For in-vitro diagnostic use Product Code: FA004.M

Transcripción

on disposal of reagent, flush with a large volume of water to
prevent azide build up.
5
SHEEP ANTI-HUMAN IgG (γ-chain) AFF
FITC
(Monkey adsorbed) (Prediluted)
For in-vitro diagnostic use
Product Code: FA004.M
Product manufactured by:
The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, U.K.
www.bindingsite.co.uk
Telephone : +44 (0)121 436 1000
Fax : +44 (0)121 430 7061
e-mail: [email protected]
1
INTENDED USE
This product is intended to be used on The Binding Site’s
(TBS) Monkey tissue slides to assist in the qualitative
determination of autoantibodies in patient serum by indirect
immunofluorescence. The identification of such autoantibodies aids in the diagnosis of autoimmune diseases.
Suitability for use in other IFA combinations has not been
assessed but use in such assays should not necessarily be
excluded.
2
PRINCIPLE
3
REAGENT
Antisera is prepared by immunising sheep with IgG purified
from human myeloma serum. The resulting antiserum is
then delipidated and if necessary, adsorbed to monospecificity by use of solid-phase adsorbants. Following
adsorption, the antisera is affinity purified by binding to the
specific antigen attached to an inert matrix and eluted with
chaotropic buffers. The antiserum is then conjugated with
fluorescein
isothiocyanate
(FITC)
and
unreacted
fluorochrome is isolated by gel filtration. This product is
diluted to an optimal concentration for use in indirect
immunofluorescence. Preservatives are added and the
product 0.2µm filtered.
4
This product should be stored at 2-8°C. DO NOT FREEZE.
It is stable until the expiry date given on the label. Slight
precipitation can occur on storage which may be removed
by centrifugation and should not affect the performance
characteristics.
6
METHODOLOGY
6.1
Materials Supplied
6.1.1
6.1.2
5mL Anti Human IgG AFF FITC (Monkey Ads)
(Prediluted conjugate).
Product insert.
6.2
Additional materials required
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
Substrate slides.
Phosphate buffered saline (PBS).
Humid chamber for incubation steps.
Negative and positive control sera.
Mounting media and coverslips.
Fluorescence microscope with 495nm exciter filter
and 515nm barrier filter.
6.3
Test Procedure (Refer to appropriate slide insert
for full details)
6.3.1
Add one drop of FA004.M to each well. Do not
leave wells uncovered for longer than 15 seconds.
7
An indirect immunofluorescence technique is used where
patient samples and appropriate controls are incubated with
substrate tissue. The unreacted antibodies are washed off
and then the conjugate is applied. Unbound conjugate is
washed off as before. Slides are viewed with a fluorescence
microscope and positive samples are observed as apple
green fluorescence which corresponds to the antibody of
interest (ref 1 and 2).
STORAGE AND STABILITY
LIMITATIONS
The light source, filters and optics of different makes of
fluorescence microscopes will influence the sensitivity of the
assay. The performance of the microscope is significantly
influenced by correct maintenance especially centering of
the mercury vapour lamp and changing of the lamp after the
recommended period of time.
8
REFERENCES
1.
Bradwell A.R., et al (1997). Atlas of Autoantibody
Patterns. Pub: The Binding Site Ltd., Birmingham
UK.
2.
Bradwell A.R., et al (1999). Advanced Atlas of
Autoantibody Patterns. Pub: The Binding Site Ltd.,
Birmingham UK.
CAUTION
This product should only be used by suitably trained
persons for the purposes stated. Adherence to the given
procedure is recommended.
This product contains sodium azide and must be handled
with caution – do not ingest or allow contact with skin or
mucous membranes. If contact does occur wash with a
large volume of water and seek medical advice. Explosive
metal azides may be formed with lead and copper plumbing;
Insert Code: HIN094, Version: 14th September 2007, Page 1 of 6
SCHAF ANTI-HUMAN-IgG-(γ-Kette)AFF-FITC-KONJUGAT
(Affen-adsorbiert) (Vorverdünnt)
Dieses Produkt enthält Natriumazid und muss mit den
entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen behandelt werden.
