16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968 - Instituto Nacional de Pediatría
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16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968 - Instituto Nacional de Pediatría
Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-01 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 1 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de los Procesos necesarios para el sistema de gestión de la calidad Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Guillermo Escamilla Guerrero Nombre: M. Leticia Medina Macias Nombre: Dinora V. Aguilar Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: 16 enero 2012 Fecha: 16 enero 2012 16 enero 2012 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 Página 1 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 2 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 26/08/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 3 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que al donador se le toma la muestra (Ver procedimiento CAL-43) se procede a caracterizarlo inmunohematológicamente abarcando los siguientes estudios: 1. Grupo sanguíneo (Sistema ABO) 2. Subgrupo sanguíneo (Sistema A) 3. Grupo sanguíneo (Sistema Rho) 4. Determinación del Du 5. Fenotipo Rho (EeCc) 6. Rastreo de Anticuerpos irregulares fuera de Sistema ABO (semipanel o panel completo) 7. Hemolisinas 8. Chequeo de grupo sanguíneo (Sistema ABO & Rho) Los métodos para realizar estos ensayos (a excepción de las Hemolisinas) son: Método semiautomático Tubo Gel Método automático Gel Las pruebas de aglutinación establecen: HEMOLISIS: Indica una reacción positiva para la unión Antígeno – anticuerpo. AGLUTINACION: la presencia del par Antígeno y/o Anticuerpo complementarios relevante. NO AGLUTINACIÓN la ausencia de cualquiera de ellos. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 4 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos INTERPRETACION Y PONDERACIÓN DE LAS AGLUTINACIONES DESCRIPCION GRADO PONDERACION Hemolísis total Ht Botón completo, sobrenadante claro 4+ 12 Botón grande con algunos agregados, fondo claro 3+ 10 Botón fragmentado en varios grumos grandes, fondo 2+ 8 1+ 5 +/- 1 negativo 0 turbio Botón fragmentados en numerosos grumos regulares, fondo turbio Botón fragmentado múltiples grumos pequeños, fondo muy turbio Aglutinación no visible 1.- DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO La prueba consiste de dos etapas: Prueba directa o celular: eritrocitos estudiados desafiados contra antisueros comerciales de especificidad conocida Prueba inversa o sérica: suero estudiado desafiado contra eritrocitos de fenotipo conocidos CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 5 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos PRUEBA DIRECTA en tubo Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml aproximadamente de solución que contiene solución salina y solución de pHix + dos gotas de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%) Se realiza la prueba directa y la prueba inversa Para la prueba directa se requiere lo siguiente: Se identifican 4 tubos TUBO 1 Agregar una gota de reactivo Anti-A (suero de color azul) TUBO 2 Agregar una gota de reactivo Anti-B (suero de color amarillo) TUBO 3 Agregar una gota de reactivo Anti-AB (suero incoloro) TUBO T Agregar 2 gotas del plasma o suero del donador Adicionar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a 3500RPM Se realiza un ligera agitación para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscópica para observar si existe o no aglutinación Registrar resultados en el formato F-A-14-26 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 6 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos PRUEBA INVERSA en tubo Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O Células de fenotipo conocido preparadas a una concentración del 2-5% TUBO A1 Agregar una gota de celulas A1+ 2gotas del plasma del donador TUBO A2 Agregar una gota de celulas A2 + 2gotas del plasma del donador TUBO B Agregar una gota de celulas B + 2gotas del plasma del donador TUBO O Agregar una gota de celulas O + 2gotas del plasma del donador Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza un ligera agitación para desprender el botón de celulas Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación Registrar resultados en el formato F-A-14-26 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 7 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Formato F-A-14-26 que es llenado por el personal de área de donadores: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 8 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Tabla 1 Prueba Directa GRUPO SANGUINEO ANTIGENOS PRESENTES EN LOS ERITROCITOS ANTICUERPOS PRESENTES EN SUERO O PLASMA A A Anti - B B AB O GRUPO A B AB O CAL-02-B Anti-A POST NEGT POST NEGT B AyB ni A ni B INTERPRETACION Prueba DIRECTA Tubo con Antisuero Anti-B Anti-AB Testigo A1 NEGT POST NEGT NEGT POST POST POST NEGT POST POST NEGT NEGT NEGT NEGT POST NEGT Anti - A ----Anti – A & Anti - B Prueba INVERSA Tubo con céluas: A2 B NEGAT POST POST NEGT NEGT NEGT POST POST O NEGAT NEGT NEGT NEGT Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 9 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos De forma Manual: GRUPO SANGUIENO SABO EN GEL Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Y se puede introducir al equipo WADiana o realizarlo de forma manual. Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solución de DianaSol 1 con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%) Se realiza la prueba directa y la prueba inversa Empleo de tira del DianaGel Donors/Donantes ver imagen INVERSA MICROTUBOS 7y8 colocar 50 l de eritrocitos reactivos (Serigrup Diana A1 y B) con 50 l del suero o plasma del donador DIRECTA MICROTUBOS 1, 2, 3, 4, 5, y 6 colocar 25 l de solución de eritrocitos del donante Centrifugar en DianaFuge (ver imagen) Leer La lectura puede ser visual o en el DianaScanner (equipo WADiana) (ver imagen) Interpretación (Acorde a la imagen presentada) Registrar resultados en el formato F-A-14-26 o mandar impresión CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 10 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos A1 B # donador: Fecha: Iniciales y clave de quien realizó: S.ABO CAL-02-B S.Rho AT INVERSA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 11 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos 2. SUBGRUPOS SANGUINEOS (SISTEMA ABO) Para realizar la prueba de Lectina A1 y H se requiere lo siguiente: Marcar 1 tubo con la letra A1 (Anti-A1) y otro con la letra H (Anti- H) TUBO A1 Agregar 1 gota del reactivo Anti-A1 Lectina TUBO H Agregar 1 gota del reactivo Anti-H Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación y se interpretan los resultados Registrar resultados en el formato F-A-14-26 abla # 2 Subgrupo SABO CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 12 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos 3.- DETERMINACION DEL FACTOR Rh GRUPO SANGUIENO Rho en tubo Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml de solución salina con amortiguador de Phix con dos gotas de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%) Marcar un tubo con la letra Rh (anti D) y otro con la letra C (control) TUBO D agregar una gota del antisuero comercial Anti - D TUBO C Agregar una gota del reactivo Control Rh ó ALB 22% Agregar una gota de suspensión al 2-5% de eritrocitos del donador Centrifugar 45 segundos/3500RPM Leer resuspendiendo con movimiento suave el botón. Interpretación acorde a la aglutinación presente NO AGLUTINACION Rh neg (D-) AGLUTINACION Rh post (D+) Registrar resultados en el formato F-A-14-26 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 13 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos 4. Determinación del Du SI la prueba Anti-D es NEGATIVA Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos a 37 C Centrifugar e Interpretar Positiva Negativa Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica. Se decanta la salina por completo en la última lavada Agregar una gota de suero de Coombs poliespecífico (anti IgG-C3d) Centrifugar e interpretar Positiva Negativa El resultado se considera Rh+ ( D+) El resultado se considera Rh- y Du+ ( para fines de transfusión se considera : donadores Rh+ receptores Rh- Rh - (D-) Registrar resultados en el formato F-A-14-26 La determinación del grupo ABO en la tarjeta de Gel conlleva la determinación del anti D y el Du Los resultados de Rh negativo en gel se confirman con el Anti D Totem (anticuerpo policlonal dirigido contra las 6 fracciones del Antígeno D: I – VI) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 14 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos 5. FENOTIPO Rho (EeCc) : Marcar la tarjeta con el número del donador que le corresponde Hacer un suspensión de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra) Añadir 25 microlitros de la suspensión de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e (Ver imagen) Centrifugar en DianaFuge y leer manual (Tabla 3A, 3B, 3C) Registrar los resultados en el formato F-A-14-23 Interpretación de fenotipo Rh Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Fenotipo: CcE CAL-02-B Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Fenotipo: CEe Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 15 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos FORMATO F- A – 14 – 23 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 16 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Tabla 3B Fenotipo Rh REACCION SEROLOGICA ANTI FENOTIPOS GENOTIPO D C c E e WIENER FISHER DCe/dce + + + - + R1r DCcee DCe/DCe + + - - + R1R1 DCCee DcE/dce + - + + + R2r DccEe DcE/DcE + - + + - R2R2 DccEE DCe/DcE + + + + + R1R2 DCcEe dce/dce - - + - + rr ddccee Dce/dce + - + - + R0r Dccee dCe/dce - + + - + r'r ddccee dCe/dCe - + - - + r'r' ddccee dcE/dce - - + + + r" r ddccee dce/dcE - - + + - r" r " ddccEE dCe/dcE - ++ + + + r' r" ddCcEe DCe/DCE + + - + + R1RZ DCCEe DcE/DCE + + + + - R2RZ DCcEE DCE/DCE + + - + - RZRZ DCCEE dCE/dCe - + - + + r y y' ddCCEe dCE/dcE - + + + - r y r" ddCcEE dCE/dCE - + - + - ryry ddCCEE CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 17 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Tabla 3C Fenotipo Rh ANTI- CAL-02-B FENOTIPO GENOTIPO PROBABLE D C E c e WIENER FISHER- RACE WIENER FISHER- RACE + + - + + Rh1rh DCe R1r DC/dce + + - - + Rh1Rh1 DCe R1R1 DC/dce - - - + + rhrh ce rr Dce/dce + + + + + Rh1Rh2 DCcEe R1R2 DC/DcE + - + + + Rh2rh DcEe R2r DcE/dce + - + + - Rh2Rh2 DcE R2R2 Dce/DcE + - - + + Rh rh Dce Ror Dce/dce - + - + + rh´rh Cce r´r dC/dce - - + + + rh´rh cEe r"r dce/dce Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 18 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos 6.- DETERMINACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES SISTEMA ABO (SEMIPANEL O PANEL COMPLETO) FUERA DEL A todas las mujeres, personas politransfundidas y personas Rh negativos se les realiza la siguiente prueba: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 19 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES FUERA DE SISTEMA ABO, EMPLEANDO PANEL TRIO Se marcan los tubos con # del 1 al 3 con su respectivo duplicado y un tubo más con una T (testigo) y con su duplicado En cada tubo se coloca: TUBO 1 1 gota de Gamma Trio #1 + 2 gotas de suero del donador TUBO 2 1 gota de Gamma Trio #2 + 2 gota de suero del donador TUBO 3 1 gota de Gamma Trio #3 + 2 gota de suero del donador TUBO T 1 gota De suspensión de eritrocitos del donador + 2 gota de suero del donador TUBO 1’ 1 gota de Gamma Trio #1 + 2 gotas de suero del donador TUBO 2’ 1 gota de Gamma Trio #2 + 2 gota de suero del donador TUBO 3’ 1 gota de Gamma Trio #3 + 2 gota de suero del donador TUBO T’ 1 gota De suspensión de eritrocitos del donador + 2 gota de suero del donador Se realiza una ligera agitación a cada uno de los tubos y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza la lectura macroscópica en salina rapida y reportar si existe aglutinación (Ver tabla 3A) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Los tubos #1, 2, 3 y T se incuban 22 C durante 60 minutos Los tubos # 1’, 2’, 3’ y T” se incuban a 37 C durante 30-60 minutos Se realiza la lectura macroscópica en frio para observar aglutinación (Ver tabla 4) y se desechan las muestras Centrifugar 30 seg. Antes de realizar la lectura macroscópica para observar aglutinación NEGATIVO Registrar resultados como Salina a 22 C en el formato F-A-14-23 POSITIVO Registrar resultados como Salina a 37 C en el formato F-A-14-23 Se lava con solución salina con pHix y se centrifuga durante 1minuto se realiza este procedimiento 3 veces (al decantar tener cuidado con el botón) en el último lavado decantar la salina por completo Agregar 1 gota de Anti-IgG-C3d Se realiza el panel completo con las diluciones de los eritrocitos del IMSS del Banco Central de Sangre del Centro Medico Nacional Siglo XXI Mezcle ligeramente, centrifuge y leer Ademas de POSITIVO Registar resultados como Salina Coombs y/ o CAGH en el formato F-A-14-23 NEGATIVO Se realiza la Prueba confirmatoria o CAGH (adición de células sensibilizadas con anti D) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 20 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Y la siguiente reacción en tarjeta: Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente: Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 3 y un T( testigo) Las células se preparan empleando 10 l de eritrocitos con 1 ml de solución Diana 2 MICROTUBO 1 Anadir 50 l de Gamma Trio 1 MICROTUBO 2 Anadir 50 l de Gamma Trio 2 MICROTUBO 3 Anadir 50 l de Gamma Trio 3 MICROTUBO T Anadir 50 l de eritrocitos del donador MICROTUBO 1, 2, 3 y T Anadir 25 l de plasma del donador Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Si es positivo se debe realizar el panel completo (10 -11 células del panel siglo XXI o comercial) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 21 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta con técnica LISS-gel se requiere lo siguiente: Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 10 u 11 y un T( autotestigo) 10 l EN CADA UNO DE LOS MICROTUBOS DE CADA UNA DE LAS CELULAS Y DEL TESTIGO Realizar una suspensión con 10 l de eritrocitos con 1 ml de DIANA 2 y adicionar a todos los microtubos 50microlitros CEL 1 CEL 2 CEL 3 CEL 4 CEL 5 CEL 6 CEL 7 CEL 8 CEL 9 CEL 10 CEL 11 MICROTUBO 1 al AutoTestigo Anadir 25 l de suero del donador Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 La interpretación se realiza contra la CARTA PANEL Tabla 4 Detección de Anticuerpos con reactivo Gamma TRIO 1, 2 y 3 Escanear imagen de carta panel del: CARTA PANEL DEL TRIO CARTA PANEL DE SIGLO XXI CARTA PANEL DE PANEL DIANA CAL-02-B AT Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 22 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos 7. HEMOLISINAS A las personas con grupo O se les realiza la siguiente prueba: Para realizar la prueba de Hemolisinas se requieren los tubos con células A1, A2, B y O de la prueba inversa y de el tubo AutoTestigo de la prueba directa Todos los tubos se incuban a 37 C/1hora y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis La Prueba es negativa cuando el líquido sobrenadante es de color claro y positiva cuando es de color rojizo Registrar resultados en el formato F-A-14-23 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 23 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos 8.- Chequeo de Grupo sanguíneo (Sistema ABO & Rho) CONFIRMACION DEL GRUPO SANGUIENO SABO EN GEL Se realiza la centrifugación del tubo PILOTO que se toma directamente de la bolsa de concentrado eritrocitario (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solución de DianaSol 1 con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%) Se realiza una prueba directa Empleo de tira del DianaGel Confirm (ver imagen) MICROTUBOS Ctrl colocar 50 l con 50 l del suero o plasma del donador DIRECTA MICROTUBTOS A, B, D, Ctrl colocar 25 l de solución de eritrocitos del donante Centrifugar en DianaFuge (ver imagen) Leer La lectura puede ser visual (ver imagen) Interpretación (Acorde a la imagen presentada) Registrar resultados en la libreta de RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A y pegar la impresión CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 24 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Libreta RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A # REGISTRO FECHA DE REALIZACION A B D CAL-02-B GRUPO DETECTADO IMAGEN Ctrl GPO REPORTADO DISCREPANCIAS REPORTA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 25 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos El formato F-A-14-26 se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 26 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos El formato F-A-14-26 se llena de la siguiente manera: Anti-A: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). Anti-B: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). Anti-AB: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). Auto (Testigo): Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). GR A1: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). GR A2: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). GR B: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). GR O: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). Lec. A1: Esta prueba se realiza solo en personas de grupo sanguíneo A. Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). Ant. H: Esta prueba se realiza solo en personas de grupo sanguíneo A. Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). Rh Anti-D: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 27 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos T Auto: Resultados Grupo: Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A) Escribir la letra del grupo donador. El formato F-A-14-23 muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 28 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos El formato F-A-14-23 se llena de la siguiente manera: Fecha: Día, mes y año en que se esta realizando el análisis de la muestra. Registro: Se escribe el análisis que se esta realizando en este caso es Anticuerpos irregulares. # del donador: # que le corresponde al donador según la bitácora de ingresos y egresos. 22 C: Temperatura a la que se realizo la prueba. 37 C: Temperatura a la que se realizo la prueba. 1: . # de microtubo que se esta analizando. Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A) 2: . # de microtubo que se esta analizando. Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A) . 3: . # de microtubo que se esta analizando. Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A) T: Conclusiones: CAL-02-B Testigo de la prueba. Se anota + si es positivo o – si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A) Escribir las observaciones resultados obtenidos. de los Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 29 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Soluciones requeridas La solución salina y pHix se compone de 1lt de solución salina isotónica y 10 ml de la solución pHix. La suspensión de eritrocitos se prepara con 2.5 – 3.0 ml aproximadamente de solución salina isotónica y pHix más 2 gotas de eritrocitos del donador. La solución Diana-1 es una solución salina para suspensiones de hematíes para técnicas en gel, se utiliza para la determinación de grupos sanguíneos, pruebas cruzadas y autocontrol , se debe conservar a 18-25 C. La solución Diana-2 Es una solución de baja fuerza iónica para suspensión de hematíes que facilita la unión de anticuerpo a los hematíes por reducirse la densidad de la nube de cationes alrededor de los mismos, favoreciendo la sensibilización , se conserva a 2-8 C. REGISTROS El Formato F-A-14-26 se debe almacenar 1año. El Formato F-A-14-23 se debe almacenar 1año. LISTA DE DISTRIBUCION Laboratorista: ____________________________________ Suplente: ____________________________________ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 30 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 31 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología . CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 26/08/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 32 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología DESCRIPCION DEL PROCESO En este procedimiento de Serología se pueden encontrar pruebas de Rutina, Confirmatorias, seguimiento y para pacientes dentro del protocolo de Transplante de medula ósea. Dentro de las pruebas que se realizan de rutina y/o encuentran: tamizaje en el laboratorio se PRUEBAS DE TAMIZAJE ENSAYO PARA DETECCION DE: PRUEBA DE RUTINA Anticuerpos contra Chagas ELISA Anticuerpos contra Chagas HAI Antígeno de Superficie de Hepatitis B ELISA Anticuerpos contra HCV ELISA Anticuerpos contra HIV 1+2 ELISA Anticuerpos contra Sífilis VDRL o RPR Anticuerpos contra Brucela Antígeno Rosa de bengala En caso de salir reactivo la prueba de tamizaje, se procede con la realización de la prueba confirmatoria o suplementaria: PRUEBAS CONFIRMATORIAS MARCADOR CHAGAS HBV HCV HIV HIV SIFILIS SIFILIS BRUCELA CAL-02-B CONFIRMATORIA HAI 2 - MERCAPTO ETANOL NEUTRALIZACIÓN INMUNOBLOT RIBA HCV WESTERN BLOT HIV-1 WESTERN BLOT HIV-2 TP-PA ELISA TP-PA HAI ANTIGENO BLANCO Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 33 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología PROPUESTA DE UN ALGORITMO DE TRABAJO EN BANCO DE SANGRE Reactivo DESTINO FINAL DEL PRODUCTO 2a corrida (tubo y piloto) 1er CORRIDA DE MUESTRAS PARA MARCADORES SEROLOGICOS Negativo Negativo REPORTE A DONADOR Reactivo PRUEBA CONFIRMATORIA Negativo NEGATIVO Reactivo Solicitar 2a muestra Se corre ELISA (1er & 2a MUESTRA) INDETERMINADO POSITIVO CAL-02-B LIBERACION Y ASIGNACION Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 34 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (ELISA) La enfermedad de Chagas es una infección provocada por un parásito llamado Tripanosoma cruzi. El diagnostico para esta enfermedad depende de la fase en que se encuentra la cual puede ir de una fase aguda a una fase crónica. Para el diagnostico de la fase crónica se utiliza entre otros métodos el de ELISA y para la fase aguda el HAI que serán los métodos que se explicaran en este procedimiento. El método de Ensayo inmunoenzimàtico (ELISA) para la determinación de anticuerpos contra el Tripanosoma cruzi se fundamenta en que la muestra del donador o paciente se diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antígeno, si contiene anticuerpos específicos contra Tripanososma cruzi, se formara un complejo que se mantiene unido al soporte. La fracción que no se une se desecha por medio de lavados. Se agrega anticuerpos anti inmunoglobulina humana conjugados con peroxidasa, si se produjo la reacción en la primera etapa del proceso, se unirá el conjugado. Se realiza un segundo lavado para eliminar en anticuerpo conjugado que no se une. Se agrega el sustrato. Si existe unión con el conjugado aparece un color celeste y se detendrá la reacción con ácido sulfúrico, con lo que el color celeste vira al amarillo. La concentración de anticuerpos específicos es directamente proporcional al color de la reacción. El reactivo que utilizaremos para realizar la prueba es el CHAGATEST ELISA: Incluye una policubeta sensibilizada que contiene tiras removibles con pocillos que contienen antígenos citoplasmáticos y de membrana de Tripanosoma cruzi inmovilizados. Diluyente de muestra Buffer de lavado de placa Controles positivo y negativo Anti inmunoglobulina humana conjugado Solución de revelado Solución de paro CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 35 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología La muestra para esta prueba puede ser plasma o suero y de preferencia no se debe de utilizarse muestras lipemicas, hemolizadas o cualquier otra causa en la que la muestra se observe turbia. Cuando el análisis no se realiza el día de la extracción de la muestra se puede conservar la muestra durante 7 días a 2-10°C o congelada a –20°C, cuando la muestra se requiera guardar y descongelar de nuevo. Este procedimiento se lee a una longitud de onda primaria de 450nm (filtro de lectura), una longitud de onda secundaria de 620-650nm (filtro de referencia). Una vez que se inicia el análisis no debe de existir interrupciones, es importante que la muestra y los reactivos al ser colocados en los diferentes pocillos sean colocados en el seno del pocillo y que al dispensar se enjuague la pipeta para asegurar la homogenización. Los reactivos utilizados en esta prueba están listos para usar y solo al Buffer de lavado (5X) se le realiza una dilución 1+ 4 (ejemplo para preparar 1l: 200ml de buffer de lavado + 800ml de agua destilada). Ver el inserto al final del procedimiento). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 36 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología DETECCION DE ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS ELISA Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s) si se requiere. Se prende la Incubadora Abbott Commander y se pone a 37 C para cuando se necesite introducir la muestra. Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, bco, controles (los pocillos no se puden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis (mapa de muestras). Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra puede ser plasma o suero) A todos los pocillo previamente identificado en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 200microlitros de diluyente de muestra incluyendo al blanco A los pocillos que son de los pacientes, donador o repetición de análisis se les adiciona 10 microlitros del suero o plasma y se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando. Al pocillo identificado como control internos positivo se le colocan 10 microlitros del tubo marcado como control interno positivo y al pocillo marcado como control interno negativo se le adicionan 10 microlitros del tubo marcado como control interno negativo. A los 2 pocillos identificados como control positivo se les colocan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control positivo y al los 3 pocillos marcados como control negativo se le adicionan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control negativo. Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta s (para evitar evaporaciòn). Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35 Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpeàndola varias veces sobre papel absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (60microlitros) de conjugado a todos incluyendo al blanco y mezclar aplicando con suaves golpes en los laterales de la policubeta. Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35 Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpeàndola varias veces sobre papel absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (50microlitros) de revelador A y una gota de revelador B y mezclar aplicando con suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg. La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN. Se agrega 1 gota (50 microlitros) de soluciòn Stopper (para detener la reacciòn) a todos incluyendo al blanco mezclar aplicando con suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg. Leer a 450nm o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable durante 30min) o con el programa del equipo LP-400. Se interpretan los resultados y se guarda el reporte impreso en el Folder de Serologia Chagas y el mes en que se esta realizando el anàlisis y tambien en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 37 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología VALIDACIÓN DE LA CORRIDA Si la corrida realizada no cumple con una o ambas de las siguientes condiciones se repite la corrida: Una lectura de al menos 2 de los 3 controles negativos que corregidas contra el blanco de reactivos deben ser menores o iguales a 0,150 D.O. Una lectura media de los controles positivos que corregida debe ser mayor o igual a 0,600 D.O. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Con instrumental óptico: La presencia o ausencia de Ac. Anti-T. cruzi se determina relacionando la absorbancia de la muestra respecto al valor Cut-off Cut-off = CN + 0,200 D.O. Donde CN: promedio de las lecturas del control negativo Zona de indeterminación: Cut-off +- 10% Muestras no reactivas: se consideran aquellas con absorbancia menores que el límite inferior de la zona de indeterminación. Muestra reactiva: se consideran aquellas con absorbancia mayores que el límite superior de la zona de indeterminación. Muestras indeterminadas: se consideran aquellas con absorbancia que caen dentro de la zona de indeterminación. Estas muestras deben ser ensayadas nuevamente. Interpretación visual: Si se opta por esta interpretación debe considerarse: No reactiva: muestra que no presenta una coloración mayor que los controles negativos. Reactiva: muestra que presenta una coloración netamente amarilla. Cuando se presentan colores tenues mayores que el control negativo se requiere de interpretación instrumental. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 38 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (HAI) La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos del Tripanosoma cruzi de producir aglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes antígenos. En el suero existen anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con los GR no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamientos con 2-mercaptoetanol que se utiliza en la Prueba confirmatoria. Para la realización de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las muestras no se encuentren de preferencia lipemicas o hemolizadas. Si la muestra se resguardara antes de su análisis se conservara a 2-10 C durante no más de 72 Hrs. contadas a partir de la extracción o a –20 C para periodos mas largos de conservación. Los reactivos a utilizar en esta prueba no todos están listos para usar y es muy importante que sean preparados con las cantidades que indica el inserto CHAGATEST HAI y el tiempo que se considera son estables. (Ver el inserto al final del procedimiento). Cuando se presenten resultados en todas las diluciones reactivas o todas con ausencia de reactividad, puede ser indicio de autoaglutinación por la presencia de Anticuerpos heterofilos del antígeno HAI o deterioro de los reactivos. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 39 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s). Se marca la placa con dividiones de 4 pocillos Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra solo puede ser suero). A todos los pocillo se les adiciona una alicuota de 25microlitros de diluyente de suero (Buffer) El diluyente del suero se prepara: 200 microlitros de solución proteica por cada 10 ml del buffer A los pocillos que son de los pacientes, donador o repetición de análisis se les adiciona 25microlitros del suero y se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando. Se realizaran diluciones seriadas a partir del primer pocillo (½, ¼, 1/8, ….. etc). Se toma una alicuota de 25microlitros del primer pocillo del paciente y se pasa al segundo pocillo, se homogeniza y se toma una alicuota del segundo pocillo de 25 microlitros y se pasa al tercer pocillo y lo mismo para el cuarto pocillo (en el cuarto pocillo se toma la alicuota de 25microlitros y se tira para que contenga el mismo volumen que los demas pocillos. Las diluciones seran de ½ para el primer pocillo, ¼ para el segundo pocillo y asi sucesivamente. Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion. Una vez reconstituido y agitado el reactivo que contiene los GR no sensibilizados (control de heterofilia) se le adiciona 25microlitros a los pocillo que contienen la dilucion ½ y ¼ de todas las muestras y controles Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/8 y 1/16 muestras y controles se les adiciona 25microlitros de Antigeno HAI o GR sensibilizados Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta (para evitar evaporaciòn). Se deja en reposo durante 90min (en un lugar donde no exista vibracion) Leer a partir de los 90min. Se puede aumentar la nitidez de lectura haciendolo sobre un espejo, ilumunando la placa desde arriba e interponiendo un papel blanco y traslùcido entre la policubeta y la fuente de luz. Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 40 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS No reactivo: presencia de un sedimento en forma de un botón o pequeño anillo de bordes regulares. Reactivo: formación de una película o manto que cubre el 50% o más del fondo de los pocillos. Si no se usan microdilutores la imagen del manto puede ser más pequeña. Cuando se observan resultados positivos y además se presenta manto en los pocillos de control de heterofilia (diluciones ½ y ¼), debe realizarse otra titulación con los sueros correspondientes pero previamente tratados con 2-ME o adsorbidos con GR no sensibilizados (el tratamiento elimina la reacción inespecífica). ANTIGENO DE SUPERFICIE DE HEPATITIS B (ELISA) Ensayo inmunoabsorbente enzimático para la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B en suero o plasma humano. La prueba de anticuerpos frente al HBs Ag ELISA es un ensayo inmunoabsorbente enzimático de tercera generación para la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBs Ag). Es una prueba de preselección de muestras y herramienta diagnóstica ante una posible infección por hepatitis B. Se utilizan pocillos recubiertos con anticuerpos frente al HBs Ag como fase sólida. El técnica ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromegénico. Al aplicar el substrato, la presencia de un antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de un producto final coloreado, el ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas. El procedimiento se divide en dos etapas y se lleva a cabo en un micropocillo recubierto con anticuerpos frente al HBs Ag. El control de omisión de muestra (COM) es una característica de la prueba basada en la medición del cambio de densidad óptica ( DO) a 405nm que se produce en los pocillos al añadir la muestra. Cambio que se observa también visualmente, cuando el diluyente de conjugado pasa de color azul a verde azulado al añadir la muestra. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 41 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Etapas de la prueba: En la primera Se añade al pocillo de ensayo el conjugado de trabajo, constituido por anticuerpos conjugados con HPR y diluidos en diluyente de conjugado de color azul. La microplaca se incuba y si la muestra contiene HBs Ag, éste se fija al pocillo recubierto de anticuerpos, y simultáneamente al conjugado para formar complejos inmovilizados, constituidos por anticuerpos- HBs Ag-conjugado. Las proteínas séricas o plasmáticas se eliminan en el siguiente paso de lavado. En la segunda etapa Se añade al pocillo un sistema de detección de enzimas compuesto por OPD y peróxido de hidrógeno. Si el conjugado se ha fijado a la muestra, el OPD se oxida bivalentemente la peroxidasa para formar un compuesto intermedio que, a su vez, se reduce, donante de iones hidrógeno. La forma oxidada de OPD resultante es de color naranja. Por último se añade ácido sulfúrico para detener la reacción. La intensidad de color depende de la cantidad de conjugado fijado que haya en el pocillo. La intensidad de color ésta en función de la concentración de HBs Ag que contenga la muestra, se mide con un lector de microplaca a 490 0 492nm. Precauciones Los reactivos se puede almacenar entre 2-8° C. No mezclar reactivos de lotes diferentes. Dejar reactivos a temperatura ambiente 30 min. antes de su empleo. Utilizar guantes y lavarse las manos al terminar. La preparación de los reactivos se observa en el inserto de la prueba anexada al final del procedimiento. Es importante que si utiliza plasma este recolectado con anticoagulante adecuado (heparina no) y que contenga la cantidad que se requiere para la muestra. Se puede utilizar suero. El suero o plasma se puede almacenar a 2 y 8 C durante un máximo de 7 días, en congelación a –18 C o menos y no descongelar y congelar consecutivamente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 42 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO Se considera que una placa es válida con respecto al substrato en blanco si el valor de la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o mayor que –0,001 e igual o menor que 0,050. CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CALIBRADOR NEGATIVO Se considera que una placa es válida si al menos dos de los tres calibradores negativos cumplen con los siguientes criterios. Si uno de los tres valores control está fuera de estos límites, deberá volver a calcularse la media de los controles negativos (NCalx) en base a los dos valores de absorbancia aceptables de los calibradores. Los valores que estén entre –0,006 y 0,012, ambos incluidos, son válidas y deben redondearse a 0,000 para efectuar el cálculo. Determine la media de los valores de absorbancia del calibrador negativo (NCalx). La placa no será válida y deberá repetirse la prueba si dos o más de los tres valores control está fuera de los límites. CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente. Se considera que una placa es válida únicamente cuando los valores de absorbancia respectivos a 490nm ó 492nm son iguales o mayores que el valor de corte, y cumple además los siguientes criterios: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 43 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El valor de absorbancia del control positivo es igual o mayor que 0,225 e igual o menor de 2,500. El valor de absorbancia del control positivo no difieren entre sí más de 0,230. Si uno cualquiera de estos valores controles está fuera de estos límites, el ensayo no se considera válido y deberá repetirse. CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO El calibrador negativo y el control positivo deben cumplir los criterios de aceptación de control de calidad para que la microplaca se pueda considerar válida. CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off) Valor de corte = NCalx + 0,030 Ejemplo: Control negativo 1 0,001 2 0,000 3 0,002 Absorbancia Absorbancia total= 0,003 NCalx = Absorbancia total/ 3 = 0,001 Valor de corte= 0,001 + 0,030 = 0,031 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 44 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a utilizar para esta prueba. Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma ) La forma de colocarlos es asi: Blanco Colocar 3 pocillos con Controles negativos Colocar 2 pocillos con controles positivos Colocar las muestras Colocar el Control interno negativo Colocar el Control interno positivo Adicionar 50microlitros de Conjugado de Hepatitis B a todos los pocillos menos al blanco (7ml de diluyente de conjugado + 20microlitros de concentrado de conjugado) Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona. Colocar 150microlitros de cada muestra Colocar 150microlitros en el pocillo del Control interno negativo Colocar 150microlitros en el pocillo del Control interno positivo Colocar en los 3 pocillos de Controles negativos 150microlitros del control Colocar en 2 pocillos de Controles positivos 150microlitros del control Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 90min. Realizar los respectivos lavados (solución de lavado con 950ml de agua destilada+ 50ml de solución de lavado 20X) con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 6 ciclos) La forma de operar del equipo se describe al final del procedimiento. Quitar exceso de lavado con golpes sobre un papel. Se prepara la Solución Buffer-sustrato-OPD (1 pastilla de OPD + 6ml de Buffer) Adicionar 200microlitros deSolución Buffer-sustrato-OPD a todos los pocillos (incluyendo al blanco). Tapar la placa con una cubierta de metal si se tiene o en oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Al termino de la incubación se adicionan a todos 50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reacciòn) Se realiza la lectura y se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A. y se guarda el registro impreso en el folder del mes y con el nombre de la prueba. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 45 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Las muestras con valores de absorbancia menores que –0,014 deben volver a ensayar una vez. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición se obtenga el mismo valor. Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o mayor de –0,014 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba. Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva. Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera repetidamente reactiva al HBs Ag si una cualquiera de las determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte. Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera reactiva y el resultado es confirmado por neutralización con anti- HBs Humano, se considera la muestra como positiva al HBs Ag. Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera no reactiva al HBs Ag si ambas determinaciones duplicadas son no reactivas y menor que el valor de corte e igual o mayor de –0,014. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 46 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología ANTICUERPOS CONTRA HCV (ELISA) Este es un Inmunoensayo enzimático cualitativo para la detección de Anticuerpos frente al Virus de la Hepatitis C (anti- HCV) en suero o plasma humanos. En el Inmunoensayo enzimático (ELISA) se utiliza como fase sólida pocillos con un revestimiento de una combinación de antígenos recombinantes configurados del virus de la hepatitis C. El principio de la ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromogénico. Al aplicar el substrato enzimático, la presencia sobre el antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de u producto final coloreado. El ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas. El virus de la Hepatitis C es el agente causal de la mayoría si no es de todas, las hepatitis transmitidas por sangre y que no son del tipo A ni del tipo B. Etapas de la prueba: En la primera Se incuba una muestra diluida en el pocillo de pruebas durante un periodo determinado de tiempo. Si en la muestra existe anticuerpo reactivo frente a cualquiera de los tres antígenos, se formarán complejos de antígeno-anticuerpo en la superficie del micropocillo. Si no existe anti-HCV, no formarán dichos complejos. La etapa de lavado elimina las proteínas del suero o plasma que no se hayan unido. En la segunda etapa Se añade al micropocillo un anticuerpo monoclonal de rata conjugado con peroxidasa de rábano. El conjugado se une específicamente a la porción de la IgG humana de los complejos antígeno-anticuerpo. Si estos complejos antígeno-anticuerpo no se hallan presentes, el conjugado que no se ha unido se eliminará en la fase de lavado que ha de realizarse a continuación. En la tercera etapa Se añade al pocillo un sistema de detección de enzima compuesto de o-fenilendiamina (cromogénico) y peróxido de hidrógeno (sustrato). Si existe conjugado unido, el OPD se oxidará y dará lugar a un producto final coloreado. En esta reacción, la peroxidasa se CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 47 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología oxida de forma divalente mediante el peróxido de hidrógeno y forma un compuesto intermedio que, a su vez, se reduce a su estado inicial mediante interacción subsiguiente con el OPD donador de ión hidrógeno. Entonces, se añade ácido sulfúrico para paralizar la reacción. La intensidad de color depende de la cantidad de conjugado unido, está en función de la concentración de anti-HCV presente en la muestra. La intensidad de color se mide con un lector de micropocillos diseñado para cuantificar la absorbancia de la luz en un micropocillo. La preparación de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al final del procedimiento. Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA, CP2D, CPD y citrato de sodio al 4% y heparina. La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 días y si se requiere un almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C. Los pocillo que no se van a utilizar se almacenan entre 2-8 C en la bolsa de aluminio que se suministra, con desecante, sellada firmemente y se debe utilizar dentro de los 42 días siguientes a la apertura de la bolsa de aluminio. CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO Se considera que una placa es válida con respecto al substrato en blanco si el valor de la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o mayor que –0,020 e igual o menor que 0,050. CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que 0,0120 y mayores o iguales que –0,005. Si uno de los tres valores control se encuentra fuera de alguno de estos límites, recalcule el valor medio del control negativo en base a los dos valores controles aceptables. La placa no será válida y deberá repetirse la prueba si dos o más de los tres valores control están fuera de los límites. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 48 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Determinar la media de los valores control negativo. Ejemplo: 1 2 3 Control negativo 0,005 0,015 0,010 Absorbancia Absorbancia total= 0,030 NCx = Absorbancia total/ 3 = 0,010 CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente. Se considera que una placa es válida, si ambos controles positivos, si el valor de ambos controles positivos es mayor o igual al valor de corte “cutoff” dentro de la lectura del lector de placas Nota: los valores por encima del límite superior del rango soportado del lector de microplacas puede aparecer como “ OVER” o “ *** “ . CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 49 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Adicionar 20 microlitros de Soluciòn buf er- sustrato-OPD (1 pastil a de OPD en 6ml de Buf er sustrato) a todos los pocil os (incluyendo al blanco). Tapar la placa con una cubierta de metal o /y oscuridad se incuba a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a todos 50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reac iòn) Se realiza la lectura, se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A y a guarda el registro dentro del folder del mes y prueba cor espondiente CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off) Valor de corte = NCx + 0,330 Ejemplo: Control negativo 1 0,005 2 0,015 3 0,010 CAL-02-B Absorbancia Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 50 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Absorbancia total= 0,030 NCx = Absorbancia total/ 3 = 0,010 Valor de la línea de corte = 0,010 + 0,330 = 0,340 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Las muestras con valores de absorbancia menores que –0,025 deben volver a ensayar en un pocillo único. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición se obtenga el mismo valor o inferior a –0,025. Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte se consideran no reactivas. No es necesario repetir la prueba. Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva. Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera repetidamente reactiva para anticuerpos a HCV si una cualquiera de las determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte. Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera no reactiva para anticuerpos HCV, si ambas determinaciones por duplicado son no reactivos, es decir menores que el valor de corte. ANTICUERPOS CONTRA HIV 1 + 2 (ELISA) Este es un Inmunoensayo enzimático cualitativo para la detección de Anticuerpos frente al Virus de Inmunodeficiencia humana de Tipos 1 y/o 2 (HIV-1 y HIV-2) en suero o plasma humanos. En el Inmunoensayo enzimático (ELISA) se utiliza como fase sólida pocillos con un revestimiento de una combinación de antígenos recombinantes HIV-1 y HIV-2. El principio de la ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 51 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromogénico. Al aplicar el substrato enzimático, la presencia de un antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de un producto final coloreado. El ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas. El síndrome de Inmunodeficiencia adquirida (SIDA) como el complejo relacionado con el (CRS) están causados por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y tipo 2. HIV-1 y HIV-2 son similares pero distintos. Morfología y linfotropismo similar Modos de transmisión parecen ser idénticos. Los genomas de los virus exhiben aproximadamente un 60% de homología en genes conservados tales como gag y pol y un 30-40% de homología en genes menos conservados. Este método puede ser utilizado tanto para el estudio de donadores de sangre como para fines de diagnóstico. El ensayo utiliza una combinación de dos proteínas de envoltura recombinantes de HIV-1 y una proteína core recombinante de HIV-2. Etapas de la prueba: En la primera Etapa del procedimiento se diluye en diluyente de la muestra (color verde). La dispersión de la muestra o el control provoca un cambio de color evidente que puede monitorearse visualmente o mediante lecturas fotométricas a 610nm. A continuación la muestra o control diluidos se incuban en el pocillo del equipo durante un periodo de tiempo establecido. Si la muestra contiene un anticuerpo reactivo a alguno de los 4 antígenos, se formaran complejos antígeno-anticuerpo en la superficie del pocillo. Si no hay anti HIV-1 y/o anti-HIV-2, nose formarán los complejos. Las proteínas séricas o plasmáticas no fijadas se eliminarán en la siguiente fase de lavado. En la segunda etapa se añade al pocillo una mezcla de los 4 antígenos HIV-1 y HIV-2 recombinantes conjugados a peroxidasa de rábano. El conjugado se fija específicamente la porción inmunoglobulina anti-HIV-1 y/o anti-HIV-2 (IgG e IgM) de los complejos antígeno-anticuerpo. Si no existen complejos antígeno-anticuerpo, el conjugado no fijado se eliminará en el siguiente lavado. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 52 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología En la tercera etapa, se añade un sistema de detección de enzimas consistente en o-fenilenediamina y peroxido de hidrógeno. Si hay conjugado fijado, el OPD se oxidará produciendo una reacción de color anaranjado. Entonces se añade ácido sulfúrico para detener la reacción. La intencidada del color resultante depende de la cantidad de conjugado fjado y es, por lo tanto, una función de la concentración de anti- HIV-1 y/o anti-HIV-2 presente en la muestra. La intensidad del color se mide con un lector de microplacas diseñado para medir la absorbancia de luz de un pocillo. La preparación de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al final del procedimiento. Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA, CP2D, CPD y citrato de sódio al 4% y heparina. La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 días y si se requiere un almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C. Los pocillos que no se utilizan se deben de cerrar bien y darles 60 días de caducidad a 2-8 C con desecante. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 53 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas. Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma ) La forma de colocarlos en la placa es asi: Blanco Colocar 3 pocillos con Controles negativos Colocar 1 pocillos con controles positivos HIV1 y otro + HIV2 Colocar las muestras Colocar el Control interno negativo Colocar el Control interno positivo Adicionar 50microlitros de diluyente de muestra a todos los pocillos menos al blanco Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona. Colocar 150microlitros de cada muestra Colocar en los 3 pocillos de Controles negativos 150microlitros del control Colocar en 1 de los pocillos de Controles positivos 150microlitros del control +HIV1 y en otro +HIV2 Colocar 150microlitros en el pocillo del Control interno negativo Colocar 150microlitros en el pocillo del Control interno positivo Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 30min. Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 5 ciclos) La forma de operar del equipo se describe al final del procedimiento. Quitar exceso del lavado con golpes sobre un papel. Adicionar 200microlitros de Conjugado a todos los pocillos (excepto al blanco). Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 30min. Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur Adicionar 200microlitros de Soluciòn buffer- sustrato-OPD (1 pastilla de OPD en 6ml de Buffer sustrato) a todos los pocillos (incluyendo al blanco). Tapar la placa con una cubierta metalica o poner a oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a todos 50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reacciòn) incluyendo al blanco. Se realiza la lectura, se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A y se guarda el registro en el folder del mes y la Prueba correspondiente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 54 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO Se considera que una placa es válida con respecto al substrato en blanco si el valor de la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o mayor que –0,020 e igual o menor que 0,050. CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que 0,070 e iguales que –0,010. Las cifras entre 0,000 y –0,010, ambas inclusive, son válidas y deben redondearse a 0,000. Si uno de los tres valores control está fuera de estos límites, deberá volver a calcularse la media de los controles negativos (NCx) en base a los dos valores aceptables. La placa no será válida y deberá repetirse la prueba si dos o más de los tres valores control están fuera de los límites. Determinar la media de los valores control negativo (NCx). Ejemplo: Control negativo 0,005 0,010 0,015 Absorbancia Absorbancia total= 0,030 NCx = Absorbancia total/ 3 = 0,010 CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente. Se considera que una placa es válida, si ambos controles positivos (HIV-1 y HIV-2) satisfacen los siguientes criterios: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 55 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El valor de absorbancia del control positivo HIV-1 es igual o mayor que 0,200 y está dentro del rango soportado por el lector de microplacas. El valor de absorbancia del control positivo HIV-2 es igual o mayor el corte del ensayo y está dentro del rango soportado por el lector de microplacas. Si uno cualquiera de estos valores controles está fuera de estos límites, el ensayo no se considera válido y deberá repetirse. Nota: los valores por encima del límite superior del rango soportado del lector de microplacas puede aparecer como “ MAS DE” o “ *** “ . CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off) Valor de corte = NCx + 0,125 Ejemplo: Control negativo 1 0,005 2 0,010 3 0,015 Absorbancia Absorbancia total= 0,030 NCx = Absorbancia total/ 3 = 0,010 Valor de corte= 0,010 + 0,125 = 0,135 INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Las muestras con valores de absorbancia menores que –0,025 deben volver a ensayar en un pocillo único. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición se obtenga el mismo valor. Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o mayor de –0,025 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 56 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva para posteriormente realizar la Prueba confirmatoria para definir si es positiva, indeterminada o negativa. Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera repetidamente reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2 si una cualquiera de las determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte. Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera no reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2, si ambas determinaciones por duplicado son negativas, es decir menores que el valor de corte. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 57 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología ANTICUERPOS CONTRA SIFILIS (VDRL o RPR) Esta prueba es utilizada para detectar sífilis a través de una técnica aglutinación cuando existe presencia de Treponema pallidum, por medio de una reacción inmunológica color azul. El reactivo SYPAL-CB es una suspensión coloidal de cardilipina, colesterol y lecitina. La cardiolipina es extraída del corazón de la res y la lecitina del pollo. Para su conservación el almacenaje se realiza a una temperatura de 2 - 8 C y cuidando que el recipiente se encuentre bien cerrados y alejados de luz. Las tarjetas que contiene el kit no se introduce al refrigerador para evitar que se humedezcan. Se requiere atemperar los reactivos antes de utilizarlos (15-30°C) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 58 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El Técnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB, los controles y la muestra(s). Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis (si se considera necesario) si no se pueden marcar a un lado de la placa con el # de toma de muestra. Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra puede ser suero o plasma) En esta prueba se utiliza una placa de prueba SYPAL-CB a todos los circulos se les adiciona una alicuota de 50microlitros o 1 gota con pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc.y se extiende con la misma pipeta desechable o punta. De igual forma se aplican los controles positivo y negativo A todos los circulos se les adiciona 1 gota de SYPAL-CB (con la punta especial que incluye el kit para la aplicacion de este reactivo) y se agita la placa en el agitador BAXTER ROTATOR V durante 6 min. Leer a partir de los 6min. /100 RPM Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B Cuando el Resultado es Negativo se reporta como Negativo, cuando el Resultado es Positivo se realizan diluciones seriadas para determinar el titulo y se realiza la confirmatoria INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Para realizar la lectura de la placa se agita manualmente por unos segundos (lo que aumenta el tamaño de los aglutinados) y se observa con luz fuerte y se continua agitando suavemente durante la lectura para distinguir cualquier microaglutinado. Una prueba se considera positivas si se obtiene grandes aglutinados (lo que depende de la cantidad presente de anticuerpos en el suero). Una prueba se considera negativa cuando la mezcla permanece homogénea. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 59 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología ANTICUERPOS CONTRA BRUCELA (ANTIGENO ROSA DE BENGALA) Para determinar la presencia de anticuerpos en el diagnostico de la Brucela de forma rutinaria en el laboratorio se realiza la siguiente prueba: Esta prueba es utilizada para el diagnostico de Brucelosis es de aglutinación rápida en placa es empleada para la detección temprana de aglutininas especificas de Brucilla ( B. melitensis, B. abortus y suis). Para la realización de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las muestras no se encuentren lipemicas o bemolizadas. Si la muestra se resguardara antes de su análisis se conservara a 2-8 C. El Técnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s). Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles (los circulos no se puden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra solo puede ser suero) En esta prueba se utiliza una placa de prueba, la cual debe ser identificada, en donde a todos los circulos se les adiciona una alicuota de 3040microlitros o una gota con pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc. y a los controles positivo y negativo de reactivos internos. Se homogenizan dentro del circulo con la parte plana de la pipeta desechable una vez que se colocan. Se les adiciona a todos (incluyendo controles) 30microlitros o 1 gota del Antigeno Rosa de Bengala previamente homogenizado. Agitar la placa en el agitador BAXTER ROTATOR V durante 4 min. Leer a partir de los 4min. Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 60 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología RESULTADOS La lectura debe llevarse a cabo exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenzó a mezclar. No aglutinación: cuando se presenta un suero negativo. Cualquier cantidad de aglutinación: presencia de anticuerpos específicos. Cuando se presenta un suero positivo. Como esta prueba es cualitativa cuando se tiene un resultado positivo debe ser confirma mediante una prueba cuantitativa para brucelosis como: aglutinación lenta estándar o aglutinación lenta en presencia de 2-mercaptoetanol. CONFIRMATORIA y/o SUPLEMENTARIAS CHAGAS ( HAI 2- BETA MERCAPTO ETANOL) La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos del Tripanosoma cruzi de producir aglutinación especifica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes antígenos. Y de esta manera eliminar los anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies (y dar falsos positivos). Su presencia se investiga enfrentando el suero con los Glóbulos Rojos no sensibilizados. Esta prueba se realiza para eliminar los anticuerpos heterófilos de las muestras con el tratamientos con 2-mercaptoetanol. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 61 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El Técnico de Serlogia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s). Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos se pueden anotar en la placa o en la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se realiza por duplicado en la misma placa. Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra solo puede ser suero) Se realiza una dilución 1:100 con 25ml de solución fisiologica + 25microlitros de 2- mercaptoetanol Se toma una alicuota de 25 microlitros de la muestra del donador, paciente, etc y de los respectivos controles + 25 microlitros de la dilución anterior, se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando y se tapa con la cubierta adhesiva. Se incuba a 37 C durante 1 hr. Se les adiciona una alicuota de 25microlitros de diluyente de suero (Buffer) Se realizaran diluciones seriadas a partir del primer pocillo. Se toma una alicuota de 25microlitros del primer pocillo del paciente y se pasa al segundo pocillo, se homogeniza y se toma una alicuota del segundo pocillo de 25 microlitros y se pasa al tercer pocillo y lo mismo para el cuarto pocillo (en el cuarto pocillo se toma la alicuota de 25microlitros y se tira para que contenga la misma cantidad que los demas pocillos. Las diluciones seran de ½ para el primer pocillo, ¼ para el segundo pocillo y asi sucesivamente. Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion. Una vez reconstituido y agitado el reactivo que contiene los GR no sensibilizados (control de heterofilia) se le adiciona 25microlitros a los pocillo que contienen la dilucion ½ y ¼ de todas las muestras y controles Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/8 y 1/16 muestras y controles se les adiciona 25microlitros de Antigeno HAI Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta s (para evitar evaporaciòn). Se incuba durante 60min en ABBOTT COMMANDER/ Se deja en reposo durante 90min (en un lugar donde no exista vibracion) Leer a partir de los 90min. Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 62 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología HbsAg ELISA (NEUTRALIZACION) Es una Prueba confirmatoria que detecta anticuerpos para la Hepatitis B en muestras reactivas en la ELISA para Antigenos de Hepatitis B. Es una técnica de neutralización en conjunto con métodos estándares en ELISA ORTHO-ANTICUERPOS. El Técnico del área de serologia enciende la incubadora ABBOTT COMMANDER para tenerla a la temperatura que se requiere al introducir las placas. Se divide la placa en dos partes que contienen cada una lo siguiente: TIRA CONTROL TIRA PRUEBA BLANCO 3 CONTROLES NEGATIVOS 2 CONTROLES POSITIVOS LA MUESTRA POR DUPLICADO 2 CONTROLES POSITIVOS MUESTRAS POR DUPLICADO Una vez que se tienen vien identificados el contenido de cada pocillo se adiciona 50 microlitros de conjugado (conjugate diluent y antibody to hep. B sudpase antigen) EXCEPTO AL BLANCO TIRA CONTROL Se le adiciona 20 microlitros de Confirmatory control TIRA PRUEBA Se le adiciona 20 microlitros de Antibody hep. B surface antigen TIRA CONTROL A los 3 pocillos marcados para CONTROL NEGATIVO se le adiciona 200microlitros de calibardor negativo a cada uno. A los 2 pocillos marcados para CONTROL POSITIVO se le adiciona 200microlitros de calibardor positivo a cada uno. A los 2 pocillos marcados para MUESTRA Y MUESTRA DUPLICADO se le adiciona 200microlitros de la muestra. TIRA PRUEBA A los 2 pocillos marcados para CONTROL POSITIVO se le adiciona 200microlitros de calibardor positivo a cada uno. A los 2 pocillos marcados para MUESTRA Y MUESTRA DUPLICADO se le adiciona 200microlitros de la muestra. Se tapa la placa con el papel adherible y se incuba a 37 C durante 180 min. Se lava 6 veces con solución lavado en el SANOFI DIAGNOSTIC PASTEUR LP35. Se adiciona 200microlitros del sustrato OPD (12ml de Buffer con 1 pastilla de OPD) a todos los pocillos y se incuba a temperatura ambiente en oscuridad durante 30 min. Se adiciona 50 microlitros de H2SO4 4N a todos los pocillos Leer a 492 con referencia de 620 en el equipo SANOFI DIAGNOSTIC PASTEUR LP 400 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 63 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS La absorbancia promedio de la muestra diluida o sin diluir es mayor o igual al valor Cutoff y la adición de anticuerpos al antígeno de Hepatitis B reduce la reactividad de la muestra en un 50% o más la Prueba se considera positiva. Cuando la absorbancia promedio de la muestra diluida o sin diluir es mayor o igual al valor Cutoff y la adición de anticuerpos al antígeno de Hepatitis B no reduce la reactividad de la muestra al menos un 50% la muestra es no neutralizable y se debe diluir al menos 1 a 10 y reinspeccionarse. Si la absorbancia de la muestra duplicada es menor al Cutoff de la muestra diluida y sin diluir se considera NO NEUTRALIZABLE. Para calcular el Cutoff se requiere sumar los valores resultantes de absorbancia de los 3 controles negativos y dividirlos entre 3. Una vez que se tiene el valor promedio de los controles negativos se suma a un valor 0.050 y se obtiene el Cutoff. HCV (INMUNOBLOT RIBA HCV) La prueba CHIRON* RIBA* HCV 3.0 SIA es un inmunoensayo cualitativo in vitro para la detección de anticuerpos frente a proteínas individuales codificadas por el virus de la hepatitis C (anti- HCV) en suero o plasma humano donado por la transfusión o manufactura posterior. Los antígenos recombinantes utilizados son c33c y NS5 y dos de los péptidos sintéticos son c100p y 5-1-1p que proceden de regiones putativas de la nucleocápside viral. Esta prueba tiene 3 etapas: Primera etapa La muestra o el control del ensayo se diluye e incuba con la tira. Si muestra contiene anticuerpos específicos frente a HCV, éstos se fijarán a las correspondientes bandas de antígeno recombinante y/o péptido sintético de la tira. Los componentes séricos o plasmáticos no fijados se eliminarán por aspiración y lavado. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 64 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Segunda etapa La tira se incuba en presencia de un conjugado de anti- IgG humana de cabra, marcada con peroxidasa. El conjugado se fija a la porción de anti- IgG humana del complejo antígeno-anticuerpo. El componentes no fijados se eliminarán por decantación y posteriores pasos de lavado. Tercera etapa Se añade un sistema colorimétrico de detección enzimática compuesto por agua oxigenada y 4-cloro-1-naftol. Si el conjugado se fijo a la muestra, la reacción enzimática origina un producto de reacción de color azul-negro insoluble en cada banda específica de antígeno, péptido o control HCV. La reactividad de la muestra ante cada banda de antígeno se determina comparando visualmente la intensidad de la banda antigénica individual con la de las bandas de control interno de IgG humano alta y baja absorbidas en cada tira. Los reactivos se debe almacenar a 2 y 8 C. Leer en el inserto de la prueba anexado al final del procedimiento para conocer sobre las precauciones que se debe tener con los reactivos que incluye la prueba al igual que la preparación de los reactivos y soluciones CONTROL DE CALIDAD Los controles positivo y negativo se deben incluir en cada serie , independientemente el número de muestras o número de tiras utilizadas. Como controles internos en cada tira se incluyen dos niveles de IgG humana (nivel I, control bajo y nivel II, control alto). La reactividad de las bandas individuales de HCV se determina comparando la intensidad de cada banda con los controles internos de la tira IgG humana de nivel I y nivel II. Los resultados previstos de los controles positivo y negativo que incluye la prueba son: Las bandas del control interno IgG de nivel I y nivel II deben ser claramente distinguibles a simple vista en las tiras de control positivo y negativo, y el control IgG de nivel I debe ser evidentemente más claro que el control IgG de nivel II. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 65 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología La tira de control positivo debe mostrar una respuesta de 2+ o mayor para todas las bandas de antígeno y péptido del HCV. La respuesta en la banda SODh debe ser visible inferior al control IgG humano de nivel I. La tira de control negativo debe mostrar una respuesta a cada una de las bandas de antígeno del HCV y SODh que sea visiblemente inferior al control IgG humano de nivel I. Si los controles de la prueba incluidos no cumplen los criterios anteriores, la serie queda invalidada y debe repetirse. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 66 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El Técnico de Serologia escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, bco, controles (los tubos no se puden marcar y contienen una tira dentro de ellos que contiene un número) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra puede ser plasma o suero) A todos los tubos previamente identificado en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 1ml de diluyente ( specimen diluent) A los tubos que son de los pacientes, donador o repetición de análisis se les adiciona 20 microlitros del suero o plasma y se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando. Al tubo identificado como control negativo se le colocan 20 microlitros y al tubo marcado como control positivo se le adicionan 20 microlitros y se homogenizan con la misma punta con que se esta colocando. Se tapan y se colocan en agitación vertical a temperatura ambiente durante 4 horas. Se tira el liquido excedente teniendo cuidado con la tira que contiene y se adiciona 1ml del diluyente y se pone en agitación vertical durante 30min a temperatura ambiente Preparo una solución de lavado WASH BUFFER CONCENTRATE (50X) con 450ml de agua destilada + 25ml de WASH BUFFER CONCENTRATE Decanto y pongo las tiras en la bandeja de reacción con 30ml aproximadamente de la solución de lavado que prepare en el paso anterior, este proceso de decantación y lavado lo realizo 3 veces Observo en el incerto cuanto conjugado debo agregar con respecto al número de tiras que tengo. El incerto indica por ejemplo que para una tira requiero 1ml de conjugado pero que cuando son menos de 10 tiras debo tomar a un así 10ml de conjugado Una vez adicionado en la bandeja de reacción el conjugado pongo en agitación durante 10- 12 min. y realizo lavados y decantaciones 3 veces como en lo hice anteriormente. Preparo una solución substrato de trabajo en la que depende el número de tiras que tengo. Ejemplo: cuando tengo de 3-10 tiras preparo 1.7ml de volumen de solución substrato con 8.5ml solución buffer del subtrato Es muy importante que no sepeguen las tiras. Agitar de 15 a 20 min a temperatura ambiente y decantar. Lavar con 60ml de agua destilada dos veces. Con pinzas colocar las tiras en un papel absorbente y retiro el exceso de agua. Dejar secar las tiras durante 30min en la oscuridad y a temperatura ambiente Leer resultdos antes de 3 hrs. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 67 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS La reactividad anti-HCV en una muestra se determina comparando la intensidad de cada banda de HCV con la intensidad de las bandas del control interno de IgG humana (nivel I y nivel II) de cada tira. La identidad de los anticuerpos se define por la ubicación especificada de la banda de HCV. La intensidad de las bandas de HCV se clasifica en función en función de la intensidad de los controles de IgG internos de la siguiente forma: Intensidad de la banda Ausente Menor que la intensidad de la banda control IgG de nivel I Puntuación NEGATIVO POSITIVO / NEGATIVO Igual a la intensidad de la banda control IgG de nivel I 1+ Mayor que la intensidad de la banda control IgG de nivel I y menor que la intensidad de la banda control IgG de nivel II 2+ Igual a la intensidad de la banda control IgG de nivel II 3+ Mayor que la intensidad de la banda control IgG de nivel II 4+ La interpretación NEGATIVA, INDETERMINADA o POSITIVA se basa en el patrón de reacción presente en la tira. Para interpretar las series como válidas deben utilizarse los siguientes criterios: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 68 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Patrón de la banda de antígeno Ninguna banda de HCV presenta reactividad 1+ o mayor. O Sólo la banda de SODh presenta reactividad 1+ o mayor. Una única banda de HCV presenta reactividad 1+ o mayor. O La banda de SODh presenta reactividad 1+ o mayor conjugadamente con una o más banda de HCV presenta reactividad 1+ o mayor. Al menos dos banda de HCV presenta reactividad 1+ o mayor. Interpretación NEGATIVO INDETERMINADO POSITIVO Una intensidad de banda menor que el control IgG nivel I (es decir +/-) está por debajo del valor límite parta la reactividad en el ensayo. Solamente se puede hacer una interpretación POSITIVA de la tira en ausencia de reactividad de la banda de SODh (es decir +/-). Un resultado de la prueba POSITIVO indica la presencia de anti-HCV e infección previa o actual con HCV. Un resultado de la prueba INDETERMINADO indica que el anti-HCV puede no estar presente y que no se puede llegar a una conclusión sobre si existe infección por HCV. Dado que una reactividad de +1 o mayor con cualquiera de los antígenos codificados del virus HCV de la tira es una posible evidencia de infección previa o actual con HCV, todos los individuos clasificados INDETERMINADOS deben volver a someterse a la prueba durante un período de 6 a 12 meses para verificar si se ha producido un aumento de la reactividad. Se recomienda que los INDETERMINADOS se vuelvan a someter a una prueba al cabo de 6 meses, usando una muestra obtenida en ese momento. Un resultado NEGATIVO que es REACTIVO por un procedimiento aprobado de escrutinio de anti-HCV, no excluye la posibilidad de infección con HCV. Las concentraciones de anti-HCV pueden no ser detectables en la infección inicial. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 69 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología HIV (WESTERN BLOT HIV 1 + HIV 2 Es una detección por electroinmunotransferencia de los anticuerpos anti-HIV 1 en suero o plasma humano para la confirmación de una respuesta anti-HIV 1y anti-HIV 2 positiva y para precisar la especificidad antigénica en el cuadro diagnóstico del SIDA. La calidad de los antígemos utilizados en estos test no permite eliminar absolutamente determinadas respuestas inespecíficas. En el cuadro diagnóstico del SIDA, es necesario para la caracterización de la infección por los virus HIV-1 ó HIV-2. Este test se basa en el principio del ELISA indirecto sobre una tira de nitrocelulosa que contiene todas las proteínas constituyentes del virus HIV-1, HIV 2 y un control interno anti-IgG. La banda del control interno se halla situada junto al extremo no numerado de la tira antes de la reacción p18 o p16 y permite validar la adición de la muestra y de los reactivos así como el buen desarrollo del método. El procedimiento de ensayo comprende las siguientes etapas: Rehidratación de las tiras de nitrocelulosa Incubación de las muestras a confirmar y sueros de control. Si están presentes los anticuerpos anti-HIV 1 o HIV 2 se unirán a las proteínas virales presentes sobre la tira de nitrocelulosa. Después del lavado, se incuban las tiras con anticuerpos anti IgG humanos marcados con fosfatasa alcalina. El conjugado se une a los anticuerpos anti-HIV 1 o HIV 2 fijados al soporte sólido. Después del lavado y eliminación del conjugado en exceso, la adición de solución de revelado permite evidenciar la actividad enzimática de los complejos ligados a la nitrocelulosa. La aparición de bandas coloreadas específicas permite reconocer la presencia de anticuerpos anti-HIV 1 o HIV 2 en el suero. IMPORTANTE No mezclar en un mismo ensayo diferentes lotes. Reactivos no caducos. Reactivos a temperatura ambiente antes de ser utilizados. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 70 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología No tocar las tiras con las manos, utilizar pinzas. Utilizar los sueros de control en cada ensayo REACTIVO PARA RECONSTITUIR R2 Solución de lavado / diluyente Homogenizar la solución, diluir (1/5) en agua destilada (ejemplo: 30ml de solución de lavado + 120ml de agua destilada). Homogenizar cuidadosamente. Una vez reconstituido permanece estable durante un mes a +2 - 8 C. El equipo contiene 3 botes : Desechos con tapón rojo H20 destilada con tapón azul Solución de lavado (1/5) con tapón amarillo. VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS La banda del control interno anti-IgG debe ser de coloración fuerte. Permite validar la adición de la muestra y de los reactivos así como el buen desarrollo del método. La ausencia o la escasa intensidad de coloración de la banda del control interno anti-IgG indica ya sea la ausencia de depósito de la muestra o de los reactivos, o ya sea un incumplimiento del método. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 71 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El Químico del área de serologia enciende el equipo SANOFI DIAGNISTIC PASTEUR LS 12 con el interruptor que se encuentra en la parte de atras del lado derecho. En la pantalla se observa lo siguiente: L-S.12 - Version 6.07.2ySelection Mode RUN = START EDIT=1 CONFIG=2 SERV=3 Presionar START RUN: Select. Test: New LAV BLOT =1 =2 Valid= START Return= STOP Presionar START Run= Check botte contents-Rack on 1 Prime=3 Valid= START Return= STOP Verificar que la linea amarilla este endentro del bote del agua Presionar el # 3 Una vez que termina se cambia la linea amarilla a el bote de solución de lavado Presionar el # 3 , apretar 3 veces el 3 para realizar 3 lavados) Como los virus de HIV son similares son tratados igual Se acomodan las tiras en cada unos de los Rack de la siguiente forma: RACK 1 RACK 2 RACK 3 HIV 2 Control negativo HIV 2 Control positivo Muestra RACK 4 RACK 5 RACK 6 HIV 1 Control negativo HIV 1 Control positivo Muestra Presionar START RUN: Number of strips 1st Rack:5 =1 =2 Valid= START Return= STOP CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 72 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Presionar el # 2 Cambiar a 1 st Rack= 6 Presionar el # 2 RUN: Number of strips 2nd Rack:6 =1 =2 Valid= START Return= STOP Presionar el # 1 hasta llegar al 0 para que quede 2nd Rack=0 Presionar START RUN: Put the rack (s) on the tray Valid= START Return= STOP Presionar START =1 RUN: New Lav Blot / Pha: 1: =2 Valid= START Return= STOP Presionar START RUN: New Lav Blot Phase 1: Soaking strip Se agitan durante 5 min. RUN: New Lav Blot Valid= START Phase 2: Dispense 20microlitros of sample Abrir la tapa del equipo Adicionar 20 microlitros del control negativo WB1y 2 y 20 microlitros del control positivo WB1 y 2. Adicionar 20 microlitros de la muestra Homogenizar con la punta de la pipeta cada una despues de adicionar RUN: New Lav Blot R3 Negative Control serum Positive Control serum R4 Presionar START CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 73 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología RUN: New Lav Blot R3 Negative Control serum Positive Control serum R4 Presionar START RUN: New Lav Blot 2Hrs. Phase 3: Incubation of samples Se incuba 2 hrs con agitación. RUN: New Lav Blot Phase 5:2nd wash of sample (3 veces) RUN: New Lav Blot Valid=START Phase 6: Dsipense 2.0ml de Conjugate 2.0ml de conjugate RS Presionar START RUN: New Lav Blot 60min. Phase 7: Incubation Conjugate R5 RUN: New Lav Blot Phase 8: 1st wash conjugate R5 RUN: New Lav Blot Phase 9: 2nd wash conjugate R5 RUN: New Lav Blot Valid:START Phase 10: Dispense 2.0ml Substrate R6 2ml de Colour developent solution R6 Presionar START RUN: New Lav Blot Reaction stop STOP Phase 11: Incubation substrate R6 Oh. Mn. S 5min. Aprox. Presionar STOP RUN: New Lav Blot Phase 12: 1st. Rinse Subtrate R6 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 74 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología RUN: New Lav Blot Phase 12: 2st. Rinse Subtrate R6 RUN: New Lav Blot Phase 12: 3st. Rinse Subtrate R6 RUN: New Lav Blot Valid:START Phase 13: End of test Presionar START RUN: Begin a new test YES= START NO=STOP Presionar STOP RUN: Instrument cleaning.Put a Rack (1st pos.) Valid=START Return= STOP Presionar START RUN: Conect R2 and H20 Tubing to the H2O bottle Valid=START Return= STOP Presionar START RUN: Instrument cleaning. 0H mn-s RUN: Disconnect the R2 and H2O tubing Valid=START Return= STOP Presionar START RUN: Dring instrument 0H mn-s RUN: Descontamination Valid=START Return= STOP Presionar START CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 75 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Colocar en un vaso de precipitado una solución de etanol al 30% e introducir al vaso las lineas amarilla y azul RUN: Inmerse both tube ends in 30% ethanol Valid=START Return= STOP Presionar START RUN: Descontaminating tubing -mn-s RUN: 30% ethanol contact OH--mn--s RUN: Connect R2 and H2O tubing to the H2O bottle Valid=START Return= STOP Presionar START RUN: Cleaning instrument 3mn RUN: Disconnect the R2 and H2O tubing Valid=START Return= STOP Presionar START RUN: Drying instrument 3mn RUN: End of decontamination Turn off the instrument CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 76 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS La presencia de anticuerpos anti-proteínas constitutivas del virus HIV 1 y HIV 2 en las muestras, se traduce por la aparición de bandas específicas coloreadas (azul-violeta). Su posición corresponde a las masas molares de las proteínas virales representadas en la tabla siguiente: HIV 1 DETERMINA GEN NATURALEZA CIÓN GP 160 ENV Glicoproteína precursora de la GP 110/120 y de la GP 41 GP 110/ 120 ENV Glicoproteína de la envoltura P 68 POL Transcriptasa inversa P 55 GAG Precursora de proteínas internas P 52 POL Transcriptasa inversa GP 41 ENV Glicoproteína transmembranal P 40 GAG Precursora de proteínas internas P 34 POL Endonucleasa P 24/ 25 GAG Proteína interna P 18 GAG Proteína interna CAL-02-B ASPECTO EN WESTERN BLOT Banda nítida Banda de bordes difusos Banda nítida Banda doble Banda nítida Banda difusa Banda nítida Banda nítida Banda nítida A veces banda doble Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 77 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología INTERPRETACIÓN NEW LAV BLOT 1 Utilizar el control positivo para identificar los anticuerpos revelados y verificar la presencia de la banda del control interno en cada tira. INTERPRETACIÓN Positivo PERFIL 2ENV +/- GAG +/- POL 1ENV GAG POL GAG + POL GAG POL Ninguna banda Bandas no significativas Indeterminado Negativo La calificación de indeterminado puede ser por alguna de las alternativas siguientes: Seroconversión HIV-2 Reacción cruzada con otros retrovirus. HIV 2 DETERMINACIÓN GEN GP 140 GP 105 P 68 P 56 ENV ENV POL GAG GP 36 ENV P34 P 26 P 16 POL GAG GAG CAL-02-B NATURALEZA ASPECTO EN WESTERN BLOT Precursor de GP 105 y GP 36 Banda + -difusa Glicoproteína de la envoltura Banda difusa Transcriptasa inversa Banda nítida Precursora de proteínas Banda nítida internas Glicoproteína Banda difusa transmembranal Endonucleasa Banda nítida Proteína interna Banda nítida Proteína interna Banda nítida Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 78 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología INTERPRETACIÓN NEW LAV BLOT II Utilizar el control positivo para identificar los anticuerpos revelados y verificar la presencia de la banda del control interno en cada tira. INTERPRETACIÓN Positivo Indeterminado Negativo HIV PERFIL ENV + GAG + POL ENV + GAG ENV + POL GAG + POL GAG POL ENV Ninguna banda Bandas no significativas (Ag P24 ELISA) VIRONOSTIKA HIV-I ANTIGEN El sistema microelisa VIRONOSTIKA HIV-I ANTIGEN es un enzimoinmunoensayo para detección cualitativa y cuantitativa del antígeno de la nucleocápside p24 del virus de la inmunodeficiencia humana del tipo 1 en suero, plasma o sobrenadante de cultivo celular humano. Es un inmunoensayo que se basa en el principio del sándwich. El anti-HIV-1 (humano) acoplado a la peroxidasa de rábano (HRP) sirve como conjugado, usando como sustrato a la tetrametilbencidina (TMB). Al concluir la prueba, el desarrollo de color sugiere la presencia del antígeno del HIV-1. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 79 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología TAMPON FOSFATO DILUIDO Verificar la ausencia de cristales de sales en el tampón fosfato concentrado. Si se han formado cristales en la solución, volver a solubilizarlos calentando a 37 C hasta la disolución de los mismos. Diluir el tampón fosfato concentrado 1:25 con agua destilada o desionizada. Preparar 50ml de tampón fosfato diluido, como mínimo, para cada tira microelisa empleada. El tampón fosfato diluido es estable durante dos semanas si se almacena a 2–8 C. SUSTRATO TMB Preparación del substrato TMB Número de pocillos 1-16 17-32 33-48 Solución TMB 1ml 2ml 3ml Solución de peróxido de urea 1ml 2ml 3ml 49-64 4ml 4ml 65-80 81-96 5ml 6ml 5ml 6ml CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 80 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El Químico de serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas. Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan las muestras y controles (los circulos no se pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma ) La forma de colocarlos en la placa es asi: Colocar 3 pocillos con Controles negativos Colocar 1 pocillos con controles positivos Colocar las muestras Adicionar 25microlitros de disruptor a todos los pocillos Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia: Colocar 100microlitros de cada muestra Colocar en los 3 pocillos de Controles negativos 100microlitros del control Colocar en 1 de los pocillos de Controles positivos 100microlitros del control Agitar ligeramente la placa y taparla con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 60min. Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 4 ciclos) La forma de operar del equipo se describe al final del procedimiento. Lavar con tampón fosfato diluido. Quitar exceso del lavado con golpes sobre un papel. Adicionar 100microlitros de Conjugado a todos los pocillos. Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 60min. Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 4 ciclos, lavar con tampón fosfato diluido) Adicionar 100microlitros de sustrato-TMB preparado a todos los pocillos. Incubar a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a todos 100microlitros de ácido sulfúrico 1mol/l (para parar la reacciòn) Se realiza la lectura a 450nm con referencia de 620nm, se interpretan los resultados y guarda el registro en el folder del mes de la Prueba correspondiente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 81 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología RESULTADOS Calificación de los valores de control negativo (CN) La absorbancia de cada pocillo de CN debe ser menor que o igual a 0,090 (longitud de onda doble) o 0,130 (longitud de onda única) y mayor que o igual a 0,000 (longitud de onda doble) o 0,040 (longitud de onda única). Eliminar los valores fuera de rango y determinar el valor de control negativo medio (CNx). Eliminar todo CN que no satisfaga los criterios siguientes, y volver a calcular el valor medio: Longitud de onda doble CN mayo o igual a 0,5x (CNx) CN menor o igual a 1,5x (CNx) Longitud de onda única CN mayo o igual a 0,8x (CNx) CN menor o igual a 1,2x (CNx) Si dos o más valores están fuera del intervalo, el ensayo no es válido y debe repetirse. Calificación de los valores de control positivo (CP) La absorbancia de cada pocillo de CP debe ser mayor que o igual a 0,960 (longitud de onda doble) o 1,000 (longitud de onda única). Valor cutoff Si el ensayo de prueba es válido, calcular el valor cutoff como sigue: Cutoff para suero y plasma = CNx + 0,070 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 82 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología VIDAS HIV DUO (HIV4) Es una prueba de screening para la infección por HIV automatizado en el sistema VIDAS, basado en la detección combinada del antígeno p24 de VIH-1 y las inmunoglobulinas G anti-VIH1 y anti-VIH2 en suero o plasma humano por una técnica ELFA. Los virus de inmunodeficiencia humana (VIH) son retrovirus ARN transmitidos principalmente por vías sexual, parenteral, perinatal y transplacentaria. Desde el aislamiento del VIH 1 en 1993 Y del VIH 2 en 1995, han sido caracterizadas numerosas variantes genéticas. El diagnóstico de una infección por VIH, se basa en la práctica normal en la detección de anticuerpos séricos anti-VIH por una técnica ELISA. Existe un periodo de 3 semanas y media entre la contaminación y la aparición de los primeros anticuerpos. Durante este periodo, el antígeno p24 esta presente en la mayoría de los pacientes infectados por VIH-1, sea cual sea su origen. La detección simultánea de la antigenémia p24 y de los anticuerpos anti-VIH-1 y anti-VIH-2 permite reducir el retraso existente entre la contaminación y el diagnóstico de la infección. Objetivo de VIDAS HIV DUO. Todas las etapas de la reacción están controladas por el sistema. El cono de uso único, sirve a la vez de fase sólida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos están listos para su uso y distribución en el cartucho. Primera reacción La detección de inmunoglobulinas G anti-VIH1 (también las del subtipo (grupo) O) y antiVIH2, se realiza en la parte baja del cono, donde después de la etapa de dilución, la muestra es aspirada y expulsada varias veces de la parte inferior del cono. Esta operación permite a las IgG anti-VIH de la muestra unirse a los péptidos de síntesis gp 41y/o subtipo (grupo) O y/o gp 36 fijados en el cono. Los componentes no ligados se eliminan en los lavados. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 83 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El conjugado anti-IgG humana marcado con fosfatasa alcalina se incuba ahora en el cono, en el cual se fija a las IgG anti-VIH. Los componentes no ligados se eliminan en los lavados. Segunda reacción Es la detección del antígeno p24 y se realiza en la parte alta. La muestra previamente diluida y los anticuerpos de conejo anti-p24 biotinilados son aspirados y expelidos en el cono. Durante la incubación del virus es lisado y los antígenos p24 liberados se unen por un lado los anticuerpos anti-p24 monoclonales de ratón fijados en la parte superior del cono, u por otro lado a los anticuerpos anti-p24 biotinilados. Los componentes no fijados son eliminados mediante estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina, cuyo exceso se elimina mediante lavados. Etapa final La etapa final de revelado se realiza simultáneamente en las dos partes y el substrato (4-metil-umbeliferil fosfato) se aspira y expele en el cono. La enzima presente en el conjugado cataliza la reacción de este substrato en un producto (4-metil umbeliferota) midiendo la fluorescencia emitida a 450nm. Esta es proporcional a la presencia de IgG anti-VIH y/o antígeno p24 presentes en la muestra. Al final de la prueba, los resultados son calculados automáticamente por el VIDAS en relación a un estándar, y posteriormente impresos. El cono es sensibilizado en el momento de la fabricación con 3 péptidos sintéticos ( 1péptido env VIH-1, gp 41 + 1péptido env VIH-2, gp 36 + 1péptido específico VIH-1 grupo O) y 3 anticuerpos monoclonales anti-p24. Los péptidos permiten la captura de las IgG anti-VIH 1 o anti-VIH 2 y los anticuerpos monoclonales el antígeno p24. La identificación de la prueba, el número de lote y la fecha de caducidad están indicadas sobre el cartucho en un código de barras y está compuesto de 10 pocillos. El primer pocillo tiene una parte precortada para facilitar la introducción de la muestra. El último pocillo es una cubeta que permite la lectura por fluorimetría. Los 8 pocillos intermedios contienen los diferentes reactivos necesarios para el análisis. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 84 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Precauciones: No utilizar reactivos después de la fecha de caducidad. No mezclar reactivos o consumibles de equipos diferentes. Utilizar guantes de látex de uso único sin talco (puede provocar falsos). Los reactivos y productos de se recomienda manipular con precaución. Los reactivos se conservan a 2-8 C. MUESTRA: Suero o plasma (EDTA, citrato, trombina, heparina de litio, gel de heparina de litio, oxalato) Las muestras que contienen partículas deberán centrifugarse. Se conservan a 2-8 C, 48 horas como máximo, sino congelar a –25 C. No congelar y descongelar. No descomplementar las muestras. CALIBRACION Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo, se efectúa a la llegada de cada nuevo lote, después de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 días. El estándar identificado como S1, será analizado dos veces y el valor debe encontrarse entre los límites de RFV fijados. Si no la media no será memorizada y se tendrá que repetir la calibración. CONTROL DE CALIDAD Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia de alteraciones de los reactivos. Cada recalibración debe ser verificada con la ayuda de estos controles. Para que el aparato pueda verificar el valor de los controles, es necesario identificarlos mediante C1 y C2. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 85 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Si los valores obtenidos del control positivo se desvían del intervalo de confianza indicado en la etiqueta del frasco. Si el valor se desvía de los valores esperados, los resultados no pueden validarse. La técnica se observa al final del procedimiento. RESULTADOS Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente. El equipo efectúa dos medidas de fluorescencia en la cubeta de lectura para cada prueba: La primera tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta substrato antes de ponerse en contacto el substrato con el cono. La segunda se efectúa después de la incubación del substrato con la enzima presente en el cono. El cálculo del RFV es el resultado de la diferencia de las dos lecturas, apareciendo en la hoja de resultados. El RFV se interpreta por el sistema VIDAS de la siguiente forma: Valor del test = RFV paciente/ RFV calibrador El valor de la prueba y la interpretación se imprimen en la hoja de resultados. La interpretación en función del valor de la prueba es la siguiente: Valor del test Cuando el valor es menor a 0,25 Cuando el valor es menor o igual a 0,25 pero menor a 0,35 Cuando el valor es mayor o igual a 0,35 Resultados Negativo Positivo límite Positivo INTERPRETACION Las muestras cuyo valor sea inferior a 0,25 se consideran negativas dentro de los límites de las características del reactivo. En caso de sospecha de una primo-infección, los valores próximos a 0,25 deberán ser interpretados con prudencia. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 86 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Las muestras con valor superior o igual a 0,25 debe repetirse. Deben ser analizadas con una prueba ELISA en donde se detecta el Ag P24. Si resulta positivo se realiza una ELISA donde solo se detecta Ag P24. BRUCELA (ANTIGENO BLANCO) PRUEBA DE AGLUTINACIÒN LENTA EN PRESENCIA DE 2-MERCATOETANOL Esta es una técnica cuantitativa para la determinación de anticuerpos anti-Brucella de la clase IgG e IgA (Marcadores de infección activa). El antigeno que se utiliza es la cepa de B. Abortus. Al ponerse en contacto con los anticuerpos, estos van uniéndose entre si a las bacterias suspendidas desarrollando la reacción de aglutinación, de esta manera se van depositando en el fondo formando una malla visible. La molécula de 2-mercaptoetanol actúa sobre la cadena J de la molécula de IgM liberando las subunidades, mismas que pierden la capacidad de aglutinar, por lo que la reacción visible se debe fundamentalmente a la presencia de IgG e IgA. Para observar mejor la reacción se realiza la lectura frente a una fuente de luz. El titulo de cada muestra se determina tomando en cuenta la dilución más alta en donde se observa una reacción positiva. Reacción positiva: Formación de una malla de aglutinación en el fondo del pozo con clarificación del medio. Reacción negativa: Permanece la turbidez del medio y el fondo se aprecia un acumulo de células sedimentadas en forma de botón. INTERPRETACION Los resultados en esta prueba se consideran significativos desde títulos de 1/20, reflejando así una etapa activa de la infección. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 87 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El Químico de serologiamarca la placa a utilizar con los # del 1 al 12 y en el otro extremo con las letras A a la H. Diluir el diluyente para suero (2-Me) con SSI ( dilución 1:10) -Adicionar 180microlitros de esta solución en los pozos marcados como H -Adicionar 100microlitros en el resto de los pozos Adicionar 20microlitros de cada muestra de la siguiente manera: En los pozos 1H al 10H colocar la muestra problema En el pozo 11 H El Control positivo En el pozo 12 H Control negativo Para realizar las diluiciones se requiere: -Subir y bajar 3 veces con la pipeta para mezclar el suero -Tomar 100microlitros del pozo H y pasarlos al pozo G -Mezclar y pasar 100microlitros al pozo F se continua de la misma forma hasta llegar al pozo A. Después de mezclar se descartan 100microlitros de este último para igualar el volumen. PUNTA DIFERENTE PARA CADA MUESTRA Agitar el antígeno y diluir con SSI (diluir 1:10) Mezclar y colocar 100microlitros de esta suspensión a todos los pozos Cubrir la placa para evitar desecación e incubar a 37 C de 20-24 hrs. Leer la placa y anotar el resultado en la Bitácora de serologia CAL-13-A CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 88 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología TRANSPLANTE DE MEDULA OSEA CITOMEGALOVIRUS VIDAS CMV IgG (CMVG) Diagnostico in vitro Determinación inmunoenzimàtica de IgG anticitomegalovirus (CMVG) en suero humano por tècnica ELFA (enzima LINKED flourecente validación) El citomegalovirus forma parte de la familia de los herpes virus. Causa patologías graves tanto en niños como en adultos. Puede persistir durante años en la persona infectada Es causante de infecciones recurrentes Se puede transmitir a otros individuos. Existen casos de entre un 60 – 85% de la población infectada, la mayoría se tratan de casos asintomáticos. Entre el 1 -3% de los casos se da en mujeres embarazadas y en 1 caso de cada 2 la infecciòn se transmite al feto, siendo una infección asintomático. En 5% de los casos puede tener consecuencias graves como: Hepato especnomegália Hidrocefalia Micromegalia Partos prematuros. La muerte del feto es frecuente. En infecciones asintomáticas el 10% de los niños presentan secuelas neurosensoriales tales como: Sordera Ceguera parcial o total. Pude causar infecciones severas en personas inmunodeprimidas (infectadas por VIH o transplantados). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 89 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología VIDAS CMV IgG es una tecnica automatizada que permite medir cuantitativamente las IgG anti CMV en suero humano. El principio de determinación asocia el método inmunoenzimático a una lectura final en fluorescencia (ELFA). Todas las etapas de la reacción están controladas por el sistema. El cono de uso único, sirve a la vez de fase sólida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos están listos para su uso y distribución en el cartucho. La identificación del la prueba, el número de lote y la fecha de caducidad están indicadas sobre el cartucho en un código de barras. La identificación de la prueba, el número de lote, los parámetros de calibración y el título del calibrador, están indicados claramente y contenidos en un código de barras de la ficha de especificaciones adjuntas al equipo. Precauciones: No mezclar reactivos de lotes diferentes. Dejar reactivos a temperatura ambiente 30 min. antes de su empleo. Comprobar que el deshidratante contenido en la bolsa de los conos no cambia de color (pasa de azul al rosa). Homogenizar el cartucho con los calibradores, controles y muestras para una mejor reproducibilidad de los resultados. Utilizar guantes de látex de uso único sin talco. MUESTRA: Suero: No descomplementados No hemolizados No contaminados Se conservan 5 días a 2-8C, congelar a -20C. No congelar y descongelar sucesivamente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 90 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología CALIBRACION Se efectua mediante el estándar incluido en el equipo , se efectúa a la llegada de cada nuevo lote, después de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 días. El estándar identificado como S1, será analizado dos veces y el valor debe encontrarse entre los límites de RFV fijados. Si no la media no será memorizada y se tendrá que repetir la calibración. CONTROL DE CALIDAD Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia de alteraciones de los reactivos. Cada recalibración debe ser verificada con la ayuda de estos controles. Si los valores obtenidos de los controles se desvían de los valores esperados, los resultados no pueden validarse. La técnica se puede observar al final del procedimiento. RESULTADOS Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente y las concentraciones en IgG anti CMV del suero o controles son calculados por el equipo. Los resultados son expresados en Ua/ml respecto a una curva de calibración memorizada en el equipo. Umbral e interpretación de los resultados Valor (Ua/ml) Interpretación Menor a 4 Negativo Mayor o igual a 4 pero menor a 6 Dudoso Mayor o igual a 6 Positivo Para valores entre 4 y 6, repetir la prueba. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 91 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología RESULTADOS FUERA DE LA CURVA Las muestras con resultado mayor de 400 Ua/ml pueden ser diluidas al ¼ en suero fisiológico. Multiplicar el resultado por el factor de dilución para obtener el título de la muestra. Solo diluir las muestras cuyo título puro sea mayor a 400 Ua/ml. VALOR CRITICO Determina un aumento significativo del nivel de anticuerpos, equivalente a un aumento de 4 veces el título de anticuerpos. Este aumento indica que existe una infección activa, y se calcula como sigue: Valor crítico: Muestra convaleciente Ua/ml / muestra aguda Ua/ml Valor Crítico Menor a 2 De 2 a 4 Mayor a 4 Interpertación Sin cambio significativo del nivel de anticuerpos. Valor crítico evocador de un aumento de anticuerpos. Una muestra suplementaria deberá ser extraída y analizada entre 7 y 14 días, y reestudiado con la primera para recalcular el valor crítico. Aumento del nivel de anticuerpos muy significativo. Se recomienda repetir las muestras agudas y convalecientes en la misma lista de trabajo del VIDAS. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 92 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología VIDAS CMV IgM (CMVM) Diagnostico in vitro Pra esta prueba no es recomendable utilizar plasma. Determinación cualitativa inmunoenzimática de IgM anti-citomegalovirus (CMVM) en suero humano por técnica ELFA (enzima LINKED flourecente validación) El citomegalovirus forma parte de la familia de los herpes virus. Causa patologías graves tanto en niños como en adultos. Puede persistir durante años en la persona infectada Es causante de infecciones recurrentes Se puede transmitir a otros individuos. Existen casos de entre un 60 – 85% de la población infectada, la mayoría se tratan de casos asintomáticos. Entre el 1 -3% de los casos se da en mujeres embarazadas y en 1 caso de cada 2 la infecciòn se transmite al feto, siendo una infección asintomático. En 5% de los casos puede tener consecuencias graves como: Hepato-esplenomegalia Hidrocefalia Micromegalia Partos prematuros. La muerte del feto es frecuente. En infecciones asintomáticas el 10% de los niños presentan secuelas neurosensoriales tales como: Sordera o ceguera parcial o total. Pude causar infecciones severas en personas inmunodeprimidas ( infectados por VIH o transplantados). La detección de las I g M anti- CMV puede ser útil en el diagnóstico de las infecciones primarias recientes, particularmente en mujeres embarazadas. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 93 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología La detección de las IgM puede presentar resultados falsamente positivos debido al factor reumatoide, y resultados falsamente negativos debido a la presencia de IgG. Problemas que se evitan con la adsorción. El principio de determinación asocia el método inmunoenzimático a una lectura final en fluorescencia (ELFA). Todas las etapas de la reacción están controladas por el sistema. El cono de uso único, sirve a la vez de fase sólida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos están listos para su uso y distribución en el cartucho. Una vez adsorbidas las IgG y el factor reumatoide, la muestra es aspirada y expulsada del interior del cono durante un tiempo determinado. Los anticuerpos IgM anti- CMV presentes en la muestra van a fijarse en el antígeno CMV fijado en la pared interne del cono. Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados. Un anticuerpo monoclonal anti-IgM humano marcado con fosfatasa alcalina es aspirado y expulsado dentro del cono y se va a fijar en las IgM anti- CMV humanas fijados en la pared del cono. La etapa de lasvado elimina los componentes no fijados. La etapa final de revelado, el substrato (4-metil-umbeliferil fosfato) es aspirado y después expulsado en el cono; la enzima del conjugado cataliza la reacción de hidrólisis de este substrato en un producto (4-metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es medida a 450nm. La identificación del la prueba, el número de lote y la fecha de caducidad están indicadas sobre el cartucho en un código de barras, el primer pocillo tiene una parte precortada para facilitar la introducción de la muestra. Precauciones: No utilizar reactivos después de la fecha de caducidad. No mezclar reactivos o consumibles de equipos diferentes. Utilizar guantes de látex de uso único sin talco (puede provocar falsos). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 94 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología MUESTRA: Suero: No descomplementados No hemolizados No contaminados Se conservan 5 días a 2-8C, congelar a -20C. No congelar y descongelar sucesivamente. No sueros lipémicos, bemolizados o contaminados. CALIBRACION Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo , se efectúa a la llegada de cada nuevo lote, después de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 días. El estándar identificado como S1, será analizado dos veces y el valor debe encontrarse entre los límites de RFV fijados. Si no la media no será memorizada y se tendrá que repetir la calibración. CONTROL DE CALIDAD Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia de alteraciones de los reactivos. Cada recalibración debe ser verificada con la ayuda de estos controles. Para que el aparato pueda verificar el valor de los controles, es necesario identificarlos mediante C1 y C2. Si los valores obtenidos del control positivo se desvían del intervalo de confianza indicado en la etiqueta del frasco. Si el valor se desvía de los valores esperados, los resultados no pueden validarse. La técnica se puede observar al final del procedimiento. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 95 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología RESULTADOS Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente. El equipo efectúa dos medidas de fluorescencia en la cubeta de lectura para cada prueba: La primera tiene en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta substrato antes de ponerse en contacto el substrato con el cono. La segunda se efectúa después de la incubación del substrato con la enzima presente en el cono. El cálculo del RFV es el resultado de la diferencia de las dos medidas. Aparece en la hoja de resultados. El índice i de la prueba es calculado por el instrumento (es la relación entre la señal fluorescente encontrada para el suero a analizar con respecto a la señal memorizada del estándar). Umbral e interpretación de los resultados Indice Una i menor a 0,70 Cuando i es menor o igual a 0,70 y pero menor a 0,90 Cuando i es mayor o igual a 0,90 Interpretación Negativo Dudoso Positivo Para índices entre 0,70 y 0,90, repetir la prueba. Si la verificación vuelve a dar dudosa, se repite el análisis sobre un nuevo suero tomado entre 10 y 15 días más tarde. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 96 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología TOXOPLASMA VIDAS TOXO IgG II (TXG) Diagnostico in vitro Determinación cuantitativa inmunoenzimática de las IgG anti-toxoplásmaticas en suero o plasma humano (anticoagulante permitido EDTA, heparina) por técnica ELFA (enzima LINKED flourecente validación) Ayuda a conocer el estado inmunitario. El Toxoplasma gondii, es un protozoario, parásito intracelular obligatorio, es un patógeno muy extendido en el hombre. Parásito cuyo huésped definitivo es el gato, se disemina en la naturaleza e infecta a numerosos mamíferos. Las afecciones en personas inmunocompetentes es discreto, pero las afecciones fetales así como en inmunocomprometidos puede ser muy severa. Mujeres O positivo antes de quedar embarazada, no transmiten el paràsito usualmente el parásito a su hijo. Mujeres O negativo, son susceptibles de ser infectadas en el curso del embarazo. La transmisión al feto ocurre durante la fase aguda de la enfermedad. La gravedad y frecuencia de la afectación fetal depende de: Fecha de la infección materna Virulencia de la cepa infectante Importancia del inóculo Calidad de la respuesta inmune de la madre. El diagnóstico de la infección se basa en la exploración biológica: búsqueda de inmunoglobulinas específicas (IgM e IgG). El diagnóstico de una infección aguda adquirida durante el embarazo se realiza poniendo de manifiesto una seroconversión, o por un aumento significativo del título de anticuerpos detectados en dos muestras secuénciales testadas en paralelo. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 97 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El principio de determinación asocia el método inmunoenzimático sándwich etapas con una lectura final en fluorescencia (ELFA). en dos Todas las etapas de la reacción están controladas por el sistema. El cono de uso único, sirve a la vez de fase sólida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos están listos para su uso y distribución en el cartucho. Todas las etapas de la reacción están controladas y son realizadas por el sistema. En a primera etapa la muestra se diluye, se aspira y expulsa del interior del cono durante un tiempo determinado. Los anticuerpos anti-T. gondii IgG presentes en la muestra van a fijarse en los antígenos de T. gondii fijado en el interior del cono. Las etapas de lavado eliminan los componentes no fijados. Las IgG de ratón monoclonales anti-IgG humanas conjugadas con fosfatasa alcalina son expulsadas y aspiradoas del interior del cono y se van a fijar en las IgG humanas fijados en la pared interna del cono. La etapa final de revelado, el substrato (4-metil-umbeliferil fosfato) es aspirado y después expulsado en el cono; la enzima del conjugado cataliza la reacción de hidrólisis de este substrato en un producto (4-metil-umbeliferona) cuya fluorescencia emitida es medida a 450nm. Proporcional a la concentración de anticuerpos presentes en la muestra. El cono esta sensibilizado con antìgeno toxoplásmatico de membrana y citoplásmico, cada cono está identificado por el código TXG. Se utilizan solo los conos necesarios y se deje el resto en la bolsa. La identificación del la prueba, el número de lote y la fecha de caducidad están indicadas sobre el cartucho en un código de barras, el primer pocillo tiene una parte precortada para facilitar la introducción de la muestra. El último pocillo es una cubeta que permite la lectura por fluorimetría. Los pocillos intermedios contienen los diferentes reactivos necesarios para el análisis. Precauciones: No usar reactivos después de la fecha de caducidad. No mezclar reactivos o consumibles de lotes diferentes. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 98 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Utilizar guantes de látex de uso único sin talco. Manejar cada reactivo con sumo cuidado. Homogenizar el cartucho con los calibradores, controles y muestras para una mejor reproducibilidad de los resultados. MUESTRA: Suero o plasma (EDTA, heparina) No hemolizados No contaminados Se conservan 5 días a 2-8C, congelar a -25C. No congelar y descongelar sucesivamente. CALIBRACION Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo, se efectúa a la llegada de cada nuevo lote, después de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 días. El estándar identificado como S1, será analizado dos veces y el valor debe encontrarse entre los límites de RFV fijados. Si no la media no será memorizada y se tendrá que repetir la calibración. CONTROL DE CALIDAD Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia de alteraciones de los reactivos. Cada recalibración debe ser verificada con la ayuda de estos controles. Si los valores obtenidos de los controles se desvían de los valores esperados, los resultados no pueden validarse. La técnica se puede observar al final del procedimiento. RESULTADOS Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente. El equipo realiza dos lecturas de fluorescencia en la cubeta óptica para cada prueba. La primera toma en cuenta el ruido de fondo debido a la cubeta y al substrato. La segunda lectura se realiza después de la incubación del substrato en el cono. El cálculo de RFV es el CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 99 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología resultado de la diferencia entre ambas lecturas y aparece en la hoja de resultados, se interpretan en Ul / ml. Umbral e interpretación de los resultados Título (Ul/ml) Menor a 4 Mayor o igual a 4 pero menor a 8 Mayor o igual a 8 Interpretación Negativo Dudoso Positivo RESULTADOS FUERA DE LA CURVA Las muestras con resultado mayor de 300 Ul/ml pueden ser diluidas al ¼ en el control negativo. Si el factor de dilución no se ha indicado en la lista de trabajo, multiplicar el resultado por el factor de dilución para obtener la concentración de la muestra. VIDAS TOXO IgM (TXM) Diagnostico in vitro Determinación inmunoenzimática de las IgM anti-toxoplásmaticas en suero humano por técnica ELFA (enzima LINKED flourecente validación). Tras la inmunocaptura de las IgM del suero, las IgM antitoxoplásmaticas se detectan específicamente gracias a un inmunocomplejo marcado con fosfatasa alcalina. Ayuda a conocer el estado inmunitario. Los reactivos se conservan a 2-8 C y su fecha de caducidad esta indicada en el envase. Todas las etapas de la reacción están controladas por el sistema. El cono de uso único, sirve a la vez de fase sólida y de sistema de pipeteo El resto de los reactivos están listos para su uso y distribución en el cartucho. Precauciones: No usar reactivos después de la fecha de caducidad. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 100 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología No mezclar reactivos de lotes diferentes. Los reactivos después de ser utilizados deben ser correctamente eliminados. Utilizar guantes de látex de uso único sin talco. Manejar cada reactivo con sumo cuidado y desecharlos adecuadamente. MUESTRA: Suero No hemolizados No contaminados Se conservan 5 días a 2-8C, congelar a -20C. No congelar y descongelar sucesivamente. CALIBRACION Se efectúa mediante el estándar incluido en el equipo , se efectúa a la llegada de cada nuevo lote, después de introducir las especificaciones del lote y se realiza cada 14 días. El estándar identificado como S1, será analizado dos veces y el valor debe encontrarse entre los límites de RFV fijados. Si no la media no será memorizada y se tendrá que repetir la calibración. CONTROL DE CALIDAD Se incluye un control positivo y un control negativo en cada equipo, estos controles se debe utilizar cada vez que se utiliza un nuevo equipo con el fin de verificar la ausencia de alteraciones de los reactivos. Cada recalibración debe ser verificada con la ayuda de estos controles. Si los valores obtenidos de los controles se desvían de los valores esperados, los resultados no pueden validarse. La técnica se puede observar al final del procedimiento. RESULTADOS CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 101 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Los resultados de la prueba los analiza el mismo equipo automáticamente y el l índice i de la prueba es calculado por el instrumento (es la relación entre la señal fluorescente encontrada para el suero a analizar con respecto a la señal memorizada del estándar). Umbral e interpretación de los resultados Indice Una i menor a 0,55 Cuando i es menor o igual a 0,55 pero menor a 0,65 Cuando i es mayor o igual a 0,65 Interpretación Negativo Dudoso Positivo Para índices entre 0,55 y 0,65, repetir la prueba. Si la verificación vuelve a dar dudosa, se repite el análisis sobre un nuevo suero tomado. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 102 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El equipo Mini VIDAS se enciende con el interruptor que se encuentra en la parte de abajo en la zona de en medio a un lado del cable de conexión Mini VIDAS BOOT R1.13 MES DIA AÑO HORA: MINUTOS: SEG 1992 bioMerieox Vitek, Inc. All Rights Reserved Booting ………….. Initializing Please wait …….. Se puede introducir el cartucho en cualquiera de los RAP de muestra A y B Se introduce el cartucho para que la zona con el punto verde se siga viendo. Inicializar sección …………………. Pantalla de estado ………………… Menú de calibración ……………….. Menú de resultados ……………….. Menú de utilidades ………………… Error codigo de barras: # Hora: día/mes/año Atención: Estandar de Prueba # caducidad Reporta cada estandar caducado Inicializar sección …………………. Pantalla de estado ………………… Menú de calibración ……………….. Menú de resultados ……………….. Menú de utilidades ………………… Cuando se introduce un kit nuevo en la charola Dar click en Menú de calibración……... Lectura del lote …………………. Introd. Manual del lote patrón … Introd. Hoja manual TOS …..….. Lista de standares memorizado. Lista de lote patrón …………,… CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 103 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Seleccionar Lista de standards memorizados…….. Se observa en la pantalla la prueba a realizar TXG………… TXM ……….. HIV4 ………. Buscando estandares Nombre de la Prueba Lote: # HR.: MIN.: SEG DIA/MES/AÑO Caducidad : HR:MIN:SEG DIA/MES/AÑO # : # BORRAR……... Como es un Kit nuevo se introduce la información Lectura del lote …………………. Introd. Manual del lote patrón … Introd. Hoja manual TOS …..….. Lista de standares memorizado. Lista de lote patrón …………,… Seleccionar Lectura del lote ……………... Sección A ………….. Sección B …….……. Se pone la tarjeta de codigo de barras en la charola y se introduce en A o en B Por favor, espere ………. Si algun codigo de barras esta dañado manda el siguiente mensaje Error codigo de barras: # Hora: HR: MIN: SEG DIA/MES/AÑO Datos tarjeta MLE incorrectos Seleccionar Introd. Manual del lote patrón……... Lectura automática 1/16| BORRAR………. DEFECTUOSO O # DE CODIGO DE BARRAS CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 104 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología A B C …………..Z + Se debe verificar todos para ver cual es que esta mal Cuando llego al 16 / 16 se da un regreso de pantalla Datos de lote incorrectos ¿ Editar de nuevo? SI ………. NO ………. Seleccionar SI ………. Se observa la siguiente pantalla Lectura del lote …………………. Introd. Manual del lote patrón … Introd. Hoja manual TOS …..….. Lista de standares memorizado. Lista de lote patrón …………,… Dar un regreso de pantalla a la principal Inicializar sección …………………. Pantalla de estado ………………… Menú de calibración ……………….. Menú de resultados ……………….. Menú de utilidades ………………… Seleccionar Pantalla de estado ……….. A B Disponible ………………….. Disponible ………………….. Visualizar temp…………. Seleccionar Visualizar temp…………. Temperatura Bandeja A: # B: # Conos # # Imprimir ……………. Dar un regreso de pantalla a la principal A B Disponible ………………….. Disponible ………………….. Visualizar A o B CAL-02-B temp…………. en la charola que se desea trabajar Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 105 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Sección A 1 2 3 # de cartuchos que puedes utilizar COMENZANDO …………. Selecciono el # 1 Posición A1 S ……….…… C……….……. Test ……….… Dilución …..… ID Muestra .... Se S ………… Se tienen 2 standares Introducir el número de estándar (1-4) Seleccionar el # 1 Posición A1 S1 S ……….…… C……….……. Test ……….… Dilución …..… ID Muestra .... Seleccionar Test …………... Programas a utilizar CH2 CHB CDA2 CDB Para seleccionarla moverte con las fechas Seleccionar el que se va a utilizar Por favor, esperar Dar un regreso de pantalla a la principal Posición S1 Programa utilizado A1 S……...……... C……….……. Test ……….… Dilución …..… ID Muestra .... Paso a la siguiente posición CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 106 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Seleccionar C …….. e introducir # controles Selecciono ID Muestra ………………. Posición Nombre A # ID completo Borrar ….…… …….……. M1 ……….… M2…...……. Z Moverse con las flechas No da espacios Cuando ya no se desea colocar otra muestra se busca el simbolo de pantalla siguiente Por favor, esperar Seleccionar Test …………... Seleccionar Borrar …………... Borar configuración de la posición……… Borar configuración de la sección……... Seleccionar Borar configuración de la posición……... Posición S1 Programa utilizado A # S……...……... C……….……. Test ……….… Dilución …..… ID Muestra .... Se observa lo que se programo: 1 2 3 4 Nombre Sección A Nombre de la Prueba S1 Nombre de la Prueba S2 Control C1 Control C2 completo del donador o paciente COMENZANDO …………... CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 107 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Los frascos de los reactivos VIDAS HIV DUO C1 Control + VIDAS HIV DUO C2 Control VIDAS HIV DUO S1 Estandar Agitar en el vortex Adicionar 100microlitros del reactivo correspondiente y colocar el cartucho en el orificio que tiene suero o plasma, cerrar la puerta A o B. Presionar COMENZANDO……………. Aparece en la pantalla lo siguiente: ID Técnico 1: 2: 3: Seleccionar el # corresspondiente al nombre del Químico que esta realizando la prueba Código de barras………… Disponible ……………….. Visualizar temperatura …... Comenzando ………… Disponible ……………….. Visualizar temperatura …... RUN ………… Disponible ……………….. Visualizar temperatura …... INICIAR EL PROCESO CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 108 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología VIRUS DE EPSTEIN BAAR VIRONOSTIKA EBV VCA IgM e IgG Es un enzimoinmunoensayo ELISA para la determinación cualitativa y semicuantitativa de anticuerpos IgM o IgG frente al Antígeno de la Cápside del Virus Epstein Barr en suero o plasma humano. Esta indicado como ayuda en el diagnóstico de infección por EBV primaria o reactivada. El virus Epstein Barr es el agente etiológico de la mononucleosis infecciosa (MI) e interviene en el linfoma de Burkitt y en el carcinoma nasofaríngeo. El péptido p18 VCA, una proteína marcadora específica del VCA recién definida única del EBV, se utiliza en el Vironostika EBV VCA IgM junto con un anticuerpo monoclonal específico de p18 VCA como conjugado. Péptido formado po 56 aminoácidos codificados por la secuencia de inicio de lectura BRRF3. Para IgG se utiliza anti-IgG humana de cabra como conjugado. Péptido, bien caracterizado, está formado por 56 amonoácidos codificados por la secuencia de inicio de lectura BRRF3. En IgM la técnica se fundamenta en el principio de captura de anticuerpos, los pocillos se hallan recubiertos de anticuerpo monoclonal contra IgM humano que constituye la fase sólida. En IgG la técnica se fundamenta en el principio de sándwich, los pocillos se hallan recubiertos con péptidos sintéticos p18 EBV VCA que constituye la fase sólida. RESULTADOS CUALITATIVOS IgM Los cálculos deben efectuarse por separado para cada soporte de tiras. Validez de la prueba Abreviaturas: Cal I: Absorbancia del calibrador I Cal II: Absorbancia del calibrador II Cal IV: Absorbancia del calibrador IV 1. Cal I debe ser menor a 0,300 2. Determinar el valor medio de Cal II (Cal IIx) Cal II debe ser mayor o igual a 0,75 Cal IIx menor o igual y 1,25 Cal IIx CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 109 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Si un (máximo de un ) replicado de Cal II no cumple esta condición, eliminar el más externo, y volver a calcular Cal IIx para la calificación de los replicados Cal II restantes. 3. Cal IV - Cal IIx debe ser mayor a 0,600. Un ensayo es válido si se cumplen los criterio indicados anteriormente. Valor cutoff Si el ensayo es válido, el valor del cuoff= Cal IIx. RESULTADOS Una muestra es reactiva para anticuerpos IgM contra EBV VCA si la absorbancia de la muestra es mayor o igual del valor del cutoff. Una muestra es no reactiva para anticuerpos IgM contra EBV VCA si la absorbancia es menor del valor del cutoff. IgG Los cálculos deben efectuarse por separado para cada soporte de tiras. Validez de la prueba Abreviaturas: Cal I: Absorbancia del calibrador I Cal II: Absorbancia del calibrador II Cal IV: Absorbancia del calibrador IV 1. Cal II debe ser menor a 0,250 2. Determinar el valor medio de Cal II (Cal IIx) Cal II debe ser mayor o igual a 0,75 Cal IIx menor o igual y 1,25 Cal IIx Si un (máximo de un ) replicado de Cal II no cumple esta condición, eliminar el más externo, y volver a calcular Cal IIx para la calificación de los replicados Cal II restantes. 3. Cal IV - Cal IIx debe ser mayor a 0,750. Un ensayo es válido si se cumplen los criterio indicados anteriormente. Valor cutoff Si el ensayo es válido, el valor del cuoff= Cal IIx. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 110 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología RESULTADOS Una muestra es reactiva para anticuerpos IgG contra EBV VCA si la absorbancia de la muestra es mayor o igual del valor del cutoff. Una muestra es no reactiva para anticuerpos IgG contra EBV VCA si la absorbancia es menor del valor del cutoff. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 111 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El Técnico de Serologia escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, calibradores (los pocillos no se pueden marcar ) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra puede ser plasma o suero). Se realiza una dilución 1:101 en un tubo previamente marcado (1ml del diluyente de muestras +10microlitros de la muestra) se homogeniza con la misma punta y la deja la punta dentro del tubo De la placa e deja la primera tira para puros controles y empezando con la segunda tira se coloca 100microlitros simultaneamente en la placa para IgM y en la de IgG de la dilución de la muestra. Se corrobora que los reactivos para las IgG e IgM estan bien identificados y se procede a colocarlos en los respectivos pocillos Coloco en los pocillo 100microlitros de cada CALIBRADOR para IgM que contienen: Coloco en los pocillo 100microlitros de cada CALIBRADOR para IgG que contienen: CALIBRADOR 1: 5 U CALIBRADOR 2: 20 U CALIBRADOR 3: 80U CALIBRADOR 4: 140U CALIBRADOR 1: 10 U CALIBRADOR 2: 20 U CALIBRADOR 3: 110U CALIBRADOR 4: 170U POR DUPLICADO CADA CALIBRADOR POR DUPLICADO CADA CALIBRADOR EJEMPLO: POCILLO 1 y 2 CALIBRADOR 1 POCILLO 3 y 4 CALIBRADOR 2 POCILLO 5 y 6 CALIBRADOR 3 POCILLO 7 y 8 CALIBRADOR 4 (por eso se deja una linea para calibradores) Tapo las placas con cinta ahesiva y se pone a incubar durante 1 hr. a 37 C Prepara una solución Buffer de fostatos 1:25 (480ml de agua destilada + 20ml de Buffer de fostatos) y con ella realizo el lavado. Lavo con el LP 35 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR (Programa 5 con 4 cliclos) CONJUGADO PARA IgM El conjugado que se va aprepar a continuación requiere como minimo 10 min para su preparación por lo que se debe ´prepara con anterioridad para que se encusntre homogenizado a la hora de colocar en los pocillos. PREPARACION DEL CONJUGADO: En el frasco que contiene la solución de reconstituyente de conjugado adiciono 5ml de la solución reconstituyente de conjugado y pongo a agitar hasta que se encuentra homogeo. Cuando se encuentra totalmente resuspendido se agregan 100microlitros de conjugado. CONJUGADO PARA IgG PREPARACION DEL CONJUGADO: Para dos tiras aproximadamente Se toman 2.5ml de diluyente de conjugado y se mezcla con 50microlitros de conjugado, y se homegeniza y se agregan 100microlitros de conjugado Tapo las placas con cinta ahesiva y se pone a incubar durante 1 hr. a 37 C Lavo con el LP 35 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR (Programa 5 con 4 cliclos) Se adicionan 100microlitros de TMB y se deja a temperatura de entre 18-.22 C durante 30 min. y se para la reacción con 200microlitros de solución de acido sulfurico 1N Una hora despues se realiza la lectura aen el LP 400 SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR a 450nm CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 112 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología EQUIPO MINI VIDAS Se utiliza para realizar las siguientes pruebas: Elisa de 4ta Generación, detecta Ag p24 y Ac HIV-1/2 En paciente con T.M.O. para Citomegalovirus y Toxoplasmosis. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 113 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología SANOFI DIAGNOSTICS PATEUR LP 35 El equipo SANOFI DIAGNOSTICS PATEUR LP 35 se enciende con el interruptor que se encuentra en la El equipo tiene 3 botes: 1. Solución de lavado, 2. Agua destilada y 3. Desechos Primero se realiza el mantenimiento: En la pantalla se observa los siguiente: WASH? N/ WASH PARM? RIUSE? Y/ WASH? W/TEST NUM:01? Y/ WASH? W/CYCLES NUM: 04? Y/ WASH? W/STRIPS NUM:04? Y/ WO1/ CYC:4/ST:04? Y/ Se cambian las mangueras a la solución de lavado Lavado de la muestra WASH? W/TEST NUM:01? Y/ WASH? W/CYCLES NUM: 05? Y/ WASH? W/STRIPS NUM:04? Y/ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 114 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología ESPECTROFOTOMETRO SANOFI PASTEUR LP 400 El Equipo SANOFI PASTEUR LP 400 se enciende con el interruptor que se encuentra en la parte del frente del equipo e inmediatamente checa los filtros. En la pantalla se observa los siguiente: SELF TEST REPORT ENTER LP 400 (FAST) (START) (DATA) (ASSAY) (SETUP) Colocar la placa y presionar (DATA) DATA: SELECT DATA MANIP. FUNTION (IDENT) (LIST) (RECALC) ( DIR) (CLEAR) Presinar (IDENT) DATA/IDENT: ENTER ID KEYS/BARCODE PLATE ID: Se escribe la fecha como identificación y se presiona (ENTER) DATA/IDENT: SELECT ASSAY (NUM/CURSOS) ASSAY NR: Presionar el # asignado a la prueba que desea realizar que va del 1 al 7 Se observa en la pantalla # - Prueba seleccionada presionar (ENTER) DATA/IDENT: ENTER ID KEYS/BARCODE FIRST SAMPLE ID: Seleccionar el # 1 y presionar (ENTER) DATA/IDENT: TOTAL NUMBER OF SAMPLES n: Seleccionar el # de pocillos que desea que se lean (sin contar blanco, controles internos y externos), Teclear el # y dar un (ENTER) DATA/IDENT: INCREMENT FOR SAMPLE ID I= # DE Seleccionar el # 1 y presionar (ENTER) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 115 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología IDENTIFICACION # SAMPLES PUT ON 1 PLATE (S) Presionar (ENTER) LP 400 (FAST) (START) (DATA) (ASSAY) (SETUP) Presionar (START) START: SELECT PLATE W/ CURSOR Nr. 1-ID: Fecha que puse como identificación identified Presionar (ENTER) START: PRINTOUT INMEDIATELY? (YES) (NO) Presionar (YES) MEASURING 450 620 PRINTING ASSAY # (# de prueba) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 116 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Incubadora ABBOTT COMMANDER La incubadora ABBOTT COMMANDER se enciende con el interruptor que se encuentra en la parte de atras del equipo Se presiona el botón que indica la temperatura que se desea y se observa que aparece en la pantalla Se indica en cual carril se pondra el soporte que contiene la prueba y se presiona el # La pantalla se pone en ceros para que se especifique el tiempo a los que desea suene la alarma Una vez que se introduce la prueba se presiona el # de carril donde se metio y empieza a correr el tiempo Una vez que pasa el tiempo especificado suena la alarma y se puede sacar la placa introducida La bitácora de Resultados de Serologia CAL-13-A debido a su tamaño no se muestra dentro de este procedimiento. La bitácora de Resultados de Serologia CAL-13-A se llena de la siguiente manera: Fecha: No.: Disponente: Día, mes y año en que se realizó la toma de muestra. Número asignado en toma de muestra. Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s) del donador. Para la valoración de los siguientes datos se toma en cuenta las especificaciones que se encuentran en la NOM-003-SSA2-1993. Hematología Hto: Hb: Leu: Plq: Prot: CAL-02-B Hematocrito el valor es obtenido del equipo Sysmex. Hemoglobina el valor es obtenido del equipo Sysmex. Leucocitos el valor es obtenido del equipo Sysmex. Plaquetas el valor es obtenido del equipo Sysmex. Se deja el espacio vació. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 117 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Sistema ABO Se especifica en el recuadro correspondiente la letra(s) del grupo sanguíneo o se palomea. A, B, AB, O: A1, H: Tipos de Grupo sanguíneo del Sistema A,B,O del donador . Subgrupos sanguíneos de A cuando el donador es del grupo sanguíneo A. (Ver procedimiento CAL- 25) Se especifica en el recuadro correspondiente la palabra del factor sanguíneo o se palomea. Pos. Neg. D Factor sanguíneo positivo. Factor sanguíneo negativo. Cuando el Rh es negativo se realiza la confirmación en el sistema DianaGel antiD (Ver procedimiento CAL- 25) Se especifica si es negativo (-) o positivo (+) . Los siguientes datos se toman del formato F-A-14-23: D, C, E, e, c: SRr Se realizan por medio del sistema DianaGel anti-D (Ver procedimiento CAL-25), los resultados de la lectura del fenotipo se reportan como positivo(+) o negativo (-) en el cuadro correspondiente. La resultados de la lectura del fenotipo se lee en CAL-13-B. RASTREO DE Abi FSABO Este análisis se realiza a: Todas las mujeres donadoras. Personas politransfundidas. Como rutina el análisis se realiza con el REAGENT RED BLOOD CELLS FOR ANTIBODY DETECTION CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 118 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Post. Negt. Ab Cuando el análisis de rutina es positivo se debe de realizar una prueba más especifica con los reactivos que son surtidos por el Banco de Sangre del Instituto Mexicano del Seguro Social (presenta fecha de caducidad). Para resultados positivos se palomea el cuadro o se escribe la palabra positivo y se establece la especie del mismo (Ver procedimiento CAL- 25) Cuando el análisis de rutina es negativo se palomea el cuadro o se escribe la palabra negativo (Ver procedimiento CAL- 25). Se deja el espacio vació. HEMOLISINAS Este análisis se realiza solo a Personas con grupo sanguíneo O (Ver Procedimiento CAL- 25) Negt. Post. Se palomea el cuadro cuando es negativo. Se palomea el cuadro cuando es positivo. SEROLOGIA BASICA Las Pruebas serólogicas siguientes son realizadas a todas las muestras de los donadores y son reportan como: Reactiva Se sella con esta leyenda cuando se considera que el análisis de la muestra presenta una probable infección. Se realiza la Prueba confirmatoria con la 1era muestra y una ELISA con la segunda muestra (Ver procedimiento CAL- 26). Negativo Se sella con esta leyenda cuando no presenta la enfermedad (Ver procedimiento CAL- 26). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 119 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Serologia básica: VIH Detecta la presencia de anticuerpos contra el virus de Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida. AgsHB Detecta la presencia del Antígeno de superficie de la Hepatitis B. HCV Detecta el anticuerpo para la Hepatitis C. BRUCELLA Detecta el anticuerpo para la Brucella. V.D.R.L. Detecta el anticuerpo contra el Treponema pallidum. CHAGAS Detecta el anticuerpo contra el Tripanosoma cruzi. Diferentes técnicas para realizar la detección: HAI ELISA Los siguientes análisis se realizan en los siguientes casos: Pacientes en tratamiento de medula ósea. Pacientes o donadores con solicitud de Médica. CMV IgM IgG Citomegalovirus Inmunoglobulina M Inmunoglobulina G IgG IgM Toxoplasma Inmunoglobulina G Inmunoglobulina M IgM IgG Virus Eimtein Barr Inmunoglobulina M Inmunoglobulina G TOXO EVB CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 120 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Pruebas confirmatorias: WB I WB II RIB Para detectar anticuerpos para H.I.V.1 Para detectar anticuerpos para H.I.V.2 Para detectar anticuerpos para H.C.V. CONFIRMATORIAS NEUTRALIZACIÓN Ag BLANCO MERCAP TP/PA PBS. ESPECIALES Citometría CD34 Carga viral Prueba confirmatoria para Hepatitis B. Prueba confirmatoria para Brucella Prueba confirmatoria para Chagas Prueba confirmatoria para Sifilis Pruebas especificas de Control de calidad. Pruebas especificas de Control de calidad Pruebas especificas de Control de calidad. (Ver procedimiento CAL- 47). OBSERVACIONES: Para escribir más información sobre el análisis de la muestra. REALIZO: Escribir la rubrica o poner el sello de las personas que llena la bitácora. Al finalizar el llenado de la bitácora el personal de Serología debe incluir el siguiente sello con la información que se le solicita para cada Enfermedad que fue analizada. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 121 de 97 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología REGISTROS La Bitácora de resultados de Serologia CAL-13-A se guarda durante 1 año en archivo activo y 1 año en archivo muerto. LISTA DE DISTRIBUCION Laboratorista: ____________________________________ Laboratorista: ____________________________________ Laboratorista: ____________________________________ Suplentes: ____________________________________ Suplentes: ____________________________________ Suplentes: ____________________________________ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-27 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 15 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 122 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de almacenamiento de los productos obtenidos de la Sangre Total Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-27 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 15 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 123 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de almacenamiento de los productos obtenidos de la Sangre Total CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 15/08/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-27 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 15 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 124 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de almacenamiento de los productos obtenidos de la Sangre Total DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que se ha llevado a cabo el fraccionamiento de la muestra (Ver procedimiento CAL-21) y etiquetado se requiere guardar cada uno de los productos de la siguiente manera para su adecuada conservación: PRODUCTO Concentrado de Eritrocitos Concentrado de Eritrocitos leucorreducido prealmacenamiento Concentrado de Eritrocitos lavados (con solución salina al 0.9%) Concentrado de Plaquetas Plasma fresco Plasma envejecido Crioprecipitado TEMPERATURA DE CONSERVACION +1 a +6 C +1 a +6 C +1 a +6 C +20 a +24 C* -18 C o menor ** -18 C o menor ** -18 C o menor ** Es recomendable irradiar las unidades de sangre y componentes sanguíneos celulares, con una dosis mínima de 1,500 cGy (1,500 rads) para reducir el riesgo de enfermedades injerto contra huésped, en los receptores que se encuentren en los casos siguientes: a) Fetos receptores de transfusiones intrauterinas; b) Exsanguineotransfusión en prematuros y en recién nacidos de peso corporal inferior a 1,000g; c) Pacientes seleccionados inmunocomprometidos; d) Receptores que han sido sometidos a trasplante de médula ósea; e) Receptores de unidades provenientes de familiares consanguíneos de primer grado. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-27 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 15 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 125 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de almacenamiento de los productos obtenidos de la Sangre Total La sangre o componentes celulares irradiados puede ser aplicados a receptores inmunológicamente normales. Los CE irradiados después de 5 días se deben de lavar. La temperatura de los refrigeradores, congeladores e incubadoras que almacenan sangre, componentes sanguíneos, muestras o reactivos, se deberán registrar cuando menos cada ocho horas, aunque tengan graficador automático y un sistema de alarma audible. Los equipos sin indicador de temperatura, deberán tener en su interior un termómetro, en caso de refrigeradores y de utilizarse termómetros de laboratorio, el bulbo de éste deberá estar sumergido en glicerina al 10% y, tratándose de congeladores, en glicerina al 50%. La vigencia máxima del Concentrado de Eritrocitos y Concentrado de Eritrocitos pobre en leucocitos a partir de la recolección depende del sistema y del anticoagulante: Para sistemas cerrados son: ANTICOAGULANTE Heparina ACD CPD CPDA-1 ACD-SAGMANITOL CPDA-MANITOL VIGENCIA MAXIMA 2 días 21 días 21 días 35 días 42 días 45 días Para sistemas abiertos, bajo condiciones de esterilidad (dentro de la campana de flujo laminar), la vigencia máxima será de 24 hrs conservándose entre +1 y +6 C y de 4hrs. si se conserva entre +20 y +24 C (Las unidades que se conservan en congelación mantienen el periodo de vigencia según el producto): La vigencia máxima del Concentrado de Eritrocitos lavados a partir de la recolección es de 4 hrs, a partir de su preparación. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-27 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 15 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 126 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de almacenamiento de los productos obtenidos de la Sangre Total Las plaquetas por fraccionamiento y por Aféresis podrán conservarse durante 5 días a +20 y +24 C y agitación constante. El Plasma Fresco Congelado, el Plasma sin Factor tiene una duración de 1 año a –35° C El Plasma envejecido tiene una duración de 1 años a –18 C y entre +1 y +6 C de 26 días (con ACD o con CPD); 40 días (con CPDA ) 12 meses. El Plasma fresco tiene una duración de 12 hrs, una vez descongelado. El Crioprecipitado a –18 C o menor tiene una duración de 1 año y de 6 hrs, una vez descongelado. **El factor VIII de la coagulación que contiene el crioprecipitado se preserva mejor cuando el plasma fresco y crioprecipitado se conservan a temperatura de –30 C o menores. Los productos se acomodan por grupo, y orden numérico, del menor al mayor, de derecha a izquierda y del frente hacia atrás REGISTROS Los Registro de temperaturas se guardan durante 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. LISTA DE DISTRIBUCION Químico: __________________________ Químico: __________________________ Químico: __________________________ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-27 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 15 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 127 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de almacenamiento de los productos obtenidos de la Sangre Total Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Técnico laboratorista: __________________________ Técnico laboratorista: __________________________ Auxiliar laboratorista: __________________________ Auxiliar laboratorista: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ CAL-02-B Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-28 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 26 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 129 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recepción y entrega de los productos en el laboratorio CAMBIO 1. CAL-02-B Se modifica titulo del procedimiento. 2. REVISIÓN FECHA 0 15/08/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-28 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 26 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 130 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recepción y entrega de los productos en el laboratorio DESCRIPCION DEL PROCESO La solicitud y la entrega de los diferentes productos se realiza de la siguiente manera: El formato A-13-14-07 es llenado por el Médico tratante que solicita el producto y se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-28 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 26 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 131 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recepción y entrega de los productos en el laboratorio El formato A-13-14-07 es llenado por el Químico, Laboratorista, Técnico del Laboratorio, (ocasionalmente el Médico) del Banco de Sangre que recibe, procesa y asigna el producto solicitado: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-28 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 26 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 132 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recepción y entrega de los productos en el laboratorio El formato M-3-0-21 es llenado por el Médico tratante que solicita el producto y se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-28 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 26 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 133 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recepción y entrega de los productos en el laboratorio La bitácora CAL-28-A es llenada por el Médico tratante, enfermera, solicitante o mensajero que pide el producto, por su tamaño no se muestra. La bitácora CAL-28-B se llena de la siguiente manera: Fecha: Día, mes y año en que se realiza lo solicitado Registro de la unidad: # que se indica como Unidad en el paquete o # de frascos que se entregan. Nombre del donador: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del donador. Producto: Tipo de producto que se solicito (CP, CE, PFC, Albúmina, Factor VIII y IX. Grupo sanguíneo: Tipo de sangre del donador (A, B, AB u O) y Factor Rh. Volumen que contiene la bolsa del producto: Quien realiza el estudio: Compatibilidad: # de entrada: Cantidad en unidades o mililitros que contiene la bolsa Personal del área de Inmunohematologia que realiza el estudio o la separación del producto, etc. El resultado que dio la prueba de compatibilidad # consecutivo solicitud el producto. Registro del paciente: # que fue designado por la institución en su credencial de afiliado. Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente Grupo sanguíneo: CAL-02-B Tipo de sangre del donador (A, B, AB u O) y Factor Rh. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-28 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 26 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 134 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recepción y entrega de los productos en el laboratorio Servicio al que pertenece: Cama: Fecha: Hora: Volumen: Nombre: Nombre: # de egreso: Área o servicio que solicito el producto. # de cama donde se encuentra el paciente. Día, mes y año en que se egresa el producto. Hora de egreso del producto. Cantidad que se le entrega de producto. Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s), clave o sello personal de la enfermera o mensajero que recibe el producto. Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s), clave o sello personal del Laboratorista, Químico, Técnico que entrega el producto. # consecutivo de entrega el producto (con la letra asignada según el turno). REGISTROS La bitácora CAL-28-A se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el archivo muerto. La bitácora CAL-28-B se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el archivo muerto. El formato A-13-14-07 se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el archivo muerto. El formato M-3-0-21 se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en el archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-28 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 26 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 135 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recepción y entrega de los productos en el laboratorio LISTA DE DISTRIBUCION Químico: __________________________ Químico: __________________________ Químico: __________________________ Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Laboratorista: __________________________ Técnico laboratorista: __________________________ Técnico laboratorista: __________________________ Técnico laboratorista: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ Suplentes: __________________________ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 136 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: IRMA GUTIERREZ Nombre: DRA. MARGARITA Nombre: DRA. DINORA LETICIA MEDINA MACIAS AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha: 27 JUNIO 2011 Fecha: 27 JUNIO 2011 Fecha: 10 JUNIO 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 137 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría CAMBIO REVISIÓN FECHA Se agrega el sistema informático de banco de sangre y el sistema Kanban 1 10/06/2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 138 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que el donador ha sido registrado (Ver procedimiento CAL-20) se procede de la siguiente manera La Enfermera toma del Kanban ubicado en el área de recepción la ficha de identificación del donador M-3-0-23 ó M-3-0-10-a (Historia clínica en proceso manual) con número de control interno de ingreso a recepción De la ficha de identificación del donador M-3-0-23 observa el nombre completo del candidato a donador, lo llama y le indica que pase a la sala donde se le realizará la valoración de sus venas y somatrometría La enfermera solicita al candidato a donador se suba a la báscula para tener su peso, pregunta su estatura o lo mide y los registra en la parte inferior del formato M-3-0-23 ó M-3-0-10-a si es manual Pide descubra y extienda ambos brazos para valorar sus venas e indicar con una M el sitio de toma de muestra si ¿El donador tiene mala calidad de venas? no Pregunta y revisa si tiene algún dibujo, herida o tatuaje (menos de 1 año de realizado) NOM 003-SSA2-1993 si El donador presenta alguna herida o tatuaje no Se toma temperatura tensión Arterial (TA), Frecuencia Respiratoria (FR), Frecuencia Cardiaca (FC) Se registran los resultados en la parte inferior de el formato M-3-0-10-a ó en la Historia clínica M-3-0-10-b inciso L, cuando es proceso manual y firma de responsable. Observa si los valores se encuentran dentro de los límites establecidos por la especificaciones indicada en la norma NOM-003-SSA2-1993, ingresa estos datos al sistema informático de banco de sangre no Valores OK? si Deja en el Kanban del área de toma de muestras la ficha de identificación con formato M-3-0-23, y la historia Clínica con formato M-3-0-10 sólo en proceso manual, para continuar con la Valoración médica (Ver Procedimiento CAL-40) CAL-02-B Se descarta al candidato como donador y se avisa a Trabajo social y al Médico para que le indique la causa del rechazo, el médico la anota en ficha de Identificación con formato M-3-0-23. Médico pasa a Trabajo social la ficha de Identificación con formato M-3-0-23. para que haga evaluación social y/ o reprogramación de cita Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 139 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría La Ficha de Identificación del donante (M-0-3-0-23) en donde se registran los datos de enfermería se encuentra en la parte inferior en donde dice uso exclusivo de enfermería y se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 140 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría La ficha de identificación del donador (M-3-0-23) cuando el sistema es manual se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 141 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría Cuando el procedimiento es manual se registra en La Historia clínica de candidatos a donación M-3-0-10-b inciso L) EXPLORACION FISICA y se muestra a continuación. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 142 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría En el formato electrónico de historia clínica, se registran los datos de somatometría por el personal de enfermería y se muestra a continuación: El formato M-3-0-10-b se inciso L) EXPLORACION FISICA y el formato M-3-0-23 se llenan de la siguiente manera: Peso: Talla: FC: CAL-02-B Cantidad en Kg que pesa el candidato a donar. La estatura que indica el candidato. Frecuencia Cardiaca (Latidos por minuto) que presenta el candidato. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-30 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 143 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración de venas y somatometría FR: T/A: Temperatura: Frecuencia Respiratoria (Respiraciones por minuto) que presenta el candidato (puede tomar la mitad del tiempo y calcularlo). Tensión Arterial que presenta el candidato. Temperatura que indica el termómetro colocado debajo del brazo izquierdo del candidato Nota: El formato M-3-0-23 debe estar lleno previamente por la recepcionista con los datos generales y el consentimiento informado firmado por el donador (Ver procedimiento CAL-20). En caso manual los candidatos a donar llenarán la ficha de identificación y la recepcionista revisará que los datos estén completos. REGISTROS M-3-0-23 Ficha de identificación del donante apto se debe almacenar en el archivo activo durante 5 años y en el archivo muerto 5 años. (NOM-003-SSA2-1993). Cuando es rechazado se almacena su registro por 3 meses (NOM-003-SSA21993). Sistema informático de banco de sangre. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-01 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 2 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de los Procesos necesarios para el sistema de gestión de la calidad CAMBIO REVISIÓN FECHA Se modifica el flujo grama del proceso que se lleva a cabo en el Banco de Sangre 03 16 ENERO 2012 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-01 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 3 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de los Procesos necesarios para el sistema de gestión de la calidad DESCRIPCION DEL PROCESO El Banco de sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo, la selección de los candidatos a donación, y posteriormente el procesamiento de la sangre bajo los estándares de calidad aplicables. El flujo grama de la operación que se lleva a cabo es el siguiente: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-01 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 4 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de los Procesos necesarios para el sistema de gestión de la calidad CITA PARA DONACIÓN (CAL-11) REGISTRO de los donadores (CAL20) VALORACIÓN DE VENAS Y SOMATOMETRÍA ( CAL-30) TOMA MUESTRA ( CAL-43) VALORACIÓN MÉDICA (CAL-40) EXTRACCIÓN DE SANGRE, (Flebotomía CAL-46) EXTRACCIÓN DE SANGRE, (Aféresis CAL-50) EXTRACCIÓN DE SANGRE, (RCSP CAL-52) LIBERACION: DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO Y ANTICUERPOS (CAL-25) SEROLOGIA (CAL-26) NAT (CAL-71) LIBERACION: DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO Y ANTICUERPOS (CAL-25) SEROLOGIA (CAL-26) NAT (CAL-71) LIBERACION: DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO Y ANTICUERPOS (CAL-25) SEROLOGIA (CAL-26) ALMACENAMIENTO (CAL-27) ALMACENAMIENTO (CAL-27) ENTREGA DE COMPROBA NTE (CAL-31) FRACCIONAMIENTO (CAL-21) CRIOPRESERVACION (CAL-77) PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD (CAL-31) ENTREGA DE PRODUCTOS (CAL-28 ) CAL-02-B CUANTIFICACION Y VIABILIDAD CELULAR (CAL-66) Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-01 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 5 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de los Procesos necesarios para el sistema de gestión de la calidad Para cada proceso del diagrama anterior, existen procedimientos documentados que describen la forma de llevarlos a cabo (Ver lista maestra de documentos CAL-02-A) REGISTROS No existen registros asociados a este procedimiento CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-04 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3 de Nov de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 6 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de control de sangre recibida de otros hospitales Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-04 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3 de Nov de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 7 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de control de sangre recibida de otros hospitales CAMBIO ninguno CAL-02-B REVISIÓN 00 FECHA 03/11/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-04 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3 de Nov de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 8 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de control de sangre recibida de otros hospitales DESCRIPCION DEL PROCESO La trabajadora social ó el personal del laboratorio del Banco de Sangre del INP, solicita vía telefónica a otro banco de sangre los hemocomponentes que se necesiten de acuerdo a la valoración por el médico adscrito o el jefe del servicio. Una vez que se consigue el apoyo de alguna institución, se elabora el formato F-A-14-29 (original y 2 copias), y se solicita al Servicio de Ambulancias que traiga los hemocomponentes. El personal del Banco del INP (Inmunohematología) entrega un recipiente adecuado para traslado de los hemocomponentes, así como el formato F-A-14-29 al personal de ambulancias. El personal de ambulancias recoge los hemocomponentes en el banco de sangre de la institución otorgante, entregando el original y copia del formato F-A-14-29, el banco de sangre externo sella el acuse y entrega relación del producto o productos solicitados con el certificado de serología negativa. El personal del Banco de Sangre del INP recibe los hemocomponentes junto con una copia del formato F-A-14-29 revisa que los hemocomponentes traigan todos los datos requeridos como son: Nombre del donador Registro Grupo Rh Fecha de extracción Fecha de caducidad Volumen Evidencia de serología negativa El personal del laboratorio verifica el estado físico del producto recibido para determinar si éste se acepta o no (rechazando productos que no estén con una temperatura adecuada de transportación, hemolizados, lipémicos, el volumen debe corresponder al indicado en la etiqueta de la bolsa y debe traer una muestra piloto para realizar las pruebas serológicas aplicables). Si el producto cumple con los requisitos, se acepta, en caso contrario se regresa. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-04 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3 de Nov de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 9 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de control de sangre recibida de otros hospitales En caso de aceptación se da ingreso en la Libreta de Ingresos y Egresos del Banco de Sangre del INP registrando la serologia y se toma la muestra piloto para realizar pruebas serológicas. El formato F-A-14-29 se muestra a continuación, (La copia se entrega al personal administrativo para que lo archive). Instituto Nacional de Pediatría Insurgentes Sur 3700-C BANCO DE SANGRE Solicitud de: PRODUCTOS SANGUINEOS México, D.F., a ____de ______________ de ______. Folio:____________ C. Dr. (a) __________________________. Director o Jefe del Banco de Sangre Del __________________________________ P R E S E N T E , Por este medio me permito solicitar a ustedes los siguientes productos: O SANGRE TOTAL PAQUETE GLOBULAR PLASMA FRESCO CONGELADO PLASMA RICO EN PLAQUETAS CONCENTRADOS PLAQUETARIOS GLOBULINA ANTIHEMOFÍLICA A B AB POSITIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO POSITIVO NEGATIVO OTRAS SOLICITUDES: Agradeciendo de antemano su atención, aprovecho este para enviarle un cordial saludo. A T E N T A M E N T E JEFE DEL BANCO DE SANGRE c.c.p. Banco de Sangre F-A-14-29 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-04 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3 de Nov de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 10 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de control de sangre recibida de otros hospitales REGISTROS El formato F-A-14-29 se almacena por cinco años pasados los cuales se puede desechar. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 11 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: LIC. TS ANA MARÍA DORANTES CEH Nombre: DRA. MARGARITA LETICIA MEDINA MACÍAS Dra. DINORA AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha: 12 Enero 2012 Fecha: 12 Enero 2012 Fecha: 12 Enero 2012 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 12 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación CAMBIO 1.- Se puntualizan los 3 tipos de cita. 2.- Se modifica el tiempo de tolerancia en las citas para donar sangre en concordancia con el folleto. 3.Se puntualizan algunas excepciones de las personas que no pueden donar que no incluye el folleto CAL-02-B REVISIÓN FECHA 05 12 Enero 2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 13 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación DESCRIPCION DEL PROCESO El Personal de Trabajo Social del Banco de sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo el siguiente proceso para proporcionar una cita para DONACION a las personas que lo soliciten en base a los siguientes lineamientos: 1.- Horarios para programación de cita para donación: Se programaran las citas a los familiares de los pacientes que acuden al Banco de Sangre en los siguientes horarios: 11:30 am y 12:30 pm. 2.- Se otorgaran 200 minutos de tolerancia para recibir familiares de pacientes a programación de citas. 3.- A su ingreso al Banco de Sangre el vigilante otorgará una ficha numerada para establecer el orden de ingreso. 4.- La trabajadora social asignada al área de selección de disponentes atenderá a los familiares por grupos según el horario de ingreso al Banco de Sangre y les impartirá una plática de orientación y sensibilización para la donación de sangre. 5.- El contenido de la plática impartida por la trabajadora social es el siguiente: 5.1 Presentación 5.2 Documentos necesarios para solicitar cita. 5.3 Importancia de la donación de sangre segura. 5.4 Promoción de la donación altruista 5.5 Documentos que necesita tener el donador el día de su cita. 5.6 Características físicas y de salud que debe reunir el candidato a donador. Se exceptúan a las personas sordomudas o que hablen un dialecto ya que implica dificultad para la comunicación con el personal que presta la atención y esto afecta la confiabilidad de los resultados. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 14 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación 5.7 Beneficios de donar sangre (estudios de laboratorio como grupo sanguíneo y serología, un examen médico). 5.8 Donación de sangre y/o aféresis 5.9 Programación de citas La Trabajadora social solicita la Hoja de Hospitalización u orden de cirugía (Ver tabla A ) Llena el folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre ? Con los datos de la solicitud de donación y anota en la bitácora de citas CAL-11-A los datos solicitados ocupando el # de espacios de citas de donadores que les corresponda cubrir. En base a la situación social del paciente asigna el día de la cita , considerando diagnóstico y servicio donde se atiende al paciente . En el Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría se manejan tres tipos de citas: CITA ABIERTA, CITA PROGRAMADA y CITA PROGRAMADA DE URGENCIA (Ver abajo descripción de cada tipo de cita. Verifica con el solicitante los datos del paciente registrados en el folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre ? , confirma la cita para la donación y le indica leer el folleto Información importante para la donación sanguínea (Ver procedimiento CAL-20) para conocer los requisitos para ser donador . Le recuerda que debe traer los folletos el día de la donación , además de su identificación personal con fotografía y vigente . FIN CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 15 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación TIPOS DE CITAS En el Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría se manejan tres tipos de citas: CITA ABIERTA. Trabajo Social asigna a familiares de pacientes con base en los siguientes criterios: a. Pacientes foráneos b. Diferimiento o rechazo en más de una ocasión de donadores c. Sin redes de apoyo El plazo para traer a sus donadores no será mayor a dos semanas. CITA PROGRAMADA (Cita que Trabajo Social asigna con una fecha y hora determinada). CITA PROGRAMADA URGENTE. Se solicitan más donaciones de acuerdo a los requerimientos del paciente, a pesar de haber cumplido con las dos donaciones. Deberán acudir a la brevedad posible (plazo no mayor a una semana) ya que se requieren de forma inmediata para cubrir las necesidades transfusionales del paciente. MANEJO DE PRÓRROGAS Trabajo Social del Departamento de Banco de Sangre proporciona prórrogas a los familiares de los pacientes cuando: 1. Se adelanta fecha de cirugía. 2. Se da a los familiares fecha inmediata para la cirugía del paciente (en las siguientes 24 hrs.) MANEJO DE CONDONACIONES Ver procedimiento CAL-63 para manejo de condonaciones por el Banco de Sangre CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 16 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación IMÁGENES DE FORMATOS RELACIONADOS CON ESTE PROCEDIMIENTO El Folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre? CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 17 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación Información importante para la donación sanguínea” También es entregada al donador, y se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 18 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 19 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación Tabla A. Donadores solicitados. SERVICIO EN QUE SE ATIENDE AL PACIENTE Cirugía ambulatoria Cateterismo cardiaco Cirugía cardiovascular Estancia en áreas críticas Cirugía programada Hospitalización Transplante de Células Progenitoras Hematopoyéticas NO DE DONADORES SOLICITADOS 1 1 4 ó más 2 ó más 2 2 10 ó más Cirugía ambulatoria y cateterismo cardiaco: Se solicita una donación de sangre, esta se debe de realizar antes de la cirugía o el mismo día dependiendo el caso. SOLO EN ESTE CASO TRABAJO SOCIAL DEL BANCO DE SANGRE DA PRORROGAS PARA QUE SE CUBRA POSTERIORMENTE LA DONACIÓN, en caso de que la cirugía o cateterismo se haya realizado de manera urgente y se solicita realizar la donación un tiempo no mayor a una semana. Cirugía cardiovascular: Cirugía cardiovascular requiere 3 donadores de sangre 1 de plaquetas el día de la cirugía, en caso necesario se solicita un mayor número de donadores según los requerimientos del paciente. Estancia en áreas críticas (Urgencias, Terapia Intensiva), Cirugía programada, Hospitalización: Se solicitan dos donaciones de sangre, con variaciones de acuerdo a los requerimientos del paciente. Trasplante de células progenitoras hematopoyéticas: Se solicitan 10 donadores de plaquetas aptos quienes iniciarán el proceso de donación antes del trasplante y se programan de acuerdo a las necesidades del paciente y puede haber modificaciones de acuerdo a los requerimientos transfusionales del paciente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 20 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación El folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre? se debe llenar de la siguiente manera: DATOS DEL PACIENTE PROPORCIONADOS POR EL DONADOR: Nombre del paciente: Número de expediente: Servicio: Nombre completo del paciente para el que va a realizar la donación Número de Expediente asignado por el INP (equivale al # de registro). Especialidad en la que se esta tratando el paciente. # de cama en que se encuentra el paciente hospitalizado para quien se solicita la donación Cama: PARA USO EXCLUSIVO DEL BANCO DE SANGRE: Número de donadores: Fecha de la donación: Hora de la cita: Número de donadores que se solicitan según sea el caso (Ver tabla A) Fecha de la cita para asistir a la donación Hora de la cita para la donación La Bitácora de citas CAL-11-A contiene lo siguiente: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 21 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación BITÁCORA DE CITAS CAL-11-A Fecha: No./Hora Nombre Registro Servicio #de Fecha donadores Observaciones La Bitácora de citas CAL-11-A se llena de la siguiente manera: Fecha: No. / Hora: Nombre: Registro: Servicio: # De donadores: Fecha: Observaciones: CAL-02-B Día, mes y año en que está citado el candidato a donador. # consecutivo del día y hora de su cita. Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente. # de registro del paciente asignado por el INP. Especialidad donde se encuentra el paciente. # de donadores solicitados. Día y mes en que se da la cita. Cualquier observación que se considere relevante. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-11 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 12 enero 2012 Página 22 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de citas para donación REGISTROS Bitácora CAL-11-A (Libreta programación de citas) se almacena en el archivo del área de recepción durante 1 año. Bitácora CAL-20-A (Registro de donadores) se almacena 3 meses después de que completa el llenado de todas sus hojas. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 23 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Dr. Ismael Hernández Montiel T.S. Ana María Dorantes Ceh Nombre: Dra. Margarita Leticia Medina Macías Nombre: Dra. Dinora V. Aguilar Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: 10 Enero 2012 Fecha: 10 Enero 2012 Fecha: 10 Enero 2012 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 24 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados CAMBIO Se establece el mismo tiempo de entrega de resultados después de la donación de sangre y de aféresis Se actualiza el formato electrónico de entrega de resultados Se cambia plazo de almacenamiento en archivo activo y muerto de la Bitácora CAL-13-A CAL-02-B REVISIÓN FECHA 3 10/01/2012 3 10/01/2012 3 10/01/2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 25 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que al donador se le ha realizado el Sangrado o el Procedimiento de Aféresis (Ver Procedimiento CAL-46 o CAL-50) se le informa que podrá recoger los resultados del análisis de la muestra personalmente a los 8 días posteriores a la donación. El día de entrega de resultados se procede de la siguiente manera: La recepcionisa solicita identificación y fecha en que realizó donación de sangre (verifica que coincida la fotografía de la identificación , con la persona presente) y le pide que se registre en la bitacora de entrega de resultados CAL -13-A En el sistema de cómputo, la recepcionista ingresa apellidos para localizar Resultados de Serología (siempre que sean negativos), imprime los resultados, y sube con el químico para que los avale con su firma. De manera manual, La recepcionista, sube al laboratorio para copiar los datos de la libreta de Serología (siempre que sean negativos) al formato F-A-14-07; Procede a transcribirlos a máquina para que el químico los avale con su firma . SI La serología es positiva? La recepcionista detecta serología positiva en el sistema de cómputo o en la libreta de Serología, e informa al médico responsible y al químico de laboratorio NO La recepcionista entrega resultados por escrito al donador . El donador firma de recibido en la bitacora de resultados CAL-13-A FIN Químico informa al médico responsible de SeroPositivos Médico le solicita a Trabajo Social que localice al donador Trabajo social trata de localizar vía telefónica al donador para informarle la necesidad de una 2da. muestra para completar estudios (se realizan 3 llamadas en un lapso de 1 mes para tratar de localizar al donador en caso de no ser posible se canaliza el caso al Servicio de Epidemiología ) Cuando el donador acude a 2da. Muestra por haber obtenido un resultado REACTIVO de su muestra El médico habla con el donador para comentar que se requiere otra muestra de su sangre para completar estudios , se toma 2da, muestra y se da “Cita en una semana para entregar Resultados” En laboratorio se realiza la prueba de ELISA CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 26 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados REACTIVO El resultado puede ser NEGATIVO Se realiza prueba confirmatoria de la cual podemos obtener los siguientes resultados Resultado INDETERMINADO Resultado NEGATIVO Resultado POSITIVO Médico reporta como indeterminado, da cita en tres meses para otra muestra, se da seguimiento durante un año Brucella, chagas, VHC, VDRL, VHB VIH Médico notifica y explica posibles causas Médico entrega resultados y refiere al donador a Epidemiología para que lo canalice a donde reciba atención. Médico refiere al donador a psicología para que sea sensibilizado, y el psicológo informa al médico cuando considera que el donador puede recibir la noticia. FIN El médico en compañía del psicologo notifica el diagnóstico FIN Positivo: Cuando el análisis de la Prueba de rutina o tamizaje realizada a la 2da muestra es REACTIVA y la Prueba confirmatoria se encuentra dentro de los rangos considerados como POSITIVO, la muestra se determina como POSITIVA. Negativa: Cuando el análisis de la Prueba de rutina o tamizaje realizada a la 1era muestra es NEGATIVA dentro de los rangos considerados, la muestra se determina como NEGATIVA. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 27 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados Indeterminada: Es cuando el resultado de la prueba No cumple con el 100% los criterios de interpretación. Opciones: PRIMERA MUESTRA SEGUNDA MUESTRA CONFIRMATORIA 1era. Corrida: reactivo 2da Corrida: reactivo (se corre tubo primario y tubo piloto) 1era. Corrida: reactivo 2da Corrida: negativo Reactiva Positiva Negativa Indeterminada RESULTADO DE LA PRUEBA Positiva Negativo Indeterminado (seguimiento del donador) Negativa 1era. Corrida: negativo Negativa El formato de Entrega de Resultados F-A-14-07 se llena en la maquina de escribir de la siguiente manera: INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA BANCO DE SANGRE Resultado de los exámenes practicados al DONADOR: Nombre: Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s) Número de Registro: Número de la bitácora de egresos e ingresos. Grupo (ABO): Resultados obtenidos por medio del análisis de la muestra Resultados obtenidos por medio del análisis de la muestra Resultados obtenidos en serología. FACTOR RH (D): V.D.R.L., HUDDLESSON, ANTIGENO AUSTRALIA, CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 28 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados HEMOGLOBINA g.% y HEMATOCRITO: Resultados obtenidos del equipo automatizado de biometría hemática. OTROS: Resultados de H.I.V.,CHAGAS obtenidos en serología México, D,F., a: Fecha en que se solicita el comprobante de donación. Clave, Firma: Nombre y HEPATITIS C y Del Jefe del Laboratorio o del químico responsable La Hoja de entrega de resultados F-A-14-07 que se obtiene del sistema informático de Banco de Sangre contiene lo siguiente: INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA BANCO DE SANGRE Donante: Donación: Fenotipos: Anticuerpos: Hemoglobina Hematocrito Grupo Rh Hepatitis B Nombre del donador No. De Unidad, Fecha Resultado obtenidos por medio de análisis de la muestra Resultado obtenidos por medio de análisis de la muestra RESULTADOS ANALÍTICOS Resultados obtenidos en el equipo automatizado de biometría hemática Resultados obtenidos en el equipo automatizado de biometría hemática Resultados obtenido por medio del análisis de la muestra del donador Resultados obtenido por medio del análisis de la muestra del donador Resultados obtenidos en serología Hepatitis C Resultados obtenidos en serología HIV 1-2 Resultados obtenidos en serología CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 29 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados Sífilis Resultados obtenidos en serología Chagas Resultados obtenidos en serología Brucella Resultados obtenidos en serología NAT Hepatitis B Resultados obtenidos en Biología Molecular NAT Hepatitis C Resultados obtenidos en Biología Molecular NAT HIV Resultados obtenidos en Biología Molecular Proteínas Totales Resultados obtenido por medio del análisis de la muestra del donador Nombre y firma del Jefe del Laboratorio o del químico responsable Nombre y firma del personal de laboratorio CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 30 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 31 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados BITÁCORA DE ENTREGA DE RESULTADOS CAL-13-A Fecha de solicitud de Resultados Nombre del Donador Fecha de Donación NÚMERO UNIDAD Tipo de Resultados Se entregaron Resultados Firma de Recibido Persona que entrega OBSERVACIONES Si:_____ No:____ Escritos Causa: _________ Si:____ No:____ Verbales Causa:_________ ___ FORMA DE LLENAR LA BITÁCORA CAL-13-A: Se anota la fecha en que acude el donador a solicitar resultados Fecha de solicitud de Resultados Nombre del Donador Nombre del donador Fecha de Donación Fecha en que se realizó la donación Se anota el número de unidad que se le asignó NÚMERO UNIDAD Escritos Se entregaron Resultados Firma de Recibido Persona que entrega OBSERVACIONES Tipo de resultados Verbales Si:____ No:___ Causa _______ Si __ No: ____ Causa:____ Se tacha el lugar que indique el tipo de resultados entregados y la causa de este tipo de entrega de resultados Firma del donador de que recibió resultados Nombre de quien integra resultados Cualquier comentario acerca de si es reactivo, acude a segunda muestra, o dato importante del donador Nota: La Recepcionista entrega los resultados al donador en caso de que todas las pruebas serológicas sean negativas, de lo contrario el médico proporciona la información y plan a seguir al donador. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-13 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 10-01-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 32 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Entrega de resultados REGISTROS La Bitácora de Resultados CAL-13-A se guarda durante 1 año en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-14 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 7 Octubre 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 33 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Calibración del CELLDYN RUBY Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Q.F.B. MARÍA TERESA FLORES CAMACHO Nombre: M en C GUILLERMO Nombre: Dra. DINORA ESCAMILLA GUERRERO V. AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha:07 Octubre 2009 Fecha:14 Octubre 2009 Fecha: 14 Octubre 2009 CAL-02-B anco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-14 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 7 Octubre de 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 34 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Calibración del CELLDYN RUBY CAMBIO REVISIÓN FECHA Se actualiza procedimiento porque se cambió el equipo automatizado de Biometría Hemática 2 7 Octubre de 2009 CAL-02-B anco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-14 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 7 Octubre de 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 35 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Calibración del CELLDYN RUBY DESCRIPCION DEL PROCESO Para poder realizar los análisis de la toma de muestra (Ver Procedimiento CAL16) se requiere haber realizado una calibración previa del equipo CELLDYN RUBY para la que se procede de la siguiente manera: CAL-02-B anco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-14 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 7 Octubre de 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 36 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Calibración del CELLDYN RUBY FLUJOGRAMA PARA PROCESO DE CONTROLES CHECAR NUMERO DE LOTE Y FECHA DE CADUSIDAD PONER LOS TUBOS 15 MIN A TEMPERATU RA AMBIENBTE VERIFICAR VALORES Y CURVA DE LJ INICIAR ASPIRA DO ROTAR LOS CONTROLE S CON LA MANO POR 20 SEGUNDOS PONER CONTROLES EN EQUIPO EN SISTEMA ABIERTO SELECSIONAN DO EL NIVEL DE CONTROL SI NO PROC ESAR MUES TRA S CAL-02-B CHECAR CONTROLES Y REACTIVOS INVERTIR EL CONTROL Y ROTAR POR 20 SEGUNDOS INVERTIR LOS CONTROL ES A LA DERECHA Y A LA IZQUIERD E CON LA MABNO POR 10 SEG anco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-14 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 7 Octubre de 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 37 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Calibración del CELLDYN RUBY Las hojas de los resultados de la calibración se guardan en la carpeta CAL-14-A La carpeta CAL-14-A se llena de la siguiente forma: Fecha de calibración: Día, mes y año en que se realizo la calibración. (Impresa en la hoja de resultados. Control patrón de calibración usado: Indicar el lote y fecha de caducidad del control patrón de calibración. Persona que realiza la calibración: Nombre completo o sello de la persona que realiza la calibración. Nota 1: La Calibración se debe realizar todos los días antes de analizar las muestras. Nota 2: La bitácora se debe encontrar en el área de toma de muestra para su llenado. Nota 3: El control patrón de calibración tiene una fecha de caducidad pasada la cual se desecha y se cambia de control. REGISTROS La carpeta CAL-14-A se debe guardar durante al menos 1 año. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-15 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 38 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de muestras Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 1 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 2 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas CAMBIO REVISIÓN FECHA Se asigna el número de bitácoras de registro 1 7 de octubre 2003 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 3 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas DESCRIPCION DEL PROCESO El Banco de sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo los siguientes procesos para proveer de sangre segura a los pacientes que la requieran: CAL-02-B RECEPCION DE MUESTRAS GRUPO SANGUINEO (Sistema ABO & Rh) LECTINAS FENOTIPO (Rh & FSABO) COOMBS DIRECTO RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (COOMBS INDIRECTO) PRUEBA CRUZADA o OPCIONES DE TRANSFUSION RN TABLA DE NOM ALTGORITMOS: o PRUEBA CRUZADA INCOMPATIBLE o PRUEBA CRUZADA INCOMPLETA o REACCION TRANSFUSIONAL RPR / VDRL DESPLASMATIZAR PLAQUETAS LAVADO DE PAQUETES GLOBULARES SANGRE RECONSTITUIDA FILTRACION CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS Y CELULAS ELUSION o ELU KIT o EGA KIT ADSORCION AGLUTININAS ANTI A & ANTI B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 4 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Los métodos para realizar ensayos de aglutinación son: Método semiautomático Tubo Gel Método automático Gel Las pruebas de aglutinación establecen: HEMOLISIS: Indica una reacción positiva para la unión Antígeno – anticuerpo. AGLUTINACION: la presencia del par Antígeno y/o Anticuerpo complementarios relevante. NO AGLUTINACIÓN la ausencia de cualquiera de ellos. INTERPRETACION Y PUNTUACION DE LAS AGLUTINACIONES DESCRIPCION GRADO PUNTUACION Hemolísis total Ht Botón completo, sobrenadante claro 4+ 12 Botón grande con algunos agregados, fondo claro 3+ 10 Botón fragmentado en varios grumos grandes, fondo turbio 2+ 8 Botón fragmentados en numerosos grumos regulares, fondo turbio 1+ 5 Botón fragmentado múltiples grumos pequeños, fondo muy turbio +/- 1 negativo 0 Aglutinación no visible CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 5 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas INTERPRETACION Y PONDERACIÓN DE LAS AGLUTINACIONES EN GEL NEGATIVO CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 6 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas RECEPCION DE MUESTRAS Una vez que el Médico, enfermera o mensajero lleva la muestra a la ventanilla del laboratorio, el PERSONAL DE BANCO DE SANGRE, revisa que las muestras esten bien identificadas con el Nombre completo del paciente, registro, fecha y hora de toma de la misma; que la muestra sea la indicada para el analisis solicitado y que la solicitud tenga todos los datos requeridos. Discrepancia entre membrete de tubo con requisición NO Se retiene la muestra y la solicitud se rotula “MUESTRA MAL ETIQUETADA” Se solicita nueva muestra SI NO Menor cantidad de la indicada Se le indica al Médico, enfermera o mensajero que lleva la muestra anote en la Bitácora de Registro CAL-031-A los datos solicitados en el número consecutivo correspondiente. El PERSONAL DE BANCO DE SANGRE, asigna el número correspondiente a la entrada tomado de la Bitácora CAL-031-A en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original y copia) El PERSONAL DE BANCO DE SANGRE procede a centrifugar la muestra para trasvasar en tubos membretados con los datos del paciente, fecha y número de requisición, el plasma o suero y el paquete eritrocitario, para su distribución, almacenamiento o trabajo. 1.- DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO La prueba consiste de dos etapas: Prueba directa o celular: eritrocitos problema desafiados contra antisueros comerciales de especificidad conocida Prueba inversa o sérica: suero problema desafiado contra eritrocitos de fenotipo conocidos CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 7 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas PRUEBA DIRECTA en tubo Se realiza la centrifugación del tubo de muestra para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Se rotula 2 tubos para la transferencia de suero y suspensión de eritrocitos (2-5%) con solucion salina amortiguada Se realiza una prueba directa y una prueba complementaria llamada inversa Para la prueba directa se requiere lo siguiente: Marcar 4 tubos con los # del 1 al 3 y el cuarto con una T (testigo) TUBO 1 Agregar una gota de reactivo Anti-A (suero de color azul) TUBO 2 Agregar una gota de reactivo Anti-AB (suero incoloro) TUBO 3 Agregar una gota de reactivo Anti-B (suero de color amarillo) TUBO T Agregar 2 gotas del plasma o suero del paciente Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos del paciente a los cuatro tubos Se introducen en la centrifuga durante 15 a 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Esta prueba se realiza a temperatura ambiente Se realiza un ligera agitación para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscópica para aglutinación (Ver tabla 1) Registrar resultados en el / los formato A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 8 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas PRUEBA INVERSA en tubo Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O Células de fenotipo conocido preparadas a una concentración del 2-5% TUBO A1 Agregar una gota de celulas A1+ 2gotas del plasma del paciente TUBO A2 Agregar una gota de celulas A2 + 2gotas del plasma del paciente TUBO B Agregar una gota de celulas B + 2gotas del plasma del paciente TUBO O Agregar una gota de celulas O + 2gotas del plasma del paciente Se introducen en la centrifuga durante 15-30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza una ligera agitación para resuspender las celulas Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación (ver tabla 1) Registrar resultados en los formatos A-13-14-07; FA-14-23; F-A-14-27 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 9 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Tabla 1 Prueba Directa GRUPO SANGUINEO ANTIGENOS PRESENTES EN LOS ERITROCITOS ANTICUERPOS PRESENTES EN SUERO O PLASMA A A Anti - B B AB O B AyB ni A ni B Anti - A ----Anti – A & Anti - B INTERPRETACION GRUPO A B AB O CAL-02-B Prueba DIRECTA Prueba INVERSA Tubo con Antisuero Tubo con céluas: Anti-A Anti-B Anti-AB POST NEGT POST NEGT NEGT POST POST NEGT POST POST POST NEGT Testigo NEGT NEGT NEGT NEGT A1 A2 B O NEGT POST NEGT POST NEGAT POST NEGT POST POST NEGT NEGT POST NEGAT NEGT NEGT NEGT Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 10 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas GRUPO SANGUINEO Sitema ABO/Rh EN GEL Se realiza la centrifugación del tubo de muestra para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solución de DianaSol 1 con 25 l de concentrado eritrocitario del paciente (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%) Se realiza una prueba directa y una prueba complementaria llamada inversa Empleo de tira del DianaGel Donors/Donantes ver imagen DIRECTA MICROTUBOS A, B, AB, D,D` colocar 25 l de solución de eritrocitos del PACIENTE AUTOTESTIGO TUBO Ctrl colocar 25 l de eritrocitos del donador y 50 l del suero o plasma del PACIENTE INVERSA MICROTUBOS A1; B colocar 50 l de eritrocitos reactivos (Serigrup Diana A1 y B) con 50 l del suero o plasma del PACIENTE Centrifugar en DianaFuge (ver imagen) Leer La lectura puede ser visual o en el DianaScanner (ver imagen) Interpretación (Acorde a la imagen presentada) Registrar resultados en el formato F-A-14-26; F-A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-114-27 o mandar impresión CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 11 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas A1 B REGISTRO: # REQUISICION: Fecha: Clave de quien realizó: S.ABO CAL-02-B S.Rho AT INVERSA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 12 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas SUBGRUPOS DE “A” Marcar 1 tubo con la letra A1 (Anti-A1) y otro con la letra H (Anti- H) TUBO A1 Agregar 1 o 2 gotas del reactivo Anti-A1 Lectina TUBO H Agregar 2 gotas del reactivo Anti-H Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos (2-5%) del PACIENTE A CADA TUBO Se realiza una ligera agitación a cada uno de los tubos Se realiza una ligera agitación a cada uno de los tubos y se incuban durante 5 minutos aproximadamente a temperatura ambiente. Se introducen en la centrifuga durante 15-30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza un ligera agitación para resuspender los eritrocitos. Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación Registrar resultados en los formatos FA13-14-07; FA-14-23; F-A-14-27 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 13 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Tabla # 2 Subgrupo “A” CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 14 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas GRUPO SANGUIENO Rho en tubo Se realiza la centrifugación del tubo de muestra para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml de solución salina con amortiguador con dos gotas de concentrado eritrocitario del PACIENTE (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%) Marcar un tubo con la letra Rh (anti D) y otro con la letra C (control) TUBO D agregar una gota del antisuero comercial Anti - D TUBO C Agregar una gota del reactivo Control Rh ó ALB 22% Agregar una gota de suspensión al 2-5% de eritrocitos del donador Centrifugar 15-30 segundos, la revolución esta predeterminada Leer resuspendiendo con movimiento suave el botón. Interpretación acorde a la aglutinación presente NO AGLUTINACION Rh neg (D-) AGLUTINACION Rh post (D+) NO AGLUTINACION Registrar resultados en los formatos F-A-14-26; F-Q-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27 o mandar impresión CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 15 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas SI la prueba Anti-D es NEGATIVA Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos a 37 C Centrifugar e Interpretar Positiva Negativa Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica, teniendo cuidado para resuspender las celulas por completo Se decanta la salina por completo en la última lavada Agregar una gota de suero de Coombs poliespecífico (anti IgG-C3d) Centrifugar e interpretar Positiva VALIDAR TECNICA CON CELULAS SENSIBILIZADAS Negativa El resultado se considera Rh+ ( D+) El resultado se considera Rh- y Du+ ( para fines de transfusión se considera : donadores Rh+ receptores Rh- Rh - (D-) Registrar resultados en los formatos: F-A-13-14-07; F-A14-23; F-A-14-27 La determinación del grupo ABO en la tarjeta de Gel conlleva la determinación del anti D y su especie el Du Los resultados de Rh negativo en gel se confirman al desafiarlos con el Anti D Totem (anticuerpo policlonal dirigido contra las 6 fracciones del Antígeno D: I – VI) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 16 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas FENOTIPOS Rh Hacer un suspensión de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra) Añadir 25 microlitros de la suspensión de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e (Ver imagen) Centrifugar en DianaFuge y leer manual o en el Diana scanner (Tabla 3A, 3B, 3C) Registrar los resultados en los formatos F-A-13-14-07; F-A-14-23; F-A-14-27 Interpretación de fenotipo Rh Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Fenotipo: CcE CAL-02-B Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Fenotipo: CEe Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 17 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas FORMATO F- A – 14 – 23 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 18 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Tabla 2 Fenotipo Rh REACCION SEROLOGICA ANTI FENOTIPOS GENOTIPO D C c E e WIENER FISHER DCe/dce + + + - + R1r DCcee DCe/DCe + + - - + R1R1 DCCee DcE/dce + - + + + R2r DccEe DcE/DcE + - + + - R2R2 DccEE DCe/DcE + + + + + R1R2 DCcEe dce/dce - - + - + rr ddccee Dce/dce + - + - + R0r Dccee dCe/dce - + + - + r'r ddccee dCe/dCe - + - - + r'r' ddccee dcE/dce - - + + + r" r ddccee dce/dcE - - + + - r" r " ddccEE dCe/dcE - ++ + + + r' r" ddCcEe DCe/DCE + + - + + R1RZ DCCEe DcE/DCE + + + + - R2RZ DCcEE DCE/DCE + + - + - RZRZ DCCEE dCE/dCe - + - + + r y y' ddCCEe dCE/dcE - + + + - r y r" ddCcEE dCE/dCE - + - + - ryry ddCCEE CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 19 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas COOMBS INDIRECTO O RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES PANEL CASERO se les adiciona 5 microlitros de las células panel + 500 microlitros de la solución Diana sol 2 (suspensión al 1%) y se homogenizan. EL PANEL COMERCIAL SE ADICIONA DIRECTAMENTE Se le realizan de 3 a 5 lavados al tubo que contiene los eritrocitos de la muestra problema. Se identifica la tarjeta de Diana Gel Coombs con los # del 1 al 10 y el AT (testigo) y se toma una alicuota de 50 microlitros de cada tubo y se depositan en su respectivo microtubo + 25 microlitros del suero de la muestra problema Al microtubo marcado con la letra AT se le adiciona 50microlitros de la suspensión de eritrocitos problema previamente lavadas + 25 microlitros del suero problema. Se incuba en el equipo Diana Incubador a 37°C / 15min., transcurrido el tiempo se centrifuga en Diana Fuge y se interpretan los resultados con la CARTA PANEL CORRESPONDIENTE. RESULTADO es NEGATIVO: Se indica al reportar que los Anticuerpos irregulares FSABO. RESULTADO es POSITIVO: Se reporta como POSITIVO & ANTICUERPO DETECTADO CON PROBABLE ESPECIFICIDAD:….. Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitácota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el formato F-A-14-23 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de recibido en la Bitácora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 20 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Y la siguiente reacción en tarjeta con el PANEL TRIO: Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente: Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 3 y un T( testigo) Las células se preparan empleando 5 l de eritrocitos con 0.5 ml de solución Diana 2 MICROTUBO 1 Anadir 50 l de Gamma Trio 1 MICROTUBO 2 Anadir 50 l de Gamma Trio 2 MICROTUBO 3 Anadir 50 l de Gamma Trio 3 MICROTUBO 1 Anadir 25 l de plasma del PACIENTE Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Si es positivo se debe realizar el panel completo CAL-02-B MICROTUBO T Anadir 50 l de eritrocitos del PACIENTE Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 21 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Tabla 3 CARTA PANEL TRIO Escanear imagen de carta panel del: TABLA 4 CARTA PANEL DIANA CARTA PANEL DE SIGLO XXI CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 22 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas COOMBS DIRECTO EN TUBO El concentrado eritrocitario se toma una alicuota y se realiza una suspensión al 2-5%, a la cual se le realizan 3 lavados minimo con solución de cloruro de sodio al 0.9% (SSI), en cada lavado se centrifuga. se decanta y se repite el proceso de lavado. Una vez que se realizarón los lavados se decanta el exceso de solución y se adiciona SSI para obtener una solución al 5%. AGREGAR 1 GOTA DE LA DILUCION DE ERITROCITOS DEL PACIENTE Y 2 GOTAS DE SUERO DE COOMBS Se centrifugan los tubos y se leen anotando el resultado en el formato F-A-14-27 donde indica 22 °C en su respectiva dilución, Si el RESULTADO es POSITIVO se titula (diluyendo el suero de Coombs en forma doble seriada,)se reporta en los formatos A-13-14-07 y F-A-14-27 POSITIVO y la dilución Si el RESULTADO es NEGATIVO si la técnica fue realizada en tubo se continua con el llamado CAGHs (consumo de antiglobulina humana) es la prueba que se realiza para corroborar que se haya realizado bien la técnica anterior. Para realizar el CAGHs se adiciona una gota de células sensibilizadas a todos los tubos, se mezclan y centrifugan a SI ES POSITIVO SE VALIDA EL ENSAYO, SI ES NEGATIVO SE REPITE DESDE SU INICIO Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitácota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el formato F-A-14-27 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de recibido en la Bitácora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 23 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas RPR o VDRL El Químico de Inmunohematologia antes de iniciar la prueba lleva a temperatura de entre 15-30 C el REACTIVO Y SUS CONTROLES Procede a centrifugar la muestra para continuar con la separación del plasma y el concentrado eritrocitario. Se realiza la identificación de la placa: controles y muestra A los circulos que se van a ocupar se les adiciona una alicuota 1 A 2 gota del suero del paciente.y se extiende con la misma pipeta desechable o punta. De igual forma se aplica en los circulos correspondientes los controles positivo y negativo A todos los circulos se les adiciona 1 gota del REACTIVO Se homogeniza y se lleva a agitar la placa en el equipo BAXTER ROTATOR V durante 6 - 8 min. A 100 rpm. Realizar lectura macroscopica e interpretar, ausencia de aglutinación resultado negativo, presencia de aglutinación resultado positivo Se anota el resultado en la Bitácora de Estudios especiales de Inmunohematologia CAL-31-B y en el formato de solicitud A-13-14-07 original y copia, se entrega al personal que venga por los resultados la copia de la forma A-13-14-07 y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de recibido en la Bitácora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 24 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas COOMBS DIRECTO EN GEL El concentrado eritrocitario se toma una alicuota y se realiza una suspensión al 2-5%, a la cual se le realizan 3 lavados minimo con solución de cloruro de sodio al 0.9% (SSI), en cada lavado se centrifuga. se decanta y se repite el proceso de lavado. Una vez que se realizarón los lavados se decanta el exceso de solución y se adiciona SSI para obtener una solución al 5%. AGREGAR 1 GOTA DE LA DILUCION DE ERITROCITOS DEL PACIENTE Y 2 GOTAS DE SUERO DE COOMBS Se centrifugan los tubos y se leen anotando el resultado en el formato F-A-14-27 donde indica 22 °C en su respectiva dilución, Si el RESULTADO es POSITIVO se titula (diluyendo el suero de Coombs en forma doble seriada,)se reporta en los formatos A-13-14-07 y F-A-14-27 POSITIVO y la dilución Si el RESULTADO es NEGATIVO si la técnica fue realizada en tubo se continua con el llamado CAGHs (consumo de antiglobulina humana) es la prueba que se realiza para corroborar que se haya realizado bien la técnica anterior. Para realizar el CAGHs se adiciona una gota de células sensibilizadas a todos los tubos, se mezclan y centrifugan a SI ES POSITIVO SE VALIDA EL ENSAYO, SI ES NEGATIVO SE REPITE DESDE SU INICIO Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitácota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el formato F-A-14-27 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de recibido en la Bitácora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 25 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas ANTIGENOS ERITROCITARIOS Se rotulan 2 tubos con los datos del paciente, una vez que la muestra se centrifuga y se separa el suero o plasma del tubo y en el otro se realiza una suspensión al 2-5% de globulos rojos. Se identifican 20 tubos con la sigla de cada uno de los antigenos a determinar Se coloca en cada tubo una gota de la suspensión de eritrocitos al 2-5% de la muestra problema + 1 gota del antisuero correspondiente (VER TABLA ANEXA 5) Se incuban de 15-20 min Cuando obtengo en Salina rápida un negativo se continua con una incubación de 15-30min. en la temperatura a la cual reacciona optimamente con su respectivo anticuerpo (MNSU 22 C, el resto a 37 C) al termino de la incubación se sacan los tubos se centrifugan a 3500RPM / 20-30 segundos y se toma tubo por tubo observando algun tipo de aglutinación. Se reporta todos los resultados obtenidos en el formato F-A-14-23. Se anotan los datos y resultados de la prueba en la Bitácota de Estudios especiales CAL-31-B y se conserva el formato F-A-14-23 junto con el original del formato A-13-14-07. La copia del formato A-13-14-07 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que lo solicite y se le pide que ponga los datos que se le solicitan y firme de recibido en la Bitácora de Entrega de resultados de estudios especiales CAL-31-C. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 26 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas TABLA 5: ANTIGENOS ERITROCITARIOS M N S s P Fya Fyb K k Jka Jkb Lea Leb Dia S/4°C S/22°C S/37°C S/SC CAGH CAL-02-B TIEMPO DE INCUBACION Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 27 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Una vez que el Médico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Químico revisa que la muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma, que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren. Una vez que el Químico verifica lo anterior le pide al Médico residente se anote en la Bitácora de Registro CAL-31-A y el Químico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original) y M-3-0-21 (original y copia) y el turno que le corresponde. Este procedimiento se realiza si el Médico del Banco de sangre lo considera adecuado por el diagnostico del paciente o por que no se tengan en existencia concetrados plaquetarios del grupo sanguineo del paciente. El procedimiento se realiza de igual manera para Pool de plaquetas, Feresis o Concentrado plaquetario La centrifuga se pone a temperatura de 22 a 24 C El producto a desplasmatizar se centrifuga a 1400rpm/10min a una temperatura de entre 22-24 C, una vez que concluye la centrifugación por medio del Conector esteril o puncionanado la bolsa con la espiga de la bolsa transfer, sosteniendo en la palma de la mano la bolsa que contiene el plasma y las plaquetas, se trasvaza el plasma en su totalidad a la nueva bolsa. A la bolsa que contienen las plaquetas se le deja una linea de aprox. 15 cm sellandola y desechando la bolsa que contiene el plasma A la bolsa que contiene las plaquetas por medio del conector esteril se le conecta un equipo de venoclicis para que por medio de el puncione una bolsa o frasco de solución salina fisiologica y se trasvasa la cantidad de solución adecuada o solicitada. Se sella la bolsa para separa la solución salina, se resuspenden las plaquetas y se coloca en agitación durante 30min./100RPM/T.A. Con el formato M-3-0-21 copia y en la etiqueta indica que el producto fue desplamatizado. Se anotan los datos del donador y paciente en la Bitácota de Control de asignación de sangre CAL-31-D y se conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21. La copia del formato M-3-0-21 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el producto. Una vez que el Químico completa los datos de la bitácora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido en la Bitácora CAL-31-D y en el original del formato M-3-0-21. Una que el Químico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la fecha y hora en que se entrego el producto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 28 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas DESPLAZMATIZACIÓN Una vez que el Médico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Químico revisa que la muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma, que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren. Una vez que el Químico verifica lo anterior le pide al Médico residente se anote en la Bitácora de Registro CAL-31-A y el Químico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original) y M-3-0-21 (original y copia) y el turno que le corresponde.Este procedimeinto se realiza cuando el Médico solicita por medio del formato A13-14-07 un paquete eritrocitario lavado o que el paquete a transfundir haya sido radiado 5 días antes o por que la patologia del paciente asi lo requiera. (Verificar si el paquete fue filtrado cuando fue fraccionado) Al Concentrado eritrocitariose le conecta por medio del Conector esteril la parte contraria a la espiga del equipo de venoclisis y la parte sobrante se desecha. La parte que queda libre que es donde se encuentra la espiga se une a la bolsa o frasco de solución salina y se deja de 100 a 150ml. Se sella la bolsa dejando aprox. de 5-10cm de linea en la bolsa del concentrado eritrocitario, homogeniza por medio de inversión. Se centrifuga colocando el paquete con los puertos de entrada hacia abajo a 3500RPM durante 10min. Una vez que finaliza la centrifugación se retira con sumo cuidado los vasos de la centrifuga y posteriormente el Concentrado eritrocitario lavado el que se cuelga en un tripie. Se identifica la bolsa transfer con los datos de la bolsa que contiene el CE a lavar y se prepara con 50-100ml de SSI la cual se une a CE lavado y se deja pasar el CE LAVADO a la bolsa transfer deteniendo la transferencia de CE antes de que la linea que divide el CE y el sobrenadante quede antes de 3cm de la base de los puertos. Una vez que se detiene la transferencia se sella la linea y se separa la bolsa que contiene el sobrenadante para desecharla Se homogeniza el CE y se refrigera hasta su solicitud Se anotan los datos del donador y paciente en la Bitácota de Control de asignación de sangre CAL-31-D y se conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21. La copia del formato M-3-0-21 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el producto. Una vez que el Químico completa los datos de la bitácora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido en la Bitácora CAL-31-D y en el original del formato M-3-0-21. Una que el Químico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la fecha y hora en que se entrego el producto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 29 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas LAVADO DE PAQUETES ELUSION FILTRACION Una vez que el Médico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Químico revisa que la muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma, que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren. Una vez que el Químico verifica lo anterior le pide al Médico residente se anote en la Bitácora de Registro CAL-31-A y el Químico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original y copia) y el turno que le corresponde. Este procedimiento se realiza cuando el Médico lo solicita o cuando el Médico del Banco de sangre lo considera necesario se realiza para pacientes que se cree tiene aloanticuerpo o autoanticuerpo. Se rotulan 2 tubos con los datos del paciente, una vez que la muestra se centrifuga a 3500RPM/8min. Se separa el plasma y se toma aprox. 