HemosIL®

HemosIL®
Dimertest ® - 49738960
Dimertest ® - 49738960
ENGLISH - Insert revision 11/2014
INTENDED USE
The DIMERTEST® Latex Assay is intended for the rapid qualitative or semi-quantitative evaluation of circulating derivatives
of cross-linked fibrin degradation products (XL-FDP) in human plasma.
SUMMARY AND EXPLANATION OF THE TEST
During blood coagulation, fibrinogen is converted to fibrin by the activation of thrombin. The resulting fibrin monomers
polymerize to form a soluble gel of non-cross-linked fibrin. This fibrin gel is then converted to cross-linked fibrin by
thrombin activated Factor XIII to form an insoluble fibrin clot. Production of plasmin, the major clot-lysing enzyme, is
triggered when a fibrin clot is formed.
Fibrinogen and fibrin are both cleaved by the fibrinolytic enzyme plasmin to yield degradation products, but only
degradation products from cross-linked fibrin contain D-dimer.1-3 Therefore, cross-linked fibrin degradation products
(XL-FDP) are a specific marker of fibrinolysis.
TEST PRINCIPLE
DIMERTEST® Latex is a rapid agglutination assay utilizing latex beads coupled with a highly specific D-dimer monoclonal
antibody. XL-FDP present in a plasma sample bind to the coated latex beads, which results in visible agglutination
occurring when the concentration of D-dimer is above the threshold of detection of the assay.
REAGENTS
Composition
R Latex Reagent: a 0.83% suspension of latex particles coated with murine anti-D-dimer monoclonal antibody,
10 mg/mL BSA and 0.1% sodium azide.
P Positive Control: a solution containing purified human D-dimer fragment, 5 mg/mL BSA and 0.1% sodium azide.
N Negative Control: a buffer solution containing 5 mg/mL BSA and 0.1% sodium azide.
BBuffer: a 10 mM phosphate buffer solution containing 0.1% sodium azide.
Warnings and Precautions
• For In Vitro Diagnostic Use Only.
The Dimertest kit is classified as:
Hazard Class: Acute Tox. 4, H302 Hazard statements: H302: Harmful if swallowed. Precautionary statements: P270: Do no eat, drink or smoke when using this product. P301+312: IF SWALLOWED : Call a
poison center or doctor/physician if you feel unwell. P330: Rinse mouth.
• CAUTION: All reagents in DIMERTEST® Latex contain sodium azide (0.1%) as preservative. Do not ingest or allow to
contact skin or mucous membranes. Sodium azide may form explosive azides in metal plumbing. Use proper disposal
procedures.
• CAUTION: The Positive Control in DIMERTEST® Latex contains components of human origin. Each individual blood
donation intended for the production of this reagent is tested for Hepatitis B antigen, anti-HCV, anti-HIV1 and anti-HIV2.
Only donations with negative findings are employed. As complete absence of infectious agents can never be assured, all
materials derived from human blood should be treated as potentially infectious and handled with due care following the
precautions recommended for biohazardous material.
Storage and Stability
Storage: Store at 2°C to 8°C. DO NOT FREEZE.
Stability: Refer to outer package and vial labels for expiration date.
Indication of Reagent Deterioration
Reagent deterioration is indicated by failure of the Latex Reagent to agglutinate with the Positive Control, agglutination
with the Negative Control, or evidence of microbial contamination.
SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION
Plasma prepared from whole blood anticoagulated with sodium citrate is recommended. The use of EDTA and heparin
will result in an increased level of false positive reactions. After separation of the plasma by centrifugation, specimens may
be tested directly for the presence of XL-FDP. Defibrination of the plasma is not recommended. Plasma storage/stability:
-20°C: 2 weeks
Thaw frozen specimens rapidly at 37°C and centrifuge before testing. Refer to CLSI (formerly NCCLS) publication H21-A5
for further instructions on specimen collection, handling and storage.4
PROCEDURE
Materials Provided
DIMERTEST® (Cat. No. 49738960)
Latex Reagent
1 x 2 mL: White Cap
Positive Control
1 x 0.6 mL: Yellow Cap
Test Cards
x 10: 8-well, for agglutination reaction
Stirrers
x 60: for mixing
Instructions for Use
Negative Control 1 x 0.6 mL: Black Cap
Buffer
1 x 20 mL
Materials Required but not Provided
Precision pipettes and tips - 20 μL and 100 μL
Plastic test tubes and rack
Stopwatch or timing device
Disposable gloves
Tissue (for wiping dropper bottle tips)
Important!
• Equilibrate reagents to room temperature (20°C to 25°C) before use.
• Latex Reagent should be mixed by inversion immediately prior to use.
• Prior to each use, the dropper bottle tips must be wiped dry with a tissue.
• Dropper bottles must be held vertically when dispensing drops of reagent.
For correct drop delivery
Wipe tip dry prior to use
Der DIMERTEST® ist ein qualitativer und semiquantitativer Latex Test zur schnellen Bestimmung von zirkulierenden
Derivaten von quervernetzten Fibrinspaltprodukten (XL-FDP) in humanem Plasma.
ZUSAMMENFASSUNG
QUALITY CONTROL
It is recommended that both Positive and Negative Controls be included in each batch of tests to ensure proper
functioning of the system. Control solutions should be tested by the same procedures as patient samples. For the
qualitative screening procedure, a positive result (agglutination) can be obtained by substituting DIMERTEST® Positive
Control for the plasma in steps 3-6. Conversely a negative result (no agglutination) can be obtained by substituting
DIMERTEST® Negative Control for the plasma in steps 3-6. When performing the semiquantitative procedure, it is
recommended that testing of serial dilutions of the Positive Control be conducted. Dimertest® Latex Positive Control
consists of a solution of human D-dimer at a level of approximately 0.80 mg/L (800 ng/mL).
RESULTS
A. Qualitative Assay
For the qualitative assay protocol, the following pattern of results should be obtained:
Undiluted Plasma D-dimer
(XL-FDP) concentration
Negative
Positive
Note: All values in mg/L (ng/mL) are approximate
TESTPRINZIP
Der DIMERTEST® Latex ist ein schneller Agglutinations-Assay unter Verwendung von an Latexpartikel gebundenen,
hochspezifischen monoklonalen D-Dimer Antikörpern. In der Plasmaprobe vorhandenes XL-FDP bindet an die
beschichteten Latex-Partikel. Dadurch kommt es zu einer sichtbaren Agglutination, sofern die Konzentration an D-Dimeren
den Schwellenwert des Tests übersteigt.
Inhalt
R Latex Reagent: Eine 0,83%-ige Suspension von Latexpartikeln, die mit monoklonalem Anti-D-Dimer-Antikörper der
Maus beschichtet sind, die 10 mg/mL bovines Serum-Albumin und 0,1% Natriumazid enthält.
B. Semiquantitative Assay
Approximate levels of XL-FDP, containing the D-dimer domain, for specimen dilutions are shown in Table 1. As with all
semiquantitative tests, some variability in dose-response can be expected.
Table 1
Approximate Range
Sample Dilution
Undiluted
1:2
1:4
D-dimer (XL- FDP) mg/L (ng/mL)
<0.20
(<200)
0.20 - 0.40
(200 - 400)
+
0.40 -0.80
(400 - 800)
+
+
0.80 - 1.60
(800 - 1600)
+
+
+
1.60 - 3.20*
(1600 - 3200*)
+
+
+
+ = agglutination, - = no agglutination
* Levels of XL-FDP greater than 3.20 mg/L (3200 ng/mL) can be estimated by further dilutions beyond 1:8.
