la producción de combustibles renovables, para la gran mayoría de países el ordenamiento de la Unión Europea (UE) con respecto a que a partir de 2015 no podrán aterrizar aviones en cuyo combustible no vaya una mezcla de biocombustible (bioturbosina en México) so pena de pagar altísimas multas, y que los países que no puedan surtir mezcla con bioturbosina quedarán fuera de ruta, representa una situación muy delicada, puesto que no hay oferta en el mercado mundial. Así, representantes de diversas compañías transnacionales han llegado al país en búsqueda de materia prima para el combustible, sondeando diversas opciones. México resulta atractivo por la extensión de su territorio, su clima y order to be accepted as jet biofuel oils supplier. These are related to ecological sustainability and social equity. The conditions Mexico can offer to face this first real biofuels demand as well as their likely effects are analyzed in the agenda. Introduction In 2011 the global concern about fuels is seriously founded. Proven petroleum reserves are under negative growth and this is combined with political and social issues in the Middle East region and an exceptionally cold 2010-2011 winter in the Northern hemisphere. All these factors together give as result increasing petroleum price, which rose towards US$ 108.00 a barrel for Brent crude. There are many alternative sources of energy, but nowadays they are more expensive or harder to process and dangerous, or they require changes in the type of engines currently used. This is why all efforts have been focused on biofuels like ethanol, biodiesel and jet biofuel –on July 11th, 2011, ASTM International, previously known as the American Society for Testing and Materials (ASTM), which is a worldwide known leader that develops and publishes voluntary consensus international standards, approved mixture of up to 50% jet biofuel in commercial and military aircraft engines. Of course, biofuels, specially the first generation agricultural fuels, will compete with food crops by land and other productive resources. At world level there is scarcity of biofuels. The EU regulation in the sense that starting from 2015 airplanes whose fuel is not a mixture of biofuel (jet biofuel in Mexico) are not allowed to land, unless paying extremely high fees, and that countries which can not supply fuel mixture with jet biofuel will be out of route, for almost any countries, due there is no offer in global market, it represents a very complex scenario, except for Brazil which has more than 40 years working in renewable fuels production. Thus, representatives of several transnational companies had been in the country searching fuel raw material, assessing different options. Mexico is very attractive due its size, weather and large young population, all of them being milestones for biomass production or oils needed for biodiesel and jet biofuel production. Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial porque tiene una amplia población joven, elementos todos necesarios para la producción de la biomasa o los aceites necesarios para el biodiesel y la bioturbosina. Aunque en otros países existen varios cultivos no comestibles productores de aceite, entre ellos jatropha (Jatropha curcas), higuerilla (Ricinus communis), camelina (Camelina sativa) y salicornia (Salicornia acetaria), en México sólo se está trabajando en Jatropha e higuerilla. Recientemente han adquirido especial relevancia las microalgas productoras de aceite México consume más de 3 200 millones de litros anuales de combustible de aviación, que se distribuyen en 62 aeropuertos, de los cuales, 75% se concentra tan sólo en 6 (ASA, 2010). En México, la dependencia directamente encargada de surtir el combustible aéreo es Aeropuertos y Servicios Auxiliares (ASA), organismo descentralizado del Gobierno Federal.ASA ha convocado a un grupo amplio y plural de investigadores, académicos, funcionarios, inversionistas, productores y políticos, a verter información, a conocer más sobre el tema, a opinar y a discutir sobre el gran reto que la demanda internacional presenta para el país. Así, ASA organizó talleres especializados entre los meses de junio de 2010 y marzo de 2011, cuyas ponencias han sido fuente principal para este trabajo. De los talleres de ASA, denominados Plan de Vuelo Hacia los Biocombustibles Sustentables, se espera que salga un documento amplio y comprehensivo que sirva para presentar a los diversos actores que deben intervenir en el proceso y les proporcione una panorámica que precise el papel que deben jugar y los resultados esperables. La mesa redonda para combustibles sustentables Con la finalidad de que la era de los biocombustibles, al menos para la aviación, no sea el inicio de una etapa de mayores problemas para la Tierra y para los seres humanos, que no utilice terrenos aptos para la producción de alimentos y compita con ellos, que no genere ni de lejos tantas emisiones como las actuales -en 2008 la industria de la aviación comercial generó 677 millones de toneladas de bióxido de carbono (CO2) ASA, 2011- que promueva el uso de terrenos actualmente en desuso y que apoye con ello el desarrollo rural y social de los pobres del campo, se estableció la mesa redonda para biocombustibles sustentables (Roundtable on Sustainable Biofuels, RSB). La RSB es el estándar de certificación global y multi-actor para biocombustibles sustentables que quieran acceder a mercados regulados, aplicable a todo tipo de biocombustible 581 Although in other countries there are non-edible oils producing crops, among them Barbados nut (Jatropha curcas), castor oil plant (Ricinus communis), camelina (Camelina sativa) and glasswort (Salicornia acetaria), in Mexico only Barbados nut and castor oil plant are used. Farming of oil producing microalgae has recently achieved great importance. Mexico’s yearly aircraft fuel consumption is more than 3.2 billion liters, which are distributed in 62 airports, from which 75% are concentrated only in 6 (ASA, 2010). In Mexico, the body responsible for supplying airplane fuel is Aeropuertos y Servicios Auxiliares (ASA), Mexico’s federal airport operator. ASA has convoked a wide and plural group of researchers, college members, officers, investors, producers and politicians to contribute with information, to know about this matter, to argue and discuss about the challenge that international demand represents for Mexico. Between June 2010 and March 2011, ASA arranged an agenda whose presentations have been the main source for this work. The aim of this agenda, known as Flight Plan Towards Sustainable Biofuels, is to get a broad and comprehensive document used to show to different stakeholders that must participate in the process and to provide them an overview about the role they need to play and the expected outcome. Roundtable for sustainable fuels With the goal that biofuels era, at least for aircraft, does not become the beginning of an era with greater problems for Earth and mankind, that does not take lands already used in food production and compete with them, that does not generate emissions so far as the current ones -in 2008 aircraft industry was responsible for 677 millions tons of carbon dioxide (CO2) (ASA, 2011)-, that promotes the use of lands currently unused and that supports rural and social development of countrymen, the Roundtable on Sustainable Biofuels (RSB) was established. RSB is the global certification standard and multiplestakeholder for sustainable biofuels that need access to standardized markets, and it applies to all kind of biofuel and raw material. It has coverage on whole supply chain. SRB headquarters are located in École Politechnique Federale de Lausanne, Switzerland. RSB (Rudolph, 2010) set 12 principles and criteria: Ibis Sepúlveda González 582 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 y de materias primas. Tiene cobertura sobre toda la cadena de suministro. La sede de RSB está en la École Politechnique Federale de Lausanne, Suiza. La RSB (Rudolph, 2010) estableció 12 principios y criterios: Principio 1. Marco legal Principio 2. Planeación, monitoreo y mejora continua Principio 3. Emisiones de gases de efecto invernadero (GEI) Principio 4. Derechos humanos y laborales Principio 5. Desarrollo rural y social Principio 6. Seguridad alimentaria local Principio 7. Conservación Principio 8. Suelo Principio 9. Agua Principio 10. Aire Principio 11. Uso de la tecnología, insumos y manejo de residuos Principio 12. Derechos a la tierra Para tener acceso a los mercados de materias primas para bioturbosina, los oferentes deberán cumplir con todos y cada uno de los 12 criterios, cumplimiento que tiene que ser certificado por un organismo ad hoc acreditado para ello. Los análisis de ciclo de vida término creado por los evaluadores ambientales para cuantificar el impacto ambiental de un material o producto desde que se lo extrae de la naturaleza hasta que regresa al ambiente como desecho. En este proceso sistémico se consumen recursos naturales y se emiten desechos (Fuentes, 2010), serán fundamentales en los estudios de certificación. En México no existen por el momento organismos nacionales con la capacidad legal para otorgar las certificaciones que la RSB exige, pero antes de 2015, fecha en que ASA debe incorporar bioturbosina al combustible aéreo, tiene que haberlos o traer a los certificadores del extranjero. Los oferentes de los aceites u otras materias primas, deberán pagar sus certificaciones. Los cultivos Jatropha curcas L. Esta planta, conocida también como piñón mexicano es originaria de Mesoamérica, por lo que en México existe una amplia variabilidad genética. Como cultivo es reciente, aunque hay productores que señalan que la están cultivando desde hace unos cuatro años. Se ha llevado la semilla a otros países, debido a lo cual la India es el principal productor, aunque Mozambique Principle 1. Legal framework Principle 2. Planning, supervision and continuous improvement Principle 3. Greenhouse gas (GHG) emissions effect Principle 4. Human rights or labor rights Principle 5. Social and rural development Principle 6. Local food security Principle 7. Conservation Principle 8. Soil Principle 9. Water Principle 10. Air Principle 11. Technology use, raw material and waste management Principle 12. Land rights To have access to jet biofuel’s raw materials markets, suppliers must fulfill all and every principle, and this needs to be certified by an authorized consultant body. The life cycle impact assessments are performed by environmental consultants in order to measure ambient impacts associated with material or product’s life from raw material extraction through disposal again to environment. During this process natural resources are used and waste is generated (Fuentes, 2010), which will be key in the certification studies. In Mexico currently there is no national consultant body with legal ability to release the certifications that RSB demands, but before 2015, deadline defined by ASA to add jet biofuel to airplane fuel, there must be one or, on the other hand, to bring foreign certification bodies. Oils or other raw materials suppliers must pay their certifications. Crops Jatropha curcas L. This plant, known also as purging nut, it has its origin in Mesoamerica, therefore wide genetic varieties exist in Mexico. Although there are producers that state they have been cultivating it since four years, this crop is recently used. Seed had been sent to other countries, becoming India main producer, although Mozambique is also an outstanding producer -Sun Biofuels from Mozambique recently exported jatropha oil shipment to Germany, to be used by Lufthansa in jet biofuel. This airline is currently searching for 400 millions liters of jet biofuel (http://biofuelsdigest.com/bdigest/2011/07/26). It is a perennial species with high oil content in seed (from 26.4 to 56.9% in laboratory tests), from which greater Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial también es muy importante -Sun Biofuels de Mozambique exportó recientemente un embarque de aceite de jatropha a Alemania, para ser utilizada en bioturbosina por Lufthansa. Esta línea aérea está buscando actualmente 400 millones de litros de bioturbosina. (http://biofuelsdigest. com/bdigest/2011/07/26)-. Se trata de una especie perenne con altos contenidos de aceite en su semilla (26.4 a 56.9% en pruebas de laboratorio), de la que se esperan altos rendimientos (alrededor de 4 toneladas por hectárea). Hay variedades tóxicas y no tóxicas. En México existen alrededor de 41 variedades. El 76% son endémicas. El Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias (INIFAP), está desarrollando investigación agronómica: evaluación de genotipos en diferentes ambientes; desarrollo de tecnología de producción (podas, fechas de siembra, fertilización, poscosecha), selección de variedades y selección de tecnologías. La institución ha establecido 2012 como el año en que podrá informar sus resultados (Zamarripa, 2010). También el INIFAP ha establecido las zonas potenciales para este cultivo. Así, señala que en el país existen un millón 926 748 ha con potencial alto y dos millones 774 182 ha con potencial medio. Esto significa más cuatro millones y medio de hectáreas de regiones aptas para esta plantación. Las condiciones son climas cálidos, no superiores a los 1 500 msnm. Las plantaciones más extensas están en Chiapas y en Sinaloa, con semillas no tóxicas y tóxicas provenientes en su mayor parte de la India. ProÁrbol, de la Comisión Nacional Forestal (CONAFOR) asignó presupuesto para plantaciones forestales comerciales con Jatropha para los años 2007 a 2010 a los estados de Campeche, Chiapas, Guerrero, Hidalgo, Jalisco, Michoacán, Morelos, Oaxaca, Quintana Roo, Sinaloa, Tabasco, Tamaulipas, Veracruz y Yucatán para un total de 33 205 hectáreas. De éstas, sólo se establecieron plantaciones en los estados de Chiapas, Guerrero, Michoacán, Morelos, Oaxaca y Yucatán en un total de 3 031 hectáreas, durante el periodo 2008 a 2010. Para 2011-2012, CONAFOR se propone apoyar el establecimiento de 10 000 mil hectáreas de plantaciones de jatropha, principalmente en las zonas con mayor potencial, focalizando recursos en los estados de Chiapas, Michoacán, Morelos, Guerrero, Oaxaca, Sinaloa, Tamaulipas y Yucatán. 583 yields are expected (around 4 ton ha-1). There are toxic and non-toxic varieties. Around 41 varieties exist in Mexico, from which 76% are endemic. The National Research Institute for Agricultural, Forestry and Livestock (INIFAP) is developing agronomic research: assessment of genotypes in different environments; development of production technology (pruning, planting dates, fertilization, post-harvest), varieties selection and technologies selection. 2012 has been set by the Institute like year in which it would inform results (Zamarripa, 2010). Also INIFAP has set potential zones for this crop. According to its reports there are 1 926 748 ha with high potential and 1 774 182 ha with intermediate potential in Mexico. This means more than 4.5 million ha of suitable soils for this crop. Its conditions are warm weather, with less than 1 500 masl. Largest plantations are in Chiapas and Sinaloa, with toxic and non toxic seed coming most of them from India. ProÁrbol, from National Forestry Commission (CONAFOR), allocated budget for commercial forest plantations with Jatropha from year 2007 to 2010 in the states of Campeche, Chiapas, Guerrero, Hidalgo, Jalisco, Michoacán, Morelos, Oaxaca, Quintana Roo, Sinaloa, Tabasco, Tamaulipas, Veracruz and Yucatán for total surface of 33 205 ha. From these, plantations were set only in Chiapas, Guerrero, Michoacán, Morelos, Oaxaca and Yucatán with total surface of 3 031 ha during 2008-2010 period. For 2011-2012 period, CONAFOR proposal is to set 10 000 ha of jatropha plantations, mainly in the zones with greater potential, focusing resources in states of Chiapas, Michoacán, Morelos, Guerrero, Oaxaca, Sinaloa, Tamaulipas and Yucatán. The supports consist in $7 398 per ha for plantation settling and maintenance during first year, adding an amount between $438 and $1 096 for technical assistance and from $548 to $876 for plantation insurance covering first two years, depending on surface and risk type (SEMARNAT, 2010). Castor oil plant (Ricinus communis L.). This plant has great adaptation in Mexico’s territory, but it has never been used in large portions of land. It is a yearly plant, with 4 to 5 months cycle, but can produce during two or three years, like 584 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Los apoyos consisten en $7 398 por hectárea para establecimiento y mantenimiento de la plantación durante el primer año, más una suma entre $438 y $1 096 para asistencia técnica y desde $548 hasta $876 por concepto de seguro de la plantación para los dos primeros años, dependiendo de la superficie y el tipo de riesgo (SEMARNAT, 2010). Higuerilla (Ricinus communis L.). Esta planta tiene una gran adaptación en todo el territorio mexicano, pero hasta ahora nunca se había cultivado en grandes extensiones. Se trata de una planta anual, que tiene un ciclo vegetativo de 4 a 5 meses, pero que puede llegar a producir por dos o tres años, como un cultivo semiperenne. La higuerilla, de la que se extrae el aceite de ricino o aceite castor, se ha utilizado desde hace muchos años como planta medicinal, principalmente para problemas digestivos, pero también para la gripe, infecciones y golpes externos. La higuerilla se cultiva comercialmente en más de 30 países. Tiene frutos semiespinosos que pueden ser dehiscentes -que se abren espontáneamente al madurar- o indehiscentes, lo que tiene mucha importancia para la cosecha. En América, Brasil, Colombia y Costa Rica tienen la delantera en su cultivo. Como cultivo anual, puede ser parte de un esquema de rotación de cultivos. Existen variedades enanas susceptibles de mecanizar. El INIFAP ha estimado que en México existen 6.3 millones de hectáreas con “potencial productivo medio en áreas de temporal”. Requiere suelos con pH neutro, porque no tolera la salinidad. Prospera bien hasta los 1 800 msnm. Su producción en el país es muy reciente, por lo que no se conoce con exactitud el rendimiento medio por hectárea. En la India, éstos varían de 1.3 a 3.6 toneladas por hectárea y en Brasil de 1 a 4 toneladas por hectárea de semilla (Cárdenas, 2010). Sus rendimientos en aceite varían de 45 a 50%. Palma africana (Elaeis guineensis). Esta plantación es originaria de África Oriental y actualmente se cultiva en numerosos países de Asia, África y América Latina. Entre todos sobresale Malasia donde se produce 50% de toda la cosecha mundial, con palmas modificadas genéticamente y bajo el control de la transnacional Unilever. Entre sus requerimientos están una humedad relativa de 75% (1 800 a 2 200 mm anuales bien distribuidos) y altas temperaturas. Ibis Sepúlveda González a semi-perennial crop. The castor oil plant, from which castor oil is extracted, by many years has been used as medicinal plant, mainly for digestive problems, but also to treat cold, infections and external contusions. Castor oil plant is commercially cultivated in more than 30 countries. It has semi-thorny fruits which can be dehiscent -that spontaneously open at maturity- or indehiscent, which is very important for the crop. Brazil, Colombia and Costa Rica are the main producers in America. Just like other annual crops, it can be used in rotation scheme. There are dwarf varieties susceptible to mechanize. According to INIFAP, Mexico has an estimate of 6.3 millions ha with “intermediate productive potential in rainfall zones”. Due salinity affects this plant, it requires soils with neutral pH. Its conditions are less than 1 800 masl. Its yield per hectare is not known with certainty due its harvest is very recent in Mexico. In India, yield ranges from 1.3 to 3.6 tons ha-1; and from 1 to 4 tons ha-1 in Brazil. Oil yield varies from 45 to 50%. Oil Palm (Elaeis guineensis). This plant is from West Africa and actually is harvested in many countries from Asia, Africa and Latin America. The most important is Malaysia with 50% of worldwide share, with genetically modified palms and under control of transnational company Unilever. It requires 75% of relative humidity (from 1 800 to 2 200 mm per year evenly distributed) and high temperatures. Due crop characteristics and deforestation, soil is exposed to sunlight and rain, which leads to its erosion, compression and impoverishment. Palm cultivation contributes to climatic change due deforestation and therefore to global warm, causing lack of rain (Hidalgo, 2002). It is estimated that in Nicaragua is economically viable for 25 years. Average oil yield is between 3.5 and 3.8 ton ha-1 per year for oil, but only if technological conditions and producer’s capacity are improved, yield can rise up to 5.5 or 6 tons ha-1 of crude oil per year (Nireblog-Agronomía, 2009). Oil palm produces edible oil, which contravenes sustainability principles set by RSB. However, in Chiapas, where weather conditions allow it, there are palm plantations in more than 17 756.75 ha of surface, to which there would be added 5 000 ha planted in 2007 under Main Plan for Oil Palm Product System Chiapas 2004-2014 (Castro, 2009). Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial Debido a las características del cultivo y la deforestación, el suelo queda expuesto a los rayos solares y a las lluvias, lo que conlleva a su erosión, compactación y su empobrecimiento. El cultivo de palma contribuye al cambio climático por la deforestación y con ello al calentamiento global, aunado a ello, se dan otros procesos de deforestación y como consecuencia la falta de lluvias (Hidalgo, 2002). En Nicaragua sostienen que es económicamente viable por 25 años. El rendimiento de aceite promedio en Nicaragua anda entre 3.5 a 3.8 toneladas por hectáreas por año de aceite, pero mejorando las condiciones tecnológicas y la capacidad de los productores el rendimiento puede elevarse a 5.5 a 6 toneladas de aceite crudo por hectárea al año (NireblogAgronomía, 2009). La palma africana o palma aceitera produce aceite comestible, por lo que quedaría fuera de los principios de sustentabilidad establecidos por la RSB. Sin embargo, en Chiapas, donde las condiciones climáticas lo permiten, hay plantaciones de palma cuya superficie se calculaba en más de 17 756.75 hectáreas, a las que habría de adicionarle 5 000 hectáreas más plantadas en 2007 Plan Rector del Sistema Producto Palma de Aceite Chiapas 2004-2014 (Castro, 2009). Agaves. La enorme producción de biomasa susceptible de obtenerse de diversos tipos de agaves en terrenos no aptos para el cultivo, hace de los agaves una opción a considerarse en la producción de bioturbosina. Su producción se estima en 40 a 100 toneladas de materia seca por hectárea por año, con bajos requerimientos de insumos (Vélez, 2010). Esta información, vertida en una ponencia del Plan de Vuelo, requiere verificación técnica más precisa-. No se promueve la biomasa para la producción de biocombustibles de segunda generación. Faltan incentivos para la utilización de la biomasa. Acontinuación se presenta un diagrama de flujo proporcionado por una de las empresas que tienen la patente para la refinación de la bioturbosina (UOP de Honeywell), donde se puede observar que tanto los aceites como la biomasa son materias primas para la producción del combustible aéreo, aunque con distintos procesos de elaboración (Figura 1). Sin embargo, se requiere de un estudio puntual para conocer la disponibilidad de biomasa de agaves, así como para estimar los costos de producción de planta y de plantación en terrenos marginales. 585 Agave. The huge biomass production which is able to be obtained from several types of agave in soils not suitable for cultivation makes agave an option to consider in jet biofuel production. Its production is estimated between 40 to 100 tons of dry matter per hectare by year, with low requirements of supplies (Vélez, 2010). This information, from a presentation during Flight Plan agenda, requires precise technical verification. Biomass for second generation biofuels is not promoted. There is lack of incentives for biomass usage. Bellow is flow diagram provided by Honeywell’s UOP, which holds jet biofuel refining patent. It can be seen that as well oils as biomass are raw material for jet fuel production, but with different manufacturing processes. However, deeper study is required to know availability of agave biomass, and for estimating plant production costs and planting in marginal lands. Also, jet biofuel production based in agaves is within raw material biomass sources and it represents: Requirements of research in processing (UOP). High transportation costs due its large volume. There are several and supplementary biomass sources: vegetal and urban disposal. Energy efficiency analysis. Economical profitability analysis. Other raw materials for jet biofuel Algae. Oil producing microalgae are an important source for non-edible oils production. Again they convert Mexico in a country very suitable for its production, due its wide coastal surface with warm weather throughout year and high sun radiation. Bellow there is a list with some advantages of algae, in particular if CO2 is added for commercial production: High photosynthetic efficiency. Ibis Sepúlveda González 586 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 2nd Generation Renewable Jet Fuel from Oils and Biomass Natural Oils and Fats Deoxygenation Selective Cracking/ Isomerization Green Jet-range paraffins Renewable Jet Fuel Solid Biomass Pyrolysis Catalytic Stabilization/ Deoxygenation Jet Range cyclic hydrocarbons Figura 1. Segunda generación de combustible para aviones a partir de aceite renovable y la biomasa. Figure 1. 