la inmunización con adn: ¿una nueva generación de vacunas?

la inmunización con adn: ¿una nueva generación de vacunas?

LA INMUNIZACIÓN CON ADN:
¿UNA NUEVA GENERACIÓN DE VACUNAS?
Orlando L Pardo
División Vacunas, CIGB, Apdo. 6162, c.P. 10600, Ciudad de la Habana, Cuba.
ABSTRACT
'
In the last five years, it has been foun~ !hat ~irect nucleic acid transfer into living organisms is a feasible ap- .
proach to obtain expression levels that although a-re still farfrom being of emy therapeutic value, are indeed
enough to elicit in the host a significative immune response against the protein codified by the nucleic acid .as', .
such. This methodology of immunization
has many advantages
over more conventional
ones, namely: t.q!3.., :'
need of purifying proteins is obviated, as the expression occurs in the host cells the appropriate protein p~oc}~
",
essing and conformation
are guaranteed,
and most pros of live (e.g. elicitation of an efficient cellula,rp~~, .
sponse) and subunit vaccines (e.g. high safety) are combined while most cons of both are avoided (e.g, eJ¡~i.-,
tation of an immune response against the proteins of the specific live vector used). Therefore, although mony
questions on the topic still remain unanswered, the possibility of nucleic acid vaccines becoming a new ge~eration of human vaccines belongs now to the near future.
.." ;:~..
Key words: DNA immunization, DNA vaccines, gene-transfer,
plasmid D~A. ':;:.
Blotecnologla
Aplicada
J996; 13:8 J-88
(); .'1 ;. ~ i."
y
~.
;:RESUMEN
En los últimos cinco años se ha logrado demostrar que la transferencia directa de ácidos nucleic::o~:a'org'anismos vivos genera niveles de expresión que si bien son aún de escaso valor terapéutico,' son sufldehtespara
despertar en el hospedero una respuesta inmune significativa contra la proteína codificada poi el'a'Cido nucleico en cuestión. Esta metodología de inmI;Jnización posee múltiples ventajas sobre las ya convencionales:
se obvia la necesidad de purificar proteínas, la expresión en las propias células.del hospedero garantiza una
maduración y conformación adecuadas para la proteína de interés, y se combinan muchos aspectos 'positivos
de las vacunas vivas (p.e. obtención de respuesta celular eficiente) con los de las vacunas de subunidades
(p.e. alta seguridad), evitándose además muchos de los aspectos negativos de ambas (p.e. desencadenamiento de respuesta contra los antígenos propios del vector vivo empleado). Por consiguiente, y aunque'aún
existen muchas interrogantes
abiertas al respecto, la posibilidad de que las vacunas de ácidos nucleicos se conviertan en una nueva generación de vacunas humanas pertenece ahora a un futuro no muy lejano.
Palabras claves: ADN plasmídico,
transferencia
Introducción
En enero de 1989, un grupo de científicos de la Universidad de Wisconsin (EE.UU.) dirigido por Jon
WolfT,trabajaba en la verificación de una hipótesis
elaborada pocos meses antes por el grupo de Philip
Felgner en la compañía biotecnológica Vical Inc.,
de San Diego, Califomia. La idea. en resumen, consistía en emplear los complejos eIectrostáticos que
surgen entre el ADN y determinados lípidos catiónicos, como vehículo para lograr una transfección in vivo eficiente, que rindiera niveles de expresión de cierto valor terapéutico.
Para sorpresa de todos, en los animales usados'
como controles negativos (en los que sólo se administró ADN plasmídico en solución acuosa) los
niveles de expresión del transgén en el músculo
munno eran significativos también. Una vez comprobada la reproducibilidad de semejante hallazgo,
la llamada tecnología de "transferencia directa de
ADN desnudo" recién había nacido, lo cual despertó gran interés en toda la comunidad científica
intemacional.
