anti-Glypican 3 (GC33) Mouse Monoclonal Primary Antibody

anti-Glypican 3 (GC33) Mouse Monoclonal Primary Antibody

ALMACENAMIENTO
anti-Glypican 3 (GC33) Mouse Monoclonal
Primary Antibody
Almacenar entre 2 y 8 °C. No congelar.
Para garantizar una dispensación adecuada del reactivo y la estabilidad del anticuerpo,
vuelva a poner el tapón después de cada uso y almacene inmediatamente el dispensador
en la nevera, en posición vertical.
790-4564
06483186001
Todos los dispensadores de anticuerpo tienen una fecha de caducidad. El reactivo es
estable hasta la fecha indicada en la etiqueta siempre que se almacene correctamente.
No usar el reactivo después de la fecha de caducidad.
50
Figura 1. Tinción de anti-Glypican 3 (GC33)
del carcinoma hepatocelular
USO PREVISTO
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Anti-Glypican 3 (GC33) Mouse
Monoclonal Primary Antibody (antiGlypican 3 (GC33)) se dirige contra
el proteoglicano heparán sulfato,
glipicano 3. Este anticuerpo se
puede usar en la diferenciación del
carcinoma hepatocelular del hígado
normal o de lesiones benignas. El
anticuerpo está destinado a la tinción
cualitativa en cortes de tejido fijado
con formol y embebido en parafina.
Cuando se utiliza el procedimiento habitual, los tejidos fijados en formol y embebidos en
parafina resultan adecuados para el uso con este anticuerpo primario utilizarlos con los
kits de detección de Ventana y un módulo de tinción de portaobjetos automatizado
Ventana BenchMark Series. El fijador de tejido recomendado es formol tamponado neutro
al 10%.6 Los portaobjetos deberían teñirse inmediatamente, ya que la antigenicidad de
las secciones de los cortes de tejido puede disminuir con el tiempo.
Este producto debe ser interpretado
por un anatomopatólogo cualificado en conjunción con un examen histológico, la
información clínica pertinente y los controles adecuados.
Se recomienda que los controles positivos y negativos se analicen simultáneamente con
muestras desconocidas.
AVISOS Y PRECAUCIONES
1.
2.
Este anticuerpo es para uso diagnóstico in vitro (IVD).
3.
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
Anti-Glypican 3 (GC33) es un anticuerpo monoclonal de ratón producido contra el
glipicano-3 (GPC3), un miembro de la familia de glipicanos de proteglicanos heparán
sulfato de glicosilfosfatidilinositol vinculados a la superficie de la célula.1 La proteína
GPC3 se expresa ampliamente en una variedad de tejidos durante el desarrollo, pero está
suprimida en la mayor parte de los tejidos adultos. El tejido del hígado normal y lesiones
benignas como a displasia y los nódulos cirróticos suelen ser negativos al glipicano-3. El
glipicano-3 se sobreexpresa en las células y tejidos del carcinoma hepatocelular (HCC) y
estimula el crecimiento de las células HCC aumentando la señalización Wnt canónica de
la autocrina/paracrina.1-3 Además, GPC3 regula a la baja el BMP7, un regulador negativo
del crecimiento celular.4 GPC3 juega un papel en la regulación de la migración, adhesión
y organización del citoesqueleto de actita en las células del tumor de mama mediante la
modulación de la señalización Wnt.5
REACTIVO SUMINISTRADO
Anti-Glypican 3 (GC33) contiene reactivo suficiente para 50 pruebas.
Un dispensador de 5 mL de anti-Glypican 3 (GC33) contiene aproximadamente 8,4 µg de
un anticuerpo monoclonal de ratón.
El anticuerpo se diluye en solución salina con tampón fosfato con proteína transportadora
y ProClin 300 al 0,05%, un conservante.
La concentración de proteína total del reactivo es de aproximadamente 3 mg/mL. La
concentración del anticuerpo específico es aproximadamente de 1,7 μg/mL. No se ha
observado ninguna reactividad de anticuerpo no específica conocida en este producto.
