Trabajo presentado

El cultivo in vitro de las Orchidaceae en Andalucía
Laura Plaza1, Begoña Garrido1, Carmen Rodriguez-Hiraldo2 & Jose Algarra1
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Agencia de Medio Ambiente y Agua. Consejería Medio Ambiente. Junta de Andalucía ([email protected])
Departamento de Flora y hongos. Consejería de Medio Ambiente
La Consejería de Medio Ambiente de la Junta de Andalucía puso en marcha en el año 2009 el Proyecto de Bulbosas y Orchidaceae en Andalucía para la
recuperación y protección de este grupo de plantas tan vulnerables. El inicio del Proyecto ha requerido la puesta a punto de nuevas técnicas de cultivo. Así, en
el año 2009 se inició en el Laboratorio de Propagación Vegetal la puesta en marcha de un método de multiplicación de Orchidaceae mediante la germinación
asimbiótica de semillas maduras e inmaduras.
Introducción
En Andalucía existe una gran riqueza en este grupo de plantas, apareciendo 58 especies diferentes, estando incluidas dos de ellas incluidas en la Ley 8/2003 de la Flora y de la Fauna
Silvestres de Andalucía. El objetivo de la propagación de las orquídeas consiste en la producción de planta tanto para actuaciones de conservación en el medio natural (refuerzos,
introducciones y reintroducciones en la naturaleza) como para las colecciones de la Red Andaluza de Jardines Botánicos, además de generar conocimiento sobre la compleja propagación
de este grupo.
Material y Métodos
El material empleado para los distintos ensayos procede tanto de cápsulas maduras como de cápsulas inmaduras. Las semilals procedentes de cápsulas maduras fueron recolectadas
entre los años 2004 y 2009 por el personal de la Red Andaluza de JJBB y conservadas a 5ºC hasta el momento de su siembra
Las semillas maduras se esterilizan en hipoclorito cálcico al 2%, añadiéndole una gota de Tween-20 para favorecer la impregnación. En el caso de las semillas inmaduras se esterilizan las
cápsulas (aún sin abrir) con hipoclorito sódico y una vez esterilizadas se separan de la placenta con ayuda de una aguja o bisturí.
La siembra se ha realizado en placas petri de 9 cm de diámetro, a una temperatura de 23 ºC y condiciones de oscuridad. El medio de cultivo empleado ha sido BM1 de ® Phyto Technology
Laboratories.
Una vez que se ha producido la germinación y se inicia el desarrollo del protocormo, estos fueron individualizados y
pasados a un estado de vernalización (condiciones de frío a 4ºC) por un periodo que ha oscilado entre 3 y 4 meses.
TAXÓN
LRA 2005 Ley 8/2003
PLANTACIÓN
Dactylorhiza elata
Dactylorhiza markusii
Dactylorhiza sulphurea
Epipactis lusitanica
Epipactis microphylla
Ophrys atlantica
Ophrys speculum subsp. lusitanica
Ophrys scolopax
Orchis cazorlensis
Orchis laxiflora
Serapias parviflora
DD
DD
DD
DD
DD
DD
-
VU
EN
-
Tras pasar este periodo de vernalización, los protocormos vuelven a unas
condiciones de 23ºC y un fotoperiodo de 16 horas luz/8 horas oscuridad.
Resultados
Una vez realizada la siembra, se ha realizado el
seguimiento en sus fases iniciales cada 10-15 días,
tomándose los porcentajes de plántulas en cada uno
de los siguientes estadios:
1: germinación de la semilla con ruptura de la testa.
2: Producción de rizoides.
3: producción del primordio folial
(basado en Pritchard, 1989; p. 40).
Ophrys speculum subsp. lusitanicum
Serapias parviflora
Dactylorhiza markusii: semillas, germinación y plántulas
En la tabla siguiente se incluyen algunos de los
resultados obtenidos hasta el momento:
TAXÓN
N: número de lotes ensayados
Semillas: si se han empleado semillas procedentes
de cápsulas Maduras (M) o de cápsulas Verdes (V)
Año: años de colecta de los lotes empleados en los
ensayos
T0: día a partir del cual se ha observado la
germinación, se incluyen los valores máximos y
mínimos para cada especie.
Ophrys atlantica
Dactylorhiza elata
Dactylorhiza markusii
Dactylorhiza sulphurea
Epipactis lusitanica
Epipactis microphylla
Ophrys atlantica
Ophrys speculum subsp. lusitanica
Ophrys scolopax
Orchis cazorlensis
Orchis laxiflora
Serapias parviflora
N Semillas
1
1
2
2
1
9
4
1
1
1
1
M
V
MyV
M
M
MyV
MyV
V
V
V
M
Año
2005
2009
2004 y 2009
2004 y 2009
2010
2010 y 2009
2010
2009
2009
2009
2009
T0 Min T0 Max
41
13
27
20
28
18
24
13
20
45
41
20
82
20
107
32
24
20
20
66
Ophrys speculum subsp. lusitanicum
Ophrys speculum subsp. lusitanica
Conclusiones
Ophrys speculum subsp. lusitanicum
•En todos los ensayos realizados se ha podido observar la germinación en los 45 días siguientes a la siembra
•Hasta el momento se ha obtenido la germinación de 11 taxones y se ha conseguido la formación del protocormo en 5 de ellos, siendo destacable el buen desarrollo
obtenido en Ophrys speculum susbps lusitanicum incluida en la Ley 8/2003 con la categoría de En peligro
•Aún se tiene que trabajar en la fase de endurecimiento y paso a tierra, ya que hasta el momento esta fase no ha dado resultados satisfactorios
•Las principales dificultades encontradas hasta el momento son el lento crecimiento que presenta, la contaminación por hongos que se ha tenido y la pérdida de material
que esto conlleva, así como dar el paso final de endurecimiento y crecimiento en tierra.