87
Si bien era la primera vez que se demostraba expresión in vivo mediante la administración directa
de ADN "desnudo", existían varios precedentes de
"transferencia genética directa" desde los años
ochenta, cuando la inyección inlraperitoneal de
ADN plasmídico coprecipitado con fosfato cálcico
generó expresión delectable en varios órganos murinos (1). Poco antes, un intent.o similar había
sugerido que sólo las moléculas replicativas serían
capaces de persislir suficiente tiempo en el organismo en cuestión (2), y de hecho, era conocido que
la inyección del ADN genómico de ciertos virus sí
rendía tral1sfecciones exitosas in vivo.
Asimismo, no sólo los complejos ADN lípidos,
sino también los de ADN proteínas (entre otros
sistemas más o menos sofisticados), se venían estudiando intensamente durante esos años con el objetivo común de desarrollar mi vehículo efectivo
para la transfección del ADN i1/ vivo. Pero es sólo
después.del inusitado descubrimiento dc los grupos
de WolIT y Fclgner (3), que se presta suficiclIl<:
genética,
vacunas de ADN
o Pardo
Inmunización
atención a la posibilidad de lograr dicho objelivo
sin necesidad de apelar a fonnulaciones especiales.
La presente revisión se concentra básicamente en
los estudios desencadenados a raíz del mencionado
descubrimiento, y está enfocada, como lo indica su
título, hacia el campo de las vacunas, pero también
se abordan otras aplicaciones no menos importantes
que van siendo ensayadas con esta novel tecnología
de "transferencia directa de ADN desnudo".
Estudios
iniciales
Varios estudios fueron iniciados a partir de 1990 para
dilucidar los aspectos básicos de la "transferencia di-'
recta de ADN desnudo", así como para establecer las
condiciones óptimas en las que ésta se verificaba (322, revisado en 23). Los resultados más relevantes de
estos primeros estudios pueden resumirse de If
siguiente manera:
l. Mediante la inyección directa de ADN plasmídico puro en animales se obtiene expresión importante en el tejido muscular estriado (esquelético y
cardiaco), pero apenas en otros órganos como son el
cerebro, pulmón, estómago, bazo, útero y ru1ón (5).
Esporádicamente se ha reportado expresión también
en el higado (24) y la gláJldula tiroides (25).
2. La solución a ulyectar requiere por lo general de
cierta fuerza iónica (16), por ejemplo: NaCI 0,9 %p:v,
prefiriéndose un pH cercano a la neulrnlidad, si bien la
implantación quirúrgica de precipit.1dosetanólicos del
plásmido puro también resulta efectiva (4).
3. El n!imero de fibras transfectadas, salvo en casos particulares, resulta inferior al I % del total que
compone al músculo en cuestión, pero la expresión
es detectable durante más de un w10(15), especialmente cuando se emplean promotores virales
"promiscuos" como el inmediato-temprano del citomegalovirus humano.
4. La presencia física del plásmido en el tejido
muscular, al igual que su expresión, es detectable
durwlte varios meses (15), a pesar de que la mayor
parte tiende a ser degradado rápidamente, y de que
no hay evidencias de su integración ni de su replicación en el wnbiente [posmitótico) de las libras musculares (15). La fonna superenrollada del plásmido
resulta 20-100 veces más eficiente que la lineal
(15), lo cual pudiera estar relacionado con una
mayor resistencia a la degradación o con e] mecanismo, aÚndesconocido, de entrada a la célula.
5. En muy pocos casos la inyección del plásmido
provoca infiltración de células mononucIeares a] tej ido muscular (17), Ytambién es limitado el número
de fibras dañadas por esta técnica.
6. En el modelo murino, se considera que la dosis
"saturwJte" de plásmido es inferior aSO Jlg (16), Y
si bien es recomendable inyectar durante las seo'
manas de rápido crecimiento (12), se ha verificado
expresión en casi todas las edades del animal. Entre
las especies donde inicialmente también se de-
82
con ADN
mostró expresión mediante la inyección de ADN
plasmídico se incluyen carpas, pollos, perros, gatos,
puercos, hwnsters y conejos.
7. Por último, las moléculas de ARN traJ1SCril3S
y
procesadas apropiadamente in vilro también generan expresión' detectable por esta técnica, pero
mucho más transiente que la generada por el ADN
plasmídico (3).