Verschlucken sowie Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten
vermeiden. Nach Kontakt Hautstelle mit viel Wasser
abspülen und ärztlichen Rat einholen.
Natriumazid kann mit Blei- oder Kupferrohren explosive
Metallazide bilden. Nach der Entsorgung mit ausreichender
Menge Wasser nachspülen um Azidablagerungen zu
vermeiden.
Zur in vitro Diagnostik
Bestell-Nr.: FA004.M
In England hergestellt von:
The Binding Site Ltd, P.O. Box 11712, Birmingham B14 4ZB, U.K.
Vertrieb in Deutschland und Österreich durch:
The Binding Site GmbH, Robert-Bosch-Straße 2A
D-68723 Schwetzingen, Deutschland
Telefon: +49 (0) 6202 92 62 0
Fax: +49 (0) 6202 92 62 222
1
VERWENDUNGSZWECK
Dieses Produkt kann auf Affengewebe-Gefrierschnitten von
The Binding Site (TBS) verwendet werden. Es dient zum
qualitativen Nachweis von Autoantikörpern in Patientenseren durch die indirekte Immunfloreszenz. Die
Identifikation dieser Autoantikörper unterstützt die Diagnose
von Autoimmun-Erkrankungen. Die Verwendung dieses
Produktes zusammen mit anderen Substraten wurde nicht
geprüft, ist aber nicht zwangsläufig ausgeschlossen.
2
TESTPRINZIP
Der Test beruht auf der indirekten ImmunfluoreszenzTechnik. Das Patientenserum und entsprechende Kontrollen
werden mit dem Substrat inkubiert. In einem Waschschritt
werden die nicht reagierenden Antikörper entfernt und dann
das Fluoreszein-Konjugat zugegeben. Überschüssiges
Konjugat wird durch Waschen entfernt. Die Beurteilung der
Objektträger erfolgt unter dem Fluoreszenzmikroskop.
Positive Proben zeigen im Bereich der Bindungsstellen
zwischen dem Substrat und den Antikörpern eine
apfelgrüne Fluoreszenz (ref. 1 und 2).
3
REAGENZIEN
Das Antiserum wird durch Immunisierung von Schafen mit
Human-IgG, das aus humanen Myelomseren gereinigt
wurde, gewonnen. Das Antiserum wird delipidisiert und bei
Bedarf durch Festphasen-Adsorption bis zur Monospezifität
gereinigt. Nach der Adsorption wird das Antiserum affinitätsgereinigt, dazu wird das spezifische Antigen an eine inerte
Matrix gebunden und anschließend mit einem chaotropen
Puffer eluiert. Anschließend wird das Antiserum mit
Fluoreszein-Isothiocyanat konjugiert und das ungebundene
Fluorochrom durch Gelfiltration entfernt. Das Reaktionsprodukt (Konjugat) wird optimal für die Verwendung in der
indirekten Immunfluoreszenz verdünnt, mit Konservierungsstoffen versetzt und durch einen 0,2µm Fliter filtriert.
4
5
LAGERUNG UND STABILITÄT
Dieses Produkt bei 2-8°C lagern. NICHT EINFRIEREN. Es
ist so bis zum auf dem Etikett angegebenen Datum haltbar.
Während der Lagerung kann eine leichte Präzipitatbildung
auftreten. Das Präzipitat durch Zentrifugation entfernen, die
Produktqualität wird dadurch nicht beeinträchtigt.
6
TESTDURCHFÜHRUNG
6.1
Gelieferte Materialien
6.1.1
6.1.2
(Prediluted conjugate). (Vorverdünntes Konjugat).
Arbeitsanleitung.
6.2
Zusätzlich benötigte Materialien
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
Substrat-Objektträger.
Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (PBS-Puffer).
Feuchte Kammer für die Inkubationen.
Negativ- und Positivkontrollseren.
Eindeckmedium und Deckgläschen.
Fluoreszenzmikroskop mit einem 495nm Anregungsfilter und 515nm Barrierefilter.
6.3
Testdurchführung (Detailangaben siehe spezifische Arbeitsanleitung).
6.3.1
Je einen Tropfen FA004.M auf jede Auftragstelle
geben. Auftragsstellen nicht länger als 15
Sekunden unbedeckt lassen.
7
GRENZEN DES TESTS
Die im Fluoreszenzmikroskop verwendete Lichtquelle, Filter
und Optik beeinflussen die Sensitivität des Tests. Die
Qualität des Mikroskops wird maßgeblich durch die korrekte
Wartung, speziell durch Zentrieren der Quecksilberlampe
und deren Austausch nach der empfohlenen Brenndauer,
beeinflusst.
8
REFERENZEN
1.
UK.
2.
Birmingham UK.
WARNUNGEN
Dieses Produkt sollte nur von entsprechend geschultem
Laborpersonal verwendet werden. Die Einhaltung der
Arbeitsvorschrift wird empfohlen.
CONJUGUE AFF FITC DE MOUTON
ANTI IgG (chaîne gamma) HUMAINES
SPECIAL LAMES DE SINGE
(prédilué)
Pour usage in vitro diagnostique
Références : FA004.M
Produit fabriqué en Angleterre par la société :
The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, U.K.
Distribués en France par la société :
The Binding Site, 14 rue des Glairaux, BP226, 38522 Saint-Egrève Cedex.
Téléphone : 04.38.02.19.19
Fax : 04.38.02.19.20
e-mail : [email protected]
1
UTILISATION
Ce conjugué doit être utilisé en conjonction avec les lames
de tissus de singe The Binding Site pour la détermination
qualitative des autoanticorps dans le sérum humain en
immunofluorescence indirecte. L’identification de tels
anticorps apporte une aide dans le diagnostic de maladies
autoimmunes. L’utilisation de ces réactifs pour d’autres tests
en immunofluorescence indirecte n’a pas été évaluée mais
ne doit pas être nécessairement exclue.
2
PRINCIPE
Une technique d’immunofluorescence indirecte est utilisée
lorque les sérums et les contrôles appropriés sont incubés
avec les lames de tissus. Les anticorps non fixés sont
éliminés par lavage et le conjugué est déposé. Le conjugué
non lié est également éliminé par lavage. Les lames sont
ensuite observées sous microscope. Les sérums positifs
présentent une fluorescence verte qui correspond à
l’anticorps recherché (réf. 1 et 2).
3
5
STOCKAGE ET STABILITE
Ces produits doivent être stockés à 2-8°C dès leur
réception, ne pas congeler. Ils sont stables jusqu’à la date
de péremption indiquée sur l’étiquette du flacon. De faibles
précipitations peuvent avoir lieu lors du stockage qui
peuvent être éliminées par centrifugation, ceci n’affecte en
rien les performances des réactifs.
6
METHODOLOGIE
6.1
Matériel fourni
6.1.1
6.1.2
(Prediluted conjugate) (Conjugué prédilué).
Fiche technique.
6.2
Matériel nécessaire et non fourni
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
Lames.
Tampon PBS.
Chambre humide (pour les étapes d’incubation).
Contrôles négatif et positif.
Milieu de montage et lamelles.
Microscope avec filtre excitant à 495nm et filtre
barrière à 515nm.
6.3
Procédure (cf. fiche technique des lames)
6.3.1
Ajouter une goutte de FA004.M à chaque puits. Ne
pas laisser les puits non couverts plus de 15
secondes.
7
LIMITES
La source lumineuse, les filtres et les optiques des
microscopes influent sur la sensibilité du test. Les
performances du microscope dépendent de la qualité de la
maintenance (changement de la lampe).
