Avances en neuropatología

Transcripción

Neuropatología
PONENTE:
Dr. Miguel Ángel Idoate Gastearena
HOSPITAL:
Clínica Universidad de Navarra
Comunicaciones a la USCAP 2013 en el área de la
Neuropatología
27 comunicaciones (procedencia)
•USA & Canadá, 22*
•España, 2
•Italia, 2
•Turquía, 1
Temática:
20 sobre neurooncología
• 12 gliomas
• 8 otros (meduloblastoma, meningioma, carcinoma metastásico
cerebral...)
7 sobre enfermedades neurodegenerativas y otras
(*) Dos en colaboración con Alemania o Brasil
Comunicación 1
Objetivo: Identificar la angiopatía amiloidea.
Formas anatomopatológicas de
presentación.
Cerebrovascular A-beta amyloid in surgical
specimens: clinicopathological correlates.
Angiopatía beta amiloide y angeítis
Angiopatía beta amiloide y angeítis. Scolding et al. Brain 2005.
Angiopatía beta amiloide y angeítis.
Tipos de angiopatía beta amiloide
Depósito amiloide vascular en el SNC y leptomeninges
según tres patrones lesionales:
a. Angeítis amiloidea cerebral angiodestructiva
(granulomatosa) ABRA
b. Angiopatía amiloidea cerebral (CAA)
c. Angeítis amiloidea perivascular cerebral (reacción
de células gigantes) CAA-RI
Resultados
•62 biopsias cerebrales
•Edad 42-86 años
•Hemorragia cerebral, efecto
masa, alteración leptomeníngea.
Peor pronóstico
Asociación con
hemorragia cerebral
Cerebrovascular A-beta amyloid in surgical specimens:
clinicopathological correlates.
Mensaje
• Pensar en la angeítis amiloidea en las
biopsias cerebrales, especialmente en las
correspondientes a hemorragias cerebrales,
en el despistaje de la angiopatía amiloidea
cerebral.
• La angiopatía amiloidea cerebral es causa
de angeítis (angeítis amiloidea) y se
manifiesta como un espectro lesional.
Comunicación 2
Objetivo: Identificar el GBM tipo proneural
Utility of Olig-2 and Notch-1 immunostains in
glioblastomas in a routine histopathology setting.
Olig 2 and Glioblastoma
Notch1 and Glioblastoma
Material & Methods and Results
• 40 GBM
• IHQ frente a Olig-2 y Notch-1
• Valoración semicuantitativa
Mensaje
• La inmunotinción de Olig-2 y Notch-1 como una
procedimiento de fácil utilización para la
identificación del glioblastoma “proneural”, que
parece estar asociado a un mejor pronóstico.
Comunicación 3
Objetivo: ¿Existe realmente genoma de
citomegalovirus en el glioblastoma?
Lack of human cytomegalovirus in gliomas. A viral
load analysis by quantitative real time-PCR.
Utility of Olig-2 and Notch-1 immunostains in glioblastomas in a routine
histopathology setting.
Detección del CMV por técnicas de IHQ, ISH y nested-PCR con secuenciación, con los controles
adecuados.
•Se utiliza PCR cuantitativa a tiempo real con creditación CE (no utilizada previamente en
ningún trabajo publicado) para la cuantificación de citomegalovirus (carga viral tumoral).
Resultados
•82 gliomas de diferentes grados (II-IV).
•Kits validados por la CE para el despistaje de CMV en trasplante. Controles positivos
(GAPDH) y negativos.
•Rango de cuantificación 10-10.000 copias; rango de detección >1 copia
•3 casos < 10 copias; resto negativo. Estudios complementarios en Castellón (PCRnested) y Alicante (IHQ. ISH).
•Buen rendimiento en las muestras.
Comparación metodológica
Trabajo de Barberá et al.
• Gliomas
• Controles positivos/negativos.
Experiencia en CMV.
• Bloques de parafina.
• PCR cuantitativa a tiempo real.
Por triplicado. DNA se ha
estudiado en otras alteraciones
génicas.
• Otros: Posteriormente, de 20
casos PCR-nested, sólo los tres
casos con < 10 copias fueron
positivos. IHQ e ISH negativo.
Trabajo de Cobb et al.
• Gliomas.
• Controles: meningiomas, otros
tejidos.
• Bloques de parafina
• PCR nested-secuenciación DNA
(94%).
• Otros: IHQ, ISH, microscopía
electrónica, positivo.
¿Problema metodológico en la extracción de DNA? ¿Marcada variabilidad del número de
copias en los gliomas? ¿Problema de lectura de los primers?
Mensaje
•Paradójica situación que requiere un
replanteamiento metodológico crítico:
Necesidad de una estandarización metodológica
para el estudio del DNA extraído de bloques de
parafina.
•Frente a lo aceptado hasta ahora, no se detecta
citomegalovirus en el glioma, por lo que se
suscita una duda razonable sobre el papel de
este virus en el glioma.
Comunicación 4
Objetivo: La utilidad de la expresión del receptor de
somatostatina en el diagnóstico del meningioma.