4.
5.
6.
7.
Para diagnóstico in vitro (IVD)
ProClin 300 se utiliza como conservante en esta solución. Está clasificado como
irritante y puede provocar sensibilización en contacto con la piel. Tomar
precauciones razonables al manipularlo. Evitar el contacto de los reactivos con los
ojos, la piel y las membranas mucosas. Utilizar ropa y guantes de protección.
Los materiales de origen animal o humano deben manejarse como materiales
peligrosos para el medio ambiente y deben eliminarse con las precauciones
adecuadas.
Evitar el contacto de los reactivos con los ojos y las membranas mucosas. Si se
produce el contacto con áreas sensibles, lave con agua abundante.
Evitar la contaminación microbiana de los reactivos, dado que podría dar lugar a
unos resultados incorrectos.
Consultar con las autoridades locales y/o nacionales sobre el método recomendado
de eliminación.
Consultar la hoja de datos de seguridad para más información.
PROCEDIMIENTO DE TINCIÓN
Los anticuerpos primarios de Ventana se han optimizado para su uso con un módulo de
tinción automatizado Ventana BenchMark Series junto a los kits de detección de Ventana
y sus accesorios. En la tabla 1 se indican los protocolos de tinción recomendados para los
equipos BenchMark XT y BenchMark ULTRA con ultraView Universal DAB Detection Kit.
Los parámetros para los procedimientos automatizados se pueden mostrar, imprimir y
editar según el procedimiento descrito en el manual del usuario del equipo. Consultar el
prospecto correspondiente del kit de detección Ventana para más detalles sobre los
procedimientos de tinción de inmunohistoquímica.
Table 1. Protocolo de tinción recomendado para anti-Glypican 3 (GC33) con ultra View
Universal DAB Detection Kit en equipos BenchMark XT y BenchMark ULTRA.
Tipo de procedimiento
Anti-Glypican 3 (GC33) es un anticuerpo monoclonal de ratón producido como
sobrenadante de un cultivo celular purificado.
Consultar el folleto correspondiente del kit de detección de Ventana para descripciones
detalladas de: (1) Principios del procedimiento, (2) Materiales y reactivos necesarios pero
no suministrados, (3) Extracción y preparación de la muestra para su análisis,
(4) Procedimientos de control de calidad, (5) Resolución de problemas, (6) Interpretación
de los resultados y (7) Limitaciones generales.
Desparafinado
Seleccionado
Acondicionamiento celular
Cell Conditioning 1 suave
(Desenmascaramiento del
antígeno)
Enzima (proteasa)
No se requiere
Anticuerpo (primario)
Equipo BenchMark XT
32 minutos, 37 °C
MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS
No se suministran reactivos de tinción como los kits de detección de Ventana (ultraView
Universal DAB Detection Kit) ni componentes auxiliares, incluyendo portaobjetos de
control tisular negativos y positivos.
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1/3
Método
Equipo BenchMark ULTRA
32 minutos, 36 °C
Contratinción
Hematoxylin II, 4 minutos
Contratinción posterior
Bluing, 4 minutos
1010007ES Rev C
Table 2. Protocolo de tinción recomendado para anti-Glypican 3 (GC33) con iVIEW DAB
Detection Kit en un equipo BenchMark XT.
