bk auramina (morse) kit

BK AURAMINA (MORSE) KIT
Para diagnóstico “in vitro”
Principio
Muestras
La técnica para le detección de microorganismos ácido alcohol resistentes
por fluorescencia es similar a la tinción clásica de Ziehl cambiando la Fucsina
fenicada por un colorante fluorescente adicionado de fenol. La coloración
fluorescente aporta la ventaja de una mayor visibilidad de los microorganismos
fluorescentes sobre un fondo oscuro. Esto permite trabajar con objetivos de
menor aumento, lo que incrementa el campo de visión y disminuye el tiempo
necesario para evaluar la preparación.
Extensiones procedentes de cultivos bacterianos. Muestras procedentes de
diversos fluidos corporales: exudados, fluidos pulmonares, sedimentos de orina
etc.
Manipular las muestras con precaución por su capacidad potencialmente
infecciosa.
Reactivos
Kit 3 x 250
Contiene:
A. 1 x 250 ml. Reactivo Nº1 Auramina (Morse)
B. 1 x 250 ml. Reactivo Nº2 Decolorante MT
C. 1 x 250 ml. Reactivo Nº3 Permanganato potásico MT
Ref. 99 38 10
Ref. 99 38 42
Ref. 99 68 30
Ref. 99 43 60
Disponible asimismo:
Auramina (Morse)
Composición
Colorante Auramina
Fenol
Isopropanol
Decolorante MT
Composición
Isopropanol
HCl
Permanganato potásico MT
Composición
KMnO4
Rojo de Tiazina
Composición
Rojo de Tiazina
Fenol
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 38 55
Ref. 99 38 76
0,2%
0,4%
25%
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 68 60
Ref. 99 68 96
70%
0,05%
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 43 70
Ref. 99 43 95
0,5%
1 x 1000 ml
1. Cubrir la preparación con el Reactivo Nº1.
Dejar unos 15 min.
2. Lavar suavemente en agua corriente.
3. Decolorar con Reactivo Nº2 durante 30-60 seg.
4. Lavar suavemente en agua corriente.
5. Cubrir la preparación con Reactivo Nº3 durante unos 2 min.
6. Lavar con agua y secar al aire.
7. Examinar la preparación en un microscopio de fluorescencia a un
aumento de 25X con un filtro de absorción 460nm y filtro de emisión
550nm.
Resultados
Los microorganismos alcohol-ácido resistentes aparecen fluorescentes.
El fondo negro con permanganato o rojizo con rojo de tiazina y otras bacterias
pueden aparecer ligeramente fluorescentes.
Notas al método
La técnica descrita anteriormente puede modificarse de acuerdo con las
preferencias del operador para lograr mayor o menor intensidad de coloración,
lo cual implica variaciones en los tiempos de tinción, decoloración, lavado, etc.
Agua altamente clorada puede alterar la coloración.
Se aconseja una vez detectados los microorganismos fluorescentes confirmar
los resultados con objetivos de mayor aumento (100x). Esta segunda revisión
permite distinguir entre partículas fluorescentes no celulares y células
bacterianas fluorescentes, que pueden confundirse a bajo aumento.
Ref. 99 39 45
Bibliografía
0,1%
5%
Conservación y estabilidad
El reactivo Auramina, debe conservarse a 4 - 8ºC y en la oscuridad.
Los otros componentes, Decolorante MT, Permanganato potásico y Rojo de
Tiazina, pueden mantenerse a Tª ambiente.
En estas condiciones los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta.
Precauciones
Los reactivos son irritantes en contacto con la piel, ojos y mucosas y perjudiciales
por ingestión e inhalación.
El decolorante MT contiene alcohol isopropílico a concentraciones elevadas que
es inflamable. Manejar los productos con precaución. Consultar las fichas de
seguridad de los reactivos.
La eliminación de los residuos debe hacerse según la normativa local vigente.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: Enero 2015
Técnica
Prepare una extensión fina y fije a la llama suavemente.
Somoskövi, A., Hotaling, J.E., Fitzgerald, M., O’Donnell, D., Parsons, L.M.,
Salfinger, M. (2001), Chest, 120, 250-257.
Good, R.C., Silcox, V, Kilborn, C., ch.40, 679-686 in Balows, A., Hausler, W.,
Diagnostic procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th
ed. Washington D.C.
Ederer, G.M., Lund, M.E., ch.46, 806-811 in Balows, A., Hausler, W., Diagnostic
procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th ed.
Washington D.C.
Lenette, Spaulding and Truant. Manual of Clinical Microbiology (1974),3rd .
ed., ASM.
Truant, Brett, Thomas, fluorescent microscopy acid-fast procedure 1962, 382383 in Clarck, G., Staining procedures (1981), 4th ed. W&W.