Während des Gerinnungsprozesses wird Fibrinogen durch die Aktivierung von Thrombin zu Fibrin umgewandelt. Die
resultierenden Fibrinmonomere polymerisieren zu einem löslichen Gel. Dieses Fibrin-Gel wird anschließend durch
aktivierten Faktor XIII zu quervernetztem Fibrin umgesetzt, wodurch ein unlösliches Fibringerinnsel entsteht. Durch die
Bildung des Fibringerinnsels wird die Produktion von Plasmin gestartet. Plasmin ist das wichtigste Fibrinolyse Enzym.
Fibrinogen und Fibrin werden durch Plasmin enzymatisch gespalten. Nur die Abbauprodukte des quervernetzen Fibrins
(XDP) enthalten D-Dimere.1-3 Aus diesem Grund sind Spaltprodukte von quervernetztem Fibrin (XL-FDP) spezifische
Marker der Fibrinolyse.
REAGENZIEN
Less than 0.20 mg/L (200 ng/mL)
Greater than 0.20 mg/L (200 ng/mL)
P Positive Control: Lösung mit gereinigtem humanem D-Dimer Fragment, die 5 mg/mL bovines Serum-Albumin und
0,1% Natriumazid enthält.
N Negative Control: Lösung mit Puffer, die 5 mg/mL bovines Serum-Albumin und 0,1% Natriumazid enthält.
BBuffer: 10 mM Phosphatpufferlösung, die 0,1% Natriumazid enthält.
1:8
+
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
Clinical diagnosis should not be based on the result of DIMERTEST® Latex alone. Clinical signs and other relevant test
information should be included in the diagnostic decision.
EXPECTED VALUES
A positive result, indicating active fibrinolysis, should be obtained with DIMERTEST® Latex when XL-FDP (D-dimer) levels
are at or greater than approximately 0.20 mg/L (200 ng/mL). Plasma specimens from normal subjects are expected to
give negative results because their plasma XL-FDP concentrations are typically less than 0.20 mg/L (200 ng/mL). Due to
many variables that may affect results, each laboratory should establish its own normal range. Elevated levels of XL-FDP
(containing the D-dimer domain) have been demonstrated in patients by a combination of immunoprecipitation and gel
electrophoresis techniques.1-3,5,6 Monoclonal antibodies allow the specific detection of the D-dimer domain.7 Monoclonal
antibody based D-dimer assays are of diagnostic value in disseminated intravascular coagulation (DIC) and acute
vascular diseases, including pulmonary embolism (PE) and deep venous thrombosis (DVT), conditions that are difficult to
detect reliably by clinical examination.8,9
The amount of XL-FDP detected in a specimen will depend on several interrelated factors in vivo, such as the severity of
the thrombotic episode, the rate of cross linked fibrin formation, and the time elapsed after the thrombotic event until blood
is drawn from the patient.
Elevated levels of XL-FDP as an indication of reactive fibrinolysis have also been reported in surgery, trauma, sickle cell
disease, liver disease, severe infection, sepsis, inflammation, and malignancy.10,11 D-dimer levels also rise during normal
pregnancy but very high levels are associated with complications.12
DIMERTEST® Latex does not cross-react with fibrinogen, factor XIIIa cross-linked fibrinogen,13 or fibrinogen degradation
products.8
Warnung
• Dieses Produkt ist nur für die in vitro Diagnostik geeignet.
Der Dimertest Testkit ist wie folgt klassifiziert:
Gefahrenklasse: Akut Tox. 4, H302 Gefahrenhinweise: H302: Gesundheitsschädlich bei Verschlucken.
Sicherheitssätze: P270: Bei Gebrauch nicht essen, trinken oder rauchen. P301+312: BEI VERSCHLUCKEN: Bei
Unwohlsein GIFTINFORMATIONSZENTRUM oder Arzt anrufen. P330: Mund ausspülen.
• VORSICHT: Alle Reagenzien im DIMERTEST® Latex enthalten weniger als 0,1% Natriumazid (Natriumazid kann in
metallenen Abflußrohren potentiell explosive Azide bilden). Bitte die entsprechenden Abfallbeseitigungsvorschriften
beachten.
• VORSICHT: Die DIMERTEST® Latex Positiv-Kontrolle enthält Komponenten humanen Ursprungs. Jeder Blutspender
wurde auf HIV 1/2-Antikörper, Hepatitis-B-Antigen und HCV-Antigen geprüft. Nur Personen mit negativen Testergebnissen
kamen als Spender in Frage. Da das Vorhandensein von infektiösen Agentien nie mit hundertprozentiger Sicherheit
ausgeschlossen werden kann, sollten sämtliche Materialien humanen Ursprungs als potentiell infektiös betrachtet und
nach den für biogefährliches Material empfohlenen Richtlinien behandelt werden.
Lagerung und Haltbarkeit
Lagerung: Lagerung zwischen 2-8°C. NICHT EINFRIEREN.
Haltbarkeit: Das Verfallsdatum befindet sich auf der Verpackung und den Etiketten.
Anzeichen von Reagenzverfall
Sollte bei der Positiv-Kontrolle keine Agglutination der Latex-Partikel auftreten, die Negativ-Kontrolle agglutinieren
oder Anzeichen einer mikrobiellen Kontamination erscheinen, so ist dies ein Hinweis auf einen möglichen Verfall des
Reagenzens.
PROBENENTNAHME UND VORBEREITUNG
Es wird empfohlen, Citrat-Plasma zu verwenden. Der Einsatz von EDTA oder Heparin kann zu vermehrt falsch positiven
Ergebnissen führen. Nach dem Zentrifugieren kann das Plasma sofort auf das Vorkommen von XL-FDP getestet werden.
Die Defibrination des Plasmas wird nicht empfohlen.
Lagerung/Haltbarkeit Plasma: -20°C: 2 Wochen Gefrorene Proben bei 37°C rasch auftauen und vor dem Testen
zentrifugieren. Hinweise zur Aufbereitung des Blutes sind den Empfehlungen des Deutschen Instituts für Normung - DIN
58 905 - oder dem CLSI (ehemals NCCLS) Dokument H21-A5 zu entnehmen.4
SPECIFIC PERFORMANCE CHARACTERISTICS
TESTVERFAHREN
Plasma from one hundred and seventy (170) apparently healthy, voluntary blood donors was tested using DIMERTEST®
Latex. A negative result was obtained for one hundred and sixty-two (162) of the samples. This equates to a specificity of
95.3% (162/170).
One hundred and forty-five (145) plasma samples from patients judged to be suffering from, or having a high probability
for thrombotic episode, were tested by DIMERTEST® Latex and another agglutination reference method. The correlation
coefficient was r = 0.94 and the regression equation was y = 1.19x.
Intra-assay (within run) reproducibility was determined for 10 replicates of 3 plasma samples that contained different levels
of XL-FDP. The results were equivalent for all replicates.
Inter-assay (run-to-run) reproducibility was determined using 10 plasma samples with XL-FDP titers ranging from 1 to 16.
In 10 runs, the replicates of these specimens did not vary by more than one titer.
In an anticoagulant study of 50 parallel citrated, EDTA and heparin plasma samples, the correlation between the titers
obtained with DIMERTEST® Latex and the expected titers (based on ELISA XL-FDP values) was r = 0.91 for citrated
samples, r = 0.73 for EDTA samples and r = 0.78 for heparin samples. Citrate is the anticoagulant of choice. In a study of
samples from patients with rheumatoid arthritis, 17 were found to agglutinate with DIMERTEST® Latex. In all 17 samples,
the agglutination could be inhibited by the addition of the D-dimer specific monoclonal antibody DD3B6/22, but not with a
non-specific monoclonal antibody of the same subgroup, IgG3K. This suggests that DIMERTEST® Latex is insensitive to
rheumatoid factor disturbances.
