Galludos: Squalus, discriminación de especies en la ZCPAU a

Galludos: Squalus, discriminación de especies en la ZCPAU a

Galludos: Squalus, discriminación de especies en
la ZCPAU a través de análisis morfométricos y
moleculares
F. Mas; A. Márquez; F. Doño; L. Rubio; E. Errico; V. Vidal; M. Prandi; S. Silveira; R. Forselledo & A. Domingo
INTRODUCCIÓN
Orden: Squaliformes
Familia: Squalidae
Género: Squalus
•
Espinas en ambas aletas dorsales.
•
Ausencia de aleta anal.
•
Quillas en pedúnculo caudal.
•
Espiráculos grandes, próximos a los ojos.
•
Barbas nasales cortas.
• Distribucón circumglobal en aguas templadas y tropicales.
• Demersales.
• Al menos 25 especies (taxonomía problematica).
“acanthias”
Squalus spp.
Aletas pectorales
Aletas caudales
Posición relativa de 1ra aleta dorsal
Morfología de los dentículos dérmicos
“mitsukurii”
“cubensis-megalops”
Bigelow & Schroeder (1948); Last et al. (2007); Ebert et al. (2013)
INTRODUCCIÓN - Antecedentes
5 especies de galludos citadas para la ZCPAU
(Nion et al. 2002; Domingo et al. 2008):
• S. acanthias
• S. mitsukurii
• S. cubensis
• S. megalops?
• S. blainville?
OBJETIVOS
• Identificar caracteres morfológicos externos que permitan discriminar entre
especies.
• Validar estos resultados mediante análisis genéticos.
MATERIALES Y MÉTODOS – Colecta de datos
• Pesca experimental (B/I Aldebarán).
• Red de arrastre de fondo.
• Feb / Marzo 2014 (19/2 al 9/3).
• ZCPAU:
35°22’–36°26’S ; 52°37’–53°44’W
• Prof. de fondo : 66–310 m.
MATERIALES Y MÉTODOS – Caracterización morfológica externa
• Sexo, grado de madurez, peso.
• ~ 80 medidas (Compagno 2001; Last et al. 2007).
• Fotografías (morfología externa, coloración, forma
de aletas).
• Dentículos dérmicos: lupa y fotografías MEB.
• Muestras: vértebras, espinas dorsales, piel, músculo,
hígado, gónadas, estómago, mandíbulas.
MATERIALES Y MÉTODOS – Análsis molecular
• Muestras de músculo conservadas en alcohol 95.
• Extracción de ADN (métodos de extracción salina).
• Amplificación mediante PCR de un fragmento de la citocromo oxidasa I.
• Secuenciación automática (Macrogen Inc.).
• Árbol de distancia.
• Distancia: Tamura 3 parámetros.
• Agrupamiento: Neighbor joining.
• Clados: Bootstrap 1000 pseudoréplicas.
• Secuencias de referencia del Genbank.
MATERIALES Y MÉTODOS – Análisis discriminante
Especies
Variables morfométricas (%LT)
Análsis discriminante
•
Entrenamiento del modelo con un subset de datos.
Predicciones para al resto de los datos.
•
Validación cruzada (jackknife).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
49 ejemplares procesados.
23 S. mitsukurii (18 M y 5 H).
26 S. cubensis (19 M y 7H).
n = 23
n = 26
RESULTADOS Y DISCUSIÓN – Denticulos dérmicos
S. cubensis
S. mitsukurii
S. cubensis
S. mitsukurii
S. mitsukurii
S. cubensis
RESULTADOS Y DISCUSIÓN – Aletas caudales y pectorales
RESULTADOS Y DISCUSIÓN – Análsis moleculares
•
Todos
los
individuos
analizados genéticamente se
agruparon en 2 especies
(forman
dos
caldos
mutuamente monofiléticos).
•
No se observa subdivisión
dentro de cada clado.
Árbol de distancia
RESULTADOS Y DISCUSIÓN – Análsis moleculares
SQL22 Squa7
Squa18 S cubensis dudoso
SQL31 Squa11
Squa 1 S mitsukurii
94 EU074611 Squalus mitsukurii Argentina
JF494587 Squalus mitsukurii Sudafrica
JF494591 Squalus mitsukurii Sudafrica
S. mitsukurii
JF494588 Squalus mitsukurii Sudafrica
EU074610 Squalus mitsukurii Argentina
Squa2 S mitsukurii
SQL29 (1531)
Grupo mitsukurii
JF494590 Squalus mitsukurii Sudafrica
JF494592 Squalus mitsukurii Sudafrica
JF494589 Squalus mitsukurii Sudafrica
86
EF539319 Squalus montalbani Indonesia
EF539301 Squalus chloroculus Australia Tasmania
EF539306 Squalus edmundsi Indonesia Bali
87
EF539307 Squalus hemipinnis Indonesia NTB
EF539317 Squalus japonicus Taiwan
98
EF539323 Squalus nasutus Indonesia Jawa Tengah
EF539292 Squalus albifrons Austarlia NSW
EF539272 Squalus suckleyi Japon
EF539273 Squalus suckleyi USA
100
EF539287 Squalus acanthias USA
Grupo acanthias
EF539281
Squalus
acanthias
Reino
Unido
97
57 EF539286 Squalus acanthias Chile
EF539294.1 Squalus brevirostris Japon
97
EF539318 Squalus megalops Australia Victoria
SQL 24
100
Squa26 S cubensis
SQL25
78
SQL13 squa25
Grupo cubensis
S. cubensis
58 FN431670 Squalus cubensis Golfo de Mexico
SQL15 Squa24
SQL18 (1645)
SQL 05
SQL 23
66
Árbol de distancia
incluyendo secuencias
de otras especies del
género (obtenidas del
genbank).
51
74
99
0.005
RESULTADOS Y DISCUSIÓN – Análisis discriminante
Modelo retiene únicamente a PRN/INLF y PCA
n = 22
PRN
INLF
n = 26
PRN
INLFPRN/INLF
n = 23
PCA
PRN/INLF
n = 24
PCA
Eficacia del modelo:
• Entrenamiento 100% (n = 13)
n = 22
SVL
• Validación cruzada 100% (n = 43)
n = 24
Ecuaciones de clasificación:
n = 10
n = 21
D1SA
S. mitsukurii: EC = -349,37D1SL
+ 139,71 (PRN/INLF) + 20,26 (PCA)
D1H
8 cubensis:
n = 25 n = S.
EC = -393,79 + 70,27 (PRN/INLF) + 24,21 (PCA)
D1H
– D1l
D1ASR
= D1SA – D1SL
D1l
CONCLUSIONES Y PERSPECTIVAS
Conclusiones
• Es efectivamente posible diferenciar ambas especies (S. mitsukurii y S.
cubenis) en base a medidas morfológicas clave y caracteres visuales
(validado por técnicas moleculares).
Lineamientos futuros
• Continuar con el procesamiento de ejemplares (mejor cobertura del rango
de tallas para ambas especies y sexos).
• Dieta (C.E. + AIE).
• Madurez y reproducción sexual.
• Edad y crecimiento (vétebras y espinas dorsales).
• Relaciones Talla-Peso y Talla-Talla.
MUCHAS GRACIAS!
S. mitsukurii
S. cubensis
n = 19
n = 18
n=5
ED = 9,33 + 14,58(PRN/INLF) - 0,83(PCA)
n=7