PRO4_REG9_BKAUMOR_4
TB AURAMINE (MORSE) KIT
For “in vitro” diagnostics
Principle
Samples
The method for the detection of acid-fast microorganisms through fluorescence
is similar to the usual Ziehl- Neelsen procedure, using a phenolated fluorescent
dye instead of carbol Fuchsin.
The advantage of fluorescent staining is that the microorganism appears as a
bright fluorescence against a dark background. This allows using low power
objectives increasing the field of view, and making possible a saving in time to
establish the positive or negative nature of the smear.
Smears of microorganisms from bacterial cultures. Samples from body fluids as:
exudates, pulmonary fluid, urine, etc.
The samples must be handled with care due to its capacity of infection
Reagents
Kit 3 x 250
Contents
A. 1 x 250 ml. Reagent Nº1 Auramine (Morse)
B. 1 x 250 ml. Reagent Nº2 MT Decolorizer
C. 1 x 250 ml. Reagent Nº3 MT Potassium Permanganate
Ref. 99 38 10
Ref. 99 38 42
Ref. 99 68 30
Ref. 99 43 60
Also available:
Auramine (Morse)
Composition
Auramine
Phenol
Isopropyl alcohol
MT Decolorizer
Composition
Isopropyl alcohol
HCl
MT Potassium Permanganate
Composition
KMnO4
Thiazine Red
Composition
Thiazine red
Phenol
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 38 55
Ref. 99 38 76
0.2%
0.4%
25%
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 68 60
Ref. 99 68 96
Ref. 99 43 70
Ref. 99 43 95
0.5%
1 x 1000 ml
Results
Alcohol-acid resistant microorganisms are seen as fluorescent.
The background is dark with permanganate or dark red with thiazine red.
Other bacteria can appear lightly fluorescent.
Notes
70%
0.05%
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Procedure
Prepare a thin smear and fix by gently heating.
1. Cover the smear with Reagent Nr.1.
Let stand for approx 15 min.
2. Rinse gently under running tap water.
3. Decolorize with Reagent Nr.2 for 30-60 sec.
4. Rinse gently under running tap water.
5. Finally, cover the slide with Reagent Nr.3 for approx. 2 min.
6. Rinse with water and air dry.
7. Examine under a fluorescence microscope with a 25X objective in
460nm absortion filter and 550nm emission filter.
Ref. 99 39 45
0.1 %
5%
Storage and stability
Auramine reagent must be kept at 4 - 8ºC in the dark.
MT Decolorizer, Potassium Permanganate and Thiazine Red can be stored at
room temperature.
The reagents will remain stable until the expiration date stated on the label.
The procedure described above can be modified according to the user’s
preferences to achieve weaker or stronger colour intensity, being carried out by
changing the times for staining, washing, etc.
Highly-chlorinated tap water could weaken the staining.
It is advisable to confirm the results obtained at lower power objectives using
a 100X objective. The higher magnification is required to distinguish between
noncellular fluorescing particulates and fluorescing bacterial cell, which might
appear similar at the lower power of magnification.
References
Somoskövi, A., Hotaling, J.E., Fitzgerald, M., O’Donnell, D., Parsons, L.M.,
Salfinger, M. (2001), Chest, 120, 250-257.
Good, R.C., Silcox, V, Kilborn, C., ch.40, 679-686 in Balows, A., Hausler, W.,
Diagnostic procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th
ed. Washington D.C.
Ederer, G.M., Lund, M.E., ch.46, 806-811 in Balows, A., Hausler, W., Diagnostic
procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th ed.
Washington D.C.
Lenette, Spaulding and Truant. Manual of Clinical Microbiology (1974),3rd .
ed., ASM.
Truant, Brett, Thomas, fluorescent microscopy acid-fast procedure 1962, 382383 in Clarck, G., Staining procedures (1981), 4th ed. W&W.
Caution
The safety statements are on the label. We advise to read SDS before reagent
manipulation.
Reagents may be harmful in contact with skin, eyes and mucous membranes.
MT Decolorizer contains Isopropyl alcohol and is flammable. Handle with care.
Waste products must be handled as per local regulations
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
ISO 9001 / ISO 13485 Certified Company
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revision: January 2015
PRO4_REG9_BKAUMOR_4
BK AURAMINA (MORSE) KIT
Para diagnóstico “in vitro”
Princípio
Amostras
A técnica para a detecção de microorganismos álcool-ácido resistentes por
fluorescência é semelhante à coloração clássica de Ziehl trocando a fucsina
fenicada por um corante fluorescente fenolado. A coloração fluorescente tem
a vantagem de uma maior visibilidade dos microorganismos fluorescentes
sobre um fundo escuro. Isto permite trabalhar com lentes de menor aumento,
o que aumenta o campo de visão e diminui o tempo necessário para avaliar a
preparação.