De todas las generalizaciones aportadas por los
estudios iniciales referidos arriba (3-23), quedaba
cIaro que la tecnología de "transferencia directa de
ADN desnudo" era una realidad que podría revolucionar los protocolos convencionales de terapia
génica, especialmente los diseñados para combatir
miopatías primarias como la distrofia muscular de
Duchelllle, entre olJ'as, y en este sentido se comenzó
a investigar (8).
I.a inmunización
con ADN
Al margen de las posibles aplicaciones terapéuticas
de la "transferencia directa de ADN desnudo",
quedaba otro campo aún sin explorar: ¿sería posible
generar una respuesta inmune en el hospedero al
transferirle genes heterólogos? ¿Cuán efectiva resultaría dicha respuesta para protegerlo contra un
patógeno específico?
En 1992, De-chu Tang y colaboradores en la
Universidad de Texas (EE.UU.), responden afirmativamente la primera de las interrogantes anteriores
al detectar anticuerpo s en ratones inoculados con
los genes de la honnona del crecimiento y/o la antitripsina-al humanas, si bien la técnica empleada
en este caso no fue la inyección intramuscular, sino
la proyección intradérmica de micra partículas de
oro recubiertas superficialmente con los plásmidos
en cuestión (26). Esta variante de administración ill
vivo del ADN plasmídico será abordada con algún
detalle más adelante. En el mismo reporte (26), se
notó una evidente respuesta secundaria al inmunizar más de una vez los animales, pudiéndose detectar los wlticuerpos durante al menos cinco meses.
A partir de entonces, numerosos grupos científicos interesados en generar inmunidad protectora
contra determinados patógenos (especialmente intracelulares), decidieron ensayar la inmunización
con ADN para detenninar si las respuestas inmunes
obtenidas mediante esta técnica tenían algún significado biológico (revisado en 27-32). De ser así,
podrían compararse los resultados de esta incipiente tecnología con los alcanzados mediante las ya
convencionales (inmunización con proteínas puras,
microorganismos inactivados o atenuados, etc.).
Un patógeno en el que se comenzó a trabajar con
gran intensidad fue el virus de la influenza humana
(33-43, revisado en 44) empleando como modelos
animales ratones, pollos, y más recientemente,
hurones.
Biolecnología
Aplicada
1996; Vol. 13, No. 2
Inmunización
o Pardo
Los resultados positivos obtenidos han superado
con toda s~guridad cualquier vaticinio preliminar.
En el mode1o-.murino,en varios casos se generaron
títulos discretos de anticuerpos.contra la hemaglutinina (HA) y la nucleocápsida (NP), los que resultarOn capaces de inhibir la hemaglutinación viral e
incluso neutralizar el virus in vitro. Se generó,
además, respuesta citotóxica de amplio espectro
contra NP, la cual fue detectable aún al año de la inmunización (38, 42). Pero lo que resulta más importante: en dependencia de la dosis de ADN y la vía
de inmunización empleada, hasta un 95 % de los ratones inmunizado s quedaron protegidos contra UIJ
reto letal del virus de la influenza (33-35, 40).
Los estudios realizados con este ortomixovirus no
sólo demuestran que las vacwlas de ADN resultan de
hecho efectivas, sino que han modificado en gran
medida los conocimientos iniciales ya mencionados
sobre "la transferencia directa de ADN desnudo".
Por ejemplo, además de la vía intramuscular de
inmunización, la intravenosa (35) y la intradérmica
(35,42) también generan respuestas inmunes importantes. Asimismo, en ratones la dosis de ADN
plasmídico puede ser tan poca como I J.1g(40), Ysi
se emplea la variante de los microproyectiles in- .
tradénnicos, mucho menor aún (35).
Otro importante patógeno abordado por la imnunización con ADN es el virus de la imnunodeficiencia humana (VIIi-I) (45-53). En este caso, se han
obtenido anticuerpos contra epítopes relevantes de
las glicoproteínas gp 120 Y gp4 I en ratones y primates no humanos. Estos anticuerpos neutralizan ill
vitro al virus, inhiben la fonnación de sincisio por
el mismo, e interfieren parcialmente la unión de
gpl20 con su receptor celular (45, 46).
