RNA: Química y estabilidad RNA

RNA: Química y estabilidad
RNA: Química y estabilidad
• Ribosa: 2’ OH
•Conformación en hélice A
•Inestable a la hidrólisis
• Direccional: extremos 5’ y 3’
• Bases modificadas
• Estructura secundaria
Hélice exclusivamente en conformación A
Grupo 2’OH permite
rápida hidrólisis
Mezcla de
2’ y 3’ NMP
1
2013 Enrique Castro
Nucleósidos exóticos en RNAs
Nucleósidos exóticos en RNAs
2013 Enrique Castro
2
RNA: estructura y tipos
RNA: estructura y tipos
 RNA ribosómico (rRNA)
• Cadena simple
• Alta estructura secundaria
(hélices en bucles intracatenarios)
• Estructural (ribosoma)
• Catalítico
120 nts (5S)
1542 (16S)
2904 (23S)
80 % RNA total
rRNA 16S
 RNA de transferencia (tRNA )
• Cadena simple
• Estructura secundaria media
(hélice en bucles intracatenarios)
73-90 nts
15 % RNA total
• Abundancia de bases modificadas
• Adaptador del código genético
 RNA pequeño nuclear (snRNA )
• Cadena simple
• Alta estructura secundaria
(hélice en bucles intracatenarios)
<300 nts
3 % ? RNA total
• Ricos en U
• Estructural (partículas snRNP, espliceosoma)
• Catalítico (eliminación de intrones)
 RNA heterogéneo nuclear (hnRNA )
• Cadena simple
• Baja estructura secundaria
• Informativo: transcritos primarios de genes
 lncRNA
• Cadena simple, intergénico, ¿espurio?
 RNA intrónico
• No-informativo
 RNA mensajero (mRNA )
75-3000 nts
2 % RNA total
• Informativo: codificación de proteínas
(madurado a partir de hnRNA)
2013 Enrique Castro
3
Convenios y nomenclatura: transcripción y traducción
Convenios y nomenclatura: transcripción y traducción
con sentido
Hebra codificante
No molde
5’3’
sin sentido
Hebra molde
No codificante
3’5’
mRNA 5’3’
Secuencia de hebra codificante
Complementario a molde 3’5’
Proteína NC
Traducido de mRNA 5’3’
2013 Enrique Castro
Hebra codificante 5’3’
4
Transcripción: proceso general
Transcripción: proceso general
 Transcripción: polimerización de RNA
•
•
•
•
Reconocimiento del promotor
Ensamblaje sobre inicio
Activación del PIC: desalojo del promotor
Terminación: corte y poliadenilación
Terminación
Promotor
Sitio inicio
 Procesamiento del transcrito primario (pre-mRNA)
•
•
•
•
Caperuza 5’
Corte y poliadenilación 3’
Eliminación de intrones (splicing)
Edición
 Transporte nucleo-citoplasmático
5
2013 Enrique Castro
RNA polimerasa : mecanismo enzimático
RNA polimerasa : mecanismo enzimático
 Caracteríscticas de RNA polimerasas
•
•
•
•
•
Oligómero de alto peso molecular (6-14 subunidades)
Requiere molde de DNA
Utiliza NTP, libera PPi
No necesita cebador (3'-OH libre): 2 sitios NT
Carece de 3’exonucleasa (corrección)
RNAn + NTP ↔ RNAn+1 + PPi
2013 Enrique Castro
6
Inhibidores de RNA polimerasas
Inhibidores de RNA polimerasas
Rifampicina:
se une a RNApol β (bacterias)
impide desalojo el promotor
Actinomicina D:
intercala entre GC adyacentes
distorsiona dúplex
impideprogreso de la burbuja (RNApol)
(pro/eucariotas)
Carece de 3'OH
impide crecimiento
(pro/eucariotas)
α-amanitina:
bloquea RNApol II>RNApol III
(eucariotas)
7
2013 Enrique Castro
Topología
Topología del
del inicio
inicio de
de transcripción
transcripción
Reconocimiento del promotor
• RNApol se une inespecíficamente al DNA (baja afinidad)
• Recorre el dúplex buscando el promotor
• Compejo multiproteico reconoce el promotor
Complejo promotor cerrado
• (Unión RNApol/DNA enrollado, Kd = 10-6-10-9 M )
• RNApol se desplaza hacia la caja Pribnow.
