BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO

BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIO
El nom bre m icroscopio deriva del griego: mikrós=pequeño,
skopéo=observar. Este térm ino designa, en sentido am plio, a todo instrum ento
utilizado para am plificar la im agen de objetos que, por su tam año, no son
observables a sim ple vista. En la práctica, se refiere a un aparato form ado por
un sistem a de, al m enos, dos lentes: un objetivo y un ocular, con el m ism o fin.
El descubrim iento del m icroscopio
com puesto tuvo un precedente atribuido a
Galileo (1564-1642).
El verdadero im pulsor de la Microscopía
fue, sin duda, el holandés Anton Van
Leeuw enhoek, (1632-1723). Construyó
m icroscopios sim ples, con lentes m uy
convexas que él m ism o pulía y con los
cuales realizó ob serva ciones m uy
diversas: estudió la com posición de la
sangre, fue el prim ero en observar y
dibujar los protozoos, descubrió las
bacterias, etc.
Sus trabajos fueron
publicados por la Real Sociedad de
Londres (1683).
Leeuwenhoek. Su microscopio
Hoy día, hay unanim idad en considerar a
los holandeses Hans y Zacarias Janssen,
padre e hijo, com o constructores del
prim er m icroscopio com puesto en 1590.
Desde entonces y hasta nuestros días, el m icroscopio com puesto no ha cesado
de perfeccionarse, incorporándole m ejoras, revolver portaobjetivos, visión
binocular, ilum inación halógena de gran rendim iento, filtros polarizadores, equipo
de contraste de fase, m icroscopio de contraste interferencial, m icroscopio de luz
ultravioleta, etc.
Pese a todo, el m icroscopio óptico presenta una serie de lim itaciones que le
im pone la naturaleza de la propia LUZ. Por encim a de los 1500-2000 aum entos,
las aberraciones que origina la luz im piden hacer observaciones con nitidez.
Es por ello que los investigadores tuvieron la idea de utilizar haces de electrones
en lugar de rayos lum inosos y potentes electroim anes, en lugar de lentes. Con
ello nació el microscopio electrónico.
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PARTES
del
MICROSCOPIO
11- Pie o base: Sostiene todo el conjunto del m icroscopio y puede soportar un
espejo plano-cóncavo, un ilum inador de subplatina acoplable o un equipo de
ilum inación halógena, com o es el caso que describim os aquí.
Se relacionan en orden, según la num eración establecida en la figura adjunta.
1- Ocular: Sistem a de lentes que queda próxim o al ojo.
2- Anillo de corrección dióptrica: Corrige las diferencias de visión entre am bos
ojos. Sólo se presenta en los m icroscopios binoculares y trinoculares.
3- Revolver porta-objetivos: Accesorio que soporta de tres a seis objetivos,
según los m odelos, perm itiendo cam biar de uno a otro, rápidam ente. Posee un
"clic" que nos avisa cuándo está el objetivo en la posición correcta.
12- Corrector de la distancia interpupilar: Im prescindible en los m odelos
binoculares, ya que la distancia entre nuestros ojos varía de una persona a otra.
13- Cabezal binocular: Equivale al tubo de los m odelos con diseño antiguo.
Es la estructura que soporta al ocular u oculares. En este caso contiene un
sistem a de prism as que inclinan el rayo lum inoso a 45º a la vez que lo dividen en
dos, uno para cada ocular.
Existen tam bién cabezales m onoculares y
trinoculares, estos últim os con tubo adicional para cám ara fotográfica o de vídeo.
14- Estativo: Colum na que soporta al cabezal y sirve com o asa de transporte.
4- Objetivos: Com ponentes ópticos que quedan próxim os al objeto, de ahí su
nom bre. Cada uno contiene un delicado sistem a de lentes.
Norm alm ente, se sum inistran cuatro objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x. Los tres
prim eros trabajan en seco, el cuarto, que lleva la inscripción "OIL", y
generalm ente se distingue por un anillo negro en su parte baja, requiere
im prescindiblem ente el em pleo de un aceite especial, disponible en el com ercio,
"aceite de inmersión" o “aceite de cedro” cuyo índice de refracción es m uy
sim ilar al vidrio de las lentes (n = 1,515). Su función se explicará m ás adelante.
