HCV

PORQUE BUSCAMOS LA HEPATITIS C?
ESTE INDIVIDUO TIENE HCV?
ESTA PERSONA (POTENCIAL DONANTE DE SANGRE)
PUEDE ESTAR EXPUESTO A HCV ?
QUE EFECTOS TIENE LA INFECCION POR HCV EN
EL HIGADO?
CUAL ES LA PROBABILIDAD QUE EL TRATAMIENTO
SEA EFECTIVO EN ESTE PACIENTE?
EXISTEN TRATAMIENTOS EFECTIVOS?
QUIENES SON LOS CANDIDATOS A
ESTUDIAR EL HCV ?
1- AQUELLOS QUE TIENEN FACTORES DE RIESGO PARA
LA INFECCION POR HCV
2- AQUELLOS CON RESULTADOS DE SU FUNCION
HEPATICA ANORMAL
3- LOS DONANTES DE SANGRE
4- PACIENTES INFECTADOS CON TERAPIA ANTIVIRAL
IMPACTO DE LA INFECCION
HISTORIA NATURAL DE LA HEPATITIS C
GRAN COHORTE DE PACIENTES
AMBOS SEXOS Y DE DIFERENTES ETNICIDAD
FECHA DE INFECCION: HEPATITIS C AGUDA
SIN TRATAMIENTO
CONOCIMIENTO DE COFACTORES
ESTRATEGIAS PARA EL ESTUDIO DE
LA HISTORIA NATURAL DE HCV
INFECCION INICIAL
FASE TEMPRANA
HEPATITIS CRONICA
FASE TARDIA
HEPATITIS CRONICA
(CIRROSIS)
20 A 40 AÑOS
ESTUDIOS RETROSPECTIVOS
ESTUDIOS PROSPECTIVOS
ESTUDIOS RETROSPECTIVOS - PROSPECTIVOS
Leonard Seeff 2002; Hepatology
DINAMICA DE LA INFECCION
TEMPRANA POR HCV
INFECCION POR HCV
CLEARANCE VIRAL
TRANSMISSION
PATOGENESIS
PERSISTENCIA VIRAL
HCV RNA 4-7 log
Doubling Time Viral :10,8 a 17 horas
SCREENING SEROLÓ
SEROLÓGICO
Concentración Relativa
Ag/Ac 4ª
Período de Ventana Serológica
Anti-HCV 3ra
Infección
Anti-HCV 2da
Anti-HCV 1ra
0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110
Eclipse
Días
ALGORITMO
DIAGNÓSTICO
Relación
S/CO
-
EIA para Anti
HCV
NEGATIVO
+
Alto
S/CO
RIBA Anti
HCV
Bajo
S/CO
POSITIVO
NEGATIVO
IND
INDETERMINADO
+
POSITIVO
Evaluación
adicional
(PCR, ALT, etc)
Alter et al, Recommendations and Reports, CDC,2003
RT-PCR
HCV
+
SCREENING SEROLÓ
SEROLÓGICO
ELISA
CORE
E1 E2 NS1 NS2
NS3
NS4
NS5
80%
c100-3
1º
2º
C22-3
3º
C22-3
c200
c200
S
95%
NS5
97%
La Pregunta Inicial
¿Falso positivo?
Pacientes sanos
No antecedentes parenterales
ALT normal
Anti--HCV (+)
Anti
Pruebas Suplementarias:
RIBA-LIA
HCV RNA
Transfusiones o drogas IV
Incremento de ALT
Enfermedad hepática
¿Verdadero positivo?
Limitaciones del Anti-HCV
No mide la presencia de virus circulante
No distingue entre infección aguda,
crónica o resuelta
Es negativo en alrededor del 10% de los
pacientes con infección crónica C
No es útil para el diagnóstico de infección
aguda (seroconversión en semanas)
En poblaciones de bajo riesgo la tasa de
resultados falsos positivos es alta
EN LOS INMUNOENSAYOS
MUESTRAS QUE PERMANECEN POSITIVAS Y QUE SON
NEGATIVAS POR UN TEST CONFIRMATORIO
INESPECIFICA O FALSA REACTIVIDAD
FALSOS POSITIVOS O BFR
2- LAS CAUSAS
INMUNOENSAYOS
La causa primaria de BFR es la reactividad de anticuerpos
No específicos ya sea contra epitopes virales o no virales
contaminantes
Vacunación contra FLU o Rabia
Infecciones agudas recientes o Alergias
Agentes relacionados inmunologicamente
CARACTERISTICAS DE LOS BFR
1- RELACIONADOS AL ENSAYO
2- CAMBIOS DE LA TASA DE BFR CON LOS LOTES
3- VARIACIONES DE BFR DEBIDO A LAS MODIFICA
CIONES DEL ENSAYO
4- RESULTADOS DE BFR TRANSITORIO
5- LA SEÑAL S/CO
CARACTERISTICAS DE LOS BFR
5- LA SEÑAL S/CO
ENSAYOS DE MICROPLACAS
HCV
BFR S/CO : 1.524
ANTI HCV (+)/ RNA (-) S/CO: 4.546
ANTI HCV (+) RNA(+) S/CO: 6.467
ENSAYOS EN TUBOS
MÉTODOS SUPLEMENTARIOS
RIBA O LIA
Mayor Especificidad y menor Sensibilidad
que EIA de 3º Generación
LUDWIG VAN BEETHOVEN – 1770-1827
El término música clásica es un amplio, a veces
impreciso, término que se refiere a la música producida
o arraigada en la tradición
INTERPRETACION
La Biología Molecular es una ciencia cuyo objetivo
fundamental es la comprensión de todos aquellos
procesos celulares, que contribuyen a que la información
genética se transmita eficientemente de unos seres a
otros, y se exprese en los nuevos individuos.
