Servicio de banco de semen y vitrificación de ovocitos
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Servicio de banco de semen y vitrificación de ovocitos
BANCO DE SEMEN VITRIFICACIÓN SUGERENCIAS… JAVIER OLTRA CHICOTE TECNICAS TRA Transferencia Vitrificacion FIV Congelación Inseminación DGP PICSI embriones Captación CONGELAR SEMEN Medios cultivo Fragmentación ADN ICSI Hatching IMSI MACS PCR sexado Vitrificación ovocitos embryoscope Servicio integrado en las T.R.A. que permite conservar muestras de semen a lo largo del tiempo, manteniendo parte de la viabilidad inicial, para ser usado en el momento que se necesite. Donantes Factor masculino(azoospermia),mujer sola.. Muestras valiosas Obtención traumática (biopsia,aspiración..) Pérdida fertilidad Tratamiento quimioterapia,radioterapia.. Situaciones profesionales Ausencia el dia punción.. ORGANIZACIÓN BANCO DE SEMEN Recursos humanos: • Médico experto en Reproducción Humana. • Biólogo formación y experiencia en criopreservación de semen. • Personal de enfermería. • Personal sanitario auxiliar. Áreas: • Área exclusiva para la recogida de semen. • Área de almacenamiento y conservación de las muestras. • Área de almacenamiento y archivo de datos. Recursos materiales: • Disponibilidad de nitrógeno líquido. • Microscopio, centrífuga. • Recipientes criogénicos. FUNCI0NAMIENTO BANCO SEMEN 1. Captación de donantes. 2. Recepción de donantes. 3. Selección de donantes. 4. Firma del consentimiento informado. 5. Uso de gametos masculinos para la donación. FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN 1. Captación de donantes. • Folletos publicitarios. • Recomendación personal directa de otro donante. • Anuncios y artículos relacionados en prensa y radio • Universidades y polideportivos. 2. Recepción de donantes. 3. Selección de donantes. 4. Firma del consentimiento informado. 5. Uso de gametos masculinos para la donación. FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN 1. Captación de donantes. 2. Recepción de donantes. • Pruebas a las que van a ser sometidos. • Frecuencia con la que deben acudir al Banco. • Controles serológicos periódicos. • Necesidad de periodos de abstinencia de 3-5 días. • Método de recogida de la muestra. 3. Selección de donantes. 4. Firma del consentimiento informado. 5. Uso de gametos masculinos para la donación. FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN 1. Captación de donantes. 2. Recepción de donantes. 3. Selección de donantes. Historia clínica y personal del donante. Seminograma completo. Analítica sanguínea, Cariotipo… Viabilidad tras congelación/descongelación. 4. Firma del consentimiento informado. 5. Uso de gametos masculinos para la donación. FUNCIÓNAMIENTO BANCO SEMEN 1. Captación de donantes. 2. Recepción de donantes. 3. Selección de donantes. 4. Firma del consentimiento informado. 5. Uso de gametos masculinos para la donación. ÉXITO-FRACASO SELECCIÓN DE DONANTES CRITERIOS SELECCIÓN ÉXITO-FRACASO PROPIOS DE CADA CENTRO Recuento spz/movilidad Viabilidad congelación/descongelación Muestras en fresco 70 -80x106 spz/ml y una motilidad del 40%(A+B) 30-40% NO SOBREVIVE CONGELACIÒN Para superar prueba congelación/descongelación se debe recuperar aprox. el 50% de los espermatozoides móviles progresivos iniciales. Mayoría de candidatos que no satisfacen los requisitos demandados. La mayoría debido a una pobre calidad seminal y al deterioro de ésta tras el proceso de congelación/descongelación (Murray y Golombok, 2000). CONGELACIÓN La congelación de semen se define como el tratamiento empleado para la conservación y el mantenimiento de espermatozoides a temperaturas de –196ºC. MÉTODO DE CONGELACIÓN 1. Dilución en crioprotector: Proporción variable. 2. Envasado de la mezcla en pajuelas, criotubos, etc. 3. Congelación: • 20-45 minutos a 4ºC (nevera). • 30 minutos en vapores de nitrógeno (1-10 cm). • Nitrógeno líquido. 