No assay interference was demonstrated with DIMERTEST® Latex with spiked specimens containing potential
interferents at the following concentrations:
Mitgelieferte Materialien
DIMERTEST® (Art. Nr. 49738960)
Latexreagenz
1 x 2 mL: weisse Kappe Negative Kontrolle Positive Kontrolle
1 x 0,6 mL: gelbe Kappe
Puffer Testkarten
x 10: 8-Felder, für die Agglutinationsreaktion
Rührer
x 60: zum Mischen
Gebrauchsanweisung
Bilirubin0.2 mg/mLHemoglobin
Lipids (triglycerides)
30 mg/mL
Protein (gamma globulin)
DEUTSCH - Packungsbeilage Version 11/2014
VERWENDUNG
Semiquantitative Method
1. Prepare serial dilutions of the test plasma with Buffer as follows:
1:2 dilution 100 μL plasma plus 100 μL Buffer solution
1:4 dilution 100 μL 1:2 dilution plus 100 μL Buffer solution
1:8 dilution 100 μL 1:4 dilution plus 100 μL Buffer solution
2. Test each dilution as described in the qualitative method.
5.0 mg/mL
0.06 g/mL
Qualitative Method
1. Mark (or make note of) positions on the test slide for specimens and, as needed, for positive and negative controls.
2. Hold the Latex Reagent dropper bottle vertically and place one drop of the reagent within a well on a Test Card.
3. AVOID touching the surface of the Test Card. Accurately pipette 20 μL of undiluted plasma or add one drop of control
solution inside the same well next to the drop of Latex Reagent.
4. Mix the Latex Reagent and sample with a stirrer until the Latex is uniformly distributed.
5. Rock the Test Card gently by hand for exactly 3 minutes.
6. At exactly 3 minutes, check for agglutination under a strong light source. Note: If test reading is delayed beyond 3
minutes, the latex suspension may dry out giving a false agglutination pattern. If this is suspected, the specimen
must be retested.
7. Discard the Test Card and stirrer into a biohazard container – do not re-use.
1 x 0,6 mL: schwarze Kappe
1 x 20 mL
Erforderliche Materialien (nicht im Lieferumfang enthalten)
Präzisionspipetten und Spitzen - 20 μL und 100 μL
Kunststoffteströhrchen und Ständer Stoppuhr oder Zeitmesser
Einweghandschuhe
Zellstofftücher (zum trockenwischen der Flaschenspitzen)
Wichtig!
• Vor Gebrauch Reagenzien auf Raumtemperatur (20 bis 25°C) bringen.
• Unmittelbar vor der Verwendung müssen die Latexreagenzien durch Umdrehen gemischt werden.
• Vor jedem Gebrauch die Spitzen der Tropfflaschen mit Zellstofftüchern trockenwischen.
• Die Tropfflaschen müssen beim Betropfen der Testkarten senkrecht gehalten werden.
Für korrekte Tropfenentnahme
Flaschenspitzen trocken wischen
Qualitative Methode
1. Markieren (oder notieren) der Felder auf der Testkarte für Proben und, falls nötig, für die positiven und negativen
Kontrollen.
2. Die Tropfflasche senkrecht halten und einen Tropfen Latexreagenz auf ein markiertes Feld auf der EinwegReaktionstestkarte geben.
3. Die abzulesende Oberfläche der Testkarte NICHT BERÜHREN.
4. Auf dasselbe Feld direkt neben den Latexreagenztropfen genau 20 μL unverdünntes Testplasma pipettieren oder
Symbols used / Verwendete Symbole / Símbolos utilizados / Symboles utilisés / Simboli impiegati / Símbolos utilizados
Bibliography / Literatur / Bibliografía / Bibliographie / Bibliografia /Bibliografia
In vitro diagnostic medical
device
In-vitro Diagnostikum
De uso diagnóstico in vitro
Dispositif mèdical de
diagnostic in vitro
Per uso diagnostico in
vitro
Dispositivo médico para
utilização em diagnóstico
in vitro
1. Gaffney, P.J. Distinction between Fibrinogen and Fibrin Degradation Products in Plasma. Clin. Chim. Acta. 65 (1):
109-115; 1975.
2. Lane, D.A. et al. Characterisation of Serum Fibrinogen and Fibrin Fragments Produced During Disseminated
Intravascular Coagulation. Br. J. Haematol. 40 (4): 609-615; 1978.
3. Whitaker, A.N. et al. Identification of D-dimer-E complex in Disseminated Intravascular Coagulation. Thromb. Res. 18
(3-4): 453-459; 1980.
4. Clinical and Laboratory Standards Institute. Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing
Plasma-Based Coagulation and Molecular Haemostasis Assays; Approved Guideline – Fifth Edition, CLSI Document
H21-A5; Vol. 28 No. 5.
5. Graeff, H. et al. Detection and Relevance of Crosslinked Fibrin Derivatives in Blood. Semin. Thromb. Hemost. 8 (1):
57-68; 1982.
6. Yoshioka, K. et al. Distinction between Fibrinogen and Fibrin Products produced during Disseminated Intravascular
Coagulation in Childhood. Eur. J. Pediatr. 138 (1): 46-48; 1982.
7. Rylatt, D.B. et al. An Immunoassay for Human D-dimer using Monoclonal Antibodies. Thromb. Res. 31 (6): 767-778;
1983.
Batch code
Chargen-Bezeichnung
Identificación número
de lote
Désignation du lot
Numero del lotto
Número de lote
Use by
Verwendbar bis
Caducidad
Utilisable jusqu’à
Da utilizzare prima del
Data límite de utilização
Temperature limitation
Festgelegte Temperatur
Temperatura de
Almacenamiento
Températures limites de
conservation
Limiti di temperatura
Límite de temperatura
Consult instructions for
use
Beilage beachten
Consultar la metódica
Lire le mode d’emploi
Vedere istruzioni per l’uso
Consultar as instruções
de utilização
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Control
Kontrollen
Control
Contrôle
Controllo
Controlo
Biological risks
Biologisches Risiko
Riesgo biológico
Risque biologique
Rischio biologico
Risco biológico
Manufacturer
Hergestellt von
Fabricado por
Fabricant
Prodotto da
Fabricado por
Authorised representative
Bevollmächtigter
Representante autorizado
Mandataire
Rappresentanza
autorizzata
Representante autorizado
einen Tropfen der Kontrolllösung zugeben.
5. Den Latexreagenz- und Probentropfen mit einem Kunststoffrührstab mischen, bis das Latexreagenz gleichmäßig
verteilt ist. Objektträger für exakt 3 Minuten von Hand bewegen; keine mechanischen Mischer o.ä. verwenden.
6. Nach Ablauf der 3 Minuten sofort unter einer starken Lichtquelle auf Agglutination prüfen. Hinweis: Falls ein Ablesen
des Tests erst nach mehr als 3 Minuten erfolgt, ist ein Austrocknen der Latex-Suspension möglich, was zu einem
falschen Agglutinationsmuster führt. Wenn dies vermutet wird, muss die Probe neu etestet werden.
