136.PAZ,M. VET-UNL Aislamiento de
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136.PAZ,M. VET-UNL Aislamiento de
XIV Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2013. Jornada Latinoamericana Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario Aislamiento de Influenza porcina en células MDBK Paz, M.E.; Gollan, A.; Campá, M.; Agosto, M.; Favaro, P.; Lotto, B.; García Langhi, P.; Mosso, P.; Occhi, H. Cátedra de Virología. Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral [email protected] La Influenza porcina es una afección viral respiratoria aguda, muy contagiosa, de elevada morbilidad e implicada en complicaciones letales. Es de gran importancia debido a las pérdidas económicas derivadas de su alta morbilidad. El agente causal pertenece a la Familia Orthomyxoviridae, es un ARN de 8 segmentos y polaridad negativa. En su composición proteica se hallan la nucleoproteína, proteína de matriz, hemaglutininas y neuraminidasas. Por ellas se divide a los virus Influenza en tipos A, B y C y subtipos. Su subtipo y virus prototipo ha sido denominado Hsw1N1A/porcino/Iowa/15/30-H1N1. Son frecuentes las variaciones genéticas en sus segmentos lo que origina cambios en las secuencias nucleotídicas de 3 hemaglutininas y neuraminidasas, modificando la identidad antigénica . Se ha demostrado que virus de influenza porcina tuvo su origen en aves, 2 habiéndose propagado al hombre causando enfermedad . El virus circula aún en piaras con ligeras variantes antigénicas motivando enzootias y epizootias tras bruscos cambios climáticos, déficit alimentario, y es cuando los animales desarrollan síntomas respiratorios, disnea, tos paroxística, postración, fiebre, anorexia, descarga nasal y conjuntivitis. Hay atelectasia en los lóbulos pulmonares y taponamiento de bronquios y bronquiolos 1 generando neumonía y enfisema . El virus puede aislarse desde hisopados nasales, lavajes broncoalveolares y pulmones de animales afectados. El diagnóstico de Laboratorio puede hacerse por detección del virus por Inmunofluorescencia con anticuerpos monoclonales, aislamiento viral en huevos embrionados, por pruebas de Hemoaglutinación con eritrocitos de diversas especies (ave, cobayo, humanos) o Aislamiento en células susceptibles y Reacción en cadena de la Polimerasa. Las muestras obtenidas: hisopados nasales en medio de transporte con antibióticoantimicótico y tejidos pulmonares de cerdos con sintomatología y sin ella (de frigorífico).Se procesaron de acuerdo a las pautas del Manual de Vigilancia 4 y Diagnóstico de Influenza en animales de la OMS . Los hisopados se presionaron fuertemente contra las paredes del tubo se centrifugaron y controlaron bacteriológicamente los sobrenadantes. Los tejidos pulmonares se trituraron y morterearon con arena estéril y medio de transporte con antibiótico-antimicótico y se centrifugaron, obteniéndose y controlándose los sobrenadantes. Ambos tipos de muestras fueron inoculadas en monocapas con 90-100% confluentes de la Línea MDCK (cedida por CICV-Laboratorio de Aves y Porcinos, del INTA- Castelar), crecidas en MEM+L- glutamina +10% de suero fetal bovino y 1% de antibiótico-antimicótico, en 25 cm de superficie. Se efectuaron 3 pasajes consecutivos, observándose XIV Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2013. Jornada Latinoamericana Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario diariamente hasta la aparición del efecto citopático (fusión de membranas celulares- sincitios) o por 7 días. Algunas muestras exhibieron el efecto en el 1er pasaje, otras en el 3ero. Tanto en las que apareciera el efecto como no, se congelaron a -20ºC y descongelaron; con los sobrenadantes se efectuaron las pruebas de hemoaglutinación con glóbulos rojos lavados de ave y cobayo al 0.25%, confirmándose algunas por Reacción en cadena de la Polimerasa. De 43 muestras estudiadas: 23 fueron hisopados y 20 pulmones, (8 de casos clínicos y 12 de frigorífico). De ellas 23 fueron positivas: 9 hisopados /14 pulmones, habiéndose hallado títulos hemoaglutinantes de entre 1:4 y 1:64. Las muestras obtenidas resultaron ser adecuadas en su procedimiento de obtención y procesamiento ya que se detectó el virus, tratándose de la extracción en fase aguda y a la necropsia desde las lesiones. La Línea elegida resultó eficiente en la replicación del virus influenza. La negatividad en algunas muestras podría atribuirse a aquellos cerdos que no estuvieran en el momento óptimo de máxima liberación del virus en el momento de recolección de la muestra, o bien el cuadro clínico pudo ser producido por otros virus del complejo respiratorio porcino, o hasta por la ocurrencia del fenómeno de interferencia viral heteróloga. Pese a que en algunas muestras no se logró recuperar el virus de la Influenza porcina, se logró la implementación de técnicas para un diagnóstico eficiente y oportuno. Teniendo en cuenta la fase de crecimiento que transita la explotación porcina y dado que existen evidencias clínicas, serológicas y de aislamientos de la enfermedad a nivel de granjas, se hace necesario poder confirmar los estudios y detectar el agente, evento que no solo puede presentar repercusiones económicas a nivel de las explotaciones porcinas, sino también implicancia en la salud humana. BIBLIOGRAFÍA 1. Fain Binda, J.C. ”Epidemiología de la influenza humana y animal”-UNR Editora-pp.91-99 y 104-109. Setiembre 2001 2. Kida, H.; Ito, T.; Yasuda, J.; Shimizu, Y.; Itakura, C.; Shortridge, K.; Kawaoka, Y.; Webster, R. Potential for transmission of avian influenza viruses to pigs. Journal of General Virology. Vol.75- pp.2183-2188- 1994. 3. Samson, S.; Wong, Y.; Yuen, K. Avian Influenza Infections in Humans. Vol 12-156-178. Chest, 2006 4. Webster, R.; Cox, N.; Stor, K. Who Manual on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance. World Health Organization. Department of comunicable disease surveillance and response. WHO Global Influenza Programme, pág. 96. 2002