El 40x y el 100x suelen estar provistos de m ontura retráctil.
5- Platina: Plataform a que sostiene la preparación. En casi todos los diseños
actuales, presenta m ovim iento de elevación-descenso para el enfoque.
15- Tornillo fijador del cabezal: Al aflojarlo, perm ite el giro de éste, para un
segundo observador, y su desm onte, en caso necesario.
16- Carro móvil porta-preparados: Accesorio que sujeta la preparación y
perm ite m overla en dirección frontal y lateral, para su exploración. Presenta una
pieza fija y otra m óvil entre las cuales se ancla el porta. Suele ir provisto de dos
escalas con nonius, perpendiculares entre sí para tom ar las coordenadas de
zonas interesantes de la preparación.
17- Enfoque macrom étrico: Este m ando realiza un enfoque rápido pero con
poca precisión, sobre todo cuando trabajam os con objetivos de gran aum ento.
Actúa subiendo y bajando la platina, en m odelos antiguos m ueve el tubo.
6- Condensador: Conjunto de lentes que concentra la luz sobre la m uestra.
7- Diafragma iris: Es un sistem a m ecánico form ado por varias lam inillas
dispuestas en form a radial delim itando un orificio de abertura variable, que regula
la cantidad de luz que entra al condensador. Se acciona m ediante una palanca
de fácil acceso (en la figura aparece con ~). Su correcto uso es de vital
im portancia en la observación, sólo la práctica nos perm itirá com probarlo.
8- Portafiltros: Contiene, norm alm ente, un filtro de vidrio azul, dado que la luz de
longitud de onda corta m ejora el poder de resolución del m icroscopio.
Por otra parte, si el foco de luz no es plano o uniform e (bom billa blanca-m ate o
luz día) colocarem os en el anillo un filtro de vidrio esm erilado, blanco o azul.
9- Tornillo elevador del condensador: Perm ite bajar el condensador para
cam bio o lim pieza del m ism o y, a veces, para trabajar con aum entos débiles.
18- Enfoque microm étrico: Tornillo de enfoque con precisión, m ueve la platina
con extrem a lentitud. Es im prescindible para afinar el enfoque de los objetivos
con aum entos fuertes. En este m odelo es coaxial con el m acrom étrico.
19- M ando de movimiento frontal del carro.
20- M ando de movimiento lateral del carro.
21- Regulador de intensidad lum inosa.
22- Interruptor de iluminación.
NOTA 1: Los elem entos con nº 1, 4, 6, 10 y 13 constituyen la parte óptica del
m icroscopio, todos los dem ás form an la parte mecánica.
10- Iluminador: Este m odelo presenta a un eficaz equipam iento de ilum inación,
alojado en la base, con lám para halógena y regulación de la intensidad lum inosa.
NOTA 2: El aum ento total de trabajo se calcula m ultiplicando el aum ento indicado
en el objetivo por el indicado en el ocular (Ej.- objetivo 40x, ocular 10x, aum ento
total = 400x). Esto debe constar en los dibujos que se hagan sobre nuestras
observaciones.
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M A N E J O del M I C R O S C O P I O
L
Es muy importante respetar todos los pasos que se detallan a
continuación.
1- Quitar la funda de plástico (con cuidado de no coger el ocular, al m ism o
tiempo), doblarla y guardarla donde no estorbe.
2- Conectar el foco de luz.
3- Separar objetivo y platina, colocar la preparación en ésta y centrar la zona
teñida sobre la lente superior del condensador.
4- Abrir poco el diafragm a y colocar el condensador en posición alta.
5- Colocar el objetivo de m enor aum ento (4x o 10x, según m odelos). Observando
lateralm ente el m icroscopio, aproxim ar el objetivo a la preparación (bajando el
tubo o subiendo platina, según m odelos) hasta que queden lo m ás juntos posible,
sin llegar a tocarla.
6- Observando a través del ocular, levantar lentam ente el objetivo (o bajar platina)
con el m acrom étrico, hasta que aparezca un im agen nítida.
Dado el bajo aum ento del objetivo, es posible que la ilum inación resulte excesiva.