Además, también se genera respuesta citotóxica
contra las proteínas gpl60 y gpl20 de este
retrovirus, la cual tiende a anteceder la aparición de
los anticuerpo s (47), Y resulta suficiente para proteger a más del 90 % de los ratones imnwlizados de
un reto letal con células tumorales transfectadas
con la gpl60 del propio VIH-I (48).
Un resumen de los principales patógenos donde se
ha aplicado (con mayor o menor éxito) la inmunización con ADN, aparece en la Tabla 1; también se
han iniciado estudios con los genes de las proteínas
gB de citomegalovirus, porinas de Salmonella typhi, y
varios antígenos Oavivirales, entre otros.
Vías Alternativas
con ADN
no lo emplean "desnudo" exactamente, sino conjugado a otras moléculas. Estas estrategias persiguen,
en última instancia, lograr una transfección más eficiente in vivo, o dirigir específicamente la expresión a determinado tejido de interés que no sea
el muscular estriado.
Cañón de micropartículas
En la sección anterior se mencionó el empleo de los
microproyectiles intradénnicos, primero como reporte original de la obtención de anticuerpo s al inmunizar éon ADN (26), Yya luego aplicado al caso
específico del virus de la influen~a humana' (35).
Esta variante de administración hace uso de un
"cm1ón" capaz de propulsar las micropartículas recubiertas con el ADN en cuestión a través de varias
capas celulares del tejido a transfectnr, bien sea este
un órgano quirúrgicamente expuesto, o simplemente la piel (54-56).
La expresión de los genes transferidos mediante
esta técnica, al igual que con la inyección directa, se
ha demostrado en múltiples especies de animales
(ratón, rata, hámster, conejo y mono rhesus), pero
distintivamente, la misma no se limita sólo al músculo
estriado, sino que es detectabl.etambién en epidemlis,
dennis, hígado, rú1ón,páncrens y, algo menos, en corazón, bazo y músculos abdominales (22).
Con dosis tan bajas como 15 ng de ADN ya es
posible obtener una respuesta biológica eficiente
(57), lo que es atribuible no sólo a la alta efectividad en la entrega intracelular del ADN, sino también a la posibilidad de transfectar tejidos más inmuno-competentes que el músculo (58).
Propulsor de fluidos
El principio de funcionamiento es la proyección
con alta presión de la solución donde se haBa
disuelto el ADN. Este procedimiento ha sido empleado con anterioridad para la vacunación convencional en humanos.
.. Al parecer no resulta tan eficaz cpmo el "cw1ón"
de micropartículas, pero el mero hecho de no introducir tales partículas metálicas en el orgmlismo, lo
hace muy atractivo para WIapresunta inmunización
con ADN en seres humwlOs. Además, esta técnica
mWItienela ventaja de pennitir expresión no sólo en el
músculo estriado, sino taJnbiénen picI, tejido adiposo
y glándulas mamarias (59, 60), lo cual genera
respuestas humorales y ccIularcs signilicalivas (61).
Complejos ADN lípidos (3D, 62)
Si bien la inyección intramuscular directa de complejos ADN lípidos no rinde ventajas significativas
sobre el ADN "desnudo", por vía intravenosa sí se
obtiene con ellos una expresión importante en músculo, así como en muchos otros tejidos y órganos:
pulmón, riñón, hígado, bazo, timo, médula ósea, endotclio vascular, útero, páncreas e intestino. Sin
embargo, la expresión en estos tejidos resulta, por
Además de la inyección intramuscular en solución
salina fisiológica, se han desarrollado varias vías
altemativas de inmunización, algunas de las cuales
ya han demostrado ser superiores a la primera. A
continuación se describen brevemente estas vías altemativas. También aparecen relacionadas, en aras
de brindar un cuadro más completo, algunas estrategias "directas" de inmunización con ADN que
83
Biolecnología
Aplícacla
1996: Vol.13,No. 2
o Parda
Inmunización
lo general, menos duradera que en el músculo, aunque en ratones tamhién se ha rcportado la transferencia ~.e\plesiÚn de dichos wmplcJos en los fetos y progenie neouala de hemhras inmunizadas (63).