Iniciación
• 2 sitios de unión de NTPs en la RNApol
Sitio de iniciación: prefiere A,G
Sitio de elongación: 2º nucleótido
• El 3'-OH del nucleótido en el lugar de
iniciación ataca y se une al α-P del
NTP en el otro sitio
• La RNApol transloca 1 pb y repite ciclo,
alargando la cadena naciente de RNA
Complejo promotor abierto
• Actividad helicasa desenrolla
≈12-15 pb hasta +2 - +5.
• burbuja de transcripción.
Unión de muy alta afinidad, Kd = 10-14 M
2013 Enrique Castro
Desalojo del promotor
• Cuando el transcrito tiene 6-10 nts
• Factores de reconocimiento del
promotor disociados
8
Burbuja de transcripción
Burbuja de transcripción
 Elongación: Núcleo de RNA polimerasa (sin GTFs)
 RNA pol es procesiva
 RNA pol no precisa helicasa (desenrrolla al avanzar)
 Fidelidad media (10-4 errores)
(adecuado para transcritos de <10000 nt)
 Velocidad 20-50 bases/segundo.
(más lento en zonas ricas en G/C)
 Topoisomerasas preceden y siguen a la burbuja de
transcripción (alivio de tensiones superhelicoidales)
13-15 pb
17-19 pb
17-19 pb
8-9 pb
6-7 nt
 Elongación: topoisomerasas
 Topoisomerasas preceden y siguen a la burbuja de
transcripción (alivio de tensiones superhelicoidales)
9
2013 Enrique Castro
RNA polimerasas eucarióticas
RNA polimerasas eucarióticas
Tres polimerasas diferentes
 RNApol I: pre-rRNA (nucleolo)
 RNApol II: general (mRNA)
 RNApol III: genes RNA
(tRNA, snRNA etc)
Sensibilidad a α-amanitina
Pol II > polIII >> polI, RNApol bact
10 µM
100µM
Proteínas grandes multiméricas
 ≈12 subunidades (500-700 kD)
 5 comunes
 4-7 específicas de I-III
2 subunidades grandes
RPB1, RPB2 (130-220KD)
homólogas a β,β’ de E. coli
Estructura y función
conservadas
Interacción con promotores




A través de RPB4
Requiere factores adicionales
específicos de promotor
RNApol III reconoce señales 3’
2013 Enrique Castro
Factores de
Transcripción
2 subunidades homólogas a la α de E. coli
RPB3 (20-40 kD)
10
Transcripción en eucariotas: estructura del mRNA
Transcripción en eucariotas: estructura del mRNA
 Genes discontinuos
 Exones/intrones
 Procesamiento: splicing
 Estructura del mRNA eucariótico:





Caperuza 5’
(estabilización)
5’ UTR
(regulación)
Región codificante
3’UTR
(regulación)
Cola de poli-A 3'(estabilización)
Caperuza 5’
Región codificante
(ORF)
5’ UTR
Cola poli-A 3’
3’ UTR
11
2013 Enrique Castro
RNA polimerasa II
RNA polimerasa II
Transcripción de genes de proteínas
 Reconoce variedad de promotores
 Ampliamente regulable
2 subunidades grandes
RPB1 (220 kD), RPB2 (150 kD)
homólogas a β β’ de E. coli
 Requiere al menos 7 factores de transcripción generales
 Dominio carboxi-terminal (CTD) fosforilable
Dominio CTD de RPB1
52 repeticiones de
YSPTSPS
Hasta 50 nm
P
P
P
P
Funciones de CTD: Regulación
• Unión al promotor: desfosforilado
• Iniciación: fosforilado
• Unión de proteínas accesorias
RPB1: unión a NTPs
(catalítica)
RPB2: unión a DNA
Regulación por
fosforilación múltiple
Procesamiento
del pre-mRNA
2013 Enrique Castro
12
Promotores eucarióticos: promotor proximal (core promoter)
Promotores eucarióticos: promotor proximal (core promoter)
Exones
intrones y UTRs
Elementos potenciadores
Estructura de un gen
de mamífero:
-200
-10 / -50 kb
+10 / +50 kb
-30
•Caja TATA
•Iniciador
•Caja GC
Promotor
proximal
start
2013 Enrique Castro
13
Elementos reguladores Cis y Trans Elementos reguladores Cis y Trans Elementos reguladores Cis = secuencias promotoras (DNA)
Elementos reguladores Trans = factores de transcripción (Prot)
Elementos trans (proteínas)
se unen a
elementos cis (secuencias DNA)
2013 Enrique Castro
14
Factores de transcripción asociados a RNApol II
Factores de transcripción asociados a RNApol II
15
2013 Enrique Castro