1ml (varia según la cantidad de muestra extraída) del paquete de celulas LAVADO CON SSI Al tubo que contiene el paquete de celulas se le adiciona ¾ partes de SSI del tubo Centrifugar a 3500rpm/2min, decantar (3 lavados minimo). LAVADO CON SOLUCION DE LAVADO Solución de lavado dilución 1/10 (1ml de solución de lavado concentrado + 9ml de solución salina fisiologica) Al tubo que contiene el paquete de celulas lavadas con SSI se le adiciona ¾ partes de Sol. de lavado del tubo Centrifugar a 3500rpm/2min, decantar (4 lavados minimo). Después del último lavado se decanta totalmente la solución de lavado. Del paquete previamente lavado se toma una alicuota y se coloca en un tubo identificado y se adiciona la misma cantidad de sol. de elución Se realizan dos movimientos de inversión al tubo y se introduce a la centrifuga a 3500rpm/1min. se decantar (3 lavados minimo). Después del último lavado se decanta totalmente la solución de lavado y se adicionan 20 gotas de amortiguador (color azul) pH 7 ELUIDO TARJETA TUBO Realizar una solución al 1% del panel de células del del SIGLO XXI Identificar 10 tubos Tomar una alicuota de 50microlitros de las solución anterior + 50 microlitros del ELUIDO Adicionar 1 gota de células panel del SIGLO XXI + 2 gotas del ELUIDO Incubar durante 15min. Incubar durante 15min. en Diana Incubador Lavadar con solución de lavado 1 vez Interpretar los resultados con la carta del panel Agregar 2 gotas de suero de Coombs a cada tubo Mezclar y centrifugar a 3500rpm/15-30seg Interpretar los resultados con la carta del panel CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 30 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Una vez que el Médico residente o la enfermera lleva la muestra a la ventanilla del laboratirio el Químico revisa que la muestra este bien identificada (Nombre completo del paciente o familiar, hr. de toma de muestra y fecha de la toma, que la muestra sea la adecuada para el analisis que solicita y que la solicitud tenga todos los datos que se requieren. Una vez que el Químico verifica lo anterior le pide al Médico residente se anote en la Bitácora de Registro CAL-31-A y el Químico anota el # consecutivo en el formato de solicitud del análisis A-13-14-07 (original) y M-3-0-21 (original y copia) y el turno que le corresponde. Este procedimiento se realiza si el Médico en la solicitud indica que se le realice filtración al producto solicitado Una vez que se le realizarón las pruebas de compatibilidad al producto y esta listo para ser filtrado Se selecciona el filtro por su capacidad y producto a filtrar y se identifica la etiqueta que trae la bolsa del equipo para filtrar con el nombre del donador, tipo de sangre, # de registro, volumen, fecha de extracción, fecha de caducidad y fecha en que se esta realizando la filtración. Se realiza la unión de la bolsa y el equipo de filtración con el TSCD SC-201A Se corta la parte sobrante y se abre la parte de la linea que se sello para dejar pasar el producto y el piloto de la bolsa. Se cuelga la bolsa en un tripie y se espera a que termine de pasar todo el producto Si no se va a requerir el total de la bolsa, se coloca la bolsa ( a donde se encuntra el producto filtrado) en la balanza y tomo solo la cantidad que requiero, procedo a sacar el aire de la bolsa y sello. Si se requiere todo el producto se espera a que se filtre todo, se saca el aire, se sella y se pesa para conocer el peso final. Se anotan los datos del donador y paciente en la Bitácota de Control de asignación de sangre CAL-31-D y se conserva el formato A-13-14-07 junto con el original del formato M-3-0-21(se especifica la cantidad que entrega). La copia del formato M-3-0-21 se le entrega al Médico residente o a la enfermera que solicite el producto junto con el producto. Una vez que el Químico completa los datos de la bitácora CAL-31-D se le solicita que la firme de recibido en la Bitácora CAL-31-D y en el original del formato M-3-0-21. Una vez que el Químico entrega el producto sella en la parte del formato M-3-0-21 de ENTREGADO, incluyendo la fecha y hora en que se entrego el producto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 31 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS Y CELULAS El Químico del área de grupos realiza el Control de calidad de los hemoclasificadores y células reactivo que son las siguientes: Los hemoreactivos a utilizar son: -Anti-A -Anti-B -Anti-AB -Anti-A1 -Anti-H -Anti-D -Albumina 22% o Control de Rh Las Células que se van a ocupar: -Globulos rojos A1 -Globulos rojos A2 -Globulos rojos B -Globulos rojos O -Eritrocitos sensibilizados -Eritrocitos no sensibilizados -Globulos rojos de fenotipo conocido (panel1-10) El Control de calidad se realiza con las células del C.M. Siglo XXI a las que se les realizan tres lavados previos a su uso con SSI (1 L. de solución CS + 10ml pHix) hasta ¾ partes del tubo, centrifugar a 3500/ 2min, decantar, agitar para resuspender las células En el último lavado decantar sin resuspender. De cada una de las células realizar una suspensión al 5%. Durante los lavados determinar la existencia de hemolisis y turbidez. Identificar 4 tubos con los # del 1 al 4 y con la letra A, 4 tubos con la letra AB, 4 tubos con la letra B, 2 tubos con la letra A1 y 2 tubos con la letra H Adicionar 2 gotas de su respectivo reactivo a los 4 o 2 tubos Una vez que se adicionarón los reactivos se realiza lo siguiente: A los TUBOS 1 Adicionar 1 gota de globulos rojos A1(lavados) A los TUBOS 2 Adicionar 1 gota de globulos rojos A2(lavados) A los TUBOS 3 Adicionar 1 gota de globulos rojos B(lavados) A los TUBOS 4 Adicionar 1 gota de globulos rojos O (lavados) Centrifugar 3500rpm / 15-30seg. Leer Aglutinación y anotar en la bitácora de Control de Calidad Identificar 2 tubos como D Rh+ y D Rh- : A los 2 tubos adicionarle 2 gotas de Hemoclasificador D y al #1 adicionar 1 gota de globulos rojos R1r (células del panel C.M. Siglo XXI Rh positivas) y al # 2 adicionar 1 gota de globulos rojos rr (células del panel C.M. Siglo XXI Rh negativas) Identificar 2 tubos como albumina o control Rh: CAL-02-B A los 2 tubos adicionarle 2 gotas de reactivo ALBUMINA o el Control Rh y al #1 adicionar 1 gota de globulos rojos R1r (células del panel C.M. Siglo XXI Rh positivas) y al # 2 adicionar 1 gota de globulos rojos rr (células del panel C.M. Siglo XXI Rh negativas) Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 32 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Centrifugar 3500rpm / 15-30 seg. Leer Aglutinación y anotar en la bitácora de Control de Calidad Obsevar las especificaciones en la NOM- 017-SSA1-1993 Observar Avidez en placa de as células del C.M. Siglo XXI A1, A2, B, de la siguiente manera: Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-A + 1gota de células A1 Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-A + 1gota de células A2 Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-B + 1gota de células B Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-AB + 1gota de células A1 Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-AB + 1gota de células A2 Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-AB + 1gota de células B Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-D + 1gota de células con fenotipo R1r Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Obsevar las especificaciones de Avidez de la NOM- 017-SSA1-1993 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 33 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Adicionar 1 gota de hemoclasificador Anti-C3d-IgG + 1gota de células sensibilizadas Mezclar con un aplicador de madera y tomar el tiempo en que aglutina con un cronometro y registrarlo en la Bitácora Obsevar las especificaciones de Avidez de la NOM- 017-SSA1-1993 Para realizar el Control de calidad del suero de Coombs se identifican 1 serie de 8 tubos cada una con las siguientes diluciones: 1/1 o sin diluir , ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32, 1/64 y 1/ 128 Adicionar al tubo # 1 1 ml de Anti-IgG,-C3d Adicionar al tubo #2 1ml de de Anti-IgG,-C3d + 1ml de SSI Homogenizar Al tubo #3 se le adiciona una alicuota de 1ml del tubo #2 y se homogeniza , Al tubo #4 se le adiciona una alicuota de 1ml del tubo #3 y se homogeniza Asi se continua hasta la dilución 1/128 en la última dilución se desecha 1ml para que todos los tubos tengan la misma cantidad. Montar 2 SERIES de 8 tubos identificada con cada una de las diluciones. Se toma una alicuota de 0.1ml de la última dilución y se coloca en el últimos tubos de la SERIE I y IIy asi en todas las diluciones. A las SERIE I y II adicionarles lo siguiente: SERIE I Adicionar 1 gota de eritrocitos sensibilizados lavados SERIE II Adicionar 1 gota de eritrocitos NO sensibilizados lavados Se centrifugan 30seg / 3500rpm . Leer Aglutinación y anotar en la bitácora de Control de Calidad En caso de obtener resultados negativos en cualquiera de las 2 series realizar consumo de antiglobulina humana para control de la técnica y reportar en la bitácora. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 34 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas ACTIVIDADES DE RUTINA Anotar la temperatura de los refrigeradores Ordenar refrigeradores Sacar la lista de CE existente por # de registro, Fecha de caducidad y grupo. Sacar la lista para Centro Nacional Acomodar las plaquetas según lo siguiente: radiadas, cruzadas, próximas a caducar, disponibles. Sacar la lista de plaquetas cruzadas Tener el producto solicitado para cirugías e indicar la fecha en que se requiere Se ordenan las requisiciones A-13-14-07 por # y turno Se anota en egresos M-3-0-21 Cotejar en entrega de guardia Lista de egresos y cancelados Verificar que el producto solicitado a las 24 hrs se encuentra todavía se reincorpora al stock CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 35 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas CAL-31- A BITACORA DE ESTUDIOS ESPECIALES DE INMUNOHEMATOLOGIA Fecha: Día, mes y año en que se esta realizando el estudio. Registro: #de registro del paciente. Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente. Edad: Años que tiene en ese momento el paciente (opcional) Sexo: M (hombre) y F (mujer). Depto. y/o Servicio: Servicio de donde se solicita el estudio. Cama: # de cama donde se encuentra el paciente. Diagnostico: Diagnostico que da el medico. G: Gesta P: Partos A: Abortos Rhogam: Vacuna de Rh Transfusión: Si ha sido transfundido si o no Fecha: Fecha en fue transfundido EST. LAB. Bilis: Bilirrubinas HTO: Hematocrito HB: Hemoglobina RETIS: Reticulositos TP: Tiempo de protombina P/G: Peso (g) SABO Grupo: Grupo Sanguíneo del paciente. Subgrupo: Cuando el paciente es del grupo A se determina su subgrupo A1 o A2 SRh D, DU, Rh Salino, C, c, E, e: Determinación de fenotipo de Rh CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 36 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas COOMBS IgG-C3d, IgG, C3, IgM, Titulo, Potencia: Determinación con el reactivo de Coombs Positivo o Negativo, su titulo y potencia. RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES FSABO Suero: Tipo de muestra utilizada (suero) Eluido Adsorción: Tipo de muestra utilizada (eritrocitos) Positivo: Cuando se encuentra positivo Negativo: Cuando se encuentra negativo Especificidad: Probable Anticuerpo Titulo: Respuesta (en cruces) Potencia: Potencia encontrada. FENOTIPO P, M, N, S, s, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lea, Leb, K, k: Antígenos eritrocitarios con anticuerpos específicos. Día: Día en se realiza el estudio. RPR Positivo: Se marca con una X si es positivo Negativo: Se marca con una X si es negativo Titulo: Titulo encontrado en la prueba. Ab INMUNES Anti-A, Anti-B: Prueba de aglutininas o Sello, firma, rubrica del Químico que realizo el estudio. CAL- 31-E CONTROL DE CALIDAD Fecha: Día, mes y ano en que se realiza el control de calidad. Turno: Turno que esta realizando el control de calidad (M matutino, V vespertino, N nocturno, E especial) Reactivo: Hemoclasificado al que se le va a realizar el control de calidad.. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 37 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Lote: de lote del hemoclasificado. Caducidad: Fecha en que caduca el hemnoclasificado. Marca: Nombre comercial que tiene el hemoclasificado Registro: # que tiene como registro el hemoclasificado. Color: Color que presenta el hemoclasificado. Aspecto: Aspecto transparente o turbio del hemoclasificado. A1, A2, B, O, R1r, rr, A1, A2, B, Rr: Resultados al realizar el control de calidad. Hemolisis: Negativa o positiva. Turbidez: Negativa o positiva Cel. Sensib.: Con dilucioneas del 1/1 al 1/128 y células sensibilizadas. Cel. no sensib: Con dilucioneas del 1/1 al 1/128 y células no sensibilizadas. CAGH: Consumo de antiglobulina humana. 31-F ENTREGA DE GUARDIA Fecha: Día, mes y ano de entrega de turno. Req. Inicial: # de requisición inicial Req. Final: # de requisición final Turno: Turno que esta realizando el control de calidad (M matutino, V vespertino, N nocturno, E especial) Egreso: Numero de egreso inicial con que se recibe el turno. Ingreso: Numero de egreso final con que se recibe el turno. Cirugía con células: Nombre completo del paciente y registro. Productos liberados: Numero, tipo de producto y estado en que se encuentra (pendiente, liberados) Pacientes: Nombre del paciente y registro Refrigeradores: Si están en orden o no. Entrega: Firma o/y sello, rubrica del Químico(a) que entrega el turno. Recibe: Firma o/y sello, rubrica del Químico(a) que recibe el turno. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 38 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas CAL-31-D CONTROL DE ASIGNACION DE SANGRE Fecha: Día, mes y ano en que asigna la sangre Registro: Numero de registro del donador (paquete). Nombre del donador: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del donador. Producto: Tipo de producto solicitado (CE, CP, etc ) GPR. Y Rh: Grupo sanguíneo y Rh del donador. Volumen: Volumen que contiene el paquete. Realizo Prueba: Químico que realiza la asignación del producto. Resultados: Compatible o no compatible. No. Solic.: Numero y turno de la solicitud. Proced.: ------------------Observaciones: Cuando existe alguna especificación. Registro: Numero de registro del paciente. Nombre del receptor: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del paciente. GPO Y Rh: Grupo sanguíneo y Rh del paciente. Departamento y/o Servicio: Servicio que solicita el producto. Cama: Numero de cama en que se encuentra el paciente. Fecha ent.: Día, mes y ano en que se entrega el producto solicitados Hora entr.: Hora en que se entrega el producto solicitado. Volumen: Volumen real que se entrega. Recibió: Personal que recibe el producto. Entrego: Químico que entrega el producto. No. Salida: Numero que se le asigna de salida y turno. CAL -31-C ENTREGA DE RESULTADOS DE ESTUDIOS ESPECIALES Fecha: Día, mes y ano en que se realiza el estudio. Registro: Numero de registro del paciente. Servicio: Departamento que solicita el estudio. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 39 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del paciente. Estudios solicitados: Prueba Que se solicita se realice Medico, Nombre, firma, clave: Rubrica o/y firma y clave del personal que recoge los resultados del estudio. CAL – 31- G RELACION DE PRODUCTOS ENVIADOS A RADIOTERAPIA Fecha: Día, mes y ano en que se lleva a radiología. Tipo de producto: Tipo de producto a radiar (CE, CP) Grupo: Grupo sanguíneo y Rh del producto a radiar. Registro: Numero de registro de los productos a radiar. Hora de entrega: Hora en que se entrega el producto a radiología. Hora de recoger: Hora en que se puede pasar a recogerlo. GRUPOS EN EL TURNO VESPERTINO Fecha: Día, mes y año en que se determino el grupo sanguíneo y Rh al donador. Muestra: # de registro del donador. Grupo: Grupo sanguíneo del donador. Rh: Fenotipo del donador. Observaciones: --------------------------CAL- 31-I PRODUCTOS REGRESADOS Fecha: Día, mes y año en que se regresa el producto. Hora: Hora en que se regresa el producto Registro del producto: # del registro del producto que se regreso. Grupo: Grupo sanguíneo del producto devuelto. Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del paciente. Registro del paciente: # de registro del paciente. Servicio: Departamento donde se devuelve el producto. Regresa: Personal que regresa el producto. Recibe: Químico que recibe el producto. Causa: Motivos por que el producto es devuelto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 40 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas CAL-31-J BITACORA DE ESTADISTICAS INMUNOHEMATOLOGICAS Fecha: Día, mes y año en que se realiza la estadística. M: Turno Matutino. V: Turno Vespertino. N: Turno Nocturno # REQ.: # de requisiciones. S ABO: # de Pruebas de grupos sanguíneos en el sistema ABO realizadas. SUB GRUPO: # de subgrupos realizados. S Rh: # de análisis para conocer el Rh Fenotipo: # de pruebas para conocer el fenotipo. Fenotipo otros: # de otras pruebas que se realizaron para conocer el fenotipo. C.D.: # de Coombs directo realizados. C.D. ESP.: # de Coombs directo especial realizados. Rastreo de Ab: # de Rastreo de Anticuerpos que se realizaron. Titulo de Ab: # de titulaciones de anticuerpos se realizaron Eluido: # de eluidos realizados. Adsorciones: # de adsorciones realizadas. Aglutininas A: # de aglutininas A se realizaron. Aglutininas B: # de aglutininas B se realizaron. RPR: # de Pruebas RPR se realizaron. C.E.: # de Concentrados Eritrocitarios entregados. C.P.: # de Concentrados plaquetarios entregados P.F.: # de Plasmas Frescos entregados. G.A.H.: F VIII: # de Factor VIII F IX: Factor IX ALB. HUMANA: Albúmina humana C.E. FRACC.: # de Concentrado Eritrocitario que se fraccionaron. C.P. FRACC.: # de Concentrado plaquetario que se fraccionaron. C.E. LAVADO: # de Concentrado Eritrocitario que se lavaron. C.E. FILTRADO: # de Concentrado Eritrocitario que se filtraron. C.E. REGRESADO: # de Concentrado Eritrocitario devueltos. P.F. REGRESADO: # de Plasma Fresco devuelto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-31 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 7 de Octubre 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 41 de 131 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Pruebas Inmunohematicas C.P. REGRESADO: # de Concentrados plaquetarios revueltos. VALORACIONES: Valoraciones realizadas. RESPONSABLE: Químicos responsables del turno. CAL-31-K PACIENTES CON PROBLEMAS DE TRANSFUSION Fecha: Día, mes y año en que se suscita el problema de transfusión. Reg. pte. : # del registro del paciente. Nombre pte.: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del paciente. Gpo: Grupo sanguíneo del paciente. Dx: Diagnostico especificado por el Médico. Gpo a trans: Grupo sanguíneo a transfundir. Observaciones: Cualquier observación que sea importante en cuanto a la transfusión realizada. CAL-31- L BITACORA DE SALIDA DE PRODUCTOS A OTROS BANCOS La libreta debe incluir el # de registro del producto a salir, el tipo de producto, el nombre completo del disponente, el volumen del paquete, el grupo sanguíneo y Rh y la fecha de extracción del producto junto con la de caducidad. Una vez que el Químico saca la relación le entrega una copia a la Secretaria para que llene el formato A-14-01 o F-A-14-01. REGISTROS Todas las Bitácora de este procedimiento se resguardan en archivo activo durante 1 año y en archivo muerto 5 años. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero-2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 42 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Dr. Carlos E. Cob Sosa Nombre: Dra. Margarita L. Medina Macías Nombre: Dra. Dinora V Aguilar Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: 3-Febrero-2010 Fecha: 3-Febrero-2010 Fecha: 3-Febrero 2010 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero 2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 43 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica CAMBIO REVISIÓN FECHA Se cambia formato de Historia Clínica y programa de cómputo 03 03/02/10 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero 2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 44 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que al donador se le toman los datos de identificación, se imprime la Historia Clínica, el candidato a donador firma la carta de consentimiento informado, se registra en la Bitácora CAL-20 B, se valoran las venas, somatometría, signos vitales y toma de muestra (Ver procedimiento CAL-20, CAL 20-B, CAL-30 y CAL-43) se procede de la siguiente manera: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero 2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 45 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica El Medico toma del área de recepción la ficha de identificación del donador M-3-0-23 (y la Historia Cliníca M3-0-10-a; sólo en caso de procedimiento manual) De la ficha de identificación del donador M-3-0-23 observa el nombre completo del donador, lo llama y le indica que pase al consultorio donde se le realizará la valoración medica El médico, supervisa que los parámetros de signos vitales registrados, por el enfermera, en la ficha de Identificación, esten dentro de las especificaciones marcadas por la NOM-003-1993, Así como también que los resultados de la biometría hemática que se realizó en el área de toma de muestras esté acorde con los parámetros que establece la NOM-003-1993. Posteriormente interroga, explora y elabora Historia Clínica (cuando el procedimiento es manual llena formato de Historia Clínica M-3-0-10-a), ó ingresa datos en el sistema de cómputo (Programa Winlab) Médico verifica datos de somatometría, signos vitales e ingresa, los parámetros emitidos de toma de muestra de la biometría hemática en el apartado del sistema de cómputo (Datos del Donante) y determina si el candidato cumple con los requerimientos para donar sangre. No Apto El médico determina que el candidato no es apto para donar sangre y anota causa de rechazo en la Historia Clínica así como en el sistema de cómputo busca y graba la (s) causa (s) por la (s) cual(es)el donador NO ES APTO Si es Apto En el sistema de cómputo (en Datos del Donante) determina que el donador es aceptado para donar sangre y lo graba. Deposita en el buzón del área de Recepción la Histotia Clínica con la Biometría Hemática para que sea tomado por la recepcionista para asignar número de unidad, imprimir etiquetas y entregar todos estos documentos a la enfermera para continuar con el procedimiento de extracción de sangre total o de componentes sanguíneos por aféresis. (Ver Procedimiento CAL-43). Médico informa causa(s) de la exclusión para donar sangre El Médico informa al personal de Recepción y Trabajo social para evaluación social y reprogramación de cita. Les entrega la Historia Clínica CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero 2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 46 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica FICHA DE IDENTIFICACION DEL DONADOR CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero 2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 47 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica HISTORIA CLINICA DE CANDIDATO A DONADOR CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero 2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 48 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 3 Febrero 2010 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 49 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica REGISTROS Bitácora de entrega y recepción de Historias Clínicas del donador de sangre y componentes sanguíneos. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 50 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: NOMBRE: DR. ISMAEL HERNÁNDEZ MONTIEL NOMBRE: DRA. MARGARITA NOMBRE: DRA. DINORA L. MEDINA MACÍAS V. AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha: 12-Juulio-2011 Fecha: 13-Juliol-2011 Fecha: 13-Julio- 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 51 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica CAMBIO REVISIÓN FECHA 04 08/04/11 Se integra el sistema Kanban. Se anexa firma de la evaluación de la biometría hemática así como la impresión del formato de historia clínica electrónica M-3-0-10 a y b por el médico responsable. Se integra el CAL-64 Procedimiento de manejo de candidatos a donación No Aptos del área de selección de disponentes en este procedimiento, así mismo se da de baja en la lista maestra. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 52 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica DESCRIPCION DEL PROCESO El médico toma la hoja de Ficha de identificación del Kanban ubicado en el área de recepción y procede de la siguiente manera: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 53 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica El Medico toma del Kanban ubicado en el área de valoración médica la ficha de identificación del donador M-3-0-10-(a y b) y el resultado de la biometría hemática (BH) en caso de procedimiento manual también se incluye la Historia Cliníca M-3-0-10-(a y b) De la ficha de identificación del donador M-3-0-10a el médico observa el nombre completo del donador, lo llama y le indica que pase al consultorio donde se le realizará la valoración medica. En caso de sistema manual los datos los toma de la Historia Clínica El médico, verifica que los parámetros de signos vitales registrados, por la enfermera, en la ficha de Identificación, estén dentro de las especificaciones marcadas por la NOM-003-1993, Así como también que los resultados de la biometría hemática que se realizaron en el área de toma de muestras estén acordes con los parámetros que establece la NOM-003-1993, y anota su nombre, clave y firma. Posteriormente interroga, explora y elabora la Historia Clínica, ingresa los datos en el sistema informático de banco de sangre ó cuando el procedimiento es manual llena formato de Historia Clínica M-3-0-10-(a y b). El médico emite el diagnóstico y determina si el candidato cumple con los requerimientos normativos para realizar la donación de sangre o de aféresis. Si el disponente es APTO ó NO APTO lo registra en el sistema informático de banco de sangre, si es Apto imprime la historia clínica; anota su nombre, clave y firma de responsable en la ficha de identificación (formato M-3-0-23) y en la historia clínica (formato M-3-010-a y b) y solicita la firma al disponente No Apto El médico anota causa de rechazo en la ficha de identificación formato M-3-0-23 y en la Historia clínica en el formato M-3-0-10-(a y b) del sistema informático de banco de sangre (y manual) Si es Apto El médico informa al disponente la causa de rechazo Deposita en el Kamban del área de Recepción la Ficha de Identificación, impreso de biometría hemática y la Historia Clínica para que en recepción se le asigne número de unidad e impresión de etiquetas para posteriormente colocar todos estos documentos en el Kamban del área de flebotomía ó aféresis según corresponda y proceder a la extracción de sangre total (Ver CAL-46) o de componentes sanguíneos por aféresis. (Ver Procedimiento CAL-50) CAL-02-B El médico informa trabajo social y a recepción que el disponente no es apto, para posterior evaluación social y/o reprogramación de cita Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 54 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica FICHA DE IDENTIFICACION DEL DONADOR M-3-0-23 (PROCEDIMIENTO MANUAL) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 55 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica HISTORIA CLINICA DE (PROCEDIMIENTO MANUAL) CAL-02-B CANDIDATO A DONADOR M-3-0-10a Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 56 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica HISTORIA CLINICA DE (PROCEDIMIENTO MANUAL) CAL-02-B CANDIDATO A DONADOR M-3-0-10b Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 57 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica FICHA DE IDENTIFICACIÓN DEL INFORMÁTICO DE BANCO DE SANGRE CAL-02-B DONANTE (M-0-3-23) SISTEMA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 58 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica HISTORIA CLÍNICA (SISTEMA INFORMÁTICO DE BANCO DE SANGRE) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 59 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-40 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 12 Julio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 60 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica En el caso de los candidatos a donación No Aptos: La ficha de identificación y/o la Biometría Hemática impresas, se archivan durante 3 meses como indica la NOM-003-SSA-1993 La historia clínica permanece resguardada en el sistema informático de banco de sangre. En el sistema quedan registrados los candidatos a donación excluidos permanentemente que por no cumplir con los requisitos no serán aceptados como donadores en caso de solicitar nuevamente ser candidatos. REGISTROS Bitácora de entrega y recepción de Historias Clínicas CAL-50D se almacena en el archivo durante 3 meses. Bitácora CAL-20B (Registro de donadores), se almacena en el archivo durante 3 meses. Ficha de Identificación (M-3-0-23) (Manual y sistema informático de banco de sangre), se almacena junto con la historia clínica. Historia Clínica M-3-0-10-(a y b) (Manual y sistema informático de banco de sangre). Cuando el donador es Apto dichos registros permanecen durante 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-42 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 61 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de solicitud y entrega de estudios en el laboratorio Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-42 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 62 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de solicitud y entrega de estudios en el laboratorio CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 29/09/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-42 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 63 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de solicitud y entrega de estudios en el laboratorio DESCRIPCION DEL PROCESO Los diferentes estudios que se realizan en el Área de Inmunohematologia del laboratorio se solicitan de la siguiente manera: El Médico tratante solicita al Área de Inmunohematologia los estudios con los siguientes documentos: -El formato A-13-14-07 original y copia donde indica los estudios que requiere -Y la muestra del paciente identificada (Registro y nombre completo del paciente, fecha y hora de toma de muestra) La muestra puede ser entregada en el Área de Inmunohematologia por el Médico tratante, Residente, personal paramédico y mensajeros El personal de Inmunohematologia revisa el original y la copia de los formatos que le entrega y verifica que coincida el nombre que tiene el formato A-13-14-07 y la muestra , tambien verifica que la muestra sea la adecuada para los estudios solicitados . Si la identificación de la muestra o el tipo de muestra no es la correcta se procede a retener la muestra y solicitar una nueva muestra identificada correctamente. El personal de inmunohematologia entrega los formatos al medico, enfermera o mensajero y le pide que anote en la bitácora de solicitud de productos CAL-28-A los datos que se le solicitan y asigna el # consecutivo del día y una inicial según el horario (M para matutino, V para vespertino, N para nocturno y E para sabado, domingo o dias festivos) en el formato A-13-14-07 . Solo en caso de duda se consulta con el Jefe de Laboratorio o con el Médico especialista SI NO Se esta de acuerdo con lo solicitado lo indica en el formato con un SI en la parte superior derecha Se cancela su realización, y se notifica al servicio solicitante El personal de inmunohematologia realiza las pruebas solicitadas Una vez que el personal de inmunohematologia realizo los estudios solicitados anota en la bitácora de estudios especiales CAL-42-A los datos que se le solicita y procede a anotar los resultados en el original y en la copia del formato A-13-14-07 y guardar en el folder de estudios especiales la copia del formato Cuando el Médico, enfermera o mensajero solicita los resultados se le indica anote en la Bitacora de entrega de resultados de estudios especiales CAL-42-B lo que se le solicita y firme de entregado y se le entregan la copia del formato A-13-14-07 con los resultados. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-42 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 64 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de solicitud y entrega de estudios en el laboratorio El formato A-13-14-07 es llenado por el Médico que solicita el producto y se muestra a continuación: La bitácora CAL-28-A es llenada por el Médico que solicita el producto y se muestra en el Procedimiento CAL-28. El formato A-13-14-07 que se entrega al laboratorio como solicitud del estudio contiene al frente en la parte superior izquierda un recuadro en blanco donde se plaquea el carnet o se le escriben los datos de la persona a la que se realizara el estudio. Cualquiera de los datos que no se encuentren en el formato A-13-14-07 y no sean esenciales para realizar el estudio se puede quedar el espacio vació o cancelar con una raya La bitácora de Estudios especiales de Inmunohematologia CAL-42-A debido a su tamaño no se muestra dentro de este procedimiento. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-42 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 65 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de solicitud y entrega de estudios en el laboratorio La bitácora de Estudios especiales de Inmunohematologia CAL-42-A se llena de la siguiente manera: Fecha: Registro: Nombre: Edad: Sexo: Depto. y/o servicio: Cama: Diagnostico: Día, mes y ano en que se solicita el estudio. # asignado por el INP Apellido paterno, Apellido materno y Nombre del paciente o donador a quien se le solicita se le realicen los estudio. Se calcula de la fecha de nacimiento que contiene el carnet M masculino y F femenino y puede ser obtenido del carnet. Se encuentra en el formato A-13-14-07 # de cama donde se encuentra el paciente Se encuentra en el formato A-13-14-07 Datos referentes a la madre G: P: A: # de gesta es el paciente # de parto es el paciente # de abortos RHOGAM: Transfusión: Fecha: Vacuna anti-D Si existen transfusiones anteriores Si existe alguna transfusión la fecha en que se le realizo Estudios de Laboratorio Bilis: Si se requiere este resultado para los estudios que se van a realizar debe ser incluido por el medico que solicita los estudios. HTO: HB: CAL-02-B Si se requiere este resultado para van a realizar debe ser incluido solicita los estudios. Si se requiere este resultado para van a realizar debe ser incluido solicita los estudios. los estudios que se por el medico que los estudios que se por el medico que Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-42 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 66 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de solicitud y entrega de estudios en el laboratorio RETIS: TP: P/G: Si se requiere este resultado para van a realizar debe ser incluido solicita los estudios. Si se requiere este resultado para van a realizar debe ser incluido solicita los estudios. Si se requiere este resultado para van a realizar debe ser incluido solicita los estudios. los estudios que se por el medico que los estudios que se por el medico que los estudios que se por el medico que SABO Grupo: Subgrupo: Estudio que se puede solicitar al laboratorio. Estudio que se puede solicitar al laboratorio. SRh D, Du, Rh salino, C, c, E, e: Estudios que se puede solicitar al laboratorio. Coombs IgG-C3d, IgG, C3d, IgM, Titulo, Potencia: Estudios que se puede solicitar al laboratorio. Rastreo de anticuerpos irregulares FSABO Suero, Eluido Absorción ( Positivo o Negativo), Especificidad, Titulo, Potencia: Estudios que se puede solicitar al laboratorio. Fenotipo P, M, N, S, s, Fya, Fyb, Jka, Jkb, Lea, Leb, K, k, Dia: RPR Positivo, Negativo, Titulo: CAL-02-B Estudios que se puede solicitar al laboratorio. Estudios que se puede solicitar al laboratorio para el análisis de sífilis. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-42 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 67 de 7 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de solicitud y entrega de estudios en el laboratorio Ab inmunes Anti A y/o Anti B: Estudios que se puede solicitar al laboratorio para conocer la presencia de anticuerpos. La bitácora de Entrega de resultados de Estudios Inmunohematologia CAL-42-B se muestra a continuación: especiales de BITACORA DE ENTREGA DE RESULTADOS DE ESTUDIOS ESPECIALES DE INMUNO HEMATOLOGÍA CAL-42-B Fecha Registro Nombre del paciente Estudio solicitado Personal que recoge el resultado Nombre/Firma/clave La bitácora de Entrega de resultados de Estudios especiales Inmunohematologia CAL-42-B se llena de la siguiente manera: de Fecha: Día, mes y año en que se realiza el estudio. Registro: Numero de registro del paciente. Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s)del paciente. Estudios solicitados: Prueba Que se solicita se realice Personal que recoge el resultado, Nombre, firma, clave: Rubrica o/y firma y clave del personal que recoge los resultados del estudio. REGISTROS El formato A-13-14-07 se debe almacenar 5 año en archivo activo y 5 años en archivo muerto. La bitácora CAL-42-A se debe almacenar 5 año en archivo activo y 5 años en archivo muerto. La bitácora CAL-42-B se debe almacenar 5 año en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 07 de Octubre 2009 Página 68 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 07 de Octubre 2009 Página 69 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra CAMBIO REVISIÓN FECHA Se modifica procedimiento con datos administrativos actualización del equipo automatizado de Biometría Hemática. 04 07 de Octubre de 2009 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 07 de Octubre 2009 Página 70 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que al donador se le realiza la valoración DE SIGNOS VITALES Y SOMATOMETRIA (Ver procedimiento CAL-30), el Químico/Laboratorista del área de toma de muestras de Banco de Sangre toma la Ficha de Identificación del Donador (Formato M-3-0-23) del “Buzón de valoración del disponente”, que se encuentra en recepción y se procede de la siguiente manera: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 07 de Octubre 2009 Página 71 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 07 de Octubre 2009 Página 72 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra El formato F-A-14-26 se muestra a continuación: Instituto Nacional de Pediatría BANCO DE SANGRE CLASIFICACION DE GRUPOS ABO Y Rh0 (D) RESULTADOS SUBGRUPOS DE A No. DE UNIDAD ANTI-A ANTI-B ANTIAB AUTO GR-A1 GR-A2 GR-B GR-O LEC.-A1 ANTI-H S-RH ANTI-D CRho GRUPO Hto Hb LEUCO PLAQ RAiFSABO HORA REQ. HORA RES 1 k 2 3 4 5 6 7 8 9 0 F-A-14-26 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 07 de Octubre 2009 Página 73 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra El formato F-A-14-26 se llena de la siguiente manera: Resultados: Hb (Hemoglobina): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY Hto (Hematocrito): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY LEUCO (Leucocitos):Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY PLAQ (Plaquetas): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados del CELL DYN RUBY Nota 1: En el equipo CELL DYN RUBY se debe correr controles diariamente antes de su uso (Ver procedimiento CAL-14). Nota 2: Los tubos deben contener el nombre completo del paciente, número de registro, número de toma de muestra y fecha. REGISTROS F-A-14-26 Se debe almacenar en el archivo activo durante 5 años y en el archivo muerto 5 años. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 27 Junio del 2011 Página 74 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 27 de Junio del 2011 Página 75 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra CAMBIO REVISIÓN FECHA Se inserta el nuevo formato M-3-4-10 05 27 de Junio del 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 27 de Junio del 2011 Página 76 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que al donador se le realiza la valoración DE SIGNOS VITALES Y SOMATOMETRIA (Ver procedimiento CAL-30), el Químico/Laboratorista del área de toma de muestras de Banco de Sangre toma la Ficha de Identificación del Donador (Formato M-3-0-23) del “Buzón de valoración del disponente”, que se encuentra en recepción y se procede de la siguiente manera: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 27 de Junio del 2011 Página 77 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 27 de Junio del 2011 Página 78 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra El formato M-3-4-10 se muestra a continuación: El formato M-3-4-10 se llena de la siguiente manera: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-43 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 05 Fecha: 27 de Junio del 2011 Página 79 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de toma de muestra Resultados: Hb (Hemoglobina): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados Hto (Hematocrito): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados LEUCO (Leucocitos):Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados PLAQ (Plaquetas): Anotar el dato que aparece en la hoja de resultados Nota 1: En el equipo Automatizado de Biometrías se debe correr controles diariamente antes de su uso (Ver procedimiento CAL-14). Nota 2: Los tubos deben contener el nombre completo del paciente, número de registro, número de toma de muestra y fecha. REGISTROS No asociados CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-44 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 80 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de separación y almacenamiento de muestras Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-44 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 81 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de separación y almacenamiento de muestras CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 29/09/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-44 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 29 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 82 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de separación y almacenamiento de muestras DESCRIPCION DEL PROCESO El Personal Auxiliar del laboratorio del Banco de sangre que se encarga de separar y almacenar las muestras analizadas lleva a cabo el siguiente proceso: De las muestras obtenidas en el área de sangrado (en enfermería) y que son utilizadas en el área de serologia se realiza la separación y almacenamiento de la muestra. Los tubos de sangre total (tapon rojo) se centrifugan en la centrifuga Hettich Eba8s, de 5 a 10 minutos, de 3500 a 5500 rpm, y de 70 a 100% de potencia. Los tubos de biometría hemática (tapón morado) se separan en la centrifuga Sero-fuge durante 3 minutos a su máxima velocidad. Coloca las muestras separadas en una gradilla y las entrega al área de serología. Para realizar el almacenamiento: Se marca el criotubo (s) con el números de registro del día y/o Nombre completo del paciente o # del donador Se toma el tubo que contiene la muestra y se trasvasa al criotubo identificado con ese mismo # o Nombre, asegurandose solo pase el suero, se cierra y se coloca en una gradilla de unicel Una vez que se a terminado de vaciar todas las muestras, se saca la gradilla del refrigerador observando que sea la que contenga la última muestra colocada un día anterior. Una vez que se encuentran ordenadas se resguardan en el refrigerador a -70 C El Auxiliar de laboratorio marca las gradillas de unicel para poderlas guardar en el refrigerador con el # correspondiente visible para que sea posible identificarlas fácilmente y las coloca por # consecutivo. REGISTROS No existen registros asociados a este procedimiento CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-45 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 27 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 83 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de lavado del material Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-45 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 27 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 84 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de lavado del material CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 2 27/07/2006 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-45 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 27 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 85 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de lavado del material DESCRIPCION DEL PROCESO El Personal Auxiliar de laboratorio del Banco de sangre encargado del lavado de los diferentes tipos de material lleva a cabo el siguiente proceso: El Auxiliar del laboratorio prende el horno a una temperatura aprox. de 120º C. Se toman los diferentes botes de las áreas de Pruebas cruzadas y grupos sanguineos y se verifica que el material haya estado en contacto con la solución que contiene el bote. Si no es así se sumergen durante 10-15min. Aproximadamente para que se lleve a cabo la desactivación. El bote que contiene las pipetas se vacia en la tarja y se seleccionan -Las rotos: las separo o tiro al contenedor de material peligrosos. -Las que tienen presencia de contaminación las pongo al chorro del agua y las ordeno para que la punta de todas quede hacia el mismo lugar. -Las que presentan una contaminación mayor se ponen a remojar en una mezcla de agua/jabón/ cloro. El bote que contiene los tubos se vacia en la tarja y se seleccionan -Los rotos: se separan y tiran a una caja de cartón -Los que tienen presencia de contaminación los pone al chorro del agua y los talla con el escobillon uno por uno -Los que presentan una contaminación mayor se ponen a remojar en una mezcla de agua/jabón/ cloro Una vez que las pipetas o tubos contaminados se han remojando se enjuagan uno por uno (si se cree necesario) en el chorro del agua Si alguno de los tubos presentara algun tipo de marca con plumón se les talla con el sacate hasta borrarla en su totalidad . Cuando ya se tallarón se enjuagan con agua a presión, se sacuden y se unden en una charola que contiene agua destilada , hasta que se observe que no contienen jabón. Las pipetas se sacuden y se colocan boca a arriba en una canastilla y los tubos boca a bajo . Una vez que se termina el tiempo en la estufa se ponen los guantes adecuados y se saca la canastilla , se deja enfriar y se coloca el material en su lugar. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-45 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 27 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 86 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de lavado del material Nota: Observar que el material este en contacto con la mezcla agua/jabón/cloro antes de lavar. Si no fue así hundir durante 30-45 minutos aproximadamente para desactivarlos. REGISTROS No existen registros asociados a este procedimiento. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-45 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 27 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 87 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de lavado del material INDICACIONES DEL LAVADO DE MATERIAL DEL EQUIPO VITROS ECiQ 1. -Inactivar con alcohol etílico durante 30 minutos 2. Enjuagar con agua de la llave 3. Dejar en minutos. una mezcla de agua-jabón al 2 % por aproximadamente 15 4. Enjuagar con abundante agua de la llave y posteriormente con agua destilada. 5. Dejar boca-abajo para escurrir y secar. 6. Colocar el material en el lugar correspondiente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-45 Nivel de Revisión: 2 Fecha: 27 JULIO 2006 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 88 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de lavado del material TABLA PARA PREPARAR MEZCLA CLORO-AGUA AL 1:10 LTS. AGUA 0.900 1.800 4.5 9.0 13.5 ml CLORO 100 200 500 1000 1500 VOL. FINAL 1 LT 2 LT 5 LT 10 LT 15 LT TABLA PARA PREPARAR MEZCLA JABON-AGUA AL 2% LTS. AGUA 0.980 1.960 4.900 9.800 10.780 11.760 ml JABON 20 40 100 200 220 240 REGISTROS No existen registros asociados a este procedimiento. CAL-02-B VOL. FINAL 1 LT 2 LT 5 LT 10 LT 11LT 12LT Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 ISBN: 978-968-9170-17-4 Nivel de Revisión: 08 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 89 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Enf. Martha Concepción Jiménez Martínez Nombre: Dra. Margarita L. Medina Macías Nombre: Dra. Dinora Aguilar Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: 1de diciembre 2011 Fecha: 5 de diciembre 2011 Fecha: 5 de diciembre 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 90 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea CAMBIO Se detalla el procedimiento de asepsia Se ajusta el sistema para la toma de muestras para la determinación de grupo sanguíneo y serología. Se agrega la captura en la bitácora electrónica de cada donador. CAL-02-B REVISIÓN FECHA 08 5 de diciembre de 2011 08 5 de diciembre de 2011 08 5 de diciembre de 2011 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 91 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que al candidato a donación se le ha realizado la toma de la muestra (Ver procedimiento CAL-43) y cumple con las especificaciones publicadas en el área se procede así: La Enfermera administrativa recibe del área de recepción la Historia clínica de candidatos a donación (cuando el procedimiento es manual, también el formato M-3-0-10-a y b), la Ficha de Identificación del donador, formato M-3-0-23, las etiquetas que salen del sistema de cómputo (en procedimiento manual se usa la etiqueta M-3-0-30), Y hoja de resultado de Biometría Hemática. De la Historia clinica de candidatos a donación observa el nombre completo del donador, lo llama y le indica que pase a la sala donde se le realizará recolección sanguínea. Verifica que coincida Identificación Oficial con el donador y los datos de la Historia Clínica Las enfermeras solicitan al donador le indique en que brazo le fue tomada la muestra, le pide se acomode en el reposet Se le muestra al donador que el material que se va a utilizar esta cerrado , esteril y nuevo. Se le dá a leer el folleto informativo: El que tenga un amor ….. Que lo cuide. Las Enfermeras verifican el nombre del donador de la Historia Clínica y Número de Unidad asignado, coloca las etiquetas en los tubos, lila para la determinación de grupo sanguíneo y rojo para la serología (ó transcribe los datos a las bolsas cuando el sistema es manual) La enfermera que realiza la flebotomía corrobora que los datos del donador sean correctos verificándolos con la identificación con fotografía. Coloca el torniquete en el brazo, identifica la vena en donde se realizará la flebotomía y realiza el procedimiento de asepsia en el siguiente orden: jabón antiséptico, iodopovidona y alcohol. Posteriormente realiza la flebotomía y se fija la línea al brazo con tela adhesiva, indica al donador abrir y cerrar el puño de la mano durante el tiempo que dure la extracción sanguínea. La pantalla y la alarma de la balanza indica el llenado adecuado de la bolsa (450 a 480 ml +/- el 10% dependiendo de la bolsa que esté en uso), automáticamente se cierra el sistema y no deja pasar más sangre, o se pinza la línea de extracción y se retira la aguja y la bolsa (se da máximo 10 minutos y si no se obtiene el volumen deseado retira la aguja y la bolsa). Las muestras sanguíneas se tomarán dependiendo de la bolsa que esté en uso al inicio o al final de la extracción, respectivamente. Primero se toma la muestra del tubo con el tapón color lila (grupo sanguíneo) y luego el tubo de tapón color rojo o amarillo (serología). Se pinza la línea y se retira la aguja, colocando inmediatamente una torunda de algodón seca, dando indicación al donador de que permanezca acostado con el brazo suavemente doblado sin hacer presión hasta que le den la indicación de levantarse. La enfermera que retiró la aguja sella y corta la línea de la misma así como la línea del vacutainer, depositando el material punzocortante en el contenedor de RPBI. Anota la hora de inicio y término del sangrado. Homogeniza la línea 2 veces y en el sellador dieléctrico se realizan las secciones para los pilotos para su uso en el laboratorio. Se coloca la bolsa en el refrigerador (Temperatura 1 a 6°C) para que el personal de laboratorio la traslade al mismo. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 92 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea La enfermera da las indicaciones a los donadores de permanecer acostados aprox. 10 minutos. Coloca parche adhesivo en el sitio de la flebotomía y vendaje ligeramente compresivo en el área. Entrega etiqueta de autoexclusión al donador (ó talón en sistema manual) Para que de acuerdo a lo que leyó del folleto marque lo que considere si su sangre es segura “si o no”. Pregunta al donador como se siente: Si ¿Se siente bien? No Se suspende la extracción si estuviera en este proceso e inmediatamente se avisa al médico responsable del área quien dará indicaciones para el manejo del evento Le indica que se puede levantar y mantenga doblado el brazo durante 20 minutos más, deposite la etiqueta en el buzón y pase a tomar un refrigerio para posteriormente pasar a recepción y registrar su hora de salida, pedir su comprobante de donación con la trabajadora social (ver procedimiento CAL-19) , el cual se imprime del sistema de cómputo (o comprobante con formato M-3-0-25, cuando se emplea sistema manual). Despide al donador y da la gracias. La etiqueta (o talón, en procedimiento manual) de autoexclusión, permite al donador, informar si considera que su sangre es segura o no es segura SI La enfermera llena la Bitácora CAL-46 A (Disponentes y eventos adversos) con los datos de los donadores y coloca la etiqueta de autoexclusión en el ángulo superior izquierdo de la ficha de identificación del donador ¿Mi sangre es segura? no Las enfermeras registran la Autoexclusión y el Producto no Conforme por defecto de recolección en la bitácora CAL-46-B. Colocan la etiqueta de Producto No Conforme inmediatamente en la bolsa de sangre total (etiqueta fluorescente) ; Notifican al químico responsable y al personal de fraccionamiento para que le de el manejo de producto de conforme. Al final de la jornada, las enfermeras registran en la Bitácora 46-A los datos de todos los donadores del día y eventos adversos a la donación (en caso de que se presenten). Captura los datos en la bitácora electrónica de cada donador y entrega los documentos de los donadores efectivos al médico asignado. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 93 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea VIGILANCIA MÉDICA En cuanto a la permanencia de los médicos en el área de selección de disponentes se determina lo siguiente: 1. Durante el procedimiento de toma de muestra, extracción de sangre total y aféresis cualquier reacción adversa será atendida de manera inmediata por la persona que realiza el procedimiento. (enfermera o químico) 2. La enfermera o químico, avisará al médico. 3. Los médicos deben permanecer en el área, durante los procedimientos mencionados. 4. cuando algún médico requiera ausentarse del área, avisará y encargará a otro médico para que esté pendiente de los donadores. BITÁCORAS Y FORMATOS RELACIONADOS A ESTE PROCEDIMIENTO CAL-46-A BITACORA DE DISPÓNENTES Y EVENTOS ADVERSOS A LA DONACIÓN Los rubros que contiene la Bitácora CAL-46-A, son los siguientes: FECHA Numero de Donadores Sexo Femenino CAL-02-B Masculino HORA DE INICIO HORA DE TERMINO AUTOEXC LUSION No de UNIDAD OBSERVACIONES Y EVENTOS ADVERSOS A LA DONACIÓN ENFERMERA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 94 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea BITÁCORA DE REGISTRO DE PRODUCTO NO CONFORME Los rubros que contiene la Bitácora CAL-46-B, son los siguientes: FECHA Numero de unidad NOMBRE DONADOR CAUSA DE LA NO CONFORMIDAD NOMBRE Y FIRMA DE ENFERMERA QUE ENTREGA NOMBRE Y FIRMA DE LA PERSONA DEL LABORATORIO QUE RECIBE Los datos que solicita la Bitácora son los siguientes: Fecha: se anota la fecha actual, del día en el se esta llevando a cabo el procedimiento Número de unidad: se anota el número que se asignó en toma de muestra y que se encuentra en el extremo superior derecho de la ficha de Identificación con formato M-3-0-23 Nombre del Donador: se anota el nombre del donador que aparece en la parte superior de la Historia Clínica y que coincide con el número de unidad que tiene la etiqueta o talón de autoexclusión. Causa de la No Conformidad: Se detalla el motivo por el cual no cumple con los requisitos del producto. Nombre y firma de la Enfermera que entrega: Se anota el nombre y la firma de la enfermera quien detectó el producto no conforme. Nombre y firma del personal de laboratorio que recibe: Se anota el nombre y la firma de la persona del laboratorio que recibe el producto no conforme. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 95 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea Talón de autoexclusión se muestra a continuación: Talón del sistema informático de Banco de Sangre Talón sistema Manual El Talón de autoexclusión se debe llenar de la siguiente manera: DESPUES DE QUE HAYAS DONADO SANGRE, DEPOSITALO EN EL BUZON. MI SANGRE: SI ES SEGURA (Tacha aquí si consideras que tu sangre SI es segura) NO ES SEGURA (Tacha aquí si consideras que tu sangre NO es segura) No. DE REGISTRO: Número de unidad asignado consecutivamente y se encuentra en la bitácora de ingresos y egresos. Nota 1: El Personal del laboratorio debe recoger las muestras identificadas y el formato M-3-0-30 previamente lleno. Nota 2: Es importante revisar que la enfermera deje en recepción los formatos M-3-0-10-a y b, M-3-0-23, cupón de autoexclusión y el ticket de resultado de toma de muestra. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 96 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea Nota 3: En el Procedimiento CAL-19 se indica como llenar el formato M-3-0-25. Nota 4: La bolsa de recolección de sangre no debe contener burbujas mayores a 3mm de diámetro antes de ser utilizada. Y debe de contener el sello que indica PENDIENTE DE ESTUDIOS NO TRANSFUNDIR. Nota 5: Las unidades marcadas con autoexclusiones implican su destrucción al llegar a la sección de fraccionamiento Nota 6: ASEPSIA: En caso de que algún candidato a donar sangre refiera ser susceptible a algún componente que se utiliza para realizar al asepsia, previo a la venopunción, se modificará el procedimiento, eliminando la sustancia o solución a la que es susceptible. REGISTROS CAL-46-A Bitácora de control de disponentes. CAL-46-B.-La bitácora de control de autoexclusión y efectos adversos a la donación , CAL-46-B No tiene Caducidad. Cupón de autoexclusión se almacena en el archivo activo durante 5 años y en el archivo muerto 5 años. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 97 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea ANEXO 1 CARACTERISTICAS DE REFRIGERIO A DONADORES CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-46 Nivel de Revisión: 08 ISBN: 978-968-9170-17-4 Fecha: 05 de Diciembre 2011 Página 98 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Extracción Sanguínea CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 99 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 100 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 31/07/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 101 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio DESCRIPCION DEL PROCESO En el área de Control de calidad aplicado a la sangre y sus componentes obtenidos en el Banco de sangre del INP se realizan las siguientes pruebas: A. CONCENTRADOS ERITROCITARIOS: Determinación de Biometría hemática: Conteo de leucocitos Hematocrito Hemoglobina Control Bacteriológico B. CONCENTRADOS PLAQUETARIO Y PLAQUETAFERESIS: Determinación de Biometría Hemática: Conteo de leucocitos Cuenta de plaquetas: Indices plaquetarios: ADP VPM Control Bacteriológico Determinación de pH C. PRODUCTOS LEUCORREDUCIDOS: Determinación de leucocitos residuales Determinaciones acorde al tipo de producto estudiado (Ver incisos A y B) D. PLASMA FRESCO CONGELADO: Determinación de Factores de Coagulación: Factor I Factor VIII Factor IX Determinación de proteínas totales CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 102 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio E. PLASMA DESPROVISTO DE FACTOR: Determinación de Factores de Coagulación: Determinación de Factor IX Determinación de Proteínas Totales F. CRIOPRECIPITADOS: Determinación de Factores de Coagulación: Determinación de Factor I Determinación de Factor VIII Este análisis se realiza en 8 productos (8 CE, 8 CP, 8 PFC, 8PSF, 8 GAH) de la población captada mensualmente y en todo producto anormal. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 103 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio CONTROL DE CALIDAD DEL CONCENTRADO ERITROCITARIO El Químico de Control de calidad toma al azar el 1% o 8 Unidades (lo que sea mayor ) de los Concentrados eritrocitarios del mes en cuestión obtenidos del refrigerador donde se resguardan para ser utilizados Se colocan las bolsas que contienen el CE en la campana de extracción y se Identifica un tubo por cada producto con el # de registro que presenta la bolsa que contiene el C.E. a analizar Se coloca la bolsa que contiene el CE en agitación aproximadamente de 10-15 min. con una velocidad de 100- 120 RPM ( es importante que la temperatura de la bolsa no suba demasiado). La bolsa contiene 2 lineas. la que fue utilizada para realizar la extracción de la sangre y la otra es la que unía a las demás bolsas. Esta última es la que se purga. La homogenización entre el CE que contiene la bolsa y el que se encuentra en la linea es muy importante por que esta linea sera la vía de extracción de la muestra. Se toma la punta de la linea de la bolsa con las pinzas de rodillo y se purga (se mueve la pinza en dirección de la bolsa, para dejar pasar todo el CE que contiene y sin quitar la pinza se agita la bolsa sosteniendola en la palma de la mano) este proceso de purga y agitación se realiza varias veces. Se utiliza el conector esteril ( TERUMO STERILE TUBING WELDER TSCD) para unir una bolsa de transferencia con el fin de evitar habrir el sistema y contaminarlo. BOLSA DE TRANSFERENCIA De la Bolsa de transferencia que contiene aproximadamente con 50 ml se toma una muestra para el estudio Se analizan las muestras en el Sysmex KX-21N observando los resultados obtenidos en la muestra y el tubo de leucocitos, hemoglobina y hematocrito. De la Historia clinica del donador se buscan los valores iniciales de leucocitos, hemoglobina y hematocrito para establecer la eficiencia del producto. Todos los datos obtenidos durante este proceso se escriben en la bitácora de Control de Calidad CAL-47-A y se anexa el ticket obtenido del Sysmex KX-21N y se escriben los datos indicados en la bitácora de Control de Calidad Bacteriológico CAL-47-B Los CE analizados se mandan al laboratorio de bacteriología junto con el formato M-3-106-a o el F-A-13-16-06 y la bitácora CAL-47-B para que el personal de bacteriología firme de recibido el producto. Los resultados de bacteriología son enviados al Jefe del banco de sangre y el Químico de control de calidad los pasa a la bitácora CAL-47-A CAL-02-B BOLSA ORIGINAL CON EL VOLUMEN REMANENTE: se envia al servicio de bacteriologia para su cultivo. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 104 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 105 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio Curva de actividad para dosificación de FACTORES en el equipo ORGANON TEKNIKA COAG-A-MATE Muestra biológica: Estándar liofilizado o Pool de plasmas citratados (mínimo 10) Reactivos: Sustrato liofilizado deficiente en factor VIII Sustrato liofilizado deficiente en factor IX Tromboplastina parcial activad Trombina Cloruro de clacio 0.025M Buffer veronal (Owren) Material: Micropipetas de 50, 100, 200 y 1000 µl Cubeta de plástico para el equipo de coagulación Gradilla metálica en cubeta de hielo Condiciones: Sustratos, reactivos, controles y muestras de trabajo mantenerlos en baño de hielo Sistema de reacción a 37°C Nota: el pool de plasmas se obtiene de donadores, se recomienda que sean mujeres (mayor concentración de factor VIII y/o IX). En caso de no correr la curva el mismo día de la toma de muestra, se mantiene a 35°C hasta por un año. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 106 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio CURVA DE ACTIVIDAD O CONCENTRACION Tubo 1(dilución 1/5) Se adiciona 800microlitros de Buffer + 200microlitros de la muestra Tubo 2 (dilución 1/10) Se adiciona 500microlitros de Buffer + 500microlitros de la muestra del Tubo 1 Tubo 3(dilución 1/20) Se adiciona 500microlitros de Buffer + 500microlitros de la muestra del Tubo 2 Tubo 4(dilución 1/40) Se adiciona 500microlitros de Buffer + 500microlitros de la muestra del Tubo 3 se quitan 500microlitros después de homogenizar para que contenga la misma cantidad que los demás. Las diluciones utilizadas para la calibración de la curva de Fibrinogeno son las siguientes: Tubo 1(dilución 1/5) Se adiciona 200microlitros de la estándar o control (≥360mg%) + 800microlitros de Tampón Owren Tubo 2 (dilución 1/10) Se adiciona 100microlitros de la muestra+ 900microlitros de Tampón Owren Tubo 3(dilución 1/20) Se adiciona 100microlitros de la muestra + 1.9ml de Tampón Owren Tubo 4(dilución 1/30) Se adiciona 100microlitros de la muestra+ 2.9ml de Tampón Owren Reactivos para reconstituir para la curva de Factor VIII, IX y Fibrinogeno: STA Factor IX se reconstituye en 1ml de agua destilada. Factor VIII Deficient plasma se reconstituye en 1ml de agua destilada. Trombina se reconstituye en 5ml de agua destilada. PTT Reagent se reconstituye 30min. antes de ser utilizado. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 107 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio El Patrón de Fibrinógeno se reconstituye en 1ml de agua destilada. Coagulación La Prueba de coagulación se realiza para los siguientes productos: Al Plasma fresco congelado se le realiza Factor VIII, IX y Fibrinógeno. Al Plasma sin factor se le realiza Factor IX. A los Crioprecipitados se les realiza Factor VIII y Fibrinógeno. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 108 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio CURVA DE CALIBRACIÓN CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 109 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio MUESTRA Cuando la muestra que se va a analizar es un Crioprecipitado se reconstituye con 15ml de solución salina todo el crioprecipitado, se agita durante 15minutos y se toma una alicuota y diluye con diluyente o tampón 1:5 o 1:10 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 110 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio A continuación se describe el manejo del Citometro: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 111 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 112 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 113 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio El formato M-3-1-06-a se llena de la siguiente manera: En el recuadro vacío del lado superior izquierdo se anota el numero de la unidad que se encuentra en la etiqueta de la bolsa del producto. El grupo: Grupo sanguíneo del paquete. El tipo de producto: Hemoderivado enviado (CE, CP, Plasma, etc.) Servicio : Servicio que solicita el análisis “Banco de sangre”. Fecha: Día, mes y año en que se solicita el análisis. El formato F-A-13-16-06 se llena de la siguiente manera: Dependencia: Servicio : Fecha: Institución que requiere el análisis “ INP ” Servicio que solicita el análisis “Banco de sangre”. Día, mes y año en que se solicita el análisis. En el recuadro vacío del lado superior izquierdo se anota el número de la unidad que se encuentra en la etiqueta de la bolsa del producto. El grupo: Grupo sanguíneo del paquete. El tipo de producto: Hemoderivado enviado (CE, CP, Plasma, etc.) La bitácora de Control de calidad de Bacteriología CAL-47-A siguiente manera: se llena de la Fecha: Día en que se realiza el control de calidad. Procedencia: Institución de donde se manda realizar el análisis. Registro: # Unidad Producto: Tipo de hemoderivado para analizar. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 114 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio Anticoagulante: Anticoagulante que contiene la bolsa cuando se realiza el sangrado, se encuentra especificado en la etiqueta del hemoderivado. RPM : Velocidad a la que fue fraccionado el hemoderivado (Bitácora de fraccionamiento) T°C:Temperatura a la que fue fraccionado el hemoderivado (Bitácora de fraccionamiento) Fecha de caducidad del producto: Día, mes y año en que caduca el hemoderivado esta especificado en la etiqueta. Hemólisis: Cuando se realiza el conteo en los CE se requiere saber si el hemoderivado se encuentra hemolizado o no. pH: Cuando se realiza conteo en CP se requiere conocer el pH Peso bruto: Se requiere conocer el peso del hemoderivado (Bitácora de fraccionamiento) Volumen (ml): Se requiere conocer el volumen del (Bitácora de fraccionamiento) PLQ/microlitros: Cuando se realiza conteo en CP (ticket del Sysmex) PLQ/U: Cuando se realiza conteo en CP (Dilución) Leucocitos/microlitros: Cuando se realiza conteo en CP y CE (ticket del Sysmex) Leucocitos/U: Cuando se realiza conteo en CP y CE Hematocrito inicial: Cuando se realiza conteo en CE (ticket del Sysmex) Hematocrito final: Cuando se realiza conteo en CE (ticket del Sysmex) Control bacteriológico:.Resultados del cultivo en el Laboratorio de Bacteriología. Factor VIII %: Se obtiene % de actividad del factor de coagulación en Plasma y crioprecipitados Factor IX %: Se obtiene % de factor de coagulación del Plasma y crioprecipitados Fibrinógeno (mg/dl) Se obtiene la concentración en mg de Fibrinógeno en PFC y GAH. La bitácora de Control de BacteriologiaCAL-47-B se llena de la siguiente manera: Fecha: Día en que se realiza el control de calidad. Registro: # Unidad Producto: Tipo de hemoderivado para analizar. Grupo: Grupo sanguíneo del hemoderivado (etiqueta del producto) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-47 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 31 de Julio 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 115 de 22 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Control de Calidad en los diferentes hemocomponentes procesados en el laboratorio Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del donador o paciente. Entrega: Nombre completo de la persona que esta solicitando el análisis. Recibe: Fecha en que recibe y firma de quien lo recibe. REGISTROS El formato F-A-13-16-06 se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. El formato M-3-1-06-a se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. La bitácora CAL-47-A se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. La bitácora CAL-47-B se debe almacenar 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. LISTA DE DISTRIBUCION Laboratorista: ____________________________________ Laboratorista: ____________________________________ Suplente: ____________________________________ Suplente: ____________________________________ Suplente: ____________________________________ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 116 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Dra. DORIS LORDMENDEZ JACOME Nombre: Dra. M. LETICIA MEDINA MACÍAS Nombre: Dra. DINORA AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha: 23 de junio 2011 Fecha:23 de junio 2011 Fecha:23 de junio 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 117 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis CAMBIO a) Se modifica el nombre de la bitácora CAL-46 B (Bitácora de registro de producto no conforme) b) Se agregan lineamientos incluyendo las características del producto conforme de Aféresis. c) Se agrega el formato Control diario de procedimientos de aféresis CAL-02-B REVISIÓN FECHA 04 23 de junio 2011 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 118 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis DESCRIPCION DEL PROCESO El Instituto Nacional de Pediatría requiere la donación de plaquetas en el Banco de sangre para el diferente aporte transfusional que se lleva a cabo en el mismo, la cantidad de donadores al procedimiento de aféresis dependerá de la demanda en el Banco de Sangre. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 119 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis El candidato a donador solicita a la Trabajadora social una cita para donar plaquetas Se presenta el donador el día de su cita, presentando su identificación oficial con fotografía y vigente, pasa a recepción en donde se registra (Ver procedimiento CAL-20); y se identifica el formato M-3-0-23 de acuerdo al procedimiento de aféresis que se vaya a realizar (PLAQUETAS, GRANULOCITOS, CÉLULAS TALLO) Se le realiza la valoración de venas y signos vitales (Ver procedimiento CAL-30), toma de muestra (Ver procedimiento CAL-43) y la valoración medica (Ver procedimiento CAL-40). Si el donador se encuentra apto el Médico le proporciona la información sobre el procedimiento y lo ingresa a la sala de Aféresis y solicita el número de unidad y las etiquetas correspondientes (Ver procedimiento CAL-20) pegando una etiqueta en la hoja de identificación y desprende otra para que entrega a trabajo social para que sea pegada en el comprobante de donación y anota en forma manual el motivo de la donación (control interno de trabajo social . Si por necesidades del servicio o por ser producto dirigido se programará una cita registrándose en la Bitácora de Citas de Aféresis CAL-50-B se le entrega recordatorio CAL-50-C de cita y se le dan indicaciones generales previas a la donación. Cita programada no si Cuando el candidato acude a su cita de donación, el médico recaba la documentación con resultados en el área de Serología, y verifica resultado de marcadores serológicos El médico entrega al área de enfermería la documentación correspondiente, para inicio del proceso de aféresis si Serologfía Negativa no Si alguna(s) de las pruebas del candidato a donador presenta un resultado REACTIVO se descarta como donador y el área de Serología notifica al Medico para que se solicite 2da muestra para realizale la prueba confirmatoria, y una vez que se tiene el resultado se anexa la hoja de resultados en su documentacion y el Medico le informa el motivo de rechazo CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 120 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis La Enfermera llama al candidato a donación por su nombre completo, le solicita su identificación y le indica que pase a la sala donde se le realizará el proceso, se le muestra el equipó que será utilizado y se abre en su presencia haciendo énfasis en que el equipo esta cerrado , estéril y es desechable. Se le pide al donador que pase al baño y regrese al área para iniciar la donación . Aproximadamente 30 minutos previos al inicio del procedimiento de aféresis, la enfermera o el médico encargado del procedimiento administrará de manera profiláctica 2 tabletas de carbonato de calcio (500mg/tab) por vía oral a cada donador. Se reforzará la información a los donadores sobre los síntomas iníciales de hipocalcemia por parte del personal médico y de enfermería para asegurar la comprensión de dicha información.* Se procede a instalación y purgado de equipo (cebado) (Ver manual del operador del separador en uso)l e inicia el proceso de donación de Aféresis registrando la información en la hoja de control de procedimientos de aféresis Bitácora CAL 50-A Al terminar el proceso de Aféresis, se toman signos Vitales y se colocan parches en las zonas de venopunción Se le entrega al donador el folleto “El que tenga un amor que lo cuide” y el talón de autoexclusión confidencial si AUTOEXCLUSIÓN no La Enfermera notifica al médico del área de aféresis, y se registra en la Bitácora CAL 46-B y se maneja como producto No conforme (ver procedimiento CAL09 ) Se le pide al donador pase al comedor para ingerir su refrigerio y al terminar pasar a trabajo social quien entrega el comprobante de donación y proporciona información del horario para recoger resultados de exámenes realizados. Al terminar de retirar el equipo la enfermera identifica las unidades del producto obtenidas (2 bolsas), la ficha de identificación. Una de las etiquetas se pegan en la Bitácora CAL-50-a de la hoja que corresponde al procedimiento que se lleva a cabo NOTA: La identificación de las bolsas es provisional hasta la identificación final en Serología . (Ver CAL- 32 ) Se anota en cada una de las bolsas el número de Aferesis (obtenido de la bitacora CAL-50-A), la cantidad de concentrados plaquetarios (estimados por la máquina) y el volúmen. La enfermera lleva las bolsas del producto al área de Inmuno-Hematología – receptores. Se colocan en el refrigerador correspondiente y se avisa al personal del área . Se entrega al área de Serología la Historia clinica, la ficha de identificación, el talón de autoexclusión, los resultados de la biometría PRE. Al terminar el procedimiento la enfermera registra la información en el sistema informático de CAL-02-B banco de sangre . Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 121 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis *El contenido de la plática de información que deben impartir el personal médico y de enfermería sobre los potenciales síntomas iníciales de la hipocalcemia secundaria a efectos adversos por la anticoagulación con citrato son: Adormecimiento peribucal, vómitos, diarreas y menos frecuentemente contracturas. Se anexa a la Historia Clínica el siguiente control diario de procedimiento de aféresis: LINEAMIENTOS O POLÍTICAS: 1.- La información adicional que se anexa a la hoja de identificación del donador no deberá eliminarse (desprenderse o borrarse). 2.La obtención de componentes celulares por métodos de aféresis deberán tener como propósito cubrir la deficiencia específica de dicho componente en un paciente. 3. La realización de los procedimientos para la obtención de plaquetas, eritrocitos y plasma se justificara en base a las reservas y demandas de dicho componente para cubrir las necesidades de los pacientes. 4.- Los procedimientos de aféresis para la obtención de leucocitos (granulocitos y/o células progenitoras hematopoyéticas deberá estar justificada por una solicitud de interconsulta del servicio y el médico del servicio responsable del tratamiento del paciente CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 122 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis 5- Los donadores de componentes celulares obtenidos por aféresis deberán cubrir todos los requisitos normativos de selección. - Para plaquetas. Accesos venosos adecuados. Cuenta plaquetaria mínima de 150x103 No ingesta de medicamentos que contengan acido acetilsaliciclio en las ultimas 72 h (única toma) o 7 días (tomas repetidas). - Para leucocitos (granulocitos, neutrófilos). Accesos venosos adecuados. Movilización 12 h previas al procedimiento con esteroides y/o factor estimulante de colonias). Por los menos dos cuentas leucocitarias con diferencial previas al procedimiento que permitan valorar la respuesta al estimulo de la movilización. Para eritrocitos (dobles rojos): Donador: Genero. Masculino. Peso: ≥ 65 Kg. Talla: ≥ 165 cm Hematocrito: ≥45% Grupo: Dependerá de las necesidades de pacientes y/o del faltante de las reservas del banco de sangre. Para plasma: Donador: genero: indistinto. Peso: ≥ 50 Kg. Proteínas séricas: ≥ 6 g/mL Dependerá de las necesidades del servicio. 6.-Los concentrados de leucocitos y plaquetas obtenidos al final de cada procedimiento deberán cumplir con los siguientes requisitos para ser considerado como producto conforme: Componente: Leucocitos (Neutrófilos) Volumen (mL Cuenta celular mínima CAL-02-B variable 1x1010 neutrófilos Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 123 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis Plaquetas Volumen (mL) 200-250 mL Cuenta mínima de plaquetas 3.0x1011 de plaquetas Plasma 450-750 mL Proteínas 60g/L FVIII 1UI/mL Fibrinógeno 160 mg/dL 12 meses congelado Células progenitoras ≥ 50 mL ≥ 2x106/kg de peso de receptor de células CD34+ Hematopoyéticas (Alogenico) ≥1.5x106/Kg de peso receptor de células CD34+ (Autólogo) Para todos los componentes sanguíneos: Integridad de los contenedores. Identificación de la unidad con: Nombre del donador Número de unidad/Número de aféresis. Fecha de obtención. Tipo de componente. Volumen. Talón de autoexclusión con respuesta SI ES SEGURA. (EXCEPTO DONADORES PEDIATRICOS) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 124 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis 7.- Los componentes celulares obtenidos por aféresis que no cumplan con los criterios de conformidad deberán ser evaluados conjuntamente con el personal médico y de laboratorio de banco de sangre cuando el componente sean plaquetas, glóbulos rojos o plasma Y el coordinador de trasplantes cuando se trate de Células progenitoras hematopoyéticas, en base a los siguientes criterios: Cuando la dosis no sea la óptima se considerara la posibilidad de la realización de otro procedimiento para poder alcanzar la dosis sumando la dosis anterior. El volumen y la concentración de plaquetas sea equivalente como mínimo a un concentrado de Plaquetas obtenido de sangre total y en el caso de eritrocitos y/o plasma fresco pueda cubrir una dosis de 10 mL/Kg de peso. La Bitácora de Aféresis CAL-50-A se llena de la siguiente manera: Procedimiento: Anotar el procedimiento realizado: Plaquetaféresis Después de anotar el procedimiento poner A (significa Aféresis) / número consecutivo de la bitácora CAL-50-A / los dos últimos números del año. Fecha: Equipo: Flujo: Día, mes y año en que se realiza la aféresis. Indicar el tipo de máquina usada. Indicar el tipo de flujo usado para la aféresis: Continuo Discontinuo I. DATOS DEL RECEPTOR Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del paciente que requiere el producto. Cama: # de la cama donde hospitalizado el paciente. Grupo sanguíneo: Tipo de sangre del paciente que va a recibir el producto. Diagnostico: Diagnostico principal del paciente para el que se realiza la donación. CAL-02-B se encuentra Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 125 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis II. DATOS DEL DONADOR Nombre: Apellido paterno, Apellido Nombre(s) del donador. materno y Edad: # de años que tiene el donador al momento de realizar el procedimiento. Grupo sanguíneo: Tipo de sangre del donador Parentesco: Relación que existe entre el paciente y el donador (Amistad, familiar, etc). Peso El peso del donador expresado en Kg H.I.V., H.C.V., HbsAg, R.P.R, BRUCELLA, OTROS. Resultados de las pruebas realizadas al donador por el Laboratorio del Banco de sangre tomado de la Historia Clínica. Nombre y firma de quien realizo las Pruebas Sello o firma de quien realizo el análisis de las pruebas. III. DATOS DEL PROCEDIMIENTO Hora de inicio: Hora de terminación: Responsable: Hora en que se inicio el procedimiento. Hora en que se finalizó el procedimiento Nombre y firma de la enfermera que realiza el procedimiento. Otros datos que se registran en la bitácora CAL-50-A anotados por la enfermera durante el procedimiento: VELOCIDAD VELOCIDAD TIEMPO DE DE ** SANGRE * PLASMA * CAL-02-B VOLUMEN DE SANGRE * VOLUMEN DE PLASMA * GOTAS DE ACD ** SIGNOS VITALES Y OBSERVAC. *** Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 126 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis *. Obtenidos directamente de la máquina. **. Al momento de llenar el registro. ***. Se registran antes, durante y después del procedimiento. Volumen procesado de sangre: Cantidad de sangre que se proceso al finalizar el procedimiento, obteniendo este dato directamente de la máquina, referido como END-POINT. Anticoagulante: Cantidad de anticoagulante que se utilizo durante el procedimiento. Solución salina: Cantidad de solución salina que se utilizo durante el procedimiento NOTA: La enfermera que realizo el procedimiento calcula las cantidades de Solución salina y Anticoagulante mediante la inspección visual de las bolsas; resta al volumen inicial marcado en las bolsas el volumen contenido en las bolsas al final del procedimiento (Las bolsas son graduadas). IV. RESULTADOS Volumen de la cosecha: DATOS DE BIOMETRIA HEM. PLAQUETAS LINFOCITOS GRANULOCITOS HEMATOCRITO OTROS CAL-02-B MUESTRA PRE Dato que es obtenido por la enfermera al pesar cada bolsa que contiene el producto y restarle el peso de la bolsa vacía (40 ml) MUESTRA POST MUESTRA DE LA COSECHA COSECHA FINAL Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 127 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis Datos obtenidos de: Muestras del Donador (PRE Y POST) Equipo automatizado de biometría hemática Área de Control de Calidad Médico que supervisa el procedimiento Muestra de la Cosecha Cálculo de la cosecha final Nombre y firma del Médico que realizo el procedimiento: Firma de quien realizó el análisis de la cosecha final . La Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B se muestra a continuación: DONADOR FECHA Y HORA NOMBRE TELEFONO FECHA DE ESTUDIO PROCEDIMIE NTO PACIENTE MOTIVO DE NOMBRE LA DONACIÓN OBSERVACI ONES La Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B se llena de la siguiente manera: DONADOR Fecha y hora: Día, mes y año de la cita de donación. Y Hora y minutos en que se da la cita de donación. Nombre : Apellido paterno, Apellido Nombre(s) del donador. materno y Teléfono: # telefónico del donador. Fecha del estudio: Día, mes y año en que se le realizo los estudios de Serologia. PACIENTE Procedimiento: Procedimiento a realizar Nombre: Apellido paterno, Apellido Nombre(s) del paciente. CAL-02-B materno y Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 128 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis Motivo de la donación: Diagnostico por el que el Médico justifica el procedimiento de plaquetaféresis. Observaciones: Anotar cualquier observación relacionada al procedimiento (Cancelado, Suspendido, Reprogramado, No acudió donador, etc.) El recordatorio de cita de aféresis CAL-50-C es el siguiente: Favor de permitir el paso al Sr. (a): Nombre completo del candidato a donar plaquetas. DONADOR (B) DE PLAQUETAS El día: Fecha de cita de donación. A las: Horario de la cita de donación. Fecha de Estudio: Fecha en que se tomaron muestras para estudio. Al reverso deberá contener la siguiente información: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 129 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis Indicaciones. El día anterior a la cita: No comer de preferencia alimentos con grasa No tomar bebidas alcohólicas con un mínimo de 72 hrs previas a la donación. No tomar medicamentos con un mínimo de 72 hrs previas a la donación. Cenar sin grasa y no tomar leche Aseo Corporal Dormir como mínimo 6 horas El día de la cita: Puede tomar jugo y fruta Usar ropa holgada y con manga corta. La Bitácora de Entrega y Recepción de Historias clínicas CAL-50-D se llena de la siguiente manera: Fecha: Día, mes y año en que se entregan las Historias clínicas al personal de grupos. # de Historias Clínicas Totales: # final de Historias clínicas del día (donación de sangre total) Intervalo de Unidades: # de Plaquetas: CAL-02-B # de Unidad inicial y # de Unidad final. # de donadores de plaquetas del día. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 130 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis Firma de quien entrega: Firma del Médico que entrega al personal de grupos la bitácora. Firma de quien recibe: Firma del personal de grupos que recibe y verifica que se encuentren el # de Historias clínicas que se especifican en la bitácora. Observaciones: Comentarios con respecto a la entrega de la documentación. Nota 1: Se requiere de 2 venas gruesas para que se lleve a cabo la Aféresis. Nota 2: Existen 3 maquinas Separadoras de células sanguíneas TRIMA para realizar el procedimiento de aféresis de plaquetas. *Nota 3: Si las plaquetas se necesitan para una urgencia, se realiza la Aféresis sin tener los resultados de las Pruebas serológicas, pero no se liberan las plaquetas hasta que se tienen los resultados de las mismas. NOTA: ENTREGA DE RESULTADOS DE SEROLOGIA Y COMPROBANTE DE DONACIÓN LO REALIZA EL MÉDICO COORDINADOR O LA ENFERMERA Y SOLICITA QUE FIRMA LA BITACORA DE REGISTRO DE ENTREGA DE RESULTADOS. FECHA: En que recibe los resultados NOMBRE: Del donador de aféresis FIRMA: Del donador de aféresis COMENTARIOS: Comentarios que el donador quiera aportar CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-50 Nivel de Revisión: 04 Fecha: 23 de junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 131 de 16 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Aféresis REGISTROS Control de procedimientos de Aféresis CAL-50-A clínicas se almacenan durante 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B se almacena durante 3 meses después de que se termina el llenado de la última hoja. Recordatorio de cita de aféresis CAL-50-C se anexa a la historia clínica. Bitácora de Entrega y Recepción de Historias clínicas CAL-50-D, se almacena durante 3 meses después de que se termina el llenado de la última hoja. El CAL-50 A y las Historias clínicas se archivan durante 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. Bitácora CAL-50-G De entrega de resultados CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-15 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 39 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de muestras CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 24/09/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-15 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 40 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de muestras DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que al candidato a donar se le realizo la valoración médica (Ver procedimiento CAL-40) y fue considerado apto en el área de toma de muestra sale impresa la etiqueta para la Biometría Hemática. De donde se toma el Nombre completo del donador y se corrobora con el de la Ficha de identificación del candidato y se escribe en la Hoja de toma de muestra F-A-14-26 posteriormente se pega la etiqueta en el tubo para la Biometría. La Etiqueta de identificación es la siguiente: Nombre completo del candidato a donador: Fecha: No. Toma: Nombre de la Prueba: Número de Toma de muestra: La Etiqueta contiene los siguiente datos: Nombre completo del candidato a donador:Apellido paterno, Apellido materno y Nombre (s) del donador. Fecha: Día, mes y año en que se toma la muestra No. de Toma: Número de candidato a donador, es consecutivo y el Químico lo escribe a mano No. de Toma de muestra: Número que se le asigna en Toma de muestra. Fecha: Día, mes y año en que se toma la muestra. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-15 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 41 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de muestras REGISTROS No existen registros asociados a este procedimiento. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 42 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Q.F.B. MARÍA TERESA FLORES CAMACHO Nombre: M en C GUILLERMO ESCAMILLA GUERRERO Nombre: DRA. DINORA V. AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha: 7 DE OCTUBRE DE Fecha: 14 DE OCTUBRE 2009 2009 CAL-02-B Fecha: 14 DE OCTUBRE 2009 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 43 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática CAMBIO REVISIÓN FECHA Se actualiza procedimiento y se cambia nombre por Uso del Equipo Automatizado para Biometrías Hemática, se modifican valores de leucocitos 3 27 de junio de 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 44 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que el candidato a donador ha sido valorado por el personal de enfermería (Ver Procedimiento CAL-30), se calibra el equipo Automatizado de Biometría Hemática (Ver Procedimiento CAL-14), se le toma la muestra de sangre (Ver Procedimiento CAL-43) y posteriormente se realiza el análisis correspondiente de la siguiente manera: El equipo Automatizado de Biometría Hemática se usa para el procesamiento de la biometría hemática para determinar los niveles de plaquetas, hematocrito, hemoglobina, etc. En muestras de sangre. El equipo permite obtener resultados casi inmediatos y con ello decidir si las condiciones de la sangre son las adecuadas para llevar a cabo la donación. El equipo Automatizado de Biometría Hemática se opera de la siguiente manera: TOMA DE MUESTRA CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 45 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática EL QUÍMICO Y/ O LABORATORISTA ENCIENDE EL EQUIPO AUTOMATIZADO DE BIOMETRÍA HEMÁTICA Verificar Niveles de Reactivos, de Bote de Desechos ( RPBI) e Hojas de impresión Introducir Controles Bajo, Normal y Alto verificar que estén dentro del rango especificado y checar la curva de L J Tomar ficha de identificación de Donador ( M-3-0-23) del Buzón de Valoración de Disponentes ubicado en área de recepción Anotar # de registro y nombre en el formato M-3-4-10). Colocar etiqueta emitida por recepción en tubos lila para BH (2), y tubo rojo si es mujer CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 46 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática Llamar al Donador por su Nombre, verificando su identidad con su credencial de elector o documento oficial con fotografía Realizar asepsia de la zona a puncionar, aplicar Torniquete y puncionar en el antebrazo seleccionado Colocar el tubo de Biometría Hemática en el Rack o de forma manual según sea el caso en el equipo de Automatizado de Biometría Anotar resultados de BH en formato M-3-4-10), anexar hoja en la ficha de identificación de donador y se coloca en buzón de valoración Médica Pegar las etiquetas con el # de Unidad emitidas por recepción correspondientes a cada tubo de Donador cuando este ha sido aceptado CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 47 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática ANALIZADOR DE BIOMETRÍA HEMÁTICA SELECCIONAR ADMINISTRADOR ENCENDER ANALIZADOR CHECAR EL BACKGROUND Y METER CONTROLES EN MODO ABIERTO PONER CONTROLES TECLEAR QC (CAL) BAJO MEDIO ALTO RESULTADO IMPRESO CHECAR CON TABLA DE VALORES QUE VIENE EN LAOS CONTROLES SELECCIONAR ICONO MUESTREADO R CON EL NUMERO DE LOTE DE CADA CONTROL INICIAR SI NO SELECCIONAR SISTEMA CERRADO EXPLORADOR PONER MUESTRAS EN RACK DONADOR SELECCIONAR ICONO DE MUESTREADOR AUTOMÁTICO DE MUESTRAS E INICIAR CAL-02-B OBSERVAR PUNTOS EN GRÁFICAS DE L-J Y VERIFICAR QUE ENTREN EN EL RANGO OBSERVAR RESULTADOS EN PANTALLA E IMPRESO VACIAR RESULTADOS AL FORMATO M-3-4-10 ENGRAPAR RESULTADO EN HISTORIA REPETIR PROCESO Y/O VERIFICAR REACTIVOS Y/O CAMBIO DE CONTROLES Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 48 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática La aceptación o rechazo de un donador en cuanto a los valores en la Biometría Hemática se debe de basar en la NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA21993 “Para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines terapéuticos”. INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA DEPARTAMENTO DE BANCO DE SANGRE VALORES MÍNIMOS PARA FLEBOTOMÍA EN DISPONENTES ALOGÉNICOS. Género. Altitud sobre el nivel del mar. Masculino. Hemoglobina. 0 a 1500 m. 1501 o más. 13.5 g/dL. 14.5 g/dL. Femenino Hematocrito. Hemoglobina. Hematocrito. 41 a 56% 44 a 56% 12.5 g/dL. 14.0 g/dL. Leucocitos Plaquetas 4.0 a 12.0 x103 μL. 150 a 450 x103 μL. 38 a 50% 40 a 50% La tabla de valores debe permanecer a la vista del personal que realiza las biometrías hemáticas para su consulta. Autorizado. Dra. Dinora Aguilar Escobar. Jefe del Banco de Sangre, I.N.P. Bibliografía: Proyecto de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-253-SSA1-2009 para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines terapéuticos NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993 para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines terapéuticos. Ruiz Argüelles, Guillermo J. Fundamentos de hematología 4ª edición, México, Editorial Médica Panamericana, 2009. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 49 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática Esta tabla debe encontrarse a la vista del personal que realiza las biometrías hemáticas para que siga dichos criterios. Bibliografía NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993 La información que contiene la hoja de resultados es la siguiente: LEU ERI HB HTC VCM HCM CCMH IDE PLT MPV IDP LIN % MON % GRA % LIN # MON # GRA # Leucocitos totales/microlitros Eritrocitos Hemoglobina Hematocrito Volumen Corpuscular Medio Hemoglobina Corpuscular Medio Concentración Media de Hemoglobina Corpuscular Ancho de Distribución Eritrocitaria (Desviación Estándar Plaquetas Volumen Plaquetario Medio Ancho de Distribución Plaquetaria Porciento de Linfocitos Porciento de Monocitos Porciento de Neutrofilos Linfocitos totales Monocitos totales Número de Neutrofilos Nota 1: Los valores que se toman en cuenta para la donación son Hemoglobina, Hematocrito, Leucocitos y Plaquetas. Los Histogramas de WBC, RBC y PLT son para observar gráficamente los valores de dichas células. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-16 Nivel de Revisión: 4 Fecha: 27 Junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 50 de 9 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Uso del Equipo Automatizado de Biometría Hemática REGISTROS Los Resultados que se observan en la hoja de resultados se reportan en el formato M-3-4-10 y se engrapan en las formas M-3-0-23 se debe guardar durante 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-19 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 9 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 51 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de entrega del comprobante de donación Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: LIC. TS ANA MARIA DORANTES CEH Nombre: DRA. MARAGARAITA LETICIA MEDINA MACÍAS Nombre: DRA. DINORA AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha:7 JUNIO 2011 Fecha: 7 JUNIO 2011 Fecha: 9 JUNIO 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-19 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 9 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 52 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de entrega del comprobante de donación CAMBIO REVISIÓN FECHA Se actualiza formato del comprobante de donación de acuerdo al sistema informático de banco de sangre 1 9/06/2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-19 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 9 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 53 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de entrega del comprobante de donación DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que el donador ha realizado la donación de sangre o aféresis y ha ingerido su refrigerio (Ver Procedimientos CAL-46 y CAL-50) se le solicita anote en la bitácora de Registro de entrada y salida de donadores CAL-20-A su hora de salida y su firma, sobre la misma línea en la que se registró al inicio de la donación, se le entrega su Comprobante de donación, indicándole que venga por sus resultados de Serología y Hematología en 8 días y personalmente (a partir de la fecha en que realizó la donación), con una identificación con fotografía y vigente. El comprobante de donación tiene una vigencia de 3 meses. El formato de Comprobante de Donación de Sangre M-3-0-25 (manual) se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-19 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 9 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 54 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de entrega del comprobante de donación El formato de Comprobante de donación de Sangre M-3-0-25 (manual) se llena de la siguiente manera: Nombre del donador: Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s) del donador. Nombre: Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s) del paciente. Registro número: Número de registro que el INP asigna al paciente. Servicio: Área del INP donde fue solicitada la donación. Fecha: Fecha en que se entrega el comprobante de donación. Nombre: Nombre de la Trabajadora Social. Clave: Clave de la Trabajadora Social. Firma: Firma de la Trabajadora Social. Numero de unidad: Número de unidad asignado en recepción una vez que el donador se considera APTO. Hora: En que se entrega el comprobante. El formato de Comprobante de donación de Sangre que se realiza en el sistema informático del banco de sangre se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-19 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 9 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 55 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de entrega del comprobante de donación CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-19 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 9 junio 2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 56 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de entrega del comprobante de donación El formato de Comprobante de donación de Sangre que se realiza en el sistema informático de banco de sangre contiene lo siguiente: No. Unidad: Número de unidad asignado en recepción una vez que el donador se considera APTO. Fecha y Hora: Fecha y hora en que comprobante de donación. Donador: Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s) del donador. Nombre del paciente: Apellido paterno, Apellido materno, Nombre(s) del paciente. Registro No.: se imprime el Número que el INP asigna al paciente. Nombre: Nombre de la Trabajadora Social que autoriza Clave: Clave de la Trabajadora Social que autoriza Firma: Firma de la Trabajadora Social que autoriza. REGISTROS Comprobante de donación de sangre (manual) M-3-0-25. Comprobante de donación en el sistema informático de banco de sangre M-3-0-25 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 57 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Mireya López Mejía Nombre: Dra. Margarita Medina Macías Nombre: Dra. Dinora V. Aguilar Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: 5 de Enero de 2012 Fecha: 5 de Enero de 2012 Fecha: 5de Enero de 2012 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 58 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes CAMBIO Se homogeniza el término donador en todo el procedimiento en donde se menciona. Se ajusta el diagrama de proceso CAL-02-B REVISIÓN FECHA 06 5 de enero 2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 59 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes DESCRIPCION DEL PROCESO El departamento de Banco de Sangre lleva a cabo el registro diario de los candidatos a donación que acuden a estudiarse, así mismo se encarga de hacer un registro de todos los candidatos para llevar a cabo su rastreabilidad. El día de la donación el candidato a donador presenta el folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre? (Ver procedimiento CAL-11) para continuar de la siguiente manera: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 60 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes El candidato a donador muestra el folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre? y la identificación con fotografía vigente al oficial en turno como pase de entrada al Banco de Sangre y este entrega un portagafete y una ficha con numeración consecutiva, se les solicita portar el gafete durante su permanencia en el Banco de sangre La Trabajadora Social da una plática de inducción y sensibilización sobre los facto res de riesgo y el proceso de donación para todos los candidatos a donadores y sobre la importancia de que la sangre donada sea segura (Ver anexo 2) y/o se les presenta un video informativo. Les proporciona una copia del consentimiento informado para que la lean y analicen su contenido ya que posteriormente si está n de acuerdo lo firmarán o se aclaran dudas al respecto. NO SI TS evalúa la situación del donador para decidir si le programa cita por no estar registrado ese día o lo acepta. Registra en la bitácora de citas CAL11-A en el rubro de observaciones los datos que la bitácora solicita haciendo el señalamiento correspondiente para indicar que fue aceptado para su valoración el mismo día. En caso necesario programa una nueva cita para la donación y la registra en dicha bitácora (esto para efectos de trazabilidad). Si se corrobora la cita pasa al área de recepción para su registro. La recepcionista solicita el portagafete con su identificación oficial y el folleto ¿Cómo solicitar una cita? Para donador de sangre, para registrar sus datos personales en el sistema informático de banco de sangre , se imprime la ficha de identificación que incluye la carta de consentimiento informado (M-3-0-23) , se le solicita al disponente que firme el consentimiento informado si es que está de acuerdo o si tiene dudas se indica que pase a trabajo social . . Posteriormente se le devuelve el gafete con la identificación dentro y se le indica que pase a la sala de espera . Se le indica al donador que espere a que sea llamado para la valoración de venas y somatometría (Ver procedimiento CAL-30). La ficha de identificación se coloca en el Kanban de toma de signos vitales. FIN CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 61 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes FORMATOS RELACIONADOS CON ESTE PROCEDIMIENTO FICHA DE IDENTIFICACIÓN continuación: CAL-02-B DEL DONANTE M-3-0-23 se muestra a Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 62 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes El formato M-3-0-23 se llena de la siguiente manera: Nombre: Nombre, Apellido paterno y Apellido materno del candidato a donar. Parentesco: Relación que existe entre el candidato a donar y el paciente. Edad: Años que tiene el candidato. Fecha de nacimiento: Día, mes y año en que nació el candidato. Sexo: Indicar el sexo del candidato: Masculino (Hombre) y Femenino (Mujer) Estado Civil: Indicar el estado civil del candidato: Soltero (a), Casado (a), Unión Libre, Viudo, Divorciado. Escolaridad: Indicar hasta que grado de escolaridad curso el candidato: Primaria, Secundaria, Preparatoria o equivalente, Universidad, etc. Ocupación: Actividad que realiza el candidato. Domicilio, municipio, código postal: Lugar donde vive actualmente el candidato. Teléfono: Número telefónico donde se pueda localizar al candidato (casa, oficina, caseta telefónica, etc.). Tipo de donación: Se especifica si la donación es: o Familiar: o o o o Altruista: Autóloga: Dirigida: Aféresis: Nombre del paciente: No. de expediente: Donación que se realiza para un paciente familiar (Padre, Madre, Hermano, Primo, Amigo, etc.). Donación que no se realiza para un paciente específico. Donación que se la realiza para si mismo. Donación que se realiza específicamente para un paciente. Donación de plaquetas, Leucocitos, Granulocitos, Plasma y Eritrocitos. Nombre, Apellido paterno y Apellido materno del paciente (este dato y los siguientes los puede encontrar en el folleto ¿Cómo solicitar una cita para donar sangre?) Número que fue asignado para el paciente por el Instituto Nacional de Pediatría (corresponde al # de registro). PLATICA DE INDUCCION AL DONADOR OBJETIVO: Sensibilizar e informar sobre los procesos a los cuales se someterá el disponente y la importancia de la seguridad sanguínea. 1.- Introducción Nombre de la trabajadora social en el Banco de Sangre. Importancia del consentimiento informado. Registro en Bitácora. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 63 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes 2.- Describe los procesos: Descripción del proceso de donación y probable tiempo de estancia. Importancia de la sangre segura. -Documentos necesarios para el registro en el área de recepción. -Importancia de los datos personales para la ficha de identificación. -Valoración por el personal de enfermería. -Toma de muestra por el personal de laboratorio. -Valoración médica. -Extracción de sangre total o procedimiento de aféresis. Importancia de ingerir el lunch posterior a la donación. Entrega de comprobante de donación. Acudir por los resultados de sus estudios. Registro en Bitácora. Video Informativo. La bitácora CAL-20-A se muestra a continuación: BITÁCORA DE REGISTRO DE DONADORES CAL-20-A Nombre Nombre Hora Hora No. Firma Unidad Observaciones Donador Paciente Entrada Salida Efectivos Rechazados Estudiados para Aféresis Procedimientos Aféresis CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 64 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes La bitácora CAL-20-A se llena de la siguiente manera: No. Nombre Donador Número consecutivo en que se van anotando los donadores Nombre del candidato a donación de sangre Nombre Nombre del paciente para el que viene a ser Paciente donador Hora Entrada Hora en que se están registrando Hora en que sale el donador y ya se le entregó Hora Salida comprobante Firma Firma de que recibió comprobante de donación No. de unidad que se asignó siempre que haya Unidad sido donador Observaciones Motivo de rechazo o diferido, etc. Efectivos Número de donadores efectivos que pasaron donar Rechazados Número de donadores que no fueron aceptados para donar Estudiados Cantidad de donadores que se estudiaron para para Aféresis procedimiento de Aféresis Procedimientos Número de procedimientos realizados Aféresis CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 65 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes FORMATO CAL-20-B CONTROL DE REGISTRO DE DONADORES INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRIA BANCO DE SANGRE CONTROL DEL REGISTRO DE DONADORES FECHA:______________ UNIDAD DE INICIO________________ UNIDAD_________ ULTIMA CAL-20-B 1 13 25 37 En este formato el personal de recepción registra: 1. Subraya el número de donador que ya ingresó en el sistema de cómputo 2. Anota si algún donador salió diferido, la causa del mismo, información que permite conocer qué área rechazó al donador. 3. El número de unidad que le asigna a los donadores aceptados. 4. Señala los candidatos a donación que van a ser estudiados para aféresis. 5. Anota los donadores de aféresis y el número de unidad que les corresponde. 6. Así mismo se registra el número de unidad de inicio y el último número de unidad asignado del día. REGISTROS La bitácora CAL-20-A se almacena durante 1 año. La Bitácora CAL-20-B se almacena en el archivo durante 3 meses. M-3-0-23 (Ficha de Identificación) que incluye el Consentimiento informado del candidato a donador, se almacena en archivo activo 5 años y en archivo muerto 5 años, en los donadores aptos (Ver CAL-40 Procedimiento de valoración médica). En los donadores diferidos durante 3 meses. Sistema informático de banco de sangre. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 66 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes ANEXO 1.- MANUAL DEL MANEJO DEL SISTEMA DE CÓMPUTO PARA EL ÁREA DE RECEPCIÓN CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 67 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 68 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 69 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 70 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes + CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-20 Nivel de Revisión: 06 Fecha: 5 de Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 71 de 15 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Registro a Disponentes CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 72 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 73 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento CAMBIO 1. Se incluye procedimiento alterno en sistema de fraccionamiento. 2. Se incluye nuevo formato electrónico en la captura de datos CAL-02-B REVISIÓN FECHA 1 24/02/04 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 74 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que el donador ha sido sangrado (Ver procedimiento CAL-46) se procede de la siguiente manera: El personal de Fraccionamiento checa el estado en que se encuentran cada uno de los equipos que utiliza para realizar el proceso y anota los resultados en la bitacora de estado de los equipos CAL-21-A. Toma del área de sangrado las Bolsas con la ST recolectada al igual que los formatos M-3-0-30 y los lleva al área de fraccionamiento. El Paquete de Bolsas de muestra contiene: 4 Bolsas. Una de las bolsa madre contiene la Sangre Total con 63-65 ml de anticoagulante (ACD), otra bolsa contienen el aditivo (100 ml de SAG-MANITOL o ADSOL), un filtro leucorreductor para concentrado eritrocitario y las dos bolsas satelites vacias En el área de fraccionamiento se anota en la bitácora de fraccionamiento CAL-21-B los siguientes datos: Fecha del día de análisis y Fecha de caducidad de cada concentrado (CE, CP, PCF y GAH cuando se realiza). De cada una de las muestras se anotan en la bitácora CAL-21-B los siguientes datos: # que le corresponde al donador, Peso Bruto del sistema (ST-PB = Bolsa madre con 63-65 ml de anticoagulante + 450 +/- 10% de sangre más la bolsa con el aditivo (100ml), un filtro leucorreductor rara concentrado eritrocitario y las dos bolsas satelites); sexo del donador, Peso Neto (ST-PN = PB menos la suma de la Bolsa Madre con 63-65 ml de anticoagulante con bolsa de aditivo con dos bolsas satelites) y volumen (V-ST= PN/1.054 o1.057) Se pesa en una balanza granataria de 2 platos un paquete de bolsas y su peso se equilibra con otro paquete de bolsas adicionando cualquier objeto de material similar al de las bolsas hasta que el peso sea el mismo. Todo lo que se encuentre en el plato se cada brazo se mete a un vaso de centrífuga. El peso en la centrífuga debe estar equilibrado para que el proceso se realice correctamente. Para introducir las bolsas al vaso de la centrífuga y no sean maltratadas por el mismo movimiento, se acomodan de la siguiente manera: coloque en la mesa las bolsas satelite y la del aditivo, despues las lineas de todas las bolsas, forme un “taco” enrrollando las bolsas con las líneas dentro de ellas (para protección). Para introducirlas en el vaso de la centrifuga: se coloca la bolsa madre con las costuras de la bolsa alineadas con las muescas de sostén del vaso, a continuación meter el “taco” al frente de la bolsa madre. Se revisa que las zonas de conectores para equipos de transfusion estén sin sangre para evitar contaminación (dar pequeños golpes a los pilotos hasta que ya no tengan sangre), se le coloca una pinza en la linea que se uso para la extracción de la sangre y se introduce el vaso en la centrifuga verificando que se oriente la bolsa madre hacia la flecha y el “taco” hacia las paredes de la centrífuga.,el filtro queda orientado hacia la parte externa de la centrifuga soportado por la zona media con la boca del vaso Se procede a centrifugar (Ver procedimiento CAL-23) Una vez que se termina la centrifugación, se saca el vaso de la centrifuga. Las 4 Bolsas se retiran del vaso con sumo cuidado para evitar que el plasma se vuelva a mezclar con el concentrado eritrocitario (CE) Se revisa que la zona para conectores de equipo de transfusion esten limpios y se transfiere el plasma rico en plaquetas(PRP) a una bolsa satelite, se sella en la línea que une a la bolsa madre (sellador dielectrico. (Ver Procedimiento CAL-24) Al finalizar la extracción del plasma se tienen pinzas colocadas en la bolsa que contiene el plasma rico en plaquetas (PRP) y en la bolsa satelite si se considera necesario. Se cuelga en el tripié la bolsa que contiene el aditivo, se rompe el broche de la bolsa de SAG-MANITOL para que pase atraves del filtro (funciona para purgar el filtro). Se invierte el sistema para filtrar el concentrado eritrocitario (con cuidado, evitando que pasen burbujas de aire). Se dejan colgadas en un tripie hasta que se termina el proceso de filtración Cuando se termina de adicionar el aditivo se procede a la quema de las lineas con el TUBE SEALER ACS-152 TERUFLEX. Pimero se sella la linea que sale de la bolsa que contiene el Concentrado Eritrocitario una vez separados, se agita para ayudar a la homogenización del CE y el aditivo y se pesa. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 75 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento El peso bruto del Concentrado Eritrocitario se anota en CAL-21-A en la columna de PB - CE y posteriormente se resta el peso de la bolsa al valor del CE para obtener el PN-CE. El volumen del CE se obtiene dividiendo el valor ( PN / 1.093 ) y se apunta en la bitácora CAL-21-A los resultados, se verifica que se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993 NO SI Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CE, el volumen de CE y la caducidad (acorde al anticoagulante empleados) y esta se pega en la bolsa e introduce en el refrigerador a 4° C cuando el procedimiento es manual . La Bolsa de PRP y la bolsa satelite se pesan para introducir y equilibrar con pesos iguales y no perder la estabilidad que requiere la centrifuga para su uso adecuado (Ver Procedimiento CAL-23). Se acomodan en pares de la siguiente manera para evitar que se rompan en la centrifuga: se coloca en la mesa primero la bolsa satelite vacia y sobre ella la que contiene el plasma, cuando se introducen en los vasos de la centrifuga las lineas deben quedar detrás de las bolsas. Una vez en el vaso se le quitan las pinzas a las dos bolsas. Se procede a desechar la muestra y se registra el motivo en la bitácora CAL-21-A y en la Bitácora de Bajas CAL-21-C. Al termino del centrifugado se sacan los vasos de la centrifuga y se procede a retirar con sumo cuidado las bolsas de PRP. Se transfiere a una bolsa satelite vacia la mayor cantidad de plasma dejando un remanante de 40-60ml para reconstituir el botòn de plaquetas (CP) (con un volumen de 40 a 60 ml) y el PF (volumen de 150-180 ml) en el T-ACE o en su defecto empleando el sistema manual (plancha para desplasmatizar) (Ver Procedimiento CAL-22) El Concentrado Plaquetario se pesa y se anota el Peso Bruto en la bitácora CAL-21-A en la columna PB-CP, en la columna PN-CP el valor del Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-CP el Volumen (V= PN/1.028), los que se anotan en CAL-21-A .Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993. NO SI Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CP, el volumen de CP y la caducidad (5 días) y esta se pega en la bolsa, Se mantienen en el incubador entre 20-24 ° C cuando el procedimiento es manual . Se continua con el pesado e identificación de PF: el PB se anota en la bitácora CAL-21-A en la columna PF-PB, en la de PN-PF el Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-PF el Volumen (V= PN/1.028). Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993. Se procede a desechar la muestra y se registra el motivo en la bitácora CAL-21-A y en la Bitácora de Bajas CAL21-C. NO SI Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras PCF, el volumen de PCF y la caducidad (1 año) y esta se pega en la bolsa e introduce en el CONGELADOR con rangos de -30 a -70 ° C cuando el procedimiento es manual . A los productos obtenidos en este proceso como son: CE, CP y PCF se les debe anotar con un plumon y pegar una etiqueta con su respectivo grupo sanguineo obtenido de la bitácora de serología CAL-26-A cuando el procedimiento es manual. El Personal de fraccionamiento anota en la Bitàcora de producto radiado CAL-21-D la fecha, tipo de producto, # de registro y el auxiliar de laboratorio antes de entregar el producto anota la hora de recepcion y solicita anote su Nombre y firma quien lo recibe y al finalizar la radiaciòn de quien entrega el producto , una vez que el producto se recoge de radiaciòn se coloca en las condiciones especificadas para su posterior identificaciòn. Al finalizar el proceso se registra en CAL-21-A el número de donadores, el número de ST, CP, CE, PCF y GAH obtenidos, el nombre o sello y firma del personal que realizo el fraccionamiento. Se ingresan datos de volumen y fracciones al sistema de computo TESI. CAL-02-B Se procede a desechar la muestra y se registra el motivo en la bitácora CAL-21-A y en la Bitácora de Bajas CAL-21-C. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 76 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento El personal de Fraccionamiento checa el estado en que se encuentran cada uno de los equipos que utiliza para realizar el proceso y anota los resultados en la bitacora de estado de los equipos CAL-21-A. Toma del área de sangrado las Bolsas con la ST recolectada al igual que los formatos M-3-0-30 y los lleva al área de fraccionamiento. El Paquete de Bolsas de muestra contiene: 4 Bolsas. Una de las bolsa madre contiene la Sangre Total con 63-65 ml de anticoagulante (ACD), otra bolsa contienen el aditivo (100 ml de SAG-MANITOL o ADSOL) y las dos bolsas satelites vacias En el área de fraccionamiento se anota en la bitácora de fraccionamiento CAL-21-B los siguientes datos: Fecha del día de análisis y Fecha de caducidad de cada concentrado (CE, CP, PCF y GAH cuando se realiza). De cada una de las muestras se anotan en la bitácora CAL-21-B los siguientes datos: # que le corresponde al donador, Peso Bruto del sistema (ST-PB = Bolsa madre con 63-65 ml de anticoagulante + 450 +/- 10% de sangre más la bolsa con el aditivo (100ml) y las dos bolsas satelites); sexo del donador, Peso Neto (ST-PN = PB menos la suma de la Bolsa Madre con 63-65 ml de anticoagulante con bolsa de aditivo con dos bolsas satelites) y volumen (V-ST= PN/1.054 o1.057) Se pesa en una balanza granataria de 2 platos un paquete de bolsas y su peso se equilibra con otro paquete de bolsas adicionando cualquier objeto de material similar al de las bolsas hasta que el peso sea el mismo. Todo lo que se encuentre en el plato se cada brazo se mete a un vaso de centrífuga. El peso en la centrífuga debe estar equilibrado para que el proceso se realice correctamente. Para introducir las bolsas al vaso de la centrífuga y no sean maltratadas por el mismo movimiento, se acomodan de la siguiente manera: coloque en la mesa las bolsas satelite y la del aditivo, despues las lineas de todas las bolsas, forme un “taco” enrrollando las bolsas con las líneas dentro de ellas (para protección). Para introducirlas en el vaso de la centrifuga: se coloca la bolsa madre con las costuras de la bolsa alineadas con las muescas de sostén del vaso, a continuación meter el “taco” al frente de la bolsa madre. Se revisa que las zonas de conectores para equipos de transfusion estén sin sangre para evitar contaminación (dar pequeños golpes a los pilotos hasta que ya no tengan sangre), se le coloca una pinza en la linea que se uso para la extracción de la sangre y se introduce el vaso en la centrifuga verificando que se oriente la bolsa madre hacia la flecha y el “taco” hacia las paredes de la centrífuga. Se procede a centrifugar (Ver procedimiento CAL-23) Una vez que se termina la centrifugación, se saca el vaso de la centrifuga. Las 4 Bolsas se retiran del vaso con sumo cuidado para evitar que el plasma se vuelva a mezclar con el concentrado eritrocitario (CE) Se revisa que la zona para conectores de equipo de transfusion esten limpios y se transfiere el plasma rico en plaquetas(PRP) a una bolsa satelite, se sella en la línea que une a la bolsa madre (sellador dielectrico. (Ver Procedimiento CAL-44) Al finalizar la extracción del plasma se tienen pinzas colocadas en la bolsa que contiene el plasma rico en plaquetas (PRP) y en la bolsa satelite si se considera necesario. Se cuelga en el tripié la bolsa que contiene el aditivo, se rompe el broche de la bolsa para dejarlo pasar al CE. CAL-02-B Cuando se termina de adicionar el aditivo se procede a la quema de las lineas con el TUBE SEALER ACS-152 TERUFLEX. Pimero se sella la linea que sale de la bolsa que contiene el Concentrado Eritrocitario una vez separados, se agita para ayudar a la homogenización del CE y el aditivo y se pesa. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 77 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento El peso bruto del Concentrado Eritrocitario se anota en CAL-21-B en la columna de PB - CE y posteriormente se resta el peso de la bolsa al valor del CE para obtener el PN-CE. El volumen del CE se obtiene dividiendo el valor ( PN / 1.093 ) y se apunta en la bitácora CAL-21-B los resultados, se verifica que se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993 NO SI Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CE, el volumen de CE y la caducidad (acorde al anticoagulante empleados) y esta se pega en la bolsa e introduce en el refrigerador a 4° C cuando el procedimiento es manual . La Bolsa de PRP y la bolsa satelite se pesan para introducir y equilibrar con pesos iguales y no perder la estabilidad que requiere la centrifuga para su uso adecuado (Ver Procedimiento CAL-23). Se acomodan en pares de la siguiente manera para evitar que se rompan en la centrifuga: se coloca en la mesa primero la bolsa satelite vacia y sobre ella la que contiene el plasma, cuando se introducen en los vasos de la centrifuga las lineas deben quedar detrás de las bolsas. Una vez en el vaso se le quitan las pinzas a las dos bolsas. Al termino del centrifugado se sacan los vasos de la centrifuga y se procede a retirar con sumo cuidado las bolsas de PRP. Se transfiere a una bolsa satelite vacia la mayor cantidad de plasma dejando un remanante de 40-60ml para reconstituir el botòn de plaquetas (CP) (con un volumen de 40 a 60 ml) y el PF (volumen de 150-180 ml) en el T-ACE o en su defecto empleando el sistema manual (plancha para desplasmatizar) (Ver Procedimiento CAL-22) El Concentrado Plaquetario se pesa y se anota el Peso Bruto en la bitácora CAL-21-A en la columna PB-CP, en la columna PN-CP el valor del Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-CP el Volumen (V= PN/1.028), los que se anotan en CAL-21-A .Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993. NO SI Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras CP, el volumen de CP y la caducidad (5 días) y esta se pega en la bolsa, Se mantienen en el incubador entre 20-24 ° C cuando el procedimiento es manual . Se continua con el pesado e identificación de PF: el PB se anota en la bitácora CAL-21-A en la columna PF-PB, en la de PN-PF el Peso Neto (PN= PB-peso bolsa satelite) y en la de V-PF el Volumen (V= PN/1.028). Se verifica que los valores obtenidos se encuentren dentro de los valores especificados en la NOM-003-SSA2-1993. NO SI Se anotan en la etiqueta M-3-0-30 las letras PCF, el volumen de PCF y la caducidad (1 año) y esta se pega en la bolsa e introduce en el CONGELADOR con rangos de -30 a -70 ° C cuando el procedimiento es manual . A los productos obtenidos en este proceso como son: CE, CP y PCF se les debe anotar con un plumon y pegar una etiqueta con su respectivo grupo sanguineo obtenido de la bitácora de serología CAL-26-A cuando el procedimiento es manual. El Personal de fraccionamiento anota en la Bitàcora de producto radiado CAL-21-D la fecha, tipo de producto, # de registro y el auxiliar de laboratorio antes de entregar el producto anota la hora de recepcion y solicita anote su Nombre y firma quien lo recibe y al finalizar la radiaciòn de quien entrega el producto , una vez que el producto se recoge de radiaciòn se coloca en las condiciones especificadas para su posterior identificaciòn. Al finalizar el proceso se registra en CAL-21-A el número de donadores, el número de ST, CP, CE, PCF y GAH obtenidos, el nombre o sello y firma del personal que realizo el fraccionamiento. Se ingresan datos de volumen y fracciones al sistema de computo TESI. CAL-02-B Se procede a desechar la muestra y se registra el motivo en la bitácora CAL-21-A y en la Bitácora de Bajas CAL-21-C. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 78 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento SISTEMA ALTERNO EN BOLSA TERUMO RECOGER DEL AREA DE SANGRADO EL PRODUCTO OBTENIDO (SANGRE TOTAL) Se pesa el Sistem y se ingresa en la Cal 21-B (en sistema de computo) Colocar en las camisas de la centrifuga la ST y balancear por peso Centrifugar 1800 rpm/10 min aproximadamente Separar PG Se pasa el PG a la bolsa de ADSOL y se sella Se conceta el filtro al PG. Por gravedad se filtra y almacena CAL-02-B Separar PRP CENTRIFUGAR 3500 RPM /15 MIN Pesar e ingresar en el SISTEMA SEPARA EL CP. PESAR SEPARA EL PFC. PESAR Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 79 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento El formato de identificación de productos sanguíneos, M-3-0-30 continuación: se muestra a El formato M-3-0-30 se llena de la siguiente manera para cada producto: Nombre del donador: Fecha y hora de caducidad: Producto: Volumen: CAL-02-B Nombre y apellido completo Fecha en que caduca el producto. Tipo de producto: ST, CE, CP, PCF. Cantidad en ml que se obtuvo del producto. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 80 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento La bitácora de estado de los equipos CAL-21-A se muestra a continuación: BITÁCORA DE ESTADO DE LOS EQUIPOS CAL-21-A Fecha: Nombre o sello del Químico de Fraccionamiento Centrifuga DAWONDAMON/IEC DIVISION Temperatura RPM Tiempo Limpieza Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 Temperatura RPM Tiempo Limpieza Centrifuga BECKMAN J6-MC Temperatura RPM Tiempo Limpieza Limpieza del Extractor de plasma Funcionamiento y limpieza de Equipo T-ACE Observaciones La bitácora CAL-21-A se llena de la siguiente manera: Fecha: Día, mes y año de uso del equipo. Nombre o sello del Químico de Fraccionamiento: Nombre(s), Apellido Paterno y Materno Centrifuga DAWON/IEC DIVISION,Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 y Centrifuga BECKMAN J6-MC Anotar una paloma en el caso de que el equipo se encuentre en buen estado antes de su uso y una X en caso contrario. : CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 81 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento Temperatura: Realizar pruebas a diferentes temperaturas y anotar una paloma en el caso de que el equipo se encuentre en buen estado antes de su uso y una X en caso contrario. RPM: Realizar pruebas a diferentes revoluciones por minuto y anotar una paloma en el caso de que el equipo se encuentre en buen estado antes de su uso y una X en caso contrario. Tiempo: Realizar pruebas a diferentes tiempos y anotar una paloma en el caso de que el equipo se encuentre en buen estado antes de su uso y una X en caso contrario. Limpieza del extractor de plasma: Si el equipo se encuentra limpio anotar una paloma y en caso contrario una X. Funcionamiento y limpieza del equipo T-ACE: Si el equipo funciona y se encuentra limpio anotar una paloma y en caso contrario una X. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 82 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento La bitácora de fraccionamiento CAL-21-B se muestra a continuación: BITACORA DE FRACCIONAMIENTO CAL-21-B No. REGIS TRO ST PB-ST PN-ST SEXO CE VOL PB-PG PN-PG PF V PF-PB PF-PN CP PF-V CP-PB CP-PN H. EXTR H. F. delta T. FIL. INI T. FIL. FIN DIF CP-V La bitácora de bajas CAL-21-B debido a su tamaño no se muestra dentro de este procedimiento. La bitácora CAL-21-B se llena de la siguiente manera: No.: # de bitácora de Ingresos y egresos. REGISTRO: # de unidad SEXO: Masculino (M).- Densidad: 1.057 Femenino (F).- Densidad: 1.054 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 83 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento ST-PB: Peso (gr) del sistema de sangrado: la bolsa madre con 63-65 ml de anticoagulante más la sangre de la flebotomia (450 gr +/-10%), la bolsa con el aditivo y las dos bolsas satelites. ST-PN: Es la diferencia de peso entre el ST-PB y la suma de la bolsa madre con 63-65 ml de anticoagulante más la bolsa con 100 ml de aditivo más las dos bolsas satelites ST-V: Es el PN entre la densidad de la sangre (Masculino 1.057 o Femenino 1.054) CE-PB: Peso del Concentrado eritrocitario más la bolsa CE-PN: PB-CE menos el peso de la bolsa contenedora (47gr para el sistema que actualmente empleamos) VOL: PN entre1.093 (densidad del CE) CP: Peso del Concentrado plaquetario más la bolsa. PN: Peso del CP menos 25 que es el peso la bolsa VOL: Es el PN entre 1.028 (densidad del CP) h. extraccion: Hora de extracción H. F. Hora de termino del sangrado CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 84 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento delta Diferencia entre inicio y término del sangrado Tfil ini. Hora de inicio prealmacenaminto Tfil fi Hora de término prealmacenamaiento Dfilt Diferencia entre inicio y término del proceso de filtración NOMBRE O SELLO: Nombre(s), Apellido Paterno, Apellido Materno del Químico de Fraccionamiento que realizo el proceso. FIRMA: Firma del Químico, Laboratorista, Técnico o Auxiliar de laboratorio que realizo el Fraccionamiento de de la filtración la filtración La bitácora de bajas CAL-21-C debido a su tamaño no se muestra dentro de este procedimiento. La bitácora de bajas CAL-21-C se llena de la siguiente manera: Se marca con una paloma o una X el motivo de la baja. Fecha: Registro: Nombre: Vol: Día, mes y año de baja del producto. # de bitácora de ingresos y egresos Apellido Paterno, Apellido materno nombre(s) Volumen desechado en ml o UI. Tipos de productos: ST: CE: CAL-02-B Sangre Total Concentrado eritrocitario y Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 85 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento PF: PE: PSF: CP FERESIS: CP: CR: Plasma fresco. Plasma envejecido Plasma sin factor Concentrado plaquetario obtenido por aféresis abierta o cerrada. Concentrado plaquetario Crioprecipitado CAUSAS DE BAJA 6.7.1 Marcadores Infecciosos: VIH: VBH: VCH: VDRL: CHAG: BRUC: CMV: OTROS: Virus de Inmunodefiencia adquirida Hepatitis B Hepatitis C Sifilis Chagas Brucela Citomegalovirus Estudios específicos solicitados. Otros motivos de baja: 672AUTOEX.: 673 CAD.: 674 Def. conserv.: 675 Def. recolec.: 676 Roto: Autoexclusión Caducidad Deficiente conservación Deficiente recolección Sistema Roto (Bolsa, linea, etc) 677 Cont. erit/Hem.: 678 Lipem.: 679 Cont./Pic.: Contaminación de Eritrocitos y/o Hemólisis. Lipemico Picado (Bolsa, linea, etc) Control de Calidad: Nombre: Utilizado en estudios de Control de calidad Nombre Completo o sello del Químico, laboratorista, técnico o auxiliar de laboratorio que dio de baja el producto CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-21 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 24 Feb 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 86 de 102 ANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Fraccionamiento Nota 1: El uso de guantes para el proceso de fraccionamiento es obligatorio. Nota 2: El funcionamiento y la limpieza de los equipos deben ser revisados por el Químico de Fraccionamiento antes de iniciar el proceso. Nota 3: Se puede utilizar la bolsa vacía para recolectar el PCF o la bolsa que contenía el aditivo, tomando en cuenta la variación de peso entre cada bolsa para los cálculos. Nota 4: La temperatura de los refrigeradores es muy importante para el almacenamiento adecuado de los diferentes tipos de muestras. Nota 5: Se debe tener la calibración y revisión continua de balanzas, del equipo T-ACE y centrifugas. REGISTROS La bitácora CAL-21-A se debe almacenar 1año. La bitácora CAL-21-B se guarda 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. La bitácora CAL-21-C se guarda 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-22 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 87 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del equipo T-ACE Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-22 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 88 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del equipo T-ACE CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 24/09/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-22 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 89 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del equipo T-ACE DESCRIPCION DEL PROCESO Durante el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento CAL-21) se puede realizar la separación utilizando el Extractor de plasma (Ver procedimiento CAL-24) o por medio del Equipo T-ACE la siguiente manera: Verifique en el manometro que se encuentra en la parte de atras baja del equipo que la presion este en 5. (1) Encienda el equipo con el interruptor (2) que se encuentra en la parte de atras del equipo. Oprima MENU en el panel de control (3) para seleccionar el programa que desea Oprima SCROLL (4) para seleccionar el No del programa Oprima STOP (5) y aparece la siguiente pantalla: PROGRAMME 5 PRP phase:05 Colocar la bolsa que contiene el plasma previamente centrifugado en frente de la puerta (7) dentro de dos piezas de metal (6). Colocar la bolsa satelite vacia en la balanza (8) que le corresponde La linea que sale de la bolsa que contiene el plasma se coloca dentro de los clamps marcados con numeros y de acuerdo al diagrama siguiendo siempre la linea marcada. (9) , (10), (11). (marcado en el equipo en color rojo) Cerrar la puerta y el equipo indicara que se puede comenzar y la pantalla sera la siguiente: BREAK CLICK-TIPS AND PUSH “START” Y en el panel de control se observa que el foco del STOP (5) se prende y el del START (12) empieza a parpadear Oprimir START (12) para iniciar y las pantallas que se observan son las siguientes: PROGRAMME 5 P:08 plasma (g): PRP PROGRAMME 5 phase:09 sealing head 1 PRP PROGRAMME 5 phase:09 sealing head 2 PRP PROGRAMME 5 close tubing with plastic clamps and push STOP PRP Escuchara el sonido de alarma y en el panel observara el foco del MENU (3) encendido y el STOP (5) parapadeando y se escucha como sellan los clamps las líneas de plástico e indica que a terminado el procedimiento CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-22 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 90 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del equipo T-ACE Se abren los clamps Se ponen los dedos del lado izquierdo de los clamps 1 y 2 (13) y el sobrante de linea se desecha en el bote correspondiente. Quitar la bolsa que contiene el PCF y despues la que contiene el plasma teniendo cuidado al sacar las lineas de los clamps Equipo T-ACE 4 Obstructores y Cabezales selladores de Alta frecuencia (10 Y 11) Balanzas (8) (13) (7) 1 Pantalla Digital y un Fácil Panel de Control (3), (4) ,(5) y (12) (6) (1) Motor Regulador de Flujo y un 1 Detector (9) 12 Detectores de Presión (2) 1 Lector de Código de Barras Universal CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-22 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 91 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del equipo T-ACE Nota 1: Se requiere el mantenimiento periódico del equipo. Nota 2: Mantener limpia el área de los clamps. Nota 3: Realizar la inspección diaria para conocer el estado del equipo. REGISTROS No existen registros asociados con este procedimiento. CAL-02-B Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-23 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 27 Febrero 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 93 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento general de operación de centrifugas CAMBIO REVISIÓN FECHA Se anexa procedimiento de manejo para la centrifuga SERO - FUGE 1 27/02/04 DESCRIPCION DEL PROCESO Una vez que el donador ha sido sangrado (Ver procedimiento CAL-46) se procede a realizar el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento CAL-21) en el que se realizan varias centrifugaciones de la siguiente manera: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-23 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 27 Febrero 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 94 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento general de operación de centrifugas Centrifuga DAMON/IEC DIVISION La centrifuga DAMON/ IEC DIVISION se prende con el interuptor que indica MAINWER (1). Al encender el equipo se ilumina al mismo tiempo el foco naranja que se encuentra arriba del la palabra anterior y el foco verde donde indica STOPPED (2). Se establecen las RPM (3) y la Temperatura (4) especificas para cada producto a centrifugar (Ver Tabla CAL-23-A) Se abre la tapa de la centrifuga con la palanca que se encuentra en la tapa, la que se giran a la izquierda y se jala hacia arriba. Se sacan los vasos de centrifuga Se introduce la muestra a centrifugar en el vaso (previamente pesada y corroborado que los vasos paralelos tendran el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga). Se introducen los vasos que contienen las muestras a la centrifuga Una vez adentro los 4 vasos de la centrifuga se cierra la puerta y se jala hacia la derecha la palanca. Se pone el tiempo que se requiere según la muestra introducida.