El deslum bram iento nos im pedirá obtener una visión satisfactoria, en tal caso,
cerrar el diafragm a, o bajar el condensador.
NOTA: Téngase en cuenta que antes de enfocar la preparación, observarem os
la posible suciedad que haya sobre la lente superior del condensador y sobre la
cara inferior del porta. Saldrem os de dudas m oviendo el condensador o el carro.
Tam bién se puede dar el caso de que veam os puntos o m anchas que no
desaparecen al m over los elem entos antes citados. Sin duda, se trata de
suciedad depositada en el ocular, lo que com probarem os haciendo girar éste.
Una vez enfocada la preparación, rara vez necesitarem os volver a tocar el tornillo
m acrom étrico, incluso al cam biar de objetivos.
Dependiendo del m aterial que se estudie, el aum ento puede ser insuficiente para
obtener una im agen significativa (el profesor debe dar indicaciones al respecto),
en cuyo caso pasarem os al objetivo siguiente, 10x, El "clic" nos avisará la
correcta colocación del objetivo.
Si el anterior estaba bien enfocado, podem os cam biar de objetivo directam ente,
sin m odificar el enfoque, aunque luego habrá que afinar con el m icrom étrico.
Continuar la exploración.
8- Puede ser conveniente tom ar las coordenadas de las zonas m ás interesantes.
Para ello, nos ayudarem os de los nonius, que están dispuestos
perpendicularm ente entre sí, sobre la platina. Pedir indicaciones al profesor.
9- Pasar al objetivo siguiente (40x), reenfocar con el m icrom étrico, será
conveniente m odificar la altura del condensador hasta su posición m ás alta así
com o la abertura del diafragm a.
NOTA: Es muy importante que los objetivos no toquen la preparación, el
10x y 40x tienen ese riesgo, al igual que el 100x.
10- Sólo si está previsto en el guión de prácticas, pasarem os al objetivo de 100xinm ersión. En tal caso, depositarem os una gota de aceite, que nos proporcionará
el profesor, sobre la preparación.
Bajar el objetivo de 100x, m irando lateralm ente el
m icroscopio, hasta tocar la gota de aceite,
observarem os la form ación de un m enisco.
El aceite im pide la dispersión de los rayos de luz,
m ejorando notablem ente la nitidez de la im agen y la
lum inosidad del objetivo.
Mirando a través del ocular, enfocarem os con el
m icrom étrico. Debem os explorar la preparación m uy
lentam ente.
11- Term inada la observación, levantar el objetivo (o bajar platina). Retirar la
preparación y apagar el foco. No olvidar lim piar el objetivo 100x, si se ha usado
aceite de inm ersión (ver MANTENIMIENTO).
7- Explorar la preparación, utilizando los
m andos del carro, lentam ente de izquierda
a derecha y de arriba a abajo, procurando
no pasar varias veces por la m ism a zona.
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RECOMENDACIONES
OBSERVACIÓN DE PREPARACIONES M ONTADAS
* Aunque los objetivos de 40x y 100x, en los m icroscopios m odernos, suelen ser
retráctiles, es decir, retroceden parcialm ente al tocar la preparación para no
dañarla, correm os el riesgo de rayar y ensuciar el objetivo, es preferible evitar el
contacto entre éste y el preparado, salvo en el caso de objetivo inm ersión.
* Con cada objetivo deberem os ajustar la abertura del diafragm a y, a veces, la
posición del condensador, hasta obtener una visión satisfactoria.
En teoría, el condensador debe estar siem pre en su posición m ás alta.
* Los m icroscopios m odernos, suelen venir equipados con oculares de punto focal
alto, es decir, si nos acercam os dem asiado a él, la visión será defectuosa.
Debem os, por tanto, buscar la altura adecuada.
* En los m icroscopios de form ato antiguo, sin inclinación en el cabezal, se pueden
inclinar estativo y platina, para m ayor com odidad. Esto no se podrá hacer si
estam os utilizando inm ersión o preparaciones con líquido entre porta y cubre.
* En los m icroscopios binoculares, debem os tener en cuenta que la distancia
entre los ojos varía de una persona a otra. Habrá que ajustar la separación entre
los oculares.