2th generation renewable jet fuel from oils and biomass. Además, la producción de bioturbosina con base en agaves se inscribe dentro de las fuentes de biomasa como materia prima y el trabajo con ella presenta: Higher grow rate than any other source. Requerimientos de investigación en el procesamiento (UOP). Little space requirements. Altos costos de transporte por su gran volumen. Fixing CO2. Hay fuentes diversas y complementarias de biomasa: residuos vegetales y desechos urbanos. Can use blackwater. Análisis de eficiencia energética. Análisis de rentabilidad económica. Otras materias primas para bioturbosina Algas. Las microalgas productoras de aceite son una fuente muy importante para la producción de aceites no comestibles. Las microalgas nuevamente hacen a México High oil productivity. Disposal is reusable. Can produce secondary metabolites with pharmaceutical interest. According to studies from Scientific Research Center of Yucatán (CICY), algae commercial production is not in the near future (Barahona, 2010). However, there are companies with outstanding and apparently highly competitive development. Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial un país muy adecuado para su producción, debido a su amplia superficie de litorales con clima cálido todo el año y alta radiación solar. A continuación se enumeran algunas de las ventajas de las algas, sobre todo si se les adiciona CO2 para una producción comercial: Alta eficiencia fotosintética. Mayor tasa de crecimiento que cualquier otra fuente. Alta productividad de aceite. Requieren poco espacio. 587 Used grease, fats and edible oils. This is an important source of biodiesel production, and eventually for jet biofuel, in European countries and in Brazil, in America. Their main raw materials are greases collected in slaughter houses and oil used for large food manufacturing companies. However, usage of this source, in order to be sustainable and that not consumes more energy during collection process than it would be, initially requires: Contracts with slaughter houses and food processing companies. Fijan CO2. Collection infrastructure in food companies and receiving containers with available location for general population disposal. Pueden utilizar aguas residuales. Population education on used edible oils disposal. Los residuos son utilizables. As it can be seen, all are potentially feasible options, but many research and development is needed in the country to set them in efficiently production conditions, and there is an option to which Mexican government is already strongly pushing. Pueden producir metabolitos secundarios de interés farmacéutico. De acuerdo a las investigaciones del Centro de Investigaciones Científicas del estado de Yucatán (CICY) al respecto, la producción comercial de algas está lejana (Barahona, 2010). Sin embargo, hay empresas que tienen ya desarrollos muy importantes y al parecer, altamente competitivos. Grasas, sebos y aceites comestibles usados. Esta es una fuente importante para producción de biodiesel, y eventualmente bioturbosina, en países europeos y en Brasil, en América. Sus materias primas principales son las grasas que se colectan en los rastros y el aceite usado en la elaboración de alimentos por parte de grandes empresas. Sin embargo, la utilización de esta fuente, para que sea sustentable y no consuma más energía en el proceso de recolección que la que se obtendría, requiere de inicio de: Contratos con rastros y empresas procesadoras de alimentos. Infraestructura de recolección en empresas alimentarias y depósitos receptores localizados disponibles para los desechos de la población en general. Seeds processing to obtain oils and by-products From our point of view, oils demand for biofuels can only be fulfilled by combination of suppliers and sources of raw materials. This would be a route to revitalize depressed agricultural sectors. However, in order that primary producers get greater extent of supply chain, it seems necessary they hold processing stage of seeds they produce. This requires organization, as later will be discussed, so they can become oil suppliers, not only from oleaginous seeds. Oil extraction from oleaginous seeds is a process that requires several phases, in general terms: cleaning, peeling, slicing and milling, mechanical extraction and solvent extraction. The most usual extraction methods are pressing and centrifuge. Crude oils and paste are the products. They can be used for animal food and even to obtain proteins for human consumption, they normally contain more than 9% in oils. To seize most of this excess, solvent-based degreasing procedure is used, which usually keeps pastes or cakes intact for nutritional use. Hexane is the most used material as solvent. Ibis Sepúlveda González 588 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Educación de la población para el desecho de aceites comestibles usados. Como se puede observar, todas las opciones son potencialmente factibles, pero falta mucha investigación y desarrollo en el país para ponerlas en condiciones de ser productivas y eficientes, aunque hay una opción a la que ya el gobierno mexicano le está apostando fuertemente. El procesamiento de las semillas para obtención de aceites y subproductos Desde nuestro punto de vista, la demanda de aceites para biocombustibles sólo puede ser satisfecha por una combinación de oferentes y fuentes de materias primas. Esto pudiera ser una opción para reactivar sectores agrícolas deprimidos. Sin embargo, para que los productores primarios obtengan una fracción mayor del valor de la cadena, parece necesario que se apropien de una etapa del procesamiento de las semillas que produzcan. Esto requiere de organización, como se discutirá más adelante, para que puedan ser oferentes de aceite, no sólo de semillas oleaginosas. La extracción de aceites de las semillas oleaginosas es un proceso que requiere de varias fases, en términos generales: limpieza, descascarillado, troceado y molido, extracción mecánica y extracción por solventes. Las formas más usuales de extracción son por prensado y por centrifugado. Los productos son aceites crudos y pastas. Estas, que pueden usarse para la alimentación animal e incluso en la obtención de proteínas para consumo humano, contienen normalmente más de 9% de aceites. Para aprovechar parte importante de este excedente, se procede a un procedimiento de desgrasado por solventes, que no suele inutilizar las pastas o tortas para su uso nutricional. El material más utilizado como solvente es el hexano. El procedimiento no resulta técnicamente muy complicado, pero requiere de estudios precisos en cuanto a localización de las plantas extractoras y tamaño de planta, todo ello sujeto a la superficie de las siembras o plantaciones, a lo compacto de las áreas y al rendimiento de las variedades de los cultivos. También es muy importante considerar las bodegas para guardar las semillas, su conservación hasta la extracción, la infraestructura carretera y el transporte, comercialización y usos alternativos de los aceites, tortas y otros subproductos. Sin estos estudios que valoren la rentabilidad de los procesos, podrán establecerse plantas extractoras que sólo aumenten la cantidad de elefantes blancos, infraestructura perdida en el campo mexicano. The procedure is technically quite simple, but requires precise studies as long for extraction plants localization and plant size, all depending on sowing or plantations surface, on soils density and crops varieties yield. Also is very important to consider warehouse to keep seeds, their conservation up to extraction, roadway infrastructure and transport, marketing and alternative use of oils, cakes and other by-products. Without these studies that assess process profitability, only extraction plants that are useless, lost of infrastructure in Mexican country is obtained. Legislation Law for Promotion and Development of Biofuels (Cámara de Diputados, 2008) is released on February 1st, 2008. Becoming public on June 18th, 2009 and on November 13th 2009 rules for granting permissions for production, storing, transport and marketing of biofuels from anhydrous ethanol and biodiesel type are emitted. In the first revision approved on April 2007 it comprised only corn and sugar cane production as biomass sources for ethanol and only mentioned promotion of crops for biodiesel production (García, 2009). To coordinate policies of Federal GovernmentAdministration in biofuels matters, the Inter-secretariat Committee for Biofuels Development is created. Body comprised by Energy Secretriat (SE), which plays like head office: Ministry of Agriculture, Livestock, Rural Development, Fisheries and Food (SAGARPA); Environment and Natural Resources Secretariat (SEMARNAT); and Finance and Public Credit Secretariat (SHCP). According to the law, activities subject to license are production, storing, transport, duct distribution and marketing of ethanol and biodiesel. Complex law about requirements for every license exists, even for non-edible oils that can produce biofuel. Some of these requirements are in such law and other are implicitly in reference to other laws and make difficult to handle production and transformation process of biofuels materials. OriginOil and Manhattan project On February 22nd, 2011 appeared in Biodiesel Magazine (www.biodieselmagazine.com) the news about Mexican government, together with Californian company OriginOil, would start pilot project in Ensenada, Baja California, for Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial La legislación El 1 de febrero de 2008 se promulga en México la Ley de Promoción y Desarrollo de los Bioenergéticos (Cámara de Diputados, 2008). El reglamento se hace público el 18 de junio de 2009 y el 13 de noviembre de 2009 se emiten los lineamientos para el otorgamiento de permisos para la producción, el almacenamiento, el transporte y la comercialización de bioenergéticos del tipo etanol anhidro y biodiesel. En una primera versión aprobada en abril de 2007 básicamente se contemplaba la producción de maíz y caña de azúcar como fuentes de biomasa para etanol y sólo se indicaba la promoción de cultivos para la producción de biodisel (García, 2009). Para coordinar las políticas de la Administración Pública Federal en materia de bioenergéticos, se crea la Comisión Intersecretarial para el Desarrollo de los Bioenergéticos. Se trata de un órgano colegiado, integrado por las Secretarías de Energía (SE), que lo preside: la Secretaría Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación (SAGARPA); Secretaría Medio Ambiente y Recursos Naturales (SEMARNAT); y Secretaría de Hacienda y Crédito Público (SHCP). De acuerdo al reglamento, son actividades sujetas a permisos la producción, el almacenamiento, el transporte, la distribución por ductos y la comercialización de etanol y biodiesel. Existe toda una normatividad bastante complicada con respecto a los requerimientos para obtener los permisos para cada fase del proceso de producción, manejo y comercialización de algún biocombustible, incluso de los aceites no comestibles que pueden dar origen al biocombustible. Estos requisitos están algunos explícitos en el citado Reglamento y otros implícitos que hacen referencia a otras leyes y que dificultan grandemente los procesos de producción y transformación de materiales para los biocombustibles. Originoil y el proyecto Manhattan El 22 de febrero de 2011 apareció en la revista electrónica Biodiesel Magazine (www.biodieselmagazine.com), la noticia de que el gobierno mexicano, junto con la empresa californiana OriginOil, pondrán en funcionamiento un proyecto piloto en Ensenada, Baja California, para la producción de aceite de algas destinado, en primera instancia, a la producción de bioturbosina. El proyecto de colaboración, llamado Proyecto Manhattan, será financiado por el gobierno mexicano a través de una serie de subvenciones de la SE que serán administradas por el Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT) en un plan multianual. Estas declaraciones las hizo Riggs Eckelberry, ejecutivo principal de OriginOil. 589 production of algae oil used for jet biofuel production, in first term. The collaboration project, known as Manhattan Project, will be funded by Mexican government through several subventions from SE that will be managed by National Council of Science and Technology (CONACYT) in multiple-years plan. These statements were made by Riggs Eckelberry, OriginOil’s CEO. He also stated that the project has three phases for this year; therefore he would be working in location (“alpha site” in Baja California) for the second quarter of year and for the end of the third phase would be producing two hectares, one with algae ponds and the other one with photobioreactor. This project will be repeated in a second phase where 1 000 ha of coastal line will be used for algae production, also at “seed” level. Genesis companies (Genesis Ventures) and their partners, who participate in the project, are willing to invest in development at large scale of “beta sites” in Mexico. Based on a previous project set in Sonora and on the results obtained by OriginOil in Karratha, Australia, it is planned that 1 hectare produces 74 kilograms of lipid per day. According to Dr. José Sánchez Piña, Vicepresident of Production and Growing Systems of OriginOil Inc., to obtain jet biofuel required in Mexico for year 2020, an industrial production can be achieved “with 22 950 ha of open sky bonds with an initial investment of 1 606 million dollars or construction of 11 475 ha of photobioreactors with an initial investment of 1 893 million dollars. Also, 1 530 ha of bonds can be used together with heterotrophic reactors sets with capacity to process 1 683 millions of liters per day, which would initially cost 872 millions dollars. Operation costs about $40 000 dollars per hectare per year need to be added -including production, harvest, oil extraction and processing to jet biofuel-, independently of used technology” (Sánchez, 2011). In this work, the author shows a map from Mexico where around 60% of total surface is suitable for oil algae production, in coastal lines at open bonds and in non-coastal regions by advanced automated photobioreactors. Recommendations and conclusions Facing scarcity of fuels, recently worsen by Japan earthquake which made clear weakness and risk of using nuclear energy, it is more evident than ever that biofuels will be a need in the short term, not only to produce aircraft fuels. 590 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 También señaló que el proyecto contempla tres fases para este año, por lo que se espera ya estar trabajando en terreno (sitio Alfa en Baja California) para el segundo trimestre del año y que para el final de la tercera fase van a estar en producción dos hectáreas, una con estanques de algas y la segunda con un fotobiorreactor. Este proyecto se replicará en una segunda fase donde se ocuparán 1 000 hectáreas de costa para la producción de algas, también a escala “semilla”. Las empresas Génesis (Genesis Ventures) y sus socios, parte del proyecto, están dispuestas a invertir para desarrollar en México “sitios Beta” de gran escala. Con base en un proyecto que ya se había establecido en Sonora y en los resultados obtenidos por OriginOil en Karratha, Australia, se plantea que una hectárea de algas puede producir 74 kilos de lípidos al día. De acuerdo al Dr. José Sánchez Piña, Vicepresidente de Sistemas de Producción y Crecimiento de OriginOil Inc., para conseguir la bioturbosina requerida en México para 2020, se puede lograr la producción industrial “con 22 950 hectáreas de estanques a cielo abierto con una inversión inicial de 1 606 millones de dólares o la construcción de 11 475 hectáreas de fotobiorreactores con una inversión inicial de 1 893 millones de dólares. También, se pueden usar 1 530 hectáreas de estanques aunadas a baterías de reactores heterotróficos con capacidad para procesar 1 683 millones de litros diarios, lo cual costaría 872 millones de dólares inicialmente A esto hay que agregar gastos de operación de $40 000 dólares por Hectárea anualmente -incluye producción, cosecha, extracción de aceite y procesamiento en bioturbosina, independientemente de la tecnología usada” (Sánchez, 2011). En el trabajo citado, el autor presenta un mapa de la república mexicana donde se muestra que aproximadamente 60% de la superficie total nacional es apta para la producción de aceite de algas, en las líneas costeras en estanques a cielo abierto, y en las regiones no costeras mediante la instalación de fotobiorreactores automatizados avanzados. Recomendaciones y conclusiones Ante la escasez de combustibles, agudizada muy recientemente por el terremoto de Japón que dejó en evidencia las debilidades y riesgos del uso de la energía nuclear, se hace más evidente que nunca que los biocombustibles serán una necesidad en el corto plazo, no sólo para elaborar combustibles aéreos. Ibis Sepúlveda González This creates a window of opportunities for countries like Mexico, with large land surface, suitable weather as well for production of oil-based raw materials for jet biofuels, as for ethanol production and with large young population that due lack of jobs in their hometowns, they are forced to emigrate within Mexico and abroad. For the time being, first true market arises and will demand virtually all non-edible oil that could be produced. Mexico imports near 95% of oleaginous seeds that process (López, 2008) and with actual added demand already mentioned, there will be possibilities of sale and use oleaginous seed that can be harvested. Of course, the goal is not to use lands already for agricultural use, then competing with food production, but to use lands with hydric deficit and low quality superficial soils would be a good alternative for crops like jatropha and castor oil, which have very low requirements and high rusticity. Jatropha is a plantation that can last up to 30 years, then it is important to carefully choose land where it would be set, but castor oil is a yearly crop that can be introduced in rotation cycle of low demanding requirement crops in marginal lands, without competing with other traditional crops either causing ecological issues like monoculture (Sepúlveda, 2011). In 2011, thanks to their production costs even fossil fuels prices, like jet fuel, are lower than their biological equivalent fuels, like jet biofuel. Therefore, in the forecast and business plans for new production, it is important to consider all coproducts and by-products that could emerge during their processing, because if producers considers only oils sale, profitability would be negative. Also alternative markets are an option to consider, like pharmaceutical industry, specially for castor oil plant (castor oil and secondary metabolites), tanneries and, specially, the possibility of processing at low scale to transform it in biodiesel, by means of transesterification process giving glycerin as by-product. Other option is to seek supplement crops with animal breeding, since cakes left after oil extraction process have high protein content, which is the most expensive and indispensable component in livestock diets. The husk can also be used to add organic matter to soils. Other outstanding issue is to evaluate available roadway infrastructure, as well local roads in field as highways to move grains to distribution centers for extraction facility Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial Esto abre una ventana de oportunidad a países como México, con un amplio territorio, un clima adecuado para la producción tanto de materias primas para biocombustibles basados en aceites, como para la producción de etanol y con abundante población joven que, por falta de oportunidades de empleo en sus lugares de origen, se ven obligados a emigrar, dentro y fuera del país. Por lo pronto, se abre un primer mercado cierto que demandará prácticamente todo el aceite no comestible que pueda producirse. México importa cerca de 95% de las semillas oleaginosas que procesa (López, 2008) y con la demanda agregada actual ya referida, habrá todas las posibilidades de venta y utilización de las semillas oleaginosas que se puedan cultivar. Por supuesto, no se trata de utilizar superficies que tengan vocación agrícola pues así si se competiría con la producción de alimentos, pero utilizar terrenos con deficiencia de agua y con suelos someros de poca calidad, puede ser una opción muy favorable para cultivos como la Jatropha y la higuerilla, que tienen requerimientos muy escasos y alta rusticidad. La jatropha es una plantación que puede durar hasta 30 años, por lo que es importante seleccionar con mucho cuidado el terreno donde se establecería, pero la higuerilla es un cultivo anual que puede perfectamente entrar en un ciclo de rotación de cultivos poco exigentes en terrenos marginales, sin competir así con otros cultivos tradicionales ni provocar problemas ecológicos como monocultivo (Sepúlveda, 2011). Actualmente, en 2011, aún los precios de los combustibles fósiles, como la turbosina, son más bajos que los que se supone que tendrían sus similares biológicos, como la bioturbosina, atendiendo a sus costos de producción. Por lo tanto, en las proyecciones y planes de negocio para las nuevas producciones, es muy importante considerar todos los coproductos y subproductos que pudieran resultar de los procesos, pues si sólo se piensa en la venta del aceite, los resultados económicos serán probablemente negativos. También es muy relevante considerar mercados alternativos, como la industria farmacéutica, sobre todo en el caso del aceite de higuerilla (aceite de ricino o aceite castor y metabolitos secundarios), la curtiduría y sobre todo, la posibilidad del procesamiento en pequeño del aceite para transformarlo en biodiesel, a través de un proceso de transesterificación que da glicerina como subproducto. Otra opción muy importante es buscar complementar los cultivos con cría de animales, pues las tortas que quedan después de la extracción del aceite, tienen un elevado contenido en 591 and from there to target market. Due is already defined by law and rules, as mentioned before, it is indispensable to foreseen the transport means and truck features. This is by obvious reasons an option to revitalize rural sector, in particular for countrymen producers that usually own marginal and currently unused lands, due lack of productive options, lack of technical assistance, infrastructure and incentives to settle crops. Nevertheless, to seize this opportunity is necessary to organize small producers. This must be met, since large surfaces will be needed in order to obtain profitable production when settling down a processing center. To push this organization, the cooperative figure can be used, but under a scheme that makes no conditions to producers to be linked to the other workers’ scheme and that the payment is directly related to the quantity of product they deliver. An option to make efficient the technical assistance is by means of contract agriculture, even if the entity that makes the contract is a rural cooperative, which has oil extracting facility. In this way, facility rules all productive process, taking charge of technical assistance, supply of required raw material on time, attention to emergencies that would arise and recommendations for harvest in timely and properly way. Other two factors to consider before commit with a new crop project are agronomic research and technical assistance. Although INIFAP is working on agronomic matters, results are slow and actual institute team members find hard to communicate it. If keep waiting until spreading results that would be obtained by the Institute and wait for multiplication of necessary seeds, the chance to make it profitable would vanish for Mexican countrymen and their lands will be rented for this same purpose, but probably by transnational companies, which will pay much less to them and will not allow to overcome misery. By all these reasons, groups that take this production of new crops as challenge (although castor oil and jatropha are plants that live in wild or greenhouse, they have never been used for commercial purposes) will have to take care of obtaining and testing materials -Colombia, through CORPOICA, developed and recently released castor oil plant variety Nila Bicentenaria, with yields between three and four tons per hectare in 12 to 14 months. Nila B prospers with mild cold at heights ranking from Ibis Sepúlveda González 592 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 proteínas, que es el componente más caro e indispensable en las dietas pecuarias. Las cascarillas también pueden ser usadas para incorporar materia orgánica a los suelos. Una consideración relevante es valorar la infraestructura carretera con que se cuenta, tanto de “caminos de saca” en campo, como de carreteras para transportar granos al centro de acopio de la planta extractora y de ésta al mercado objetivo. El tipo de medio de transporte, las características de los camiones, es indispensable de conocer y prever, pues como se veía en la parte de regulaciones, todo ello está sujeto a reglamentos y revisiones. Por supuesto, ésta se considera una opción de reactivación para el campo, sobre todo para los productores de tipo campesino que suelen ser los poseedores de tierras marginales y actualmente ociosas, tanto por falta de opciones productivas, como de asistencia técnica, infraestructura y apoyos para establecer los cultivos. Sin embargo, para aprovechar esta oportunidad es indispensable la organización de los pequeños productores. Es un requisito sine qua non, puesto que se necesitarán superficies considerables en producción para que sea rentable establecer un centro de procesamiento. Una figura que podría utilizarse para esta organización, es la cooperativa, pero bajo un esquema ligero que no condicione a los productores a ligarse a las formas de trabajo de sus compañeros y se les pague estrictamente en relación a la cantidad de producto que entreguen. Una forma de hacer eficiente la asistencia técnica es mediante los mecanismos de la agricultura de contrato, aunque quien contrate sea una cooperativa rural, pero que tenga su planta extractora de aceite. De esta manera, la planta debería ser la estructuradora del proceso productivo total, encargándose de la asistencia técnica, la provisión de los insumos necesarios en los momentos oportunos, la atención de las emergencias que pudieran presentarse y las recomendaciones para la cosecha en el tiempo y forma adecuada. La investigación agronómica y la asistencia técnica son otros dos factores a considerar antes de comprometerse con un proyecto sobre un cultivo nuevo. Aunque el INIFAP está trabajando sobre los aspectos agronómicos, de acuerdo a lo expresado por el líder, los resultados son lentos y difícilmente comunicables por el equipo institucional encargado actualmente. Si se espera a la divulgación de los resultados que se obtengan por el instituto y a la multiplicación de las semillas necesarias, la oportunidad quedará atrás para los mexicanos(as) y sus tierras serán rentadas para el mismo objetivo, probablemente por transnacionales, cuyos pagos no permitirá a los campesinos salir de la miseria. 