( '(I/UI''''}''.\'
..11 J.\'/>rcJleiI1OS
(6-1-66)
Se han empleado mÚltiples variantes de complejos
¡\:)N proteínas. La dección de la proteína (transfenina. insulina, asialoglico-prolcínas. etc.) se basa
en la presencia de los rcceptores celulares cspecífil'I1Sen d lcjido a transfeclar U,Ú).¡\demás, también
se han desanollado complejos más sofisticados que
Incluven particulas adenovirales no replicativas,
con d ohjclivo de favorecer el escape cndosomal
una vez endocitado el complejo (65);
Otras
Aplicaciones
Las aplicaciones de la "transferencia directa de
genes" no se reducen a generar inmunidad contra
agentes infecciosos, sino que, mediante la transferencia de los gcnes codificantes para las proteínas del
sistema principal de histocompatibilidad (67-72),
mÚltiples linfoquinas (73-76), regiones variables de
inmunoglobulinas (77), el receptor de las células T
(7R) así como las moléculas de diferenciación CD4
y CD8 (79), ya se ha comenzado a manipular i" vivo'
d sistema inmune de una fonna mucho más práctica que las disponibles por las metodologías convencionales.
Los resultados obtenidos en este campo son también muy alentadores, como lo indican los ejemplos
citados a continuación:
l. En r~tones, la transferencia intramuscular de
los genes de IL2, IL4 Y GM-CSF adyuva la
respuesta humoral que estos animales desarrollan
contra un antígeno determinado, mientras que la
transferencia de los genes de TGF-j31 y IFN-y la
suprimen (73, 76). Asimismo, la administración intravenosa de los genes del propio TGF-j31 y de
PDGF B, provoca marcados efectos biológicos en
el tejido endotelial transfectado (75, 80).
2. Se han iniciado estudios con los genes codilicantes para la cadena de receptores de células T
"patogénicos" (provenientes de tejidos sino viales
de pacientes con artritis reumatoide), y es posible
generar respuesta humoral contra esa proteína en
ratones (78), lo cual pudiera tener importancia
terapéutica de verificarse en humanos.
3. Varios esquemas de inmunización con ADN
plasmídico se han realizado en animales para gene.,
rar una respuesta inmune protectora antitumoral.
Los transgenes por excelencia han resultado ser las
moléculas del sistema principal de histocompatibilidad tipo 1 (67, 68, 71, 72) (con el propósito de
provocar un rechazo hacia las células tumorales
transfectadas), si bien otros candidatos (como los
antígenos T del virus SV40 y el antígeno carcinoembrionario) también han sido empleados (81 ).
84
can ADN
Por lo general, en estos estudios el ADJ-..se ha
evaluado acomplejado con lípidos catiónicos, buscando amplificar los efectos biológicos de la terapia
(respuesta cito tóxica antitumoral, regresión o progresión retardada del tumor, etc.), pero en solución
salina fisiológica también se desata una respuesta
ilUnune en el animal vacunado (69, 70),
Es precisamente en pato.logías incurables por la
medicina actual, donde la "transferencia directa de
ADN" ha sido aplicada en seres humanos por
primera vez. Varios estudios clínícos de fase 1 y 11,
que involucran en total a decenas de pacientes de
cáncer, han sido realizados o están en desarroIlo en
EE.UU. (82).
En estos estudios, los panímetros seguidos más
rigurosamente han sido la toxicidad de la formulación, la aparición de síntomas de autoinmunidad y
por supuesto, la cuantificación y localización tanto
de la pro.teína for-ánea como dcI plásmido que la
codifica. Aún es muy temprano para emitir veredicto alguno sobre los efectos biológicos de la
terapia, si se toma en cuenta que las vías de inoculación, fonnulaciones y dosis aún están siendo optimizadas.
