interacciones farmacológicas entre florfenicol, ciprofloxacina

interacciones farmacológicas entre florfenicol, ciprofloxacina

CIENCIAS BÁSICAS (FARMACOLOGÍA GENERAL)
INTERACCIONES FARMACOLÓGICAS ENTRE FLORFENICOL, CIPROFLOXACINA,
TETRACICLINA Y UN INHIBIDOR DE BOMBAS DE EFLUJO FRENTE A Escherichia coli
MARCHETTI, Laura 1; DADÉ, Martín 1; MESTORINO, Nora 1
1
Laboratorio de Estudios Farmacológicos y Toxicológicos (LEFyT), Facultad de Ciencias Veterinarias,
Universidad Nacional de La Plata. Calle 60 y 118 s/n, 1900 La Plata. *[email protected]
INTRODUCCIÓN. Los efectos en la actividad combinada de dos fármacos, pueden ser clasificados en 4
subtipos: indiferencia,
adición, sinergismo y antagonismo (4). En estudios de asociaciones de
fármacos antimicrobianos, se establece un Índice de Concentración Inhibitoria Fraccionaria (CIF). Este
índice representa la sumatoria de las CIFs de cada fármaco testeado.
El objetivo de nuestro estudio fue evaluar la existencia de algún efecto sinérgico entre antimicrobianos de
uso frecuente en la clínica veterinaria; y un inhibidor de bombas de eflujo 1-(1-naphthylmethyl)piperazine
(NMP) frente a cepas de E. coli mutagénicas multirresistentes.
MATERIALES Y MÉTODOS. Se utilizaron tres cepas de E. coli modificadas genéticamente: AG112 con
sobreexpresión de bombas de eflujo tipo acrAB-TolC, AG100 como cepa “normal” y AG100A con deleción
total de bombas (Tabla I). La cepa de referencia para el control de calidad fue E. coli ATCC 25922. Los
antimicrobianos evaluados fueron florfenicol, ciprofloxacina y tetraciclina. Se empleó caldo Luria Bertani
(LB). Se procedió a la determinación de las CIMs de los antibacterianos a través de la prueba cuantitativa
de microdilución en caldo, basada en la determinación del crecimiento del microorganismo en presencia de
concentraciones crecientes de antimicrobiano, en policubetas con y sin el agregado de NMP a razón de 50
µg/mL y 100 µg/mL (3). La lectura de la CIM fue realizada por observación directa del primer pocillo que
no presentó turbidez (3). Para la determinación de las interacciones entre los tres antimicrobianos
seleccionados (florfenicol, ciprofloxacina y tetracilina) se calculó el Índice de Concentración Inhibitoria
Fraccionaria (CIF del inglés: Concentration Index Fractionary) a partir de la siguiente ecuación:
(𝑨)
(𝑩)
+ (𝑪𝑰𝑴)𝒃
(𝑪𝑰𝑴)𝒂
= 𝑪𝑰𝑭𝒂 + 𝑪𝑰𝑭𝒃 = 𝑰𝒏𝒅𝒊𝒄𝒆 𝑪𝑰𝑭
Donde (A) se corresponde con la concentración del antimicrobiano cuando se encuentra en combinación
con NMP; (B) es la concentración de NMP presente en la mezcla con el antimicrobiano, (CIM) a: es la CIM
del antimicrobiano solo y (CIM)b es la CIM de NMP solo.
RESULTADOS. Frente a florfenicol, se observó una clara actividad antibacteriana sinérgica frente a las
cepas ATCC 25922, AG112 y AG100. Sin embargo, no existió ni adición ni sinergismo frente a la cepa
AG100A con deleción total de bombas. Con ciprofloxacina la asociación de NMP es sinérgica únicamente
a la concentración de 100 µg/mL de NMP cuando existe sobreexpresión de bombas de eflujo. En las cepas
que expresan una cantidad “normal” de bombas sobre su superficie se observó el fenómeno de adición y
nada ocurrió frente a AG100A. En la cepa AG112 y en la E. coli ATCC 25922, se observó la presencia de
sinergismo al evaluar las CIMs de tetracilina y NMP. Ver resultados en Tabla II.
DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN. Algunos autores consideran sinergismo cuando el valor de CIF<1, adición o
indiferencia cuando es igual a 1 y antagonismo si es superior a 1 (4,5). Sin embargo otros autores (1, 2),
establecen rangos intermedios de modo que la clasificación es un poco más amplia, siendo sinergismo
cuando los valores de CIF son ≤0.5; sinergismo parcial o adición para CIFs en el rango de >0.5 y <1;
indiferencia o adición si es ≥1 y <2; y antagonismo cuando el valor es ≥2-4. Basándonos en esta última
clasificación, consideramos para nuestros resultados, verdadero sinergismo a aquellos valores de CIF ≤
0.5. Es evidente que ocurrió sinergismo sin excepción, cuando se realizó la combinación de los tres
antimicrobianos evaluados con 100 µg/mL de NMP. La incorporación de 50 µg/mL de NMP tuvo excelentes
resultados con florfenicol y tetraciclina frente a la cepa AG112. Es importante concluir que la existencia de
sinergismo podrá incrementar la eficacia terapéutica y; disminuyendo el riesgo de selección de resistencia
bacteriana.
Tabla I. Características genotípicas de las cepas isogénicas y el fenotipo wild type.
Nombre
AG100
Genotipo
argE3 thi-3 rpsL xyl mtl supE44
AG112
AG100 marR (5-bp deleción cerca 5′ final)
AG100A
AG100 ΔacrAB::Kan
Tabla II. Indice CIF de florfenicol, ciprofloxacina y tetraciclina con y sin la adición de NMP
Indice CIF obtenido frente a las cepas
E. coli ATCC
AG100
AG100A
AG112
25922
0
1
1
1
1
FLR
50
0.38
0.38
1.13
0.38
100
0.38
0.38
1.25
0.28
0
1
1
1
1
CIP
50
0.63
0.63
1.13
0.62
100
0.75
0.75
1.25
0.5
0
1
1
1
1
TET
50
0.38
0.63
1.13
0.38
100
0.5
0.75
1.25
0.31
FLR: florfenicol. CIP: ciprofloxacina. TET: tetraciclina. NMP: 1-(1-naphthylmethyl)piperazine.
Antimicrobiano
NMP
(µg/mL)
BIBLIOGRAFIA
1. Bharadwaj, R. et al. 2003. An in vitro study to evaluate the synergistic activity of norfloxacin and metronidazole.
Indian J Pharmacol, 35: 220-226.
2. Choi, M et al. 2011. The in vitro antibacterial activity of florfenicol in combination with amoxicillin or cefuroxime
against pathogenic bacteria of animal origin: Pak Vet J, 31 (2): 141-144.
3. CLSI 2009. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; nineteenth informational supplement.
CLSI document M100-S19 Wayne, Pennsylvania, USA, Clinical Laboratory Standard Institute.
4. Meletiadis, J. et al. 2010. Defining fractional inhibitory concentration index cutoffs for additive interactions based
on self-drug additive combinations, Monte Carlo simulation analysis, and in vitro-in vivo correlation data for
antifungal drug combinations against Aspergillus fumigatus. Antimicrob Agents Chemother, 54 (2).
5. Te Dorsthorst, D. et al. 2002. Comparison of fractional inhibitory concentration index with response surface
modeling for characterization of in vitro interaction of antifungals against itraconazole-susceptible and -resistant
Aspergillus fumigatus isolates. Antimicrob Agents Chemother, 46 (3):702-707.