1 800 to 2 100 masl (CORPOICA, 2011)- as well as in situ experiments together with producers. For sure, the first years of these new crops should not achieve huge economic success, and they would be prepared for this, but they need to be aware that they are opening a new option with great future. Then crop of non-conventional and non-edible oleaginous oils is a challenge that countrymen and NG organizations must face, like an opportunity to support recovery of unused lands, and probably in middle term, to obtain a good income for countrymen, who actually have as option to emigrate, which is even harder and harder to achieve due ongoing conditions in northeast orchards production (frosts and cereals high cost, which has led to a change in crop patterns) and all issues related to crossing the border towards USA. On the other hand, is very important being aware of initiatives like Project Manhattan. It is worth to mention that government supports with public resources, even for CONACYT research, to private transnational companies that have well defined processes and, like in this case, even patented process. And is worth to mention not because supporting private companies, it has been done before through CONACYT, but because there is no opportunity for the company to distribute profits, since they employ very few personnel thanks to its high technology. Without any doubt, at the beginning they will work in sectors already environmentally affected, but afterwards, depending on profitability margins, they will move towards suitable lands, “renting complete common lands” –term used by OriginOil representative-, because according to the potential map of Mexico filled with microalgae plants that OriginOil CEO issued, Mexico could become the supplier of algae oil at worldwide level, but through and for large transnational company. End of the English version Literatura citada ASA. 2010. Consideraciones. En http://plandevuelo.asa. gob.mx/wb/. ASA. 2011 Biocombustibles de aviación. En http:// plandevuelo.asa.gob.mx/wb/. Bioturbosina. Producción de cultivos energéticos para la aviación comercial Por lo anteriormente asentado, los grupos que se comprometan en este tipo de producciones nuevas (aunque tanto la higuerilla como la jatropha son plantas que se han dado de manera silvestre o en traspatio, pero no como cultivos comerciales), tendrán que encargarse de conseguir y probar materiales - Colombia, a través de CORPOICA, desarrolló y recientemente liberó la variedad Nila Bicentenaria de higuerilla, con rendimientos de entre tres y cuatro toneladas por hectárea en 12 a 14 meses. Nila B prospera con frío moderado en altitudes de 1 800 a 2 100 msnm (CORPOICA, 2011)- así como hacer experimentación in situ con los mismos productores. Seguramente los primeros años de estos cultivos nuevos no serán de grandes logros económicos, y hay que estar preparados para ello, pero sí estar conscientes de que están abriendo una nueva posibilidad con mucho futuro. El cultivo de oleaginosas no convencionales y no comestibles es, entonces, un reto que deberían asumir las organizaciones campesinas y las Organizaciones No Gubernamentales (ONG), como una oportunidad de apoyar la recuperación de tierras ociosas, y probablemente a mediano plazo, conseguir un ingreso decoroso para la gente del campo a la que actualmente sólo le queda el impulso de migrar, impulso cada vez más difícil de hacer realidad por las condiciones en que se está dando la producción de hortalizas en el noroeste (heladas y altos precios de los cereales, lo que ha conducido a un cambio de patrón de cultivos) y las dificultades de todo tipo para traspasar las fronteras hacia el norte. Por otro lado, es importante estar muy al tanto de iniciativas como el Proyecto Manhattan. Resulta curioso, por decir lo menos, que el gobierno apoye con recursos públicos, incluso para investigación CONACYT, a empresas privadas trasnacionales que tienen muy bien definidos y hasta patentados sus procesos, como es este caso. Y, lo curioso no es apoyar a empresas privadas, pues a través de CONACYT se ha hecho siempre, sino en proyectos como este que no se ve por donde pueda realizar distribuciones de sus utilidades, puesto que ocupan muy poco personal por su alta tecnología. Sin duda de inicio comenzarán a trabajar en zonas ya ambientalmente impactadas, pero después, dependiendo de los márgenes de ganancia, avanzarán sobre buenos terrenos, “rentando ejidos completos” -expresión utilizada por el representante de OriginOil-, porque de acuerdo al mapa potencial de México lleno de plantas de microalgas presentado por el directivo de OriginOil, México podría ser el surtidor de aceite de algas para todo el mundo, pero a través y para, un gran consorcio trasnacional. 593 ASTM. 2011. ASTM aviation fuel standard now specifies bioderived components. En http://www. astmnewsroom.org/. Barahona, F. 2010. Microalgas para combustibles. Centro de Investigaciones Científicas de Yucatán (CICY). D. F., México. BiofuelsDigest. 2011. Sun biofuels commences shipment of jatropha oil from Mozambique. En http:// biofuelsdigest.com/bdigest/2011/07/26. Cámara de Diputados (CD). 2008. Ley de Promoción y Desarrollo de los Bioenergéticos. Diario Oficial de la Federación, México, D. F. Cárdenas, C. 2010. La higuerilla, un cultivo bioenergético. Enerall. En: http://plandevuelo.asa.gob.mx. Castro, S. G. 2009. Otros mundos. AC/Amigos de la Tierra México. Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria (CORPOICA). 2011. CORPOICA lanzó primera variedad colombiana de higuerilla para clima frío moderado. En CORPOICA hace grande el agro colombiano. En http://www.corpoica.org.co/sitioweb/. Fuentes, A. 2010. Ciclo de vida. Red mexicana de bioenergía, A. C., México. García, M. P. 2009. Actores en bioenergéticos. Inédito. Doctorado en Ciencias Agrarias, Departamento de Sociología Rural. Universidad Autónoma Chapingo (UACH), Estado de México, México. García, M. P. 2010. Biorrefinerías y agricultura. Ensayo predoctoral. Doctorado en Ciencias Agrarias, Departamento de Sociología Rural. Universidad Autónoma Chapingo (UACH). Estado de México. Herrera, V. y Morgan, D. 2010. Sustainable aviation fuel. Global Overview. BOEING Commercial Airplane. En http://plandevuelo.asa.gob.mx/wb/. Hidalgo, D. O. 2002. El cultivo de la Palma Africana en Chiapas. En http://www.ecoportal.net/Temas _ Especiales/Biodiversidad/. López, P. E. 2008. Análisis y perspectivas del mercado mundial de aceites, grasas y proteínas. ANIAME, México. 58:12-21. Nireblog-Agronomía, 2009. Guía de manejo de palma africana. En http://agronomia.nireblog.com/. Rudolph, M. 2010. Round table on sustainable biofuels (RSB). École Politechnique Federale de Lausanne, Swiss. In: http://plandevuelo.asa.gob.mx. Sánchez, P. J. 2011. Experiencia operativa de producción comercial de microalgas para biocombustibles en México. Originoil. En: http://plandevuelo.asa. gob.mx. 594 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Secretaría del Medio Ambiente y Recursos Naturales (SEMARNAT). 2011. Plantaciones forestales comerciales de piñón de aceite (Jatropha curcas). Coordinación General de Producción y Productividad. P Gerencia de Desarrollo de Plantaciones Forestales Comerciales. In: http:// plandevuelo.asa.gob.mx. Ibis Sepúlveda González Sepúlveda, G. I. 2011. Cultivos bioenergéticos. Síntesis de presentaciones. En http://plandevuelo.asa.gob.mx. Zamarripa, A. 2010. Zonas con mayor potencial de cultivos orientados a la producción de Bioturbosina. En http://plandevuelo.asa.gob.mx. Vélez, A. 2010. Biomasa. Proyecto agaves. En http:// plandevuelo.asa.gob.mx. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 595-600 Control químico de las enfermedades: una alternativa para la producción de trigo de temporal en Tlaxcala* Chemical control of diseases: an alternative for rainfall wheat production in Tlaxcala Héctor Eduardo Villaseñor Mir1, René Hortelano Santa Rosa1§, Eliel Martínez Cruz1, Luis Antonio Mariscal Amaro2, Santos Gerardo Leyva Mir3 y Julio Huerta Espino1 Programa de Mejoramiento de Trigo. Campo Experimental Valle de México, INIFAP. Carretera Los Reyes-Téxcoco km 13.5, Coatlinchán, Texcoco, Estado de México. C. P. 56250 Tel. 01 595 9212715. Ext. 161 y 152. ([email protected]), ([email protected]), ([email protected]). 2Campo Experimental Bajío, INIFAP. Carretera Celaya-San Miguel de Allende km 6.5, Celaya, Guanajuato. C. P. 38000 Tel. 01 461 6115323. ([email protected]). 3Departamento de Parasitología Agrícola, Universidad Autónoma Chapingo. Carretera México-Texcoco km 38.5. Chapingo, Estado de México C. P. 56230. ([email protected]. mx). §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract Con el propósito de valorar la conveniencia de aplicar fungicida para mejorar la productividad del trigo harinero y cristalino cuando incide la roya amarilla y el complejo de enfermedades foliares bajo condiciones de temporal, se establecieron en tres localidades del estado de Tlaxcala las variedades Gema C2004 y Tlaxcala F2000. Las variables analizadas fueron días a floración y a madurez, altura de planta, rendimiento de grano, incidencia de roya amarilla en el follaje y en la espiga e incidencia y severidad de enfermedades foliares. En las tres localidades la variedad de trigo harinero Tlaxcala F2000 superó en rendimiento de grano a la variedad de trigo cristalino Gema C2004 de 9% hasta 46%. Las enfermedades en su conjunto causaron mermas en el rendimiento hasta 26%. Sportak® fue el fungicida que se asoció con el mejor control de las enfermedades, lo cual se reflejó en una mayor productividad de grano con incrementos promedios 26.5 y 29.4%, cuando incidió roya amarilla y enfermedades foliares, respectivamente. Los resultados indican que es conveniente la aplicación de fungicida para reducir mermas en la producción de trigo de temporal. With the aim to evaluate convenience of applying fungicide to improve productivity of flour wheat and white wheat when there is incidence of yellow rust and complex of foliar diseases under rainfall conditions, varieties Gema C2004 and Tlaxcala F2000 were settled in three localities from state of Tlaxcala. Analyzed variables were days to flowering and to maturity, plant height, grain yield, incidence of yellow rust in foliage and in ear and incidence and severity of foliar diseases. In the three localities the flour wheat Tlaxcala F2000 variety overcame from 9% to 40% in grain yield to white wheat Gema C2004 variety. The diseases together caused decrease in yield up to 26%. Sportak® was the fungicide associated with better disease control, which was seen in greater grain yield with average increases of 26.5 and 29.4% when yellow rust and foliar diseases affected, respectively. The results denote fungicide application to reduce decreases in rainfall wheat production is convenient. * Recibido: mayo de 2011 Aceptado: enero de 2012 Key words: Triticum aestivum, Triticum durum, Puccinia striiformis f. sp. tritici, foliar diseases, fungicides. 596 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Palabras clave: Triticum aestivum, Triticum durum, Puccinia striiformis f. sp. tritici, enfermedades foliares, fungicidas. En México se consumieron en 2009 cerca de 6.7 millones de toneladas de trigo harinero y cristalino, de las cuales 4.1 millones de toneladas corresponden a la producción nacional (SIAP, 2010), por lo que se tuvieron que importar 2.1 millones de toneladas de los Estados Unidos de América y Canadá. La producción nacional se realiza principalmente bajo riego, donde Sonora, Baja California y Guanajuato participan con 75% del total. Por otro lado, 33% de la molienda del trigo de nuestro país se realiza en el Estado de México y Distrito Federal, lo que representa un gasto por concepto de flete al mover el grano de la zona de producción a los centros de molienda, lo cual es un factor determinante en la competitividad de la cadena agroindustrial del trigo nacional (Fuente, 2008). Por lo que una solución para mejorar su rentabilidad y el desabasto de trigo nacional, es la producción de este cereal en zonas cercanas a los centro de molienda. Lo anterior requiere que el productor de la región de los Valles Altos de México, ofrezca trigo en cantidad y con la calidad que demanda la industria. Es importante indicar que parte del buen potencial de rendimiento del trigo (harinero o cristalino), en las zonas temporaleras, se debe a la tolerancia a la roya amarilla (Pucccinia striiformis f. sp. tritici), roya de la hoja (P. triticina) y al complejo de enfermedades foliares causado por Septoria sp., Cochleobolus sativum y Phyrenophora tritici-repentis, por lo que el objetivo de esta investigación fue analizar el efecto de cuatro fungicidas sobre variables agronómicas y fitopatológicas en dos variedades comerciales de trigo bajo condiciones de temporal. El material genético empleado fueron las variedades Tlaxcala F2000 (trigo harinero) y Gema C2004 (trigo cristalino). Se utilizó un diseño experimental de bloques al azar con tres repeticiones en un arreglo de tratamientos de parcelas divididas, en donde la parcela grande fueron los tratamientos con fungicida (dos aplicaciones de Tilt®, Folicur®, Sportak® y Opus®) y sin fungicida, y las parcelas chicas fueron las variedades; el ensayo se analizó como una serie sencilla de experimentos. Las localidades de prueba fueron Nanacamilpa, Zotoluca y Soltepec, en el estado de Tlaxcala durante el ciclo primavera-verano 2007. La parcela experimental fue de 4 surcos de 3 m de longitud con una separación entre surcos de 0.3 m. Las variables evaluadas fueron: días a floración (DF) y madurez (DM), altura de planta (AP), porcentaje de roya Héctor Eduardo Villaseñor Mir et al. During 2009 in México near of 6.7 millions of tons of flour and white wheat were consumed, from which 4.1 millions tons corresponds to national production (SIAP, 2010), therefore 2.1 millions of tons from United States and Canada had to be imported. National production is mainly obtained under rainfall conditions, where Sonora, Baja California and Guanajuato hold 75% of total. On the other hand, 33% of wheat milling process is made in state of Mexico and Distrito Federal, which means an expense by freight when moving grain from production zone to milling center, which is an important factor for competitiveness of national wheat supply chain (Fuente, 2008). Therefore a solution to improve profitability and lack of supply at national level is to produce this grain in regions near to milling center. This requires that producer from High Valleys of Mexico offer wheat in quantity and quality required by the industry. It is important to mention that part of wheat (flour or white) yield in rainfall regions, is due its tolerance to yellow rust (Pucccinia striiformis f. sp. tritici), leaf rust (P. triticina) and complex of foliar diseases caused by Septoria sp., Cochleobolus sativum and Phyrenophora tritici-repentis, therefore the aim of this research was to analyze the effect of four fungicides on agronomical and phytopathological variables in two wheat commercial varieties under rainfall conditions. The genetic material used were varieties Tlaxcala F2000 (flour wheat) and Gema C2004 (white wheat). A randomized block experimental design with three repetitions in a treatment arrangement of split plots was used, where large plot were treatments with fungicide (two applications of Tilt®, Folicur®, Sportak® and Opus®) and without fungicide, and small plots were the varieties; the essay was analyzed as simple series of experiments. Test localities were Nanacamilpa, Zotoluca and Soltepec, in the state of Tlaxcala during 2007 spring-summer cycle. Experimental plot was from 4 furrows of 3 m length with separation between furrows of 0.3 m. The assessed variables were: days to flowering (DF) and to maturity (DM), plant height (AP), percentage of yellow rust in foliage (RAF) and in ear (RAE), incidence and severity of complex of foliar diseases (variables measured only in Nanacamilpa and Zotoluca), and grain yield (REND). For the case of reading of foliar diseases a two-digits scale was used (Saari and Prescott, 1975) that was transformed into percentage (%) of damaged foliar area (AFD) by the formula: (%) AFD= ((D1/9) x (D2/9) x 100) proposed by Control químico de las enfermedades: una alternativa para la producción de trigo de temporal en Tlaxcala amarilla en el follaje (RAF) y en la espiga (RAE), incidencia y severidad del complejo de enfermedades foliares (variables medidas sólo en Nanacamilpa y Zotoluca) y rendimiento de grano (REND). Para el caso de la lectura de las enfermedades foliares se utilizó la escala de dos dígitos (Saari and Prescott, 1975) que se transformó a porcentaje (%) del área foliar dañada (AFD) mediante la fórmula: (%) AFD= ((D1/9) x (D2/9) x 100) propuesta por Duveiller et al. (2005), en donde la incidencia D1 (primer digito) indica el progreso de la enfermedad en la altura de la planta y la severidad D2 (segundo digito) es el área foliar enferma. Se observaron diferencias significativas entre localidades para la mayoría de las variables evaluadas con excepción de RAE. Entre fungicidas se observaron diferencias para DM, RAF, RAE, AFD y rendimiento de grano. Entre variedades se observaron diferencias para DF, DM, AP y rendimiento (Cuadro 1). Lo anterior indica el contraste de las condiciones ambientales de las localidades de prueba, que los fungicidas tienen diferente efecto sobre el control de las enfermedades que incidieron y que las variedades fueron diferentes en su comportamiento agronómico. 597 Duveiller et al. (2005), where incidence D1 (first digit) indicates progress of disease in plant height and the severity D2 (second digit) is foliar area with disease. There were significant differences between localities for most of assessed variables, except RAE. Between fungicides there were differences for DM, RAF, RAE, AFD and grain yield. Between varieties there were differences for DF, DM, AP and yield (Table 1). This is a consequence of contrasting ambient conditions in test localities, since fungicides have different effect on control diseases and that varieties were different in their agronomical behavior. In Figure 1 is shown grain yield in genotypes, where is seen that in Nanacamilpa it is achieved greatest productivity due rain precipitation during crop cycle was higher (640 mm) than in Soltepec (460 mm) and Zotoluca (396 mm). Variety Tlaxcala F2000 also overcame to Gema C2004 in the three localities from 9 to 42%, due the first one was made for rainfall crops in High Valleys of Mexico, while the second one was released for rainfall crops in Bajío. The reason to assess Gema C2004 in this study is because in the results of Cuadro 1. Cuadrados medios del análisis de varianza de variables agronómicas y fitopatológicas de genotipos de trigo harinero y cristalino evaluadas bajo condiciones de temporal. Primavera-verano 2007. Table 1. Square means of analysis of variance for agronomical and phytopathological variables of genotypes of flour and white wheat assessed under rainfall conditions. Spring-summer 2007. FV Localidad Repetición (L) Fungicida (F) L*F R*F(L) Variedad L*V V*F L*V*F Error Media CV GL 2 6 4 8 24 1 2 4 8 30 DF 478.6** 10.0 0.23ns 0.28ns 1.4 513.6** 43.4** 0.6ns 1.2ns 1.5 67.4 1.8 DM 3072.2** 0.53 60.2** 6.9** 1.3 864.9** 11.4** 1.7ns 0.82ns 1.3 130.5 0.9 AP 1914.8** 1.2 1.3ns 2.5ns 3.1 1596.0** 60.0** 0.76ns 0.82ns 2.9 83.2 2 RAF 301.1** 9.4 1436.1** 21.9ns 4.5 2.5ns 13.3ns 9.4ns 16.1ns 8.6 13.6 21.5 RAE 0.27ns 3.6 1067.7** 0.27ns 3.6 4.4ns 1.9ns 4.4ns 1.9ns 4.4 24.9 8.4 AFD§ 5121.1** 14.6 1617.4** 320.3** 14.6 15.8ns 56.1ns 8.7ns 9.8ns 5.1 26.3 8.6 REND 31967151.3** 93714.2 1477529.2** 445563.7** 50926.9 7935840.2** 699538.8** 42611.3ns 58186.1ns 50442 2720.1 8.2 CV= coeficiente de variación; GL= grados de libertad; DF= días a floración; DM= días a madurez; AP = altura de planta; RAF= roya amarilla en el follaje; RAE= roya amarilla en la espiga; §AFD= área foliar dañada (variable medida en Nanacamilpa y Zotoluca); REND= rendimiento de grano; ns= no significativo; ** y * = significativo con p≤ 0.01 y p≤0.05, respectivamente. En la Figura 1 se presenta el rendimiento de grano en los genotipos, en donde se percibe que en Nanacamilpa se logró la mayor productividad debido a que la precipitación durante researches made during 2006 rainfall cycle in High Valleys showed that Durum variety had greatest yield and had good tolerance to diseases. Héctor Eduardo Villaseñor Mir et al. 598 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 En el Cuadro 2 se presenta la comparación de medias entre funguicidas, en donde se observa que su aplicación disminuyó significativamente la incidencia de la roya amarilla en el follaje y espiga, lo que se ref lejó en incrementos en el rendimiento desde 430 hasta 790 kg ha-1. La mayor incidencia de roya amarilla se asoció con pérdidas en rendimiento de hasta 26%, información que confirma lo reportado por Rodríguez et al. (2004). El fungicida Sportak® superó estadísticamente a los otros tres productos evaluados, además de que mostró mejor control sobre el complejo de enfermedades foliares (Figura 2). 4.5 a 4.0 Rendimiento (t ha-1) el ciclo de cultivo fue mayor (640 mm) que en Soltepec (460 mm) y Zotoluca (396 mm). También se analizó que la variedad Tlaxcala F2000 en las tres localidades superó a la variedad Gema C2004 desde 9% hasta 42%, lo anterior debido a que la primera se generó para siembras de temporal en los Valles Altos de México, mientras que Gema C2004 se liberó para siembras de riego en El Bajío. La causa de la evaluación de Gema C2004 en el presente ensayo, se debe a que resultados de investigaciones realizadas durante el temporal de 2006 en Valles Altos indicaron que fue la variedad de trigo macarronero con mayor rendimiento y mostró buena tolerancia a las enfermedades. b 3.5 a 3.0 2.5 a 2.0 b a b b 1.5 1.0 Tlaxcala Gema Tlaxcala Gema Tlaxcala Gema Tlaxcala Gema F2000 C2004 F2000 C2004 F2000 C2004 F2000 C2004 Nanacamilpa Soltepec Zotoluca General Figura 1. Comportamiento del rendimiento de las variedades evaluadas por localidad y por los tres ambientes (en general) de temporal. Primavera-verano, 2007. Figure 1. Yield behavior of assessed variables per locality and the three environments (in general) of rainfall. Spring-summer, 2007. In Table 2 is shown comparison of means between fungicides, where is seen that their application significantly decreased incidence of yellow rust in foils and ears, resulting in increased yields from 430 up to 790 kg ha-1. The greatest yellow rust incidence was associated with losses in yield of up to 26%, information that coincides with Cuadro 2. Comparación de medias de las variables agronómicas y fitopatológicas de los fungicidas evaluados. Primaveraverano, 2007. Table 2. Comparison of means for agronomical and phytopathological variables of assessed fungicides. Spring-summer, 2007. Fungicida Sportak Folicur® Tilt® Opus® SF DMS ® DF 67.3a 67.6a 67.5a 67.3a 67.4a 1.2 DM 132.3a 131.4a 130.9b 130.6b 127.5c 1.1 AP 83.4a 83.2a 83.7a 83.2a 82.9a 1.6 RAF 9.7b 7.8c 11.1b 10.0b 29.4a 2.7 RAE 5b 5b 5b 5b 22.2a 2 REND 3069a 2814b 2736b 2706b 2276c 212 DF= días a floración; DM= días a madurez; AP= altura de planta (cm); RAF= roya amarilla en el follaje (%); RAE= roya amarilla en la espiga (%); REND= rendimiento (kg ha-1); SF= sin fungicida; DMS= diferencia mínima significativa. El fungicida que presentó el mejor control sobre el complejo de enfermedades foliares fue Sportak®, lo cual se asoció con los valores más altos de rendimiento; mientras que Tilt ®, Folicur ® y Opus ® controlaron diferencialmente las enfermedades foliares; sin embargo, no se reflejó en el rendimiento, ya que estos últimos tres productos presentaron efectos estadísticamente semejantes (Figura 2). En el caso del tratamiento sin fungicida se presentaron los valores mayores para porcentaje del área foliar dañada reported by Rodríguez et al. (2004). Sportak® fungicide statistically overcame to other three assessed products, also showed better control on complex of foliar diseases (Figure 2). The fungicide that showed better control on complex of foliar diseases was Sportak®, which was associated with highest yield values; while Tilt®, Folicur® and Opus® controlled differentially foliar diseases; however, it did Control químico de las enfermedades: una alternativa para la producción de trigo de temporal en Tlaxcala Mediante la aplicación del fungicida Sportak® se logró el mayor rendimiento de grano favoreciéndose en promedio 26.5 y 29.4%, cuando incidió roya amarilla y enfermedades foliares, respectivamente, y se determina que la aplicación de fungicida es una práctica cultural rentable que evita pérdidas en el rendimiento de trigo de temporal. Literatura citada Duveiller, E.; Sharma, R. C.; Mercado, D.; Maraite, H.; Bhatta, M. R.; Ortiz-ferrara, G. and Sharma, D. 2005. Controlling foliar blight of wheat in south Asia: a holistic approach. Turk. J. Agric. For. 29: 129-135. Fuente, P. J. L. 2008. ¿Quiénes somos? La industria molinera de trigo en México In: Revista CANIMOLT. Ediciones Canimolt México, D. F. Núm. 0 Año 1. 