8
REACTIF
L’antisérum est préparé en immunisant un mouton avec des
IgG purifiées à partir de sérum humain de myélome.
L’antisérum qui en résulte est délipidé et si nécessaire
adsorbé de façon monospécifique en utilisant des
adsorbants en phase solide. Après l’adsorption, l’antisérum
est purifié par affinité par liaison de l’antigène spécifique à
une matrice inerte, il est élué avec des tampons
chaotropiques. L’antisérum est ensuite conjugué à
l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC) et le fluorochrome
non fixé est isolé par filtration sur gel. Le conjugué est dilué
à une concentration optimale pour être utilisé en
immunofluorescence indirecte. Des conservateurs sont
ajoutés et le produit est filtré à 0,2µm.
4
avec la peau ou les muqueuses. En cas de contact, laver à
grande eau et consulter un médecin. Des azides de métaux
explosifs peuvent se former avec le cuivre et le plomb, laver
à grande eau les récipients afin d’éviter la formation des
azides de métaux.
1.
2.
BIBLIOGRAPHIE
Patterns. Pub : The Binding Site Ltd., Birmingham
UK.
Autoantibody Patterns. Pub : The Binding Site Ltd.,
Birmingham UK.
PRECAUTIONS
Ce produit doit être manipulé par des personnes
compétentes en techniques de laboratoire. Il est
recommandé de suivre scrupuleusement la procédure
d’utilisation.
Ce réactif contient de l’azide de sodium, il doit donc être
utilisé avec précaution. Ne pas ingérer ou mettre en contact
ANTICUERPO OVINO ANTI-IgG
HUMANA (cadena-γ) AFF FITC
(adsorbido de mono) (conjugado
prediluido)
Spanish
Para uso diagnóstico in vitro
Código de producto: FA004.M
Producto fabricado por:
The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, Reino Unido.
The Binding Site sucursal en España,
C/ Balmes 243 4º 3ª, 08006 Barcelona
Teléfono 902027750
Fax: 902027752
web: www.bindingsite.es
1
Este producto sólo debe ser utilizado por personal
debidamente formado para los fines mencionados. Se
recomienda seguir el procedimiento descrito a continuación.
Este producto contiene azida sódica y debe manejarse con
cuidado. No ingerir; evitar que entre en contacto con la piel
o las membranas mucosas. En caso de contacto, lavar la
zona con agua abundante y consultar a un médico. Pueden
formarse azidas metálicas explosivas con el cobre o el
plomo de las tuberías. Al eliminar el reactivo, lavar los
recipientes con agua abundante para evitar la acumulación
de azida en los desagües.
5
6
USO PREVISTO
PRINCIPIO
Se utiliza una técnica de inmunofluorescencia indirecta en
la que las muestras de paciente y los controles
correspondientes se incuban con tejido del sustrato. Los
anticuerpos no reactivos se eliminan mediante lavado y, a
continuación, se aplica el conjugado. El conjugado no unido
se elimina mediante lavado como se ha hecho
anteriormente. Los portaobjetos se examinan con un
microscopio de fluorescencia. Las muestras positivas
producen una fluorescencia de color verde claro que
corresponde al anticuerpo en cuestión (ref. 1 y 2).
3
PRECAUCIÓN
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Este producto debe almacenarse a 2-8°C. NO CONGELAR.
Es estable hasta la fecha de caducidad que figura en la
etiqueta. Puede producirse una ligera precipitación durante
el almacenamiento que puede eliminarse mediante
centrifugación. Ésta no debería afectar a las características
de rendimiento.
Este producto está diseñado ser utilizado en los
portaobjetos de tejido de mono de The Binding Site (TBS)
para ayudar a la determinación cualitativa de
autoanticuerpos en suero de paciente mediante inmunofluorescencia indirecta. La identificación de estos
autoanticuerpos contribuye al diagnóstico de enfermedades
autoinmunes. No se ha evaluado la idoneidad del uso con
otras combinaciones de IFA, aunque no debe excluirse en
este tipo de ensayos.