Pasos clave en la transcripción del DNA por RNApol II
Pasos clave en la transcripción del DNA por RNApol II
Ensamblaje:
Construcción secuencial y ordenada
del complejo de iniciación
 Reconocimiento del promotor
 Unión de RNApolII (CTD desfosforilado)
Iniciación:
Hasta el complejo de
preiniciación
 Apertura del complejo
Desenrollado del molde y activación
de la polimerización
 Activación de la RNApol
 Fosforilación del CTD
Hasta el desalojo del
promotor
Elongación:
Actividad de
TFIIH
 Disociación de factores generales
 Reclutamiento de factores de elongación
 Reclutamiento por CTD de RNPs para procesado
(capping, splicing)
Crecimiento del transcrito por
polimerización de NTPs sobre
el molde
Mientras no termine
Terminación:
 Reclutamiento del complejo de poliadenilación
(reconocimiento de la señal AUAAA)
 Corte y liberación del transcrito: desactivación de RNApol
 Poliadenilación 3’
2013 Enrique Castro
Acoplamiento de corte y poliadenilación
con terminación
16
Ensamblaje de RNApol II sobre el promotor
Ensamblaje de RNApol II sobre el promotor
1. Reconocimiento de promotor
• unión de TBP
• unión de TFIID ( y/o TFIIA)
TFIID=
•TBP o similar
•11 TAFs
3. Reclutamiento de
RNApol II
• unida a TFIIF
• CTD desfosforilado
2. Unión de TFIIB
• Recluta RNApol
TFIIF inhibe
la unión no
específica a
sitios no
promotores
9 subunidades
Se une a TFIIB
Complejo de
iniciación
cerrado
5. Apertura
• Actividad helicasa de
TFIIE y TFIIH
2013 Enrique Castro
Complejo de
iniciación
abierto
4. Formación del
complejo cerrado
• unión de TFIIE
• unión de TFIIH
Complejo de
pre-iniciación
(PIC)
17
Ensamblaje de RNApol II en promotor: TBP­TFIID
Ensamblaje de RNApol II en promotor: TBP­TFIID
TBP reconoce secuencia poli-A en promotor
Se une al DNA en conformación
agudamentemente curvada
2013 Enrique Castro
18
Inicio de la transcripción por RNApol II
Inicio de la transcripción por RNApol II
TBP
TFIIA
TFIIB
TFIIF
RNApol II
TFIIE
Ensamblaje sobre
core promoter
TFIIH
reutilización
Señal de
terminación
Helicasa de TFIIH:
Precisa
Mediator
Complejo
enhanceosoma
• PIC abierto
• Molde expuesto
pTEFb
Elongación
Quinasa de TFIIH:
• Fosforilación múltiple en CTD
• Activación de RNApol II
• Disociación de TFIID/TBP-TFIIB
2013 Enrique Castro
Desalojo del promotor
marca inicio
Factores
generales
disociados
Liberación de
TFIIE/H
19
Procesamiento del mRNA eucariótico
Procesamiento del mRNA eucariótico
• Simultáneo a la elongación
• Factores reclutados por p-CTD
PIC
Reclutamiento de la
capping enzyme
Caperuza formada en la
la transición iniciación-elongación
(mRNA naciente 20-40 Nts)
Requiere desfosforilación en Ser-5
Reclutamiento de la
maquinaria de splicing
(RNPs)
Reclutamiento de la
maquinaria de corte
y poliadenilación
capping
enzyme
maquinaria
de splicing
(RNPs)
Requiere fosforilación en Ser-2
por pTEF2b(quinasa)
mRNA/RNPs
2013 Enrique Castro
20
Procesamiento del mRNA: Formación de la caperuza 5’
Procesamiento del mRNA: Formación de la caperuza 5’
Funciones de la caperuza:
 Protección de 5’exonucleasas
 Exportación del núcleo
 Reconocimiento por ribosomas
Capping
enzyme
Síntesis:
 Durante iniciación-elongación (25-30 nts)
 Enzima ligada a CTD-P de RNApol II
21
2013 Enrique Castro
Terminación de transcripción: corte y poliadenilación
Terminación de transcripción: corte y poliadenilación
 Señal de terminación en DNA/transcrito:
 Reclutamiento de endonucleasa
 Corte del transcrito termina la acción de RNApolII
 Catalizado por componentes RNP
G/U
Sitio de
corte
10-30 nts 20-40 nts
G/U
RNApolII con
RNA acortado:
desensamblaje
AAUAAA
Rica en G/U
muy conservada
muy degenerada
Une CPSF
Une CstF
Structural biology of poly(A) site definition.