4-7 pp. Rodríguez-Contreras, M. E.; Villaseñor-Mir, H. E.; LeyvaMir, G.; Huerta-Espino, J.; Sandoval-Islas, S. y De los Santos-Posadas, H. M. 2008. Efecto de Septoria tritici en el rendimiento de trigo de temporal en ambientes lluviosos de los valles altos centrales de México. Agrociencia 42: 435-442. Rodríguez, G. Ma. F.; Villaseñor, M. H. E.; Huerta, E. J. y Espitia, R. E. 2004. Pérdidas en el rendimiento en trigo de temporal causadas por roya amarilla. In: Mendoza, C. Ma. del C.; Córdova, T. L.: Cruz I. S. y Mendoza, M. C. G. (Comps.). XX Congreso nacional de fitogenética. Primera edición. SOMEFI. México. p. 47. 45 AFD Rendimiento 40 35 4.0 3.5 3.0 Rendimiento (t ha-1) La variedad de trigo harinero Tlaxcala F2000 superó en rendimiento de grano, en las tres localidades, a la variedad de trigo cristalino Gema C2004, debido a que dicha variedad de trigo harinero fue liberada y recomendada para su cultivo bajo condiciones de temporal, donde expresa su potencial productivo, superando a los mejores testigos bajo condiciones favorables, intermedios y críticos (Villaseñor et al., 2000). not affected yield, since these last three products showed statistically similar effects (Figure 2). In the case of treatment without fungicide there were higher values for percentage of damaged foliar area and therefore reductions in grain yield of up to 29.4%, compared to treatment with Sportak®. Such percentage coincides with reported by Rodríguez-Contreras et al. (2008) who reported losses by incidence of Septoria tritici from 16% to 36% depending of assessed genotype. Área foliar dañada (%) y consecuentemente hubo reducciones en rendimiento de grano hasta 29.4%, comparado con el tratamiento con Sportak®. Dicho porcentaje concuerda con lo señalado por Rodríguez-Contreras et al. (2008) quienes reportaron pérdidas por incidencia de Septoria tritici de 16% a 36% dependiendo del genotipo evaluado. 599 30 2.5 25 2.0 20 1.5 15 10 1.0 5 0.5 0 SF Tilt Folicur Opus Tratamiento Sportak 0.0 Figura 2. Efecto de fungicidas sobre el complejo de enfermedades foliares y el rendimiento, en dos localidades de temporal primavera- verano, 2007. DMS para rendimiento y (%) AFD= 0.29 y 2.7, respectivamente. Figure 2. Fungicide effect on complex of foliar diseases and yield, in two rainfall localities spring-summer 2007. DMS for yield and (%) AFD= 0.29 and 2.7, respectively. The flour wheat variety Tlaxcala F2000 overcame in yield, in the three localities, to white wheat variety Gema C2004, due it was released and recommended for its harvest under rainfall conditions, where has its better productive performance, overcoming better controls under favorable, intermediate and critical conditions (Villaseñor et al., 2000). By the application of fungicide Sportak® it was achieved the greatest grain yield with an average of 26.5 and 29.4%, when there was presence of yellow rust and foliar diseases, respectively, and it is concluded that fungicide application is a profitable practice that avoids losses in rainfall wheat yield. End of the English version 600 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Saari, E. E. and Prescott, J. M. 1975. A scale for appraising the foliar intensity of wheat disease. Plant Dis. Reptr. 59:377-380. Servicio de Información y Estadística Agroalimentaria y Pesquera (SIAP). 2010. www.siap.gob.mx. Enero 2010. Héctor Eduardo Villaseñor Mir et al. Villaseñor, M. H. E. y Espitia R. E. 2000. Variedades de trigo recomendadas para siembras de temporal en México. In: Villaseñor, M. y Espitia, R. E. (eds.). El trigo de temporal en México. Libro técnico Núm. 1. INIFAP-CIRCE-CEVAMEX. 151-175 pp. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 601-609 Exploración y caracterización morfológica de poblaciones de la jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) del estado de Guerrero, México* Morphological exploration and characterization of roselle (Hibiscus sabdariffa L.) populations from state of Guerrero, Mexico Noé Alarcón-Cruz1§, Rafael Ariza Flores2, Aristeo Barrios Ayala3, David H. Noriega Cantú4 y Juan Porfirio Legaria Solano5 Departamento de Fitotecnia, Universidad Autónoma Chapingo. Carretera México-Texcoco. Km. 38.5. Chapingo, Estado de México C. P. 56230. (noealarcon1242003@ hotmail.com). 2Centro de Investigación Regional Pacífico Sur (CIRPS), INIFAP. Melchor Ocampo Núm. 7, Col. Santo Domingo Barrio Bajo, Villa de Etla, Oaxaca, Oaxaca. C. P. 68200. ([email protected].) 3Campo Experimental Iguala- INIFAP. C. P. 40000. Carretera Tuxpan km.2.5 iguala Guerrero México. (barrios. [email protected]) 4Campo Experimental Iguala- INIFAP. ([email protected]). 5Departamento de Fitotecnia Programa de Genética de la Universidad Autonóma Chapingo km. 38.5. Carretera México Texcoco. Chapingo Estado de México C. P. 56230. México. ([email protected]). §Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract El presente estudio se realizó en las instalaciones de la Universidad Autónoma Chapingo durante el periodo de 2007 a 2009 y tuvo como objetivo caracterizar morfológicamente a 47 colectas de jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) que representaron a poblaciones del estado de Guerrero. En la caracterización morfológica se evaluaron 50 variables, mismas que se separaron en 40 cuantitativas y 10 cualitativas. De las cuantitativas se seleccionaron 25 variables y de las cualitativas cinco con alta significancia. En la caracterización de datos morfológicos se utilizaron correlaciones, análisis de correspondencia y de agrupamiento. Los caracteres morfológicos cuantitativos que más aportaron a la diferenciación de los genotipos de jamaica fueron: longitud en la base del lóbulo principal de la hoja, longitud promedio del fruto, perímetro promedio del fruto, longitud vertical de la hoja, ángulo del lóbulo izquierdo de la hoja, croma (C) de la flor y promedio de color de hoja cuantificado con colorímetro (L). Los caracteres cualitativos que mejor ayudaron a definir los grupos de jamaicas fueron el color visual de la hoja, precocidad, color aparente del tallo, color de brácteas y ausencia o presencia de glándulas melíferas que contribuyeron de manera substancial en la separación de los grupos. During 2007 to 2009 period this study was performed. Taking place at facilities of Universidad Autonoma Chapingo, the aim was to morphologically characterize 47 collections of roselle (Hibiscus sabdariffa L.) that represented populations from the state of Guerrero. In morphological characterization 50 variables were assessed, which were divided into 40 quantitative and 10 qualitative variables. 25 were selected from the quantitative ones and five with high importance from the qualitative. For morphological data characterization correlations, correspondence and grouping analysis were used. The quantitative morphological characters that most contributed to differentiation of roselle genotypes were: width at the base of leaf’s main lobule, average length of fruit, average fruit perimeter, leaf’s vertical length, leaf’s left lobule angle, flower’s chroma (C) and average leaf’s color quantified by colorimeter (L). The qualitative characters that best helped to define roselle groups were leaf’s visual color, earliness, stem’s apparent color, bracts color and lack or presence of glands, which substantially contributed to segregate the groups. * Recibido: junio de 2011 Aceptado: febrero de 2012 Noé Alarcón-Cruz et al. 602 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Palabras clave: agrupamientos, caracterización, colectas, germoplasma. Key words: groupings, characterization, collections, germplasm. Introducción Introduction La jamaica (Hibiscus sabdariffa L.), pertenece a la familia de las Malvaceae y es un cultivo anual nativo de África tropical. Actualmente, el cultivo es extensamente cosechado en la India, Sudán, Egipto, Senegal y Tailandia por sus agradables cálices de color rojo los cuales son usados para hacer mermeladas, gelatinas y refrescos (Al-Wandawi et al., 1984; Balami, 1998). Roselle (Hibiscus sabdariffa L.) belongs to Malvaceae family and is a yearly crop from tropical Africa. Currently, thanks to its well-known red calyxes flavor the crop is widely harvested in India, Sudan, Egypt, Senegal and Thailand and is used to make jam, gelatin and beverages (Al-Wandawi et al., 1984; Balami, 1998). Por otra parte, extractos de sépalos y semillas de jamaica en agua y aceite presentan una alta capacidad antioxidante, los cuales pueden proteger a las células contra los daños ocasionados por los radicales libres (Pin-Der y Gow-Chin, 1997). Recientemente, el aceite extraído de semillas de la planta ha demostrado tener un efecto inhibitorio sobre algunas bacterias y hongos in vitro. Además, el extracto que procede de los sépalos en el cultivo de jamaica puede tener un efecto considerable sobre la reducción de la presión arterial (Haji Faraji y Haji, 1999). En Egipto, Hibiscus sabdariffa L., es importante porque tiene uso farmacéutico, alimenticio e industrial (cosméticos) (Omer et al., 1997). Como resultado de la importancia de Hibiscus sabdariffa L., a nivel internacional, el área de cultivo se está incrementando en México de manera gradual con fines de utilización y exportación. En 2008 Guerrero obtuvo una producción de 1 603.19 t de jamaica y a partir de ese año a 2010 la producción se ha incrementado a 3 792.71 t; cuyo incremento porcentual representa 42.27% de la producción estatal (Anónimo, 2008, 2010). El objetivo de este estudio fue la caracterización morfológica en Hibiscus sabdariffa L., debido a que se buscó evaluar la variación para un número de caracteres morfológicos en 47 colectas de jamaica, a través del estudio de parámetros morfológicos, mismos que contribuyen al rendimiento de las plantas. En caracterización morfológica se estudiaron 47 materiales de Hibiscus sabdariffa L., colectados en regiones tropicales y subtropicales del estado de Guerrero, en un rango de altura de 0- 1200 m. Los municipios muestreados fueron Tecoanapa, Acapulco, Ometepec, Tlapa, El Ocotito, Atoyac de Álvarez, Iguala, Chilpancingo y Arcelia. El experimento se estableció en instalaciones de la Universidad Autónoma Chapingo (UACH) bajo condiciones de invernadero rústico sin On the other hand, sepals extracts and roselle seeds in water and oil have a high antioxidant capacity, that can protect cells against damage by free radicals (Pin-Der and GowChin, 1997). Recently, oil extracted from plant’s seeds had proven inhibiting effect against some bacteria and fungi in vitro. Also, the extract that comes from sepals in roselle crop can have an important beneficial effect on blood pressure (Haji Faraji and Haji, 1999). In Egypt, Hibiscus sabdariffa L., outstands thanks to its pharmaceutical, food and industrial (cosmetics) use (Omer et al., 1997). As result of Hibiscus sabdariffa L., importance at international level, the crop area is gradually increasing in Mexico with export and usage means. During 2008 in Guerrero production yield was of 1 603.19 t of roselle and from that point to 2010 production has increased to 3 792.71 t; this means for increase in production of 42.27% (Anonimous, 2008, 2010). The aim of this study was to obtain the morphological characterization in Hibiscus sabdariffa L., due assessment variation for a given number of morphological characters in 47 collections of roselle, through study of morphological parameters that contribute to plant’s yield. In the morphological characterization, 47 materials of Hibiscus sabdariffa L., collected in tropical and subtropical regions from state of Guerrero, at height range from 0 to 1200 m, were studied. The samples came from the municipalities Tecoanapa, Acapulco, Ometepec, Tlapa, El Ocotito, Atoyac de Álvarez, Iguala, Chilpancingo and Arcelia. The experiment was performed at facilities of Universidad Autónoma Chapingo (UACH) under rustic greenhouse conditions without heating and with glass cover during January-October 2008 period. The university is located in the state of Mexico, between Exploración y caracterización morfológica de poblaciones de la jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) del estado de Guerrero, México calefacción y con cubierta de cristal en el periodo de enerooctubre del 2008. La universidad se localiza en el Estado de México, entre las coordenadas 19° 29´34.61” latitud norte, 98° 53´06.93” longitud oeste, a 2 254 msnm. La zona presenta un clima templado subhúmedo. La temperatura media oscila entre 22 y 28 °C. El clima se clasifica como C Wo w b (y) g García (1988). El experimento empezó con el establecimiento del semillero, en el cual se utilizó como sustrato el ‘cosmo peat’. El número de semillas que se colocaron por compartimiento fueron 2, a una profundidad no mayor de 5 mm en cada charola; al término del día 4 el proceso de germinación comenzó en la mayoría de las colectas. Las plántulas permanecieron en el semillero por un periodo de 2 meses hasta su transplante en bolsas de plástico negras de 30 x 30 cm utilizando como sustrato una combinación de tezontle, lana de roca, fibra de coco y dos sustratos turbas que reciben los nombres comerciales de ‘cosmo peat’ y ‘promix’, asignando 2 plantas por bolsa. El número total de plantas por colectas fueron 20, dando un total de 940 plantas distribuidas uniformemente en 470 bolsas negras de 30 x 30. Para el diseño experimental y variables evaluadas en la caracterización morfológica se utilizó un diseño completamente al azar en el que se empleó como unidad experimental una planta. Las variables de respuesta fueron el rendimiento y las características morfológicas de las colectas. Se evaluó un sólo tratamiento, debido a que era necesario mantener las condiciones homogéneas en las unidades experimentales. Variables evaluadas La fase metodológica del proyecto incluyó la exploración física y ecogeográfica para la identificación de los recursos fitogenéticos de interés de jamaica (Hibiscus sabdariffa L.). La estrategia de exploración consistió en la identificación y muestreo de las plantas, basándose en requerimientos agroecológicos de la especie como son clima, suelo, pendiente y altitud; así como en la lista de localidades descritas como productoras de jamaica en el estado de Guerrero (Anónimo, 2006). Los criterios de selección de las plantas fueron: a) que los especímenes provinieran de plantas y sitios diferentes además de encontrarse en estado productivo y aparentemente sanas; b) el número de plantas a las que se les tomó la muestra presentó una variación 603 coordinates 19° 29´34.61” north latitude, 98° 53´06.93” west longitude, at 2 254 masl. The zone has sub humid temperate climate. The average temperature varies between 22 and 28 °C. Weather is classified like C Wo w b (y) g García (1988). The experiment started with settling of seedbed, in which ‘cosmo peat’ was used like substrate. Two seed were used per tray’s division, at a deep no longer than 5 mm in each tray; at the end of day 4 germination process started in most of collections. The shoots were kept in the seedbed during 2 months before transplanting them to 30 x 30 cm black plastic bags using like substrate a mixture of tezontle, rockwool, coconut fiber and two peat moss substrates known by their brand name as ‘cosmo peat’ and ‘promix’, placing two plant per bag. Total amount of plants per collection were 20, with a total of 940 plants evenly distributed in 470 black plastic 30 x 30cm bags. For the experimental design and assessed variables in morphological characterization a completely random design was used with one plant as experimental unit. The response variables were yield and collections’ morphological characteristics. One single treatment was assessed, due it was required to keep homogeneous conditions in the experimental units. Evaluated variables The methodology process of the project included physical and ecological-geographical exploration for identification of roselle’s (Hibiscus sabdariffa L.) phytogenetic resources of interest. The exploration strategy was identification and sampling of plants, based on specie’s agricultural ecological requirements like climate, soil, slope, and height; as well as localities defined like roselleharvested in the state of Guerrero (Anonimous, 2006). The selection criteria for plants were: a) that specimens came from different plants and localities and also that be in production phase and with apparently health; b) the number of plants to which sample was taken varied from 2 to 15 plants per accession; and c) simultaneously the variables corresponding to geographical location like slope and height were taken with Model 2000 GPS system, association with type of vegetation or species of agronomic interest, soil color and stony index in place of sampling, such information is recorded in the log data. 604 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 de 2 a 15 plantas por accesión; y c) en forma simultánea se tomaron las variables correspondientes a la ubicación geográfica con la ayuda de un GPS Modelo 2000, como pendiente, altitud, asociación con tipo de vegetación o especies de interés agronómico, color del suelo e índice de pedregosidad en el lugar de la muestra, dicha información se encuentra registrada en los datos de pasaporte. De cada planta se colectó un mínimo de 10 frutos. Los frutos cosechados se envolvieron en bolsas de papel y se trasladaron a las instalaciones de la UACH, para su almacenamiento por un lapso de 3 meses hasta que alcanzaron el punto adecuado de madurez. Los características estructurales de la planta tomados en cuenta fueron: altura de planta, se midió desde la base del tallo hasta el meristemo apical considerando que la planta ya había culminado su desarrollo hasta su estado adulto y se encontraba en etapa productiva; la cobertura foliar se midió tomando en cuenta las longitudes mayor y menor de las zonas de goteo de cada ejemplar. El diámetro basal se midió considerando la parte más baja del tallo que presentaba contacto directo con el sustrato. El criterio utilizado para medir el diámetro basal medio, se basó en el hecho de que no todas las colectas presentaban el mismo porte, por lo tanto, una vez que dichos especímenes se encontraban en su estado adulto, se procedió a tomar datos de altura de la planta y dividirla entre dos para obtener la altura media. Simultáneamente a lo anterior se tomó datos de número de flores, número de ramas, ausencia o presencia de glándulas, precocidad, color visible de hojas, flores y frutos. Para evaluar características de las hojas, de cada colecta se seleccionó al azar 5 de ellas fisiológicamente maduras y a diferentes niveles de ubicación en la planta. En cuanto el análisis de la parte reproductiva de la planta, se consideraron los cálices y las semillas debido a que son las principales partes aprovechables. Se tomó el peso del fruto así como datos de longitud y diámetro promedio con la ayuda de un vernier y una balanza granataria. Cabe resaltar que para el muestreo se realizó una selección de 10 frutos en todos los individuos de las 47 colectas. Éstos se separaron y se midieron en fresco tomando los datos anteriormente mencionados. Las características cualitativas evaluadas fueron: a) color visual de la hoja; b) color de pecíolo; c) color aparente del tallo; d) color de brácteas; e) color de flor; f) precocidad; g) ausencia o presencia de glándulas melíferas; h) color Noé Alarcón-Cruz et al. From each plant at least 10 fruits were collected. The harvested fruits were wrapped in paper bags and moved to UACH facilities, for storing during 3 months until they reach suitable mature state. The taken plant’s structural characteristics were: plant height, measured from stem base to apical meristem considering that the plant has finished its development to adult state and found in productive stage; foliar cover was measured taking into account the longer and shortest lengths of drip zones of each sample. Basal diameter was measured considering the stem’s lowest portion that had direct contact with substrate. The used criteria to measure average basal diameter was based in the fact that not all collections had same size, therefore, once they were adults height was measured and divided by two to obtain average height. Also, at the same time, data like number of flowers, number of branches, presence or lack of gland, earliness, visible color of leaves, flowers and fruits. To evaluate leaves characteristics, from each collection 5 were selected at random which were physiologically mature and at different plant locations were taken. As for analysis of plant reproduction system, calyxes and seed were considered due they are the most used parts. Fruit weight was measured as well as average length and diameter using vernier scale and top loading balance. It is worth to mention that for sampling a selection of 10 fruits were used from each one of the 47 collections. These were separated and measured in fresh. The qualitative characteristics assessed were: a) leaf visual color; b) petiole color; c) stem apparent color; d) bracts color; e) flower color; f) earliness; g) lack or presence of glands; h) visual apparent color visual of fruit; and i) total defoliation at 6 months. To set values a comparison between all collections was made and with experience on continuous contact with materials scales for all phenotypical qualitative variables were set. The measured quantitative characters were: number of branches, number of fruits, number of bracts, lobules and color averages for leaf, stem, flower and fruit, as well as measurements of foliar area, angles, heights, weights, diameters and lengths. Statistical analysis of morphological markers With the aim of statistically analyze morphological characters database was developed in Excel and then the variables were discriminated in quantitative and qualitative, Exploración y caracterización morfológica de poblaciones de la jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) del estado de Guerrero, México 605 visual del fruto aparente; e i) defoliación total a los 6 meses. Para establecer los valores se realizó una comparación entre todas las colectas y con experiencia del contacto continuo entre los materiales se establecieron escalas para todas las variables fenotípicas cualitativas. Los caracteres cuantitativos medidos fueron: número de ramas, número de frutos, número de brácteas, lóbulos y los promedios de color de hoja, tallo, flor y fruto, así como mediciones de área foliar, ángulos, alturas, pesos, diámetros y longitudes. resulting in 40 and 10 respectively. With these variables independent statistical analysis was made using Statistical Analysis System, SAS (2004) version 9 using the following procedures: for selection of quantitative variables with high significance the principle of forward progressive regression was used and with the selected and standardized variables the number of collection groups was defined by graphic representation of grouping cubic analysis and use of square Euclidian distances. Análisis estadísticos de marcadores morfológicos With qualitative variables a second analysis was performed, in which groups were defined based on correspondence analysis to detect phenotypical relationships between collections and also infer the characteristics that define groups’ formation. Con el propósito de analizar estadísticamente los caracteres morfológicos, se realizó una base de datos en Excel y posteriormente se separaron las variables en cuantitativas y cualitativas siendo 40 y 10, respectivamente. Con las variables morfológicas cuantitativas y cualitativas se procedió a realizar análisis estadísticos independientes con el programa Statistical Analysis System, SAS (2004) versión 9 utilizando los procedimientos siguientes: para la selección de las variables cuantitativas con alta significancia se utilizó el principio de una regresión progresiva hacia adelante llamado Forward y con las variables seleccionadas y estandarizadas se determinó del número de grupos de colectas a través de la representación gráfica de un análisis cúbico de agrupamientos y el uso de distancias euclidianas cuadradas. Con las variables cualitativas se realizó un segundo análisis, en donde los agrupamientos estuvieron determinados en base a un análisis de correspondencia para detectar relaciones fenotípicas entre las colectas y así mismo inferir que características determinaron la formación de grupos. En la caracterización