2
4
6.1
Materiales suministrados
6.1.1
6.1.2
5 ml Anti Human IgG AFF FITC (Monkey ads)
(anti-IgG humano AFF FITC (adsorbido de mono),
conjugado prediluido).
Folleto de instrucciones.
6.2
Materiales adicionales necesarios
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
Portaobjetos de sustrato.
Solución salina tamponada con fosfato (PBS).
Cámara húmeda para las etapas de incubación.
Sueros de control positivos y negativos.
Medio de montaje y cubreobjetos.
Microscopio de fluorescencia con un filtro de
excitación de 495nm y un filtro barrera de 515nm.
6.3
Procedimiento de ensayo. Consultar el folleto del
portaobjetos correspondiente para obtener más
detalles.
6.3.1
Añadir una gota de FA004.M a cada pocillo. No
dejar los pocillos descubiertos durante más de 15
segundos.
REACTIVO
7
Los antisueros se preparan mediante la inmunización de
oveja con IgG purificada de suero de mieloma humano. El
antisuero resultante se deslipida y, si es necesario, se
adsorbe de forma monospecífica mediante material
adsorbente en fase sólida. Tras la adsorción, los antisueros
se purifican por afinidad mediante el enlace al antígeno
específico unido a una matriz inerte y se eluyen con
tampones caotrópicos. A continuación, el antisuero se
conjuga con isotiocianato de fluoresceína (FITC) y el
fluorocromo que no ha reaccionado se aísla por filtración en
gel. Este producto se diluye a una concentración óptima
para utilizarse en inmunofluorescencia indirecta. Se añaden
conservantes al producto y se pasa a través de un filtro de
0,2µm.
METODOLOGÍA
LIMITACIONES
La calidad de la fuente de luz, los filtros y la óptica de los
microscopios de fluorescencia influirán en la sensibilidad del
ensayo. El funcionamiento del microscopio depende de un
correcto mantenimiento, especialmente del enfoque de la
lámpara de vapor de mercurio y el reemplazo de la misma
una vez transcurrido el período de tiempo recomendado.
8
1.
2.
REFERENCIAS
Patterns. Pub : The Binding Site Ltd., Birmingham
UK.
Autoantibody Patterns. Pub : The Binding Site Ltd.,
Birmingham UK.
CONJUGADO DE IgG ANTI-HUMANA
DE CARNEIRO (cadeia- γ) AFF
com FITC (Adsorvido de macaco)
(Pré-diluído)
um contacto com o produto, deve-se lavar abundantemente
com água e consultar um médico. Em contacto com
canalizações de chumbo ou cobre, podem-se formar sais
explosivos; para evitar que tal aconteça, fazer correr
abundante quantidade de água aquando da inutilização dos
reagentes.
5
Portuguese
Para diagnóstico in vitro
Código do Produto: FA004.M
Produto fabricado por:
The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham B14 4ZB, U.K..
Telefone: +44 (0)121 436 1000
Fax: +44 (0)121 430 7061
1
PRINCIPIO
Quando é utilizada a técnica de imunofluorescência
indirecta, as amostras e os controlos são incubadas com
substrato de tecido. Os anticorpos que não reagiram são
removidos através de lavagem e é aplicado o conjugado.
Em seguida, as lâminas são observadas ao microscópio de
fluorescência. A positividade das lâminas manifesta-se
através de uma fluorescência; são observadas amostras
positivas onde a “verde-maçâ” que corresponde ao
anticorpo relevante (ref. 1 e 2).
