Monitoreo de Leucemia Mieloide Crónica. Uso de BCR-ABL

Monitoreo de Leucemia Mieloide Crónica. Uso de BCR-ABL

Monitoreo de Leucemia Mieloide
Crónica
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Uso de BCR-ABL (International Scale)
!
!
Santiago Padilla B MD, FCAP
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Grupo Rochem Biocare
Marzo 2014, Viña del Mar
LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA
BCR-ABL: ISOFORMAS
BCR-ABL: RNA DE PROTEÍNA CON
ACTIVIDAD DE !!TIROSIN KINASA
Inhibidores de Tirosin Quinasa
SUPERVIVENCIA LMC- IRIS
Cromosoma Philadelphia: Cariotipo
BCR ABL- FISH
SEGUIMIENTO DE RESPUESTA A
TRATAMIENTO
!
PCR Cuantitativo en Tiempo
Real
MONITOREO DE BCRABL
CICLOS DE PCR
2^(n-1)
Copias
PCR EN TIEMPO REAL
CUANTIFICACIÓN DE RNA BCR-ABL
primer especifico al Gen
RNA
Transcriptasa
Inversa
cDNA
Forward
Amplificacion
Deteccion
PCR en Tiempo Real
Reverse
sonda
GX BCR-ABL PRIMERS Y
SONDAS
BCR-ABL
Type
b3-a2
11
12
13
14
11
12
13
= RT-PCR primers
QSY7
2
FAM
4
145
FAM
b2-a2
3
2
3
4
70
QSY7
= nested PCR primers
ABL
1a
1b
a2
a3
a4
77
TxRd
QSY21
INFORME DE
RESULTADOS
BCR-ABL detectado.
ABL =14.2
BCR-ABL= 16.1
E ΔCt = 1.89
Test ΔCt = -1.8
Ratio BCR-ABL/
ABL = 1.89 (-1.8) =
0.31
% Ratio BCR-ABL/ABL = 0.31 x 100 =
31.0%
Resultado: “Positivo para BCR-ABL.
%BCR-ABL/ABL = 31%
NECESIDAD DE ESTANDARIZAR
DATOS DE IRIS
•
Se evidencio en estudio IRIS ( International Randomised study of
Interferon vs STI571)
•
Definición de respuesta molecular mayor -MMR
•
Disminución de tres logaritmos desde nivel base
•
Tres laboratorios- cada uno definió MMR a partir de un valor medio de
30 pacientes con LMC
•
En esos tres laboratorios factores de conversión de 1.25, 0.83 y 2.22
respectivamente
NEJM-2003 349;15 p 1423
NECESIDAD DE ESTANDARIZAR
NUMEROSAS VARIABLES
•
Múltiples laboratorios- mas de 40
•
Diferentes metodologías- mas de 8
•
Diferentes Instrumentos- tres plataformas
•
Genes control- ABL, BCR, GUS, G6PD, B2M
•
Extracción de ARN- 7 métodos
•
Transcriptasa inversa- mas de 5
•
Primers de amplificación- tres tipos de primers
•
Materiales de curva estándar- 4 tipos
!
•
40 Laboratorios Referencia Vs 1 en Adelaide- IRIS
Blood. 2008;112:3330-3338
VALORES DE FACTOR DE CONVERSIÓN
Variabilidad entre laboratorios
-Inmensa!!
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PRIMER PASO ESTANDARIZACION A
IS
CURVA ESTANDARDCADA LOTE CON IS
IS ...... QUE NO CAMBIA
•
Indicaciones de q-PCR para BCR-ABL
•
En el momento de de diagnostico, antes de iniciar terapia
•
Cada tres meses durante el tratamiento inicial
•
En caso de CCR cada 3 meses por 3 años... luego cada 3
a 6 meses
•
Niveles aumentando de BCR-ABL cada 1-3 meses
IS CAMBIO SIGNIFICATIVO?
•
Definición de MMR ya no es de 3 logaritmos.
•
MMR es 0.1%
!
•
Muchos laboratorios están pasando a IS. Si hay resultados
anteriores a IS, hay que averiguar el Factor de Conversión
de la metodología que usan.
MUTACIONES DE TK
PREDICCION DE MUTACION DE
DOMINIO DE KINASA
AUMENTO SIGNIFICATIVO EN
IS
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• 
Agosto 2010
• 
3500 viales de 4 diluciones de células K562 en HL60
(negativas)
• 
Células liofilizadas
• 
Validado para genes control ABL, BCR y GUS
• 
Estandar Primario- Solo para desarrollo de estandares
secundarios
• 
Validado entre concentraciones de 10 a 0.01 SI
ESTANDARDIZACION
VARIABLIDAD EN CONCENTRACIONES POR
DEBAJO DE MMR
Gracias