Yang Q, Doublié S. Wiley Interdiscip Rev RNA. 2011 2(5):732-47.
80-250 nts
2013 Enrique Castro
22
Procesamiento del mRNA: poliadenilación 3’
Procesamiento del mRNA: poliadenilación 3’
CPSF forma
complejo inestable
con AAUAAA
Previene
terminación
por RNApol II
Corte señala
terminación a
RNApol II
Unión de CFI y CFII
complejo estable unido a
señales de terminación
CStF se une a G/U
Liberación de
factores
Se recluta poli-A
polimerasa
Poliadenilación lenta
Reclutamiento
de PABII
Unión de PAP
activa endonucleasa:
corte 3’ de AAUAAA
PABII
estimula a PAP
Poliadenilación rápida
23
2013 Enrique Castro
Intrones eucarióticos: gen y mRNA de la ovoalbúmina de pollo Intrones eucarióticos: gen y mRNA de la ovoalbúmina de pollo Intrones: bucles extra
(no codificante)
mRNA maduro
DNA genómico
DNA genómico del gen de ovoalbúmina
hibridado a su mRNA
 Exones:
 Elemento funcional
 Dominio estructural
 Variabilidad/combinatoria
30-100 aa
 Intrones:
 Señales de control
 Variabilidad/combinatoria
100-20.000 nts
3’UTR
5’UTR
2013 Enrique Castro
1158 nts (386 aa)
24
Estructura
Estructura de
de los
los intrones
intrones
 Señales identificadoras




1: Límite 5’: GU
2: Punto de ramificación (A), a 20-50 pb de 3’
3: Región rica en pirimidinas (≈15 pb)
4: Límite 3’: AG
1
2
3
4
Intrón
Punto de
ramificación
Exón 5’
A/C A G GU A/G A G U
70 60 80
Frecuencia de
aparición, %
Exón 3’
20-50 pb
100
U A/G A C/U
95 70 80 45
90 80 100 80
Señal GU:
Sitio de
empalme 5’
Zona rica
en Pir
100 –
20000 pb
C AG G
80 100
60
Señal AG:
Sitio de
empalme 3’
 Corte y empalme:
A partir de bordes 5’GU y AG3’
Punto de ramificación es esencial
Exclusivamente en el núcleo
El sustrato de splicing es transcrito+caperuza+poli-A
Catalizado por partículas snRNP
(espliceosoma)
 snRNAP reclutadas por CTD-P de RNApol II





25
2013 Enrique Castro
Splicing: Corte y empalme de intrones
Splicing: Corte y empalme de intrones
2 reacciones de
trans-esterificación sucesivas
Exón 1 (5')
Pre-mRNA
Autocorte:
• Tipo I algunos rRNA, rRNA
• Tipo II (plantas, hongos)
No autocorte:
1ª trans-esterificación.
2’-OH de A ataca pGU 5’
• Genes estructurales
• tRNAs
Requieren catalizador: snRNP
“Lazo”: blucle cerrado
covalentemente.
Enlace 2’A-5’G
2ª transesterificación.