3
REAGENTES
O antisoro é obtido através da imunização do carneiro com
o imunogénio referido acima. O antisoro que resulta daí é
adsorvido para o tornar monoespecifico e depois é
purificado para lhe conferir uma elevada afinidade. afinidade
pela ligação ao antigénio específico a uma matriz inerte. O
antisoro é então conjugado com FITC. O Fluorocromo que
não reagiu é removido através de filtração por gel. A
diluição deste produto é optimizada para ser utilizado em
imunofluorescência indirecta. São adicionados conservantes
e o produto é filtrado (0,2µm).
4
Este produto deve ser conservado entre 2-8°C. NÃO
CONGELAR. Permanece estável até a data de validade
indicada no rótulo. Pode ocorrer ligeira precipitação, esta
pode ser removida através de centrifugação, o que não
afecta as características da performance do produto.
6
METODOLOGIA
6.1
Material Fornecido
6.1.1
6.1.2
5mL Anti Human IgG AFF FITC (Conjugado Prédiluído) (Adsorvido de macaco).
Folheto de Instruções.
6.2
Material Adicional Necessário
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
Lâminas com Substrato.
Tampão (PBS).
Câmara húmida para as etapas de incubação.
Soro controlo negativo e positivo.
Meio de Montagem e lamelas.
Microscópio Fluorescente com filtro de excitação
de 495nm e filtro de barreira de 515nm.
6.3
Procedimento do Teste (Consultar folheto de
instruções das lâminas para mais detalhes).
6.3.1
Adicionar uma gota de FA004.M a cada poço. Não
deixar os poços descobertos por mais de 15
segundos.
UTILIZAÇÃO
Este conjugado deve ser utilizado com lâminas contendo
tecido de macaco da The Binding Site como auxiliar na
determinação qualitativa de autoanticorpos no soro de
doentes por imunofluorescência indirecta. A identificação
destes autoanticorpos vai auxiliar o diagnóstico de doenças
autoimunes. A utilização com outros métodos de I.F. não foi
ainda verificada. Contudo não deve ser excluída a utilização
neste tipo de testes.
2
CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE
7
LIMITAÇÕES
A fonte emissora de luz, filtros e ópticas de diferentes tipos
de microscópicos fluorescentes podem influenciar a
sensibilidade do teste. A performance do microscópio é
influenciada de forma significativa pela manutenção
correcta do microscópio principalmente no que diz respeito
à lâmpada de vapor de mercúrio e mudar a mesma após a
duração recomendada.
8
REFERENCIAS
1.
UK.
2.
Birmingham UK.
PRECAUÇÕES
Deve proceder-se a um manuseamento e métodos de
inutilização adequados para todo o material potencialmente
infectado e apenas a pessoal treinado adequadamente
nestes métodos deverá ser permitida a execução destes
procedimentos. Os componentes do kit contêm azida de
sódio como conservante, pelo que terão que ser
manuseados com precaução – não ingerir nem permitir o
contacto com a pele ou membranas mucosas. Se ocorrer
4
ANTI-IgG UMANE DI PECORA (catena-γ)
AFF FITC (Prediluito) (adsorbito con
tessuto di scimmia)
Italian
Per uso diagnostico in vitro
Codice Prodotto: FA004.M
Prodotto da:
The Binding Site Ltd, PO Box 11712, Birmingham, B14 4ZB, U.K.
PRINCIPIO
Viene impiegata una tecnica di immunofluorescenza
indiretta in cui i campioni dei pazienti e i relativi controlli
sono incubati con i tessuti. Gli anticorpi non specifici sono
eliminati con il lavaggio, quindi viene applicato un coniugato
fluoresceinato. I vetrini vengono poi lavati come prima per
eliminare il coniugato non legato. Per la lettura dei vetrini si
utilizza un microscopio a fluorescenza. I campioni positivi
presentano una fluorescenza di colore verde brillante che
corrisponde all’autoanticorpo che si vuole determinare (rif. 1
e 2).
