Requisitos y condiciones de analisis

SERVICIO DE ESPECTROMETRÍA
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Requisitos de las muestras y condiciones de análisis Página 1 SERVICIO DE ESPECTROMETRÍA
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INTRODUCCION A continuación se indican los requisitos generales que han de cumplir las muestras para poder ser analizadas en el Servicio de Espectrometría de Masas del Instituto de Química General (IQOG). Asimismo, se especifican los métodos de análisis de rutina que se aplicarán en cada uno de los espectrómetros y para cada tipo de muestra. En cualquier caso, si se desea el análisis de la muestra con un determinado equipo y en unas condiciones específicas tendrá que ser indicado en el formulario, ya que de lo contrario se aplicarán los procedimientos de rutina y siguiendo el criterio del responsable del Servicio. Si la muestra no fuese analizable por los métodos de rutina y requiriese una optimización del método, pasaría a la cola de espera, analizándose cuando se dispusiese del personal, tiempo y equipo necesarios para ensayar nuevas configuraciones o condiciones de análisis. Todas las pruebas necesarias se facturarán como muestras diferentes. En cualquier caso, el solicitante ha de ser consciente de que los resultados obtenidos pueden no ser satisfactorios. Página 2 SERVICIO DE ESPECTROMETRÍA
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A. LC‐MS QTOF • Muestras a analizar − sólidas o líquidas.‐ Cantidad mínima 5 µg, indicando cantidad aproximada que se suministra y el disolvente a utilizar. − disoluciones.‐ Volumen mínimo de 100 µl a un nivel de concentración de 0.1‐1 mg/l. Se presentarán en viales compatibles con el automuestrador. Los disolventes más adecuados son metanol, acetonitrilo y agua. • Moléculas analizables − masa molecular hasta 20.000 u si producen iones monocargados y hasta 100000 u si son iones policargados − sustancias tanto polares (ESI) como apolares (APCI) − volatilidad media o baja − admite moléculas lábiles • Interferentes en el análisis − Evitar: ƒ ácidos y bases inorgánicos, TFA, fosfatos, boratos, citratos, SDS, poliacrilamida, detergentes, reactivos no volátiles (como los agentes alquilantes, reductores y tampones usados en la extracción y digestión de muestras biológicas), CH2Cl2, etc. − Tolerables (< 20 mM): ƒ tampones de sales volátiles como NH4Ac y NH4HCOO − No interfieren: ƒ HCOOH, HAc, NH4OH, metanol, ACN • Condiciones de análisis de rutina − Análisis directo ƒ muestra sólida o disuelta preferiblemente en H2O:ACN, sin interferentes ƒ procedimiento: inyección por bucle en un caudal de 100 µl/min de acetonitrilo:H2O. En aquellos casos que sea necesario la potenciación de la ionización se empleará como regla general 0.5 % de HCOOH, 0.1 % de NH4OH o 10 mM de NH4HCOO Página 3 SERVICIO DE ESPECTROMETRÍA
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ƒ modo de registro: Full scan (ESI+/‐ o APCI+/‐, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) − LC‐MS ƒ muestra sólida o disuelta preferiblemente en H2O:ACN, sin interferentes ƒ programa de elución: 100
% ACN con 0.1% HCOOH
80
60
caudal = 100 µl/min 40
20
0
0
10
20
30
40
50
60
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tiempo (min)
ƒ columna cromatográfica: C18 (100 x 2.1 mm, 3 µm) ƒ modo de registro: Full scan (ESI+/‐ o APCI+/‐, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) Página 4 SERVICIO DE ESPECTROMETRÍA
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B. LC‐MS Triple Cuadrupolo • Muestras a analizar − disoluciones.‐ Volumen mínimo de 50 µl a un nivel de concentración de 0.1‐1 µg/l. Se presentarán en viales compatibles con el automuestrador. Los disolventes más adecuados son metanol, acetonitrilo y agua. • Moléculas analizables − masa molecular hasta 2.000 u si producen iones monocargados y hasta 100000 u si son iones policargados − sustancias tanto polares (ESI) como apolares (APCI) − volatilidad media o baja − admite moléculas lábiles • Cantidad de muestra necesaria y niveles de concentración 1 − como regla general, requiere un volumen mínimo de 100 µl a un nivel concentración de 1 pg/µl. • Interferentes en el análisis − evitar: ƒ ácidos y bases inorgánicos, TFA, fosfatos, boratos, citratos, SDS, poliacrilamida, detergentes, reactivos no volátiles (como los agentes alquilantes, reductores y tampones usados en la extracción y digestión de muestras biológicas), CH2Cl2, etc. − tolerables (< 20 mM): ƒ Tampones de sales volátiles como NH4Ac y NH4HCOO − no interfieren: ƒ HCOOH, HAc, NH4OH, metanol, ACN 1
Son datos indicativos, pues también son función de los aditivos, contaminantes, sales, etc.