Por último, no debe omitirse aquí la mención de
dos aplicaciones muy recientes de la inmunización
con ADN, y que resultan no menos espectaculares:
l. El empleo de detenninadas bacterias transformadas con el plásmido de interés como vehículo
vivo para su entrega a nivel de las mucosas (83).
2. La inmunización directa con bibliotecas
genómicas de detenninados patógeno s, como metodología de identificación .de los antígenos protectores contra eIlos (84).
8ioseguridad
y Regulaciones
Tres consecuencias negativas que en principio podrian derivarse de la ilUnwlización con ADN son:
l. La aparición de anticuerpo s contra el ADN
inyectado pudiera generar estados autoininunes reminiscentes de los que se presentan, por ejemplo,
en ellupus eritematoso sistémico.
2. La integración genómica al azar del ADN
inyectado pudiera activar un oncogén, inactivar
genes supresores de oncogenes, etc.
3. La expresión continua de "bajos" niveles del
antígeno, y su presentación al sistema ilUnune por
largos periodos, pudiera generar estados de tolerancia, hiperilUnunidad, etc.
El primero de estos puntos es tal vez el menos
preocupante de los tres, ya que durante años se
conoce la escasa imnunogenicidad de la confonnad{)n B (más usual) del ADN, especialmente libre en
solución. La obtención de anticuerpos contra el
ADN B se logr.a mediante su conjugación a proteínas inmunogénicas. Además, de los anticuerpo s
contra el ADN doblecatenario, solamente aqueIlos
de alta afinidad que posea.n aminoácidos básicos en
sus paratopos resultan realmente patogénicos, al de-
Biofecno/og(a
Aplicada
1996; Vol. 13, No. 2
o Pardo
Inmunizacióh
Tabla 1. Principales patógenos
contra los que se ha aplicado la inmunización
con ADN.
COMENTARIOS
PÁ TÓGENO
Herpesvirus
bovino 1
con ADN
REFERENCIAS
Anticuerpos murinos contra gl, glll, Y glV, estol últimos neutrali%antes. la inmunización
con ..1 g..n d.. glV confi..r.. prot..cción
Virus
de las hepatitis
ByC
Anticuerpos
Virus de la coriomeningitis
linfocltica
Escasos onticu..rpos
Virus de la rabia
Obt..nción
d.. anticu..rpos
prot..ctora,
d..t..ctándos..
murinos contra prot..lnas
en ratas y conejos 'o han generado
en raton..s contra la NP d..1 VHC.
quiméricas
anticuerpo.
NP (del VHC) y pr..S2-S o S (d..1 VHB). Tambión
contra S, y s. ha d.tectado
murinos conlro lo NP o GP, pero sensibilización
in vivo y 50 % d.. prot..cción
d. terneros
(92)
parcial.
(..n ocosion..s
(103-105)
d.. linfocitos citotóxicos
inmunoamplificación).
murinos n..utralizant..s
adyuvación
(93-101,102)
respuCtsta cito'óxico
o supr..sión
y r..spu..sta
m..diante
citotóxica contra gG, asi como inmunidad
la coinoculación
d.. plásmidos
(106,107,76)
codificant...
para GM-CSF o IFN-1. r...p..ctivam..nte.
Micobacterias
La inmunización
d.. raton...
con ..1 g..n d.. HSP65 d.. M. leprae rind.. m..nor...
tras un r..to con M. tuberculosis.
d.. M. tuberculosis.
Leishmania majar
La inmunización
Plasmodium yoelii
Obt..nción
d.. ratones
de anticuerpo.
parcialmento
Tambión s.. ..studian
bact..r..mia.
h..pática.
(108)
los g..n..s d.. HSP65, 85A, 85B Y 85C
con el g..n de gp63 de L. maior confi..re prot..cción
murinos contra ..1 antlg..no
(109,110)
parcial.
CSP d.. P. yoelii (lo. qu.. in vitro inhib..n
la invasión microbiana a h.patocitos),
as( como respuesta
Virus herpes
simplex
Anticu..rpos
murino.
anticu..rpo.
n..utralizont...
Schistosoma
japonicum
Anticuerpo.
murino.
contra Sj97, no a.i contra Sj26.
