Presentación de PowerPoint

CÉLULA-MATRIZ EXTRACELULAR
EN FPI
Vanesa Vicens Zygmunt
FISIOPATOLOGÍA
MEC
Fibroblastos/
Miofibroblastos
Mediadores
antifibróticos
PGE2, MMPs
MA
MI
CEA II
Mediadores
profibróticos
TGF-β1, IGF-1,
ET-1, PDGF,
TIMPs, KGF,
HGF, ROS,
Th1/Th2
CEA II
Vicens-Zygmunt, V.
El microambiente pro-fibrótico de la MEC contribuiría a los cambios fenotípicos
y de función celular --- perpetuación del proceso.
OBJETIVOS
Caracterizar el perfil proteico de la MEC en pulmones de
pacientes con FPI.
Desarrollar una matriz 3D in vitro que mimetice las
condiciones biomecánicas del pulmón FPI, que permita el
cultivo celular en su interior.
CARACTERIZACIÓN PROTEICA DE LA MEC EN FPI
Transcript
Reversa
RNA
cDNA
MICROARRAYS MEC
(84 prots)
qPCR
WB
Confirmación de proteïnas
IHQ
Localización de proteïnas
7 normal
17 FPI
Expresión
génica
DNA-MICROARRAYS
20 proteínas están
sobreexpresadas en
pulmón fibrótico
6 proteínas están
infraexpresadas en
pulmón fibrótico
Estany S, et al. BMC Pulm Med. 2014;14:120
Rt-PCR
Colágeno I y III
3,0
Ntx
FPI
* p<0,01
2,5
unitats arbitràries (rac BA)
Confieren
resistencia al
estiramiento
*
2,0
1,5
Responsables de la
degradación
de
la
MEC, de la mbna basal
y
del
remodelado
tisular.
1,0
0,5
1,6
l3
a1
co
l1
a2
co
l1
a1
0,0
co
Anclaje celular
a la membrana
basal
Proteínas de membrana basal
Metaloproteinasas
100
*
*
Ntx
FPI
1,2
* p<0,01
1,0
0,8
0,6
0,4
Ntx
FPI
80
unitats arbitraries (rac BA)
*
* p<0,01
60
*
40
*
*
20
0,2
*
P1
3
M
M
P1
2
M
M
P9
M
M
P7
M
M
P2
M
M
M
M
a3
La
m
a2
l4
P1
0
0,0
co
unitats arbitraries (rac BA)
1,4
Estany S, et al. BMC Pulm Med. 2014;14:120
RESULTADOS
Proteínas del intersticio pulmonar
Rt-PCR
Favorecen la
diferenciación celular,
adhesión y migración.
unitats arbitràries
(rac BA)
(rac BA)
arbitrarias
Unidades
5
Ntx
FPI
* p<0,01
*
4
*
3
2
1
N
C
0
VCAN
V
C
A
TN
TNC
WB
TNC
FPI
TNC/actin
Control
Actin
Control
FPI
Inmunohistoquímica
DESARROLLO DE UNA MEC 3D
COLÁGENO TIPO I con
FIBROBLASTOS en su INTERIOR
GLICACIÓN NO-ENZIMÁTICA
Grupo
amino
reversible
Proteína
(Colágeno)
irreversible
horas
Grupo
carbonil
(CHOH)4
días
Base de
Schiff
Productos de Amadori
irreversible
Semanas, meses, años
CH2OH
Azúcar reducido:
Glucosa/Ribosa
Advanced Glication End-products (AGEs)
AGE cross-links
DESARROLLO DE UNA MEC 3D
COLÁGENO TIPO I con
FIBROBLASTOS en su INTERIOR
GLICACIÓN NO-ENZIMÁTICA
PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D
PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D
Estructuras de las fibras de Colágeno I
PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D
Formación de AGEs
PROPIEDADES FÍSICO-QUÍMICAS DE LAS MEC 3D
Dureza
VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D
VIABILIDAD FIBROBLASTOS
VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D
VIABILIDAD CELULAR DENTRO DE LAS MEC 3D
video
CAMBIO EN EL FENOTIPO CELULAR
PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS DE MATRIZ (TNC)
EN CULTIVO 3D
MUCHAS GRACIAS!
Equipo ufip
Estany S, Vicens-Zygmunt V, Llatjós R, Montes A, Penin R, Escobar I, Xaubet A, Santos S, Manresa F,
Dorca J, Molina-Molina M. Lung fibrotic tenascin-C upregulation is associated with other
extracellular matrix proteins and induced by TGFβ1. BMC Pulm Med. 2014;14:120.
Vicens-Zygmunt V, Estany S, Colom A, Montes-Worboys A, Machahua C, Sanabria AJ, Llatjos R, Escobar
I, Manresa F, Dorca J, Molina-Molina M. Fibroblast viability and phenotypic changes within glycated
stiffened three-dimensional collagen matrices. Respir Res. 2015;16:82.
Proyecto financiado por: ISCIII-FIS, SEPAR, SOCAP, FUCAP