Prueba por aglutinación de látex en lámina para la determinación
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Prueba por aglutinación de látex en lámina para la determinación
Regresar especimenes visiblemente hemolizados ya que se conoce que estos producen resultados falsos positivos. Prueba por aglutinación de látex en lámina para la determinación cualitativa y semi - cuantitativa de Anti-DNP asociado con Lupus Eritematoso Sistémico en suero Humano. Referencia Presentación s-LE/010 Estuche x 50 pruebas s-LE/012 Estuche x 100 pruebas INTRODUCCION En el Lupus Eritematoso Sistémico (s-LE), se producen anticuerpos dirigidos contra el ácido desoxirribonucleico nativo y otros componentes nucleares. Está clasificado como el prototipo de la enfermedad autoinmune severa, involucrando variedad de tejidos, asociado con un amplio rango de anticuerpos en circulación. Las características de la enfermedad son anticuerpos en contra el DNA nativo, nucleoproteínas, DNA denaturado y otros antígenos nucleares extractables. El Lupus Eritematoso Sistémico (S-LE) también afecta un amplio rango de tejidos. Los órganos afectados son en decreciente incidencia, articulaciones, piel, riñones, sistema nervioso central, corazón y pulmones. Otra característica importante es la elevada frecuencia de la enfermedad en mujeres, la cual es aproximadamente de 3 – 4 veces más frecuente que en los hombres. La alta incidencia de s-LE entre gemelos monocigotos (70-80%) y familiares cercanos (5-10%) indica que s-LE puede ser una enfermedad hereditaria. Los anticuerpos Anti-DNP son demostrados por un número de procedimientos de laboratorio el cual incluye la prueba de Célula LE, inmunofluorescencia y aglutinación de partículas de látex recubiertas. En la prueba s – LE de Plasmatec, las partículas son ligadas con proteína desoxiribonucleica nativa (DNP) por medio de una matriz de albúmina intermediaria. Estas partículas revestidas combinadas con anticuerpos Anti DNP en suero producirán una aglutinación visible. PRESENTACION DEL ESTUCHE 1. 2. 3. 4. 5. Reactivo de Látex suficiente para 50/100 pruebas en lamina (Etiqueta amarilla) Suspensión de partículas de látex de poli estireno recubiertas con extracto de DNP en un buffer salino. Control Positivo (etiqueta rojal) Suero humano estabilizado, positivo para s-LE. Control Negativo (etiqueta azul) Suero Humano estabilizado, negativo para s-LE. Lamina plástica reutilizable para prueba. Pipetas y mezcladores desechables. PRECAUCIONES Para uso de Diagnostico In Vitro El suero control SLE ha sido probado y encontrado como no reactivo para el antígeno de superficie de hepatitis B (HbsAg) y HTLV-111; sin embargo, todos los productos de suero humanos y los especimenes de pacientes deben ser considerados como potencialmente peligrosos y deben ser manejados de la misma manera que el agente infeccioso. Los reactivos contienen azida de sodio. Este agente es conocido como reactivo con el cobre y el plomo en desagües y puede formar de ácidos explosivos. Estos materiales deben ser eliminados con grandes cantidades de agua para prevenir la acumulación de ácidos. ALMACENAMIENTO Los reactivos son estables entre 2-8 C hasta la fecha de expiración que indica la etiqueta. NO CONGELAR. REQUERIMIENTOS ADICIONALES Reloj temporizador Tubos de Ensayo (Titulación solamente) Pipetas Serológicas (Titulación Solamente) Salina Fisiológica (0.9% NaCl) (Titulación Solamente) PREPARACION DE LA MUESTRA Se recomienda que sólo suero sea utilizado. No inactive con calor el suero o los controles. Evite descongelar los especimenes repetidamente. No utilice Estabilidad de la muestra: El suero es estable por 48 horas cuando es almacenado entre 2-8 C Sustancias que interfieren: Utilice solamente una lamina limpia y seca, lavada previamente con poco detergente y enjuagado con agua destilada. Los pacientes con Artritis Reumatoide, Síndrome de Sjogren, enfermedad mixta de Tejido Conectivo., Esclerosis Sistémica Progresiva y L.E discoide, pueden mostrar reactividad cuando se ejecute la prueba. Muchos medicamentos de amplio uso, pueden de hecho inducir a un síndrome de Lupus Eritematoso sistémico. Hidralazina, Isoniazida y procainamida y un numero de anti convulsionantes pueden entrar en esta categoría. Los reactivos Látex deben ser agitados vigorosamente por 30 segundos antes de su uso con el propósito de evitar la agregación de las partículas de látex. PROCEDIMIENTO 1. Lleve todos los reactivos a temperatura ambiente y mezcle suavemente antes de usar. 2. Coloque en las divisiones separadas (celdas) de la misma lamina: Suero 1 gota Control Positivo (etiqueta roja) 1 gota Control Negativo (etiqueta azul) 1 gota 3. Adicione una gota de reactivo látex sLE a cada célula 4. Mezcle con el extremo plano de la pipeta / mezcle y esparza el fluido regularmente sobre cada celda. 5. Incline la lamina de atrás hacia adelante suavemente por 3 minutos mientras observa la aglutinación DETERMINACION SEMI CUANTITATIVA Prepare las diluciones para los especimenes como se muestra a continuación: Dilución: 1:2 (1 parte suero + 1 parte salina) 1:4 (1 parte suero + 3 parte salina) 1:8 (1 parte suero + 7 parte salina) 1:16 (1 parte suero + 15 parte salina) 1:32 (1 parte suero + 31 parte salina) 1:64 (1 parte suero + 63 parte salina) Proceda como el la prueba de screening (cualitativa). El titulo de anticuerpos de s LE en suero es la dilución mas alta de suero que muestra aglutinación del reactivo látex, 3 minutos después de ser mezclados. CONTROL DE CALIDAD: Los controles positivos y negativos deben ser corridos con cada serie y los resultados comparados con los especimenes del paciente. RESULTADOS Algún grado de aglutinación visible dentro de 3 minutos se interpretará como positivo. La prueba s-LE es considerada negativa cuando no hay diferencia entre la aglutinación del espécimen y el control negativo. CARACTERISTICAS DE INTERPRETACION La prueba de Látex s-LE fue comparada con una Prueba de Células LE estándar, así como también con una prueba de fluorescencia ANA. Las tres pruebas mostraron una concordancia excelente en el suero de pacientes clínicamente activos para sLE: s-LE látex 82% positivo, preparación de Células LE 86% positivo, prueba de ANA 82% positivo. Sueros de pacientes clínicamente inactivos para s-LE: reacciones positivas: s-LE látex 19%, prueba ANA 71%. Pacientes con enfermedad de Tejido Conectivo no mostraron reacciones positivas con la prueba S-LE látex, pero 17% y 50% de reacciones positivas con preparación de Células LE y la prueba de ANA respectivamente. Estudios adicionales publicados han confirmado la sensibilidad y la especificidad de las pruebas s-LE látex REFERENCIAS 1. Christian, C.L., R Méndez-Bryan, and D.L. Larson, 1958. Proc. Soc. 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