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MANTENIMIENTO
1- El m icroscopio es un instrum ento de precisión, debe ser m anipulado con
suavidad, despacio, nunca intentar forzar ningún m ecanism o.
2- Term inada la práctica, separar objetivo y platina, retirar la preparación y apagar
el foco.
3- Si se ha em pleado aceite de inm ersión, debe lim piarse el objetivo 100x con un
pañuelo suave de celulosa, y papel siliconado para lim pieza de lentes. Si esto
resulta insuficiente, se utilizará xilol o mezcla alcohol-éter, im pregnando
levem ente el pañuelo o papel lim pia-gafas.
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4- Cubrir bien el m icroscopio con su funda y, si no se va a usar en un cierto
tiem po, guardarlo en su estuche o arm ario.
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INSTRUMENTOS MÁS USUALES EN MICROSCOPÍA
1- PORTAOBJETOS.- Vidrio rectangular de 75m m .x 25m m .(aprox.) sobre el que
se deposita la m uestra que pretendem os observar. Se expenden en el com ercio
en cajas de 50 unidades, generalm ente. Existen m odelos excavados para el
exam en "en gota pendiente" de infusorios, por ejem plo
2- CUBREOBJETOS.- Vidrio cuadrado extrem adam ente delgado, de
dim ensiones variables (20x20m m , 22x22m m , 22x50m m .,etc.) con el que se cubre
la muestra. El tam año 20x20 m m . es el m ás usual. Se suelen vender en cajas
de100 unidades.
3- AGUJA ENM ANGADA DE DISECCIÓN.- Aguja, m ás o m enos larga, con
m ango, de usos m últiples. No suele ser cara, pero se puede hacer de fabricación
casera.
12- VIDRIOS DE RELOJ.- Vidrios cóncavos de distintos diám etros y usos
m últiples: para calentar suavem ente, para teñir cortes etc.
13-CAPSULA DE PORCELANA.- Recipiente cóncavo de porcelana, utilizado
para calentar.
14- CÁPSULA DE PETRI.- Tam bién llam ada placa de Petri o caja de Petri. Es
un recipiente cilíndrico, de fondo plano cuya altura es notablem ente m enor que
su diám etro. Consta de dos partes de igual form a, una m ayor que la otra, que
encajan entre sí. Se em plea para cultivos de bacterias y otros usos.
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4- LANCETA.- Sim ilar a la anterior pero con la punta aplanada en form a de lanza
y bordes cortantes. Presenta usos m últiples: disección, m ontar preparaciones...
5- ESCALPELO.- Instrum ento cortante de uso en cirugía. Se aconseja utilizar
m odelos de un solo uso, su precio es m ás asequible y su afilado, excelente . En
determ inados casos, se podrá sustituir por una hoja de afeitar o un cúter.
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6- ASA DE PLATINO.- Consta de un m ango provisto en su extrem o de un fino
alam bre, de aleación níquel-crom o generalm ente, con un anillo term inal. Se
utiliza norm alm ente para m anipular los cultivos de bacterias.
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7- PINZAS.- Se aconsejan de presión suave. La hay puntiagudas, de puntas
redondeadas, curvas, etc.
8- TIJERAS DE DISECCIÓN.- Deben ser de acero inoxidable. Existen en el
com ercio m odelos desm ontables que perm iten una fácil lim pieza y secado. Las
hay de punta rom a, fina, curva, etc.
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9- CUENTAGOTAS.- Para dosificar colorantes y otros reactivos.
10- PINCEL DE PELO FINO.- Para m anipular cortes histológicos. Tam bién es
conveniente disponer de otro destinado exclusivam ente a la lim pieza de lentes.
Los hay m uy decentes en los "Todo a 100".
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11- CUCHARILLA ESPÁTULA: Muy útil para m anipular sustancias sólidas, sobre
todo al pesar en la balanza.
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15- M ECHERO DE ALCOHOL.- Es conveniente que las fibras de la m echa no
estén m uy apretadas y que ésta no sobresalga dem asiado de la boca del
m echero, para tener una llam a estable. Es imprescindible.