INTERPRETACION
MUSICA CLASICA
ORQUESTA
VIOLINES, VIOLAS, FLAUTAS,
VIOLONCELOS CONTRABAJO,
OBOE, FAGOT, CLARINETE
OBRA MUSICAL
(SINFONIA)
LA BIOLOGIA MOLECULAR
ENSAYOS
HIBRIDACION, CLONACION
PLASMIDOS, TRANSFECCION
AMPLIFICACION DE ACIDOS
NUCLEICOS, SATELITISMO
HEPATITIS C
SINFONIA
HEPATITIS C
1º Allegro
Replicación y Persistencia
2º Adagio o Andante
Interacción con el SI
3º Minuetto o Scherzo
Mutaciones
4º Allegro Finale o Rondó
Carga Viral
CARGA VIRAL HCV
EL MOVIMIENTO DE ESTA SINFONIA : NAT
LOS INSTRUMENTOS : PCR CUANTITATIVA
TMA
REAL TIME PCR
bDNA
ARMONIA : LOS ACORDES
LIMITE DE DETECCION Y CUANTIFICACION
Utilidad Clínica del HCV RNA
Marcador directo de replicación viral
Diagnóstico de infección aguda
Diagnóstico de infección oculta
Transmisión vertical
Transmisión por órganos sólidos
Recurrencia de HCV post-trasplante
Confiabilidad de los productos sanguíneos
Accidentes de trabajo
Monitoreo del tratamiento antiviral
¿Para qué sirve la carga viral de HCV?
Para estimar la respuesta al tratamiento
antiviral
Para evaluar la respuesta virológica
precoz (12 semanas de tratamiento):
HCV RNA negativo o ↓ >2 log
¿Qué valor tienen la carga viral para
evaluar la severidad o el pronóstico
de una hepatitis crónica C?
Ninguno fehacientemente comprobado
Tecnología Real time
Taqman
Syber Green
Easy Q (Molecular Beacon)
A. Martinez-Lab Virología-CEMIC
REAL TIME PCR
Sondas de hibridización
Molecular
beacons
Syber Green
HCV RNA
Tecnología Taqman
Journal of Molecular Endocrinology (2000) 25,169-193
HEPATITIS VIRALES-CARGA VIRAL
REAL TIME PCR :
BAJA CONTAMINACION
AUMENTO DEL RANGO DINAMICO : LOG DE 8 O 9
BAJO LIMITE DE DETECCION
RESULTADOS EN UI/mL
REPRODUCIBILIDAD – HIT RATE 95%
“Workflow” 48 muestras
DIA 2
DIA 1
9:00 10:00 11:00 12:00 13:00 14:00 15:00 16:00 9:00 10:00 11:00 12:00 13:00 14:00 15:00 16:00
PCR
Extracción, automatizada
Amplificación
RT
Extracción, automatizada
Amplificación
Detección
Detección
SCOTT JD, GRETCH DR. JAMA 2007; 21:724-732
ENSAYOS MOLECULARES PARA HCV
•NASBA HCV QT
(BIOMERIEUX) 278 UI/mL
•Procleix HIV 1/ HCV
(Gene Probe ) 5 UI/mL
•AmpliScreen HCV
(Roche) 50 UI/mL
HCV RNA CUANTITATIVO
MONITOREO TRATAMIENTO
SCOTT JD, GRETCH DR. JAMA 2007; 21:724-732
* LOS ENSAYOS MOLECULARES DEBEN ESTAR VALIDADOS
* LOS ENSAYOS MOLECULARES: ESTANDARIZADOS
* LOS ENSAYOS MOLECULARES: CONTROLES DE CALIDAD
* ENSAYOS MOLECULARES COMERCIALES : TRAZABILIDAD
PERO CUIDADO!!
CAP/ CTM
SOBREESTIMACION
DE LA CARGA VIRAL
SUBESTIMACION DE
LA CARGA VIRAL
GENOTIPO 2 (15%)
GENOTIPO 4 (30%)
PAWLOTSKY JM, 2007 Hepatology ;46: 22-31
LOS ENSAYOS DE BIOLOGIA MOLECULAR CONSTITUYEN
EL NUEVO PARADIGMA EN LAS HEPATITIS VIRALES
NUEVAS TECNOLOGÍAS : ARRAY LÍQUIDO (LUMINEX)
NUEVOS MARCADORES : cccDNA (HBV)
INTERPRETACION