(5) Se aprieta START (6) y se puede observar que ha iniciado la centrifugación cuando el foco verde que dice STOPPED (2) se apaga. Pasado el tiempo de la centrifugación se enciende el foco verde STOPPED (2) lo que indica que ha terminado de centrifugar y se pueden sacar los vasos de la centrifuga. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-23 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 27 Febrero 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 95 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento general de operación de centrifugas Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 La centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 se prende con el interuptor que dice MAIN SWITCH ON (encender) y OFF (apagar) (1) , cuando la enciendes se prende el foco naranja que dice MAIN POWER (2) Se establecen las RPM (3) y la Temperatura (4) especificas para cada producto a centrifugar (Ver Tabla CAL-23-A) La tapa de la centrifuga se abre jalando la palanca hacia arriba Se sacan los vasos de centrifuga Se introduce la muestra a centrifugar en el vaso (previamente pesada y corroborado que los vasos paralelos tienen el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga). Se incorporan los vasos que contienen las muestras a la centrifuga Se cierra la puerta de la centrifuga Se pone el Tiempo (5) que se requiere según la muestra introducida. Se aprieta START (6) y se prende el foco naranja (7) que indica el inicio de la centrifugación. Una vez terminada la centrifugación se pueden sacar los vasos de la centrifuga. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-23 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 27 Febrero 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 96 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento general de operación de centrifugas Centrifuga BECKMAN J6-MC La centrifuga BECKMAN J6-MC se prende con el interuptor (1) y se observa al encender que se prende un foco naranja donde dice MAIN POWER (2) Para introducir las condiciones se siguen los siguientes pasos: Para poner las RPM se presiona el boton que dice SPEED (3) teclee el valor y presione ENTER/RECALL (4) para que se fije el dato que metio Para introducir el tiempo se presiona el boton que dice TIME (5) teclee el valor y presione ENTER/RECALL (4) para que se fije el dato que metio Para introducir el valor de la temperatura presione de el boton TEMP (6) teclee el valor y presione ENTER/ RECALL (4) para que se fije el dato que metio. Los valores especificados para cada producto se encuentran en la Tabla CAL-23-A. La tapa de la centrifuga se abre empujando la palanca hacia abajo y jalando la tapa. La tapa de los vasos se abre jalandola hacia arriba y se coloca en la parte interna de la tapa de la centrifuga. Se sacan los vasos de centrifuga Se introduce la muestra a centrifugar en el vaso (previamente pesada y corroborado que los vasos paralelos tengan el mismo peso para conservar la estabilidad de la centrifuga). Se incorporan los vasos que contienen las muestras a la centrifuga Se pone la tapa de los vasos verificando que entre totalmente y posteriomente se cierra la puerta de la centrifuga Se presiona PROGRAM RECALL (7) para verificar que las condiciones. Se presiona START (8) y se prende el foco verde que indica el inicio de la centrifugación. Al termino del tiempo suena la alarma y cambia de START (8) a STOP (9) Se pueden sacar los vaso de la centrifuga. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-23 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 27 Febrero 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 97 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento general de operación de centrifugas SERO - FUGE El personal de banco de sangre recibe los tubos para su separación en tubos 12 x 75mm Se colocan los tubos con volumen similar en cotraposición La SERO FUGE es una centrífuga de velocidad constante (3400 rpm aproximadamente) y con tiempo variable. El timer que se localiza en la parte frontal se gira en dirección a las manecillas del relog y se ubica en el timpo deseado. Al término del tiempo la centrífuga se detiene en automático. Destapar y sacar los tubo. La tabla CAL-23-A se muestra a continuación: Sangre Total Centrifuga DAMON/IEC DIVISION Plaquetas 2200RPM 10MIN 18 C 1500RPM 10MIN 18 C Centrifuga SORVALL General-Purpose RC-3 2200RPM 10MIN 18 C 1500RPM 10MIN 18 C 10MIN 18 C 1500RPM 10MIN 18 C Centrifuga BECKMAN CAL-02-B J6-MC 2200RPM Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-23 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 27 Febrero 2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 98 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento general de operación de centrifugas Nota 1: Se requiere el mantenimiento y la calibraron periódica de las balanzas. Nota 2: Mantener sin golpes y limpios los vasos de la centrifuga. Nota 3: Realizar la inspección diaria de los equipos de trabajo. Nota 4: Las centrifugas DAMON/IEC DIVISION y la SORVALL General-Purpose RC-3 contienen 4 vasos para centrifugar y la BECKMAN J6-MC tiene 6 vasos. REGISTROS No existen registros asociados con este procedimiento CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-24 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 99 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del extractor de plasma Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-24 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 100 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del extractor de plasma CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 0 24/09/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-24 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 101 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del extractor de plasma DESCRIPCION DEL PROCESO Durante el Fraccionamiento de la muestra recolectada (Ver procedimiento CAL-21) se utiliza el extractor de plasma de la siguiente manera: Para realizar la extracción del plasma se requiere introducir la bolsa que contiene el Concentrado eritrocitario y el Plasma previamente separados por la centrifugación en el Extractor de plasma. Para introducir la bolsa se baja la palanca (1) que se encuentra en la tapa (2) que ejercera la presión y se atora en el gancho (3) que se encuentra en la base del extractor, una vez introducida la bolsa se suellta la palanca de la tapa girando el gancho a la derecha y se inicia la presión sobre la bolsa. Se coloca una pinza en la línea que va a la bolsa vacía que esta sola y se rompe el seguro de la linea principal de la bolsa que contiene el producto para dejar salir el plasma. Dejando un poco de plasma aproximadamente 1cm y finalizada la separación se coloca una pinza en la linea que va al plasma y se quita la usada en la toma de muestra (si concidera que sea necesario poner una pinza en la bolsa vacia) Extractor de plasma: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-24 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 24 sep 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 102 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de operación del extractor de plasma REGISTROS No existen registros asociados con este procedimiento CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-51 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 Dic 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 1 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-51 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 Dic 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 2 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA Ninguno 00 03/Dic/03 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-51 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 Dic 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 3 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica DESCRIPCION DEL PROCESO El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva acabo la valoración médica de los pacientes para los que solicitan productos del Banco. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-51 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 Dic 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 4 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica VALORACION CLINICA DEL PACIENTE SOLICITUD A-13-14-07 Se recibe solicitud de producto sanguíneo en ventanilla de sección de Inmunohematología del Banco de Sangre. Se revisa SI ok NO NO SE RECIBE muestra ni solicitud Se recibe muestra y solicitud NO Se notifica la Médico adscrito al Banco de Sangre para su valoración El Médico revisa: Nombre del paciente Servicio Solicitante Cama Fecha de última transfusión Diagnóstico Hb/Hto Peso del paciente Causa de la Urgencia (si existe) Depués de realizar la valoración clínica del paciente, se pone una nota en la solicitud con los cambios a efectuar en: A).- los productos solicitdos B).- dosis SI OK NO SE ACEPTA Se procede a realizar la valoración clínica de acuerdo a los productos sanguíneos solicitados, revisando al paciente así como su expediente clínico SI Se realiza una anotación con la palabra SI en el ángulo superior derecho de la solicitud CAL-02-B Se da la solicitud al personal de laboratorio para la asignación del producto solicitado Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-51 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 Dic 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 5 de 5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para valoración médica REGISTROS Formato A 13-14-07.- se almacena 5 años en el archivo activo y 5 años en archivo muerto CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página: 1 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Dra. Doris Lordméndez Jácome Nombre: Dra. M. Leticia Medina Macías Nombre: Dra. Dinora V. Aguilar Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: 8-Julio-2011 Fecha: 8 Julio 2011 Fecha: 8 de Julio 2011 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 7 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA CAMBIO Se elimina la sección de cuantificación de células tallo (CD 34+) por citometría, ya que esto se describe en otro procedimiento (CAL-66 Citometría). Se agrega el diagrama de flujo de este procedimiento. Se agregan lineamientos incluyendo las características del producto conforme de Aféresis. CAL-02-B REVISIÓN FECHA 1 08-07/11 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 8 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA El donador/paciente acude a su cita se registra en el área de recepción presentando su identificación con fotografía y vigente, si es menor de edad acude con el padre o tutor y se identifica el formato M-3-0-23 con la leyenda CÉLULAS TALLO) La enfermera toma del Kanban de recepción la ficha de identificación y llama al donador para toma de signos vitales, somatometría y toma de muestra de biometría hemática la cual es procesada por el quíco encargado del área de toma de muestra. El médico toma del Kanban de recepción la ficha de identificación con resultado de la biometría hemática y realiza la historia clínica (Ver procedimiento CAL-40). Lo ingresa a la sala de Aféresis y solicita el número de unidad y las etiquetas correspondientes (Ver procedimiento CAL-20) pegando una etiqueta en la hoja de identificación y se procede a realizar la recolecciónm de células tallo. Se procede a instalación y purgado de equipo (cebado) (Ver manual del operador del separador en uso) e inicia el proceso de recolección de células tallo conectando el equipo desechable instalado en el separador al catéter deldonado/paciente con técnica estéril*, registrando la información en la hoja de control de procedimientos de aféresis Bitácora CAL50-A. Se administra gluconato de calcio y solución salina (1gr./10 Kg) en infusión continua en la línea de retorno como profilaxis para prevenir la toxicidad por citrato. Al terminar el proceso de recolección de células tallo se toman signos Vitales y se desconecta el equipo desechable de las líneas del cateter, se cierran las líneas del mismo dejándose heparinizados.( con técnica estéril). Se le proporciona un refrigerio y al terminar se envía al servicio de trasplantes para seguir indicaciones y se programa para una segunda recolección al día siguiente (solo en caso de no haberse obtenido la dosis terapéutica). Al terminar de retirar el equipo la enfermera identifica las unidades del producto obtenidas (2 bolsas), la ficha de identificación. Una de las etiquetas se pegan en la Bitácora CAL -50-a de la hoja que corresponde al procedimiento que se lleva a cabo NOTA: La identificación de las bolsas es provisional hasta la identificación final en Serología . (Ver CAL- 32 ) Se anota en cada una de las bolsas el número de Aferesis (obtenido de la bitacora CAL-50-A), y el volúmen. La enfermera lleva las bolsas del producto al área de Inmuno -Hematología – receptores. Se colocan en el refrigerador correspondiente y se avisa al personal del área . Se entrega al área de Serología la Historia clinica , la ficha de identificación, el talón de autoexclusión, los resultados de la biometría PRE. Al terminar el procedimiento la enfermera registra la información en el sistema informático de banco de sangre . CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 9 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA 1.-PROPOSITO: Obtener células progenitoras de sangre periférica de donadores alogénicos o autólogos en cantidades terapéuticas que garanticen el injerto satisfactorio de las mismas en los pacientes que lo reciban. 2.-ALCANCE: Desde la aceptación del paciente en protocolo de Trasplante de células progenitoras hematopoyéticas de sangre periférica (TCPH-SP), el estudio/valoración del donador alogénico o autólogo en el banco de sangre, control de la movilización de CPH, hasta la recolección de las CPH por medio de procedimientos de aféresis. PERSONAL INVOLUCRADO Y RESPONSABILIDADES. - COORDINADOR DEL COMITÉ DE TRASPLANTE DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS. Informar a miembros del comité sobre los pacientes aceptados para el protocolo de trasplante de células progenitoras hematopoyéticas. Elaborar solicitudes para estudios a realizar en Banco de Sangre (BS). (Ver procedimiento de elaboración de solicitudes de estudios en BS). Administrar estimulo al donador para movilización. Solicitar unidades de CPH-SP para su infusión. - JEFE DEL DEPARTAMENTO DE BANCO DE SANGRE. Enlazar las actividades del BS con la coordinación del comité de TCPH. Coordinar actividades relacionadas a la recolección en el Banco de sangre. Solicitar apoyo para la criopreservación de las CPH-SP si no se dispone del recurso en el BS. - COORDINADOR (A) DE LA UNIDAD DE AFERESIS. Informar y orientar al familiar, sobre el proceso de recolección de CPH-SP y apoyo transfusional peri trasplante Recoger, verificar los resultados de los estudios realizados e informar al jefe del departamento, al coordinador del comité de TMO sobre los resultados de los estudios realizados en BS. Programar los procedimientos de recolección de CPH-SP Supervisar los procedimientos de recolección de CPH-SP. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 10 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA Informar a la jefatura de BS y a la Coordinación del comité de TCPH sobre cualquier eventualidad de los procedimientos. Coordinar con el laboratorio de BS la existencia de componentes sanguíneos dirigidos para los pacientes en caso de utilizarse durante el procedimiento de recolección. JEFE DEL LABORATORIO DEL BANCO DE SANGRE. Coordinar la realización de los estudios de los donadores y/o pacientes en protocolo de TCPH. Proporcionar de manera oportuna, a la coordinación de aféresis los resultados de los estudios de laboratorio realizados a los donadores, pacientes en protocolo de TCPH. Coordinar la realización del control de la movilización en sangre periférica de los donadores (BH, cuantificación de células mononucleares (CMN) y/o CD34+) Coordinar la realización del control de calidad a las cosechas de CPH-SP obtenidas en los procedimientos de recolección. Mantener bajo resguardo las CPH y supervisar la adecuada conservación de las CPHSP obtenidas. Proporcionar las unidades de CPH-SP cuando se lo soliciten. RECEPCION. (Ver CAL-20 Procedimiento de registro a disponentes) Ingresar datos personales del donador en el sistema e imprimir etiquetas para identificación de tubos de muestras de sangre y asignar número de unidad. ENFERMERA. Valora accesos venosos, somatometría y signos vitales de los candidatos a donadores de CHP-SP (Ver CAL- 30 valoración de venas y somatometría). Realiza procedimiento de recolección de células (Ver Manual Operativo del separador celular) QUIMICO Procesar muestra de sangre para BH (Ver CAL-16 Uso del equipo automatizado de Biometría Hemática) y cuantificación de CD34. 3.-DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO. Se realiza en 4 fases que son: 1.- Presentación de pacientes al programa de Trasplante de medula ósea (TMO). Se realizan reuniones quincenales en donde se comentan los casos (Ver Minutas). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 11 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA 2.- Estudio de donador, donador/paciente en banco de sangre (Ver Cal-25 Procedimiento de grupo sanguíneo y anticuerpos y Cal-26 Procedimiento de serología). Valoración en la unidad de aféresis. Se realiza valoración clínica del donador de acuerdo a edad: A) Mayores de edad solicita cita a TMS de BS para estudio como donador habitual. B) Si es menor de edad llena historia clínica de disponentes de sangre, se toman signos vitales y somatometría y se valora la utilización de concentrado eritrocitario para el cebado del equipo desechable del separador celular. Se programa procedimiento de acuerdo a características específicas de cada donador. Se proporciona al padre o tutor o al donador la carta de consentimiento bajo información donde se describen las características del procedimiento: como, donde y quien lo realiza y quien supervisa, preparación (movilización), duración y frecuencia, efectos adversos y posibles complicaciones; y solicita su firma de autorización para la realización del mismo. (Ver Carta de consentimiento bajo información). 3.- Movilización. Inicia 4 días antes del inicio de la recolección con la administración de citocinas, quimioterapia, citocinas/quimioterapia y/o radioterapia, según protocolo de TMO. El donador o paciente/donador acude al servicio de oncología para la administración del estimulo cada 24 h incluyendo los días de recolección de CPH-SP. Simultaneo a la administración del estimulo, se toma una muestra de sangre en tubo de BH para el control de la movilización, de acuerdo a el incremento de la formula blanca (leucocitos totales, % y total de CMN).y se envía al BS el tubo con la muestra de sangre para el conteo de células CD34+. 4.- Recolección de células hematopoyéticas progenitoras de sangre periférica. El donador acude al BS al 4º ó 5º día del inicio de la movilización, presenta la solicitud de BH y CD34+. La recepcionista ingresa la información en el sistema, le proporciona la hoja ficha de identificación de donador (M-3-0-23) la cual ha identificado con la leyenda células tallo, y solicita la firme el donador o el padre /tutor. La recepcionista solicita al familiar o al donador se anote en la Bitácora de Disponentes Atendidos (CAL-46-B), y pase a la sala de espera. La enfermera toma la hoja de identificación del Kanban ubicado en la zona de recepción. Lo llama para tomar signos vitales. Nota: Si no tenemos resultado de CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 12 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA biometría hemática y cuenta de CD34 previas, se tomarán en ese momento las muestras correspondientes. Pide al donador o al familiar que lleve al menor de edad que acudan a tomar un desayuno ligero. El químico procesa la citometría hemática y entrega el resultado a la enfermera y/o médico y posteriormente se realiza la cuantificación de células CD34+. El médico encargado del procedimiento valora los resultados de la biometría hemática y de la cuantificación de CD34+ si se tienen disponibles del día anterior y decide la realización o no del procedimiento de acuerdo a lo programado de acuerdo a las características clínicas del donador valoradas previamente. La enfermera procede instalar el equipo desechable en el separador celular según las instrucciones del Manual del operador. El médico supervisa permanentemente el procedimiento, las condiciones clínicas del paciente y da instrucciones si se presentan problemas técnicos y/o clínicos relacionados con el paciente. Nota: La conección y desconección de las líneas del catéter al equipo desechable deberá realzarse utilizando técnicas de asepsia y antisepsia y se tomarán las muestras pre y post procedimiento necesarias para el control del mismo (biometría hemática, hemocultivo, tiempos de coagulación, etc.). Al finalizar el procedimiento la enfermera o el médico solicita al área de recepción las etiquetas de identificación de unidades y documentación, y las pega en las bolsas de recolección de CPH, plasma, bitácora, historia clínica y hoja de identificación. La enfermera entrega el o los productos obtenidos al área de inmunohematología para su almacenamiento hasta que se soliciten para su infusión. LINEAMIENTOS O POLÍTICAS: 1.- La información adicional que se anexa a la hoja de identificación del donador no deberá eliminarse (desprenderse o borrarse). 2.- La obtención de componentes celulares por métodos de aféresis deberán tener como propósito cubrir la deficiencia específica de dicho componente en un paciente. 3.- Los procedimientos de aféresis para la obtención células progenitoras hematopoyéticas deberá estar justificada por una solicitud de interconsulta del servicio y el médico del servicio responsable del tratamiento del paciente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 13 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA 4.- Los donadores de células hematopoyéticas obtenidas por aféresis deberán cubrir los requisitos normativos: Accesos venosos adecuados (preferentemente catéter venoso central) Estudios de inmunohematología (grupo ABO, Rh), antígenos eritrocitarios, aglutininas en caso específicos (incompatibiloidad mayor) Estudios de serología del donador: VIH, HB, AgsHB, Brucella, Chagas, CMV IgM. Consentimiento informado. Control de movilización con biometría hemática y/o cuantificación de células CD34+. Células progenitoras ≥ 50 mL ≥ 2x106/kg de peso de receptor de células CD34+ Hematopoyéticas (Alogénico) ≥1.5x106/Kg de peso receptor de células CD34+ (Autólogo) Para el producto final: Integridad de los contenedores. Identificación de la unidad con: Nombre del donador Número de unidad/Número de aféresis. Fecha de obtención. Tipo de componente. Volumen. 5.- El producto final que no cumpla con los criterios de conformidad deberá ser evaluado conjuntamente con el personal médico y de laboratorio de banco de sangre y el coordinador de trasplantes, en base a los siguientes criterios: Cuando la dosis no sea la óptima se considerara la posibilidad de la realización de otro procedimiento para poder alcanzar la dosis sumando la dosis anterior. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 14 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA DESCRIPCIÓN DEL LLENADO DE LA BITÁCORA CAL-50-A (Control de procedimientos de Aféresis) Una vez firmada la carta de consentimiento bajo información ya sea para disposición Alogénica o Autóloga (Ver Anexo 1 y Anexo 2) se procede a realizar la recolección de células progenitoras hematopoyéticas de sangre periférica. Registrándose la información en la bitácora CAL 50 A (Control de procedimientos de aféresis), que contiene la siguiente información: HOJA DE CONTROL DE PROCEDIMIENTOS DE AFÉRESIS M-3-4-06 a No. De Aféresis: Con la letra A para identificar que es procedimiento de aféresis, el número consecutivo del procedimiento, se inicia el No. 1 con el primer procedimiento del año y finaliza el 31 de diciembre, y el año en curso. No. De Unidad: Asignado por el sistema informático de banco de sangre en forma consecutiva. Procedimiento: Según el componente(s) que se va(n) a obtener. Fecha: Día, mes y año en que se realiza la recolección. Equipo: Elegir las opciones (Abierto o Cerrado). Flujo: Establecer si es continuo o discontinuo Máquina: Se refiere al separador que se utiliza. Cámaras: NA (No aplica) I. DATOS DEL RECEPTOR. Nombre: Apellido paterno, apellido materno y nombre (s) Registro: No. de registro otorgado por el INP Cama: En caso de que el paciente se encuentre hospitalizado, se anotará el número de cama correspondiente. Grupo sanguíneo: Se anotará solo si se tiene disponible. Edad: En años Sexo: Se refiere a género femenino ó masculino. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 15 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA II. DATOS DEL DONADOR Nombre: Apellido paterno, Apellido materno y Nombre(s) del donador. Edad: # de años que tiene el donador al momento de realizar el procedimiento. Grupo sanguíneo: Tipo de sangre del donador Parentesco: Relación que existe entre el paciente y el donador (Amistad, familiar, etc). Peso: En kilogramos. SEROLOGIA: Se refiere a los resultados de los siguientes exámenes: - H.I.V. - H.C.V. - AgS HB - R.P.R. - BRUCELLA - OTROS Nombre y firma del químico que realizó las pruebas: El químico anota su nombre y firma. III. DATOS DEL PROCEDIMIENTO Hora de inicio: Hora en que se inicio el procedimiento. Hora de terminación: Hora en que se finalizó el procedimiento. Nombre y Firma de la enfermera que realiza el procedimiento Otros datos que se registran en la bitácora CAL-50-A anotados por la enfermera durante el procedimiento: VELOCIDAD DE VELOCIDAD DE SANGRE(ml/min) PLASMA TIEMPO ** * (ml/min)* VOLUMEN DE SANGRE (ml) * VOLUMEN DE PLASMA (ml)* SIGNOS VITALES Y OBSERVACIONES *** ACD (ml)** PRE CAL-02-B TRANS POST Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 16 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA *. Obtenidos directamente de la máquina. **. Al momento de llenar el registro. ***. Se registran antes, durante y después del procedimiento. Volumen procesado de sangre: Cantidad de sangre que se proceso al finalizar el procedimiento, obteniendo este dato directamente de la máquina. Anticoagulante: Cantidad de anticoagulante que se utilizo durante el procedimiento. Solución salina: Cantidad de solución salina que se utilizo durante el procedimiento IV. RESULTADOS Volumen de la cosecha: Dato que es obtenido por la enfermera al pesar cada bolsa que contiene el producto y restarle el peso de la bolsa vacía (40 ml) C.P. Estimados: El cálculo que se realiza para programar la plaquetaféresis. DATOS DE BIOMETRIA HEMATICA MUESTRA PRE MUESTRA POST MUESTRA DE LA COSECHA COSECHA FINAL PLAQUETAS LINFOCITOS GRANULOCITOS HEMATOCRITO OTROS Nombre y firma del médico que supervisó el procedimiento: El médico anota su nombre y firma. M-3-4-06 b Reacciones adversas durante el procedimiento: (RAP) Presentó RAP: Se anota afirmativa o negativamente CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 17 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA Tipo de RAP: Se anota el tipo de reacción presentada. Medidas Tomadas: Se anota el manejo que se dio a la reacción. Observaciones: Se anota algún comentario adicional si es que existiera. Fallas técnicas durante el procedimiento: (FTP) Tipo de falla: Se anota las características de la falla técnica que hubo durante el procedimiento. Medidas tomadas: Se anotas las acciones tomadas para tratar de resolver la falla. Observaciones: Se anota algún comentario adicional si es que existiera. ESPACIO LIBRE PARA ADHERIR ETIQUETA DEL EQUIPO. ANEXO 1: CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION (Autólogo) INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA DEPARTAMENTO BANCO DE SANGRE PROGRAMA DE RECOLECCIÓN DE CELULAS PROGENITORAS HEMATOPOYETICAS (Autólogo) CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION. México, D.F A día mes año- Yo NOMBRE DEL PADRE O TUTOR acepto que mi hijo (a) NOMBRE Y APELLIDOS DEL PACIENTE de edad en años y meses de edad, con número de registro ---------done células hematopoyéticas progenitoras obtenidas de sangre periférica a través del método de aféresis, para que le sean transfundidas, ya que se encuentra en el protocolo de trasplante de células hematopoyéticas progenitoras y quién tiene el diagnóstico -------------------------------------------------. Se me explicó que el procedimiento de aféresis consiste en la extracción de sangre del organismo a través de un equipo plástico, desechable y de uso único. Inmediatamente al salir la sangre del organismo es mezclada con un anticoagulante con la finalidad de que no se coagule. Por medio de un equipo de centrifugación integrado a la máquina que separará de la sangre las células hematopoyéticas progenitoras con una pequeña cantidad de sangre y plasma que le sirve para su conservación, el resto de la sangre ya mezclada con el anticoagulante es retornada a su organismo. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 18 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA Todo esto requiere que antes del procedimiento haya cubierto varios requisitos que son: a) Acudir a una valoración de su estado de salud actual, realizada por el médico tratante, y los servicios interconsultados por el mismo, incluyendo banco de sangre En el banco de sangre le realizaran: estudios para conocer su grupo sanguíneo ABO Y Rh, antígenos eritrocitarios, y todas las pruebas que se consideren necesarias para evitar o disminuir posibles complicaciones inmunohematológicas como consecuencia de transfusiones previas y/o secundarias al trasplante. b) Pruebas para la detección de infecciones que puedan trasmitirse por medio de la sangre, y que de estar presente en su organismo de manera latente puedan reactivarse como consecuencia de la baja de defensas que presentará durante el trasplante y que garanticen su seguridad, la del personal que trabaja con su sangre y de la persona (s) que se encuentra (n) atendiéndola(o). c) Valoración de sus signos vitales. La aplicación de un medicamento (factor estimulante de colonias) durante 4-6 días previos a la realización del procedimiento para la obtención de las células hematopoyéticas progenitoras, con el propósito de movilizarlas de la medula ósea hacia la periferia y puedan ser separadas de esta mediante el procedimiento en cantidad suficiente para alcanzar la cantidad necesaria (dosis terapéutica). Puede presentar efectos adversos a la administración del medicamento (factor estimulante de colonias) como seria: dolor óseo (huesos), escalofríos, elevación leve de la temperatura corporal (menor de 38 grados C) dolor de cabeza (cefalea) los cuales son leves y ceden generalmente con la administración de medicamentos que calmen el dolor o controlen la fiebre, si a pesar de estos persisten las molestias, se considerara la suspensión del procedimiento. d) Toma de muestras para la realización de estudios de laboratorio (biometría hemática) que se consideren necesarios para valoración de la respuesta a la aplicación del que sirvió para movilizar las células. Pueden ser necesarios 2 o más procedimientos de recolección de células hematopoyéticas para alcanzar la dosis que mí paciente requiera. Se me informó también que: - El procedimiento será realizado por una enfermera especialista en el manejo de la máquina y por un médico que supervisará la realización del mismo. Para asegurar una buena tolerancia del procedimiento tomarán constantemente sus signos vitales: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 19 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria, tensión arterial, temperatura y llevaran un registro de la Cantidad de sangre procesada, la cantidad de anticoagulante administrado y el tiempo en que se realiza. Puede presentar efectos adversos como son: dolor y/o moretones al momento o después de las punciones y en el sitio de las mismas, por efecto del anticoagulante las molestias pueden ser: adormecimiento de los labios u hormigueo en diferentes partes del cuerpo, ocasionalmente mareos, vómito, mismas que serán atendidas de manera inmediata por el médico supervisor del Banco de sangre, quién dará las instrucciones pertinentes para corregir estos efectos o suspender el procedimiento si considera conveniente por ser de riesgo para el paciente continuarlo. Existe el riesgo excepcional de que la máquina deje de funcionar por una falla de la corriente eléctrica, esto no condiciona riesgo ya que el equipo cuenta con dispositivos de seguridad para estas situaciones y que son implementadas por el personal al cargo de las mismas. Existe un riesgo mínimo (1:10,000) de muerte secundaria al procedimiento. Se me recomendó que después del procedimiento debo mantener a mi paciente en reposo relativo y no realizar actividades intensas. He recibido información amplia sobre el procedimiento de donación de células hematopoyéticas progenitoras de sangre periférica, con respuesta a todas mis preguntas y estoy satisfecho(a) con la explicación. Por ello acepto que mi hija(o) done las células hematopoyéticas progenitoras por el método de aféresis, enterado de los beneficios y de los riesgos de la realización de este procedimiento, liberando de toda responsabilidad al personal médico y paramédico del Banco de Sangre. ATENTAMENTE Nombre Madre o tutor del paciente) ----------------------------------- Firma___________________ Coordinador (a) de Aféresis---------------------------------------------Firma_____________________ Responsable del Banco de Sangre------------------------------------------ Firma____________________ Testigo--------------------------------------------------------------------------Firma___________________ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 20 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA ANEXO 2: CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION (Alogénico) INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA DEPARTAMENTO BANCO DE SANGRE PROGRAMA DE RECOLECCIÓN DE CELULAS HEMATOPOYETICAS PROGENITORAS. Alogénico CARTA DE CONSENTIMIENTO BAJO INFORMACION. México, D.F A día de mes de año Yo NOMBRE DEL DONADOR (A) acepto donar células hematopoyéticas progenitoras obtenidas de sangre periférica para que mi parentesco NOMBRE Y APELLIDOS DEL PACIENTE de 1edad en año y meses, (del paciente) con número de registro ------(del paciente) a través del método de aféresis, para que le sean transfundidas, ya que se encuentra en el protocolo de trasplante de células hematopoyéticas progenitoras y quién tiene el diagnóstico de diagnostico del paciente. Se me explicó que el procedimiento de aféresis consiste en la extracción de sangre del organismo a través de un equipo plástico, desechable y de uso único. Inmediatamente al salir la sangre del organismo es mezclada con un anticoagulante con la finalidad de que no se coagule. Por medio de un equipo de centrifugación integrado a la máquina que separará de la sangre las células hematopoyéticas progenitoras con una pequeña cantidad de sangre y plasma que le sirve para su conservación, el resto de la sangre ya mezclada con el anticoagulante es retornada a mi organismo. Todo esto requiere que antes del procedimiento haya cubierto varios requisitos que son: Acudir a una valoración de mi estado de salud actual, realizada por el médico tratante, y los servicios interconsultados por el mismo, incluyendo banco de sangre En el banco de sangre me realizaron: a) estudios para conocer mi grupo sanguíneo ABO Y Rh, antígenos eritrocitarios, y todas las pruebas que se consideren necesarias para evitar o disminuir posibles CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 21 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA complicaciones inmunohematológicas como consecuencia de transfusiones previas y/o secundarias al trasplante. b) Pruebas para la detección de infecciones que puedan trasmitirse por medio de la sangre, y que de estar presente en mi organismo de manera latente puedan reactivarse como consecuencia de la baja de defensas que presentará durante el trasplante y que garanticen su seguridad, la del personal que trabaja con su sangre y de la persona (s) que se encuentra (n) atendiéndola(o). Valoración de sus signos vitales. La aplicación de un medicamento (factor estimulante de colonias) durante 4-6 días previos a la realización del procedimiento para la obtención de las células hematopoyéticas progenitoras, con el propósito de movilizarlas de la medula ósea hacia la periferia y puedan ser separadas de esta mediante el procedimiento en cantidad suficiente para alcanzar la cantidad necesaria (dosis terapéutica). Puede presentar efectos adversos a la administración del medicamento como seria: dolor óseo (huesos), escalofríos, elevación leve de la temperatura corporal (menor de 38 grados C) dolor de cabeza (cefalea) los cuales son leves y ceden generalmente con la administración de medicamentos que calmen el dolor o controlen la fiebre, si a pesar de estos persisten las molestias, se considerara la suspensión del procedimiento. - Toma de muestras para la realización de estudios de laboratorio (biometría hemática) que se consideren necesarios para valoración de la respuesta a la aplicación del que sirvió para movilizar las células. Pueden ser necesarios 2 o más procedimientos de recolección de células hematopoyéticas para alcanzar la dosis que el paciente requiere. Se me informó también que: - El procedimiento será supervisado por una enfermera especialista en el manejo de la máquina y por un médico que supervisará la realización del mismo. Para asegurar una buena tolerancia del procedimiento tomarán constantemente mis signos vitales: frecuencia cardiaca, frecuencia respiratoria, tensión arterial, temperatura y llevaran un registro de la cantidad de sangre procesada, la cantidad de anticoagulante administrado y el tiempo en que se realiza. Puedo presentar efectos adversos como son: dolor y/o moretones al momento o después de las punciones y en el sitio de las mismas, por efecto del anticoagulante las molestias pueden ser: adormecimiento de los labios u hormigueo en diferentes partes del cuerpo, ocasionalmente mareos, vómito, mismas que serán atendidas de manera inmediata por el médico supervisor de Banco de Sangre, quien dará las CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 22 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA instrucciones pertinentes para corregir estos efectos o suspender el procedimiento si considera conveniente por ser de riesgo para el paciente continuarlo. Existe el riesgo excepcional de que la máquina deje de funcionar por una falla de la corriente eléctrica, esto no condiciona riesgo ya que el equipo cuenta con dispositivos de seguridad para estas situaciones y que son implementadas por el personal al cargo de las mismas. Existe un riesgo mínimo (1:10,000) de muerte secundaria al procedimiento. Se me recomendó que después del procedimiento debo mantenerme en reposo relativo y no realizar actividades intensas. He recibido información amplia sobre el procedimiento de donación de células hematopoyéticas progenitoras de sangre periférica, con respuesta a todas mis preguntas y estoy satisfecho(a) con la explicación. Por ello acepto donar las células hematopoyéticas progenitoras por el método de aféresis, enterado de los beneficios y de los riesgos de la realización de este procedimiento, liberando de toda responsabilidad al personal médico y paramédico del Banco de Sangre. ATENTAMENTE Nombre Madre o tutor del paciente) ----------------------------------- Firma___________________ Coordinador (a) de Aféresis---------------------------------------------Firma_____________________ Responsable del Banco de Sangre------------------------------------------ Firma____________________ Testigo--------------------------------------------------------------------------Firma___________________ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-52 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 08-Julio-2011 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 23 de 18 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE CÉLULAS PROGENITORAS HEMATOPOYÉTICAS DE SANGRE PERIFÉRICA REGISTROS Bitácora de Aféresis CAL-50-A Bitácora de Cita de Aféresis CAL-50-B El CAL-50 A y las Historias clínicas se almacenan durante 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-55 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 24 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-55 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 25 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA NINGUNO 00 3-mayo-2004 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-55 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 26 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo DESCRIPCION DEL PROCESO El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo estudios especiales como el de Coombs Directo COOMBS DIRECTO TÉCNICA DIANAGEL D.C. Scan Este procedimiento se realiza cuando el Médico lo solicita por medio del formato A-13-14-07 señalando el Coombs Directo, o cuando el Médico del banco de sangre o el personal mismo lo considera adecuado por el dignóstico del paciente. Se realiza la centrifugación del tubo que contiene la muestra del paciente para separar el Paquete eritrocitario. Se recomienda lavarlo una vez. Preparar una suspensión de hematíes al 1 % (1 mililitro de Diana Sol 2 más 10 microlitros del paquete eritrocitario). De esta suspensión de eritrocitos se agregan 50 microlitros a cada uno de los pozos de la tarjeta, que deberá estar previamente identificada con los datos del paciente. Centrifugar en la centrífuga Dianafuge. Leer e interpretar los resultados. NEGATIVO Registrar resultado en el Formato A-13-14-07, y en Bitácora CAL-31-B de CAL-02-B Estudios Especiales POSITIVO Identificar si es por complemento o por una IgG. Se requiere titularlo para poder reportarlo en el Formato A-13-14-07 y en la libreta de Estudios Especiales Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-55 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 27 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo REGISTROS FORMATO.- A-13-14-07 Bitácora.- CAL-31-B.-De Estudios Especiales CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-56 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 28 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-56 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 29 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA NINGUNO 00 3-mayo-2004 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-56 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 30 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo DESCRIPCION DEL PROCESO El Laboratorio del Banco de Sangre lleva a cabo un protocolo especial para la técnica de Coombs en Neonatos. Determinación de antígenos del sistema ABO, Rh y prueba de Coombs Directo en recién nacidos con el DianaGel Neonatal 2D. Este procedimiento se realiza cuando el Médico lo solicita por medio del formato A-13-14-07 señalando el Coombs Directo, o cuando el Médico del banco de sangre o el personal mismo lo considera adecuado por el diagnostico del paciente. Se realiza la centrifugación del tubo que contiene la muestra del paciente para separar el Paquete eritrocitario. Se recomienda lavarlo una vez. Preparar una suspensión de hematíes al 1 % (1 mililitro de Diana Sol 2 más 10 microlitros del paquete eritrocitario). De esta suspensión de eritrocitos se agregan 50 microlitros a cada uno de los pozos de la tarjeta, que deberá estar previamente identificada con los datos del paciente. Centrifugar en la centrífuga Dianafuge. Leer e interpretar los resultados. NEGATIVO Registrar resultado en la Formato A-13-14-07, y Bitácora CAL-56-A de Estudios Especiales CAL-02-B POSITIVO Identificar si es por complemento o por una IgG. Se requiere titularlo, y realizar un eluido para identificar el posible anticuerpo pegado a los eritrocitos y así poderlo reportaren el formato A-13-14-07 y en la libreta de Estudios Especiales Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-56 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 3-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 31 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Coombs Directo REGISTROS FORMATO A-13-14-07 Bitácora CAL-56-A.- De Estudios Especiales CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-57 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 10-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 32 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica para Anemia Hemolítica en el Recién Nacido Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-57 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 10-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 33 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica para Anemia Hemolítica en el Recién Nacido CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA NINGUNO 00 10-mayo-2004 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-57 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 10-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 34 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica para Anemia Hemolítica en el Recién Nacido DESCRIPCION DEL PROCESO ENFERMEDAD HEMOLIÍTICA DEL RECIEN NACIDO (EHRN) La EHRN es un proceso inmunológico que afecta al feto y al recién nacido, y se caracteriza por un cuadro de anemia hemolítica inmune debido a la incompatibilidad entre el grupo sanguíneo de la madre y el de su descendiente. Clasificación de la EHRN según la causa desencadenante: 1. EHRN debido a sensibilización a otros antígenos del sistema Rh-Hr: D, C, E, c, e. 2. EHRN por incompatibilidad con el sistema ABO. 3. EHRN causada por la sensibilización a otros antígenos: Kell, Duffy, Kidd, Diego, etc. ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIEN NACIDO EXAMENES DE LABORATORIO DEL BANCO DE SANGRE PARA SU DETERMINACIÓN RECIEN NACIDO (RN) Determinación del Sistema ABO y Rh-Hr (fenotipos completos del sistema). Coombs Directo (CD) RN: grupo A, B, AB y Rh positivo. CD positivo o negativo. Madre: O positivo, RAI negativo. Probable incompatibilidad por Sistema ABO Titular el CD del RN si es positivo. Realizar un eluido para Sistema ABO. CAL-02-B MADRE Determinación del Sistema ABO y Rh-Hr (fenotipos completos del sistema). Rastreo de Anticuerpos Irregulares (RAI) RN: grupo A, B, AB, O, y Rh positivo CD positivo o negativo. Madre: O negativo, RAI positivo o negativo. Probable incompatibilidad por sistema Rh-Hr Titular el CD del niño si es positivo. Realizar un eluido para Ac irregulares fuera de Sistema ABO. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-57 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 10-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 35 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica para Anemia Hemolítica en el Recién Nacido En caso de que se requiera exanguinotransfusión el RN seleccionar la sangre de acuerdo con la tabla CAL-57-A REGISTROS No existen registros CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-58 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 24-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 36 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Prueba Rápida para Coombs Directo Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-58 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 24-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 37 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Prueba Rápida para Coombs Directo CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA NINGUNO 00 24-mayo-2004 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-58 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 24-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 38 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Prueba Rápida para Coombs Directo DESCRIPCION DEL PROCESO El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo pruebas rápidas en tubo para Coombs Directo, la cual está indicada en: a. Todos los mcasos de anemia o enfermedad hemolítica del recién nacido. b. Estudios de la sangre de pacientes con anemia hemolítica. c. Reacciones hemolíticas transfusionales. PRUEBA RÁPIDA EN TUBO La muestra de los eritrocitos del paciente en estudio, deberá obtenerse en un tubo de Biometría Hemática Se centrifuga la muestra y se separan los eritrocitos. En un tubo de ensayo se vierten aproximadamente 0.5 ml de eritrocitos, o una cantidad menor, dependiendo del tamaño de la muestra; se lavan 3 veces con solución salina fisiológica. Un minuto a 3000 rpm. Después de cada lavada se retira con cuidado la solución salina fisiológica. Se prepara una suspensión aproximadamente al 2% en salina fisiológica de los eritrocitos lavados. En un tubo de ensayo se coloca una gota de suero Anti- Humano (Coombs), poliespecífico (IgG-C3d), y se le añade una gota de la suspensión al 2% de las células lavadas Centrifugar durante 20 segundos a 3000 rpm (velocidad máxima de una Sero- Fuge). Agitar el tubo suavemente para suspender el concentrado de eritrocitos y observar perfectamente si hay presencia de aglutinación. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-58 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 24-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 39 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Prueba Rápida para Coombs Directo Una prueba negativa se reconocerá por la suspensión homogénea de todas las células. Una prueba positiva mostrará eritrocitos aglutinados visibles macroscópicamente. Registrar resultados en el Formato A-13-14-07, (ver forma de llenado en proc. CAL-42) Y Bitácora CAL-31-A de Estudios Especiales (Ver forma de llenado en el procedimiento CAL-31) REGISTROS Formato A-13-14-07.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. Bitácora CAL-31-A.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-59 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 18-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 40 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica DE Elución por Calentamiento Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-59 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 18-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 41 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Elución por Calentamiento CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA NINGUNO 00 18-mayo-2004 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-59 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 18-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 42 de 3 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Técnica de Elución por Calentamiento DESCRIPCION DEL PROCESO El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo la técnica de ELUCIÓN POR CALENTAMIENTO (Landsteiner y Miller) 1. Lavar el volumen de células con un exceso de salina por 6 veces. Después del último lavado, conservar una alícuota de salina para investigar anticuerpos libres. Si persisten, significa que los lavados no han sido suficientes y deben practicarse lavados adicionales hasta que el residuo de salina no muestre anticuerpos. 2. Después del último lavado, empaquetar bien las células y agregarle igual volumen de albúmina bovina al 6%. La cual se prepara mezclando 2 ml de albúmina al 30% para 8 ml de salina, o 3 ml de albúmina al 22% para 8 ml de salina. Mezclar bien. 3. Llevar al baño María a 56ºC durante 10 minutos, mezclando periódicamente. 4. Centrifugar a altas velocidades por 5 minutos. 5. Separar el sobrante rosado en un tubo aparte e identificado adecuadamente. Este método ofrece buenos resultados para eluir anticuerpos anti – A y anti – B, pero no es recomendable para otros anticuerpos. Registrar el resultado en el Formato A-13-14-07, Ver forma de llenado en proc. CAL-42) y Bitácora CAL-31-A de Estudios Especiales (Ver forma de llenado en el procedimiento, CAL-31) REGISTROS Formato A-13-14-07.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. Bitácora CAL-31-A.- Se almacena en el Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-60 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 25-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 43 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo para Titular Eritrocitos Problema Positivos. Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-60 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 25-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 44 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo para Titular Eritrocitos Problema Positivos. CAL-02-B CAMBIO REVISIÓN FECHA NINGUNO 00 25-mayo-2004 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-60 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 25-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 45 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo para Titular Eritrocitos Problema Positivos. DESCRIPCION DEL PROCESO El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo la Prueba de Coombs para titular eritrocitos problemas positivos. PRUEBA DE COOMBS DIRECTO PARA TITULAR ERIOTROCITOS PROBLEMA POSITIVOS. MATERIAL.1. Sangre problema anticoagulada con EDTA (eritrocitos problema) 2. Eritrocitos sensibilizados con IgG (testigo positivo de Coombs) 3. Eritrocitos no sensibilizados (testigo negativo de Coombs) 4. Suero de Coombs poliespecífico IgG-C3d Preparación de los eritrocitos.a. Se requieren 3 tubos de 12 X 75 mm, en uno de ellos se coloca 1 gota de eritrocitos problema, en otro 1 gota de testigo positivo de Coombs, y en el tercero 1 gota de testigo negativo de Coombs. b. Lávelos con Solución Salina Fisiológica (SSF) tres veces, llenando el tubo. c. Resuspéndalos al 2.5% con SSF (25 microlitros de eritrocitos en 1 ml de SSF) Preparación de la dilución del suero de Coombs.1. Numere 4 series de tubos de 10 X 75 mm o de 12 X 75 mm del 1 al 8. 2. La serie 1 se utilizará para hacer la dilución del Suero de Coombs, en los tubos No 1 y 2, se colocan 8 gotas de suero de Coombs. 3. A partir del tubo 2 hasta el No 8, coloque 8 gotas de Solución Salina Fisiológica. 4. Mezcle el contenido del tubo No 2 y pase 8 gotas al tubo No 3 y así sucesivamente hasta el No 8 donde se descartan 8 gotas. 5. Del tubo No 8 , pasar con una pipeta limpia m2 gotas a los tubos 8 de la serie 2, 8 de la serie 3, 8 de la serie 4. 6. Pase el tubo No. 7, 2 gotas a los tubos 7 de la serie 2, 7 de la serie 3, 7 se la serie 4, y así sucesivamente hasta los tubos No 1 de la serie 2, 1 de la serie 3, 1 de la serie 4. 7. Con una pipeta limpia se pone una gota de los eritrocitos problema a todos los tubos de la serie 2. 1 gota de eritrocitos sensibilizados a todos los tubos de la serie 3 y una gota de eritrocitos no sensibilizados a la serie 4. 8. Mezcle cuidadosamente cada serie. 9. Centrifugue todos los tubos a 3000 rpm durante 20 segundos. 10. Lea cuidadosamente cada uno de los tubos, comenzando del tubo No 8 al No 1. 11. Los resultados positivos se reportan en cruces, 4+ para el más positivo, 1+ para el menos positivo. 12. El título se reporta de acuerdo a la dilución que resulte más elevada. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-60 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 25-mayo-2004 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 46 de 4 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de la Prueba de Coombs Directo para Titular Eritrocitos Problema Positivos. Registrar resultado en el Formato A-13-14-07, (ver forma de llenado en proc. CAL-42) y Bitácora CAL 31-A de Estudios Especiales (Ver forma de llenado en el procedimiento CAL-31) REGISTROS Formato A-13-14-07.- Se almacena en Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. Bitácora CAL-31-A.- Se almacena en Banco de Sangre 5 años en archivo activo y 5 años en archivo muerto. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-63 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 47 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para manejo de Condonaciones Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Lic. TS Ana María Dorantes Ceh Dra. Margarita Leticia Medina Macías Dra. Dinora V. Aguilar Escobar Firma: Firma: Fecha: 10-enero-2012 CAL-02-B Firma: Fecha: 10-enero-2012 Fecha: 10-enero-2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-63 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 48 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para manejo de Condonaciones CAMBIO Se elimina el inciso 3 de los requisitos para la condonación Se establece tiempo de resguardo del formato A-14-33A CAL-02-B REVISIÓN FECHA 01 10-enero-2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-63 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 49 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para manejo de Condonaciones DESCRIPCIÓN DEL PROCESO Dentro del Instituto Nacional de Pediatría se solicitan donaciones de sangre, según el manual de procedimientos del Departamento de Trabajo Social (Ver Manual de Procedimientos de Trabajo Social para la donación de sangre y procedimiento CAL-11, del Banco de Sangre) y lleva a cabo la condonación de sangre para los pacientes que lo ameriten. Dichas propuestas de condonación se llevan a cabo en Trabajo Social del Banco de Sangre y en Trabajo social de Hospitalización, y son autorizados por la Trabajadora Social del Banco de Sangre y por el Jefe del Departamento del Banco de Sangre o quien este a cargo del departamento. CONDONACIONES EN EL BANCO DE SANGRE El Banco de Sangre del Instituto Nacional de Pediatría lleva a cabo condonaciones de donación de sangre cuando la situación socio-económica de los pacientes lo amerite y bajo las siguientes situaciones: 1. Cuando son pacientes que forman parte de algún protocolo de investigación. 2. Cuando el paciente este bajo protección institucional. 3. Por diagnóstico conocido del paciente y/o de los padres. Dicha determinación se basa en el estudio social del área de Trabajo Social del Banco de Sangre y es autorizado por el Jefe del Departamento del Banco de Sangre. Si el Jefe del Departamento autoriza la Condonación de Sangre, La Trabajadora Social realiza el llenado del Formato de Condonación A-14-33-A, (ver abajo) y entrega a los padres la parte correspondiente y se queda en el Banco de Sangre la parte que registra la condonación realizada, así mismo se acompaña de una breve descripción del motivo de condonación. El Formato de Condonación A-14-33-A, es almacenado por el Banco de Sangre en el archivo del área de recepción. La Trabajadora Social de Hospitalización da indicaciones a los padres del paciente para que pase a Trabajo Social del Banco de Sangre y entregue el motivo social para sugerir que se condone la donación de sangre y/o documento que ampara la protección institucional del paciente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-63 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 50 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para manejo de Condonaciones Notifica al jefe del Departamento de Banco de Sangre y llena el Formato de Condonación con clave A-14-33-A, esto con la finalidad de que El Banco de Sangre lleve un registro y evidencia de las condonaciones que se realizan en el Instituto. Llenado del Formato de Condonación A-14-33-A, la Trabajadora Social del Banco de Sangre, lo pasa a autorización con el Jefe del Departamento, o el responsable del Departamento que se encuentre en ese momento. FORMATOS RELACIONADOS A ESTE PROCEDIMIENTO Formato A-14-33-A INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA BANCO DE SANGRE Nombre del Paciente:________ Reg.___ Servicio:___Cama:____ Se condonó Sangre: 1Donación ( ) 2 Donaciones ( ) Motivo:_______________________ ____________________________________ A-14-33-A CAL-02-B INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRÍA BANCO DE SANGRE No Nombre del paciente:_______________________ Reg:______ Servicio:______ Cama_______ Se condonó sangre: 1Donación ( ) 2 Donaciones ( ) JEFE DEL BANCO DE SANGRE Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-63 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 10 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 51 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento para manejo de Condonaciones Forma de Llenar el Formato A-14-33-A Nombre del Paciente: Registro: Servicio Cama: Se condonó sangre: 1Donación ( ) 2 Donaciones ( ) Motivo: Nombre del paciente para el que se solicita la donación Número de expediente que tiene el paciente en el INP Servicio para el que le estan solicitando la donación sangre Cama en la que esta hospitalizado niño, o referir si es externo Tachar en el espacio correspondiente a la cantidad de donaciones condonadas Describir brevemente la razón por la que se decide condonar la donación de sangre REGISTROS A-14-33-A se almacena en el Banco de Sangre, en el archivo del área de Recepción, durante 5 años. ANEXO 1.- MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE TRABAJO SOCIAL, AUTORIZADO INSTITUCIONALMENTE CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 52 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Elaborado por: Revisado por: Nombre: Pilar Sánchez S. Nombre: Guillermo Escamilla Nombre: Dinora Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: 02 Enero 2012 Fecha: 02Enero 2012 Fecha: 02 Enero 2012 CAL-02-B Aprobado por: Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 53 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 CAMBIO CAMBIO DE EQUIPO COBAS AMPLICOR A TAQ MAN CAL-02-B REVISIÓN 01 FECHA 02 ENERO 2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 54 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 DESCRIPCION DEL PROCESO Después de que las muestras de los pacientes que resultaron positivas, al Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH-1) ó al Virus de la Hepatitis C, se continuará el seguimiento clínico con determinaciones de la carga viral de manera periódica solicitándola al Banco de Sangre. OBTENCION DE LA MUESTRA (CAL-76) Y CENTRIFUGACION DE LA MISMA Campana de Flujo Laminar OBTENER ALICUOTA DE 550 uL DE PLASMA (de ser posible dos ), IDENTIFICAR Y GUARDAR EN EL CONGELADOR DE -20 C A -80 C A Campana de Flujo Laminar PROCESO DE EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS Software AMPLINK / Equipo Taq Man CREACION DE SERIE ANALITICA Software AMPLINK / Equipo Taq Man AMPLIFICACION Y DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS Software AMPLILINK VALIDACION DE RESULTADOS Y GENERACION DE ARCHIVO (RESPALDO ELECTRONICO) IMPRESIÓN DE RESULTADOS Y DESCARGAR AL SIBS (Sistema Informático de Banco de Sangre) LOS REPORTES IMPRESO GENERADOS SE GUARDAN 5 AÑOS EN ACTIVO Y 5 AÑOS EN ARCHIVO MUERTO CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 55 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Carga viral del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) La prueba COBAS® TaqMan® HIV-1, para uso con el sistema de alta pureza (HPS) es una prueba in vitro de amplificación del ácido nucleico para la determinación cuantitativa de ARN del virus de inmunodeficiencia humana de tipo 1 (HIV-1) 1 en plasma humano con EDTA, utilizando el kit para ácido nucleico vírico del sistema de alta pureza para la preparación manual de las muestras y el analizador COBAS® Taq Man® 48 para la detección y amplificación automática. La prueba está indicada para usarse conjuntamente con la presentación clínica y otros marcadores analíticos de progreso de la enfermedad para el tratamiento clínico de los pacientes infectados por HIV-1. La prueba puede utilizarse para evaluar la prognosis del paciente mediante la medición de la concentración de referencia (antes de iniciar el tratamiento) de ARN del HIV-1 o para controlar los efectos de la terapia antirretrovírica mediante la medición de los cambios en las concentraciones de ARN del HIV-1 en plasma en el curso del tratamiento antirretroviral. La prueba COBAS® TaqMan® HIV-1 no está indicada para utilizarse para detectar la presencia de HIV-1 en sangre o hemoderivados ni como prueba diagnóstica para confirmar la existencia de una infección por HIV-1. Utiliza la tecnología PCR para lograr una sensibilidad máxima y un intervalo dinámico para la detección cuantitativa del ARN del HIV-1 en plasma anticoagulado con EDTA. La prueba puede cuantificar el ARN del HIV-1 en un intervalo de 47 - 10.000.000 copias/ml. Una copia de ARN del HIV-1 es equivalente a 1,7 UI basándose en el estándar de la OMS (Código NIBSC 97/656). NOTA: Para mayor información consulta el inserto CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 56 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Principios del ensayo La prueba COBAS® TaqMan® HIV-1 está basada en tres procesos principales: 1. Preparación manual de las muestras para obtener el ARN del HIV-1 2. Transcripción reversa automática del ARN del objetivo para generar un ADN complementario (ADNc). 3. Amplificación simultánea del ADNc del objetivo con iniciadores complementarios específicos del HIV-1, y la detección de sondas de detección oligonucleótidas marcadas con dos colorantes fluorescentes que permiten la determinación cuantitativa del producto amplificado del objetivo del HIV-1 (amplicón) y del ARN del estándar de cuantificación del HIV-1, que se procesa, amplifica y detecta simultáneamente con la muestra.( Ver inserto) Obtención de la muestra y centrifugación: Para la obtención de la muestra se procederá de acuerdo al procedimiento CAL-76 de recolección y toma de muestras de pacientes. En este proceso se utilizan únicamente muestras con EDTA. La sangre obtenida con EDTA se puede almacenar a una temperatura de 2 a 28°C hasta 6 hrs. a partir de su obtención. Una vez obtenida la muestra se procederá a separar el plasma de los hematíes mediante centrifugación a 800-1600g por 20 minutos a temperatura ambiente. Separar e identificar el plasma en tubos de rosca en (uno ó dos) alícuotas de 550 µL y almacenar de -20°C a -80°C en caso de no ser usado de inmediato. Para mayor información referirse a la pagina 11 del inserto) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 57 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS PARA MUESTRAS Y CONTROLES PARA VIH-1 1) Descongelar las muestras. 2) Preparar los siguientes reactivos:. a) Inhibitor Removal Buffer (IRB) No Test IRB (negro) (mL) Etanol (mL) 12 test 8.25 5 24 test 16.5 10 48 test Todo 20 Conservar a 15-25 C Estabilidad 30 días Mezclar por inversión (5 a 10 veces) b) Wash Buffer No Test Wash Buffer (azul) (mL) Etanol (mL) 12 test 5 20 24 test 10 40 48 test Todo (20) 80 Conservar a 15-25 C Estabilidad 30 días Mezclar por inversión (5 a 10 veces) c) Elution Buffer (ELB). Incubar a 70°C. 75 ul por muestra CAL-02-B No Test ELB (mL) 12 test 5 24 test 10 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 58 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 d) Isopropanol en tubo Falcon e) CAR (Blanco) No Test Isopropanol (mL) 12 test 5 24 test 10 f) PK (Magenta) Para 24 tests: 0,5 ml ELB en frasco CAR. Mezclar por inversión y vortex. Para 24 tests: 5 ml ELB en frasco PK. Mezclar por inversión y vortex. Conservar a -20°C hasta 28 días. Conservar a -20°C hasta 28 días. 3) Vórtex a muestras, controles y QS. 4) Tener Lysis Rack blanco listo con marca orientación de primera muestra y N de rack. 5) Preparar la Lysis Binding Working Solution en tubo Falcon agregando los reactivos en el siguiente orden. Cuando se agrega el QS y PK mezclar inversión (no vortex). Reactivo 12 Test 24 Test 7 mL 14 mL CAR RNA 140 µL 280 µL HIV-1 QS 84 µL 168 µL PK 1.4 mL 2.8 mL Lysis Binding 6) Agregar inmediatamente 625 μl de la Lysis Binding Working Solution preparada en cada well del Lysis Rack (blanco). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 59 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 7) Agregar 500 μl de muestra y controles a sus respectivos wells del Lysis Rack. Vortex el Rack 10 seg. 8) Incubar el Lysis rack a 50 C – 10 minutos en baño de agua (5 cm altura de agua). 9) Secar el Rack y centrifugar 20 sec a 4600 g. 10) Agregar 350 μl de isopropanol a cada well (1 por vez). Mezclar el Rack por inversión y luego vortex 10 seg. 11) Centrifugar 20 sec a 4600 g. 12) Preparar el Filter Tube Rack (amarillo) con su Waste Rack. Colocar las marcas de orientación y N de Rack. 13) Transferir 750 μl de cada well al well correspondiente del Filter Tube rack (amarillo) con su Waste Rack ajustado. Tener en cuenta las marcas de muestras. 