NOMBRE: PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES (I8

NOMBRE: PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES (I8

NOMBRE: PRODUCCIÓN DE PROTEÍNAS RECOMBINANTES (I8)
PROFESOR RESPONSABLE: Manuel Cifuentes Rueda (Universidad de Málaga)
PROFESORES PARTICIPANTES:
Victoriano Juan Carlos Aledo Ramos (Dpto. Biología Molecular y Bioquímica,
Universidad de Málaga)
Nieves Medina Escobar (Dpto. Biología Molecular y Bioquímica, Universidad de
Málaga)
DESCRIPTORES
Sistemas de expresión de proteínas en procariontes y eucariontes. Vectores de
expresión.
OBJETIVOS DEL APRENDIZAJE
Conocer los fundamentos y la metodología más avanzada para la expresión de
proteínas en organismos uni y plirucelulares.
Nª DE CREDITOS ECTS: 3
ACTIVIDADES DEL APRENDIZAJE (h):
- Clases teóricas: 24 horas
- Clases prácticas:
- Actividades académicas dirigidas: 6 horas
- Tutorías especializadas: 4 h
- Trabajo personal autónomo: 5 h
- Trabajo en grupo: 5 h
- Horas de estudio de las clases teóricas/prácticas: 20 h
- Horas de trabajo personal derivadas de las actividades dirigidas: 10 h
- Otras actividades (visitas, conferencias, excursiones):
- Exámenes o pruebas de evaluación escritos: 1h
- Exámenes o pruebas de evaluación orales:
BLOQUES TEMATICOS
Tema 1. Manipulación de la expresión génica en eucariotas. Expresión con
promotores fuertes e inducibles. Proteínas de fusión. Ruptura y purificación
de las proteínas de fusión. Control de la estabilidad y plegamiento correcto
de las proteínas. La secreción de las proteínas.
Tema 2. Sistemas de expresión en Saccharomyces cerevisiae. Vectores. Secreción de
proteínas. Pichia pastoris y vectores de expresión en otras levaduras.
Tema 3. Mutagénesis dirigida. Métodos de PCR. Mutagénesis al azar. Proteínas con
aminoácidos inusuales. Ingeniería de proteínas. Cambio de puentes de
disulfuro. Sensibilidad a proteasas.
Tema 4. Producción de proteínas recombinantes en plantas. Uso de suspensiones
celulares y cultivos de raíces. Vectores de producción en monocotiledóneas.
Promotores. Producción en cloroplastos. Aspectos de bioseguridad.
Tema 5. Expresión de proteínas recombinantes en baculovirus. Glicosilación y
modificaciones post-traduccionales. Cultivo de células de insecto. Vectores.
Plásmidos donadores. Tipos de promotores.
Tema 6. Sistemas de expresión en Baculovirus, tipos y sus fundamentos Escalado de
la producción de proteínas. Protocolos básicos.
Tema 7. Sistemas de expresión en mamíferos. Introducción, Procesamiento posttraduccional. Expresión transitoria versus permanente. Cultivo de células de
mamíferos. Tipos de vectores. Protocolos básicos.
BIBLIOGRAFIA BASICA
- Glick B.R., Pasternak J.J. (2003). Molecular Biotechnology. 3rd. Edition. ASM
Press. Washington (USA).
- Dalby, P.A. (2003) Optimising enzyme function by directed evolution. Curr. Opin.
Struct. Biol. 13: 500-505
- Dingermann T. (2008) Recombinant therapeutic proteins: Production platforms
and challenges. Biotechnol. J.3, 90–97