morfológica la selección de las variables cuantitativas altamente significativas se utilizó el principio de una regresión progresiva hacia delante con la instrucción Forward con un nivel de significancia de 0.04 y 0.01 y de la cual se obtuvieron las siguientes variables altamente significativas (Cuadro 1). Una vez realizada la selección de las variables altamente significativas, éstas se utilizaron para el realizar el análisis cúbico de agrupamientos y determinar el número de grupos formados, siendo 4 para los caracteres morfológicos cuantitativos y dicho agrupamiento fue corroborado por el análisis de conglomerado de la varianza mínima de WARD correspondientes a las variables morfológicas cuantitativas seleccionadas (Cuadro 2). In the morphological characterization the selection of highly significant quantitative variables the principle of forward progressive regression was used at a significance level of 0.04 and 0.01 and from which the following highly significant variables were obtained (Table 1). Once the highly significant variables selection is made, they were used to make cubic groups analysis and define the number of created groups, being 4 for quantitative morphological characters and such grouping was verified by conglomerate of minimum variance analysis WARD corresponding to selected morphological quantitative variables (Table 2). To define number of groups canonical discriminant analysis was performed. It allowed to define the characteristics that better contribute to discriminate or separate groups (Figure 1). In dendrogram of Figure 2 it is observed the formation of four groups that keep a relationship according to grouping cubic analysis. The height of cut is at 0.100. Group I is divided in two sub-groups. The first sub-group is comprised by collections 10T, 15C, 19T, 1C, 11C, 16C, 11T, 28C, 12C, 22T, 20C, 27C, 9C, 30T, JC, 1T, 28T, 31T, 20T, 27T, 25C, 26T and 24T. In this sub-group the collections 11T and 28C are separated by a distance of 0.001 being the shortest distance observed in the dendrogram. The second sub-group was constituted by collections: 14T, 7C, 15T, 29T, 21T and 23T. Which were separated a distance of 0.075. Group II is comprised only by collection 9T, separating from group I at a distance of Noé Alarcón-Cruz et al. 606 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Cuadro 1. Selección de variables por el método de Forward. Table 1. Variables selection by Forward method. Número de variables 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 Método de Forward X47 X48 X50 X49 X25 X38 X42 X43 X46 X44 X2 X14 X3 X33 X31 X28 X41 X4 X39 X40 X21 X7 X1 X9 X34 Carácter medido Ancho en la base del lóbulo principal de la hoja Ángulo en la base del pecíolo Longitud promedio del fruto Perímetro promedio del fruto Promedio de color de fruto cuantificado con colorímetro (L) Promedio de color de flor cuantificado con colorímetro (a) Perímetro de la hoja Longitud vertical de la hoja Ángulo del lóbulo izquierdo de la hoja Longitud horizontal de la hoja Número de ramas Numero de brácteas Número de frutos Color del tallo en la parte media de la planta cuantificado con colorímetro(L) Color de tallo en la base cuantificado con colorímetro (b) Croma C de fruto Área de la hoja Número de flores Promedio de color de flor cuantificado con colorímetro (b) Croma C de la flor Promedio de color de hoja cuantificado con colorímetro (L) Número de lóbulos en hojas por planta Altura de planta Longitud de pecíolo Color del tallo en la parte media de la planta cuantificado con colorímetro(a) Cuadro 2. Análisis de conglomerado de la varianza mínima de WARD correspondientes a las variables morfológicas cuantitativas seleccionadas. Table 2. Conglomerate of minimum variance analysis WARD corresponding to selected morphological quantitative variables. Conglomerados Valor propio Diferencia Proporción Proporción acumulada 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 5.74 4.81 2.87 2.15 1.99 1.41 1.26 0.98 0.81 0.63 0.60 0.42 0.36 0.23 0.21 0.17 0.14 0.93 1.94 0.73 0.16 0.58 0.15 0.29 0.17 0.18 0.02 0.18 0.06 0.13 0.03 0.04 0.03 0.05 0.23 0.19 0.12 0.09 0.08 0.06 0.05 0.04 0.03 0.03 0.02 0.02 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.23 0.42 0.54 0.62 0.70 0.76 0.81 0.85 0.88 0.91 0.93 0.95 0.96 0.97 0.98 0.99 0.99 Se han estandarizado los datos en la media 0 y varianza 1. Desviación estándar de la muestra total cuadrática media= 7.07. 1 Exploración y caracterización morfológica de poblaciones de la jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) del estado de Guerrero, México 607 Cuadro 2. Análisis de conglomerado de la varianza mínima de WARD correspondientes a las variables morfológicas cuantitativas seleccionadas (Continuación). Table 2. Conglomerate of minimum variance analysis WARD corresponding to selected morphological quantitative variables (Continuation). Conglomerados 18 19 20 21 22 23 24 25 Valor propio 0.10 0.04 0.03 0.02 0.02 0.00 0.00 0.00 Diferencia 0.06 0.01 0.00 0.01 0.02 0.00 0.00 Proporción 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 Se han estandarizado los datos en la media 0 y varianza 1. Desviación estándar de la muestra total cuadrática media= 7.07. 1 Para determinar el número de grupos se realizó un análisis discriminante canónico. El análisis discriminante canónico permitió determinar las características que mejor contribuyeron a la separación de los grupos (Figura 1). VD2 10000000 Croma C de la flor Promedio de color de hoja cuantificado con colorímetro (L) (claros) 8000000 4000000 -2000000 -4000000 -4000000 Grande longitud en la base del lóbulo principal Longitud del fruto grande Perímetro promedio del fruto grande Gran longitud vertical de la hoja Ángulo del lóbulo izquierdo de la hoja grande Pequeña longitud en la base del lóbulo principal Longitud del fruto pequeño Perímetro promedio del fruto pequeño Pequeña longitud vertical de la hoja Pequeño ángulo del lóbulo izquierdo de la hoja 6000000 0 0.135. Group III was comprised by collections: 13T, 16T, 19C, 36T, 37T, 4T, 5T, 29C, TEX, 3T, 32T, 33T, 34T, 38T, 35T and 39T. This group is linked to group IV at a distance of 0.130. The fourth group is constituted by collection 7T. TRAZADO DE VD2*VD1SJAMAICA. EL SIMBOLO USADO ES ’. ’. . 9T 2000000 Proporción acumulada 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 3 3T 1 312C5T 37T . 32 T 22T164T 39T T Croma C de la flor Promedio de color de hoja cuantificado con colorímetro (L) (mas oscuros) 15T 7T . 14T 2831TJC 27T . 30T TE23TC9 -2000000 0 2000000 VD1 4000000 6000000 8000000 Figura 1. Ubicación espacial de los cuatro grupos de colectas de jamaica con sus variables discriminantes 1y 2 (VD1 y VD2). Figure 1. Spatial location of four groups of roselle collections with its discriminant variables 1 and 2 (VD1 and VD2). En el dendrograma de la Figura 2 se observa la formación de cuatro grupos que mantienen una relación según el análisis cúbico de agrupamiento. La altura de corte se presenta a 0.100. El grupo I se divide en dos subgrupos. El primer subgrupo está conformado por las colectas 10T, 15C, 19T, 1C, 11C, 16C, 11T, 28C, 12C, 22T, 20C, 27C,9C, 30T, JC, 1T, 28T, 31T, 20T, 27T, 25C, 26T y 24T. En este subgrupo se encuentran las colectas 11T y 28C separadas a una distancia de 0.001, siendo esta la menor distancia que se observa en el dendrograma. Thanks to their phenotypical characteristics, 7T and 9T belong to the most important collections that are totally apart from main groups. Collection 7T has very colorful fruits and lacks of glands, while 9T is very late, has white color fruits and has glands. For morphological characterization, also were included qualitative variables X8, X17, X12, X15 and X18 that symbolize leaf visual color, earliness, stem’s apparent color, bracts color and lack or presence of glands, which substantially contributed to groups’ differentiation. Noé Alarcón-Cruz et al. 608 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Entre las colectas más importantes que se separan totalmente de los grupos principales debido a sus características fenotípicas fueron las 7T y 9T. La colecta 7T presenta frutos muy coloridos y carece de glándulas melíferas, mientras que 9T es muy tardía, tiene frutos de color blanco y presenta glándulas melíferas. Para la caracterización morfológica también se incluyeron las variables cualitativas X8, X17, X12, X15 y X18 que simbolizan al color visual de la hoja, precocidad, color aparente del tallo, color de brácteas y ausencia o presencia de glándulas melíferas, mismas que contribuyeron de manera substancial en la separación de los grupos. Conclusiones La variables morfológicas permitieron diferenciar a los genotipos de jamaica divido a la alta variabilidad de los materiales de Hibiscus sabdariffa L. Los agrupamientos de genotipos, resultado de la caracterización morfológica fueron 4 grupos diferentes y los caracteres morfológicos cuantitativos que más aportaron a la diferenciación fueron: ancho en la base del lóbulo principal de la hoja, longitud promedio del fruto, perímetro promedio del fruto, longitud vertical de la hoja, ángulo del lóbulo izquierdo de la hoja, croma (C) de la flor y promedio de color de hoja cuantificado con colorímetro (L). Los caracteres cualitativos que mejor ayudaron a definir los grupos de jamaicas fueron color visual de la hoja, precocidad, color aparente del tallo, color de brácteas y ausencia o presencia de glándulas melíferas. Agradecimientos A la Universidad Autónoma Chapingo (UACH) y al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT) por la oportunidad para realizar los estudios de posgrado del primer autor. 0.20 0.15 R2 semi parcial El segundo subgrupo lo formaron las colectas: 14T, 7C, 15T, 29T, 21T y 23T. Mismas que se separaron a una distancia de 0.075. El grupo II lo conformó sólo la colecta 9T, separándose del grupo uno a una distancia de 0.135. El grupo III estuvo conformado por las colectas: 13T, 16T, 19C, 36T, 37T, 4T, 5T, 29C, TEX, 3T, 32T, 33T, 34T, 38T, 35T y 39T. Este grupo se encuentra unido al grupo IV a una distancia de 0.130. El cuarto grupo lo constituyó la colecta 7T. I 0.10 II III IV 0.05 0.00 111 1 11 12 122 2C3 J12 32 222 2 1C1222 9 111 3345 C133 3333 3 7 05 9C16 18 220 790C1 81 07 564 47 59 131 36 967 11 2E12 3485 9 1 1 C 1 C C C1 C C 1 C C 1 1 1 1 1 C 1 1 1 1 1 1 1 1 1 C1 1 9X 11 1111 Colectas de jamaica Figura 2. Dendrograma de relaciones entre las 47 colectas de jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) utilizando distancias euclidianas al cuadrado y el método de agrupamiento UPGMA. Figure 2. Dendrogram of relationships between 47 collections of roselle (Hibiscus sabdariffa L.) using Euclidian distances to square power and UPGMA grouping method. Conclusions Morphological variables allowed to differentiate roselle genotypes due high variability of Hibiscus sabdariffa L., materials. Genotypes groupings, resulting from morphological characterization, were 4 different groups and the quantitative morphological characters that more contributed to differentiation were: width at the base of leaf’s main lobule, average length of fruit, average perimeter of fruit, leaf’s vertical length, leaf’s left lobule angle, flower’s chroma (C) and average leaf’s color quantified by colorimeter (L). The qualitative characters that best helped to define roselle groups were leaf’s visual color, earliness, stem’s apparent color, bracts color and lack or presence of glands. End of the English version Literatura citada Al-Wandawi, H.; Al-Shaikhaly, K. and Abdurahman, M. 1984. Roselle seeds: a new source of protein. J. Sci. Food Agric. 32:510-512. Exploración y caracterización morfológica de poblaciones de la jamaica (Hibiscus sabdariffa L.) del estado de Guerrero, México Anónimo, 2006. Avances de cosechas del ciclo primavera verano por cultivo 2006. Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación. Información del Sector Agrícola Delegación Estatal Guerrero Sección Estadísticas. Anónimo, 2008. Estadísticas del cultivo de jamaica en el estado de Guerreo. Secreta de Agricultura, Pesca y Alimentación. www.sagarpa.gob.mx. (28/07/2011). Anónimo, 2010. Estadísticas del cultivo de jamaica en el estado de Guerreo. Secretaría de Agricultura, Pesca y Alimentación. www.sagarpa.gob.mx. (28/07/2011). Balami,A. 1998. The effect of processing conditions packaging and store on selected quality attributes of Mungza Ntusa. M. Sc. Thesis, University of Ibadan, Nigeria. 609 García, E. 1988. Modificaciones al sistema de clasificación climática de Köppen, 4ª. Ed. UNAM. México, D. F. 252 pp. Haji Faraji, M. and Haji, T. A. H. 1999. The effect of sour tea (Hibiscus sabdariffa) on essential hypertension. J. Ethnopharmacol. 65:231-236. Omer, E. A.; Khattab, M. E. and Ibrahim, M. E.1997. Effect of pinching and foliar application of some growth regulators on two new early mature varieties of Hibiscus sabdariffa L. Egypt J. Hort. 24:117-130. Pin-Der, D. and Gow-Chin, Y. 1997. Antioxidative activity of three herbal water extracts. J. Food Chem. 60:639-645. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 611-620 Adaptación al cambio climático y la variabilidad: algunas opciones de respuesta para la producción agrícola en Uruguay* Adaptation to climatic change and variability: some response options to agricultural production in Uruguay Agustín Giménez§ y Bruno Lanfranco Unidad de Agroclima y Sistemas de Información (GRAS). Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria (INIA). INIA Las Brujas, Ruta 48 km 10. Canelones, Uruguay. § Autor para correspondencia: agimé[email protected]. Resumen Abstract Adaptación al cambio climático y la variabilidad: “algunas opciones de respuesta para la producción agrícola en Uruguay”. Como se señala en varios informes del Panel Intergubernamental sobre Cambio Climático (IPCC, 2007a; IPCC, 2007b), la comunidad científica internacional expresa que el aumento en la concentración de gases de efecto invernadero tiene como resultado cambios en la variabilidad climática diaria, estacional, interanual y a lo largo de decenios. La variabilidad climática y la ocurrencia de eventos extremos (heladas, granizos, sequías) resulta en perjuicios muy importantes para el sector agropecuario y frecuentemente el sector requiere de varios años para recuperarse económica y financieramente de los daños ocasionados. La unidad de agroclima y sistemas de información (GRAS) del Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria (INIA) de Uruguay en conjunto con el Banco Mundial (BM) y la Universidad de Cornell (UC) de los Estados Unidos de América, finalizaron en el año 2009 el proyecto “Vulnerabilidad al cambio climático en los sistemas de producción agrícola en América Latina y el Caribe: “desarrollo de respuestas y estrategias”, (Giménez y Lanfranco, 2009). El objetivo de la propuesta fue formular un plan de acción con recomendaciones para el desarrollo de respuestas y estrategias con el fin de contribuir a una mejor Adaptation to climatic change and variability: “some response options to agricultural production in Uruguay”. Like is mentioned in several reports of Intergovernmental Panel about Climatic Change (IPCC, 2007a; IPCC, 2007b), the international scientific community express that increase of greenhouse effect gas concentration has extreme changes in daily, seasonal, between years and along decades climatic variability. Climatic variability and occurrence of extreme events (frost, hail, droughts) results in very important damages for agricultural sector and is very frequent that this sector requires several years to economically and financially recover from such damages. The Agricultural Weather and Information Systems unit (GRAS) from National Institute of Agricultural Research (INIA) from Uruguay together with World Bank (BM) and Cornell University (CU) from United States of America, ended in year 2009 the project “Vulnerability to climatic change in agricultural production systems in Latin America and Caribbean: development of responses and strategies” (Giménez and Lanfranco, 2009). The aim of proposal was to outline an action plan with recommendations for development of responses and strategies with the purpose to contribute with a better adaptation to climatic variability impacts and occurrence of extreme climatic * Recibido: abril de 2011 Aceptado: marzo de 2012 Agustín Giménez y Bruno Lanfranco 612 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 adaptación a los impactos de la variabilidad climática y la ocurrencia de eventos climáticos extremos en los sistemas de producción agrícola de Uruguay. Como resultado del trabajo, se identificaron y priorizaron 3 opciones de respuesta: sistema de información y soporte para la toma de decisiones; gestión del agua; y seguros y otros instrumentos financieros para la gestión de riesgos. Palabras claves: adaptación, cambio climático, opciones de respuesta, producción agrícola. Introducción Como se señala en varios informes del Panel Intergubernamental sobre Cambio Climático (IPCC, 2007a, IPCC, 2007b), la comunidad científica internacional expresa que el aumento en la concentración de gases de efecto invernadero tiene como resultado cambios en la variabilidad climática diaria, estacional, interanual y a lo largo de decenios. Los informes del IPCC también señalan que los estudios científicos sugieren que es de esperar “cambios en la frecuencia, intensidad y duración de fenómenos climáticos extremos”. En un estudio regional que comprendió la zona agrícola de Uruguay (Giménez, 2006), se compararon los desvíos estándar de las medias y los coeficientes de variación de las precipitaciones registradas en los periodos 19311960 y 1971-2000 para primavera (setiembre, octubre y noviembre), verano (diciembre, enero y febrero), otoño (marzo, abril y mayo) e invierno (junio, julio y agosto). Al respecto se constató como en sitios del área de estudio en Uruguay, las magnitudes de los coeficientes de variación incrementaron en primavera y verano en los 30 años más recientes en relación a los 30 años anteriores (Cuadro 1). Esto estaría indicando un incremento de la variabilidad de las precipitaciones en dichas épocas del año. events in Uruguay’s agricultural production systems. The outcome of the work was identification and giving priority 3 response options: system of information and support for decision making; water management; and insurance and other finance products for risk management. Key words: adaptation, climatic change, response options, agricultural production. Introduction Like is mentioned in several reports of Intergovernmental Panel about Climatic Change (IPCC, 2007a; IPCC, 2007b), the international scientific community express that increase of greenhouse effect gas concentration has extreme changes in daily, seasonal, between years and along decades climatic variability. IPCC reports also conclude that scientific studies reveal that is very feasible “to expect changes in frequency, intensity and duration of extreme climatic phenomena”. In a regional study that comprised Uruguay’s agricultural zone (Giménez, 2006) standard deviations of average and variation coefficients of rainfalls recorded in 1931-1960 and 1970-2000 periods for spring (September, October and November), summer (December, January and February), fall (March, April and May) and winter (June, July and August) were compared. It was proven that magnitudes of variation coefficients rose in spring and summer in the more recent 30 years period with regards 30 years of previous period (Table 1). This would indicate an increase of rainfall variability in such seasons. Also, like it is observed in Figure 1, other rainfall precipitations occurred in four locations of the country, had resulted incremental deviations of average after elapsing the most recent years. Cuadro 1. Coeficientes de variación (%) de las precipitaciones registradas en 2 periodos de análisis (1931-1960 y 1971-2000), para las 4 estaciones del año en 3 localidades de Uruguay (Estanzuela, Mercedes y Paysandú). Table 1. Variation coefficients (%) of rainfalls recorded in two analysis periods (1931-1960 and 1971-2000), for 4 seasons in 3 localities from Uruguay (Estanzuela, Mercedes and Paysandú). Estanzuela Mercedes Paysandú Primavera 1931-1960 CV % 37 40 37 1971-2000 CV % 44 47 41 Verano 1931-1960 CV % 40 52 39 1971-2000 CV % 48 57 42 Otoño 1931-1960 CV % 46 49 48 1971-2000 CV % 36 45 46 Invierno 1931-1960 CV % 50 55 50 1971-2000 CV % 40 56 51 Adaptación al cambio climático y la variabilidad: algunas opciones de respuesta para la producción agrícola en Uruguay 600 SALTO 1974-1988 1989-2003 500 400 300 200 100 0 700 600 Ene-Feb-Mar Abr-May-Jun Jul-Ago-Sep Oct-Nov-Dic COLONIA 1974-1988 1989-2003 500 400 300 200 100 0 Total Precipitación en Trimestre (mm) 700 There are rising trends of rainfalls in spring and summer (previously mentioned) and a much generalized increase of variability (standard deviation) in the recent past. Ene-Feb-Mar Abr-May-Jun Jul-Ago-Sep Oct-Nov-Dic Total Precipitación en Trimestre (mm) Total Precipitación en Trimestre (mm) Total Precipitación en Trimestre (mm) Asimismo, como se observa en la Figura 1, otros análisis de las precipitaciones ocurridas en cuatro puntos del país, han determinado desvíos de las medias incrementales en el transcurso de años más recientes. 613 700 MELO 1974-1988 1989-2003 600 500 400 300 200 100 0 700 600 Ene-Feb-Mar Abr-May-Jun Jul-Ago-Sep Oct-Nov-Dic PRADO 1974-1988 1989-2003 500 400 300 200 100 0 Ene-Feb-Mar Abr-May-Jun Jul-Ago-Sep Oct-Nov-Dic Figura 1. Evolución de la media y la desviación estándar de las precipitaciones trimestrales, en 4 puntos del país, en el periodo 1974 -2003 (comparación de dos períodos de 15 años), Rafael Terra, 2009. (Com. pers). Figure 1. Evolution of average and standard deviation of quarterly rainfalls, in 4 locations of the country, in 1974 -2003 period (comparison of two 15 years periods). (Terra, 2009. Com. pers). Se observan las tendencias de aumento de las precipitaciones en primavera y verano (mencionadas previamente) y un muy generalizado aumento de la variabilidad (desviación estándar) en el pasado más reciente. La variabilidad climática y la ocurrencia de eventos extremos (heladas, granizos, sequías) resulta en perjuicios muy importantes para el sector agropecuario y frecuentemente el sector requiere de varios años para recuperarse económica y financieramente de los daños ocasionados. Ejemplos recientes en Uruguay de eventos climáticos extremos son las sequías de 1999-2000 y la de 2008-2009 donde según estimaciones de organismos gubernamentales, las pérdidas ocasionadas fueron de entre 200 y 250 millones de dólares (alrededor de 1% del PBI promedio de los últimos años) y de entre 400 y 800 millones de dólares (de 2% a 3% aproximadamente del PBI promedio de los últimos años) Climatic variability and occurrence of extreme events (frost, hail, droughts) results in very important damages for agricultural sector and is very frequent that this sector requires several years to economically and financially recover from such damages. Recent examples in Uruguay are 1999-2000 and 2008-2009 droughts where according to data from government offices, losses were in the range between 200 and 250 million dollars (around 1% of average PIB in the last years) and between 400 and 800 million dollars (ca. 2% to 3% of average PIB in the last years), respectively (Barrenechea, 2009). Late frosts occurred in October 2008, affected to 1 000 out of a total of 2 200 vineyards installed in Uruguay, with a production loss estimated in 30% average (40 000 tons of grape) (Catadores, 2008). Hydric excess occurred in 2000 and 2001 years had high impact on development and yield of winter crops (wheat and barley) provoking collapse of 614 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 (Barrenechea, 2009). Heladas tardías ocurridas en octubre de 2008, afectaron a 1 000 de un total de 2 200 viñedos instalados en Uruguay, con una pérdida de producción estimada en promedio 30% (40 000 toneladas de uva), (Catadores, 2008). Excesos hídricos, ocurridos en los años 2000 y 2001 impactaron fuertemente en el desarrollo y rendimiento de cultivos de invierno (trigo y cebada) haciendo colapsar sistemas de seguros agropecuario vigentes para esas condiciones y causaron pérdidas importantes de montes de durazneros por asfixia radicular. En la actualidad, la mayor parte de los gobiernos y productores agropecuarios enfrentan los eventos climáticos adversos implementando medidas de “manejo de la crisis” una vez ocurridos dichos eventos. En muchos casos la implementación de este tipo de medidas para responder a las crisis implica un costo muy elevado para el Estado y la sociedad en su conjunto. Un enfoque más moderno para enfrentar circunstancias climáticas adversas consiste en la formulación e implementación de medidas anticipatorias comúnmente denominadas estrategias de “gestión de riesgos” (Baethgen et al., 2004). Es decir, acciones que contribuyan a disminuir la vulnerabilidad de la de producción agropecuaria frente a eventos climáticos adversos, permitiendo una mayor previsión y planificación a tales fines. Es así que la variabilidad y los eventos climáticos adversos en Uruguay son un factor muy relevante y toda actividad y acción dirigida a la identificación, desarrollo e implementación de opciones de respuesta que contribuyan de alguna manera a gestionar los riesgos que ocasionan y adaptarse a sus impactos, resulta de fundamental importancia para el logro de buenos resultados en las actividades agrícolas. Opciones de respuesta identificadas para la adaptación al cambio climático y la variabilidad La unidad de agroclima y sistemas de información (GRAS) del