Somatostatin receptor 2A: A novel
immunohistochemical marker of meningioma
Receptor de somatostatina y meningioma
•Los receptores de somatostatina se expresan en muchos (70-100%) meningiomas.
La función biológica de estos receptores es desconocida.
Somatostatin receptor immunostaining at 400× magnification. (A) Weak. (B)
Moderate. (C) Strong.
Somatostatin receptor 2ª: A novel
•Su presencia se puede detectar mediante gammagrafía de I111-octreótido.
Su manejo es especialmente útil en la detección de enfermedad residual
y de recidiva tumoral temprana.
Son necesarios nuevos análogos de somatostatina radiomarcables,
citotóxicos, no peptídicos, que proporcionen nuevas estrategias
terapéuticas.
• Marcador diagnóstico
– EMA
– Bcl-2
– CD-99
– Claudina-1
– Receptores de progesterona
– Receptor 2A de la somatostatina
• Utilidad terapéutica
Resultados
• Bloques de parafina
• Anticuerpo monoclonal de conejo Epitomic
Burlingame CA y método de amplificación (Quanto
polymer)
• Dos grupos:
• 27 meningiomas
• 27 otros (hemangiopericitoma, schwannoma,
gliomas)
• 100% positividad, intensa y difusa en los
meningiomas
• 2% positividad, focal, en los restantes tumores
• 100% sensibilidad, 90% especificidad
Mensaje
•Potencial uso en el diagnóstico diferencial con
otros tumores afines, como el
hemangiopericitoma, gliomas meníngeos o tumor
fibroso solitario (herramienta diagnóstica sumada
al EMA y receptores de progesterona)
•Potencial uso terapéutico en el caso de los
meningiomas que expresen intesamente este
receptor.
Comunicación 5
Objetivo: ¿Qué papel juegan los microRNAs en los gliomas
malignos?
MicroRNA, MGMT methylation and PTEN & P53
mutations in Glioblastomas
The Sanger Institute miRBase (V16), have been described 2108 human miRNA
sequences
MiRBase. Available online:
http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/index.shtml (accessed on 16
March 2012).
MiRBase. Available online: http://www.miRBase.org/ (accessed on
16 March 2012). .
MICRORNAs
The miRNAs are small non coding RNA molecules
Mature miRNA ~22 nt (miRNA)
 Key elements in post-transcriptional gene
MicroRNA, MGMT methylation and PTEN & P53 mutations in Glioblastomas
microRNAs y cáncer
Normal tissue
MicroRNA as tumor suppressor
Si falta el microRNA, no
bloquea la traducción
MicroRNA as oncogene
Si en exceso el micro RNA,
bloquea la traducción
Aurora Esquela-Kerscher & Frank J., Nature Reviews, 2006.
microRNAs y CRC
Slaby O. et al., Molecular Cancer, 2009.
MicroRNA, MGMT methylation and PTEN & P53 mutations in
Glioblastomas
MicroRNAs y Glioblastoma
Texto
mutations in glioblastomas.
M&M
•35 glioblastomas congelados
•MicroRNAs usando myRcuriRNA
(estudio de 3000 microRNAs humanos)
•MGMT mediante MLPA
•PTEN secuenciación
•TP53 secuenciación
7/22 pacientes (32%)
35 Pacientes
35 Pacientes
miRNAs
Estos 6/7 miRNAs cambian su expresión (bajan) en las condiciones
celulares adversas: MGMT metilado y PTEN mutado.
Los cambios de expresión de estos miRNAs afectarían al ciclo celular y a la
apoptosis asociada al estatus de MGMT y PTEN.
MicroRNA, MGMT methylation and PTEN & P53 mutations in Glioblastomas
Programa Ingenuity
P53 y Ciclo celular: RB1, CCND1, E2F1
Apoptosis
P53, c-myc y BCL2 (ciclo celular y apoptosis)
Título diapositiva
Mensaje
•La expresión de microRNAs permiten
diferenciar subgrupos de glioblastomas, que
tienen cierta relación con alteraciones
moleculares conocidas.
•¿Estos subgrupos de glioblastomas de acuerdo
a la expresión de microRNAs pueden tener
significado pronóstico y predictivo?
Interactive Molecular Pathology Companion Meeting at the USCAP
2013 Annual Meeting
Qué me ha aportado la USCAP 2013.
Interactive Molecular Pathology Companion Meeting at the USCAP 2013
Annual Meeting
Interactive Molecular Pathology Companion Meeting at the USCAP 2013
Annual Meeting
Conclusiones
•Progresiva caracterización molecular en la neuropatología
•Los datos moleculares van creando progresivamente un cuerpo
de doctrina que el patólogo debe aplicar con criterio al
diagnóstico, pronóstico y tratamiento.
•Dispersión de esfuerzos. Hay que ir entresacando de un gran
volumen de datos, lo que es realmente relevante.
•No ha habido aportaciones notables para la práctica
hospitalaria de la Neuropatología.
Muchas gracias por su
atención

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