Esfregaços provenientes de culturas bacterianas. Amostras provenientes de
diversos fluidos corporais: exsudatos, fluidos pulmonares, urina, etc.
Manipular as amostras com precaução pela sua capacidade potencialmente
infecciosa.
Reagentes
Kit 3 x 250
Inclui:
A. 1 x 250 ml. Reagente Nº 1 Auramina (Morse)
B. 1 x 250 ml. Reagente Nº 2 Descolorante MT
C. 1 x 250 ml. Reagente Nº 3.
Permanganato de potássio MT
Ref. 99 38 10
Ref. 99 38 42
Ref. 99 68 30
Ref. 99 43 60
Disponível também:
Auramina (Morse)
Composição
Corante Auramina
Fenol
Álcool isopropílico
Descolorante MT
Composição
Álcool isopropílico
HCl
Permanganato de potássio MT
Composição
KMnO4
Thiazin red
Composição
Thiazin Red
Fenol
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 38 55
Ref. 99 38 76
0,2%
0,4%
25%
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 68 60
Ref. 99 68 96
70%
0,05%
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Ref. 99 43 70
Ref. 99 43 95
0,5%
1 x 1000 ml
Técnica
Prepare um esfregaço fino e fixe-o por aquecimento suave.
1. Cobrir a preparação com o Reagente Nº 1. Deixar cerca de 15 min.
2. Lavar delicadamente em água corrente.
3. Descolorar com o Reagente Nº 2 durante 30 a 60 seg.
4. Lavar delicadamente em água corrente.
5. Cobrir a preparação com o Reagente Nº 3 durante cerca de 2 min.
6. Lavar com água e deixar secar ao ar.
7. Examinar a preparação num microscópio de fluorescência, a um
aumento de 25X, um filtro de absorção de 460nm e filtro de emissão
550nm.
Resultados
Os microorganismos álcool-ácido resistentes ficam fluorescentes.
O fundo negro com permanganato e vermelho com Thiazin red e as outras
bactérias podem ficar ligeiramente fluorescentes.
Notas ao método
A técnica descrita anteriormente pode modificar-se de acordo com as
preferências do técnico para conseguir maior ou menor intensidade de
coloração, o que implica variações nos tempos de coloração, descoloração,
lavagem, etc.
Água altamente clorada pode alterar a coloração.
Depois de detectados os microorganismos fluorescentes, aconselha-se confirmar
os resultados com lentes de maior aumento (100 x). Esta segunda revisão permite
distinguir entre partículas fluorescentes não celulares e células bacterianas
fluorescentes, que podem confundir-se quando se utilizam baixos aumentos.
Bibliografia
Ref. 99 39 45
0,1 %
5%
Conservação e estabilidade
O reagente Auramina, deve ser conservado entre 4 a 8 ºC e no escuro.
Os outros componentes, o descolorante MT o permanganato de potássio e
thiazin red odem manter-se à temperatura ambiente.
Nestas condições os reagentes permanecem estáveis até à data de validade
indicada na etiqueta.
Somoskövi, A., Hotaling, J.E., Fitzgerald, M., O’Donnell, D., Parsons, L.M.,
Salfinger, M. (2001), Chest, 120, 250-257.
Good, R.C., Silcox, V, Kilborn, C., ch.40, 679-686 in Balows, A., Hausler, W.,
Diagnostic procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th
ed. Washington D.C.
Ederer, G.M., Lund, M.E., ch.46, 806-811 in Balows, A., Hausler, W., Diagnostic
procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th ed.
Washington D.C.
Lenette, Spaulding and Truant. Manual of Clinical Microbiology (1974),3rd .
ed., ASM.
Truant, Brett, Thomas, fluorescent microscopy acid-fast procedure 1962, 382383 in Clarck, G., Staining procedures (1981), 4th ed. W&W.
Precauções
Os reagentes são irritantes em contacto com a pele, olhos e mucosas e são
prejudiciais por ingestão e inalação.
O descolorante MT contém álcool isopropílico a concentrações elevadas, que
é inflamável. Manipular os produtos com precaução. Consultar as fichas de
segurança dos reagentes.
A eliminação dos resíduos deve fazer-se de acordo com a normativa legal
vigente.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / ESPANHA
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisão: Janeiro 2015
PRO4_REG9_BKAUMOR_4
BK AURAMINE (MORSE) KIT
Pour le diagnostic “in vitro”
Principe
La technique pour la détection de microorganismes acide-alcool-résistants par
fluorescence est similaire à la coloration classique de Ziehl, mais la fuchsine
phéniquée est remplacée par un colorant fluorescent phénolé. La coloration
fluorescente offre l’avantage d’une plus grande visibilité des microorganismes
fluorescents sur un fond sombre. Cela permet de travailler avec des objectifs à
grossissement inférieur et, par conséquent, d’augmenter le champ de vision et
de diminuer le temps nécessaire pour évaluer la préparation.