Instituto Nacional de Investigación Agropecuaria (INIA) de Uruguay en conjunto con el Banco Mundial (BM) y la Universidad de Cornell (UC) de Los Estados Unidos de América, finalizaron en el año 2009 el proyecto “vulnerabilidad al cambio climático en los sistemas de producción agrícola en América Latina y el Caribe: “desarrollo de respuestas y estrategias” (Giménez y Lanfranco, 2009). El objetivo de la propuesta fue formular un plan de acción con recomendaciones para el desarrollo de respuestas y estrategias con el fin de contribuir a una mejor adaptación a Agustín Giménez y Bruno Lanfranco current agricultural insurance systems for such conditions and caused main losses of peach plantations due radicular asphyxia. Nowadays, most of governments and agricultural producers face adverse climatic events implementing “crisis handling” countermeasures once such events occur. In many cases, this type of measures implementation in order to respond to crisis implies a high cost for State and society together. A most modern approach to face adverse climatic circumstances consist in formulation and implementation of anticipatory measures commonly known as “risk management” strategies (Baethgen et al., 2004). In other words, actions which contribute to diminish vulnerability of agricultural production against adverse climatic events, allowing better prevention and planning for such ends. This is how variability and adverse climatic events in Uruguay are an important factor and every action and effort which lead to identification, development and implementation of options of response that contribute to risk management they create and adapt to their impacts, is fundamental for achieving good results in agricultural sector. Options of response identified for adaptation to climatic change and variability The Agricultural Weather and Information Systems unit (GRAS) from National Institute of Agricultural Research (INIA) from Uruguay together with World Bank (BM) and Cornell University (CU) from United States of America, ended in year 2009 the project “Vulnerability to climatic change in agricultural production systems in Latin America and Caribbean: development of responses and strategies” (Giménez and Lanfranco, 2009). The aim of proposal was to outline an action plan with recommendations for development of responses and strategies with the purpose to contribute with a better adaptation to climatic variability impacts and occurrence of extreme climatic events in Uruguay’s agricultural production systems. The basic strategy for achieving the objective was making shops with active participation of workgroups including mainly representatives of producers associations, companies and institutions directly involved and linked to agricultural production activities in Uruguay, and experts in matters of weather, climatic change and similar. Therefore, whole process and final proposal for the resulting project’s Adaptación al cambio climático y la variabilidad: algunas opciones de respuesta para la producción agrícola en Uruguay 615 los impactos de la variabilidad climática y la ocurrencia de eventos climáticos extremos en los sistemas de producción agrícola de Uruguay. action plan was the result of work and interchange of information, experiences, opinions and additions made by such workgroup. La estrategia básica para el logro del objetivo fue la realización de talleres con la participación activa de un grupo de trabajo integrado mayormente por representantes de asociaciones de productores, empresas e instituciones directamente vinculadas e involucradas en las actividades de producción agrícola en Uruguay, y especialistas en la temática del clima y el cambio climático y relativas. De tal manera, todo el proceso de elaboración y la propuesta final del plan de acción resultante del proyecto, fue fruto de la labor y del intercambio de información, experiencias, opiniones y aportes realizados por dicho grupo de trabajo. As result of work in shops, the group identified and further developed eight options of response that were defined by priority according to the punctuation shown in Table 2. Como resultado del trabajo en los talleres, el grupo de trabajo identificó y posteriormente se desarrollaron ocho opciones de respuesta que fueron priorizadas de acuerdo a la puntuación que se presenta en el Cuadro 2. Based on the exercise of priorities definition, an action plan was created using the best three classified options, but within which were added most of other options. It is worth to mention that 8 options of response that emerged were considered important by the workgroup. Ranking only set their priority sorting. Although project was focused on agricultural production, the results and identified proposal are inclusive, and wide scope, and therefore they can apply to most of the sectors and production systems in Uruguay. Bellow is a summary of the three priority options. Cuadro 2. Resultado de la priorización de las opciones de respuestas a los posibles impactos de la variabilidad y eventos climáticos extremos. Table 2. Result of prioritization of options of response to possible impacts of variability and extreme climatic events. Opción de respuesta Puntuación (máx.= 100) Sistema de información para la toma de decisiones (SISTD) Gestión del agua Seguros agropecuarios Apoyo a la transferencia de información y tecnologías Estímulo a buenas prácticas agrícolas Mejora en la predictibilidad del clima Diseño de sistemas de producción para reducir el riesgo climático Mejoramiento genético tradicional y uso de biotecnología 78.9 77.2 75.3 72.9 69.9 69.2 67.2 63.8 En base al ejercicio de asignación de prioridades se elaboró un plan de acción basado en las tres opciones mejor clasificadas, pero dentro de las cuales se incorporaron la mayoría de las otras opciones. Es de destacar que las 8 opciones de respuesta surgidas fueron consideradas de importancia por el grupo de trabajo. El ranking sólo estableció un ordenamiento de prioridad. Information system and support for decision making (SISTD) Si bien el proyecto estuvo enfocado a la producción agrícola, los resultados y propuestas identificadas son extensas y de amplio alcance, y por lo tanto bien aplicables a la gran mayoría de los rubros y sistemas de producción de Uruguay. Development of proponed system will give information and indicators that allow the implementation of agricultural policies towards risks reduction and that offer tools to improve decision making process and general activities planning for sector’s businessmen. Settling a service that allows to give information about agricultural-climatic and agricultural-ecological variables important for predominant productive systems is the proposed objective. Agustín Giménez y Bruno Lanfranco 616 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 A continuación se presenta un resumen de las tres opciones priorizadas. Sistema de información y soporte para la toma de decisiones (SISTD) El objetivo planteado es la instalación de un servicio que permita brindar información sobre variables agroclimáticas y agroecológicas relevantes para los sistemas productivos predominantes. El desarrollo del sistema propuesto deberá brindar información e indicadores que permitan la implementación de políticas agropecuarias tendientes a reducir riesgos y ofrecer al sector empresarial herramientas para mejorar la toma de decisiones y la planificación general de sus actividades. Algunos de los resultados esperados son: a) la definición de zonas agroecológicas homogéneas para las diferentes actividades productivas. Esto se lleva a cabo desarrollando una cartografía que considere la capacidad de uso del suelo y la climatología, utilizando promedios de largo plazo de temperaturas, precipitaciones, eventos extremos, entre otros. b) la cuantificación de la variabilidad histórica encontrada en los resultados físicos y económicos de los diferentes subsectores productivos. Esto permite calcular la probabilidad de ocurrencia de diferentes desvíos de rendimientos, incluyendo los causados por eventos climáticos extremos, de modo de cuantificar el riesgo agroclimático. c) la modelación de rendimientos de cultivos en los diferentes sectores en función de variables meteorológicas y opciones de manejo. Esto permitirá calcular el riesgo climático asociado a una decisión particular dado un pronóstico que necesariamente consistirá en un sesgo en la distribución esperada de dichas variables meteorológicas. d) monitoreo permanente de variables climáticas (temperaturas, precipitaciones heladas, granizo) y agronómicas (balance hídrico del suelo, estado de la vegetación) que permita establecer sistemas de alerta temprana (por ejemplo de sequía, de enfermedades, etc.) para colaborar en la toma de decisiones previendo tanto condiciones adversas como favorables en el corto y mediano plazo. Some of the expected results are: a) definition of homogeneous agricultural ecological zones for different productive activities. This is done with the development of cartography that considers use capacity of land and climatology, using long term averages of temperature, rainfall, extreme events, among others. b) quantification of historical variability found in the physical and economical results of different productive sub-sectors. This allows to calculate the probability of occurrence of different deviations in yields, including the caused by extreme climatic events, in way to quantify agricultural-climatic risk. c) modeling of crops yield in different sectors in function of meteorological variables and handling options. This will allow calculation of climatic risk associated to a particular decision given a forecast that will consist in a bias for expected distribution of such meteorological variables. d) permanent monitoring of climatic (temperatures, rainfall, frosts, hails) and agricultural (soil hydric balance, vegetation status) variables that allow to set early alert systems (i.e., drought, diseases) to support decision taking foreseeing as well adverse as good conditions in short and long term. e) elaboration of climatic and economic indicators that work as support for settling and implementing of insurance systems (risk quantification, climatic indexes, etc.) and other risk managements instruments. f) elaboration of early alert systems and monitoring of extreme events to support official authorities for prevention and response before emergency situations. Water management It is proposed the development of institutional actions in management of hydric resources, research and development, creation of human resources and technology transference, with the aim to optimize water management at basin level and promote an efficient use in the agricultural production systems. The proposed strategies include: a) institutional strengthening of water management. Actual legislation states that resource management must be made at basin level through basin commissions that could gather the experience from meetings about irrigation. The support Adaptación al cambio climático y la variabilidad: algunas opciones de respuesta para la producción agrícola en Uruguay 617 e) la elaboración de indicadores climáticos y económicos que operen como soporte para el establecimiento e implementación de sistemas de seguros (cuantificación de riesgos, índices climáticos, etc.) y otros instrumentos de gestión de riesgos. to public institutions with interest in hydric resources management at national level will ease development and assessment of models for land systemization with the purpose to obtain irrigation and hydrological organization, as well as its ambient and territorial planning. f) la elaboración de sistemas de alerta temprana y de monitoreo de eventos extremos para apoyar a las autoridades gubernamentales para la previsión y respuesta ante situaciones de emergencia. b) to give advice on research and development activities of different production systems that have supplementary irrigation by use of technological tools which apply for the use and management of natural resources. The experiment information in areas of water-soil-crop, as well as economical information, will be included in scheduling tools and for selection of actual production systems or for designed systems under different climatic, edaphic scenarios, and of costs for different agricultural products. Gestión de agua Se plantea el desarrollo de un conjunto de acciones en el ámbito institucional de la gestión de los recursos hídricos, la investigación y desarrollo, la formación de recursos humanos y la transferencia tecnológica, a los efectos de optimizar la gestión del agua a nivel de cuenca y fomentar un uso eficiente en los sistemas de producción agropecuarios. Las estrategias planteadas incluyen: a) el fortalecimiento institucional de la gestión del agua. La legislación vigente establece que la administración del recurso debe hacerse a nivel de cuenca a través de los comités de cuenca que podrán recoger la experiencia de las juntas de riego. El apoyo a instituciones públicas con competencia en la gestión de los recursos hídricos a nivel nacional, posibilitará el desarrollo y evaluación de modelos de sistematización de tierra con fines de riego u ordenamiento hidrológico, así como su planificación ambiental y territorial. b) orientar acciones de investigación y desarrollo de diferentes sistemas de producción que incorporen el riego suplementario mediante el empleo de herramientas tecnológicas aplicables para el uso y manejo de los recursos naturales. La información experimental en las áreas de agua-suelo-cultivo, así como la información económica, se incorporará a herramientas de programación y para la selección de sistemas de producción reales o diseñados bajo diferentes escenarios climáticos, edáficos, y de precios de los distintos productos agropecuarios. c) fortalecer la formación especializada de recursos humanos, tales como formación a nivel de posgrado de recursos humanos en sistemas de información, gestión de los recursos hídricos, manejo del agua, sistematización de tierras y diferentes técnicas de riego. Asimismo, la generación de instancias de capacitación permanente para c) strengthen specialized creation of human resources, such as creation at post-graduate level of human resources in information systems, hydric resources management, water management, lands systemization and different irrigation techniques. Also, creation of permanent training entities for the first users in the chain (freelance specialists, common land technicians, producers’organizations and first level producers). d) improve technology transference through creation of technological roundtables like integrating instrument of different stakeholders of agriculture industrial chains and strengthening of intermediate level entities for promotion and technology transference (producers organizations, cooperatives, public and private institutions, among others). Insurance and other financial instruments for risk management It is proposed the proper design of insurance system and other financial instruments for risk management, like determining factor for agricultural development, as well as bonding element for public policies in this sector. This coverage and climatic risk management, leads to planning of preventive strategies and not only to react after their occurrence. In such sense, one of the most expected products is a greater development of conventional agricultural insurances and based on climatic indexes. The agricultural insurance is a financial instrument by which producer transfer risk of production loss to insurance entity by an event (fire, frosts, etc.) In order to assume such risk, the 618 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 Agustín Giménez y Bruno Lanfranco aquellos que van a ser transmisores en el primer eslabón de la cadena (profesionales independientes, técnicos de las cooperativas, organizaciones de productores y productores de punta). insurance company needs to know the magnitude estimated by the probability of occurrence of loss. This is known as “risk premium” (or “gross premium”), being equivalent also to agricultural climatic risk when is from climatic origin only. d) mejorar la transferencia de tecnología a través de la formación de mesas tecnológicas como instrumento integrador de los diferentes actores de las cadenas agroindustriales y del fortalecimiento de las entidades intermedias de difusión y transferencia de tecnología (organizaciones de productores, cooperativas, instituciones públicas y privadas, entre otros). To estimate the probability of occurrence of loss in a given crop by effect of climatic event, it must be defined its frequency, bias from which produces loss and their magnitude, therefore is required to have enough information. Seguros y otros instrumentos financieros para la gestión de riesgos Se plantea el diseño de un adecuado sistema de seguros y otros instrumentos financieros para la gestión de riesgos, como un factor determinante para el desarrollo agropecuario, así como un elemento articulador de las políticas públicas hacia el sector. Esta lógica de cobertura y gestión del riesgo climático, apunta a la planificación de estrategias anticipatorias y no solamente a reaccionar ex-post a la ocurrencia de los mismos. En tal sentido uno de los productos esperados es un mayor desarrollo de los seguros agrícolas convencionales y de los basados en índices climáticos. El seguro agrícola es un instrumento financiero por el cual el productor transfiere el riesgo de pérdida de producción a una entidad aseguradora por causa de un evento (incendio, granizo, etc.). Para poder asumir ese riesgo y tarifar la cobertura, la aseguradora necesita conocer su magnitud que se estima por la probabilidad de ocurrencia de pérdidas. Esto es lo que se denomina prima de riesgo (o “prima pura”), siendo equivalente también al riesgo agroclimático cuando es de origen climático exclusivamente. The type and quantity of risks that can include the insurance coverage depend on available information, as well as climatic as of production loss per crop. In the country, the risks like hails, wind and fire, are well covered by agricultural insurance (in “risks covered” mode) and in some crops this also covers risks like hydric excess in winter crops and freezing temperatures in rice. There is little development of profitable insurances due higher cost regards nominal insurance. Higher cost is explained by the need of orchard plots inspection to effects of collecting information when making the contract of insurance and before sinister occurrence, as well as higher number of included risks (increase insurance premium). An offer of wide coverage to different risks and productions would promote insurance extension in whole territory, granting required risks dispersion along time and space that needs the assurance activity, which indeed would reduce fees costs. To improve offer of conventional agricultural coverage is necessary to improve availability of information required for measuring different risks, which is beyond weather scope. Para estimar la probabilidad de ocurrencia de pérdidas en un determinado cultivo por efecto de un evento climático, se debe determinar la frecuencia del mismo, el umbral a partir del cual produce pérdidas y la magnitud de las mismas, para lo cual se necesita disponer de suficiente información. Covers based on climatic indexes seem to constitute a feasible option to overcome some limitations that conventional insurance have when including high impact (catastrophic) weather events and in cases where loss ratio assessment results extremely high and difficult to estimate (plains drought). It is a novel financial instrument that protects against an eventual economic loss related to evolution of climatic variable with high relation to protection risk (i.e., amount of rain-drought) and not with production volume. El tipo y número de riesgos que puedan incluir las coberturas de seguros depende de la información disponible, tanto climática como de pérdidas de producción por cultivo. En However, this type of insurance demands an analysis process and verification of available information and in many cases requires obtaining them in order to estimate Adaptación al cambio climático y la variabilidad: algunas opciones de respuesta para la producción agrícola en Uruguay el país los riesgos como granizo, viento e incendio están suficientemente cubiertos por el seguro agrícola (en su modalidad “de riesgos nominados”) y en algunos cultivos éste cubre además riesgos como exceso hídrico en cultivos de invierno y bajas temperaturas en arroz. Existe muy poco desarrollo de los seguros de rendimiento por su mayor costo respecto a los de riesgos nominados. El mayor costo se explica por la necesidad de inspecciones de chacras a los efectos de recoger información al contratar el seguro y ante la ocurrencia del siniestro, así como por el mayor número de riesgos incluidos (aumenta la prima de riesgo). Una oferta amplia de coberturas a diferentes riesgos y producciones promovería la extensión del seguro en todo el territorio, otorgando la necesaria dispersión de los riesgos en tiempo y espacio que requiere la actividad aseguradora, lo que a su vez reduciría el costo de las tarifas. Para mejorar la oferta de las coberturas agrícolas convencionales es necesario mejorar la disponibilidad de información requerida para la medición de los diferentes riesgos, que va más allá de la climatológica. Las coberturas basadas en índices climáticos parecen constituir una alternativa factible para superar algunas de las limitaciones que tienen los seguros tradicionales para cubrir los eventos climáticos de alto impacto (catastróficos) y en los casos donde la evaluación de la siniestralidad resulta muy onerosa y difícil de estimar (sequía en pasturas). Es un instrumento financiero novedoso que protege de una eventual pérdida económica relacionada con la evolución de una variable climática con alta relación con el riesgo a proteger (ej. cantidad de lluvia- sequía) y no con un volumen de producción. Sin embargo, este tipo de seguro exige un proceso de análisis y verificación de la información disponible y en muchos casos se requiere generación de la misma para poder estimar la correlación entre el índice seleccionado y el daño, ajustar el umbral a partir del cual se activa la indemnización, las probabilidades de ocurrencia, el estado del cultivo que presenta mayor exposición al riesgo considerado, etc. Por tanto, exige un periodo previo de tiempo para su ajuste y posterior implementación, de modo que el “riesgo de base” sea mínimo. El desafío planteado es por tanto el establecimiento de un programa de generación de información que permita el desarrollo de programas de seguros, ya sean convencionales, 619 correlation between selected index and damage, to adjust bias from which indemnity is activated, occurrence probabilities, crop state that shows higher exposure to selected risk, etc. Therefore, requires a pervious timeframe for its adjustment and further implementation, in such way “base risk” is minimal. Therefore such challenge is settling of a program for information generation that allows development of safe programs, either conventional, based on weather indexes, or on yields; i.e., an information and support system for decision making which allows to contribute such information. The other proponed strategy is generation of methods for handling catastrophe funds. In case of catastrophic climatic events -of low frequency, but high negative impact due territorial extension or intensitythat give as result large losses hardly assumable by insurance sector, i.e., very extreme droughts, there are management options like contingency or emergency funds, which supplement insurance activity and in general are managed by governmental entities. Before occurrence of this type of events, state support to affected producers (direct support, tax deferral, bank financial reschedule, among others) has not been based on previsions that take into account frequency and magnitude of losses, but in resources availability at that time. Every time there is more and more consensus as well in official side (state) as in producers side in the sense that this issue must be included within national agricultural policy agenda, regarding a suitable coverage in this sector implies greater development, support to technological innovation and tracking promotion programs. Although recently has been issued an agricultural emergency fund managed by government, the estimation and prevision of needs to cover this situations will contribute to its administration and managing. Also, when contracting of climatic or catastrophe indexed insurance by the State, will ease its financing with addition of fresh resources at the moment of an event. Information and support system for decision making process would be a valid instrument to give required information to governmental authorities during extreme situations as catastrophe statement, defining affected areas, quantification of damages for indemnity issues, etc. At the same time, the system could contribute to estimate prevision of finance Agustín Giménez y Bruno Lanfranco 620 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 basados en índices climáticos o de rendimientos; es decir, un sistema de información y soporte para la toma de decisiones que permita aportar dicha información. La otra estrategia propuesta es la generación de métodos para la operación de fondos de catástrofes. En el caso de los fenómenos climáticos catastróficos -de baja frecuencia pero de alto impacto negativo por su extensión territorial e intensidad- que generan pérdidas cuantiosas difícilmente asumibles por el sector asegurador por ejemplo sequías muy extremas, existen otras opciones de gestión como los fondos de contingencia o de emergencia, que complementan la acción de los seguros y normalmente son operados por los gobiernos. Ante la ocurrencia de ese tipo de fenómenos climáticos catastróficos el apoyo estatal a los productores afectados (ayudas directas, diferimiento de obligaciones tributarias, refinanciaciones bancarias, entre otras) no ha estado basado en previsiones que tomen en cuenta la frecuencia y magnitud de las pérdidas, sino que depende de las disponibilidades de recursos en ese momento. Cada vez existe mayor consenso tanto desde el Estado como desde los productores en que el tema debe ser tratado dentro del marco de política agrícola nacional, en el entendido que una cobertura adecuada del sector implica globalmente un mayor desarrollo, incentiva la innovación tecnológica y respalda a los programas de fomento. Si bien recientemente se ha creado un fondo de emergencia agropecuaria administrado por el gobierno, la estimación y previsión de las necesidades para atender estas situaciones contribuiría a su gestión y administración. Asimismo, la contratación por parte del Estado de un seguro de índice climático o de catástrofe, facilitaría su financiamiento con aporte de fondos frescos al momento de ocurrencia de la catástrofe. El sistema de información y soporte para la toma de decisiones podría ser un instrumento válido para brindar la información necesaria a las autoridades de gobierno para la toma de decisiones en situaciones extremas como son las declaraciones de catástrofes, determinación de las regiones afectadas, cuantificación de los daños a los efectos de la indemnización, etc. Igualmente, el sistema podría contribuir a estimar las previsiones de recursos financieros que deberían contar esos fondos a los efectos de mitigar los daños que los distintos tipos de eventos catastróficos puedan producir (sequía, inundaciones, etc.). resources should such funds have in order to cover damage effects that different type of catastrophic events can produce (drought, floods, etc.). End of the English version Literatura citada Baethgen, W. E.; Meinke, H. and Gimenez, A. 2004. Adaptation of agricultural production systems to climate variability and climate change: lessons learned and proposed research approach. In: insights and tools for adaptation: learning from climate variability. NOAA-OGP, Washington, D.C. ENV/ EPOC/GF/SD/RD. Organisation for Economic Cooperation and Development. Paris. 