7. Testkarte und Rührer in einem Behälter für biogefährliches Material entsorgen. Nicht wiederverwenden.
Semiquantitative Methode
1. Mit Phosphatpuffer Serienverdünnungen des Testplasmas wie folgt herstellen:
Verdünnung 1:2 100 μL Plasma + 100 μL Pufferlösung
Verdünnung 1:4 100 μL Verdünnung 1:2 + 100 μL Pufferlösung
Verdünnung 1:8 100 μL Verdünnung 1:4 + 100 μL Pufferlösung
2. Jede Verdünnung wie für die qualitative Methode beschrieben testen.
QUALITÄTSKONTROLLE
Um die richtige Funktionalität des Systems sicherzustellen und die Qualität der Analyse zu überprüfen, wird empfohlen,
in jeder Serie sowohl die Positiv- als auch die Negativ-Kontrolle mitlaufen zu lassen. Die Kontrolllösungen müssen mit
derselben Methode wie die Patientenproben getestet werden. Wird das Ergebnis nur qualitativ ausgegeben kann ein
positiver Befund (Agglutination) erzielt werden, indem statt Plasma die DIMERTEST® Positiv-Kontrolle in den Schritten
3-6 der Methodendurchführung eingesetzt wird. Dementsprechend kann ein Negativbefund (keine Agglutintion) durch
Einsetzen der DIMERTEST® Negativ-Kontrolle in den Schritten 3-6 erzielt werden. Bei Ausführung der semiquantitativen
Methode wird empfohlen, serielle Verdünnungen der Positiv-Kontrolle zu machen. Die DIMERTEST® Positiv-Kontrolle ist
eine Lösung mit ungefähr 0,80 mg/L (800 ng/mL), humanem D-Dimer.
ERGEBNISSE
A. Qualitativer Test
Beim qualitativen Testprotokoll sollte folgendes Ergebnismuster erscheinen:
Unverdünntes Plasma
D-Dimer (XL-FDP) Konzentration
Negativ
weniger als 0,20 mg/L (200 ng/mL)
Positiv
mehr als 0,20 mg/L (200 ng/mL)
Hinweis: Bei den Angaben in mg/L (ng/mL) handelt es sich um Näherungswerte.
B. Semiquantitativer Test
Näherungsbereiche für XL-FDP D-Dimer-Spiegel der verschiedenen Plasmaverdünnungen werden in Tabelle 1
aufgeführt. Wie bei allen semiquantitativen Testmethoden kann eine gewisse Variabilität bezüglich der Dose-Response
erwartet werden.
Tabelle 1
Näherungsbereiche
Plasmaverdünnung
Unverdünnt
1:2
1:4
1:8
D-dimer (XL- FDP) mg/L (ng/mL)
<0 ,20
(<200)
0 ,20 - 0 ,40
(200 - 400)
+
0 ,40 -0 ,80
(400 - 800)
+
+
0 ,80 - 1 ,60
(800 - 1600)
+
+
+
1 ,60 - 3 ,20*
(1600 - 3200*)
+
+
+
+
+ = Agglutination, - = Keine agglutination
* XL-FDP Konzentrationen über 3,20 mg/L (3200 ng/mL) können ermittelt werden, indem das Verdünnungsschema über
eine Verdünnung von 1:8 hinaus erweitert wird.
EINSCHRÄNKUNGEN
Eine klinische Diagnose sollte nicht auf einem DIMERTEST® Latex Ergebnis alleine basieren. Das klinische Bild und
andere relevante Testinformationen sollten in die diagnostische Bewertung mit einbezogen werden.
ZU ERWARTENDE WERTE
Ein positives Resultat, welches eine aktive Fibrinolyse indiziert, sollte mit dem DIMERTEST® Latex erhalten werden, wenn
die XL-FDP- (D-Dimer) Konzentrationen größer oder gleich 0,20 mg/L (200 ng/mL) sind. Plasmaproben von normalen
Testpersonen sollten aufgrund von XL-FDP-Konzentrationen unterhalb 0,20 mg/L (200 ng/mL) ein negatives Testergebnis
liefern. Aufgrund verschiedener Variablen, die das Testergebnis beeinflussen können, wird empfohlen, dass jedes Labor
seinen eigenen Normalbereich ermittelt.
Erhöhte Konzentrationen von XL-FDP (D-Dimer-Domänen beinhaltend) können bei Patienten durch eine Kombination von
Immunpräzipitation und Gel-Elektrophorese-Techniken nachgewiesen werden.1-3,5,6 Monoklonale Antikörper7 erlauben
den spezifischen Nachweis von D-Dimer-Domänen.
Auf monoklonalen Antikörpern basierende D-Dimer Tests sind von diagnostischer Bedeutung vor allem bei
disseminierter intravasaler Gerinnung (DIC) und akuten vaskulären Erkrankungen, wie Lungenembolien (PE) und tiefen
Venenthrombosen (DVT), die mittels klinischer Untersuchungen nur schwer zuverlässig nachzuweisen sind.8,9 Die in einer
Probe nachgewiesene Menge an XL-FDP, hängt von verschiedenen, in vivo in Bezug zueinander stehenden, Faktoren ab,
wie des Schweregrads des thrombotischen Ereignisses, der Bildungsrate des quervernetzten Fibrins und der Zeitspanne
zwischen Auftreten des thrombotischen Ereignisses und der Blutentnahme.
Erhöhte XL-FDP-Konzentrationen als Indikation für eine reaktive Fibrinolyse sind ebenso bei Operationen, Traumen,
Sichelzellenanämie, Lebererkrankungen, Sepsis, Entzündungen und malignen Tumoren beschrieben worden.10,11 Auch
bei normal verlaufenden Schwangerschaften können erhöhte D-Dimer Spiegel auftreten, sehr hohe Werte sind jedoch
meist mit Komplikationen verbunden.12
Beim DIMERTEST® Latex tritt keine Kreuzreaktion mit Fibrinogen, mit Faktor XIII stabilisiertem, quervernetzten
Fibrinogen13 oder Fibrinogen Abbauprodukten auf.8
LEISTUNGSDATEN
Plasma von 170 gesunden, freiwilligen Blutspendern wurde mit dem DIMERTEST® Latex getestet. Bei 162 Plasmen
wurde ein negatives Testergebnis erzielt. Dies entspricht einer Spezifität von 95,3 % (162/170).
145 Plasmaproben von Patienten mit thrombotischen Ereignissen bzw. einer hohen Wahrscheinlichkeit dafür, wurden
ebenfalls mit dem DIMERTEST® Latex und einer anderen Agglutinations-Referenz-Methode untersucht, wobei ein
Korrelationskoeffizient von r= 0,94 und die Regressionsgleichung y=1.19x ermittelt wurde.
Die Präzision wurde über zehn Läufe mit drei Plasmen unterschiedlicher D-Dimer Konzentration bestimmt. Die Ergebnisse
waren bei allen Läufen vergleichbar. Die Präzision im Lauf wurde mit zehn Plasmen in den Verdünnungsstufen zwischen
1 und 16 bestimmt. In diesen zehn Läufen wichen die Plasmen nicht mehr als eine Verdünnungsstufe ab. In einer
Antikoagulantien-Studie wurden 50 Plasmen parallel mit Citrat, EDTA und Heparin antikoaguliert und Korrelationen
zwischen den mit dem DIMERTEST® Latex ermittelten und den erwarteten, auf ELISA D-Dimer Werten beruhenden,
Titer erstellt. Die ermittelten Korrelations-koeffizienten r= 0,91 für Citrat-Plasmen, r=0,73 für EDTA-Plasmen und r= 0,78
für heparinisierte Plasmen führen zu der Empfehlung Citrat-Plasmen zu verwenden. In einer Studie mit Plasmen von
Patienten mit rheumatoider Arthritis, agglutinierten 17 der Plasmen mit DIMERTEST® Latex. In allen 17 Proben konnte
die Agglutination durch Zugabe von D-Dimer spezifischen monoklonalen Antikörpern DD3B6/22 gehemmt werden; mit
nicht-spezifischen monoklonalen Antikörpern der selben Untergruppe, IgG3k, trat diese Hemmung nicht ein. Dies zeigt,
dass der DIMERTEST® Latex insensitiv gegenüber Störungen des Rheumafaktors ist. Bei der Testung von Proben welche
mit potentiellen Interferenzien gespiked waren, zeigten sich mit dem DIMERTEST® Latex keine Test-Interferenzen bis zu
den folgenden Konzentrationen:
Bilirubin0,2 mg/mLHämoglobin
Lipämie (Triglyzeride)
30 mg/mL Protein (Gammaglobulin) 5,0 mg/mL
0,06 g/mL
8. Elms, M.J. et al. Rapid Detection of Cross-Linked Fibrin Degradation Products in Plasma using Monoclonal AntibodyCoated Latex Particles. Am. J. Clin. Pathol. 85 (3): 360-364; 1986.