Réactifs
Kit 3 x 250
Contenu:
A. 1 x 250 ml. Reactif nº 1 auramine (Morse)
B. 1 x 250 ml. Réactif nº 2 décolorant MT
C. 1 x 250 ml. Réactif nº 3.
Permanganate de potassium MT
Réf. 99 38 10
Réf. 99 38 42
Réf. 99 68 30
Réf. 99 43 60
Également disponible:
Auramine (Morse)
Composition
Colorant auramine
Phénol
Isopropanol
Décolorant MT
Composition
Isopropanol
HCl
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
0,2 %
0,4 %
25 %
1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Rouge tiazine
Composition
Rouge tazine
Phénol
Réf. 99 68 60
Réf. 99 68 96
70 %
0,05 %
Permanganate de potassium MT 1 x 1000 ml
6 x 250 ml
Composition
KMnO4
Réf. 99 38 55
Réf. 99 38 76
Réf. 99 43 70
Réf. 99 43 95
Échantillons
Échantillons provenant de cultures bactériennes ou de différents fluides
corporels: exsudats, fluides pulmonaires, sédiments d’urine, etc.
Manipuler les échantillons avec précaution en raison de leur potentiel
infectieux.
Technique
Préparer un frottis en couche mince, puis fixer à la chaleur
1. Couvrir la préparation de réactif nº 1. Laisser agir environ 15 minutes.
2. Rincer à l’eau courante.
3. Décolorer avec le réactif nº 2 pendant 30 à 60 secondes.
4. Rincer à l’eau courante.
5. Couvrir la préparation de réactif nº 3 pendant 2 minutes.
6. Rincer à l’eau courante et sécher à l’air.
7. Examiner la préparation avec un microscope à fluorescence à un
grossissement de 25X avec filtre d’absorption 460nm et filtre d’émission
550nm.
Résultats
Les
microorganismes
acide-alcool-résistantes
présentent
une
fluorescence.
Le fond noir avec permanganate ou rouge avec rouge tiazine et les autres
bactéries peuvent présenter une légère fluorescence.
Remarques sur la méthode
La technique décrite ci-dessus peut être modifiée selon les préférences de
l’utilisateur pour obtenir une intensité de couleur variable, ce qui se traduit par
des variations dans les temps de coloration, de décoloration, de lavage, etc.
Une eau fortement chlorée peut altérer la coloration.
Une fois les microorganismes fluorescents détectés, il est conseillé de confirmer
les résultats avec des objectifs de grossissement supérieur (100x). Cette
vérification permet de distinguer les particules non cellulaires fluorescentes des
cellules bactériennes fluorescentes, qui peuvent être confondues à de faibles
grossissements.
0,5 %
1 x 1000 ml
Réf. 99 39 45
0,1 %
5 %
Conservation et stabilité
Conserver le réactif Auramine à une température située entre 4 et 8 ºC à l’abri
de la lumière.
Les autres composants, le décolorant MT, le permanganate de potassium et le
rouge tiazine peuvent être conservés à température ambiante.
Dans ces conditions, les réactifs sont stables jusqu’à la date de péremption
indiquée sur l’étiquette.
Bibliographie
Somoskövi, A., Hotaling, J.E., Fitzgerald, M., O’Donnell, D., Parsons, L.M.,
Salfinger, M. (2001), Chest, 120, 250-257.
Good, R.C., Silcox, V, Kilborn, C., ch.40, 679-686 in Balows, A., Hausler, W.,
Diagnostic procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th
ed. Washington D.C.
Ederer, G.M., Lund, M.E., ch.46, 806-811 in Balows, A., Hausler, W., Diagnostic
procedures for bacterial, Mycotic and parasitic infections. (1981), 6th ed.
Washington D.C.
Lenette, Spaulding and Truant. Manual of Clinical Microbiology (1974),3rd . ed.,
ASM.
Truant, Brett, Thomas, fluorescent microscopy acid-fast procedure 1962, 382383 in Clarck, G., Staining procedures (1981), 4th ed. W&W.
Précautions d’emploi
Les réactifs sont irritants au contact de la peau, des yeux et des muqueuses, et
nocifs par ingestion et inhalation.
Le décolorant MT contient de l’alcool isopropylique à des concentrations
élevées, qui est inflammable.
Manipuler les produits avec précaution. Consulter les fiches de sécurité des
réactifs.
L’élimination des déchets doit être effectuée conformément aux normes en
vigueur.
QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.
Entreprise certifiée ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Révision: Janvier 2015
PRO4_REG9_BKAUMOR_4