10 p. Barrenechea, P. 2009. Estudio Nacional de Economía del Cambio Climático en Uruguay. Dinama, MVOTMA. Uruguay. 27 p. Catadores, 2008. Impacto de la helada en los viñedos fue una catástrofe. Disponible en: http://www.catadores. net/nota.asp?id=385. Giménez, A. 2006. Climate change and variability in the mixed crop/livestock production systems of the Argentinean, Brazilian and Uruguayan Pampas. Final report. Project LA 27, AIACC. Disponible en: http://www.aiaccproject.org/Final%20Reports/ Final%20Reports/FinalRept_AIACC_LA27.pdf. Giménez, A. y Lanfranco, B. 2009. Vulnerabilidad al cambio climático en los sistemas de producción agrícola en América Latina y el Caribe: desarrollo de respuestas y estrategias. Informe final, octubre 2009. Banco Mundial. Disponible en: http://www.inia.org.uy/ online/files/contenidos/link_09062009025450.pdf. Intergovernmental Panel on Climate Change (IPCC) 2007a. Working group I contribution of to the fourth assessment report, climate change 2007: the physical science basis, summary for policymakers. Disponible en: http://www.ipcc.ch/SPM2feb07.pdf. Intergovernmental Panel on Climate Change (IPCC). 2007b. Intergovernmental panel on climate change. working group ii contribution to the fourth assessment report. Climate Change 2007: Climate Change Impacts. Adaptation and vulnerability, summary for policymakers. Disponible en:http:// www.ipcc.ch/SPM6avr07.pdf. Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Vol.3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 p. 621-627 Concentración nutrimental en hojas de aguacate ‘Hass’ con síntoma de moteado* Nutrimental concentration in ‘Hass’ avocado leaves with mottled symptom Edgardo Federico Hernández-Valdés1§, Salvador Aguilar-Campoverde1, Verónica Aguiera-Taylor2 y Rosa Elena Pérez-Sánchez1 Facultad de Agrobiología “Presidente Juárez”, Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo. Paseo Lázaro Cárdes esq. Berlín s/n. Col. Viveros. Uruapan, Michoacán, México. C. P. 60190. Tel. 01 452 523-64-74. ([email protected]), ([email protected]). Uruapan, Michoacán, México. 2Laboratorio de Diagnóstico Vegetal CICLUS. Calle 28 de abril Núm. 70-C, Facc. San Francisco Uruapan. Uruapan, Michoacán, México. C. P. 60157. Tel. 01 452 119-80-10. ([email protected]). § Autor para correspondencia: [email protected]. 1 Resumen Abstract El llamado “moteado de las hojas” en el cultivo de aguacate está ampliamente distribuido en las zonas de producción más importante de México, y se desconoce los factores involucrados en la aparición de este síntoma foliar. Por ello, se contrastó el contenido nutrimental en hojas de aguacate ‘Hass’ colectadas de árboles sin la presencia del moteado (tratamiento A), contra hojas que tampoco manifestaran el síntoma pero provenientes de árboles con el daño foliar (tratamiento B) y hojas con la presencia del síntoma (Tratamiento C). Se encontró que, aquellas hojas con “moteados” intervenales tuvieron menor concentración de N, P, K, y Mn, respecto a las que no presentaron el síntoma, mientras que las concentraciones de Ca, Mg, Fe, Zn, Cu y B hojas con y sin moteado fueron similares. The problem called as “mottled leaves” in avocado crop is widely spread in the most important production zones from Mexico, and it is unknown which factors are involved in this foliar symptom appearance. By this reason, the nutrimental content in ‘Hass’ avocado foils collected from trees without mottled presence (treatment A) was collated against leaves that either showed the symptom although coming from trees with foliar damage (treatment b) and leaves with symptom presence (Treatment C). It was found that those leaves with interveinal “mottled” had least N, P, K, and Mn concentration with regards the ones that show no symptom, while Ca, Mg, Fe, Zn, Cu and B concentrations in leaves with and without mottling were similar. Palabras clave: Persea americana Mill., clorosis intervenal, deficiencia foliar. Key words: Persea americana Mill., interveinal chlorosis, foliar deficiency. Introducción Introduction En los huertos de aguacate en Michoacán, Mexico, se encuentra ampliamente distribuido el daño foliar denominado “moteado de las hojas” (Mottle leaf), que se In the avocado orchards from Michoacán, Mexico, it is widely spread the foliar damage called “Mottle leaf”, which is evinced like interveinal chlorosis in young leaves * Recibido: septiembre de 2011 Aceptado: febrero de 2012 622 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 manifiesta como una clorosis intervenal en las hojas jóvenes (Barroso et al., 1985), además de hojas terminales muy pequeñas con márgenes necróticos y entrenudos cortos en casos avanzados (Malo, 1976). A medida que el daño es más severo los brotes pueden presentar defoliación y muerte progresiva lo que reduce drásticamente el rendimiento, e incluso causa la muerte de los árboles (Salazar, 2002). Durante 1910 el doctor A. J. Cook, profesor de biología en Pomona Collage, reconoció un daño similar en hojas de cítricos, al cual denominó “decadencia de árboles de naranja naval en California” que posteriormente cambió a “moteado de las hojas”. Este síntoma se intensificaba cuando los suelos eran muy duros por periodos considerables entre riegos, además se presentaba en aquellos huertos donde los riegos inundaban el terreno (Horne, 1933). Sin tener aún claro el origen de este problema, años después se reportó que las aplicaciones abundantes de materiales orgánicos, junto con un adecuado suministro de nitrógeno, y una condición favorable de humedad son importantes en la prevención del moteado de hojas. En evaluaciones posteriores en cítricos, se encontró una importante disminución del daño foliar por la aplicación de varias unidades de sulfato de zinc al suelo o por aspersiones al follaje (Horne, 1934). Debido a que en varias especies de árboles frutales, incluyendo los cítricos, son afectadas con un síntoma similar, en el cultivo de aguacate se ha recurrido a la aplicación de materiales que contienen Zn para corregir este síndrome, con respuestas favorables al aplicarlo foliarmente en forma de sulfato (Parker, 1936). Se reporta también, que las aplicaciones de Zn vía solución nutritiva sobre cultivo en arena, pueden corregir el moteado de las hojas e incrementar su tamaño y la intensidad de color verde así como el crecimiento de la plantas de aguacate (Brusca y Haas et al., 1959). Es por ello que como parte del manejo del cultivo de aguacate en Michoacán se realicen aplicaciones de 0.5 kg de sulfato de zinc por árbol al suelo, con el fin de disminuir el daño ocasionado por este síntoma (Sánchez et al., 2001). Sin embargo, existe otro estudio en donde las aspersiones en las hojas de sulfato de zinc no fueron efectivas para corregir la deficiencia foliar de Zn, tampoco de incrementar la producción de fruto, ni el tamaño del mismo (Salazar et al., 2008). De acuerdo con Aguilera et al. (2004) en Michoacán, la concentración de Zn en hojas de aguacate generalmente se encuentra desde niveles normales hacia arriba de lo normal (índices Kenworthy de 80-120 y > 120, respectivamente), lo cual pone en duda que realmente este elemento sea el causante de dicho síntoma. Edgardo Federico Hernández-Valdés et al. (Barroso et al., 1985), besides very small terminal leaves with necrotic edges and short buds in severe cases (Malo, 1976). In the extent damage is more severe the shoots can show defoliation and progressive deterioration which dramatically decreases yield, and even cause trees’ death (Salazar, 2002). During 1910 doctor A. J. Cook, biology professor at Pomona College, identified similar damage in citrus leaves, which were called “decline of navel orange tree in California” and further changed to “mottle leaf”. This symptom intensifies when soils were very hard during long periods between irrigations, also arose on orchards where irrigation flood the land (Horne, 1933). Without having the exact origin of this disease, years later it was reported that abundant application of organic materials, together with suitable nitrogen supply and favorable humidity condition are important to prevent mottled leaves. In further assessments of citric trees, it was found an outstanding decrease of foliar damage thanks to application of several units of zinc sulfate to soil and by spraying it to foliage (Horne, 1934). Due in several species of fruit trees, including citric trees, are affected by a similar symptom, avocado crops have been applied with materials that contain Zn to prevent this problem, with good results when applied to foliage in sulfate (Parker, 1936). It is also reported that Zn applications by nutritious solution on sand crop, can prevent mottled leaves and increase their size and green color intensity as well as avocado plants growth (Brusca and Haas et al., 1959). By this reason, as part of avocado crop handling in Michoacán there are applications of 0.5 kg of zinc sulfate per tree to the soil, with the aim to diminish damage caused by this symptom (Sánchez et al., 2001). However, there is another study in which spraying zinc sulfate to leaves was not effective to correct foliar deficiency, neither increase fruit yield, nor its size (Salazar et al., 2008). According to Aguilera et al. (2004) in Michoacán, Zn concentration in avocado leaves generally is found from normal to above levels (Kenworthy indexed from 80-120 and > 120, respectively), which puts in doubt that this element is really causing such symptom. Despite Salazar (2002) acknowledges mottled leaves as lack of Zn on them, Barroso et al. (1985) and Tapia et al. (2007) described lack of manganese (Mn) like a fading of interveinal zones but keeping green the areas surrounding nerves, and in the extent that becomes more severe, such Concentración nutrimental en hojas de aguacate ‘Hass’ con síntoma de moteado 623 A pesar que Salazar (2002) reconoce al moteado de las hojas como una falta de Zn en las hojas, Barroso et al. (1985) y Tapia et al. (2007) describieron la falta de manganeso (Mn) como un empalidecimiento de las áreas intervenales de las hojas permaneciendo verdes las zonas contiguas de los nervios, y a medida que se hace más aguda, dichas áreas adquieren una coloración amarilla más intensa. Por su parte Wallihan y Miller (1968) en plántulas sometidas a diferentes niveles de Mn, demostraron que los síntomas por falta del nutrimento presentan un patrón de clorosis similar al causado por Zn. areas acquire a more intense yellow coloration. On the other hand, Wallihan and Miller (1968) in seedlings submitted to different Mn levels, demonstrated that symptoms by lack of this element showed a chlorosis pattern similar to the one caused by Zn. Por ello, el objetivo de este trabajo fue determinar la concentración de nutrimentos presentes en hojas de aguacate ‘Hass’ con síntoma de “moteado”, contrastándolas contra hojas que visualmente no presentaron el daño. Materials and methods Materiales y métodos El presente estudio fue realizado en huertos de aguacate ‘Hass’ ubicados en el municipio de San Juan Parangaricutiro, Michoacán, México (19º 25’ 05’’ latitud norte, 102º longitud oeste 07´ 50’’ longitud oeste). Se estableció un diseño experimental en bloques al azar con tres tratamientos y cinco repeticiones. En cada huerta se seleccionaron cinco árboles con apariencia sana, considerándose éste como follaje verde oscuro y sin daño aparente por falta de nutrimentos que provocaran clorosis intervenal en sus hojas (tratamiento A). Cerca de los árboles de donde se tomaron hojas para el tratamiento A, se ubicaron otros cinco árboles con por lo menos la mitad de su copa con daño de moteado en sus hojas, seleccionando de él hojas sin daño (tratamiento B) y hojas con daño visible (tratamiento C). De cada árbol, se colectaron cuatro hojas con las características mencionadas, para tener finalmente 20 hojas de cada tratamiento por huerto. Los bloques fueron huertos a diferentes altitudes dentro del municipio, ubicados a 1 400, 1 780, 1 880, 2 184 y 2 438 msnm. Las hojas se llevaron a laboratorio para su lavado en agua desionizada, luego con ayuda de un sacabocado de 1 cm de diámetro, se obtuvieron círculos de zonas intervenales de cada hoja, asegurando tener muestra de la clorosis entre las venas para el tratamiento C, mientras que para los otros dos tratamientos los círculos de regiones intervenales fueron de un color verde oscuro. Se procedió a dar un enjuague de las porciones de tejido foliar con ácido clorhídrico 0.1 N, Therefore, the aim of this work was to define concentration of nutriments that exist in ‘Hass’avocado leaves with mottled symptom, contrasting them with leaves that showed no visual damage. This study was made in ‘Hass’ avocado orchards located in the municipality of de San Juan Parangaricutiro, Michoacán, Mexico (19º 25’ 05’’ north latitude, 102º 07´ 50’’ west longitude). A randomized block experimental design with three treatments and five repetitions was set. In each orchard five apparently health trees were selected, i. e., with dark green foliage and without apparent damage due lack of nutriments that could cause interveinal chlorosis in their leaves (treatment A). Near those trees whose leaves were used for treatment A, other five trees were located with at least half of the canopy with mottled leaves damage, selecting leaves without damage (treatment B) and with visible damage (treatment C). From each tree, four leaves with the mentioned characteristics were collected, to finally obtain 20 leaves of each treatment by orchard. Blocks were orchards at different heights within the municipality, located at 1 400, 1 780, 1 880, 2 184 and 2 438 masl. The leaves were taken to laboratory for deionized water washing, and then with help of 1cm diameter punch, circular samples of interveinal zones of each leaf were obtained, being sure of getting chlorosis between veins for treatment C, while for other two treatments the circles of interveinal zones had dark green color. Then all foliar tissue portions were rinsed with 0.1 N hydrochloric acid and final wash with deionized water. Afterwards tissue was dried at 70 °C during 48 h, milled and processed with 40 mesh. Total N was determined by microkjeldhal, and by humid digestion (sulfuric acid + hydrogen peroxide) the solution to quantify P by colorimetry (ascorbic acid and ammonium molybdate) was achieved, K by flame emission; Ca, Mg, Fe, Mn and Zn by atomic adsorption and B by colorimetry (Azomethine-H). Results were analyzed by randomized block experimental Edgardo Federico Hernández-Valdés et al. 624 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 y un lavado final con agua desionizada. Después el tejido fue secado a 70º C durante 48 h, molido y tamizado por malla 40. El N total se determinó por microkjeldhal, y a través de digestión húmeda (ácido sulfúrico + peróxido de hidrógeno) se logró obtener la solución para la cuantificar P por colorimetría (ácido ascórbico y molibdato de amonio); K por emisión de llama; Ca, Mg, Fe, Mn y Zn por absorción atómica y B por colorimetría (Azometina-H). Los resultados se analizaron a través de un diseño experimental de bloques al azar con cinco repeticiones. Una vez encontradas diferencias significativas entre tratamientos, se realizó una comparación de medias por Tukey (Pr< 0.05). Resultados y discusión Macronutrimentos En el Cuadro 1 se observa un comportamiento muy similar de los niveles de N, P y K para las hojas con apariencia sana, independientemente que provinieran de árboles sanos o enfermos (tratamientos A y B, respectivamente). Sin embargo, estos dos tipos de hojas superaron estadísticamente en concentración, de estos nutrimentos, a aquellas que presentaban el síntoma de moteado (tratamiento C). La concentración de Ca y Mg fue similar en hojas con y sin el síntoma de clorosis intervenal. design with five repetitions. Once significant differences between treatments were found, a comparison of means by Tukey (Pr< 0.05) was made. Results and discussion Macronutriments In Table 1 it is shown a very similar behavior on N, P and K levels for leaves with health appearance, regardless they come from health or affected trees (treatmentsAand B, respectively). However, these two types of leaves statistically overcame in concentration of N, P and K levels to those that had mottled symptom (treatment C). Ca and Mg concentration was similar in leaves with and without interveinal chlorosis symptom. Micro nutriments According to Table 2, Fe, Zn, Cu and B concentrations in foliar tissue did not show significant differences between leaves coming from trees with and without mottled foliar symptom. But in the case of B, there is a clear statistical difference between leaves with healthy appearance as well from health as affected trees (treatments A and B, respectively) which had greater B concentration regards trees with mottled foliar symptom. Cuadro 1. Concentración de macronutrimentos en hojas de aguacate ‘Hass’ colectadas con diferentes condiciones de moteado foliar. Table 1. Macronutriments concentration in leaves from ‘Hass’ avocado collected with different conditions of mottled foliar. Tratamiento Árbol Hoja A B C Sano Enfermo Enfermo Sana Sana Enferma N P K g kg-1 Ca Mg 15.6 a† 14.7 a 12.6 b 1.4 a 1.3 a 1.1 b 6.7 a 5.9 a 4.1 b 14.4 a 13.8 a 11.2 a 9.4 a 8.6 a 8.4 a Letras distintas por columnas indican diferencia estadística significativa (Pr< 0.05). † Micronutrimentos Discussion De acuerdo con el Cuadro 2, las concentraciones de Fe, Zn, Cu y B en tejido foliar no presentaron diferencias significativas entre las hojas provenientes de árboles con y sin síntoma de moteado foliar. Pero, para en Mn la diferencia estadística se presentó claramente entre las hojas con apariencia sana tanto de los árboles sanos According to tables 1 and 2, leaves with mottled leaves had lower N, P, K and Mn concentration than those with no damage. However, in a study made by Furr et al. (1946) with avocado varieties Taylor and Lula, by technique of missing element, they achieved to induce N, P and K foliar Concentración nutrimental en hojas de aguacate ‘Hass’ con síntoma de moteado como enfermos (tratamientos A y B, respectivamente) los cuales presentaron mayor concentración de este elemento respecto a las hojas con el síntoma de moteado foliar. 625 deficiencies, the same that show no mottled symptom. The young leaves of plants without Mn did not show any symptom, by as they mature, developed many yellow areas between veins. Cuadro 2. Concentración de micronutrimentos en hojas de aguacate ‘Hass’ colectadas con diferentes condiciones de moteado foliar. Table 2. Micronutriments concentration in leaves from ‘Hass’ avocado collected with different conditions of mottled foliar. Fe Mn Cu B 41.9 a 447.3 a 37.0 a 138.6 a 36.8 a 331.7 a 36.7 a 110.4 b 28.3 a 293.6 a 34.0 a Tratamiento Árbol Hoja A Sano Sana 206.3 a 170.0 a† B Enfermo Sana 186.3 a C Enfermo Enferma 184.8 a µg g Zn -1 Letras distintas por columnas indican diferencia estadística significativa (Pr< 0.05). † Discusión De acuerdo con los Cuadros 1 y 2, las hojas con moteados tuvieron menor concentración de N, P, K y Mn respecto a aquellas que no manifestaban el daño. Sin embargo, un estudio realizado por Furr et al. (1946) con las variedades de aguacate Taylor y Lula, a través de la técnica del elemento faltante, lograron inducir deficiencias foliares de N, P y K, mismas que no presentaron el síntoma del moteado. Las hojas jóvenes de plantas sin Mn, no mostraron ningún síntoma, pero a medida que estas maduraron, se desarrollaron muchas áreas amarillas entre las venas. Para Mn, estos autores reportan similitudes del síntoma de moteado muy parecido a lo encontrado en el presente estudio, donde se logró separar por concentración de éste elemento, hojas con y sin síntomas además publicaron, que con la falta de Zn sólo muy pocas hojas presentaron un ligero moteado, situación encontrada también en este trabajo, dado que a pesar que las hojas con una mejor condición nutrimental (tratamiento A) tuvo mayor concentración de Zn que aquellas con mayor área dañada (tratamiento B y C), no se expresaron diferencias significativas entre ellas. Barnard et al. (1991) en plantas de aguacate (Hass, Duke y G755) y crecidas en solución nutritiva, también lograron inducir síntomas similares a los descritos anteriormente para N, K, P y Mn, siendo para éste último una clorosis intervenal en hojas maduras. Plantas crecidas en cultivo de arena, y manejadas con solución nutritiva que no se les agregó Zn, no manifestaron un patrón definido de moteado foliar. For Mn, these authors report similarities of mottled symptom very alike to what was fount in this study, where it was possible to split by Mn concentration leaves with and without symptoms, also they reported that with lack of Zn only very few leaves showed a slight mottled, same condition found in this work, since despite leaves with better nutrimental condition (treatment A) had higher Zn concentration than those with greater damaged area (treatment B and C), there were no significant differences between them. Barnard et al. (1991) in avocado plants (Hass, Duke and G755) and grown in nutritious solution, also achieved to induce similar symptoms to previously mentioned for N, K, P and Mn, being for the latter an interveinal chlorosis in mature leaves. Plants grown in sand culture, and handled with nutritious solution without adding Zn, did not show a defined pattern of mottled foliar. Despite that for Crowley et al. (1993) Zn deficiency is seen when its concentration in foliar tissue is < 30 µg g-1, and that in the research herein shown only leaf with presence of mottled is the one with an index lower to reported by those researchers (28.3 µg g-1), for Maldonado et al. (2007) the acceptable Zn concentrations in foliar tissue for ‘Hass’ avocado in Michoacán are located from 20 to 51 µg g -1, intervalo that allows to locate in a normal category the analyzed leaves withmottled presence. Díaz et al. (1991) acknowledge that lack of Zn in avocado leaves can be confused with lack of Mn. Edgardo Federico Hernández-Valdés et al. 626 Rev. Mex. Cienc. Agríc. Vol. 3 Núm. 3 1 de mayo - 30 de junio, 2012 A pesar que para Crowley et al. (1993) una deficiencia de Zn se manifiesta cuando la concentración del elemento en el tejido foliar es < 30 µg g-1, y en la investigación presentada aquí sólo la hoja con presencia de moteado es la que tiene un índice inferior al reportado por estos investigadores (28.3 µg g-1), para Maldonado et al. (2007) las concentraciones aceptable de Zn en tejido foliar para ‘Hass’ en Michoacán se sitúan de 20 a 51 µg g-1, intervalo que permite ubicar a las hojas analizadas con presencia de moteado en una categoría normal. Díaz et al. (1991) reconocen que una falta de Zn en hojas de aguacate puede ser confundida por la de Mn. Conclusions The leaves with presence of “mottled” in ‘Hass’ avocado showed nitrogen, phosphorus, potassium and manganese concentrations lower than those with healthy appearance. Calcium, magnesium, iron, zinc, cuprum and boron concentrations did not show significant differences between leaves with and without “mottled”. End of the English version Conclusiones Las hojas con presencia de “moteado” en aguacate ‘Hass’ presentaron concentraciones de nitrógeno, fósforo, potasio y manganeso inferiores a aquellas con apariencia saludable. La concentración de calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre y boro no presentaron diferencias significativas entre hojas con y sin el “moteado”. Literatura citada Aguilera, J. L.; Tapia, L. M.; Vidales, I. y Salazar, S. 2004. Contenido nutrimental en suelo y hojas de aguacate en huertos establecidos en Michoacán y comparación de métodos para interpretación de resultados. INIFAP, CIRPAC, C. E. Uruapan. Folleto técnico Núm. 2. 