presentes en las muestras. Cuando existan interferentes, el solicitante deberá intentar purificar
las muestras para su eliminación o reducción. Sólo en casos aislados, se podría suplir la presencia
de algún interferente con un volumen o una mayor concentración de la sustancia en la muestra.
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• Condiciones de análisis de rutina − análisis directo ƒ muestra sólida o disuelta preferiblemente en H2O:ACN, sin interferentes ƒ procedimiento: inyección por bucle en un caudal de 100 µl/min de acetonitrilo:H2O. En aquellos casos que sea necesario la potenciación de la ionización se empleará como regla general 0.5 % de HCOOH, 0.1 % de NH4OH o 10 mM de NH4HCOO ƒ modo de registro: Full scan (ESI+/‐ o APCI+/‐, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) − LC‐MS ƒ muestra disuelta preferiblemente en H2O:ACN, sin interferentes ƒ programa de elución: 100
% ACN con 0.1% HCOOH
80
60
caudal = 100 µl/min 40
20
0
0
10
20
30
40
50
60
70
tiempo (min)
ƒ columna cromatográfica: C18 (100 x 2.1 mm, 3 µm) ƒ modo de registro: Full scan (ESI+/‐ o APCI+/‐, según la polaridad y los grupos funcionales del compuesto) • Condiciones de análisis para el desarrollo metodológico − debido a su particular naturaleza, en caso de llevar a cabo algún desarrollo de metodologías analíticas sobre el equipo, será responsabilidad del usuario proporcionar la columna cromatográfica y las condiciones analíticas de partida Página 6 SERVICIO DE ESPECTROMETRÍA
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− el plan de trabajo a seguir será establecido de mutuo acuerdo entre el usuario y los responsables del servicio, de manera que la consecución de los objetivos se compatibilice con la disponibilidad y posibilidades del equipo − el análisis de resultados será llevado a cabo por parte del usuario − será responsabilidad del personal técnico del Servicio procurar un satisfactorio desarrollo de los análisis encomendados, así como poner a disposición de los usuarios los resultados que se vayan obteniendo Página 7 SERVICIO DE ESPECTROMETRÍA
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C. GC‐MS • Muestras a analizar − gaseosas, líquidas o sólidas en disolución.‐ Volumen mínimo de 100 µl a un nivel de concentración de 10 mg/l. Se presentarán en viales compatibles con el automuestrador. Los disolventes más adecuados son los orgánicos volátiles de baja polaridad. • moléculas analizables − masa molecular hasta 1.000 u − sustancias de polaridad media o baja − volatilidad media o baja − sólo moléculas térmicamente estables • interferentes en el análisis − Evitar ácidos, bases y sales inorgánicos, así como cualquier sustancia no
volátil • condiciones de análisis de rutina − muestra (volátil a 300 °C y presión atmosférica): líquida, gaseosa o disuelta
en disolventes volátiles (metanol, n-hexano, acetona, etc.), sin interferentes − programa de elución: 300
Temperatura columna (°C)
250
200
150
100
caudal = 1 ml/min
50
0
0
10
20
30
40
tiempo (min)
ƒ columna cromatográfica: Rtx-5 (Restek) 30 m x 0.25 mm x 0.25 µm
ƒ modo de registro: Full scan (EI+)
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• Condiciones de análisis para el desarrollo metodológico − debido a su particular naturaleza, en caso de llevar a cabo algún desarrollo de metodologías analíticas sobre el equipo, será responsabilidad del usuario proporcionar la columna cromatográfica y las condiciones analíticas de partida − el plan de trabajo a seguir será establecido de mutuo acuerdo entre el usuario y los responsables del servicio, de manera que la consecución de los objetivos se compatibilice con la disponibilidad y posibilidades del equipo − el análisis de resultados será llevado a cabo por parte del usuario − será responsabilidad del personal técnico del Servicio procurar un satisfactorio desarrollo de los análisis encomendados, así como poner a disposición de los usuarios los resultados que se vayan obteniendo Página 9