3’-OH de exón 1 ataca AGpX
Exones ligados en
orden
Degradado
rápidamente
2013 Enrique Castro
Exón 1 (5')
Exón 2 (3')
26
Procesamiento de intrones; estructura y función de snRNPs
Procesamiento de intrones; estructura y función de snRNPs
 Partículas snRNP
 Catalizan splicing
 ≈ 5 snRNAs
U1, U2, U4, U5, U6 (U11,U12)
100-200 nts. muy conservados
 ≈ 50 proteínas
 Ensamblaje requiere ATP
 Reclutados por CTD-P de
RNApol II
RNPn : generales y específicas
Motivos de unión a RNA
(RBD, RGG, KH)
RNP1, RNP2
U2:
unión al punto de ramificación
(o bien U12)
U1:
reconocimiento de 5’GU
(o bien U11)
Py
Centro de
ramificación
Borde 5'
 Funciones de Un snRNA
Rica Pir
Borde 3'
 Funciones de RNPs
 Hibridación: reconocimiento de señales
 Forman el lazo al reunir los extremos 5’ y 3’
 Catálisis de transesterificación: ribozimas





2013 Enrique Castro
Previene degradación snRNA
Previene plegamientos secundarios de RNA
Reconoce secuencias señal de control
Recluta otras proteínas
Transporte nucleocitoplasmático
27
Corte y empalme en el espliceosoma
Corte y empalme en el espliceosoma
U1 snRNP U2 snRNP
ADP+Pi
reutilización
Otros espliceosomas
usan U11 y U12
 Funciones de snRNA:
U1: une a extremos 5’ y 3’
U2: une a ramificación (catalítico)
U4: mantiene inhibido U6
U5: se une a 5’
U6: catalítico
Reordenamiento interno
(rehidridacion)
 Funciones EJC
Marcan RNA como procesado
Unión complejo de transporte
Reclutan exosoma (NMD)
U6 hibridado con U2 y
centro de empalme 5’
simultáneamente
Lazo RNA
degradado en
Exosoma
Depositado EJC
Carmody & Wenter (2009)
J. Cell Sci. 122, 1933-1937
2013 Enrique Castro
(20-24 nt upstream borde 5' )
EJC
28
Procesamiento alternativo de intrones
Procesamiento alternativo de intrones
 Promotores alternativos
 Hibridación: reconocimiento de señales
 Forman el lazo al reunir los extremos 5’ y 3’
 Catálisis de transesterificación: ribozimas
 Poliadenilación alternativa
 Hibridación: reconocimiento de señales
 Forman el lazo al reunir los extremos 5’ y 3’
 Catálisis de transesterificación: ribozimas
Exon skipping (4 no incluido)
29
2013 Enrique Castro
Procesamiento alternativo de intrones: modos
Procesamiento alternativo de intrones: modos
 Poliadenilación alternativa
 Hibridación: reconocimiento de señales
 Forman el lazo al reunir los extremos 5’ y 3’
 Catálisis de transesterificación: ribozimas
Isoformas proteicas
a medida de tejido
2013 Enrique Castro
30
Transcripción (RNApol I) y procesamiento de pre­rRNA
Transcripción (RNApol I) y procesamiento de pre­rRNA
SL1:multimérico
Transcripción de:
Activación e iniciación
NO requiere ATP
 rRNA cluster (18S, 5.8S, 28S)
Exclusivamente en nucleolo
TBP
Ensamblaje




UBF se une a UCE
Se une SL1 (TBP)
TIF-IB fosforilado une RNApol I
TIF-IB entrega RNApol I a SL1
RNApol I
UBF
rRNA promoter
+1
-150 -100 pb
Terminación por factor
específico unido en 3’
UCE
+1
Core element
Procesamiento
 Intensa metilación 2'OH
 Modificación covalente de bases
 Corte por snoRNPs
snoRNAs:
from genes & introns
Metilación 2'OH (≈100 b)
Conversión DHU, ψ
snoRNPs
(snoRNAs)
31
2013 Enrique Castro
Transcripción
Transcripción por
por RNApolIII
RNApolIII
Transcripción de:
A
Ensamblaje en promotor
Señales de control intragénicas (3')
4 tipos (según transcrito)
 TBP en TFIIIB (flexión de DNA)
Terminación
por señal poli-U
Unión TFIIIC a
A-box y B-box
Tipo I
Promotor tRNA
tRNAs
rRNA 5S
 RNAs pequeños (snRNAs, snoRNAs, 7S RNA SRP)
RNAs SINES
+1
tRNA
TBP
B
+1
rRNA 5S
C
Unión TFIIIA
a ICR
Elementos de
control internos
Tipo II
Promotor rRNA
(no horquilla)
TBP
Procesamiento de tRNAs
 Metilación
Ribozimas de corte
Sitio aceptor añadido
Splicing no espliceosomal
tRNA-nucleotidil transferasa.
molde interno: 3 sitios de unión
Schramm & Hernandez (2002)
Genes Dev. 16:2593-2620
ribozima
Intrón
2013 Enrique Castro
No en espliceosoma
mecanismo especial
32
Exportación de mRNAs al citosol
Exportación de mRNAs al citosol
Complejo mRNP




mRNA maduro (5'-cap, 3'-poli-A)
Proteínas CBC
Proteínas EJC
Proteínas hnRNP
sin intrones
desligado del espliceosoma
Con EJCs
hnRNP A1
EJCs
snRNPs exclusivas nucleares
(no se exportan)
NPC
transporta
activamente
Las proteínas son
exportadas.