28 p. Barnard, R. O.; Cillié, G. E. B and Kotzé, J. M. 1991. Deficiency symptoms in avocados. South African avocado growers’ Assoc. Yrb. 14:67-71. Barroso, A.; Díaz, A.; García, V. y Altares, M. 1985. Deficiencias de Zn y Mn en los cultivos de aguacate de Tenerife, Islas Canarias. Fruits. 40(1):39-47. Brusca, J. N. and Haas, A. R. C. 1959. Zinc effect on citrus, avocado. Large concentrations of zinc added to sand or soil cultures corrected mottle-leaf, increased leaf size and tree growth. Calif. Agric. 13(1):12-13. Crowley, D. E.; Smith, W.; Faber, B. and Arpaia, M. L. 1993. Zinc nutrition of avocado. Calif. Avocado Soc. Yrb. 77:95-100. Díaz, A.; Barroso, A.; Altares, M. y Chinea, E. 1991. Diagnóstico de carencia de zinc y manganeso en aguacate y mango. Rev. Frutic. 6(2):62-66. Furr, J. R.; Philip, C.; Reece, C. and Gardner, F. E. 1946. Symptoms exhibited by avocado trees grown in outdoor sand cultures deprived of various mineral nutrients. Proc. Fla. State Hort. Soc. 59:138-145. Horne, W. T. 1933. Pest and disease- Latest developments in avocado disease control. Calif. Avo. Assoc. Yrb. 18:28-32. Horne, W. T. 1934. Avocado diseases in California. University of California. College of Agriculture. Berkeley, CA. Bulletin 585. 72 pp. Maldonado, R.; Álvarez, M. E.; Almaguer, G.; Barrientos, A. F. y García, R. 2007. Estándares nutrimentales para aguacatero 'Hass'. Rev. Chapingo. Serie Hort. 13(1):103-108. Malo, S. E. 1976. Mineral nutrition of avocados. Proc. of the First Inter. Tropical fruit short course: the avocado. Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida. 42-46. Parker, E. R. 1936. Mottle-leaf and sun-blotch disese control. Calif. Avo. Assoc. Yrb. 21:149-151. Salazar, S. 2002. Nutrición del aguacate, principios y aplicaciones. Instituto de la Potasa y el Fósforo A. C. Querétaro, Querétaro. 165 p. Concentración nutrimental en hojas de aguacate ‘Hass’ con síntoma de moteado Salazar, S.; Cossio, L. E. y González, J. L. 2008. Corrección de la deficiencia crónica de zinc en aguacate ‘Hass’. Rev. Chapingo, Serie Hort. 14(2):153-159. Sánchez, J. de la L.; Alcántar, J. J.; Coria, V. M.; Contreras, J. A.; Fernández, I. V.; Tapia, L. M.; Aguilera, J. L.; Hernández, G. y Vidales, J. A. 2001. Tecnología para la producción de aguacate en México. INIFAP, CIRPAC, C.E. Uruapan. Libro técnico Núm. 1. 208 p. 627 Tapia, L. M.; Marroquín, F. J.; Cortés, I.; Contreras, J. A. y Castellanos, J. Z. 2007. Nutrición del aguacate. In: Téliz, D. y Mora, A. El aguacate y su manejo integrado. 2ª Ed. Mundi-Prensa. México, D. F. 87-106. Wallihan, E. F. and Miller, M. P. 1968. Identifying manganese deficiency in avocado trees. Yrb. Calif. Avoc. Soc. 52:135-136. INSTRUCCIONES PARA AUTORES(AS) La Revista Mexicana en Ciencias Agrícolas (REMEXCA), ofrece a los investigadores(as) en ciencias agrícolas y áreas afines, un medio para publicar los resultados de las investigaciones. Se aceptarán escritos de investigación teórica o experimental, en los formatos de artículo científico, nota de investigación, ensayo y descripción de cultivares. Cada documento será arbitrado y editado por un grupo de expertos(as) designados por el Comité Editorial; sólo se aceptan escritos originales e inéditos en español o inglés y que no estén propuestos en otras revistas. Las contribuciones a publicarse en la REMEXCA, deberán estar escritas a doble espacio (incluidos cuadros y figuras) y usando times new roman paso 11 en todo el manuscrito, con márgenes de 2.5 cm en los cuatro lados. Las cuartillas estarán numeradas en la esquina inferior derecha y numerar los renglones iniciando con 1 en cada página. Los apartados: resumen, introducción, materiales y métodos, resultados, discusión, conclusiones, agradecimientos y literatura citada, deberán escribirse en mayúsculas y negritas alineadas a la izquierda. Artículo científico. Escrito original e inédito que se fundamenta en resultados de investigaciones, en los que se ha estudiado la interacción de dos o más tratamientos en varios experimentos, localidades y años para obtener conclusiones válidas. Los artículos deberán tener una extensión máxima de 20 cuartillas (incluidos cuadros y figuras) y contener los siguientes apartados: 1) título; 2) autores(as); 3) institución de trabajo de autores(as); 4) dirección de los autores(as) para correspondencia y correo electrónico; 5) resumen; 6) palabras clave; 7) introducción; 8) materiales y métodos; 9) resultados y discusión; 10) conclusiones y 11) literatura citada. Descripción de cultivares. Escrito hecho con la finalidad de proporcionar a la comunidad científica, el origen y las características de la nueva variedad, clon, híbrido, etc; con extensión máxima de ocho cuartillas (incluidos cuadros y figuras), contiene los apartados 1 al 6 y 11 del artículo científico. Las descripciones de cultivares es en texto consecutivo, con información relevante sobre la importancia del cultivar, origen, genealogía, método de obtención, características fenotípicas y agronómicas (condiciones climáticas, tipo de suelo, resistencia a plagas, enfermedades y rendimiento), características de calidad (comercial, industrial, nutrimental, etc) y disponibilidad de la semilla. Formato del escrito Título. Debe aportar una idea clara y precisa del escrito, utilizando 13 palabras como máximo; debe ir en mayúsculas y negritas, centrado en la parte superior. Autores(as). Incluir un máximo de seis autores, los nombres deberán presentarse completos (nombres y dos apellidos). Justificados inmediatamente debajo del título, sin grados académicos y sin cargos laborales; al final de cada nombre se colocará índices numéricos y se hará referencia a estos, inmediatamente debajo de los autores(as); en donde, llevará el nombre de la institución al que pertenece y domicilio oficial de cada autor(a); incluyendo código postal, número telefónico y correos electrónicos; e indicar el autor(a) para correspondencia. Resumen y abstract. Presentar una síntesis de 250 palabras como máximo, que contenga lo siguiente: justificación, objetivos, lugar y año en que se realizó la investigación, breve descripción de los materiales y métodos utilizados, resultados, y conclusiones; el texto se escribe en forma consecutiva. Nota de investigación. Escrito que contiene resultados preliminares y transcendentes que el autor(a) desea publicar antes de concluir su investigación; su extensión es de ocho cuartillas (incluidos cuadros y figuras); contiene los mismos apartados que un artículo científico, pero los incisos 7 al 9 se escribe en texto consecutivo; es decir, sin el título del apartado. Palabras clave y key words. Se escriben después del resumen y sirven para incluir al artículo científico en índices y sistemas de información. Seleccionar tres o cuatro palabras y no incluir palabras utilizadas en el título. Los nombres científicos de las especies mencionadas en el resumen, deberán colocarse como palabras clave y key words. Ensayo. Escrito recapitulativo generado del análisis de temas importantes y de actualidad para la comunidad científica, en donde el autor(a) expresa su opinión y establece sus conclusiones sobre el tema tratado; deberá tener una extensión máxima de 20 cuartillas (incluidos cuadros y figuras). Contiene los apartados 1 al 6, 10 y 11 del artículo científico. El desarrollo del contenido del ensayo se trata en apartados de acuerdo al tema, de cuya discusión se generan conclusiones. Introducción. Su contenido debe estar relacionado con el tema específico y el propósito de la investigación; señala el problema e importancia de la investigación, los antecedentes bibliográficos que fundamenten la hipótesis y los objetivos. Materiales y métodos. Incluye la descripción del sitio experimental, materiales, equipos, métodos, técnicas y diseños experimentales utilizados en la investigación. Resultados y discusión. Presentar los resultados obtenidos en la investigación y señalar similitudes o divergencias con aquellos reportados en otras investigaciones publicadas. En la discusión resaltar la relación causa-efecto derivada del análisis. Conclusiones. Redactar conclusiones derivadas de los resultados relevantes, relacionados con los objetivos e hipótesis del trabajo. Literatura citada. Incluir preferentemente citas bibliográficas recientes de artículos científicos de revistas reconocidas, no incluir resúmenes de congresos, tesis, informes internos, página web, etc. Todas las citas mencionadas en el texto deberán aparecer en la literatura citada. Observaciones generales En el documento original, las figuras y los cuadros deberán utilizar unidades del Sistema Internacional (SI). Además, incluir los archivos de las figuras por separado en el programa original donde fue creado, de tal manera que permita, de ser necesario hacer modificaciones; en caso de incluir fotografías, estas deben ser originales, escaneadas en alta resulución y enviar por separado el archivo electrónico. El título de las figuras, se escribe con mayúsculas y minúsculas, en negritas; en gráfica de barras y pastel usar texturas de relleno claramente contrastantes; para gráficas de líneas, usar símbolos diferentes. El título de los cuadros, se escribe con mayúsculas y minúsculas, en negritas; los cuadros no deben exceder de una cuartilla, ni cerrarse con líneas verticales; sólo se aceptan tres líneas horizontales, las cabezas de columnas van entre las dos primeras líneas y la tercera sirve para terminar el cuadro; además, deben numerarse en forma progresiva conforme se citan en el texto y contener la información necesaria para que sean fáciles de interpretar. La información contenida en los cuadros no debe duplicarse en las figuras y viceversa, y en ambos casos incluir comparaciones estadísticas. Las referencias de literatura al inicio o en medio del texto, se utiliza el apellido(s) y el año de publicación entre paréntesis; por ejemplo, Winter (2002) o Lindsay y Cox (2001) si son dos autores(as). Si la cita es al final del texto, colocar entre paréntesis el apellido(s) coma y el año; ejemplo: (Winter, 2002) o (Lindsay y Cox, 2001). Si la publicación que se cita tiene más de dos autores(as), se escribe el primer apellido del autor(a) principal, seguido la abreviatura et al. y el año de la publicación; la forma de presentación en el texto es: Tovar et al. (2002) o al final del texto (Tovar et al., 2002). En el caso de organizaciones, colocar las abreviaturas o iniciales; ejemplo, FAO (2002) o (FAO, 2002). Formas de citar la literatura Artículos en publicaciones periódicas. Las citas se deben colocar en orden alfabético, si un autor(a) principal aparece en varios artículos de un mismo año, se diferencia con letras a, b, c, etc. 1) escribir completo el primer apellido con coma y la inicial(es) de los nombres de pila con punto. Para separar dos autores(as) se utiliza la conjunción <y> o su equivalente en el idioma en que está escrita la obra. Cuando son más de dos autores(as), se separan con punto y coma, entre el penúltimo y el último autor(a) se usa la conjunción <y> o su equivalente. Si es una organización, colocar el nombre completo y entre paréntesis su sigla; 2) año de publicación punto; 3) título del artículo punto; 4) país donde se edita punto, nombre de la revista punto y 5) número de revista y volumen entre paréntesis dos puntos, número de la página inicial y final del artículo, separados por un guión (i. e. 8(43):763-775). Publicaciones seriales y libros. 1) autor(es), igual que para artículos; 2) año de publicación punto; 3) título de la obra punto. 4) si es traducción (indicar número de edición e idioma, nombre del traductor(a) punto; 5) nombre de la editorial punto; 6) número de la edición punto; 7) lugar donde se publicó la obra (ciudad, estado, país) punto; 8) para folleto, serie o colección colocar el nombre y número punto y 9) número total de páginas (i. e. 150 p.) o páginas consultadas (i. e. 30-45 pp.). Artículos, capítulos o resúmenes en obras colectivas (libros, compendios, memorias, etc). 1) autor(es), igual que para artículos; 2) año de publicación punto; 3) título del artículo, capítulo o memoria punto; 4) expresión latina In: 5) titulo de la obra colectiva punto; 6) editor(es), compilador(es) o coordinador(es) de la obra colectiva [se anotan igual que el autor(es) del artículo] punto, se coloca entre paréntesis la abreviatura (ed. o eds.), (comp. o comps.) o (coord. o coords.), según sea el caso punto; 7) si es traducción (igual que para publicaciones seriadas y libros); 8) número de la edición punto; 9) nombre de la editorial punto; 10) lugar donde se publicó (ciudad, estado, país) punto y 11) páginas que comprende el artículo, ligadas por un guión y colocar pp minúscula (i. e. 15-35 pp.). Envío de los artículos a: Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas. Campo Experimental Valle de México. INIFAP. Carretera Los Reyes-Texcoco, km 13.5. Coatlinchán, Texcoco, Estado de México. C. P. 56250. Tel. 01 595 9212681. Correo electrónico: revista - [email protected]. Costo de suscripción anual $ 750.00 (6 publicaciones). Precio de venta por publicación $ 100.00 (más costo de envío). INSTRUCTIONS FOR AUTHORS The Mexican Journal in Agricultural Sciences (REMEXCA), offers to the investigators in agricultural sciences and compatible areas, means to publish the results of the investigations. Writings of theoretical and experimental investigation will be accepted, in the formats of scientific article, notice of investigation, essay and cultivar description. Each document shall be arbitrated and edited by a group of experts designated by the Publishing Committee; accepting only original and unpublished writings in Spanish or English and that are not offered in other journals. The contributions to publish themselves in the REMEXCA, must be written in double-space (including tables and figures) and using “times new roman” size 11 in all the manuscript, with margins in the four flanks of 2.5 cm. All the pages must be numbered in the right inferior corner and numbering the lines initiating with 1 in each page. The sections: abstract, introduction, materials and methods, results, discussion, conclusions, acknowledgments and mentioned literature, must be in upper case and bold left aligned. Scientific article. Original and unpublished writing which is based on researching results, in which the interaction of two or more treatments in several experiments, locations through many years to draw valid conclusions have been studied. Articles should not exceed a maximum of 20 pages (including tables and figures) and contain the following sections: 1) title, 2) author(s), 3) working institution of the author(s), 4) address of the author(s) for correspondence and e-mail; 5) abstract; 6) key words; 7) introduction; 8) materials and methods; 9) results and discussion; 10) conclusions and 11) cited literature. Notice of investigation. Writing that contains transcendental preliminary results that the author wishes to publish before concluding its investigation; its extension of eight pages (including tables and figures); it contains the same sections that a scientific article, but interjections 7 to 9 are written in consecutive text; that is to say, without the title of the section. Essay. Generated summarized writing of the analysis of important subjects and the present time for the scientific community, where the author expresses its opinion and settles down its conclusions on the treated subject; pages must have a maximum extension of 20 (including tables and figures). It contains sections 1 to 6, 10 and 11 of the scientific article. The development of the content of the essay is questioned in sections according to the topic, through this discussion conclusions or concluding remarks should be generated. Cultivar description. Writing made in order to provide the scientific community, the origin and the characteristics of the new variety, clone, hybrid, etc; with a maximum extensions of eight pages (including tables and figures), contains sections 1 to 6 and 11 of the scientific article. The descriptions of cultivars is in consecutive text, with relevant information about the importance of cultivar, origin, genealogy, obtaining method, agronomic and phonotypical characteristics (climatic conditions, soil type, resistance to pests, diseases and yield), quality characteristics (commercial, industrial, nutritional, etc) and availability of seed. Writing format Title. It should provide a clear and precise idea of the writing, using 13 words or less, must be in capital bold letters, centered on the top. Authors. To include six authors or less, full names must be submitted (name, surname and last name). Justified, immediately underneath the title, without academic degrees and labor positions; at the end of each name it must be placed numerical indices and correspondence to these shall appear, immediately below the authors; bearing, the name of the institution to which it belongs and official address of each author; including zip code, telephone number and e-mails; and indicate the author for correspondence. Abstract and resumen. Submit a summary of 250 words or less, containing the following: justification, objectives, location and year that the research was conducted, a brief description of the materials and methods, results and conclusions, the text must be written in consecutive form. Key words and palabras clave. It was written after the abstract which serve to include the scientific article in indexes and information systems. Choose three or four words and not include words used in the title. Scientific names of species mentioned in the abstract must be register as key words and palabras clave. Introduction. Its content must be related to the specific subject and the purpose of the investigation; it indicates the issues and importance of the investigation, the bibliographical antecedents that substantiate the hypothesis and its objectives. Materials and methods. It includes the description of the experimental site, materials, equipment, methods, techniques and experimental designs used in research. Results and discussion. To present/display the results obtained in the investigation and indicate similarities or divergences with those reported in other published investigations. In the discussion it must be emphasize the relation cause-effect derived from the analysis. Conclusions. Drawing conclusions from the relevant results relating to the objectives and working hypotheses. Cited literature. Preferably include recent citations of scientific papers in recognized journals, do not include conference proceedings, theses, internal reports, website, etc. All citations mentioned in the text should appear in the literature cited. General observations In the original document, the figures and the pictures must use the units of the International System (SI). Also, include the files of the figures separately in the original program which was created or made in such a way that allows, if necessary to make changes, in case of including photographs, these should be originals, scanner in resolution high and send the electronic file separately. The title of the figures is capitalized and lower case, bold; in bar and pie graphs, filling using clearly contrasting textures; for line graphs use different symbols. The title of the tables, must be capitalized and lower case, bold; tables should not exceed one page, or closed with vertical lines; only three horizontal lines are accepted, the head of columns are between the first two lines and the third serves to complete the table; moreover, must be numbered progressively according to the cited text and contain the information needed to be easy to understand. The information contained in tables may not be duplicated in the figures and vice versa, and in both cases include statistical comparisons. Literature references at the beginning or middle of the text use the surname(s) and year of publication in brackets, for example, Winter (2002) or Lindsay and Cox (2001) if there are two authors(as). If the reference is at the end of the text, put in brackets the name(s) coma and the year, eg (Winter, 2002) or (Lindsay and Cox, 2001). If the cited publication has more than two authors, write the surname of the leading author, followed by “et al.” and year of publication. Literature citation Articles in journals. Citations should be placed in alphabetical order, if a leading author appears in several articles of the same year, it differs with letters a, b, c, etc.1) Write the surname complete with a comma and initial(s) of the names with a dot. To separate two authors the “and” conjunction is used or its equivalent in the language the work it is written on. When more than two authors, are separated by a dot and coma, between the penultimate and the last author a “and” conjunction it is used or it’s equivalent. If it is an organization, put the full name and the acronym in brackets; 2) Year of publication dot; 3) title of the article dot; 4) country where it was edited dot, journal name dot and 5) journal number and volume number in parentheses two dots, number of the first and last page of the article, separated by a hyphen (ie 8 (43):763-775). Serial publications and books. 1) author(s), just as for articles; 2) year of publication dot; 3) title of the work dot. 4) if it is translation ( indicate number of edition and language of which it was translated and the name of the translator dot; 5) publisher name dot; 6) number of edition dot; 7) place where the work was published (city, state, country) dot; 8) for pamphlet, series or collection to place the name and number dot and 9) total number of pages (i. e. 150 p.) or various pages (i. e. 30-45 pp.). Articles, chapters or abstracts in collective works (books, abstracts, reports, etc). 1) author(s), just as for articles; 2) year of publication dot; 3) title of the article, chapter or memory dot; 4) Latin expression In two dots; 5) title of the collective work dot; 6) publisher(s), compiler(s) or coordinating(s) of the collective work [written just like the author(s) of the article] dot, at the end of this, the abbreviation is placed between parenthesis (ed. or eds.), (comp. or comps.) or (cord. or cords.), according to is the case dot; 7) if it is a translation (just as for serial publications and books); 8) number of the edition dot; 9) publisher name dot; 10) place where it was published (city, state, country) and 11) pages that includes the article, placed by a hyphen and lowercase pp (i. e. 15-35 pp.). Submitting articles to: Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas. Campo Experimental Valle de México. INIFAP. Carretera Los ReyesTexcoco, km 13.5. Coatlinchán, Texcoco, Estado de México. C. P. 56250. Tel. 01 595 9212681. E-mail: revista-atm@ yahoo.com.mx. Cost of annual subscription $ 60.00 dollars (6 issues). Price per issue $ 9.00 dollars (plus shipping). Revista Mexicana de Ciencias Agrícolas Mandato: A través de la generación de conocimientos científicos y de innovación tecnológica agropecuaria y forestal como respuesta a las demandas y necesidades de las cadenas agroindustriales y de los diferentes tipo de productores, contribuir al desarrollo rural sustentable mejorando la competitividad y manteniendo la base de recursos naturales, mediante un trabajo participativo y corresponsable con otras instituciones y organizaciones públicas y privadas asociadas al campo mexicano. Misión: Generar conocimientos científicos e innovaciones tecnológicas y promover su trasferencia, considerando un enfoque que integre desde el productor primario hasta el consumidor final, para contribuir al desarrollo productivo, competitivo y sustentable del sector forestal, agrícola y pecuario en beneficio de la sociedad. Visión: El instituto se visualiza a mediano plazo como una institución de excelencia científica y tecnológica, dotada de personal altamente capacitado y motivado; con infraestructura, herramientas de vanguardia y administración moderna y autónoma; con liderazgo y reconocimiento nacional e internacional por su alta capacidad de respuesta a las demandas de conocimientos, innovaciones tecnológicas, servicios y formación de recursos humanos en beneficio del sector forestal, agrícola y pecuario, así como de la sociedad en general. Retos: Aportar tecnologías al campo para: ● Mejorar la productividad y rentabilidad ● Dar valor agregado a la producción ● Contribuir al desarrollo sostenible Atiende a todo el país a través de: 8 Centros de Investigación Regional (CIR’S) 5 Centros Nacionales de Investigación Disciplinaria (CENID’S) 38 Campos Experimentales (CE) Dirección física: Progreso 5, Barrio de Santa Catarina, Delegación Coyoacán, Distrito Federal, México. C. P. 04010 Para más información visite: http://www.inifap.gob.mx/otros-sitios/revistas-cientificas.htm. PRODUCCIÓN Dora M. Sangerman-Jarquín DISEÑO Y COMPOSICIÓN María Otilia Lozada González y Agustín Navarro Bravo ASISTENTE EDITORIAL María Doralice Pineda Gutiérrez