9. Whitaker, A.N. et al. Measurement of Cross-Linked Fibrin Derivatives in Plasma: an Immunoassay using Monoclonal
Antibodies. J. Clin. Pathol. 37 (8): 882-887; 1984.
10. Hunt, F.A. et al. Serum Crosslinked Fibrin (XDP) and Fibrinogen/Fibrin Degradation Products (FDP) in Disorders
Associated with Activation of the Coagulation or Fibrinolytic Systems. Br. J. Haematol. 60 (4): 715-722; 1985.
11. Smith, R.T. et al. Fibrin Degradation Products in the Postoperative Period. Evaluation of a New Latex Agglutination
Method. Am. J. Clin. Pathol. 60 (5): 644-647; 1973.
12. Nolan, T.E. et al. Maternal Plasma D-dimer Levels in Normal and Complicated Pregnancies. Obstet. Gynecol. 81(2):
235-238, 1993.
13. Greenberg, C.S. et al. Measurement Of Plasma Fibrin D-Dimer Levels With The Use Of Monoclonal Antibody Coupled
To Latex Beads. Am. J. Clin. Pathol. 87 (1): 94-100; 1987.
Dimertest is a registered trademark of Sekisui Diagnostics, LLC
Issued November 2014
U.S. Patent 4, 758, 524.
RM1129-G Rev. 11/2014
HemosIL®
Dimertest ® - 49738960
ESPAÑOL - Revisión Prospecto 11/2014
Dimertest ® - 49738960
FRANÇAIS - Révision de la notice 11/2014
APLICACIONES
aproximado de 0,80 mg/L (800 ng/mL) de XDP.
UTILISATION
D-Dimères plasmatiques à la concentration moyenne de 0,80 mg/l (800 ng/ml).
DIMERTEST® Latex es un test rápido para la detección cualitativa y semicuantitativa de los productos de degradación
de la fibrina (XDP) en plasma humano.
RESULTADOS
DIMERTEST® est un test sur lame qualitatif et semi-quantitatif pour la mise en évidence des produits de dégradation de la
fibrine stabilisée (XL-FDP) dans le plasma humain.
RESULTATS
SUMARIO
Durante el proceso de la coagulación sanguínea, el fibrinógeno se transforma en fibrina por la activación de la trombina.
Los monómeros de fibrina resultantes polimerizan formando un gel de fibrina soluble. Este gel de fibrina se transforma,
entonces, y gracias al FXIIIa en un coágulo insoluble de fibrina. Cuando se forma el coágulo de fibrina se desencadena la
producción de Plasmina, el mayor enzima proteolítico del coágulo.
La Plasmina degrada tanto el Fibrinógeno como la fibrina, dando lugar a productos de degradación, pero únicamente
los productos de degradación de la malla de fibrina (XDP) contienen el Dímero D.1-3 Por consiguiente, los productos de
degradación del fibrina (XDP) son marcadores específicos de la fibrinolisis.
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
DIMERTEST® Latex es un test rápido de aglutinación que utiliza partículas de látex unidas a un anticuerpo monoclonal
altamente específico para el Dímero D. El XDP presente en el plasma se une a las partículas de látex; se visualiza
aglutinación cuando la concentración de Dímero D está por encima del límite de detección del test.
REACTIVOS
Composición
R Latex Reagent: 0,83% suspensión de partículas de látex recubiertas con anticuerpo monoclonal de ratón antiDímero D, con albúmina bovina (10 mg/mL) y azida sódica (0,1%).
P Positive Control: solución de fragmentos de Dímero D humano purificado, con albúmina bovina (5 mg/mL) y azida
sódica (0,1%).
N Negative Control: solución tampón, con albúmina bovina (5 mg/mL) y azida sódica (0,1%).
BBuffer: solución de tampón fosfato 10 mM con azida sódica (0,1%).
PRECAUCIÓN:
• Este reactivo es para diagnóstico in vitro.
El kit Dimertest se ha clasificado como:
Clase de peligro : Tox. ag. 4, H302 Indicaciones de peligro: H302: Nocivo en caso de ingestión Consejos de prudencia: P270: No comer, beber ni fumar durante su utilización.
P301+312: EN CASO DE INGESTIÓN: Llamar a un CENTRO DE INFORMACIÓN TOXICOLÓGICA o a un médico si se
encuentra mal. P330: Enjuagarse la boca.
• ATENCIÓN: Todos los reactivos del kit DIMERTEST® Latex contienen azida sódica (0,1%) que puede reaccionar con
tuberías metálicas dando lugar a azidas explosivas. Tomar las precauciones adecuadas para su deshecho.
• ATENCIÓN: El Control Positivo del kit DIMERTEST® Latex contiene material de origen humano. El material usado en
este producto ha sido verificado por los métodos aprobados por la FDA y encontrado no reactivo al Antígeno de
Superficie de la Hepatitis B (HBsAg), Anti-HCV y anticuerpos HIV. Manejar con precaución como si fuese
potencialmente infeccioso.
Conservación y estabilidad
Conservación: conserve a 2-8°C. NO CONGELAR.
Estabilidad: Referirse a las etiquetas del kit y del vial para consultar la fecha de caducidad.
Indicativos de deterioro del reactivo
Son indicativos de deterioro del reactivo: una mala aglutinación del reactivo de Látex con el control positivo, aglutinación
con el control negativo o evidencias de contaminación microbiológica.
RECOLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Se recomienda trabajar con plasma tratado con citrato sódico como anticoagulante. La utilización de EDTA y Heparina
puede dar lugar a resultados superiores a los reales o falsos positivos. Las muestras deberán ser analizadas lo antes
posible después de su centrifugación. No se recomienda la desfibrinación del plasma.
Conservación / estabilidad del plasma: -20°C durante 2 semanas.
Descongele las muestras congeladas rápidamente a 37°C y centrifúguelas antes de analizarlas. Para la recolección,
manejo y conservación del plasma seguir las recomendaciones del documento H21-A5 de la CLSI (anteriormente
NCCLS).4
PROCEDIMIENTO DEL TEST
Materiales suministrados
DIMERTEST® (Cat. No. 49738960)
Reactivo Látex 1 x 2 mL: Tapón blanco
Control Negativo 1 x 0,6 mL: Tapón Negro
Control Positivo 1 x 0,6 mL: Tapón amarillo
Tampón 1 x 20 mL
Tarjetas Test
x 10: 8-posiciones, para la reacción de aglutinación
Agitadores x 60: para mezclar.
Instrucciones de Uso
Materiales Necesarios que no se Suministran
Pipetas de precisión y puntas de 20 μL y 100 μL
Tubos de ensayo de plástico y gradillas
Guantes desechables
Cronómetro
Papel (para secar los cuentagotas de los viales)
Importante!