14) Centrifugar 2 min a 4600 g. 15) Transferir el remanente de cada well del Lysis rack (blanco ) a su correspondiente well en el rack amarillo. Descartar el Lysis Rack blanco. 16) Centrifugar 2 min a 4600 g.» Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo. 17) Abrir los wells con el gripper. Agregar 400 μl del IRB preparado por la pared del well sin tocar la pared. 18) Centrifugar 2 min a 4600 g. 19) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer preparado por la pared del well sin tocar. 20) Centrifugar 2 min a 4600 g. » Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo. 21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer por la pared del well sin tocar. 22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack (base azul). 23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 μl de ELB a 70 C a cada well (en el centro del filtro sin tocarlo). 24) Incubar 3 min a Temp amb. 25) Centrifugar 3 min a 4600 g. » Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientación. 26) Utilizar 50 μl del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la formación de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C 27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la MMX de trabajo. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 60 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer por la pared del well sin tocar. 22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack (base azul). 23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 μl de ELB a 70 C a cada well (en el centro del filtro sin tocarlo). 24) Incubar 3 min a Temp amb. 25) Centrifugar 3 min a 4600 g. » Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientación. 26) Utilizar 50 μl del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la formación de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C 27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la MMX de trabajo. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 61 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Preparación de Master Mix (MMX) 1) Sacar los reactivos de la MMX de la heladera y estabilizar a Temperatura ambiente 30 minutos. Proteger de la luz. Limpiar los K-carriers y K-carrier holders con isopropanol 70%. 2) Colocar el K-carrier (gradilla) en el K-carrier Holder. 3) Colocar los K-tubes en el K-carrier sin tocar las paredes del tubo. Posiciones obligatorias: 1-2-5-20-23-24 4) Preparar la MMX de trabajo: 12 tests En tubo 1,5 ml 24 tests En vial MMX HIV-1 MMX (μl) 700 Todo el vial de HIV-1 MMX CTM Mn 2+ (μl ) 85 170 Reactivo Mezclar por inversión. No usar vortex. Usar dentro de las 2 horas de preparada (proteger de la luz). 5) Destapar los K-tubes con el destapador y colocar las tapas en su gradilla. 6) Agregar 50 μl de la MMX preparada a cada K-tube. Agregar 50 µL del eluído de muestras y controles a cada K-tube mezclar por pipeteo 3 veces sin producir burbujas. Llevar al equipo de PCR. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 62 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Software Amplilink/Taq Man Encender: CPU Monitor Impresora Pestaña Service Due Perform Siga las instrucciones Usuario:_____ Pasword_____ Icono System Al finalizar: Done Escritorio Icono AMPLILINK Encender el Equipo Taq Man Creación de Serie Analítica 2) Pestaña K-Carrier 1)Icono Orders 3) New Icono System 4) Ingresar la identificación de las muestras 5) Escoger el Test 6) Save Introducir al termociclador el K-Carrier con ayuda de transportador Star CAL-02-B Open Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 63 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 RESULTADOS Cálculo de resultados El analizador COBAS® TaqMan® 48 determina de forma automática la concentración de ARN del HIV-1 para la muestra o el control. La concentración de ARN del HIV-1 se expresa en copias/ml. El factor de conversión entre copias/ml de HIV-1 y unidades internacionales UI/ml es de 0,6 copias/UI, utilizando el material de referencia de la OMS para el HIV-1B 97/65635. El analizador COBAS® TaqMan® 48: • Determina el valor umbral del ciclo (Ct) para el ARN del HIV-1 y el ARN del estándar de cuantificación del HIV-1. • Determina la concentración de ARN del HIV-1 basándose en los valores Ct del ARN del HIV1 y el ARN del estándar de cuantificación del HIV-1, así como los coeficientes de calibración específicos de cada lote. • Determina que las concentraciones calculadas en copias/ml para el HIV-1 L(+)C y HIV-1 H(+)C se encuentran dentro de los intervalos asignados. Validación de la serie Compruebe la ventana de resultados del software AMPLILINK o la impresión en busca de avisos y comentarios para asegurarse de que la serie es válida. La serie es válida si no aparecen avisos para los controles La serie no es válida si aparece alguno de los siguientes avisos en los controles CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 64 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Si la serie no es válida, repita toda la serie incluyendo la preparación de las muestras y los controles, transcripción reversa, amplificación y detección. Interpretación de resultados: Para obtener una serie válida, compruebe cada una de las pruebas por si presentan avisos o comentarios en la impresión de resultados. Interprete los resultados de la siguiente manera: Una serie válida puede incluir resultados de muestras válidas y no válidas dependiendo de si los avisos y/o los comentarios se obtienen para las muestras individuales. Los resultados de las muestras se interpretan de la siguiente manera: NOTA: Las muestras por encima del intervalo del ensayo también pueden producir un resultado no válido con un aviso “QS_INVALID“. Si se desean resultados cuantitativos, la muestra original debería diluirse con plasma humano con EDTA negativo para la presencia de HIV-1 y repetirse la prueba. Multiplique el resultado notificado por el factor de dilución. Nota: Para mayor información referirse al Inserto y al Manual. Anotar los resultados en la bitácora CAL-65-A CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 65 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 VALIDACION DE RESULTADOS 1)Icono Results Usuario:___ Pasword___ 3) Número de K-Carrier (doble click) 4) Revisar RESULTADOS 11) En barra de menús File 12) Shut Down CAL-02-B 2) Número de Review 5) Revisar RESULTADOS 10) Apagar el equipo (Interruptor lado Izquierdo) 7)Yes 6) Accept 9) Close 8) Ir a System Open Retirar el K-Carrier 13) Cerrar Windows Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 66 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Carga viral del Virus del Hepatitis C (VHC) La prueba está indicada para su uso conjunto con la presentación clínica y otros indicadores de laboratorio como una ayuda en la evaluación de la respuesta vírica frente al tratamiento antivírico a través de la determinación de cambios en los niveles séricos o plasmáticos de ARN del HCV. Datos recientes parecen indicar que las variaciones tempranas en los niveles de ARN de HCV en suero/plasma pueden pronosticar respuestas a largo plazo del tratamiento con interferón1. El virus de la hepatitis C está considerado como el principal agente etiológico responsable del 90 al 95% de los casos de hepatitis post-transfusional no A y no B. El HCV es un virus ARN monocatenario de sentido positivo con un genoma de aproximadamente 10.000 nucleótidos que codifican 3.000 aminoácidos. Como virus transportado en sangre, el HCV es transmisible a través de la sangre y los productos hemoderivados. La adopción más o menos generalizada de medidas de detección sistemática del HCV en sangre ha reducido de forma considerable el riesgo de hepatitis asociado a las transfusiones. La prueba puede cuantificar el ARN del VHC en un intervalo de 25 – 391, 000,000 UI/ml en plasma conservado en EDTA y suero Principios del ensayo La prueba COBAS® Taq Man® HCV, v2.0 se basa en tres procesos principales: (1) preparación manual de las muestras para obtener el ARN del HCV; (2) transcripción reversa automática del ARN diana para generar un ADN complementario (ADNc); (3) amplificación mediante PCR del ADNc diana utilizando primers complementarios específicos del HCV, y detección simultánea de sondas oligonucleótidas marcadas con doble marcador fluorescente escindido que permiten la determinación cuantitativa del producto amplificado de la diana del HCV (amplicón). Ver Inserto CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 67 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Obtención de la muestra y centrifugación: Para la obtención de la muestra se procederá de acuerdo al procedimiento CAL-76 de recolección y toma de muestras de pacientes. En este proceso se utilizan muestras con EDTA ó suero. La sangre obtenida con se puede almacenar a una temperatura de 2 a 28°C hasta 6 hrs. a partir de su obtención. Una vez obtenida la muestra se procederá a separar el plasma de los hematíes mediante centrifugación a 800-1600g por 20 minutos a temperatura ambiente. Separar e identificar el plasma en tubos de rosca en (uno ó dos) alícuotas de 550 µL y almacenar de -20°C a -80°C en caso de no ser usado de inmediato. Para mayor información referirse a la pagina 13 del inserto) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 68 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS PARA MUESTRAS Y CONTROLES PARA VHC 1) Descongelar las muestras. 2) Preparar los siguientes reactivos:. a) Inhibitor Removal Buffer (IRB) No Test IRB (negro) (mL) Etanol (mL) 12 test 8.25 5 24 test 16.5 10 48 test Todo 20 Conservar a 15-25 C Estabilidad 30 días Mezclar por inversión (5 a 10 veces) b) Wash Buffer No Test Wash Buffer Agua Etanol (mL) (azul) (mL) desionizada(mL) 12 test 5 12.5 7.5 24 test 10 25 15 48 test Todo (20) 50 30 Conservar a 15-25 C Estabilidad 30 días Mezclar por inversión (5 a 10 veces) c) Elution Buffer (ELB). Incubar a 70°C. 75 ul por muestra CAL-02-B No Test ELB (mL) 12 test 5 24 test 10 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 69 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 d) Isopropanol en tubo Falcon e) CAR (Blanco) No Test Isopropanol (mL) 12 test 5 24 test 10 f) PK (Magenta) Para 24 tests: 0,5 ml ELB en frasco CAR. Mezclar por inversión y vortex. Para 24 tests: 5 ml ELB en frasco PK. Mezclar por inversión y vortex. Conservar a -20°C hasta 28 días. Conservar a -20°C hasta 28 días. 3) Vórtex a muestras, controles y QS. 4) Tener Lysis Rack blanco listo con marca orientación de primera muestra y N de rack. 5) Preparar la Lysis Binding Working Solution en tubo Falcon agregando los reactivos en el siguiente orden. Cuando se agrega el QS y PK mezclar inversión (no vortex). Reactivo 12 Test 24 Test 7 mL 14 mL CAR RNA 140 µL 280 µL HCV QS 56 µL 112 µL PK 1.4 mL 2.8 mL Lysis Binding 6) Agregar inmediatamente 625 μl de la Lysis Binding Working Solution preparada en cada well del Lysis Rack (blanco). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 70 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 7) Agregar 500 μl de muestra y controles a sus respectivos wells del Lysis Rack. Vortex el Rack 10 seg. 8) Incubar el Lysis rack a 50 C – 10 minutos en baño de agua (5 cm altura de agua). 9) Secar el Rack y centrifugar 20 sec a 4600 g. 10) Agregar 250 μl de isopropanol a cada well (1 por vez). Mezclar el Rack por inversión y luego vortex 10 seg. 11) Centrifugar 20 sec a 4600 g. 12) Preparar el Filter Tube Rack (amarillo) con su Waste Rack. Colocar las marcas de orientación y N de Rack. 13) Transferir 750 μl de cada well al well correspondiente del Filter Tube rack (amarillo) con su Waste Rack ajustado. Tener en cuenta las marcas de muestras. 14) Centrifugar 2 min a 4600 g. 15) Transferir el remanente de cada well del Lysis rack (blanco ) a su correspondiente well en el rack amarillo. Descartar el Lysis Rack blanco. 16) Centrifugar 2 min a 4600 g.» Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo. 17) Abrir los wells con el gripper. Agregar 400 μl del IRB preparado por la pared del well sin tocar la pared. 18) Centrifugar 2 min a 4600 g. 19) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer preparado por la pared del well sin tocar. 20) Centrifugar 2 min a 4600 g. » Reemplazar el Waste Rack por uno nuevo. 21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer por la pared del well sin tocar. 22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack (base azul). 23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 μl de ELB a 70 C a cada well (en el centro del filtro sin tocarlo). 24) Incubar 3 min a Temp amb. 25) Centrifugar 3 min a 4600 g. » Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientación. 26) Utilizar 50 μl del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la formación de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C CAL-02-B 27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la MMX de trabajo. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 71 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 21) Abrir los wells con el gripper. Agregar 700 μl de Wash Buffer por la pared del well sin tocar. 22) Centrifugar 3 min a 4600 g. Descartar el Waste Rack. Colocar Elution Rack (base azul). 23) Abrir los wells con el gripper. Agregar 75 μl de ELB a 70 C a cada well (en el centro del filtro sin tocarlo). 24) Incubar 3 min a Temp amb. 25) Centrifugar 3 min a 4600 g. » Descartar el Filter Tube Rack (amarillo) y poner el Cover Rack (azul). Respetar las marcas de orientación. 26) Utilizar 50 μl del eluido para la PCR. Agregar a los K-tubes con la MMX de trabajo. Mezclar por pipeteo 3 veces , evitando la formación de burbujas. Estabilidad eluido en el Rack: 2 horas a 4-30 C 27) Iniciar la PCR dentro de 1hora de agregadas las muestras a la MMX de trabajo. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 72 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Preparación de Master Mix (MMX) 1) Sacar los reactivos de la MMX de la heladera y estabilizar a Temperatura ambiente 30 minutos. Proteger de la luz. Limpiar los K-carriers y K-carrier holders con isopropanol 70%. 2) Colocar el K-carrier (gradilla) en el K-carrier Holder. 3) Colocar los K-tubes en el K-carrier sin tocar las paredes del tubo. Posiciones obligatorias: 1-2-5-20-23-24 4) Preparar la MMX de trabajo: 12 tests En tubo 1,5 ml 24 tests En vial MMX HIV-1 MMX (μl) 700 Todo el vial de HIV-1 MMX CTM Mn 2+ (μl ) 85 170 Reactivo Mezclar por inversión. No usar vortex. Usar dentro de las 2 horas de preparada (proteger de la luz). 5) Destapar los K-tubes con el destapador y colocar las tapas en su gradilla. 6) Agregar 50 μl de la MMX preparada a cada K-tube. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 73 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Encender: CPU Monitor Impresora Pestaña Service Due Perform Siga las instrucciones Usuario:_____ Pasword_____ Escritorio Icono AMPLILINK Icono System Encender el Equipo Taq Man Al finalizar: Done Usuario:_____ Pasword_____ Creación de Serie Analítica 2) Pestaña K-Carrier 1)Icono Orders 3) New Icono System 4) Ingresar la identificación de las muestras 5) Escoger el Test 6) Save Introducir al termociclador el K-Carrier con ayuda de transportador Star CAL-02-B Open Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 74 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 RESULTADOS Cálculo de los resultados El analizador COBAS® Taq Man® 48 determina automáticamente el título del ARN del HCV para la muestra o el control. El título del ARN del HCV se expresa en unidades internacionales (UI)/ml según el segundo estándar internacional de la OMS para ensayos NAT de ARN del HCV (código NIBSC 96/798). El analizador COBAS® Taq Man® 48: • Determina el valor de ciclo umbral (Ct) correspondiente al ARN del HCV y al ARN del estándar de cuantificación del HCV. • Determina el título del ARN del HCV según los valores Ct para el ARN del HCV y el ARN del estándar de cuantificación del HCV y los coeficientes de calibración específicos del lote. • Determina si las UI/ml calculadas para HCV L(+)C, v2.0 y HCV H(+)C, v2.0 están dentro de los intervalos asignados. Validación de la serie analítica Compruebe la ventana de resultados del programa AMPLILINK o la impresión de los posibles avisos y comentarios para asegurarse de que la serie es válida. La serie será válida si no aparecen avisos para los controles de HCV . La serie no es válida si aparece cualquiera de los avisos siguientes para los controles de HCV : CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 75 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 76 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 Si la serie no es válida, repítala por completo incluyendo los pasos de preparación de las muestras y los controles, transcripción reversa, amplificación y detección. Interpretación de los resultados: Para determinar si una serie es válida, compruebe los posibles avisos o comentarios asociados a cada muestra en la impresión de los resultados. Interprete los resultados de la siguiente manera: Una serie válida puede incluir resultados de muestras tanto válidos como no válidos según los avisos o comentarios asociados con cada una de las muestras. Los resultados de las muestras se interpretan como se indica a continuación: NOTA: Las muestras por encima del intervalo del ensayo también pueden producir un resultado no válido con un aviso “QS_INVALID“. Si se desean resultados cuantitativos, la muestra original debería diluirse con plasma humano con EDTA negativo para la presencia de HIV-1 y repetirse la prueba. Multiplique el resultado notificado por el factor de dilución. Nota: Para mayor información referirse al Inserto y al Manual. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 65 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02 Enero 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 77 de 25 PROCEDIMIENTOS DE CARGA VIRAL VHC Y VIH-1 1)Icono Results Usuario:___ Pasword___ 3) Número de K-Carrier (doble click) 4) Revisar RESULTADOS 11) En barra de menús File 12) Shut Down 2) Número de Review 5) Revisar RESULTADOS 10) Apagar el equipo (Interruptor lado Izquierdo) 7)Yes 6) Accept 9) Close 8) Ir a System Open Retirar el K-Carrier 13) Cerrar Windows REGISTROS La bitácora CAL-65-A Se debe almacenar en el archivo activo durante 5 años y en el archivo muerto 5 años. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 78 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 79 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA CAMBIO REVISIÓN FECHA En la calibración y lectura en el equipo 1 01/11/11 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 80 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA DESCRIPCION DEL PROCESO Cuantificar el número de células CD 34+ y determinar el porcentaje de viabilidad de las mismas en la cosecha de células Células Tallo recolectadas por aféresis para el Protocolo de Transplante de Médula. PROCESO: 1. Recepción de muestra: a. Biometría Hemática b. Cosecha 2. Cuantificación de cantidad de leucocitos empleando citometría en equipo de Biometría Hemática 3. Ajuste del número de células: ≤ 10,000 µl 4. Preparación de muestra acorde a inserto 5. Antes de usar el citómetro de Flujo, se recomienda: a. Proceso de lavado largo b. Calibración c. Usar en cada corrida un control normal (ver viabilidad) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 81 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA A.- Preparación de muestras para conteo de células CD34+ CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 82 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA B.- Lavado previo al uso del equipo CVE: BDIS LAVADO ENCENDER REVISAR PRESION Cambiar de ANALIZADOR (LO + PRIME ; OBSSERVAR BURBUJAS) VENT-TANK CHANGE A VENT-RUN LOADER MANAGER CPU MAINTENANCE MONITOR DILUYENTE : LLENAR MAX ¾ IMPRESORA DESECHOS: VACIAR TEST OPTION COLOCAR LOS TUBOS EN EL RACK COMO SE INDICA EN LAS POSICIONES: EQUIPO RUN ESCOGER LONG O 39.. FAC’S CLEANE SHORT 40. FAC’S RINSE CLEAN HI COLOCAR EL EN EL EQUIPO RACK MONITOR RUN RUN ESPERAR A QUE TERMINE EL LAVADO CAL-02-B FILE DONE QUIT Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 83 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA Realizar Calibración CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 84 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA Llevar las muestras al equipo para proceder a su lectura CD34 CITOMETRO CD34 Plantillas PANTALLA PRINCIPAL APARECE EL ULTIMO RESULTADO OBTENIDO ISHAGE (Doble Click) ACQUIRE AL FINALIZAR LA CORRIDA REALIZAR UN LAVADO LARGO (LONG) DEL EQUIPO. CONECTAR CITOMETRO ACQUIRE PARAMETERS DESCRIPTION PRESIONAR LA TECLA COMAND JALAR LA CALIBRACIO N L.N.W CYTOMETER INTRUMENTS SETTINGS MOVER LOS TUBOS CON EL CONTROL ADOR M,ANUAL PESTAÑA COUNTER S ACQUIRE INGRESAR LOS DATOS DEL PACIENTE ( Y SIN SOLTAR PRESIONAR 1, 2 Y 3 Calib.File.LNW OPEN EQUI PO RUN HI DESKTOP FAC’STATION COLOCAR LOS TUBOS EN EL ORDEN QUE SE INDICA. Y EN LAS POSICIONES 38. H 2 O 39.. FAC’S CLEANE 40 . FAC’S RINSE BD FILES CHECAR QUE EN THRESHOLD ESTE SELECCIONADO FL 1 Y ESTE EN UN RANGO DE 350-360 INTRUMENT S SETTINGS SET DONE COLOCAR EL RACK EN EL EQUIPO ACQUISITION CONTROL ACQUI RE ACQUISITION CONTROL PAUSE ABORT DESPUES DE 5 MIN PAU SE SET UP QUIT CELL QUEST SET UP DON´T SAVE CAL-02-B SAVE IMPRIMIR RESULTAD OS Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 66 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 85 de 8 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE CELULAS TALLO (CD 34+) POR CITOMETRIA Resultados Obtención de resultados impresos en automático ó vaciar en el formato PERLAS BOLSA _________________ LOTE____________ NOMBRE PESO: _______ Muestra: CD 34+ viables CD34+ total CD 45+ viables CD45+ total Perlas G6 G7 Dilución Cuenta total CD 34+/µl CD34+/Kg paciente (Células CD34+ viables) / (# perlas) X (# perlas en el tubo) / (50 µl muestra) X Viabilidad de 34+: (CD 34+ viables)(100) / CD34+ REGISTROS Ningún registro asociado CAL-02-B dilución Viabilidad de 45+: (CD 45+ viables)(100) / CD45+ Instituto Nacional de Pediatría Banco de Sangre Código: CAL- 68 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 26 de Marzo 2008 Página 86 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS AGLUTININAS INMUNES Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Q.F.B. JUDITH M. en C. GUILLERMO RODRIGUEZ HERNANDEZ ESCAMILLA GUERRERO Firma: DRA. DINORA AGUILAR ESCOBAR Fecha: Fecha: CAL-02-B Fecha: Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-68 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 26 de Marzo 2008 Página 87 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS AGLUTININAS INMUNES CAMBIO CAL-02-B REVISIÓN FECHA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-68 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 26 de Marzo 2008 Página 88 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS AGLUTININAS INMUNES OBJETI VO Cuantificar la concentración de un Ac presente en una muestra de suero con fines terapéuticos, de investigación y en la elaboración y control de calidad de los reactivos. MATERIAL Y EQUIPO Suero en estudio, hematíes conteniendo el Ag correspondiente al Ac a titular, pizeta con SSF, guantes quirúrgicos, programador o gradilla, lápiz graso, pipeta de Pasteur de igual calibre, bulbo de goma, tubos de ensaye 12 x 75 mm, termoblock temperatura variable (37, 56 a 70° C), termómetro, centrifuga, antiglobulina humana (Coombs). METODO A.- Titulación de Ac anti "A" y anti "B" naturales. Realizar titulo de Ac naturales del sistema ABO, según grupo sanguíneo: Si es grupo "0" titular anti "A" y anti "B" Si es grupo "A" titular anti "B" Si es grupo "B" titular anti "A" 1. Utilizar guantes quirúrgicos 2. Obtener el suero en estudio 3. Realizar diluciones doble seriadas (solución salina / suero problema) según se requiera. 4. Colocar 100 µl de solución salina a partir del tubo número 1. Añadir 100 µl de suero. 5. Mezclar y pipetear el contenido del tubo 1 y transferir 100 µl al tubo 2, asi sucesivamente hasta la dilución deseada. 6. Se preparan tres series: para aglutininas A, aglutininas B y un testigo 7. A la primer serie se le agregan 50 µl de eritrocitos A, a la segunda 50 µl de eritrocitos B y a la tercera: 50 µl de eritoctios O. 8. Mezclar y centrifugar a tiempo y revoluciones (30” / 3500 RPM) . 9. Leer y anotar resultados en cruces, tubo en mano en formato correspondiente. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-68 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 26 de Marzo 2008 Página 89 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS AGLUTININAS INMUNES INTERPRETACION DE RESULTADOS A1/2 A1/4 4+ 4+ B1/2 B1/4 4+ 4+ A1/8 A1116 3+ 2+ B1/8 3+ A1/32 A1/64 A1/128 1+ 1/2+ B1/16 B1/32 B1/64 B1/128 3+ 2+ 1+ 1/2+ A1/256 B1/256 A1/512 B1/512 A1/102 B1/102 Re s ul t ad o del ti t ul o a nti "A " y a nti "B " Anti "A" 64 Anti "B" 128 B. Titulación de anti "A" y anti "B" inmunes Técnica para neutralizar el suero: 1. Utilizar guantes quirúrgicos. 2. Neutralizar el suero en estudio, utilizar una dilución de 1/4, 3 gotas de solución salina fisiológica mas 1 gota de suero en estudio; adecuar esta proporción para obtener mayor numero de gotas. ya que se debe comprobar si ocurrió a no la neutralización de los anticuerpos naturales, utilizando pipetas de Pasteur o agregar a los tubos 1/2 de cada hilera cuatro gotas del suero en estudio con pipeta de Pasteur o automatizada 3. Incubar el contenido de la dilución preparada de entre 56°C a 70°C por 30 minutos. 4. Retirar el contenido de la dilución neutralizada del baño de Maria y dejar reposar por 10 minutos. 5. Marcar dos tubos 12 x 75 mm como A y B. 6. Agregar a cada tubo 2 gotas de suero, posiblemente inactivado. 7. Al tubo A agregar eritrocitos "A," y al tubo "B" agregar eritrocitos B. 8. Mezclar y centrifugar a tiempo y velocidad establecida. 9. Leer y observar aglutinación. 10. Repetir los pasos 6, 7, 8, 9 y 10, si da negativo demuestre que los anticuerpos naturales han sido neutralizados, procediendo a investigar anticuerpos inmunes. 11. Colocar dos tubos anteriores previamente neutralizados a 37°C por 30 a 60 minutos. 12. Lavar ambos tubos cuatro veces con SSF, y añadir dos gotas de suero de Coombs, mezclar y centrifugar. 13. Leer y anotar resultados en cruces, tubo en mano en formato correspondiente. Si hay aglutinación existe presencia de anticuerpos inmunes, proceder a realizar titulación. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-68 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 26 de Marzo 2008 Página 90 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS AGLUTININAS INMUNES Interpretación: Si se observa aglutinación, la neutralización ha sido insuficiente, se debe incubar el tubo con el contenido de la dilución preparada durante 10 min. a 56°C a 70°C para que se termine de neutralizar. B.1 Título del suero 1. Identificar dos (2) hileras de tubos 12 x 75 mm, con la letra A 1 /2, A 1 /4 hasta A 1 / 1024 y proceder igualmente con la hilera B 2. Agregar a cada hilera un tubo adicional con Al 1, 1311. 3. 3. Colocar en ambas hileras excepto en el tubo numero 11, cuatro gotas de SSF con pipeta de Pasteur. 4. Añadir a los tubos Al /2 y B 1 /2, cuatro gotas de suero en estudio, previamente neutralizada. 5. Mezclar y pipetear el contenido del tubo A1/2 y transferir cuatro gotas al tubo A1/4 y así sucesivamente hasta el tubo numero 11. 6. Repetir el paso numero 5 con la hilera B. 7. Agregar a la hilera A, excepto en el tubo numero 11, una gota de hematíes "A1". 8. Agregar a la hilera B, excepto en el tubo numero 11 una gota de hematíes "B". 9. Mezclar e incubar ambas hileras en baño Maria a 37° C durante 30 a 60 min. 10. Lavar todos los tubos, de ambas hileras con SSF por cuatro veces consecutivas resuspendiendo en cada lavado, con una pequeña alícuota de SSF. 11. Agregar a cada tubo dos gotas de reactivos antiglobulina humana (Coombs). 12. Centrifugar a tiempo y revoluciones establecidas. 13. Leer, desprendiendo suavemente el botón celular, observando hemólisis o aglutinación, comenzando de la mas alta dilución (1/2) a la menor sobre una fuente de luz. 14. 14. Anotar los resultados en cruces, tubo en mano en el formato correspondiente. lnterpretación de resultados A1/2 4+ A1/4 4+ A1/8 3+ A1/16 2+ *12 12 10 8 B1/2 4+ B1/4 4+ B1/8 3+ B1/16 3+ *12 12 10 10 Titulo Anti A = 64 CAL-02-B ' Score Anti A = 49 A1/32 1+ A1/64 1/2+ A1/128 5 2 Sc B1/32 2+ B1/64 1+ B1/128 1/2+ 8 5 2 A1/256 A1/512 A1/1 B1/256 B1/512 B1/1 Sc Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-68 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 26 de Marzo 2008 Página 91 de 6 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS AGLUTININAS INMUNES TÉCNICA ALTERNA Técnica del 2- -mercaptoetanol La prueba es de utilidad en la investigación serológica en la investigación de enfermedad hemolítica del recién nacido, donde sólo las IgG son capaces de atravesar la placenta. Se emplea esta técnica también el la demostración de anti-A y anti-B no neutralizables. Los anticuerpos de naturaleza IgM al ser tratados con 2- -mercaptoetanol sufren la ruptura de los puentes de disulfuro en su molécula afectandose así su función o actividad serológica. Bajo condiciones similares, las IgG no sufren daño. Método: 1. Adicione 1 ml de suero problema a una solución recién preparada del 2- mercaptoetanol 0.1 M en buffer a pH 7.4. 2. Se prepara un control con suero normal en forma similar 3. Incubar los tubos a 37°C durante 2 horas. 4. Dialice durante la noche buffer pH 7.4. o aplique método pertinente a fín de eliminar el reactivo 2- -mercaptoetanol Interpretación En titulación no se observa mucha diferencia entre el suero tratado del no tratado. Aquellas muestras que contienen mezcla de IgG/IgM muestran una disminución sensible al ser reducidas con el 2- -mercaptoetanol. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 92 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Limpieza y manejo de RPBI Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: GUILLERMO ESCAMILLA GUERRERO Nombre: MARGARITA LETICIA MEDINA MACIAS Nombre: DINORA AGUILAR ESCOBAR Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 93 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI CAMBIO CAL-70 REVISIÓN FECHA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 94 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI En este procedimiento se describen los métodos de limpieza que se utilizan en las diferentes áreas y la metodología para la recolección de los residuos peligrosos biológicos infecciosos, los materiales, equipos y utensilios a emplear en cada actividad, así como la asignación de responsables a realizar dicho procedimiento, la frecuencia con que se debe realizar. TECNICAS DE LIMPIEZA / DESINFECCIÓN APLICABLES La descripción de las actividades para la limpieza de las áreas y su supervisión se desglosan en el formato CAL-70-A y este se publica en cada una de las áreas para que sean del conocimiento de todo el personal y puedan ser consultadas por los mismos cada vez que sea necesario. Una vez que el personal asignado para la limpieza conozca la descripción de ésta actividad, deberá realizarla conforme a lo descrito y para ello será monitoreado por: A. Planta Baja: Jefa de enfermería. B. Laboratorio: Jefe del Laboratorio. a. Turno matutino: auxiliar asignado b. Turno vespertino: auxiliar asignado c. Turno nocturno: personal de guardia nocturna d. Turno especial: auxiliar de turno El reporte de cada turno en el área de laboratorio se remite a la jefatura del laboratorio para elaborar reporte de informe semanal que será entregado a la jefatura del Departamento de Banco de Sangre El formato CAL-70-A se muestra a continuación: CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 95 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI S UPE RVIS ION DE L IMPIE ZA FE C HA NOMBR E DE L S UPE R VIS OR TURNO MATUTINO VE S PE R TINO NOC TUR NO E S PE C IAL AR E A BANC O DE S ANGRE M C ONC E PTO FR E C UE NC IA PIS OS Y MUR OS PR ODUC TOS INS TR UME NTOS PUE R TAS FR E C UE NC IA PR ODUC TOS INS TR UME NTOS VIDR IOS FR E C UE NC IA PR ODUC TOS INS TR UME NTOS MUE BLE S DE OFIC INA FR E C UE NC IA PR ODUC TOS INS TR UME NTOS FR E C UE NC IA E QUIPO ME DIC O PR ODUC TOS INS TR UME NTOS FR E C UE NC IA PR ODUC TOS R B M R B M R B M R B LIMPIE ZA Y DE S INFE C C ION DIAR IA TR APE ADO C ONTINUO GE R MIC IDA - J ABON NE UTR O MAQ. LAVADOR A/AC C S C E PILLOS DE R AIZ, C R UC E TAS , R E C OGE DOR , C UBE TAS , TR APE ADOR E S MANGO GR IS LIMPIE ZA DIAR IA Y LAVADO C ADA OC HO DIAS GE R MIC IDA - DE S E NGR AS ANTE E S C ALE R A, FR ANE LA, GR IS , C UÑAS DE MADE R A, C UBE TA, ATOMIZADOR LIMPIE ZA Y DE S MANC HADO DIAR IO DE S E NGR AS ANTE ATOMIZADOR , C R UC E TA, FR ANE LA GR IS , C UBE TA, C E PILO LIMPIE ZA DIAR IA Y LAVADO C ADA OC HO DIAS DE S E NGR AS ANTE ATOMIZADOR , FIBR A DE NY LON, FR ANE LA GR IS LIMPIE ZA DIAR IA (S UPE R VIS ION DE L PE R S ONAL ME DIC O) GE R MIC IDA-DE S E NGR AS ANTE LAVADO DIAR IO Y TR APE ADO C ONTINUO GE R MIC IDA-DE S E NGR AS ANTE ATOMIZADOR , FR ANE LA R OJ A, FIBR A NY LON, INS TR UME NTOS GUANTE S DE HULE , C UBE TA, C UBR E BOC A FR E C UE NC IA TR APE ADO Y BAR R IDO UNA VE Z POR TUR NO PR ODUC TOS GE R MIC IDA E S C ALE R AS TR APE ADOR MANGO GR IS , DOS C UBE TAS , INS TR UME NTOS C R UC E TA R E C OLE C C ION DE BAS UR A TR E S VE C E S POR TUR NO R E C OLE C C ION DE R PBI DOS VE C E S POR DIA S ANTIAR IOS C OME NTAR IOS : TOTAL M R B MALO R E GULAR BUE NO CAL-70-A El formato CAL-70-A se elabora de acuerdo a las necesidades de las áreas del laboratorio de la siguiente manera: ÁREA: Se escriben las diferentes áreas del Banco de Sangre que se deben limpiar y/o desinfectar. FRECUENCIA: Se indica la frecuencia con la que se debe realizar la actividad mencionada CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 96 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI PRODUCTOS: Se lista los productos necesarios para realizar la limpieza y/o desinfección del área en cuestión INSTRUMENTOS: Se lista los instrumentos y/o materiales necesarios para realizar la limpieza y/o desinfección del área en cuestión M: Malo, calificación de la actividad R: Regular, calificación de la actividad B Bueno, calificación de la actividad FECHA: Fecha en que se realiza la supervisión NOMBRE DEL SUPERVISOR: Nombre de la persona encargada de la supervisión TURNO: Turno en que se realiza la supervisión, cruzar el espacio adecuado RESPONSABLES: Se indica quien o quienes van a ser los responsables de llevar a cabo la actividad mencionada. COMENTARIOS: Anexar comentarios extras, si es necesario TOTAL: Puntaje total de columnas M, R y B Es responsabilidad de los jefes de laboratorio elaborar el programa mensual de limpieza y verificar que las actividades se realicen. Importante: El material de limpieza de cada área incluyendo las soluciones debe guardarse limpio y seco en el lugar asignado, para evitar un uso indebido en otras áreas. No se debe dejar equipo de limpieza fuera de los lugares asignados para ello. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 97 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI Las precauciones a seguir para el manejo de los químicos de limpieza y sanitización serán las descritas por el proveedor cada producto. MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO INFECCIOSOS 1. IDENTIFICACIÓN INFECCIOSOS DE LOS RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO- Clasificación. Se deben clasificar los residuos peligrosos biológico infecciosos (RPBI) que se generan en el laboratorio, así como el nivel de establecimiento que le corresponde al mismo de acuerdo con lo que indica la norma NOM-087- ECOL-SSA1-2002. 2. ENVASADO DE INFECCIOSOS LOS RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICO- Los contenedores para RPBI se clasifican de acuerdo al tipo de RPBI y los mismos deben de cumplir con lo requerimientos especificados en la NOM-087ECOL-SSA1-2002. TIPO DE RESIDUOS ESTADO FISICO 1 Sangre Líquidos 2 Cultivos y cepas de agentes infecciosos Sólidos 3 Patológicos Sólidos Líquidos Sólidos 4 Residuos no anatómicos Líquidos 5 Objetos punzocortantes CAL-70 Sólidos ENVASADO Recipientes herméticos Bolsas de polietileno Bolsas de polietileno Recipientes herméticos Bolsas de polietileno Recipientes herméticos Recipientes rígidos polipropileno COLOR Rojo Rojo Amarillo Amarillo Rojo Rojo Rojo Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 98 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI Durante el envasado, los RPBI no deben mezclarse con ningún otro tipo de residuos municipales o peligrosos. Los contenedores de los diferentes tipos de RPBI deben de cumplir con las siguientes especificaciones: a) Contenedores para residuos sólidos (bolsas de polietileno) Las bolsas deberán ser de polietileno color rojo de calibre mínimo 200 y color amarillo calibre mínimo 300 , impermeables Los materiales utilizados deberán estar libres de metales pesados y cloro, mientras que los colorantes deberán ser fisiológicamente inocuos. Resistentes. Destruibles por medios fisicoquímicos. Etiquetados con la leyenda “Peligro, residuos sólidos biológico infecciosos” y con el símbolo universal de riesgo biológico. b) Contenedores para residuos punzocortantes. Deben ser rígidos De polipropileno color rojo Los materiales utilizados deberán estar libres de metales pesados y cloro, mientras que los colorantes deberán ser fisiológicamente inocuos. Resistentes a fracturas y perdidas del contenido al caerse. Destruibles por medios físicos. Esterilizables. Resistencia a la penetración en todas partes. Tener tapa con y sin separador de agujas. Abertura para depósito con dispositivo para cierre seguro. Etiquetados con la leyenda “Peligro, residuos punzocortantes biológico infecciosos” y con el símbolo universal de riesgo biológico. Una vez llenos los recipientes no deben ser abiertos o vaciados. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 99 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI c) Contenedores herméticos para residuos líquidos. Deben ser rígidos. Herméticos. De polipropileno color rojo o amarillo Los materiales utilizados deberán estar libres de metales pesados y cloro, mientras que los colorantes deberán ser fisiológicamente inocuos. Resistentes a fracturas y perdidas del contenido al caerse. Destruibles por medios físicos. Etiquetados con la leyenda, “Peligro, residuos peligrosos líquidos biológico infecciosos”. Marcados con el símbolo universal de riesgo biológico. A continuación se muestra el símbolo universal de riesgo biológico 3. RECOLECCIÓN Y TRANSPORTE INTERNO. El manejo interno del material de residuos biológico – infeccioso, será exclusivo del área de Intendencia, utilizando el equipo de protección que se les ha asignado (bata, guantes, lentes protectores y cubrebocas). Estos pasos comprenden la recolección de las diferentes áreas de laboratorio del material residuo biológico infeccioso, el área de almacenamiento temporal y su transporte por personal capacitado al lugar de su eliminación. Para la recolección interna se siguen las siguientes normas: CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 100 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI Los residuos nunca deben ser compactados. Las bolsas y contenedores recolectados deben estar llenos al 80% de su capacidad y no más. Una vez cerrados los contenedores estos no deben ser abiertos. Se utilizaran carritos para uso exclusivo de residuos biológico infecciosos. Los carritos deberán ser lavados y desinfectados diariamente. La persona que realiza esta labor deberá contar con equipo de protección personal individual. Se deben utilizar las rutas de evacuación diseñadas y señaladas con los símbolos que marcan el manejo de RPBI. TRANSPORTE INTERNO 1. El personal responsable recolectara diariamente todos los depósitos de RPBI sólidos, identificándolos. 2. Se deberá identificar a simple vista que los RPBI se encuentren clasificados debidamente, informando cualquier anomalía detectada al responsable en turno. 3. El recorrido se llevara a cabo con las máximas precauciones y utilizando siempre el material de protección asignado. 4. La ruta de RPBI podrá identificarse por flechas de color verde y las siglas RPBI así como el símbolo universal de RPBI. 5. El transporte se realizara hasta el Almacén temporal, este deberá contar con los señalamientos indicados de manejo de Precaución RPBI, así como el símbolo universal de RPBI. 4. ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE RPBI A. Destinar un área exclusiva para el almacenamiento temporal de los RPBI y debe de cumplir con las características establecidas en el punto 6.3.5 de la norma NOM-087- ECOL-SSA1-2002, excepto para los establecimientos incluidos en el nivel 1. B. El Almacén temporal deberá contar con un candado de seguridad al cual solo tendrán acceso el personal asignado. C. Este solo será abierto para el depósito y transporte externo de RPBI por la empresa contratada para su eliminación. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 101 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI D. El periodo de almacenamiento temporal esta sujeto al nivel del establecimiento, como sigue: Nivel I: Máximo 30 días Nivel II: Máximo 15 días Nivel III: Máximo 7 días E. Los residuos patológicos, humanos o de animales (que no estén el formol) deben conservarse a temperatura de refrigeración no mas de 4°C 5. RECOLECCIÓN Y TRANSPORTE EXTERNO. El transporte externo y la disposición final de los RPBI será efectuado por una empresa contratada para este propósito, misma que se encuentra autorizada para este fin por SERMANAT y en cumplimiento de la NOM-087-ECOL-SSA1-2002 para la disposición final de RPBI. La empresa en el momento de la recolección emite un reporte de la cantidad de RPBI recolectados, la cual es firmada por el responsable de laboratorio en turno. Se encuentra establecida y actualizada una bitácora de la gestión de los residuos biológico-infecciosos a fin de evaluar el desempeño de la gestión, así como para mostrar el cumplimiento de la normatividad. 6. ACCIDENTE CON RESIDUOS PELIGROSOS BIOLÓGICOS INFECCIOSOS. Se debe entender como accidente con residuos peligrosos biológico infecciosos los siguientes: Punciones y cortaduras. Salpicaduras con residuos líquidos. Inhalación de gases producidos por los escurrimientos. Derramamientos, caídas o fracturas de bolsas y contenedores. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 102 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI a) En el caso de derrames. Se debe estar en posibilidad de descontaminar y limpiar el sitio contaminado. Para ello se puede emplear una solución de cloro inorgánico al 0.5 por ciento que representa una dilución de 1:10 del blanqueador doméstico habitual; el cual tiene actividad esporicida, tuberculocida, inactiva bacterias vegetativas, es fungicida y virocida. Se sugiere consultar al experto en control de agentes infecciosos y la exclusión del movimiento de personas en el área durante el proceso de desinfección y de limpieza. Se debe disponer de un paquete de materiales de desinfección que incluya: el desinfectante el material absorbente de líquidos las bolsas rojas para contener los materiales de limpieza el equipo de seguridad para la protección de los trabajadores de limpieza. Se deben establecer procedimientos para la contención y limpieza de derrames que incluyan: Salida inmediata del área para prevenir exposición Determinación de si ocurrió exposición. Identificación del residuo derramado. Restricción de acceso al área. Proporcionar el equipo de protección para limpieza. Rociado de los materiales derramados con el desinfectante. Remoción del material derramado. Desinfección, enjuague y limpieza del área. Disposición de los materiales de desinfección y limpieza. Remoción del equipo de protección. Lavado extenso de manos y piel expuesta. Reemplazo de los materiales usados del paquete. b) Incidentes de exposición: El seguimiento adecuado y estricto de los procedimientos que atiendan los casos de exposición de trabajadores durante el manejo de los RPBI como resultado de un derrame o salpicadura, podrán minimizar las complicaciones que deriven de ello. El seguimiento pos exposición es requerido para atender oportunamente cualquier infección. Para ello es importante el uso y seguimiento del material de protección proporcionado y el seguimiento estricto de los puntos tratados en este manual de procedimientos. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 70 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 15 JUNIO 2009 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 103 de 12 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LIMPIEZA Y MANEJO DE RPBI Para el personal a cargo se deberán seguir los siguientes pasos: Evaluación médica posterior a la exposición. Documentar como ocurrió el accidente. Identificar y documentar la fuente de sangre o muestra contaminada que causó el accidente. Notificar al empleado los resultados de las pruebas y que se hagan las recomendaciones pertinentes. Obtener el consentimiento del empleado, para hacer la determinación del VIH y VHB; tan pronto como sea posible documentar los resultados del análisis. Si el empleado no da el consentimiento para el análisis serológico, conservar la muestra de sangre y convencerlo de la necesidad de realizar las pruebas. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11 Enero 2012 Página 104 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 105 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAMBIO 1. Se incluye trabajo no conforme 2. Se incluye formato CAL-71-a 3. Se incluye bitácora de trabajo CAL-71-b 4. Se incluye formato CAL-71-c CAL-70 REVISIÓN 01 FECHA 11/01/2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 106 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) OBJETIVO GENERAL La realización del tamizaje de las muestras de plasma de los donadores en forma de pool para la detección del Virus de la Hepatitis C(VHC), el Virus de inmunodeficiencia Humana (VIH) y el Virus de la Hepatitis B (VHB) Resumen: El VHC está considerado como el principal agente etiológico responsable del 90% al 95% de los casos de hepatitis postransfusional no A no B. El VHC es un virus ARN monocatenario de sentido positivo con un genoma de aproximadamente 10,000 nucleótidos que codifican 3 000 aminoácidos. Como es un virus transportado por la sangre, el VHC puede ser transmitido por la sangre y los productos sanguíneos. Los ensayos serológicos han conseguido reducir en gran medida la transmisión, pero no se ha eliminado por completo El virus de la hepatitis B (HBV) está considerado como uno de los principales agentes etiológicos causantes de la hepatitis crónica, aguda, cirrosis y carcinoma hepatocelular. El virus HBV es un virus ADN circular parcialmente bicatenario con un genoma de aproximadamente 3200 bases que contiene cuatro marcos de lectura abiertos solapantes que codifican todas las proteínas víricas. Como virus transportado en sangre el HBV es transmisible, con un riesgo más alto que el HCV y el HIV, a través de la sangre y los productos hemoderivados. El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) es el agente etiológico del síndrome de Inmunodeficiencia adquirida (SIDA). La infección por el HIV puede transmitirse por contacto sexual, exposición a sangre o productos sanguíneos infectados o por transmisión de la madre infectada al feto. Dentro de las tres a seis semanas a partir de la exposición al HIV, los individuos infectados generalmente desarrollan un síndrome agudo, breve, caracterizado por síntomas de tipo gripal y asociado con valores elevados de viremia en la sangre periférica. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 107 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) El ARN del HIV puede determinarse cuantitativamente en el plasma utilizando las técnicas de amplificación del ácido nucleíco, entre ellas la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). La prueba COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR, versión 1.5, usa la técnica de la PCR para lograr un máximo de sensibilidad y de límites dinámicos para la detección cuantitativa del ARN del HIV-1 en plasma anticoagulado con EDTA o ACD. PRINCIPIOS DEL ENSAYO La prueba consta de cuatro procesos principales para HBV: preparación de la muestra; amplificación del DNA objetivo usando iniciadores complementarios específicos para el HBV; hibridación de los productos amplificados con sondas oligonucleótidos especificas para los objetivos; detección de los productos amplificados fijados a las sondas mediante determinación colorimétrica. Para el caso del HIV y HCV la prueba se basa en cinco procesos principales: preparación de la muestra; transcripción reversa del RNA objetivo para generar ADN complementario(ADNc),amplificación por PCR del ADNc objetivo usando iniciadores complementarios específicos para cada marcador; hibridación de los productos amplificados con sondas oligonucleótidas especificas para los objetivos y por ultimo detección de los productos amplificados fijados a las sondas mediante determinación colorimétrica. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 108 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) PROCESO GENERAL OBTENCION DE LA MUESTRA Y CENTRIFUGACION DE LA MISMA Software DATA SCREEN FORMACION VIRTUAL DE POOLS Y EMISION DE ETIQUETAS Y LISTA Software AT WIN / Equipo HAMILTON FORMACION FISICA DE POOLS Y PLACA DE ARCHIVO Campana de Flujo Laminar PROCESO DE EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS Software AMPLINK / Equipo COBAS AMPLIFICACION Y DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS Software AMPLILINK VALIDACION DE RESULTADOS Y GENERACION DE ARCHIVO (RESPALDO ELECTRONICO) Software DATA SCREEN OBTENCION DE ARCHIVOS PARA INTERPRETACION DE RESULTADOS Y EXPORTACION AL SIBS (Sistema Informático de Banco de Sangre) LOS REPORTES IMPRESO GENERADOS SE GUARDAN 5 AÑOS EN ACTIVO Y 5 AÑOS EN ARCHIVO MUERTO CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 109 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) OBTENCION DE LA MUESTRA Y CENTRIFUGACION Se pueden utilizar muestras con EDTA, CPD, CPDA-1, CP2D, ACD-A y citrato de sodio al 4%. Siga siempre las instrucciones del fabricante de los tubos de muestras. Para la obtención de la muestra se procederá de acuerdo al procedimiento CAL-43 para la obtención de muestras de donadores. En este proceso se utilizan muestras con EDTA. La sangre obtenida con EDTA se puede almacenar a una temperatura de 2 a 30°c (máximo 72 hrs) a partir de su obtención. Una vez obtenida la muestra se procederá a separar el plasma de los hematíes mediante centrifugación a 1600g por 20 minutos. TRABAJO NO CONFORME: Se considera trabajo no conforme muestra con: 1. Lipemia 2. Hemolisis 3. Volumen insuficiente 4. Discrepancia en la identificación 5. No se haya tomado la muestra En estos casos se tomara un piloto del producto plaquetario o se le llamara al donador para la toma de la muestra; se realiza la observación en la bitácora de trabajo CAL-71-b. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 110 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) Software DATA SCREEN FORMACION VIRTUAL DE POOLES DE 6 DONADORES, EMISION DE ETIQUETAS Y LISTA DE TRABAJO Se ingresa a Data Screen siguiendo los pasos: 1. Encienda la computadora que contiene el software Amplilink. 2. Encienda el equipo Hamilton. 3. Encienda la computadora que contiene el software Data Screen y ATwin. 4. Etiquete los tubos de donadores de acuerdo al sistema de laboratorio. 5. Para abrir el software de Data Screen dar doble clic sobre el icono que se encuentra en la computadora. 6. Escriba su nombre de usuario (INP)y contraseña (INP) para ingresar al sistema. 7. Dar clic sobre la opción muestras x 6 CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 111 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) 8. Para crear una nueva placa de archivo que contendrá nuevos pools, dar clic en la opción” Nuevo”. 9. Teclear el código de la placa de archivo que se utilizara (código predeterminado). Este número está compuesto de los últimos cinco dígitos que conforman la etiqueta para placas de archivo. 10. Elegir el número de pools que se desea realizar en la opción “No de posiciones” 11. A continuación aparecerán en la pantalla el número de tubos correspondientes al número de pools que se desea realizar. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 112 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) 12. Pasar por el escáner los tubos de los donadores que formaran parte de un solo pool y colocarlos en el primary rack en la posición que indica en la pantalla de la computadora. 13. cuando todos los tubos han sido escaneados, las imágenes de los tubos de pools deberán aparecer con los puntos de amarillo, lo cual indica que la posición ha sido ocupada por un donador. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 113 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) 14. Dar clic en el botón de grabar. 15. Cuando el archivo es grabado la opción código será activada. Dar clic en códigos para imprimir las etiquetas que identificaran a los pools. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 114 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) 16. Pegar las etiquetas de los pools sobre dos tubos Sarstedt. 17. Llenar los datos y pegar las etiquetas en la hoja de trabajo (CAL- 71 a). CAL-71a 18. Dar click en listados para imprimir el listado de todos los donadores a estudiar. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 115 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 116 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) 19. Salir de Data Screen. Software AT WIN / Equipo HAMILTON FORMACION FISICA DE POOLS Y PLACAS DE ARCHIVO 1. . Colocar el primary rack en el equipo Hamilton. 2. Entrar al software dando doble clic en el icono AT Win, escribir su usuario asignado y su contraseña (ADMIN para ambos casos). 3. Colocar en la placa primaria los tubos de los donadores (tubos primarios) del renglón A al F y del 1 al 10, los tubos Sarstedt en el región H del 1al 10 identificados con sus respectivas etiquetas. 4. Colocar la placa de archivo, identificada con sus respectivas etiquetas. 5. Asegurarse que estén colocadas las suficientes puntas para trabajar. 6. Realizar el Boot Run que sugiere el sistema dar clic en Yes 7. Posteriormente ir al menú de Execute y dar clic en la opción Run Next Method si se quiere seguir usando el mismo método en caso contrario dar Reset Method (esto borrará el anterior y se podrá elegir otro método deseado). 8. Aparecerá la pantalla, en la parte inferior izquierda encontrara el icono Reduce el cual oprimirá encaso de no realizar los 12 pools (si trabaja solo 10 pools), de lo contrario oprimirá el icono START y el sistema se iniciará a trabajar. 9. Si eligió el icono Reduce aparecerá otra ventana donde tendrá que elegir (dar click) los renglones que no serán procesados, estos cambiarán a color gris y posteriormente oprimirá el icono Reduce. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 117 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) 10. Regresará a la ventana inicial, en este momento oprimirá START y el equipo iniciará a trabajar. 11. Al terminar la corrida aparecerá una ventana pidiendo escanear automáticamente o manualmente la identificación de los donadores o pools que no leyó el escáner del equipo Usted eligirá la opción manual y aceptar. Usted leerá con el escáner estos números. Con esto termina el proceso de obtención de pooles. Ir a la campana de flujo laminar. Cualquier duda consultar el manual del equipo. CAMPANA DE FLUJO LAMINAR PROCESO DE EXTRACION DE ACIDOS NUCLEICOS El proceso de extracción puede ser de dos formas: Pre-PCR Preparación de múltiples muestras. Pre-PCR Preparación de muestras individuales (Proceso que usará en caso de que algún pools fuese positivo se haría la apertura para la identificación individual de la muestra positiva). CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 118 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 119 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 120 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 121 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 122 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) Diagrama del Equipo Cobas Preparación de reactivos para el equipo COBAS Se preparan reactivos: Específicos Genéricos CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 123 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) Reactivos Especificos Reactivos Genéricos CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 124 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 125 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 126 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) VALIDACION DE RESULTADOS Revisar los resultados generados en los Cobas, por cada control y muestra el equipo genera dos resultados uno detecta el virus humano (H) y el otro detecta el control interno. NC= control negativo PC= control positivo M0JXRZA= nombre del pol RESULTADO INTERPRETACION DEL RESULTADO NUMERO DEL ANILLO MUESTRA (S) O CONTROL(C) NUMERO DE POSICION EN EL ANILLO CONTROL - CN + CP - CN + CP CAL-70 HIV HIH + AII + + HCV ACH + ACI + + HBV ABH + ABI + + + + + + + + + + + Cualquier otro resultado la corrida se invalida (se repite el proceso) CORRIDA VALIDADA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 127 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) PROCEDIMIENTO DE CONTROL DE CALIDAD 1. Por cada prueba se deben procesar al menos un control Multiprep (-) y uno (+), y para cada control su correspondiente control interno. Para que el Control Negativo sea válido, la Absorbancia a 660 nm para el MP (-) C debe ser < 0.1 y la obtenida para el control interno MP IC asociado ≥ 0.2. Para que el Control Positivo sea válido, la Absorbancia a 660 nm para el MP (+) C debe ser < 0.1 y la obtenida para el control interno MP IC asociado ≥ 0.2. Resultado para CI (HCV, HIV1,HBV) : Resultado para: Control Negativo Control Positivo HCV A660 HIV-1,HBV A660 Comentario A660 Comentario <0.1 <0.2 Negativo ≥ 0.2 Valido ≥ 1.0 ≥ 1.0 Positivo ≥ 0.2 Valido En caso de no cumplir con algunos de estos criterios se invalida la prueba y se tendrá que repetir todo el proceso de extracción, amplificación, desnaturalización y detección. Nota: para información más detallada consultar los insertos correspondientes. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 128 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) INTERPRETACION DE RESULTADOS: Resultados para HCV A660 Comentario < 0.2 NEGATIVE Resultados para CI A660 Comentario ≥ 0.2 VALID < 0.2 NEGATIVE < 0.2 INVALID ≥ 0.2 POSITIVE CAL. VALID Resultados para HIV-1 A660 Comentario < 0.2 NEGATIVE Resultados para CI A660 Comentario ≥ 0.2 VALID < 0.2 NEGATIVE < 0.2 INVALID ≥ 0.2 POSITIVE CAL. VALID Resultados para HBV A660 Comentario < 0.2 NEGATIVE Resultados para CI A660 Comentario ≥ 0.2 VALID < 0.2 NEGATIVE < 0.2 INVALID ≥ 0.2 POSITIVE CAL. VALID Interpretación La muestra es negativa para ARN del HCV Resultado no válido, repita el todo procedimiento para la muestra no válida La muestra es positiva para ARN del HCV Interpretación La muestra es negativa para ARN del HIV-1 Resultado no válido, repita el todo procedimiento para la muestra no válida La muestra es positiva para ARN del HIV-1 Interpretación La muestra es negativa para ADN del HBV Resultado no válido, repita el procedimiento para la muestra no válida La muestra es positiva para ADN del HBV Nota: para información más detallada consultar los insertos correspondientes. CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 129 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) VALIDACION, INTERPRETACION Y EXPORTACION DE RESULTADOS CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 71 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 11-Enero-2012 Página 130 de 22 PROCEDIMIENTO PRUEBA DE ACIDOS NUCLEICOS (NAT) CAL-71-c Terminado este proceso se procederá de forma manual o automática (interfaz) el ingreso de los resultados al SIBS. Documento asociado CAL-43 CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha:01 Noviembre 2011 Página 131 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 132 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS CAL-70 CAMBIO REVISIÓN FECHA Diagramas de flujo 1 01/11/11 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 133 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS Introducción El monitoreo de pacientes de diagnóstico conocido es llevado a cabo por la conjugación de la determinación de subpoblaciones de linfocitos CD4+; CD8+; CD3+ & CD 45+ y determinando el porcentaje de ellos, así mismo, establecer el radio CD8+/CD4+. Principio de estudio Anticuerpos monoclonales conjugados con diferentes cromógenos con especificidad conocida se desafían con células de fenotipo desconocido a fin de establecer la presencia o ausencia con el empleo de citometría de flujo de los marcadores CD 4+, CD8+, CD45+ y CD3+ Responsabilidades Jefe del Dpto Jefe del Lab. Medico de B.S. Químico Laboratorista Auxiliar Material…….. a) Tubos trucount b) Pipeta semiautomática (25 µl, 50 µl, 1000 µl) c) Puntas para pipeta semiautomática CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 134 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS Tipo de muestra: a) Biometría hemática PROCESO: 6. Recepción de muestra: a. Biometría Hemática 7. Cuantificación de cantidad de leucocitos empleando citometría con equipo para Biometría Hemática 8. Preparación de muestra acorde a inserto 9. Antes de usar el citómetro de Flujo, se recomienda: a. Proceso de lavado largo b. Calibración c. Usar en cada corrida un control CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 135 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS A.- Lavado previo al uso del equipo CVE: BDIS LAVADO ENCENDER REVISAR PRESION Cambiar de ANALIZADOR (LO + PRIME ; OBSSERVAR BURBUJAS) VENT-TANK CHANGE A VENT-RUN CPU LOADER MANAGER MAINTENANCE MONITOR DILUYENTE : LLENAR MAX ¾ IMPRESORA DESECHOS: VACIAR TEST OPTION COLOCAR LOS TUBOS EN EL RACK COMO SE INDICA EN LAS POSICIONES: EQUIPO RUN ESCOGER LONG O 39.. FAC’S CLEANE SHORT 40. FAC’S RINSE CLEAN HI COLOCAR EL EN EL EQUIPO RACK MONITOR RUN RUN ESPERAR A QUE TERMINE EL LAVADO CAL-70 FILE DONE QUIT Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 136 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS B.- Realizar Calibración CALIBRACION (DIARIO O EN CADA USO DEL INSTRUMENTO) 3) Ir A: 1) PREPARAR DOS TUBOS CON: A) B) 1 mL de Fac´s Flow 3 mL de Fac´s Flow Mezclar suavemente las microesferas CALIBRITE y añadir una gota (invertir completamente el vial) como se indica en la siguiente tabla ICONO DE FAC´COMP INGRESAR NOMBRE DEL USUARIO FAC´S FROM INGRESAR Y/O VERIFICAR CADA UNO DE LOS # DE LOTE DE LA SEGUNDA COLUMNA DE LA CAJA DEL CALIBRADOR (ETIQ. NARANJA) Y DEL APC ( ETIQ. VERDE) EN EL CARRUSEL PONER LOS TUBOS sin tapón EN LAS SIGUIENTES POSICIONES: 1. TUBO A 2. TUBO B 39. FAC´S CLEAN 40. FAC´S RINSE 2) Mezclar por inversión . EN SOFTWARE : RUN CLEAN NOTA: Es necesario revisar el inserto para mayor detalle y en caso de alguna modificación. CAL-70 QUIT Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 137 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS C.- Preparación de muestras para conteo de células CD4+ CD4/CD8 (AUTOMATICO) ID Rack Ingresar # del Rack ICONO WORLIST MANAGER BARRA IZQUIERDA PANTALLA PRINCIPAL Assign Rack CD 4 (Un solo tubo) MULTISET LINFOS T / B (cuando son tres tubos) COLOCAR LOS TUBOS EN EL ORDEN QUE SE INDICA. Y INGRESAR LOS DATOS DE LAS MUESTRAS ACEPTAR SKIP FAC’S COMP (Si ya se realizó la calibración previamente) Checar que en el recuadro derecho este Multiset ACEPTAR EQUIPO EN LAS POSICIONES 39.. FAC’S OPERADOR EQUIPO ACEPTAR RUN RUN HI CLEANE 40. FAC’S RINSE COLOCAR EL RACK EN EL EQUIPO CAL-70 AL FINALIZAR LA CORRIDA DEL PROGRAMA SE REALIZA EN AUTOMATICO UN LAVADO DEL EQUIPO. Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 138 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS EQUIPO CD4/CD8 (MANUAL) PANTALLA PRINCIPAL ICONO BARRA IZQUIERDA OPERADOR ACEPTAR MULTISET Abri---USUARIOS--banco sangre2--MAYO 2008 PANTALLA SET UP Data Source FAC’S COMP ACEPTAR From Cytometer:Aquisition with Analysis Entry Level NamePrefix Sample name viewReports Until “Next” Button Pressed LAUNCH SKIP FAC’S COMP Automatics SavingOption Data Files Fac´station: USUARIOS. banco sangre 2 Location MAYO 2008 Laboratorio Location SELECCIONAR MAYO 2008 Physician Report Location Summary Report Use Date Generated File Name Location Export Document Use Date Generated File Name QUIT SELECCIONAR CAMBIAR LA FECHA SI PERDER LA TERMINACION Location Lot IDs SUBIR EL SEGUNDO TUBO P/CD8 ACQUIRE SAVE ACCEPT INTRODUCIR NOMBRE.FECHA Ejemp.: SOLIS.020508 SUBIR PRIMER P/CD4 EL TUBO EQUIPO (CD4-CD8-CD19). Y EN LAS RUN 39.. FAC’S CLEANE CAL-70 COPIAR RESULTADOS QUIT HI POSICIONES COLOCAR EL RACK EN EL EQUIPO ACQUIRE ACQUIRE # Muestra 40 . FAC’S RINSE AGITAR PRIMERO SUBIR EL SEGUNDO TUBO P/CD19 Panel Sample ID # registro COLOCAR LOS TUBOS EN EL ORDEN COMO SE INGRESARON MOVER LOS TUBOS CON EL CONTROLADOR MANUAL Don´t Save CAMBIAR LA FECHA SI PERDER LA TERMINACION 020508.exp Continue Absolute Counts Bead # lote # De Perlas 020508.sum AL FINALIZAR LA CORRIDA DEL PROGRAMA SE REALIZAR UN LAVADO LARGO DE FORMA MANUAL. Linfos T CD4,CD8 y Linfos B RUN TEST Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 139 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS Resultados Obtención de resultados impresos en automático ó vaciar en el formato CAL-70 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 75 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 01 Noviembre 2011 Página 140 de 11 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS CUANTIFICACION DE SUBPOBLACIONES LINFOCITOS LAVADO EXHAUSTIVO REVISAR PRESION VENT-TANK CHANGE DESCONECTAR LA TUBERIA QUE VA AL FILTRO Y CONECTAR LA TUBERIA BLANCA(DEL FAC´S FLOW) EL EL TUBO DE LA CANULA 3 ML DE FAC´S RINSE DILUYENTE : LLENAR MAX ¾ DE SOL FAC´S RINSE ENCENDER EL EQUIPO RUN HI DESECHOS: VACIAR ESPERAR POR 15 MIN. DESPRESURIZAR VENT-TANK CHANGE ENCENDER EL EQUIPO EL EL TUBO DE LA CANULA 3 ML DE AGUA DESIONIZADA DILUYENTE : LLENAR MAX ¾ DE AGUA DESIONIZADA APAGAR EL EQUIPO DESECHOS: VACIAR RUN HI ESPERAR POR 20 MIN. REVISAR ENCENDER PRESION ANALIZADOR (LO + PRIME ; OBSSERVAR BURBUJAS) VENT-TANK CHANGE APAGAR EL EQUIPO REGISTROS Ningún registro asociado CAL-70 DILUYENTE : LLENAR MAX ¾ DE SOL FAC´S FLOW MONITOR DESECHOS: VACIAR IMPRESORA CPU PANTALLA PRINCIPAL Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 141 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: Firma: Firma: Firma: Fecha: Fecha: Fecha: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 142 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes CAMBIO CAL-02-B REVISIÓN FECHA Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 143 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes DESCRIPCION DEL PROCESO Para el Banco del Instituto Nacional de Pediatría, una muestra primaria es una muestra de sangre tomada a un paciente o a un candidato a donar para ser enviada o tomada en el Banco de Sangre y la cual está destinada para practicarle un examen en el laboratorio del mismo. Se le conoce como muestra primaria debido a que es la muestra de la cual se parte para generar alícuotas para practicar los exámenes La toma de muestra primaria se efectúa por personal del Banco de Sangre especialista en toma de muestra en base a lo especificado en la solicitud de trabajo. Para la toma de muestra primaria se toman en cuenta las siguientes consideraciones: Nombre de la prueba para la que se toma la muestra primaria Condiciones en las que se debe presentar el paciente previas a la toma de muestra Tipo y cantidad a tomar de la muestra primaria, con descripciones de los contenedores de la misma y cualquier aditivo necesario. El horario más adecuado para la toma de muestra, si se requiere La información clínica, autorización y/o consentimientos cuando se requiera Las condiciones de preservación de la muestra primaria Los requisitos de acondicionamiento de la muestra Los detalles de transportación desde los sitios de toma de muestra hasta las áreas analíticas Los criterios de aceptación para las muestras primarias. MATERIAL - Tubos tipo vacutainer con anticoagulante (EDTA y citrato) y sin anticoagulante. Guantes Torundas con alcohol Agujas estériles de calibre 20 y 21 Jeringas de 5 y 10 ml Agujas tipo vacutainer CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 144 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes - Camisas para tubo vacutainer Ligaduras Gradillas Contenedor para desechos punzo-cortantes Mezclador para biometría. PROCEDIMIENTO 1. Solicitar al paciente o donador una identificación con fotografía y corroborar los datos con los de la solicitud y etiqueta y colocarla en el tubo. 2. El personal de laboratorio solicita al paciente y/o donador que tome asiento en la silla de toma de muestra, y selecciona la vena asignada para puncionar. NOTA En caso de observar alguna lesión dérmica como datos de múltiples venopunciones (que podría ser sospechoso de antecedente de administración de drogas intravenosas, donación reciente), huellas de rascado (que podría ser sospechoso de reacción alérgica activa o proceso infeccioso local), o dermatitis local (condicionada por infecciones virales como herpes, verrugas), lo informará al médico que valorará al candidato a donador para aceptación o rechazo de acuerdo a su criterio. 3. El personal encargado de tomar la muestra se coloca guantes para la toma de muestra, realiza la asepsia, en un área de 5 cm. aproximadamente en zona de punción, realizando una limpieza vigorosa de arriba hacia abajo sin invertir el orden, utilizando jabón/ alcohol/isodine dejando secar, se liga inmediatamente y no se vuelve a tocar el área ya preparada para la punción, inmediatamente después se realiza la punción de la vena. MÉTODO 1 CON JERINGA: 1. Ligar el brazo e introducir la aguja en la vena, para que el sangrado sea más rápido, se le pide al paciente o donador que apriete el puño y que no mueva ni doble el brazo. 