Tipo de procedimiento
Método
Desparafinado
Seleccionado
Acondicionamiento celular
Cell Conditioning 1 suave
(Desenmascaramiento del
antígeno)
Enzima (proteasa)
No se requiere
Anticuerpo (primario)
Equipo BenchMark XT
32 minutos, 37 °C
Contratinción
Hematoxylin II, 4 minutos
Contratinción posterior
Bluing, 4 minutos
Debido a variaciones en la fijación y el procesamiento del tejido, así como a las
condiciones generales de los equipos y del entorno del laboratorio, puede ser necesario
aumentar o disminuir el tiempo de incubación del anticuerpo primario y el
acondicionamiento celular o tratamiento previo de la proteasa en función de las muestras
particulares, de la detección que se haya utilizado y de las preferencias del profesional
encargado de la lectura. Para más información sobre las variables de fijación, consultar
“Immunohistochemistry Principles and Advances”.7
Tejido
N.º de
casos
positivos /
total
Tejido
Testículo
0/3
Hígado
0/49
Tiroides
0/3
Cirrosis hepática
0/11
Mama
0/3
Hepatitis
0/11
Bazo
0/3
Glándula salival
0/3
Amígdala
0/3
Riñón
0/3
Endometrio
0/3
Próstata
0/3
Músculo esquelético
0/3
Cuello uterino
0/3
Nervio (disperso)
0/3
Piel
0/3
Timo
0/3
Mesotelio y pulmón
0/3
Sensibilidad
Table 4. La sensibilidad de anti-Glypican 3 (GC33) se determinó analizando una variedad
de tejidos neoplásicos fijados con formol y embebidos en parafina.
CONTROL DE TEJIDO POSITIVO
Un ejemplo de un tejido de control positivo para este anticuerpo es la placenta o el
carcinoma hepatocelular.
N.º de
casos
positivos /
total
Patología
N.º de casos
positivos /
total
Glioblastoma
0/1
Meningioma atípico
0/1
Ependimoma maligno
0/1
LIMITACIONES ESPECÍFICAS
Oligodendroglioma maligno
0/1
Se ha observado una tinción no caracterizada en la hipófisis y el adenocarcinoma seroso
papilar.
Adenocarcinoma seroso papilar
1/1
Este anticuerpo se ha optimizado para un tiempo de incubación de 32 minutos en equipos
BenchMark XT y BenchMark ULTRA, combinado con el kit de detección ultraView
Universal DAB Detection Kit; no obstante, el usuario debe validar los resultados obtenidos
con este reactivo.
Adenocarcinoma mucinoso papilar
0/1
Carcinoma de células de los islotes
0/1
Adenocarcinoma pancreático
0/1
CARACTERÍSTICAS DE COMPORTAMIENTO
Seminoma
0/1
Se realizaron pruebas de tinción para especificidad, sensibilidad y reproducibilidad
utilizando anti-Glypican 3 (GC33) con ultraView Universal DAB Detection Kit en los
equipos BenchMark XT y BenchMark ULTRA.
Carcinoma embrionario
0/1
Carcinoma medular
0/1
Especificidad
Carcinoma papilar
0/1
Table 3. La especificidad de anti-Glypican 3 (GC33) se determinó analizando tejidos
normales fijados con formol y embebidos en parafina.
Carcinoma intraductal de mama
0/2
Carcinoma ductal infiltrante de mama
0/1
Linfoma difuso de células B
0/3
Carcinoma no diferenciado de células pequeñas de pulmón
0/1
INTERPRETACIÓN DE LAS TINCIONES
El patrón de tinción celular para anti-Glypican 3 (GC33) es citoplasmático/membranoso
granular.
Tejido
N.º de
casos
positivos /
total
Tejido
N.º de
casos
positivos /
total
Cerebro
0/3
Mieloide (médula ósea)
0/3
Carcinoma pulmonar de células escamosas
0/1
Cerebelo
0/3
Pulmón
0/3
Adenocarcinoma de pulmón
0/1
Glándula suprarrenal
0/3
Corazón
0/3
Carcinoma esofágico de células escamosas
0/1
Ovario
0/3
Esófago
0/3
Adenocarcinoma de esófago
0/1
Páncreas
0/3
Estómago
0/3
Adenocarcinomas mucinosos gástricos
0/1
Glándula paratiroide
0/3
Intestino delgado
0/3
Adenocarcinoma gastrointestinal
0/2
Hipófisis
3/3
Colon
0/3
GIST
0/2
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2/3
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Patología
3.