• Atempere los reactivos a 20-25°C antes de utilizarlos.
• El reactivo de látex deberá mezclarse por inversión inmediatamente antes de su empleo.
• Antes de usar, debe secarse el cuentagotas de la botella con un papel seco.
• Los viales con cuentagotas deben mantenerse en posición totalmente vertical e invertida para dispensar
correctamente las gotas de reactivo.
Para una correcta dispensación de reactivo
secar el cuentagotas antes de usar
A. Ensayo cualitativo
Para el protocolo de ensayo cualitativo, se debe obtener el siguiente patrón de resultados:
Plasma sin diluir
Concentración de Dímero D (XDP)
Negativo
Positivo
Nota: Todos los valores en mg/L (ng/mL) son aproximados.
< 0,20 mg/L (200 ng/mL)
> 0,20 mg/L (200 ng/mL)
B. Ensayo semicuantitativo
En la tabla 1 se muestran los niveles aproximados de XDP, que contienen el dominio Dímero D, para cada dilución de la
muestra. Al igual que en todos los tests semicuantitativos, se puede esperar variabilidad en la dosis-respuesta.
Tabla 1
Rango Aproximado
Dilución de la muestra
Sin diluir
1/2
1/4
1/8
Dímero D (XDP) mg/L (ng/mL)
<0,20
(<200)
0,20 - 0,40
(200 - 400)
+
0,40 -0,80
(400 - 800)
+
+
0,80 - 1,60
(800 - 1600)
+
+
+
1,60 - 3,20*
(1600 - 3200*)
+
+
+
+
+ = aglutinación, - = no-aglutinación
* Los niveles mayores que 3,20 mg/L (3200 ng/mL) de XDP pueden calcularse ampliando las diluciones por encima de 1:8.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
El diagnóstico clínico no debe basarse únicamente en el resultado del DIMERTEST®. Para establecer un diagnóstico, los
resultados del análisis deben ser usados conjuntamente con otra información, incluyendo el contexto clínico.
VALORES ESPERADOS
Cuando los niveles de XDP (Dímero-D) son superiores a 0,20 mg/L (200 ng/mL) el resultado se considerará positivo,
indicando una fibrinolisis activa. Muestras de individuos normales deben dar resultados negativos ya que la concentración
en su plasma de XDP es normalmente inferior a 0,20 mg/L (200 ng/mL). Debido a las variables que pueden afectar los
resultados, cada laboratorio debe establecer su propio rango de normalidad.
Niveles elevados de XDP (que contengan el dominio Dímero D) se han detectado en pacientes con la combinación de
técnicas de inmunoprecipitación y electroforesis en gel.1-3,5,6 Anticuerpos monoclonales (Mab)7 permiten actualmente
detectar específicamente el dominio Dímero D.
Los ensayos de Dímero D, basados en anticuerpos monoclonales, tienen un gran valor diagnóstico en la coagulación
intravascular diseminada (CID), y en patologías vasculares agudas tales como el embolismo pulmonar (EP) y trombosis
venosa profunda (TVP), situaciones que son difíciles de detectar por examen clínico.8,9
La cantidad de XDP detectado en una muestra dependerá de diferentes factores in vivo, como son la severidad del
episodio trombótico, el grado de formación de la malla de fibrina, y del tiempo transcurrido entre el episodio trombótico y
la toma de muestra del paciente.
También se han reportado niveles elevados de XDP como indicador de fibrinolisis reactiva en cirugía, traumatismos, en la
anemia drepanocítica, hepatopatías, infección severa / sepsis, inflamación y procesos malignos.10 Durante un embarazo
de desarrollo normal, los niveles de Dímero-D se elevan aunque mucho menos que en aquellos embarazos asociados a
complicaciones.12
El Test de Látex DIMERTEST® no tiene reacciones cruzadas con el fibrinógeno, fibrinógeno unido al Factor XIIIa,13 o
productos de degradación del fibrinógeno.
CARACTERÍSTICAS FUNCIONALES
Plasmas procedentes de 170 donantes de sangre aparentemente sanos se analizaron con el Test de Látex
DIMERTEST®. Se obtuvieron 162 resultados negativos. La especificidad se estimó en un 95.3% (162/170). 145 Plasmas
procedentes de pacientes que han sido diagnosticados o con alta probabilidad de sufrir un episodio trombótico, se
analizaron con el Test de Látex DIMERTEST® y con otro método de aglutinación de referencia. El coeficiente de
correlación fue de r = 0,94 y una ecuación de regresión de y = 1,19 x.
La reproducibilidad intraserie se determinó a partir de 10 replicados de 3 plasmas que contenían distintos niveles de XDP.
Los resultados fueron equivalentes para todos los replicados.
La reproducibilidad interserie se determinó a partir de 10 plasmas que contenían una titulación desde 1 hasta 16.
En 10 series, los replicados de estas muestras no variaron más de 1 título (o dilución).
En un estudio sobre anticoagulantes 50 muestras de plasmas fueron tratadas paralelamente con Citrato Sódico, EDTA y
Heparina. La correlación obtenida entre los títulos del Test de Látex DIMERTEST® y el título esperado (basado en valores
de XDP obtenidos por ELISA) fue de r = 0,91 en las muestras citratadas, r = 0,73 en las muestras con EDTA y r = 0,78 en
las muestras con Heparina. El Citrato Sódico es el anticoagulante óptimo.
En un estudio con muestras procedentes de pacientes con artritis reumatoide, 17 muestras aglutinaron con el Test de
Látex DIMERTEST®. En estas 17, la aglutinación se pudo inhibir con la adición de un anticuerpo monoclonal específico
del Dímero D (DD3B6/22), pero no con un anticuerpo monoclonal inespecífico del mismo subgrupo, IgG3k.
Esto sugiere que el Test de Látex DIMERTEST® es insensible a la presencia de factor reumatoide.
No se ha demostrado interferencias con DIMERTEST® en muestras que contengan interferentes potenciales a las
siguientes concentraciones:
Bilirrubina
0,2 mg/mL
Hemoglobina
5,0 mg/mL
Lipemia (triglicéridos)
30 mg/mL
Proteína (gamma globulina)
0,06 g/mL
PRINCIPE
Durant la coagulation, le fibrinogène est converti en fibrine par activation de la thrombine. Les monomères de fibrine issus
de cette conversion se polymérisent afin de former un gel soluble de fibrine instable. Ce gel est ensuite converti en fibrine
stable par action du Facteur XIII activé par la thrombine afin de former un caillot insoluble. La production de plasmine,
enzyme majeure de lyse du caillot, est activée lorsqu’un caillot de fibrine est formé.
Le fibrinogène et la fibrine sont clivés par la plasmine (enzyme fibrinolytique), mais seuls les produits de dégradation
de la fibrine contiennent des D-Dimères.1-3 Enfin, les produits de dégradation (XL-FDP) de la fibrine stabilisée sont un
marqueur de la fibrinolyse.
DIMERTEST® Latex est un test sur lame basé sur l’agglutination de bille de latex couplées à un anticorps monoclonal
très spécifique anti-D-Dimère. Les XL-FDP présents dans le plasma du patient se fixent sur les particules de latex
adsorbées, et une agglutination apparaît lorsque la concentration en D-Dimères est supérieure au seuil décisionnel du
test (« cut-off »).
REACTIFS
Composition
R Latex Reagent: Suspension de particules de latex (0,83%) adsorbées avec un anticorps monoclonal de souris antiD-Dimère, albumine bovine sérique 10 mg/ml et azide de sodium 0,1%.
P Positive Control: Solution contenant des fragments purifiés de D-Dimères humains, de l’albumine bovine sérique 5
mg/ml et de l’azide de sodium 0,1%.