2. Quitar la ligadura antes de retirar la jeringa, pidiendo al paciente o donador que abra su puño. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 145 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes 3. Al retirar la aguja, colocar una torunda con alcohol en el sitio de punción presionando gentilmente, pidiendo al paciente o donador que mantenga su brazo doblado de 3 a 5 minutos. 4. Trasvasar puncionando la parte central del tapón, vaciar primero las muestras en los tubos que contienen anticoagulante y después las muestras en los tubos sin anticoagulante. 5. Desechar la aguja o jeringa directamente en el contenedor sin taparla. NOTA: Por ningún motivo se deben tomar muestras solo con aguja, en caso de pacientes pediátricos se debe solicitar apoyo al servicio de pediatría. MÉTODO II VACUTAINER: 1. La aguja para el vacutainer es especial ya que se fija a la camisa en forma de tornillo. 2. Al pinchar la vena lo único que se sujeta es la camisa, para así tener un apoyo al introducir los tubos en la camisa. se toman primero las muestras que no requieran anticoagulante y después las que requieren de éste, sacar el tubo sin retirar la aguja de la vena, en caso de muestras con anticoagulante, colocarla en el mezclador de biometrías. Procurar no hacer movimientos bruscos para evitar lastimar al paciente o donador. así mismo nunca se saca la aguja sin haber retirado el tubo totalmente. 3. Al terminar de tomar la última muestra se retira la ligadura y pedir al donador o paciente que abra el puño, retirar la aguja y presionar la vena gentilmente con una torunda de algodón con alcohol indicándole que mantenga el brazo doblado de tres a cinco minutos aproximadamente. 4. La aguja se desecha en un envase rígido de plástico (contenedor) que no ofrezca ningún peligro. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 146 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes TIPOS DE PRUEBAS, TUBOS EN LOS QUE SE RECOLECTA LA SANGRE Y VOLUMEN REQUERIDO TIPO DE PRUEBA Biometría Hemática VOLUMEN REQUERIDO TEMPERATURA (ml) 6 Grupo sanguíneo 4-6 Tubo morado (anticoagulante EDTA) NAT 4-6 CD4/CD8 4-6 Tubo rojo (sin anticoagulante) o Tubo dorado CARGA VIRAL 4-6 SEROLOGIA 4-6 Las muestras se conservan a temperatura ambientes mientras se pasan al laboratorio para su análisis TUBOS PARA RECOLECTAR LA MUESTRA Una vez que el especialista en toma de muestras obtiene la muestra primaria, la identifica de manera única (ID para donadores o nombre del paciente) incluyendo la identificación de quién tomó la muestra, la fecha y hora de la toma. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 147 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes Nota: Cualquier desviación a las condiciones pre analíticas para la obtención de una muestra adecuada para análisis, se debe informar al donador y/o paciente y en su caso repetir la toma, o anotarse en la solicitud. Los materiales empleados par la toma, son desechados en los contenedores que les corresponda según lo marca la norma NOM-087 aplicable a los residuos peligrosos biológico – infecciosos. Las muestras son inspeccionadas por el personal que las recibe y en caso de ser aceptadas para su procesamiento se ingresan en la bitácora y en el sistema de informático del laboratorio. Las que no cumplen los criterios de inspección se tratan como PRODUCTO NO CONFORME. La temperatura de almacenamiento dependerá del tipo de estudio a realizar: Área de red fría de 1 a 6 ºC, -18°C o menor en refrigeradores, congeladores o ultra congeladores. Área de temperatura ambiente TRASNPORTE DE MUESTRAS Es responsabilidad del personal del Banco de Sangre el transporte hasta el área de laboratorio del Banco de Sangre de las muestras tomadas en las secciones de: a) Toma de Muestras perteneciente al Laboratorio Central b) Toma de Muestras del Banco de Sangre c) Sección de flebotomía del Banco de Sangre procederán de la siguiente forma: Usando hieleras de plástico o unisel, el personal coloca las muestras previamente tapadas e identificadas, en la gradilla que se encuentra dentro de la hielera. La hielera es propiedad del Banco de Sangre, por lo que está identificada como: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 148 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes Los recipientes secundarios deben llevar las etiquetas de: Riesgo biológico Riesgo secundario (según caso) Datos del laboratorio al que van referidos Datos de orientación Señal de orientación CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 149 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes NOTA: Para la recepción de muestras es necesario el uso de guantes. Quien recibe los contenedores de las muestras verifica que estén bien cerrados. 1. Revisa que se encuentren a la temperatura correspondiente. 2. Revisa que las muestras estén correctamente identificadas. 3. Revisa el correcto llenado de la solicitud de cada muestra. De detectar anomalías en esta inspección no se recibirán las muestras afectadas. INSPECCION DE LA MUESTRA El personal Químico/Técnico que recibe de muestras primarias, lleva a cabo la inspección de las mismas según el estudio solicitado tomando como base los siguientes criterios de aceptación: a) Tipo de muestra: El tipo de muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a realizar. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL 76 Nivel de Revisión: 00 Fecha: 03 enero 2011 Página 150 de 10 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de recolección y toma de muestras de pacientes b) Volumen: El volumen de muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a realizar. Una cantidad excedente o deficiente puede provocar problemas para la realización del (los) examen(es) por lo que en este caso se procede a consultar con el encargado de realizar al(s) prueba(s). c) Contenedor El contenedor en el que se recibe la muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a realizar . d) Aditivo El aditivo de la muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a realizar. e) Temperatura de transportación y preservación de la muestra La temperatura a la que se recibe la muestra debe cumplir con lo indicado en la especificación del estudio a realizar. f) Identificación de la muestra Las muestras deben estar identificadas por lo menos con el nombre del paciente, el cual debe coincidir con el nombre que aparece en la solicitud de estudios. Si alguna muestra no cumple con los criterios definidos en la especificación del estudio a realizar y/o no está identificada, no se recibe en el laboratorio y se le informa al cliente la razón de ello. Si la muestra cumple con los criterios, se recibe en el laboratorio, con la solicitud correspondiente y se registra su entrada en la bitácora y en el sistema de informática del laboratorio (SIL)-. REGISTROS F-A-14-26 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02- enero-2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 1 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Nombre: Nombre: Nombre: EBC Ma. Teresa de Lourdes M. en C. Guillermo Escamilla Dra. Dinora V. Aguilar Flores Camacho Guerrero Escobar Firma: Firma: Firma: Fecha: 2 Enero 2012 Fecha: 2 Enero 2012 Fecha: 2 Enero 2012 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 2 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN CAMBIO 1. Modificación de crioprotectores 2. Requisitos de recepción de Células Tallo 3. Se incluye flujograma de preparación de equipo para el proceso. 4. Se incluye flujograma de RECEPCIÓN Y PROCESO 5. Se incluye manejo de PNC CAL-02-B REVISIÓN FECHA 01 2 de enero 2012 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 3 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN ABREVIATURAS CPH CPHSP SP MO CMN ºC DMSO NaCl N2L U. V. BH Hb Hto EDTA Kg μl SSF Dx Tx CAL-02-B Células Progenitoras Hematopoyéticas Células Progenitoras Hematopoyéticas de Sangre Periférica Sangre periférica Médula Ósea Células Mononucleares Grados Centígrados Celsius Dimetilsulfoxido Cloruro de Sodio Nitrógeno Líquido Ultra violeta Biometría Hemática Hemoglobina Hematocrito Anticoagulante, Etilendiaminotetraacético disódico Kilogramo Microlitro Solución Salina Fisiológica al 0.9% Diagnostico clínico Tratamiento Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 4 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Propósito y Alcance 1.1 Propósito Criopreservar las Células Progenitoras Hematopoyéticas (CPH) obtenidas mediante procedimientos de Aféresis y en el quirófano; conservando su viabilidad, esterilidad y funcionalidad. 1.2 Alcance Todos los usuarios podrán seguir este procedimiento para la criopreservación y el trasplante de CPH. 2. Responsables Personal Responsable del Cumplimiento de este Documento Puesto Departamento Banco de Sangre Jefe del Laboratorio Personal adscrito al Laboratorio CAL-02-B Banco de Sangre Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 5 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 3. Introducción 3.1 Antecedentes La logística de trasplantes de Células Progenitoras Hematopoyéticas (CPH) incluye en la mayoría de casos, una etapa de criopreservación a temperaturas de — 196°C y en condiciones óptimas garantizan su almacenamiento durante el tiempo que sea necesario, con la mínima pérdida de sus capacidades de autorregulación y diferenciación. Las técnicas de congelación más extendidas utilizan DMSO como crioprotector para optimizar la viabilidad y funcionalidad de las células reduciendo la proporción de agua congelada y la deshidratación intracelular durante el proceso de congelación. La presencia del crioprotector hace que las suspensiones celulares descongeladas sean hipertónicas y como las células responden importando y exportando agua frente a un cambio de osmolaridad, el retorno a condiciones isotónicas puede resultar en la superación de los límites mecánicos de las membranas plasmáticas por una entrada masiva de agua al citoplasma (choque osmótico). Este fenómeno es de especial importancia durante la reconstitución y manipulación de células descongeladas debido a que la membrana celular es un conjunto de lípidos y proteínas organizados que por debajo de los 20°C pierde fluidez, limitando su resistencia y por tanto su capacidad de respuesta osmótica. 3.2. Condiciones generales para la preservación de la ultra estructura y función celular La resistencia al frío –y al congelamiento – depende de un gran número de diferentes factores. En primer lugar el descenso repentino de la temperatura puede tener un efecto adverso en ciertas células: una forma de CHOQUE TÉRMICO, que puede ocurrir tanto por arriba y por debajo del punto de congelamiento. También, la FORMACIÓN DE CRISTALES DE HIELO, dentro y fuera de las células pueden acarrear un gran DAÑO FÍSICO. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 6 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Otra consecuencia de la formación del hielo es un cambio del medio ambiente extracelular, en donde el congelamiento del agua tiene como resultado un INCREMENTO EN LA CONCENTRACIÓN DE SALES de la solución, elevándose a un nivel específico que corresponde al punto. Un incremento tal en la concentración de los electrolitos permite la DESHIDRATACIÓN CELULAR. Es de notar que las células que son más resistentes, son las mismas que son más resistentes en bajar su temperatura. 3.3 Choque térmico El choque térmico puede ocurrir cuando ciertas células son enfriadas demasiado repentinamente, incluso en la ausencia de cristalización. El rango crítico oscila entre + 15 ºC y 0 ºC, aunque también puede ocurrir entre 0 ºC y - 80 ºC. El choque térmico comienza en la membrana como un resultado de: ● Contracción diferencial de varios componentes de la membrana ● Rompimiento mecánico ● Cambios conformacionales en la topografía de la membrana El daño infligido no es dependiente significativamente del perfil CATIONICO en el fluido extracelular, sin embargo, el perfil ANIÓNICO es mucho más importante. Los aniones más importantes, desde el menos dañino al más dañino, son el acetato, cloruro, nitrato, yoduro y sulfato. El choque térmico pude ser minimizado por: ● Agentes crioprotectores ● La presencia de ciertos fosfolípidos (fosfatidil serina) ● Enfriamiento lento ● Acondicionamiento previo en medios de alta concentración de sales 3.4 Umbral de deshidratación La mayoría de las células de los vertebrados son susceptibles incluso a una deshidratación parcial (tanto a una temperatura normal o baja). Dependiendo del tipo celular específico y de la especie, las células no pueden tolerar la pérdida de más del 20 al 80% de su línea basal de contenido de agua, estableciéndose así un límite del umbral de deshidratación, en el cual las estructuras celulares sufren un daño irreversible. La correlación entre la resistencia de las células a la deshidratación y su CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 7 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN resistencia a las bajas temperaturas es un reflejo de los efectos en el balance iónico. Esto es, el incremento en la concentración de sales que acompaña a la cristalización es el responsable de los efectos más dañinos. El incremento en la concentración de sales induce la precipitación de proteínas dañando la estructura lipoproteína de la membrana. Al mismo tiempo, la cristalización de los amortiguadores electrolíticos puede inducir grandes cambios del pH. El incremento en la concentración de ciertos iones y compuestos tiene efectos tóxicos en el interior celular. El congelamiento también puede afectar la naturaleza coloidal del medio intracelular, un efecto que puede ser reversible o irreversible. El sistema coloidal puede separase en dos fases distintas con moléculas de agua asociadas, siendo eliminadas de las macromoléculas orgánicas de tal manera que posteriormente se agregan y se vuelven vitrificadas. 3.5 Velocidad de congelamiento y calentamiento El método ideal del congelamiento y la velocidad óptima de enfriamiento dependen de varios factores conflictivos, muchos de los cuales son pobremente entendidos. Las condiciones ideales son a menudo determinadas por pruebas de ensayo y error, dando como resultado protocolos, en donde se establece la velocidad del enfriamiento; sí la temperatura debería de ser disminuida en intervalos de tiempo; qué agente crioprotector es empleado; etc. El objetivo es prevenir el choque térmico, los efectos adversos de la excesiva concentración de sales, y el daño al medio coloidal de la célula. En las velocidades de enfriamiento para uso rutinario, la CRISTALIZACIÓN y el INCIO (SEEDING) siempre comienzan en el compartimiento extracelular. Esto significa que el balance osmótico de la célula es perturbado, provocando una deshidratación inicial. Una vez que el hielo ha empezado a formarse, un factor importante, con respecto en mantener la viabilidad durante la subsecuente congelación, es el VELOCIDAD DEL CAMBIO DE TEMPERATURA. Esto determina: ● La extensión del tiempo de las células durante el punto eutéctico, por ejemplo, el tiempo transcurrido en que son expuestas a una alta concentración de sales ● La velocidad de congelamiento intracelular ● El tamaño y la forma de cualquier cristal de hielo formado. Si el enfriamiento es lento, el crecimiento de los cristales de hielo en el compartimiento extracelular es de tal manera que las células se contraen y son expuestas a altas concentraciones de sales. Subsecuentemente, la fase líquida se congela a la CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 8 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN temperatura eutéctica. Si el enfriamiento es muy rápido, el agua en el interior de las células forma pequeños cristales de forma irregular que son relativamente inestables. Si las células son descongeladas subsecuentemente muy lentamente, estos cristales se agregarán a una forma más grande, formando cristales más estables, los cuales pueden causar daño. El incremento en la concentración de sales que acompaña al proceso de congelamiento causa contracción celular, y si continúa por encima de cierto umbral, permite la permeabilización de iones en la membrana. Por ello, la VIABILIDAD CELULAR depende de la velocidad de enfriamiento. La MAYOR SOBREVIDA a una cierta velocidad disminuirá conforme esta velocidad se incrementa. La VELOCIDAD IDEAL es disminuyendo lentamente la temperatura, que permita a las células perder suficiente agua para prevenir el congelamiento intracelular prematuro. Sin embargo, si la velocidad es demasiadamente lenta, las células serán expuestas a altas concentraciones de sales por un largo periodo de tiempo. Además, el rango ideal de enfriamiento depende del VOLUMEN CRÍTICO de las células que es definido por: ● La permeabilidad de la membrana celular al agua ● El área de la superficie de la membrana ● La superficie de la célula a su radio de volumen. En resumen, podría decirse que la más simple explicación por el cual una velocidad ideal de enfriamiento existe para ello, es porque la viabilidad celular depende de dos factores conflictivos, los cuales dependen de la velocidad del reenfriamiento. El factor principal que causa la perdida de la viabilidad es la formación de cristales de hielo intracelularmente, y especialmente la agregación de estos cristales durante el descongelamiento. A una velocidad lenta de enfriamiento la alta concentración de sales resultante ejerce efectos adversos cuando el agua intracelular –que tiene un alto potencial químico- difunde hacia el exterior celular y se congela en el compartimiento extracelular. Los PORCENTAJES MÁS ALTOS DE SOBREVIDA son obtenidos en una variedad de velocidades de enfriamiento referida como la ZONA DE TRANSICIÓN, en el cual el efecto de ambos mecanismos es mínimo. 3.6 Fenómeno a temperaturas bajas Hay un gran consenso de información acerca de los cambios biofísicos y bioquímicos que ocurren en las células vivientes en temperaturas inferiores a los 0 ºC. Se puede concluir que, a no ser que la temperatura de almacenamiento sea demasiada baja, algunas células continuarán viviendo y su tiempo de sobrevida dependerá de su radio metabólico residual que será lentamente desacelerado a una mayor o menor extensión. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 9 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN A temperaturas entre 0 ºC y - 40 ºC, que no es lo suficientemente baja para la preservación eficientemente de ciertos tipos celulares, la difusión procede y esto puede modificar el balance iónico en el medio. A temperaturas más bajas, estas soluciones de electrolitos son solidificados en eutéticos. La estructura cristalina del hielo puede cambiar también (con el crecimiento de cristales o recristalización) resultando en un serio daño físico a estructuras biológicas importantes. 3.7 Preservación a temperaturas bajas En el mundo de los seres vivos, la temperatura de -70 ºC es considerada el umbral de temperatura más bajo en el cuál ningún proceso vital esta permitido. Cuando se contempla el almacenamiento a largo o muy largo plazo, temperaturas por debajo de este umbral deben de ser empleadas. Muchos investigadores, conservan células almacenadas en la presencia de algún agente crioprotector (por ejemplo, Dimetilsulfoxico [DMSO] o glicero, HES, Albúmina), para prevenir cualquier daño, al momento en que son almacenadas a temperaturas inferiores de -130 ºC. En al práctica, es difícil creer que cualquier proceso dañino puede ocurrir todavía a esta temperatura que corresponde en la cual el agua se vuelve vitrificada. Algunas células particularmente lábiles, pueden necesariamente almacenarse a temperaturas extremadamente bajas de -196 ºC, como es el caso del NITROGENO LIQUIDO (N2L). 3.8 Medición de la Temperatura Debido a que la velocidad de congelamiento y descongelamiento pueden tener un mayor impacto en la viabilidad de las células y tejidos, deben de ser medidas en una forma cuantitativa. La mejor manera de realizarlo es generar una curva completa que describa el proceso de congelamiento y descongelamiento. Para esto, lo siguiente puede ser determinado: ● El enfriamiento antes de que el congelamiento inicie (1) ● El tiempo de super-enfriamiento (*) y sus parámetros (2) ● El inicio de la cristalización y la duración de la meseta de la fase de transición (3) ● El rango en el cual la temperatura desciende después de la fase de transición (4) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 10 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Esta curva es referida como el PERFIL DE LA TEMPERATURA del sistema en consideración y puede ser normalizada a una referencia medible para su fácil manipulación. El parámetro más posible de estimar el rango de enfriamiento, es el tiempo en que la temperatura cae desde 5 ºC, (al punto en el cual la mayor parte del cambio de fase o eutéctico procede, con su correspondiente liberación del calor latente de fusión) hasta -50ºC. Sobre este rango, la temperatura tiende a volverse lineal en función del tiempo. Ver figura 1. (*) SUPER-ENFRIAMIENTO: Durante el proceso de congelamiento, el superenfriamiento constituye una fase importante y crítica del perfil de temperatura. En términos prácticos, la manera en que una solución es enfriada por debajo de su punto de congelación puede determinar cómo ocurrirá el inicio de la formación de cristales de hielo y por ende la forma de cristalización. Figura 1. Perfil de la temperatura durante el proceso de congelamiento controlado. Congelamiento ideal Incremento en la velocidad de enfriamiento 3.9 Agentes crioprotectores Las causas principales de la destrucción celular son la formación de hielo intracelular, y la exposición a altas concentraciones de sales. El éxito durante el congelamiento depende en mantener un volumen de agua suficiente en la fase líquida, tanto en los compartimientos intracelular y extracelular, para mantener los electrolitos en solución. El INICIO y la subsecuente CRISTALIZACIÓN pueden ser inhibidas por la inactivación CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 11 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN del punto del potencial de condensación por medio de un ENVENENAMIENTO QUÍMICO. Los agentes usados para este fin son capaces de unirse a las moléculas del agua a través de puentes de hidrógeno y son referidos como CRIOPROTECTORES, son muy diversos en estructura química pero todos actúan de la misma manera. Cualquiera que sea su estructura, todos son muy solubles en agua y por su capacidad de formar puentes de hidrógeno con las moléculas de agua, disminuyen el punto de congelamiento de cualquier solución en la cual son incluidos. La segunda propiedad importante de estos agentes es de que no son tóxicos a las células. La toxicidad en este caso es más difícil redefinir a consecuencia de condiciones externas, tan opuestas a la naturaleza de producto en sí mismo. En la práctica, la toxicidad depende de la concentración del agente crioprotector, la tonicidad del medio, y de cómo las células están en contacto con el agente. Las otras variables que determinan la extensión a la cual un aditivo en particular será capaz de proteger las células de un sistema biológico dado dependen de factores tales como el peso molecular del compuesto y su habilidad de atravesar la membrana celular. En términos generales los agentes crioprotectores modulan las propiedades eutécticas de una solución de tal manera que la cantidad de hielo formado y en consecuencia, la concentración de sales es reducida. Por disminuir el punto de congelamiento del fluido extracelular, ellos inhiben el flujo de agua intracelular, previniendo así la disminución del volumen celular a su mínimo volumen crítico. Por reducir la retracción celular, estos agentes atenúan la hiperconcentración del fluido intracelular y por ello inhiben la precipitación de las proteínas. En la práctica, una solución salina isotónica (9 gramos de NaCl por litro) en la presencia de 1% de DMSO alcanzará una concentración de 50 g/L a una temperatura de -5 ºC. En la presencia de 5% de DMSO, esta concentración no será alcanzada hasta que la temperatura haya descendido a -20 ºC y a una concentración de 10% de DMSO no se alcanzará hasta los -50 ºC. La cantidad del daño inducido en las células durante el congelamiento depende de dos factores conflictivos, y ambos dependen de la velocidad de enfriamiento: a velocidades que son demasiado lentas, altas concentraciones de sales serán generadas, ya velocidades que son demasiado rápidas, el hielo se formará en el interior de las células. La máxima viabilidad es obtenida por el enfriamiento a una velocidad en la zona de transición en el cual el efecto combinado de ambos mecanismos es minimizado. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 12 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Como regla general, el agente crioprotector parece proteger a las células a velocidades de enfriamiento lento en el cual el daño asociado con los EFECTOS DE SOLUCIÓN predominan. Basadas en observaciones empíricas, se ha demostrado que el resultado de incrementar la concentración de un agente crioprotector (por ejemplo, glicerol o DMSO) en la suspensión celular siendo enfriada a diferentes velocidades, es trasladar el radio óptimo más inferior acoplado con un incremento del rango general de sobrevida, y se ha documentado que los problemas asociados con el congelamiento intracelular no son afectados por la presencia del agente crioprotector. Con referencia a la idea de la zona de transición descrita anteriormente, se pude decir que el agente crioprotector presente durante el congelamiento, traslada la zona entera en la dirección de rangos más bajos por disminuir el umbral asociado con el daño causado por la combinación de las altas concentraciones de sales y del hielo intracelular. 4. Instrucciones y procedimiento Los factores críticos en este procedimiento son: La suspensión celular: o La suspensión inicial de una muestra de CPH obtenida de sangre periférica movilizada no debe de exceder de 2-3 x 10 7 células/ ml. El medio crioprotector: o El medio crioprotector puede variar, se recomienda que contenga una fuente nutritiva (albúmina humana, suero o plasma), en una concentración final del 10%. o El agente crioprotector de elección es el DMSO a una concentración final del 10%. o Se parte de una solución crioprotectora con DMSO al 20%. Se mezclan un volumen de cosecha de CPH con uno de solución crioprotectora. La concentración final del DMSO será 10%. NOTA: La adición del DMSO debe de realizarse lentamente y a una temperatura de 4 ºC. o Una vez terminada la mezcla, se transfiere a una bolsa de congelamiento de material plástico no lipofílico (poliolefina/ o teflón-kapton) para evitar el daño a las membranas celulares, y además debe de ser lo suficientemente resistente a bajas temperaturas (-196 ºC). CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 13 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN o La bolsa se introduce en un soporte de aluminio que mantenga comprimidas ambas superficies, proporcionando así un espesor y forma homogénea de la muestra que facilite un correcto intercambio de calor. El programa de congelamiento: o El programa de congelación puede variar, pero en términos generales debe incluir primero una fase de estabilización a una temperatura de 4 ºC, seguida de un descenso constante de la misma a un ritmo de 1-2 ºC/min. En el momento previo al punto eutéctico, se debe de inducir un descenso prolongado de la temperatura de la cámara para compensar la liberación del calor latente de fusión e inducir el proceso de nucleación. Una vez superada la fase de transición, el ritmo de enfriamiento debe de permanecer constante entre 1-2 ºC/min. El sistema de almacenamiento: o Las células congeladas pueden almacenarse en un contenedor de N2L, en su fase líquida, donde la temperatura se mantiene constante a –196 ºC. Si la muestra se mantiene en la fase gaseosa, la temperatura puede oscilar entre –100 ºC y –140 ºC. NOTA: El tiempo máximo de almacenamiento bajo estas condiciones se desconoce con exactitud (pero se han llegado a reinfundir productos almacenados durante 15 años, con resultados satisfactorios). 4.1 Observaciones El dimetilsulfoxido es potencialmente tóxico para las células en temperaturas por arriba de 0 ºC, por ello la adición del DMSO y los pasos subsecuentes deben de realizarse lo más rápido posible y todo el procedimiento, tanto en la preparación de los reactivos, como en la preparación de las muestras biológicas se deben de mantener a una temperatura de 4 ºC y con asepsia en la campana de flujo laminar. En el laboratorio se han realizado experimentos de criopreservación usando la prensa para la bolsa criogénica, incluida en el equipo CryoMed Freezeer, el casete de aluminio (canister), y los sensores de temperatura, superficial o dentro de la muestra, con lo cual hemos observado que el proceso se ve afectado por estas configuraciones y por tal motivo es necesario elegir el programa adecuado al momento de criopreservar las CPH según la manera que se elija al congelar las muestras. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 14 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 4.2 Material y equipo requerido para criopreservar CPH 1. Bata quirúrgica 2. Cubre bocas 3. Gorro quirúrgico 4. Guantes estériles 5. Campos estériles 6. Tijeras inoxidables estériles 7. Pinzas inoxidables estériles (Rocher) 8. Gasas estériles 9. Torundas de algodón (jabón, alcohol, isodine) 10. Alcohol isopropilico al 70% 11. Desinfectante (glutaraldehído, fenol al 5%, o formaldehído) 12. Isodine 13. Frascos estériles (100 ml) o matraz Elermeyer de 250 ml 14. Probeta graduada estéril (100 ml) 15. Acopladores para toma de muestras (Sampling Site Couplers, Fenwal 4C-2405) 16. DMSO estéril (Sigma, Cat D-2650) o USP (Sigma, Cat. D-1435) 17. Jeringas desechables estériles de 5, 10, y 20 ml 18. Agujas estériles del No, 18 G 19. Bolsa criogénica de 250 ml (OriGen, Cryostore, Cat. CS 250n) 20. Casete de aluminio (Canister) para bolsa criogénica a 4º C 21. Equipo para congelamiento controlado CrioMed Freezer 22. N2L a baja presión (22 PSI dewars) 23. Guantes criogénicos 24. Frascos para hemocultivo y de hongos/micoplasma (pediátricos, 1-3 ml) 25. Tubos para Biometría Hemática (BH) 26. Hielo fräppe 27. Refrigerantes envueltos en papel 28. Azul Tripano al 0.4% 29. Cubre y porta objetos 30. Microscopio óptico 31. Sellador dieléctrico 32. Bolsas para desechos 33. Etiquetas de identificación 34. Crioviales estériles 35. Campana de Flujo Laminar 36. Depósito para almacenamiento con N2L, Cryoplus 2 37. Formato del material necesario para criopreservar CPH (Formato I) CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 15 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 38. Formato de registro del procedimiento para criopreservar CPH (Formato II) 39. Marcos metálicos (Racks) numerados 40. Diagrama del sitio de almacenamiento en el depósito de N2L. 41. Pipetas automáticas de 200 y 1000 μl 42. Puntas para pipetas automáticas de 200 y 1000 μl 43. Solución Salina Fisiológica 4.3 Espécimen a criopreservar ● Células progenitoras hematopoyéticas (alogénicas o autólogas) movilizadas de sangre periférica y obtenidas mediante aféresis. ● Médula ósea autóloga obtenida en quirófano. Si es necesario, la suspensión celular es primero concentrada en forma manual o por una técnica automatizada (seguir el procedimiento apropiado). 4.4 Procedimientos previos a la criopreservación de CPH 4.4.1 Realizar la limpieza y desinfección de la campana de flujo laminar. 4.4.2 Realizar la esterilización con Luz ultravioleta (U.V.) del material que no se puede esterilizar con vapor usado en la campana de Flujo laminar (por ejemplo, bolsas criogénicas, DMSO, tubos de BH, etc.), dejar 15 minutos dentro de la campana de flujo laminar y encender la lámpara de luz U.V. Colocar un letrero que indique que la luz U.V. está encendida. 4.4.3 Solicitar el plasma del paciente (aprox. 100 ml) obtenido durante la aféresis al equipo de enfermería y mantenerlo a 4 ºC. 4.4.4 Rotular las bolsas criogénicas y el casete de aluminio (canister). 4.4.4.1 Colocar una etiqueta de identificación en la porta-etiqueta de la bolsa criogénica. Sellar con el sellador dieléctrico en varios puntos la portaetiqueta sin sellarlo completamente. 4.4.4.2 La información de la etiqueta debe contener: Nombre del donador No. de unidad o identificación (por ejemplo, expediente) Fecha CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 16 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Producto celular (por ejemplo, CPHSP alogénica, MO o CPHSP autóloga reducida), si es autóloga: SOLO PARA USO AUTOLOGO No. de secuencia de la bolsa criogénica, (por ejemplo, 1 de 3) 4.4.4.3 Apartar las bolsas criogénicas hasta que se necesiten. 4.4.4.4 Rotular una bolsa criogénica como bolsa control y apartarla hasta su uso. 4.4.4.5 Rotular los frascos de cultivo, BH y crioviales con la información del paciente. 4.4.4.6 Rotular el casete de aluminio (canister) con una etiqueta con la de paciente. información 4.4.4.7 Verificar el nivel de N2L. Abrir la válvula del N2L, y encender el equipo congelamiento y elegir el programa que va ser utilizado. de 4.4.4.8 Colocar el casete de aluminio (canister) en el congelador hasta su uso. 4.4.4.9 Anotar el número de lote, la fecha de caducidad y la casa comercial del DMSO y de las bolsas criogénicas en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II). 4.5 Procedimiento para criopreservar 4.5.1 Pesar la bolsa que contienen las CPHSP al terminar su recolección. Restar el peso de la bolsa vacía (bolsa transfer de 600 ml de equipo CobeSpectra = 32 g; bolsa de recolección de equipo CS-3000 = 25 g) y dividir el resultado entre la densidad específica de las CPH (d= 1.066) para obtener el volumen aproximado de la cosecha de CPH. Con este valor se puede calcular la cantidad de bolsas criogénicas que serán necesarias para la criopreservación de CPHSP. Ejemplo, Peso de la bolsa con CPHSP = Peso de la bolsa transfer de 600 ml = Densidad específica de las CPHSP = CAL-02-B 133 g 32 g - __________ 101 g CPHSP ÷ 1.066 g/ml __________ 94.74 ml de CPHSP Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 17 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN En la siguiente tabla se muestran el volumen mínimo y máximo permitido al criopreservar CPH en las bolsas criogénicas de diferentes capacidades (Nota. Los datos fueron tomados de las bolsas Cryostore de Origen Biomedical, pero se puede aplicar a cualquier bolsa con las mismas dimensiones y capacidades). Código del Producto Volumen, a congelar Min - Max Volumen Nominal Largo, cm Ancho, cm CS 50 10 a 20 50 11.4 7.6 CS 250 30 a 70 250 15.2 12.7 CS 500 55 a 100 500 19.0 12.7 Tomando en cuenta la capacidad de las bolsas criogénicas, el volumen de CPH se dividiría en 3 bolsas criogénicas con un volumen de 31.58 ml (más un volumen igual de solución crioprotectora con DMSO al 20%). 4.5.1.1 Si el volumen de la cosecha es mayor a 140 ml, el volumen deberá ser reducido, según el protocolo establecido en el Servicio de Medicina Transfusional. 4.5.2 Si el volumen de la cosecha es igual o menor a 140 ml, colocar la bolsa dentro de la campana de flujo laminar. Realizar la asepsia de uno de los puertos de entrada y colocar un acoplador de toma de muestra en el puerto y realizar su asepsia correspondiente. Si no se cuenta con dicho acoplador, realizar la asepsia del tubo de recolección de la bolsa de CPH para puncionarlo con una jeringa con aguja del calibre 18 G. En este momento se puede realizar la asepsia de los puertos de entrada de las bolsas criogénicas y de los frascos de hemocultivo. De igual forma, realizar la asepsia de un extremo de tubo de la bolsa del plasma para poder tomar el volumen indicado para preparar la solución crioprotectora. 4.5.3 Usando una jeringa de 5 ml con aguja del calibre 18G retirar 2 ml de la suspensión celular y depositar 1 ml en un tubo de BH (Tubo morado con EDTA), rotulado previamente. Realizar el recuento celular en el equipo CellDyn 3500 y determinar el número de células Mononucleares en la muestra. Inocular 1 ml de la CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 18 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN suspensión celular a un frasco de hemocultivo, rotulado previamente como precongelamiento o pre-DMSO. 4.5.4 Tomar las jeringas de 20 ml con aguja del calibre 18G y llenar completamente a un volumen de 20 ml cada una. Usar las jeringas necesarias para recolectar el volumen total de CPHSP. La última jeringa contendrá menos de 20 ml. 4.5.5 Tapar la aguja con su capuchón cuidadosamente y retirar la aguja de la jeringa (desechar la aguja en un contenedor de punzo cortantes). Unir cada jeringa a una bolsa criogénica. Dispensar la suspensión celular hacia la bolsa, dejando la jeringa unida. Comenzar con la bolsa criogénica # 1. 4.5.6 Repetir el procedimiento con las otras jeringas y bolsas criogénicas como en el paso 4.5.4. 4.5.7 Anotar el volumen de cada bolsa criogénica en el formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II). 4.5.8 Dispensar a la bolsa control un volumen igual al de la bolsa de CPH con mayor cantidad de la solución control (se puede utilizar plasma). 4.5.9 Colocar las bolsas criogénicas entre los refrigerantes e incubar durante 30 minutos. 4.5.10 Calcular la cantidad de la mezcla crioprotectora (plasma autólogo con DMSO al 20%) para que al ser mezclada 1:1 con las CPH su concentración final sea del DMSO al 10%. 4.5.10.1 Volumen de cosecha de CPH + volumen bolsa control = volumen de solución crioprotectora + 10 ml de excedente. Ejemplo: 70 ml para CPH + 20 ml para la bolsa control = 100 ml de solución crioprotectora (90 ml para bolsas + 10 ml excedente). Por lo tanto se prepara de Solución crioprotectora = 80 ml de plasma + 20 ml DMSO. En la siguiente tabla se muestran los cálculos de diferentes volúmenes crioprotectora: CAL-02-B de solución Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 19 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Valores de DMSO-Plasma para la medición exacta del DMSO al 20% Volumen Total (ml) = DMSO + Plasma 5 1 4 10 2 8 15 3 12 20 4 16 25 5 20 30 6 24 35 7 28 40 8 32 45 9 36 50 10 40 55 11 44 60 12 48 65 13 52 70 14 56 75 15 60 80 16 64 85 17 68 90 18 72 95 19 76 100 20 80 105 21 84 110 22 88 115 23 92 120 24 96 125 25 100 130 26 104 135 27 108 140 28 112 145 29 116 150 30 120 160 32 128 170 34 136 180 36 144 190 38 152 200 40 160 250 50 200 300 60 240 CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 20 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 4.5.10.2 Anotar el volumen de la solución crioprotectora de cada bolsa criogénica en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II). 4.5.10.3 Anotar el volumen total de cada bolsa en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II). Volumen Total = volumen de CPH + volumen de solución crioprotectora. 4.5.11. Colocar un reloj con alarma a los 30 minutos y otro a los 20 minutos. 4.5.12 A la alarma de los 20 minutos preparar la solución crioprotectora. Con la probeta estéril medir la cantidad del plasma autólogo frío (a 4 ºC) y depositarlo en un frasco estéril en hielo. Con una jeringa de 20 ml tomar la cantidad necesaria de DMSO y adicionar al plasma mezclando perfectamente para evitar desnaturalizar las proteínas del plasma debido a la reacción exotérmica. 4.5.13. Iniciar el programa correspondiente del congelador programable y permitir que se enfríe a 4 ºC. 4.5.14 A la alarma de los 30 minutos tomar con una jeringa de 20 ml la cantidad necesaria de la solución crioprotectora. Retirar la jeringa vacía de la suspensión de CPH, y en su lugar colocar la jeringa de la solución crioprotectora: Secuencialmente y con prontitud adicionar la solución crioprotectora en cada bolsa criogénica, empezando con la bolsa control y posteriormente a las bolsas con las CPH, mezclar perfectamente las células. Usar el émbolo de la jeringa para retirar la mayor cantidad posible de aire y tomar aproximadamente 2.5 ml de la mezcla. Colocar 0.5 ml en un criovial rotulado, 1 ml en el tubo de BH, rotulado previamente como post-DMSO, para corroborar su viabilidad. Mantener el tubo a 4 ºC. Inocular 1 ml de la mezcla en el frasco de hemocultivo, rotular como post-DMSO. 4.5.15 Sellar la línea de la bolsa criogénica que contiene la jeringa tres veces con un sellador dieléctrico. Cortar con unas tijeras en medio de la línea sellada y desechar la línea unida y la jeringa. Secar rápidamente cada bolsa criogénica y colocarlas adentro del casete de aluminio (canister) previamente enfriado a -20 ºC; por ejemplo, colocar la bolsa #1 en el casete (canister) #1. Cuando corte la línea sea cuidadoso en no dejar cualquier gota de CPH en el área de sellado. Las células en un extremo abierto de la CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 21 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN línea después del sellado debe de ser evitado a causa de que puede contaminar el N2L en el tanque de depósito. Ver observaciones para otras opciones para congelar las bolsas criogénicas usando una prensa para congelamiento del equipo CryoMed Freezer. 4.5.16 Colocar los casetes de aluminio (canister) y el criovial en la cámara de enfriamiento. Distribuir individualmente los casetes de aluminio (canister) en una gradilla metálica para que se lleve a cabo el proceso en las mismas condiciones el congelamiento. 4.5.19 Coloque la bolsa control dentro de un casete de aluminio (canister) e inserte el sensor de la temperatura en uno de los puertos de muestreo. Tener cuidado de no dejar aire para evitar un registro inadecuado del proceso de congelamiento. Cerrar con cuidado el casete de aluminio (canister) para evitar maltratar el sensor de la temperatura, y colocarlo en la gradilla metálica. Ver observaciones para otras opciones para congelar las bolsas criogénicas usando una prensa para congelamiento del equipo CryoMed Freezer. 4.5.20 Cerrar la puerta de la cámara de enfriamiento y oprimir el botón de RUN del equipo. Registrar el programa utilizado para el congelamiento controlado y el tiempo de inicio en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II). 4.5.21 Al final del proceso de congelamiento presionar el botón STOP para silenciar la alarma del equipo. Registrar el tiempo final en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II). 4.5.22 Abrir la puerta de la cámara de enfriamiento, remover los casetes de aluminio (canister) y el criovial de las CPH y colocarlos en el depósito de almacenamiento con N2L en la fase de líquida o de vapor. Anotar el No. del marco metálico (rack), el lugar en el marco metálico (rack), la fase de almacenamiento de N 2L, y el sitio dentro del depósito de N2L en el Formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II), según el siguiente diagrama: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 22 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Esquema de la localización dentro del contenedor de N2L: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 23 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Esquema de la localización dentro del marco metálico (Rack): 4.5.23 Imprimir la gráfica del registro de temperatura y rotular con la identificación del paciente. La carta de congelamiento será parte del registro permanente del proceso. La gráfica del congelamiento no deberá mostrar un cambio inusual o inesperado en la temperatura. La curva apropiada del calor latente de fusión deberá de estar por debajo de 0ºC. 4.5.24 Cerrar la puerta de la cámara de enfriamiento y accionar el botón de calentamiento (warm) para descongelar la cámara. Al terminar, retirar la bolsa control y almacenarla a -20 ºC y apagar el equipo de congelamiento. 4.5.25 Limpiar la campana de flujo laminar y tirar todo el material desechable en las bolsas correspondientes. 4.6 Procedimiento para determinar el No. De CMN de las CPH 4.6.1 Encender el equipo para Biometría Hemática. 4.6.2 Evaluar los controles alto, normal y bajo, y establecer si el equipo no muestra valores fuera del rango para dichos controles. Si algún valor está por afuera de estos rangos será necesario calibrar el equipo según el manual del usuario. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 24 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 4.6.3 Procesar por duplicado la muestra rotulada como pre-DMSO que se obtuvo de la cosecha de CPH. Si los valores están por encima del rango de detección del equipo diluir la muestra de CPH 1:10 con SSF. Obtener el promedio de los valores y reportarlos en el formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH 4.6.4 Calcular el No. De CMN presentes en la muestra y la dosis / Kg de peso, como sigue: Leucocitos Totales = valor de leucocitos obtenido del Cell-Dyn (K/μl) x 1000000 x Dilución (si se realiza) x Volumen de la cosecha. CMN Totales = % de Linfocitos Cell-Dyn + % de Monocitos Cell-Dyn ÷ 100 x Leucocitos Totales. Dosis de CMN/Kg = CMN totales ÷ peso del donador. Anotar los resultados en el formato del REGISTRO DEL PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN DE CPH (Formato II). 4.7 Procedimiento para determinar la viabilidad celular de las CPH 4.7.1 Material requerido: 1. Portaobjetos 2. Microscopio óptico 3. Pipeta automática de 50 μl 4. Puntas para pipeta automática 5. Tubos de ensayo de 12 x 75 mm 6. Cámara de Neubauer 7. Cubreobjetos para cámara de Neubauer 4.7.2 Reactivos Azul de Tripano al 0.4 % 4.7.3 Procedimiento 4.7.3.1 Verificar que el material este completamente limpio. 4.7.3.2 Rotular un tubo de ensaye de 12 x 75 mm con el nombre Donador y CPHcosecha Donador. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 25 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 4.7.3.3 Rotular otro tubo de ensaye de 12 x 75 mm con el nombre del Donador y CPH post-DMSO. 4.7.3.4 Adicionar a cada tubo 50 μl de la CPH de la cosecha y de la muestra postDMSO, respectivamente. 4.7.3.5 Adicionar en cada tubo 50 μl de la solución de Azul Tripano al 0.4% y mezclar perfectamente. 4.7.3.6 Adicionar la muestra en la cámara de Neubauer y contar el número de células vivas y muertas con el microscopio óptico (40X). En caso de no mtener marcador de viabilidad o anticuerpo monoclonal 7 ADD. 4.7.3.7 Reportar el porcentaje de viabilidad de las muestras. 4.8 Limpieza y asepsia de la campana de flujo laminar Debido a que las CPH son recolectadas en un ambiente “abierto” y porque muchos de los pasos de su procesamiento no pueden ser realizados en un sistema completamente cerrado, hay numerosas oportunidades para la contaminación con microorganismos. Por esto, se debe asumir un método estricto de asepsia que deberá de ser realizado en el área de trabajo dentro de la campana de flujo laminar. Cultivos bacterianos y de hongos deberán de ser realizados en las diferentes etapas del procesamiento para determinar si cualquiera de las técnicas y/o materiales en uso están comprometiendo la pureza del las CPH. 4.8.1 Material y equipo requerido 1. Solución de limpieza Dextran-Hipoclorito de Sodio 2. Solución desinfectante PRESEPT (Code Nr. SPW50, Johnson & Johnson). Disolver una tableta de 5 g en 3 litros de agua. 4. Alcohol al 70% 5. Fenol al 5 % 6. Guantes desechables 7. Cubrebocas 8. Lentes de Protección. 9. Gasas estériles CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 26 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 4.8.2 Procedimiento 4.8.2.1 Encender la luz de la campana de flujo laminar y realizar la limpieza de la superficie del piso, techo y paredes de la campana con la solución de DextránHipoclorito de Sodio. 4.8.2.2 Realizar la desinfección de las cuatro paredes de la campana con la solución PRESEPT. 4.8.2.3 Humedecer las gasas estériles con etanol al 70 % y pasar por toda el área de trabaja dentro de la campana. 4.8.2.4 Con la ayuda de las gasas estériles desinfectar toda el área de la campana con la solución de Fenol al 5 %. Dejar actuar por 15 minutos. 4.8.2.5 Encender el motor de la campana y dejar durante 30 minutos como mínimo. Posteriormente encender la luz U.V. y dejar actuar durante 15 minutos. Colocar un letrero indicando que la luz U.V. está encendida. 4.8.2.6 Apagar la Luz U.V. A partir de este momento se puede trabajar en la campana de flujo laminar, procurando evitar salirse del área estéril, así como también, evitar movimientos bruscos para no provocar flujo de aire hacia el interior de la campana. 4.9 Verificación de la esterilidad del proceso Mantener la esterilidad es una consideración importante en el procesamiento y criopreservación de las CPH. Se ha reportado contaminación en pacientes que han recibido trasplantes alogénicos y autológos. Los microorganismos identificados fueron flora normalmente encontrada en la piel. La contaminación puede ocurrir durante la colección de las CPH y en varias etapas durante el procedimiento. La disponibilidad de sistemas semicerrados de recolección reduce oportunamente la contaminación, sin embargo la esterilidad debe de ser monitoreada con cultivos bacterianos y de hongos. La identificación del organismo y su sensibilidad debería de ser realizada en los cultivos que resultaran positivos. Aunque el mayor propósito de esta prueba es la protección del paciente, también suministra información epidemiología útil acerca de las actividades de laboratorio y del trasplante en general. CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 27 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 4.10 Procedimiento para descongelar CPH criopreservadas Las CPH criopreservadas son descongeladas en un baño maría a 37 – 40 ºC inmediatamente antes de infundirlas y administrarlas a través de un catéter central. Es posible diluir y/o lavar las CPH antes de la infusión en orden de remover el DMSO, pero esta operación es rara vez realizada. Aunque la infusión de DMSO ha sido asociada con cierta toxicidad incluyendo nauseas, vómitos, rubor, incremento en la frecuencia cardiaca y presión sanguínea, y elevación de las transaminasas en suero, muchos investigadores creen que la manipulación de las CPH descongeladas pueden resultar en la pérdida celular inaceptable. Las CPH pueden ser tanto infundidas directamente de la bolsa a través de un equipo de administración, o removidas de la bolsa con una jeringa e inyectada hacia la línea central. 4.10.1 Material necesario Baño María Cronómetro Agua estéril Solución de limpieza Dextran-Hipoclorito de Sodio Solución desinfectante PRESEPT (Code Nr. SPW50, Johnson & Johnson) Disolver una tableta de 5 g en 3 litros de agua. Alcohol al 70% Fenol al 5 % Refrigerantes Tubos de vidrio de 12x75 mm Frascos para Hemocultivo y Hongos Microscopio Óptico Porta y cubre objetos Azul de tripano al 0.4% Campos quirúrgicos Contenedor de N2L portátil Ropa quirúrgica Gasas estériles Tijeras estériles Acoplador para toma de muestra Jeringas desechables estériles de 10 y 20 ml Agujas estériles del calibre 18 G Torundas de alcohol e isodine CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 28 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Guantes estériles Cubrebocas 4.10.2 Procedimientos previos para descongelar las CPH 4.10.2.1 Localizar en el depósito de almacenamiento de N2L las bolsas criogénicas con las CPH correspondientes al paciente que va a ser reinfundido. Verificar perfectamente que los datos de las bolsas concuerden con los datos del paciente que se va a transfundir, 4.10.2.2 Determinar la cantidad de CMN y/o células CD34 de cada bolsa criogénica. 4.10.2.2 Transferir los casetes de aluminio (canister) de la fase líquida a la fase gaseosa del depósito de N2L, por lo menos 12 horas antes de la reinfusión. 4.10.3 Procedimiento 4.10.3.1 Realizar la limpieza del Baño María con la solución de Dextran-Hipoclorito de sodio. 4.10.3.2 Realizar la desinfección del Baño María con la solución desinfectante PRESEPT con la ayuda de gasas estériles. 4.10.3.3 Realizar la asepsia del Baño María con una solución de Fenol al 3 %. Dejar actuar por espacio de 30 minutos. 4.10.3.4 Cubrir el Baño María con un campo quirúrgico y trasladar el baño a pie de cama del paciente al que se van a reinfundir las CPH. 4.10.3.5 Localizar las CPH criopreservadas y acomodar las bolsas de mayor a menor concentración de CPH en el depósito de N2L portátil, el cual contiene N2L Trasladar el contenedor al área donde se llevará a cabo la reinfusión. 4.10.3.6 En el área donde se llevará a cabo la reinfusión, conectar el Baño María a una toma de corriente eléctrica. Adicionar agua estéril al baño y dejar que alcance la temperatura de 40 ºC. Adicionar al un antiséptico. 4.10.3.7 A la indicación del Médico responsable, seleccionar la primera bolsa con mayor concentración de CPH del contenedor portátil de N 2L y verificar una vez más los CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 29 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN datos de identificación de la bolsa y del paciente. Introducir la bolsa al Baño María y con una leve agitación dejar que se descongele aproximadamente 1 minuto y 50 segundos. Este tiempo puede variar según el volumen de las CPH y de las características de la bolsa criogénica. NOTA: No descongelar completamente las CPH, sino hasta el punto en que se note la apariencia de una moneda de 10 pesos en el centro de la bolsa. 4.10.3.8 Retirar la bolsa criogénica del Baño María y colocarla entre dos refrigerantes. Realizar la asepsia de uno de los puertos de entrada con las torundas de alcohol e isodine e insertar el equipo de transfusión para su reinfusión en el paciente. Otra opción sería, colocar un acoplador de toma en el puerto de entrada y con la ayuda de una jeringa de 20 ml con aguja del calibre 18 G, tomar las CPH e iniciar la reinfusión en alguna de las líneas de soluciones que tenga el paciente. 4.10.3.9 Vigilar los signos vitales y reacciones que pudiera presentar el paciente. 4.10.3.10 Realizar el mismo procedimiento, pasos 4.10.3.6 a 4.10.3.8, para cada una de las bolsas criogénicas restantes. 4.10.3.11 En cada una de las bolsas realizar la asepsia de una esquina y cortar con las tijeras estériles un extremo de las bolsas. Tomar el sobrenadante remanente de las CPH para realizar los cultivos bacterianos (hemocultivo y hongos) y la viabilidad de las CPH después de descongelarlas. El DMSO es toxico para las CPH a temperaturas mayores de 4 º, por tal motivo, conservar todas las muestras en los refrigerantes. Requisitos de recepción de Células Tallo Una vez que llega la bolsa de recolección el área de criopreservación deberá de traer: 1.- Nombre del Donador 2.-Nombre de Paciente 3.- Número de la unidad asignada 4.- Volumen de obtenido 5.- Equipo en donde fue recolectada 6.- Marca de la bolsa de recolección 7.- Fecha de caducidad 8.- Número de Lote 9.- Tubo de biometría hemática previa a la recolección CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 30 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 10.- Resultado de la biometría Hemática 11.- Resultado de CD 34, CD 45 y 7 ADD 12.- Resultado de Serología o Nota estos requisitos son indispensables para la separación automática y manual METODO MANUAL PARA LA REDUCCIÓN DE VOLUMEN Este método lo usaremos en caso que el Sepax no pueda ser utilizado debido a que tenemos mayor volumen de muestra que rebase las especificaciones del fabricante. Es muy importante pesar la bolsa de recolección vacía y llena En la campana de flujo laminar previa limpieza con alcohol al 70% e irradiación de 15 a 20 min llevar la bolsa de recolección para limpiar toda la bolsa especialmente las líneas Poner el acoplador a la bolsa de recolección (jeringa de 60 mí de preferencia) se extrae un volumen y se vacía en tubos Falcon de 50 ml, estériles, se tapa y se centrifuga por 15 min a 4 ° C a 3500 RPM. En la campana, abrir la tapa de tubo Falcon extraer el Plasma dejando alrededor de 5 ml. Dar pequeños golpecitos para despegar las células de la pared del tubo y resuspender con un poco de plasma, tratando de recuperar el mayor número de células posibles . Con una jeringa de 60 0 20 ml y aguja lila (16 G) se pasan las células a la bolsa de criopreservación a través de la línea de la bolsa (pueden ser más bolsas dependiendo del volumen que tengamos) de 250 ml y poner en el refrigerador. Prepa en un tubo Falcon de 50 ml la solución Crioprotectora DMSO al 10 % -------------------------------------------------10 ml HEST (Hidroxietilalmidon) si es al 10 %…………….……30 ml Albúmina Humana al 20% o 25%--------------------------10 ml En el caso que el HEST sea del 6% ------------------------35ml CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 31 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Albúmina Humana del 20% o 25% -----------------------5 ml Poner en el refrigerador la solución de DMSO por 15 minutos a 4°C, pues este debe estar frío a la hora de ponerlo a las células Encender el congelador minutado el cual deberá contener una sensor y a falta de este una bolsa con la mezcla de DMSO como control y en cuanto llegue a una Temperatura de 4°C En lo que el congelador minutado llega a la Temperatura deseada se prepara la Cosecha en la campana de flujo laminar con las solución crioprotectora la cual debe ser agregada poco a y en frio mezclando al mismo tiempo que se va adicionando lentamente. Eliminar el aire y burbujas con una jeringa de la criobolsa, conservando 1.5 ml de muestra, 500µl en un tubo criovial debidamente identificado y el resto de divide para realiza hemocultivos viabilidad con citometria o azul de tripan Se sella la bolsa con un sellador automático el cual también debe estar limpio y cerca de la campana de flujo laminar REACTIVOS PARA CRIOPRESERVACION INSUMOS La siguiente lista son reactivos indispensables para realizar la criopreservación de Células Progenitoras Hematopoyéticas (CPH), procedentes de Sangre Periférica, Medula Ósea y Cordón Umbilical 1.- Dimethyl Sulfoxide (DMSO) grado clínico 2.- Hidroxietil almidon al 10% (HES) 3.- Seroalbumina Humana al 20 % 4.- Etanol al 70% (desinfectante) Sigma –Aldrich PISSA Fresniere MATERIAL PARA CRIOPRESERVACION 1. Bolsas de 250ml Congelación Cryostoic Biomedica 2. Acopladores ( Sampling Site Copler ) ( en caso de no tener suplir con llave de tres vias) Baxter CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 32 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN 3. Sepax Cell Separetion Kitt Biosafe 4. Crioviales de Nitrógeno liquido de 2ml Labcon 5. Tubo Falcon de 50 ml 6. Jeringas (propulsor o perfusor) DE 60 ml 7. Jeringas de 20 ml 8. Agujas Insyde 14 G 1.7 sin 2.1x45mm 9. Agujas 16 G 1 ½ 10. Pipetas de plástico de 25 ml estéril 11. Bolsas Estériles para descongelación ( syplog ) 12. Pipetas con filtro desechables de 10 ml 13. Puntas para 200 µl 14. Puntas desechables para 1000 µl 15. Cubre bocas 16. Guantes Estériles 17. Guante manejo de temperaturas extremas (bajas) EQUIPO 1. Congelador Programable 2. Tanque de almacenaje 3. Cajas y Marcos para almacenar bolsas y criobiales 4. Placas de Presión 5. Campana de Bioseguridad Clase II 6. Pipetor Automático 7. Sellador Automático 8. Tanques de Nitrógeno Líquido 9. Balanza Digital 10. Pinzas de Rodillo 11. Sellador dieléctrico 12. Conector estéril CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 33 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN PREPARACION DE EQUIPO PARA EL PROCESO LIMPIEZA Y DESINFECCIONJ DEL AREA BLANCA DE PROCESAMIENTO VERIFICAR Y LIMPIAR CON ALCOHOL AL 70% EL CONGELADOR MINUTADO, TENER LOS CANESTER A OCUPAR LIMPIOS Y SECOS VERIFICAR QUE LAS BOLSAS CRIOPROTECTORAS TENGAN BUENA CADUCIDAD Y EL CASO DE USO DE SEPAX LIMPIARLO LIMPIEZA DE CAMPANA DE FLUJO LAMINAR COMO SE MENSIONA EN ESTE MANUAL EN EL PUNTO 4.8.2 COLOCAR EL MATERIAL REQUERIDO PARA EL PROCESO EN LA CAMPANA Y COMO JERINGAS GASAS TUBOS SELLADOR ETC. DEJAR 15 MIN CON UV CHECAR QUE HAYA SUFICIENTE NITROGENO PARA TODO EL PROCESO DE CONGELACION LIMPIEZA Y DESINFECCION DE CENTRIFUGA REFRIGERADA CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 34 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN RECEPCION Y PROCESO LA BOLSA OBTENIDA DE CELULAS PROGENITORAS HEMATOPOYETICAS, YA SEA DE MEDULA OSEA O SANGRE PERIFERICA DEBERA SER ENTREGADA CON NUMERO DE UNIDAD ASIGNADA POR EL BANCO DE SANGRE, RESULTADOS DE SEROLOGIA, NOMBRE DE EL DONADOR, NOMBRE DE RECEPTOR, PESO DEL RECEPROR, EDAD, VOLUMEN DE LA COSECHA, BIOMETRIA HEMÁTICA , VOUMEN OBTENIDO, NOMBRE DE EQUIPO UTILIZADO PARA SU OBTENCION Y RECUENTO DE CD 34 Y VIABILIDAD UN TUBBO DE BH CON MUESTRA DE LA COSECHA L ROTULAR FRASCOS DE HEMOCULTIVO, CRIOVIALES, CON NUMERO DE UNIDAD Y NOMBRE OBTENER EL PESO DE LA BOLSA VACIA Y DE BOLSA LLENA PARA CALCULAR EL VOLÚMEN REAL DE LA COSECHA MEZCLAR BIEN LAS CELULAS CON MOVIMIENTO SUAVE ASI COMO TAMBIEN LAS LÍNEAS DE LA BOLSA CON AYUDA DE PINZAS, PONER UN CAMPO ESTÉRIL EN LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR Y LIMPIAR BIEN LAS VÍAS, DE ESTAS DARLE UN PILOTO A CITOMETRIA Y OTRO PARABACTERIOLOGIA SI EL PROCESO SE VA A REALIZAR DE FORMA MANUAL PONER EL ACOPLADODR A LA BOLSA DE RECOLECION Y CON JERINGA DE 60 ML DE PEREFERENCIA EXTRAER TODO EL VOLÚMEN Y VACIAR A 2TUBOS FALCON ESTÉRILES DE 50 ML, TAPAR Y CENTRIFUGAR POR 15 MINUTOS A 4 ° C SIN FRENO SACACAR CON MUCHO CUIDADO LOS TUBOS FALCON Y LLEVARLOS A LA CAMPANA DE FLUJO LAMINAR, EXTRAEER EL PLASMA Y PASARLO A OROS TUBOS FALCON ESTÉRILES. MEDIR EL VOLÚMEN DE CÉLULAS QUE NOS QUEDARON CON JERINGA CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 35 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN PONER EN LA CAMPANA LAS BOLSAS CRIOPROTECTORAS LIMPIARLAS CON ALCOHOL CON JERINGAS DE 20 ML EXTRAEER TODAS LAS CELULAS DE LOS TUBOS FALCON, PONER UN POCO DE PLASMA PARA DEJAR LO MENOS POSIBLE DE CELULAS EN EL TUBO, CONECTAR A LA LINEA HEMBRA DE LA BOLSA DE CRIOPRESERVACION Y TRASVASARLAS A LA BOLSA. RETIRAR LAS JERINGAS Y CERRAR LA LÍNEA ES IMPORTANTE TOMAR EN CUENTA EL VOLÚMEN QUE SE TIENE Y REPARTIRLO EN LAS BOLSAS QUE SEAN NECESARIAS TOAMDO EN CUENTA EL VOLUMEN QUE SE AÑADIRÁ DE SOLUCION CRIOPROTECTORA DE MANERA QUE NO VAYAN A QUEDAR MUY LLEAS PUES SE CORRE EL RIESGO DE QUE SE ROMPAN A LA HORA DE CRIOPRESERVAR O DESCONGELAR PREPARAR LA SOLUCION CRIOPROTECTORA EN HIELO O EN UN MEDIO QUE ESTÉ A 4 ° C Prepa en un tubo Falcon de 50 ml la solución crioprotectora DMSO al 10 % -------------------------------------------------10 ml HEST (Hidroxietilalmidon) si es al 10 %…………….……30 ml Albúmina Humana al 20% o 25%--------------------------10 ml En el caso que el HEST sea del 6% ------------------------35ml Albúmina Humana del 20% o 25% -----------------------5 ml CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 36 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN ENCENDER EL CONGELADOR MINUTADO EN UTILIZANDO EL PROGRAMA # 6 PARA QUE LLEGUE A UNA TEMPERATURA DE – 4 °C, MIENTRAS SE PREPARA LA SOLUCION Y SE ENFRIA PONER EN EL REFRIGERADOR LOS TUBOS CON LA SOLUCION DE DMSO POR 15 MIN A 4 °C PUES DEBE DE ESTAR FRIO A LA HORA DE PONERLO A LAS CÉLULAS SUPONIENDO QUE SE OBTIENEN 2 BOLSAS CON 25 ML DE CÉLULAS CADA UNA SE ADICIONARAN 25 ML DE SOLUCION CRIOPROTECTORA A CADA BOLSA SE PONEN LAS BOLSAS DE LAS CÉLULAS ENTRE 2 BOLSAS DE GEL CONGELDO PARA ADICIONAR LENTAMENTE CON UNA JERINGA LA SOLUCION CRIOPROTECTORA LENTAMENTE Y MOVIENDO LAS BOLSAS SUAVEMENTE PARA MEZCLAR, SE ADICIONAN DE 2EN 2 ML HASTA TERMIAR LA SOLUCION SIEMPRE MEZCLANDO LAVAR LAS JERINGAS SIN DESCONECTAR CON LA MUESTRA DE TAL MODO QUE EN LAS LÍNEAS NO QUEDE SOLO SOLCION. CON LA MISMA JERINGA Y LAS CÉLULAS YA MEZCLADAS DEJAR ALRREDEDOR DE 5 ML DE MUESTRA PARA PONER: EN 4 CRIOVIALES PONER 500 MICROLITORS DE MUESTRA, UNO PARA CITOMERIA, 3 PARA CRIOPRESERVAR, DOS JUNTO CON LAS BOLSAS Y OTRO PARA CONTROL LOS OTROS 3 ML VACIAR EN FRASCO DE HEMOCULTIVO DAR A EL AREA DE CTOMETRIA UN CRIOVIAL O TUBO CON LA MUESTRA PARA QUE REALICE DETERMINACI0N DE CD 34 Y VIAVILIDAD PARA ASI OBTENER EL VUMERO FINAL DE CELUALS A CRIOPRESERVAR ASÍ COMO CONTOL DEL MANEJO CON LOS CRIOPROTECTORES CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 37 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN ANTES DE DESCONECAR LAS JERINGAS SACAR TODO EL AIRE DE LAS BOLSAS DE TAL MANERA QUE NO QUEDE NADA DE AIRE DENTRO Y SEGUIR MANTENIENDOLAS EN FRIO YA LISTO EN CONGELADOR PONER LAS BOLSAS EN LAS PRENSAS PARA CONGELAR JUNTO CON UN CRIOBIAL PROCURANDO QUE EL SENSOR DE EL EQUIPO QUEDE ENTRE UNO DE LAS PRENSAS PARA QUE MIDA LA TEMPERATURA REAL DE CONGELACION DE LA BOLSA Y TAMBIEN PONER LOS 3 CRIOVIALES EN EL CONGELADOR HASTA QUE TERMINE EL PROCESO A LOS – 80°C SACAR Y DESPEGAR CON CUIDADO LAS BOLSAS, COLOCARLAS EN LOS CANESTER RESPECTIVOS JUNTO CON EL CRIOVIAL QUE DEBE ESTAR LO MAS FRIO POSIBLE EL CRIOVIAL DE CONTROL PONERLO EN LA CAJA DE CONTROLES PONER EL CANESTER EN EL PORTACANESTER E INTRODUCIRLO EN EL TANQUE DE CRIOPRESERVACION QUE ESTARÁ A – 196 °C LLENAR LA HOJA DE REGISTRO CON TODOS LOS DATOS TANTO DE UBICACIÓN EN EL TANQUE, BH, CONTEO CELULAR, CD34, VIAVILIDAD NOMBRE Y EDAD DE PACIENTE DIAGNOSTICO PESO FECHA DE PROCESO TAMBIEN SE DEBE TENER EL REGISTRO EN ELECTRONICO LA UBICACIÓN EN EL TANQUE CON FECHA Y NOMBRE Todos los datos que resultan de este procedimiento se concentran en la Bitácora CAL77-A, que se muestra a continuación: CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 38 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN Bitácora CAL-77-A HOJA DE REGISTRO DE CÉLULAS TALLO CRIOPRESERVADAS NUM DE UNIDAD --------------- FECHA PROCESO: ___________________ TIPO DE TRANSPLANTE ------------------------------------------------NOMBRE DE RECEPTOR---------------------------------------------------------------- NUM. DE EXPEDIENTE ------------EDAD DE RECEPTOR------------------------------------- PESO DE RECEPTOR--------------------------- NOMBRE DE DONADOR---------------------------------------------------- PARENTESCO----------------------------- DIAGNOSTICO ---------------------------------------------------------------------- GRUPO SANGUINEO DONADOR------------------GRUPO SANGUINEO RECEPTOR-------------------------- SEROLOGIA HCV-------------- AgSHB ----------------- HIV---------------- CMV-IgM------------------- NAT: HIV:-_________ HCV:_____________ SIFILIS----------------- BRUCELLA-------CHAGAS----------HBV:__________ LEUCOCITOS TOTALES = WBC K/min L X 1000 X VOL DE BOLSA-------------------------------8 DOSIS DE LEUCOS = LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg DE DONADOR -----------------------------------CMN% = LINFOCITOS% + MONOCITOS % ----------------------------------------------------8 DOSIS DE CMN = CMN% X LEUCOCITOS TOTALES X 10 / Kg / 100 -------------------------------------------- CAL-02-B Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 39 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN CD 34 Cel / µl -----------------------------------VIABILIDAD ------------------------------------- DOSIS DE CD 34 X DILUCION X 1000X VOL / PESO DE RECEPTOR =--------------------X 10 VOL STEM CELLS CONCENTRADAS EN mL. -------------------------------------------------------- VOL SOL. CRIOPRESERVADORA-------------------------------------------------------------------VOL TOTAL DE BOLSA CRIOPRESERVADA-----------------POSICION DE CRIOVIALES--------------------------------´POSICION DE BOLSA EN TANQUE ----------CULTIVO BACTERIOLOGICO: HEMOCULTIVO PRE CRIOPRESERVACION----------------HEMOCUTIVO POS CRIOPRESERVANTES---------------------VIABILIDAD POS DMSO----------------VIABILIDAD POST- DESCONGELACION-------------------FECHA DE DESCONGELACION Y ENVIO: ______________ CD 34--------------------REALIZO ------------------------------ CAL-02-B 6 Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL- 77 Nivel de Revisión: 01 Fecha: 02-enero- 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 40 de 40 PROCEDIMIENTO DE CRIOPRESERVACIÓN PRODUCTO NO CONFORME Producto no conforme debido a mala operación o mal manejo del producto durante el proceso Producto entregado con bolsa rota, fuga en las líneas Mal sellado de líneas Células tallo para Trasplante Alogénico con células CD 34+ < 2 x 106 / Kg de peso de receptor. Células tallo para Trasplante Autólogo con células CD 34+ < 1.5 x 106 / Kg de peso del receptor REGISTROS Bitácora CAL-77-A hoja de registro de células tallo criopreservadas CAL-02-B NUM DE UNIDAD --------------FECHA PROCESO:_______________________ TIPO DE TRANSPLANTE ------------------------------------------------NOMBRE DE RECEPTOR---------------------------------------------------------------- NUM. DE EXPEDIENTE ------------EDAD DE RECEPTOR------------------------------------PESO DE RECEPTOR--------------------------NOMBRE DE DONADOR----------------------------------------------------PARENTESCO---------------------------DIAGNOSTICO ---------------------------------------------------------------------GRUPO SANGUINEO DONADOR------------------GRUPO SANGUINEO RECEPTOR-------------------------SEROLOGIA HCV-------------- AgSHB ----------------- SIFILIS----------------- BRUCELLA------- HIV---------------- CMV-IgM------------------- NAT: HIV:-_________ HCV:_____________ CHAGAS----------- HBV:__________ LEUCOCITOS TOTALES = WBC K/min L X 1000 X VOL DE BOLSA------------------------------DOSIS DE LEUCOS = LEUCOCITOS TOTALES X 10⁸ / Kg DE DONADOR ----------------------------------CMN% = LINFOCITOS% + MONOCITOS % ----------------------------------------------------DOSIS DE CMN = CMN% X LEUCOCITOS TOTALES X 10 ⁸ / Kg / 100 ------------------------------------------- CAL-02-B CD 34 Cel / µl -----------------------------------VIABILIDAD ------------------------------------- DOSIS DE CD 34 X DILUCION X 1000X VOL / PESO DE RECEPTOR =--------------------X 10⁶ VOL STEM CELLS CONCENTRADAS EN mL. ------------------------------------------------------- VOL SOL. CRIOPRESERVADORA-------------------------------------------------------------------VOL TOTAL DE BOLSA CRIOPRESERVADA-----------------POSICION DE CRIOVIALES--------------------------------´POSICION DE BOLSA EN TANQUE ----------CULTIVO BACTERIOLOGICO: HEMOCULTIVO PRE CRIOPRESERVACION----------------HEMOCUTIVO POS CRIOPRESERVANTES---------------------VIABILIDAD POS DMSO----------------VIABILIDAD POST- DESCONGELACION-------------------DESCONGELACION Y ENVIO:______________ CD 34--------------------REALIZO ------------------------------ CAL-02-B FECHA DE