PE-M-26 Escherichia coli en agua

LABORATORIO BIO 9000
PROCEDIMIENTO PE-M-26
PARA LA
DETERMINACION DE ESCHE
ESCHERICHIA
COLI EN AGUAS
Rev. nº: 02
Fecha de revisión: 04/04/06
REV.
FECHA
HOJA/S
01
17/08/04
1a7
02
04/04/06
CAUSA DEL CAMBIO
Revisión completa y cambio de referencias a PG´s
Revisión completa
Realizado
Revisado
Aprobado
Fdo.: Fco. Miguel Rguez. Peña
Fecha: 04/04/06
Fdo.: Fco. Miguel Rguez. Peña
Fecha: 04/04/06
Fdo.: Juan Carlos Domínguez
Fecha: 04/04/06
PROCEDIMIENTO ESPECIFICO
ESPECIFICO
PE-M-26
PARA EL
Rev. 02
DETERMINACION DE ESCH
ESCHERICHIA
COLI EN AGUAS
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INDICE
1.-OBJETO
2.-ALCANCE
2.1.-Intervalo de trabajo
3.-REFERENCIAS
3.1.- Documentos utilizados para la elaboración de este PNT.
3.2.- Documentos a utilizar conjuntamente con este PNT.
4.-GENERAL
4.1. Introducción
4.2.-Nivel de riesgo
4.3.-Control de calidad
5.-DESCRIPCION
5.1.-Equipos y materiales
5.2.-Preparación equipo
5.3.-Procedimiento
6.-ANEXOS
I-Volúmenes de muestras recomendados para la prueba de Escherichia coli en
filtro de membrana.
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1.-OBJETO
Asegurar la calidad e integridad de los resultados obtenidos en el recuento de
Escherichia coli a partir de la técnica de filtración en membrana.
2.-ALCANCE
Determinación de E. coli en todo tipo de aguas (aguas potable, piscinas, Pozos,
manantiales, etc.) mediante la técnica de filtración en membrana.
2.1.-Intervalo de trabajo
Mediante la técnica de filtración en membrana es posible la determinación todas las E.
coli que posea una muestra (por muy alta o muy baja que fuera la cantidad de éstos en el
agua).
El nivel de detección de esta técnica es dependencia directa de la dilución de la muestra
(cantidad de agua filtrada).
3.-REFERENCIAS
3.1.-Documentos utilizados en la elaboración de este PNT.
- APHA-AWWA-WPCF (1989): Métodos Normalizados para el análisis de aguas
potables y residuales. Ed. Diaz de Santos, 17ºEdición. Madrid.
- Orden del 1 de Julio de 1987 por la que se aprueban los métodos oficiales de
Análisis Físico-Químicos para aguas potables de consumo público. BOE 163 de 9-71987.
- PG-01: “Gestión, elaboración y control de los documentos del sistema de la
calidad”. Procedimientos Generales Bio 9000.
- PG-03: “Organización”.
- R.D. 140/2003 de 7 de Febrero por el que se aprueba la reglamentación Técnico
Sanitaria para el abastecimiento y el control de la calidad de las aguas potables de
consumo público. BOE 45 de 21 de Febrero del 2003.
3.2.-Documentos a utilizar junto a este PNT.
- PE-EQ-15: “Procedimiento para el funcionamiento, mantenimiento y control de la
bomba de vacío”.
- IT-07: "Instrucción para la realización de filtración de membrana"
- IT-01: "Procedimiento para la preparación de los medios de cultivo".
- Ver la ficha de elaboración del medio de cultivo descrita por el fabricante.
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4.-GENERAL
4.1.-Introducción
Escherichia coli es huésped constante del intestino del hombre y de los animales de
sangre caliente. Por su especificidad está considerado como buen índice de contaminación
fecal. Tiene el inconveniente de vivir poco tiempo en el ambiente extraentérico, por lo que su
presencia en las aguas indica contaminación reciente.
4.2. Nivel de Riesgo.
No existe riesgo en la determinación de E. coli por filtración en membrana, siempre que
se trabaje de acuerdo a las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL).
4.3.-Control de calidad
Periódicamente se realizan controles positivos y controles negativos.
Control positivo: A partir de una cepa patrón (de la Colección Española de Cultivos
Tipos) de Escherichia coli se realiza una solución en medio acuoso. Se hace un recuento de
ufc/ml mediante siembra en placas de PCA a partir dilución en tubos. En función de éste se
seleccionan los tamaños de la muestra a filtrar. Se incuban las placas y se procede al cálculo
de recuperación de Escherichia coli del medio.
Control negativo: A una cantidad determinada de suero fisiológico estéril se le inocula
una cepa patrón (de la Colección Española de Cultivos Tipos) de una enterobacteriaceae
coliforme (Klebsiella spp.). Se hace un recuento de ufc/ml mediante siembra en placas de
PCA a partir dilución en tubos. En función de éste se seleccionan los tamaños de la muestra a
filtrar. Se incuban las placas y se comprueba la ausencia de coliformes fecales en la muestra.
5.-DESCRIPCION
5.1.-Material y Equipos
-Equipo de filtración
-Bomba vacío
-Pinzas de filtración
-Filtros de 0.45 µm
-Agua destilada estéril
-Medio Rebecca agar en botes 200 ml.
-Mechero Bunsem
-Muestra de agua.
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5.2.-Preparación de la muestra
Antes de proceder a la filtración de la muestra hay que seleccionar el tamaño de la
muestra. (Ver anexo I).
Se utilizarán volúmenes que produzcan recuentos de 20-60 colonias E. coli por
membrana.
Cuando se ignore la densidad bacteriana de una muestra, se filtrarán varios volúmenes
decimales para establecerla. Calcúlese el volumen que se espera de una membrana contable y
elíjanse dos cantidades adicionales que representen una décima parte y diez veces el volumen
señalado.
5.3.-Procedimiento
Proceder tal y como se describe en el PNT de filtración en membrana.
Una vez realizada la filtración colocad el filtro sobre una placa de Rebecca agar e
incubarla a 37ºC durante 24 horas.
5.4.-Tratamiento de resultados
Recuento:
La típica colonia de E. coli en el medio Rebecca agar es aquella que adquiere un color
azul.
Calculo de la densidad de E. coli:
Comúniquese la densidad de E. coli como el total de E. coli por 100 ml. Calcúlese el
recuento utilizando filtros de membrana que tengan 20-60 colonias de E. coli y no más de 200
colonias de todos los tipos por membrana, y aplicando la siguiente ecuación:
Colonias de coliformes fecales/100 ml = Colonias de E. coli contadas x 100
ml de muestra filtrados
6.-ANEXOS
I-Volúmenes de muestras recomendados para la prueba de E. coli en filtro de
membrana.
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ANEXO I
VOLÚMENES DE MUESTRAS RECOMENDADOS PARA LA
PRUEBA DE ESCHERICHIA COLI EN FILTRO DE MEMBRANA
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Volúmenes de muestras recomendados para la prueba de Escherichia
coli en filtro de membrana
Volumen a filtrar (ml)
Lagos, pantanos
Pozos, manantiales
Toma suministro agua
Aguas naturales de baño
Pl. tratamiento aguas residuales
Charcas de granjas, rios
Torrenteras
Alcantarillado no tratado
Desagüe de establos
100
50
X
X
X
X
X
X
10
1
X
X
X
X
X
X
X
X
0.1
0.01
0.001
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X
X