N Negative Control: Solution contenant du tampon, de l’albumine bovine sérique 5 mg/ml et de l’azide de sodium
0,1%.
BBuffer: Solution de tampon phosphate 10 mM contenant de l’azide de sodium 0,1%.
Précautions
• Ce produit est à usage diagnostique in vitro.
Le réactif Dimertest est classé comme suit :
Classe de danger: Acute Tox. 4, H302 Indications de danger: H302: Nocif en cas d’ingestion. Conseils de prudence: P270: Ne pas manger, boire ou fumer en manipulant ce produit. P301+P312: EN CAS
D’INGESTION: appeler un CENTRE ANTIPOISON ou un médecin en cas de malaise.
P330: Rincer la bouche.
• ATTENTION: Tous les réactifs du coffret contiennent 0,1% d’azide de sodium comme conservateur. L’azide de sodium
peut former des azides de plomb ou de cuivre avec les canalisations du laboratoire, susceptibles d’exploser par
percussion. Pour cette raison, il est conseillé de rincer abondamment à l’eau après élimination des réactifs.
• ATTENTION: Le contrôle positif du coffret contient des produits d’origine humaine. Ils ont été trouvés négatifs pour les
anticorps anti VIH 1/2, anti VHC et l’antigène de surface de l’hépatite B (AgHBs), en utilisant des trousses de dépistage de
3ème génération. Cependant, aucune technique ne permettant d’assurer l’absence totale du virus HIV ou de l’hépatite B
ou de tout autre agent infectieux, ces réactifs sont à manipuler avec les précautions d’usage.
Conservation et stabilité
Conservation: Conservés les réactifs entre 2 et 8°C. NE PAS CONGELER.
Stabilité: Se référer à l’emballage et aux étiquettes des flacons pour les informations relatives à la date de péremption.
Indication de détérioration
L’absence d’agglutination avec le contrôle positif, une agglutination avec le contrôle négatif ou la visualisation d’une
contamination microbienne sont les témoins d’une détérioration du réactif latex.
RECUEIL DES ECHANTILLONS ET PREPARATION
Il est recommandé d’utiliser des plasmas préparés à partir de sang total anti-coagulé avec du citrate de sodium.
L’utilisation d’ EDTA et d’héparine entraînera une augmentation du nombre de faux positifs. Les spécimens de plasmas
doivent être analysés immédiatement après centrifugation. La défibrination du plasma n’est pas recommandée.
Conservation/Stabilité du Plasma: 2 semaines à -20°C.
Décongeler rapidement à 37°C les échantillons et centrifuger avant de réaliser le test.
Se référer au document CLSI (anciennement NCCLS) H21-A5 ou au document GEHT (STV, numéro spécial, 1-40, 1998)
pour plus d’informations sur le prélèvement des échantillons, leur manipulation et leur stockage.4
REALISATION DU TEST
Materiels Fournis
DIMERTEST® (Réf. 49738960)
Réactif latex 1 flacon de 2 ml, bouchon blanc
Contrôle négatif 1 flacon de 0,6 ml, bouchon
noir
Contrôle positif 1 flacon de 0,6 ml, bouchon jaune
Tampon
1 flacon de 20 ml
Lame de test 10 x 8 puits, pour la réaction d’agglutination
Agitateur 60 unités permettant le mélange
Instructions d’utilisation
Materiels Requis mais non Fournis
Pipettes de précision et embouts 20 μl et 100 μl
Tubes plastiques et portoirs
Chronomètre
Gants jetables
Tissu (pour essuyer les flacons compte-gouttes)
Méthode qualitative
1. Repérer les positions des spécimens et si nécessaire des contrôles positif et négatif sur la lame.
2. Tenir le flacon doseur latex verticalement et déposer une goutte de réactif latex dans le puits de la lame test. EVITER
de toucher la surface de lecture de la lame test.
3. Pipeter avec précision 20 μl de plasma à tester non dilué ou ajouter une goutte de solution de contrôle à l’endroit
précis où l’on a déposé le latex.
4. Mélanger le latex et l’échantillon à l’aide d’un agitateur jusqu’à obtention d’une répartition uniforme du latex.
5. Agiter manuellement et doucement la lame test pendant 3 minutes très exactement.
6. Après 3 minutes exactement, lire l’agglutination sous une source lumineuse. Note: Si la lecture du test est effectuée
très au-delà de 3 minutes, la suspension de latex peut être asséchée et donner l’aspect d’une réaction faussement
positive. Dans un tel cas, le test doit être réitérer.
7. Jeter la lame test et l’agitateur dans un conteneur prévu à cet effet – Ne pas réutiliser.
Método semicuantitativo
1. Prepare diluciones seriadas del plasma a analizar con el tampón de la siguiente forma:
dilución 1:2 100 μL de plasma + 100 μL de tampón
dilución 1:4 100 μL de la dilución 1:2 + 100 μL de tampón
dilución 1:8 100 μL de dilución 1:4 + 100 μL de tampón
2. Analice todas las diluciones de la forma descrita para el método cualitativo.
Méthode semi-quantitative
1. Préparer des dilutions en série du plasma à tester dans du tampon comme suit:
Dilution 1/2 100 μl de plasma pur + 100 μl de tampon
Dilution 1/4 100 μl de plasma dilué au 1/2 + 100 μl de tampon
Dilution 1/8 100 μl de plasma dilué au 1/4 + 100 μl de tampon
2. Tester chacune des dilutions selon la technique décrite ci-dessus pour la méthode qualitative.
Se recomienda que en cada serie de muestras se incluyan los controles, positivo y negativo, para comprobar el correcto
funcionamiento de la técnica. Los controles deberán analizarse con los mismos procedimientos que las muestras
de pacientes. Para el procedimiento cualitativo de screening, un resultado positivo (aglutinación) se puede obtener
sustituyendo el Control Positivo DIMERTEST® por el plasma en los pasos 3-6. Del mismo modo un resultado negativo
(no-aglutinación) se puede obtener sustituyendo el Control Negativo DIMERTEST® por el plasma en los pasos 3-6.
Cuando se está realizando el procedimiento semicuantitativo, se recomienda testar también una serie de diluciones
del Control Positivo. El Control Positivo DIMERTEST® consiste en una solución de Dímero D humano con un nivel
Instrumentation Laboratory Company - Bedford, MA 01730-2443 (USA)
Instrumentation Laboratory SpA - V.le Monza 338 - 20128 Milano (Italy)
Négatif
Inférieur à 0,20 mg/l (200 ng/ml)
Positif
Supérieur à 0,20 mg/l (200 ng/ml)
Note: Toutes les valeurs exprimées en mg/l (ng/ml) sont approximatives.
B. Test semi-quantitatif
Les concentrations approximatives de XL-FDP contenant le domaine D-Dimère, pour les dilutions concernées, sont
indiquées dans le tableau 1.
Comme avec tout test semi-quantitatif, des variations de la réponse peuvent apparaître pour une même concentration.
Tableau 1
Fourchette approximative
Sample Dilution
D-Dimère (XL- FDP) mg/l (ng/ml)
Non dilué
1/2
1/4
1:/8
<0,20
(<200)
0,20 - 0,40
(200 - 400)
+
0,40 -0,80
(400 - 800)
+
+
0,80 - 1,60
(800 - 1600)
+
+
+
1,60 - 3,20*
(1600 - 3200*)
+
+
+
+
+ = agglutination, - = pas d’agglutination
* Des concentrations supérieures à 3,20 mg/l (3200 ng/ml) peuvent être trouvées en augmentant la dilution au-delà de 1/8.