Mycoplasma
pulmonis
Anticuerpos
murinos
y respuesta
Cryptosporidi um
parvum
La inmunización
d. ovoias con 01 g8n de CP15/60
Papilomavirus
La inmunización
con el gen de L¡ en con..jos g..n..ró anticu..rpos
contra gB de HSV.¡ poco n..utralizant..s,
-
(111 114)
cito'óxico y protección parcial.
pero 80 % d.. prot..cción.
Tambión
(115,116,117)
contra gD de HSV.2.
citotóxica
positarse fundamentalmente .en la membrana basal
de los glomérulos (85). Por último, en todos los
esquemas de inmunizació\1 con ADN donde sc han
buscado anticuerpos a.nti-ADN, éstos nunca se han
d,etectado (14).
Los otros dos aspectos son de mayor significación,
ya su vez, mucho mós difíciles de monitorcar ;n vivo.
Los plásmidos que se emplean para la inmunización no poseen regiones reportadas como orígcncs dc
replicación en células eucarióticas, ni tampoco sccuencias homólogas promotoras dc evcntos recomhinativos-integrativos (exceptuando los casos donde el
gen a transferir es homólogo). Adcmás, nunca se ha
logrado detectar esos eventos expcrimentalmente
(15), si bien es imposihle aún excluir su oculTcnciaal
azar con muy baja frecucncia.
Tampoco se han dctect;:¡dosíntomas de tolenUlciao
hiperinmunidad en los animales inmunizados con
ADN, ni ningún tipo de trdstomo autoilUnunedegenerativo. Pero, obviamente, muchos experimentos controlados han de ser diseiiados aim antes de que la Última palabro sobre tan delicado aspccto sea dicha.
contra
(118)
determinados
(119,84)
antígenos.
genera anticuorpo,
en ,uoro y calostro.
n..utralizant...
y prot..ctor....
Tal v~ Wlaaltemativa que aún no haya sido apreciada a cabalidad sea el empleo del ARN en lugar del
ADN. De hecho, ya se han comenzado a desarrollar
sistcmas replicativos de ARN capaces de rcndir expresiones suficientemente estables como para gencrar
respuestas i1Ul1unessignificativas (86, 87).
C'onclusiones
¿Cuánto habrá qué esperar para la aplicación en seres humanos de una vacuna de ADN? La rcspuesta
dcpelide de los conocimientos quc sumi-nistren los
estudios mencionados arriba. También dcpcnde dcl
patógeno específico contra el quc se prctcnda proteger. Por ejemplo, en el caso del HIV-l (incurable
por la ciencia actual) algunas compmiías norteamericmlas ya han obtenido la autorización olicial para
realizar cxpcrimentos de inmunización con ADN en
seres humanos.
Los controles que habrán de realizarse preliminarmente, así como las regulaciones que rcgirán la
presunta aplicación en humanos de la primera vacuna de ADN, recién comienzan a ser discutidos (88,
85
Biolecno/ogla
--
..
Aplicado
1996; Vol. 13, No. 2
(120)
(121 )
o Pardo
Inmunización
89,90,91), y ya se han celebrado varios eventos internacionales de gran prestigio para abordar el tema
de las vacW1asde ADN, como los sostenidos en Ginebra (Suiza) en mayo '94, en Arlington (EE.UU.)
en abril '95, y en Bethesda (EE.UU.) en febrero '95
Y '96.
Son muchos los argumentos emitidos por la
comunidad científica internacional fuera y dentro
de estos eventos, tanto a favor como en contra de
una posible vacunación con ADN en seres humanos. Muchas son las interrogantes que se han
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abierto, y muchas serán las que surjan en la medida
que las primeras encuentren respuesta en los resultados experimentales que vayan obteniéndose.
Por hoy, nos basta con saber que la iJUnunización
con ácidos nucleicos "desnudos" es ya una altemativa real que va abriéndose camino paulatinamente
como fonna práctica de manipulación del sistema
iJUnune.Para maJlana nos queda la graJl incertidumbre de si esta técnica llegará a convertirse o no en
una nueva generación de vaCWlashwnaJlas.
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