N.º de casos
positivos /
total
Carcinoma colangiocelular
0/12
Carcinoma hepatocelular
83/125
4.
5.
Capurro MI, et al. Glypican-3 promotes the growth of hepatocellular carcinoma by
stimulating canonical Wnt signaling. Cancer Res. 2005;65;6245-6254.
Midorikawa Y, Ishikawa S, et al. Glypican-3, overexpressed in heptacellular
carcinoma, modulates FGF2 and BMP-7 signaling. Int J Cancer. 2003;103;455-465.
Stigliano I, et al. Glypican-3 regulates migration, adhesion and actin cytoskeleton
organization in mammary tumor cells through Wnt signaling modulation. Breast
Cancer Res Treat. 2009;114;251-262.
Carson F, Hladik C. Histotechnology: A Self Instructional Text, 3rd edition. Hong
Kong: American Society for Clinical Pathology Press; 2009.
Roche PC, Hsi ED. Immunohistochemistry-Principles and Advances. Manual of
Clinical Laboratory Immunology, 6th edition. En: NR Rose, ed. ASM Press; 2002.
Hepatoblastoma
0/1
Carcinoma de células claras renales
0/1
Adenocarcinoma prostático
0/2
Leiomioma
0/1
PROPIEDAD INTELECTUAL
Adenocarcinoma endometrial
0/1
Carcinoma de células claras endometriales
0/1
BENCHMARK, ultraView, VENTANA y el logotipo de Ventana son marcas comerciales de
Roche.
Carcinoma cervical de células escamosas
0/2
Rabdomiosarcoma embrionario
0/1
Melanoma maligno del ano
0/1
Carcinoma de células basales
0/1
Carcinoma de células escamosas
0/1
Neurofibroma
0/1
Ganglioneuroblastoma
0/1
Mesotelioma maligno epitelial
0/1
Linfoma difuso maligno
0/1
Linfoma de Hodgkin
0/1
Carcinoma de células transicionales de la vejiga
0/1
Leiomiosarcoma de grado bajo
0/1
Osteosarcoma
0/1
Rabdomiosarcoma de células fusiformes
0/1
Leiomiosarcoma de grado intermedio
0/1
Adenocarcinoma rectal
0/1
Intersticialoma rectal
0/1
6.
7.
Todas las demás marcas comerciales pertenecen a su respectivos propietarios.
Ventana concede al comprador una licencia de un solo uso al amparo de la patentes de
EE.UU. Nº 6045759, 6945128 y 7378058, y cualesquiera patentes correspondientes en el
extranjero.
INFORMACIÓN DE CONTACTO
Ventana Medical Systems, Inc.
1910 E. Innovation Park Drive
Tucson, Arizona 85755
USA
+1 520 887 2155
+1 800 227 2155 (USA)
www.ventanamed.com
Roche Diagnostics GmbH
Sandhofer Strasse 116
D-68305 Mannheim
Germany
Reproducibilidad
Se realizaron estudios de reproducibilidad de anti-Glypican 3 (GC33) para demostrar:
•
Reproducibilidad entre lotes del anticuerpo.
•
Reproducibilidad intraanálisis e interanálisis en un equipo BenchMark XT.
•
Reproducibilidad intraplataforma en el equipo BenchMark XT y el equipo
BenchMark ULTRA.
•
Reproducibilidad entreplataformas entre el equipo BenchMark XT y el equipo
BenchMark ULTRA.
Todos los estudios cumplieron los criterios de aceptación.
BIBLIOGRAFÍA
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2.
Akutsu, N, Yamamoto H, et al. Association of glypican-3 expression with growth
signaling molecules in hepatocellular carcinoma. World J Gastroenterol.
2010;16,28;3521-3528.
Ishiguro, T, et al. Anti-Glypican 3 Antibody as a Potential Antitumor Agent for
Human Liver Cancer. Cancer Res. 2008;68,23;9832-9838.
2011-06-01
3/3
1010007ES Rev C