LIMITES DE LA TECHNIQUE
Un diagnostic clinique ne peut se baser uniquement sur le résultat du DIMERTEST® Latex. Les informations cliniques et
relatives à d’autres tests pertinents sont nécessaires au diagnostic et à la décision thérapeutique.
VALEURS ATTENDUES
Un résultat positif, indiquant une fibrinolyse active, peut être obtenu avec DIMERTEST® Latex quand la concentration de
XL-FDP (D-dimères) est supérieure ou égale approximativement à 0,20 mg/l (200 ng/ml). Les spécimens de plasmas
provenant de sujets normaux auront un résultat négatif, car les concentrations plasmatiques en XL-FDP sont typiquement
inférieures à 0,20 mg/l (200 ng/ml). Du fait qu’un grand nombre de variables peuvent affecter les résultats, nous
recommandons à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs normales.
Des concentrations élevées de XL-FDP (contenant le domaine des D-Dimères) ont été observés chez des patients par
une association de techniques d’immunoprécipitation et d’électrophorèse sur gel.1-3,5,6 Les techniques par anticorps
monoclonaux (Mab)7 permettent maintenant une détection spécifique du domaine des D-Dimères. Les techniques
de dosage des D-Dimères par anticorps monoclonaux ont une valeur diagnostique dans le cas des coagulations
intravasculaire disséminées (CIVD) et des maladies vasculaires aiguës, incluant l’embolie pulmonaire (EP) et les
thromboses veineuses profondes (TVP), conditions difficiles à détecter lors de l’examen clinique.8,9 La quantité
de XL-FDP détectée dans un spécimen dépendra de différents facteurs in vivo, tels que, la sévérité de l’épisode
thrombotique, le taux de formation de fibrine stable et le temps écoulé entre l’événement thrombotique et le prélèvement.
Des concentrations élevées de XL-FDP, comme marqueur d’une fibrinolyse importante, ont été également trouvées
dans des situations telles que, une chirurgie, un traumatisme, la Drépanocytose, les affections hépatiques, les infections
sévères, les sepsis, l’inflammation et les cancers.10,11 . Les taux de D-Dimères sont aussi augmentés durant la grossesse
normale mais des taux très élevés sont associés à des complications.12
Le test Latex DIMERTEST® n’a pas de réaction croisée avec le fibrinogène, la fibrine stabilisé par le facteur XIIIa,13 ou
bien avec les produits de dégradation du fibrinogène.8
PERFORMANCES
Des plasmas provenant de cent soixante dix (170) patients apparemment en bonne santé, donneurs volontaires, ont été
testés avec le réactif Latex DIMERTEST®. Un résultat négatif a été obtenu pour cent soixante deux (162) d’entre eux,
correspondant à une spécificité de 95,3% (162/170).
Cent quarante cinq (145) plasmas de patients souffrant ou suspectés d’épisode thrombotique, ont été testés avec le
réactif Latex DIMERTEST® ainsi qu’une autre méthode d’agglutination de référence. Le coefficient de corrélation était de
0,94 et l’équation de régression était y =1,19x.
La reproductibilité intra-série (dans une série) a été déterminée sur 10 séries de tests effectuées sur 3 plasmas contenant
différentes concentrations de XL-FDP. Les résultats étaient équivalents pour toutes les séries. La reproductibilité intersérie (de série à série) a été déterminée sur 10 plasmas de spécimens avec un titre de XL-FDP entre 1 et 16. Pour 10
séries, le réplicate de ces spécimens n’a pas varié de plus d’un titre.
Dans une étude sur les anticoagulants portant en parallèle sur 50 plasmas citratés, EDTA et héparinés, la corrélation
entre les titres obtenus avec le réactif Latex DIMERTEST® et les titres attendus (basés sur les valeurs XL-FDP ELISA)
était r = 0,91 pour les plasmas citratés, r = 0,73 pour les spécimens EDTA et r = 0,78 pour les spécimens héparinés. Le
citrate est donc l’anticoagulant de choix.
Dans une étude portant sur des spécimens provenant de patients avec rhumatisme articulaire, 17 ont agglutiné avec
le réactif Latex DIMERTEST®. Pour ces 17 spécimens, l’agglutination pouvait être inhibée par addition d’un anticorps
monoclonal DD3B6/22 spécifique des D-Dimères, mais non inhibée avec un anticorps monoclonal non spécifique du
même sous groupe, IgG3k.
Ceci suggère que le réactif Latex DIMERTEST® est insensible aux perturbations dues au facteur rhumatoïde. Aucune
interférence n’a été mise en évidence avec le réactif DIMERTEST® Latex lors d’une étude utilisant des plasmas
surchargés avec des substances interférentes aux concentrations suivantes:
Bilirubine
0,2 mg/ml (200 mg/l)
Hémoglobine
5,0 mg/ml (5 g/l)
Lipémie (triglycérides)
30 mg/ml (30 g/l)
Protéine (gamma globuline)
0,06 g/ml
Important !
• Amener les réactifs à température ambiante (20 - 25°C) avant utilisation.
• Mélanger le réactif latex par inversion juste avant utilisation.
• Essuyer l’embout des flacons compte-gouttes à l’aide d’un tissu avant chaque utilisation.
• Les flacons compte-gouttes doivent être tenus verticalement lors de la distribution de réactifs.
Pour une distribution correcte
Assécher l’embout du flacon
Método cualitativo
1. Marcar en la tarjeta de tests la Identificación de la muestra, así como los controles positivo y negativo.
2. Sostenga el frasco cuentagotas en posición vertical y ponga una gota del reactivo de látex en cada círculo de la
tarjeta de test de reacción desechable.
EVÍTESE tocar la superficie de la tarjeta.
3. Pipetee exactamente 20 μL del plasma a analizar sin diluir o añada una gota de solución control en el mismo círculo
al lado de la gota de reactivo de látex.
4. Mezcle el látex y la muestra con un agitador de plástico hasta que el látex esté uniformemente distribuido.
5. Agite suavemente la tarjeta del test, durante 3 minutos exactamente.
6. Exactamente a los 3 minutos, compruebe si hay aglutinación, utilizando para ello una luz potente.
Nota: Si en ese momento no se ha leído el test, la suspensión de látex puede secarse y mostrar una falsa
aglutinación. Si se sospecha esta posibilidad, reanalizar la muestra.
7. Desechar la tarjeta de Test y el agitador en un contenedor de residuos de riesgo biológico. No reutilizar.
CONTROL DE CALIDAD
A. Test qualitatif
Dans le cadre du protocole de test qualitatif, les indications suivantes peuvent être obtenues:
Plasma non dilué
D-Dimères (XL-FDP) Concentration
CONTROLE DE QUALITE
Il est recommandé que les deux contrôles positif et négatif soient inclus dans chaque série de tests afin de valider
un fonctionnement correct du système. Ces solutions de contrôle devront être utilisées dans les mêmes conditions
que les échantillons de patients. Pour la procédure de dépistage qualitatif, un résultat positif (agglutination) peut être
obtenu en substituant le plasma par le contrôle positif DIMERTEST® dans les étapes 3 à 6 de la méthode qualitative.
Inversement, un résultat négatif (pas d’agglutination) peut être obtenu en substituant le plasma par le contrôle négatif
DIMERTEST® dans les étapes 3 à 6 de la méthode qualitative. Lors de la réalisation d’une procédure semi-quantitative, il
est recommandé de tester une série de dilutions du contrôle positif. Le contrôle positif DIMERTEST® est une solution de
RM1129-G Rev. 11/2014
Dimertest49738960
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Revision: 11/2014
Issued: November 2014
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