GOT - GPT - Spinreact

GOT –R&F
GPT - R&F
GOT - GPT
Reitman-Frankel. Colorimetric
Quantitative determination of transaminases GOT and GPT
IVD
7.
8.
Mix. Let stand for 5 min. at room temperature.
Read the initial absorbance (A) against a water blank. The color is stable at
least 1 hour.
Store at 2-8ºC
PRINCIPLE OF THE METHOD
The glutamic transaminase enzymes, serum glutamic oxalacetic (GOT)
and serum glutamic pyruvic (GPT), catalyse the transfers of the amino
group of glutamic acid to oxalacetic acid and pyruvic acid in reversible
reactions. The transaminase activity is proportional to the amount of
oxalate or pyruvate formed over a definite period of time and is measured
by a reaction with 2,4- Dinitrophenylhydrazine (DNPH) in alkaline sol.1,2.
CLINICAL SIGNIFICANCE
Transaminases GOT and GPT are cellular enzymes, found in highest
concentration in heart muscle, the cells of the liver, the cells of the skeletal
muscle and in smaller amounts in other weaves. Although an elevated
level of GOT and GPT in the serum is not specific of the hepatic disease,
is used mainly to diagnostic and to verify the course of this disease.
When GOT is used in conjunction with GPT aid in the diagnosis of infarcts
in the myocardium, since the value of the GPT stays within the normal
limits in the presence of elevated levels of GOT 1,2,5,6.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should
integrate clinical and other laboratory data.
REAGENTS
Ref: 1001165 GOT
R1a
Substrate GOT
Ref: 1001175 GPT
R1b
Substrate GPT
R2
Developer
GOT / GPT –R&F CAL
DL-Aspartate
-Ketoglutarate
DL-Alanine
-Ketoglutarate
200 mmol/L
2 mmol/L
pH 7.4
2,4-Dinitrophenylhydrazine
(DNPH)
1 mmol/L
Primary calibrator of pyruvic acid 1.2 mmol/L
STORAGE AND STABILITY
All the components of the kit are stable until the expiration date on the
label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and
contaminations prevented during their use.
Do not use reagents over the expiration date.
Signs of reagent deterioration:
- Presence of particles and turbidity.
ADDITIONAL EQUIPMENT
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 505 nm.
- Thermostatic bath at 37ºC ( 1ºC)
- Matched cuvettes 1.0 cm light path.
- General laboratory equipment.
PROCEDURE
Assay conditions:
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . 1 cm light path
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 15-25ºC
Adjust the instrument to zero with distilled.
Pipette into a tubes:
R 1 a Substrate GOT
R 1 b Substrate GPT
Mix. Return to the bath for:
R 2 Developer
6.
GOT
0.5 mL
--
GPT
-0.5 mL
100 L
100 L
30 min.
30 min.
0.5 mL
0.5 mL
Mix, incubate for 5 min. at 37ºC, add.
Sample
5.
Set up six tubes and pipette (mL):
Tube
Water
GOT Substrate
Calibrator
DNFH
1
0.2
1.0
0.0
1.0
2
0.2
0.9
0.1
1.0
3
0.2
0.8
0.2
1.0
4
0.2
0.7
0.3
1.0
5
0.2
0.6
0.4
1.0
6
0.2
0.5
0.5
1.0
10.0
10.0
Mix. Allow to stand for 20 minutes at room temperature.
NaOH 0.4 N
10.0
10.0
10.0
10.0
Mix. Allow to stand for at least 5 minutes.
2.
3.
Read against a water blank at 505 nm.
Plot a calibration curve of the absorbances found vs. The corresponding
units, on a graph paper, according to the following:
GPT
WU/mL
U/L
WU/mL
U/L
0
0
0
0
22
11
25
12
55
27
50
24
95
46
83
40
150
72
126
62
215
104
---
Units
- One Wróblewski unit (WU) of GOT or GPT is defined as the amount of enzyme
that will form 4.82 x 10-4 mole of Glutamate/min (25ºC).
- To convert WU into international units (U/I), multiply results by 0.482.
QUALITY CONTROL
Control sera are recommended to monitor the performance of assay procedures:
SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and 1002210).
If control values are found outside the defined range, check the instrument, reagents
and technique for problems.
Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and corrective actions
if controls do not meet the acceptable tolerances.
REFERENCE VALUES1
GOT:
8-40 UW / ml (3-18 U/L) GPT:
5-30 UW / ml (2-16 U/L)
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish its
own reference range.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring range: Up to linearity limit of GOT 180 WU (85 U/L) and GPT 126
WU (62 U/L).
If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/10
with NaCl 9 g/L and multiply the result by 10.
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
INTERFERENCES
Haemolysis interferes with the assay1,2. A list of drugs and other interfering
substances with GOT - GOT determination has been reported by Young et. al 3,4.
SAMPLES
Serum 1,2: Stability 7 days at 2-8ºC.
4.
1.
100 mmol/L
2 mmol/L
pH 7.4
PREPARATION
All the reagents are ready to use.
2.
3.
Calibration curve
GOT
Adicional reagent: Sodium hydroxide (NaOH) 0.4 N
1.
CALCULATIONS
From absorbances, read units of GOT or GPT from the corresponding calibration
curves.
NOTES
SPINREACT has instruction sheets for several automatic analyzers.
Instructions for many of them are available on request.
BIBLIOGRAPHY
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
Reitman S, Frankel S.J. Clin Path 1957; 28-56.
Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PACKAGING
Ref: 1001165 (GOT)
Ref: 1001175 (GPT)
Cont.
R1a, R2:1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
R1b, R2: 1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
Mix. Allow to stand for 20 min at room temperature.
NaOH 0,4 N
BEIS13-I
23/06/11
5.0 mL
5.0 mL
SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
GOT –R&F
GPT - R&F
GOT - GPT
Reitman-Frankel. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de transaminasas GOT y GPT
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DEL MÉTODO
Las transaminasas catalizan la transferencia del grupo amino del
aspartato (GOT) o de la alanina (GPT) al -cetoglutarato. El cetoácido
formado, oxalacético o pirúvico respectivamente, en presencia de 2,4Dinitrofenilhidrazina (DNFH) da la hidrazona correspondiente con una
coloración medible en medio alcalino1,2.
SIGNIFICADO CLÍNICO
Las transaminasas GOT y GPT son enzimas intracelulares que se
encuentra en niveles altos en el músculo del corazón, las células del
hígado, las células del músculo esquelético y en menores cantidades en
otros tejidos.
Aunque un nivel elevado de GOT y la GPT en el suero no es específico de
enfermedad hepática se emplea principalmente para su diagnóstico y
seguimiento. El empleo de la GOT en conjunción con la GPT ayuda en el
diagnóstico de infartos de miocardio, ya que el valor de la GPT se
mantiene dentro de los límites normales y aumenta los niveles de
GOT1,2,5,6.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos
clínicos y de laboratorio.
7. Mezclar y dejar reposar 5 min. a temperatura ambiente
8. Leer la absorbancia (A) frente a agua destilada. El color es estable como
mínimo 1 hora.
CÁLCULOS
Los valores de la actividad GOT y GPT se hallan interpolando la absorbancia
hallada para el problema con la curva de calibración.
Curva de calibración
1.
En tubos de ensayo Pipetear (mL):
Tubo
Agua
Substrato GOT
Calibrador
DNFH
DL-Aspartato
-Cetoglutarato
pH 7,4
100 mmol/L
2 mmol/L
Ref: 1001175 GPT
R1b
Substrato GPT
DL-Alanina
-Cetoglutarato
pH 7,4
200 mmol/L
2 mmol/L
R2
Revelador
GOT / GPT –R&F CAL
1 mmol/L
Calibrador primario de ácido pirúvico 1,2 mmol/L
Reactivo adicional: Hidróxido sódico (NaOH) 0,4 N
3
0,2
0,8
0,2
1,0
4
0,2
0,7
0,3
1,0
5
0,2
0,6
0,4
1,0
6
0,2
0,5
0,5
1,0
NaOH 0,4 N
10,0
10,0
10,0
10,0
10,0
10,0
Mezclar bien y dejar 5 min. a temperatura ambiente.
2.
3.
Leer la absorbancia (A) de todos los tubos, frente a agua destilada.
Representar gráficamente los resultados, colocando las absorbancias en
ordenadas y las unidades en abcisas, de acuerdo con la siguiente relación:
GPT
2,4-Dinitrofenilhidrazina
(DNFH)
2
0,2
0,9
0,1
1,0
Mezclar bien y dejar 20 min. a temperatura ambiente.
GOT
REACTIVOS
Ref: 1001165 GOT
R1a
Substrato GOT
1
0,2
1,0
0,0
1,0
WU/mL
U/L
WU/mL
U/L
0
0
0
0
22
11
25
12
55
27
50
24
95
46
83
40
150
72
126
62
215
104
---
Unidades
- Una unidad Wróblewski (UW) de GOT o GPT se define como la cantidad de
enzima que forma 4,82 x 10-4 mol de Glutamato/min (25ºC).
- Para convertir las UW a U/I multiplicar por 0,482.
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
PREPARACIÓN
Todos los reactivos están listo para su uso.
VALORES DE REFERENCIA1
GOT:
8-40 UW / ml (3-18 U/L)
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien
cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm.
- Baño termostatable a 37ºC ( 1ºC)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .505 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en un tubos de ensayo:
R1a Substrato GOT
R1b Substrato GPT
GPT
-0,5 mL
4. Incubar 5 min. a 37ºC, añadir
Muestra
5. Mezclar e incubar a 37ºC, durante:
R2 Revelador
5-30 UW / ml (2-16 U/L)
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Rango de medida: Desde el límite de detección hasta el límite de linealidad
180 UW/ml para la GOT y 126 UW/ml para la GPT
Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/10
con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 10.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas
significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).
Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
INTERFERENCIAS
La hemólisis interfiere con la determinación1,2. Se han descrito varias drogas y
otras substancias que interfieren en la determinación de GOT y GPT 3,4.
MUESTRAS
Suero1,2. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.
GOT
0,5 mL
--
GPT:
NOTAS
SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicación de este
reactivo en distintos analizadores.
BIBLIOGRAFÍA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Murray R. Aspartate aminotransferase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
Reitman S, Frankel S.J. Clin Path 1957; 28-56.
Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRESENTACIÓN
100 L
100 L
30 min.
30 min.
0,5 mL
0,5 mL
Ref: 1001165 (GOT)
Ref: 1001175 (GPT)
Cont.
R1a, R2:1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
R1b, R2: 1 x 250 mL, CAL: 1 x 5 mL
6. Mezclar y dejar 20 min. a temperatura ambiente y añadir:
NaOH 0,4 N
BEIS13-E
23/06/11
5,0 mL
5,0 mL
SPINREACT,S.A./S.A.U Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]