4. Mantenimiento a bajas temperaturas (bancos de nitrógeno). 5. Descongelación: incubar a 37ºC durante 1-10 minutos y comprobar la calidad de la muestra. CONGELACIÓN II Crioprotector Tª ambiente Diluir gota a gota/cargar pajuelas 0 0 Almacenar bombona cuarentena Sellar pajuelas 30 min vapores Nitrógeno 30-40 min CONGELACIÓN III TANQUES DE CONGELACION • Tamaño variable. • Mantenimiento temperatura. • Protegido con aislante térmico. • Resistente y robusto. • Organización interna clara y fácil acceso. SISTEMA MARGARITA MEDIDAS DE SEGURIDAD • Evitar riesgo de anoxia: uso de medidores de O2 • Evitar quemaduras por salpicaduras/contacto DESCONGELACIÓN SACAR DEL TANQUE BAÑO 1 MIN A 37ºC CAPACITACIÓN SEMINAL GRADIENTE SIEMPRE 37ºC VALORACION MUESTRA VITRIFICACIÓN La vitrificación es una técnica para la congelación ultrarrápida de células con altas concentraciones de crioprotectores para la posterior inmersión directa de las muestras en nitrógeno líquido a -196ºC. El medio acuoso intracelular adquiere una viscosidad evitando la formación de cristales de hielo que dañan estructuras celulares Vc Ve Formación de cristales de hielo Vc Ve Vitrificación El uso de grandes concentraciones de crioprotectores nos proporciona por una lado concentraciones altas que reducen la velocidad de cristalización y por otro una mejora en la difusión de los mismos. Además se utilizan volúmenes mínimos y tiempos cortos para paliar los efectos nocivos de los crioprotectores. La vitrificación aplicada a ovocitos ha resultado solventar los principales problemas que presentaba su criopreservación. Relación S/V muy baja, eleva riesgo de cristalización Baja criotolerancia Difícil distribución de los crioprotectores Desorganización del huso meiótico Fase equilibrado vitrificación el huso no se ve alterado, el desmoronamiento que sufre la tubulina debido a la bajada de temperatura se ve paliado por la deshidratación que se que aumenta su concentración yy produce VITRIFICACIÓN II La vitrificación aplicada a ovocitos ha resultado solventar los principales problemas que presentaba su criopreservación . PROBLEMAS Relación S/V muy baja, eleva riesgo de cristalización Baja criotolerancia Difícil distribución de los crioprotectores Desorganización del huso meiótico SOLUCION Fase equilibrado vitrificación el huso no se ve alterado, el desmoronamiento que sufre la tubulina debido a la bajada de temperatura se ve paliado por la deshidratación que se produce que aumenta su concentración y la polimerización del huso. SISTEMAS DE ALMACENAMIENTO CERRADO CRYOTIP Utiliza Mayor Volumen(toxicidad) ABIERTO CRYOTOP Utiliza Menor Volumen Mayor tasa Enfriamiento Menor Exposición Medio equilibrado Aúna calentamiento/ intercambio medios SISTEMAS DE ALMACENAMIENTO CERRADO CRYOTIP Utiliza Mayor Volumen(toxicidad) ABIERTO CRYOTOP Utiliza Menor Volumen Mayor tasa Enfriamiento Menor Exposición Medio equilibrado Auna calentamiento/ intercambio medios VITRIFICACIÓN DESVITRIFICACIÓN ICSI INCUBAR G-IVF 1.30h – 2h 2PN ¿¿QUE ASPECTOS SE PODRIAN MEJORAR?? I N S T A L A C I O N E S EMBRIOLOGÍA LABORATORIO LABORATORIO PERSONAL……BIÓLOGOS,ENFERMERÍA,GINECOLOGOS PUNCION/TRANSFER EVITAR PERFUMES,COLONIAS MAQUILLAJES…ETC ETC… MINIMIZAR EN LO POSIBLE LA ENTRADA AL LABORATORIO NO INTRODUCIR ELEMENTOS EXTERNOS AL LABORATORIO TORRE CODA AERO LABORATORIO ANDROLOGIA Filtración y eliminación de agentes volátiles Mayor aislamiento embriología MACS Columnas generan un campo magnético producido por un soporte ferromagnético al cual se unen las células marcadas. ANEXINA V afinidad por FOSFATIDILSERINA, molécula expresada por spz APOPTOTICOS. Conjugación ANEXINA V microgotas paramagnéticas RETENCIÓN SPZ APOPTOSIS MACS microgotas paramagnéticas Anexina V INDICACIONES USO MACS Pacientes mala calidad espermática Abortos de repetición Transferencias sin gestación PERSONAL CLINICA