3
5
6
INDICAZIONI
Questo prodotto è utilizzato sui vetrini The Binding Site
(TBS) di tessuto di scimmia come prodotto complementare
nella determinazione qualitativa degli autoanticorpi nel
siero umano, mediante immunofluorescenza indiretta.
L’identificazione di tali autoanticorpi costituisce un sussidio
nella diagnosi delle malattie autoimmuni. L’idoneità all’uso in
altre combinazioni IFA non è stata valutata ma l’utilizzo in
tali dosaggi non deve essere necessariamente escluso.
2
Il presente prodotto deve essere utilizzato da personale
specializzato. Si raccomanda di osservare la procedura del
test alla lettera.
Il prodotto contiene sodio azide e deve essere trattato con
cautela – non ingerire né permettere il contatto con la pelle
o le mucose. In caso di contatto, lavare con molta acqua e
rivolgersi al medico. Azotidrati metallici esplosivi si possono
formare con il rame e il piombo; per evitare l’accumulo di tali
composti, far scorrere abbondante acqua sui reagenti
eliminati.
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Il prodotto deve essere conservato a 2-8°C ed è stabile fino
alla data di scadenza indicata sull’etichetta. NON
CONGELARE. In fase di conservazione si potrà osservare
una
lieve
precipitazione
eliminabile
mediante
centrifugazione, che non influirà sulle caratteristiche del
dosaggio.
Telefono: +44 (0)121 436 1000
Fax : +44 (0)121 430 7061
1
PRECAUZIONI
6.1
Materiali forniti
6.1.1
6.1.2
(Prediluted Conjugate) (Anti-IgG umane AFF FITC
(adsorbite con tessuto di scimmia), coniugato
prediluito).
Scheda tecnica.
6.2
Materiale necessario ma non fornito
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
6.2.6
Vetrini con substrato.
Tampone PBS.
Camera umida per le fasi d’incubazione.
Sieri di controllo positivi e negativi.
Soluzioni di montaggio e vetrini coprioggetti.
Microscopio a fluorescenza con filtro a 495nm
(exciter) e filtro a 515nm (barrier).
6.3
Procedura (Far riferimento alla metodica del
vetrino per maggiori dettagli).
6.3.1
Aggiungere una goccia di FA004.M in ciascun
pozzetto. Non lasciare i pozzetti scoperti per oltre
15 secondi.
REAGENTE
L’antisiero viene preparato immunizzando le pecore con IgG
purificate da siero di mieloma umano. L’antisiero che ne
risulta viene poi delipidato e se necessario adsorbito a
monospecificità mediante fasi solide adsorbenti. Dopo
l’adsorbimento, l’antisiero viene purificato per affinità
mediante un legame con l’antigene specifico adeso ad una
matrice inerte ed eluito con tamponi caotropici. L’antisiero
viene poi coniugato con isotiocianato di fluoresceina (FITC)
ed il fluorocromo non legato viene isolato mediante gelfiltrazione. Il presente prodotto è stato diluito ad una
concentrazione ottimale per l’utilizzo in immunofluorescenza
indiretta. Vengono aggiunti infine dei conservanti ed il
prodotto viene filtrato a 0,2µm.
METODOLOGIA
7
LIMITI DELLA PROCEDURA
La fonte luminosa, i filtri e l’ottica dei microscopi a
fluorescenza di diverse marche influiranno sulla sensibilità
del kit. La performance del microscopio è influenzata
notevolmente da una corretta manutenzione, e in particolare
dalla centratura e dalla sostituzione della lampada a vapori
di mercurio dopo il periodo di tempo consigliato.
8
BIBLIOGRAFIA
1.
Bradwell A R et al (1997). Atlas of autoantibody
patterns on tissues. Publ. The Binding Site Ltd.,
Birmingham UK.
2.
Bradwell A R et al (1999). Advanced atlas of
autoantibody patterns. Publ. The Binding Site Ltd.,
Birmingham UK.

For in-vitro diagnostic use Product Code: FA004.M

Transcripción

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