mRNA va ligado
hnRNP A1 & EJCs
(retorna al núcleo)
No exportado = degradado
(e.g. talasemias)
Sistema de vigilancia
exosoma
(3’ exonucelasas)
mRNPs
PAB1
33
2013 Enrique Castro
Importación de proteínas RNPs
Transporte núcleo­citoplasma
Transporte núcleo­citoplasma
Importación de
factores citoplásmicos
Importación de RNPs
de ensamblaje en
citoplasma
Proteínas
RNP
snRNPs
Caperuza
adicional
Importación
activa
snRNA
snRNPs
nucleolo
núcleo
5S RNA
Exportación de
partículas pre-ribosómicas
Importación
de proteínas
18 S
Partículas
pre-ribosómicas
2013 Enrique Castro
28 S RNA
5.8 S RNA
5 S RNA
Subunidades
ribosómicas 34
Transporte citoplasma­núcleo: y proteínas G pequeñas (ran)
Transporte citoplasma­núcleo: y proteínas G pequeñas (ran)
Transporte unidireccional: ran
hnRNP A1
 Exportación sólo unido a Ran-GTP
(NLS hidrófoba)
 Ran-GTP transportada exclusivamente núcleo →citoplasma
 Distribución asimétrica de Ran-GEF/Ran-GAP
• Β-Importina une alta afinidad Ran-GTP
• [Ran GTP] alte en nucleoplasma
• Complejo αβ-importina disociado
(competición)
[Ran-GTP] 
GEF:
intercambio
GDP/GTP
Gradiente
de Ran-GDP
Gradiente
de Ran-GTP
[Ran-GDP] 
• Ran-GDP al núcleo
(a favor de gradiente)
Ran-GAP:
• β-Importina no une Ran-GDP
• β-Importina une α-importina & carga
• Complejo αβ-importina formado
Hidrólisis
de GTP unido
35
2013 Enrique Castro
Mecanismos de supervisión de RNA: núcleo
Mecanismos de supervisión de RNA: núcleo
Diferencias:
 Ran-GTP une transportador vacío
Importación es activa
Requiere factores adicionales
(NTF2)
Cada etapa puede fallar
Mecanismos QC en cada etapa
• 5' exonucleasa Rat1
• Debranching enzyme
• 3' Exonucleasa exosómica
2013 Enrique Castro
36
Mecanismos de supervisión de RNA: citoplasma
Mecanismos de supervisión de RNA: citoplasma
UPF
 Vigilancia/Control de calidad
• NMD codones stop prematuros
• NSD non-stop
• NGD no-go
EJC
UAA
Ribosoma pionero
elimina EJCs
Ribosoma
EJC
Ribosoma detenido en stop
Une eRF1, eRF2
Si queda cerca de EJC en 3'
Une UPF1-3
Recluta endonucleasa exosómica
mRNA codón stop prematuro
mRNA sin codón stop
Ski7 une al sitio A ribosoma
Libera mRNA
Recluta exosoma
Ribosomas detenidos en poli-A
RNA con estructura secundaria
Endonucleasa Dom34/Hbs1
Ribosomas detenidos (no-go)
Recambio constitutivo
 RNA dúplex (virus) / RNAi
• Dicer/RISC
37
2013 Enrique Castro
Degradación de RNA
Degradación de RNA
➢ 3' exonucleasa poli-A
• Actividad des-adenilasa (Ccr4/Caf1)
• Inhibida por PAB1
• Actividad lenta pero constante
Degradación lenta progresiva de cola poli-A
➢ Complejo Descaperuzante
•
•
•
•
Elimina cap
Inhibida por eIF-4E/eiF4G
Reclutada cuando poli-A corta
Permite Actividad 5' exonucleasa Xm1
Decapping actua sólo si
previamente acortada poli-A
➢ Exosoma
•
•
•
•
Complejo multiproteico hexamérico
3' exo- & endo-nucleasa
Degradación rápida y completa de RNAs
Nuclear/citoplasma
2013 Enrique Castro
38
Metabolismo citosólico del mRNA: vía rápida por señales AU
Metabolismo citosólico del mRNA: vía rápida por señales AU
Reclutamiento de
endonucleasa específica
Señales codificadas en
5’UTR y 3’UTR
2013 Enrique Castro
39