16- CUBETA DE TINCIONES.- Recipiente de form a rectangular o cuadrada,
generalm ente de plástico, de dim ensiones opcionales (por ejem plo 25x25 cm .),
sobre el que se deposita una varilla de vidrio o m etálica, doblada en "U" que
sujetará el porta durante la tinción. Se puede hacer con una cubeta de un "Todo
a 100" y un par de varillas de los zapatos o dos agujas de hacer punto, de
alum inio. Es imprescindible.
26- PERA DE GOM A.- Se adquiere en el com ercio para lavados nasales. En
nuestro caso, será de gran utilidad para elim inar polvo o pelusas de los oculares,
a los cuales no debem os soplar nunca, pues una dim inuta gota de saliva puede
form ar una m ancha de tam año considerable, a la hora de m irar a través del
ocular.
17- VASO DE PRECIPITADOS.- Vaso de vidrio con pico en el borde para verter
su contenido. Tiene usos diversos com o calentar, por ejem plo.
18- PIPETA.- Tubo graduado para m edir volúm enes de líquidos, con precisión.
Com o solución casera, se puede sustituir por una jeringuilla de plástico.
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19- M ICRÓTOM O.- Instrum ento para hacer cortes suficientem ente delgados,
com o para ser observados por transparencia. El m ás asequible es el m icrótom o
de m ano, pero, incluso éste m odelo, es un instrum ento caro.
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20- NAVAJA HISTOLÓGICA.- Es la clásica navaja barbera. Se usa para cortes
con m icrotom o y su perfecto afilado es esencial. (Es peligrosa de manejo se puede
sustituir por una hoja de afeitar y sólo se necesita si se piensan hacer cortes histológicos).
21- FRASCOS CUENTAGOTAS.- Muy útiles para dosificar los diversos
colorantes que se utilizan. Dependiendo de su contenido, se usarán de vidrio o
plástico. Se recom iendan los de vidrio color topacio. Para líquidos m uy volátiles,
se aconsejan de tapón esm erilado, algo m ás caros.
22- FRASCO LAVADOR.- Frasco de plástico con un tubo curvo de salida, m uy
útil para lavar las preparaciones. Los de 0,5 l. tienen un tam año m anejable.
23- TU BO S DE ENSAYO.- De usos m últiples, por ejem plo, para cultivos de
bacterias.
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24- ESTUCHE PARA PREPARACIONES.- Todas las preparaciones definitivas
deben ser alm acenadas en estuches adecuados, disponibles en el com ercio a
precio asequible.
25- ETIQUETAS.- Antes de alm acenar las preparaciones debem os etiquetarlas
en los extrem os del porta. La etiqueta debe indicar cuantos datos sean de interés
(m uestra, tinción, quién realizó la preparación, fecha, lugar, etc.). Pueden ser
apropiadas las adhesivas de 16x22 m m . (aprox.).
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OBSERVACIONES GENERALES SOBRE EL MONTAJE DE PREPARACIONES
OBSERVACIÓN DE PREPARACIONES M ONTADAS
1) Para la observación la luz debe atravesar la preparación, luego ésta debe ser
fina, bien extendida y capaz de ser traspasada por la luz.
2) La LIMPIEZA del m aterial es IMPRESCINDIBLE y debe evitarse siem pre la
grasa, huellas, pelusas, rayados, polvo, etc., tanto en las lentes del m icroscopio
com o en el porta y el cubreobjetos.
3) Los portaobjetos deben sujetarse con los dedos por los bordes, Los
cubreobjetos se m anipulan de igual m anera y/o con ayuda de un instrum ento fino
(aguja enm angada) para evitar huellas y
suciedad.
4) Las gotas de agua, colorantes u otros
productos, deben colocarse con cuidado,
utilizando el cuentagotas o una pipeta fina.
Si es preciso se extenderán sobre el porta de
form a hom ogénea con ayuda de una aguja
enm angada o lanceta, con cuidado de no rayar.
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5) Cuando se coloca el cubreobjetos sobre una gota previam ente situada en el
porta, se debe proceder com o indica la figura. Rozando el líquido en la unión
porta-cubre hasta que se situé a lo largo de toda la linea de contacto. Después se
deja caer "de golpe", com o al cerrar un libro, para evitar que queden burbujas de
aire entre cubre y porta..
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