teco diagnostics

TECO DIAGNOSTICS
FACTOR REUMATOIDE
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REACTIVO PARA FACTOR REUMATOIDE (RF)
Para la determinación cualitativa y semicuantitativa de Factor reumatoide en
suero.
INTRODUCCION.
Los factores reumatoides (RF) son anticuerpos dirigidos contra sitios en el
fragmento Fc de la IgG animal y humana. Su frecuente ocurrencia en la artritis
reumatoide los hace útiles para el diagnostico y monitoreo de la enfermedad1,2.
Un método que se usa para la detección del factor reumatoide se basa en la
habilidad del suero con artritis reumatoide para aglutinar células rojas de oveja
sensibilizadas, como lo mostró Waaler3 y Rose4. Luego se descubrió un reactivo
más sensible que consiste en látex inerte cubierto con gammaglobulina humana
y que fue descrito por Singer y Plotz5. La mayor ventaja del método es el rápido
desempeño (tiempo de reacción 3 minutos) y no interfieren anticuerpos
heterófilos.
PRINCIPIO.
El reactivo de Factor reumatoide es una suspensión de partículas de látex de
poliestireno sensibilizadas con IgG humana preparada especialmente. El reactivo
se basa en la reacción inmunológica entre la IgG humana unida a las partículas
de látex biológicamente inertes y el factor reumatoide en el espécimen. Cuando
el suero que contiene el factor reumatoide se mezcla con el reactivo de látex,
ocurre la aglutinación visible. El reactivo de factor Reumatoide de látex
sensibilizado ha sido ajustado para detectar un mínimo de 8 IU/mL de factor
reumatoide de acuerdo con los estándares internacionales de la OMS sin previa
dilución de la muestra.
REACTIVOS.
1.- Reactivo látex RF:
Una suspensión uniforme de partículas de poliestireno cubiertas con IgG humana
en buffer de glicina a pH 8.2; la sensibilidad del reactivo esta estandarizada con
el estándar de RF de la OMS. MEZCLE BIEN ANTES DE USAR.
2.- RF control positivo:
Suero humano estabilizado pre diluido con al menos 8 IU/mL de FR.
3.- RF Control Negativo:
Suero humano no reaccionante con el reactivo de prueba
4.- Buffer Glicina- Salina (20x), pH 8.2 Glicina 0.1 M; NaCl 0.15 M.
Nota: Diluya el buffer según instrucciones en la etiqueta antes de
usarse (por ejemplo: 20 mL de agua destilada con 1 ml de Buffer).
Todos los reactivos contienen 0.1% de azida de sodio como
preservativo. Almacene los reactivos a 2-8 °C. NO CONGELE.
PRECAUCIONES.
1.-Los reactivos con azida de sodio se pueden combinar con cobre y plomo para
formar azidas metálicas altamente explosivas. Deseche los reactivos con grandes
cantidades de agua para prevenir la formación de azidas.
2.- Para diagnostico in Vitro.
3.- Los controles positivo y negativo preparados con suero humano son
negativos para Hepatitis B, pero se deben manejar con cuidado como si fueran
potencialmente infecciosos.
ALMACEN Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO.
1.- Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad de la botella cuando se
almacena en refrigeración (2-8°C)
2.- NO SE CONGELE.
3.- El reactivo de látex RF una vez agitado debe ser uniforme sin grumos
visibles. Cuando se almacena en refrigeración, puede ocurrir una ligera
sedimentación y se debe considerar normal.
4.- No use el reactivo látex o control si se contaminan.
COLECTA Y ALMACENAJE DE LA MUESTRA.
1.- Use el suero separado del coagulo por centrifugación.
2.- Si no se puede realizar la prueba el mismo día, el suero se debe almacenar en
refrigeración (2-8°C) por no mas de 72 horas después de la colecta.
3.- Para periodos prolongados se debe congelar.
4.- Como en las pruebas serológicas, el suero hemolítico o contaminado no se
debe usar.
5.- NO USE PLASMA.
MATERIALES PROPORCIONADOS.
1.- Reactivo RF látex.
2.- Control positivo RF.
3.- Control negativo RF.
4.- Buffer Glicina salino.
5.- Placa de reacción.
6.- Agitadores/Pipetas.
MATERIALES REQUERIDOS NO PROPORCIONADOS.
1.- Reloj.
2.- Tubos de ensayo.
3.- Pipetas serológicas.
PROCEDIMIENTO.
Prueba Cualitativa.
1.- Los reactivos y especímenes deben estar a temperatura ambiente antes de
usarse.
2.- Ponga una gota (50 µL) del Control Positivo de RF en el campo No. 1 de la
laminilla de reacción. Ponga una gota (50 µL) del Control Negativo de RF en el
campo No. 2. Los campos restantes se usan para las muestras. Usando las pipetas
proporcionadas ponga una gota de especímenes en los campos sucesivos.
Retenga las pipetas para mezclar.
3.- Suavemente re suspenda el Reactivo RF látex y agregue una gota a cada
campo de reacción. Use el palillo pipeta para extender la mezcla en la placa.
4.- Rote la placa por 2 minutos y lea inmediatamente bajo luz directa.
NOTA: La aglutinación de la partícula de látex es un resultado positivo (vea la
figura 1). La aglutinación indica una concentración positiva de RF igual o mayor
de 8 IU/mL. Los sueros con aglutinación positiva se deben evaluar una vez más
con la prueba cuantitativa.
Prueba Cuantitativa.
1.- El reactivo y el Buffer deben estar a temperatura ambiente antes de usarse.
2.- Con el Buffer Salino de Glicina, diluya el espécimen1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32
o según sea necesario.
3.- Ponga una gota (50 µL) de negativo y otra de positivo en una laminilla.
Ponga una gota de cada dilución en los campos sucesivos de la placa de
reacción.
4.- Re suspenda suavemente el Reactivo RF en látex y agregue una gota a cada
campo de prueba. Use el palillo pipeta para extender la reacción sobre todo el
campo.
5.- Rote la laminilla durante 2 minutos y lea inmediatamente debajo de la luz
directa.
CONTROL DE CALIDAD.
1.- Se deben usar Controles Positivos y negativos de RF en cada grupo de
pruebas.
2.- El desempeño aceptable se indica cuando se forma una suspensión uniforme
y lechosa sin muestras de aglutinación con el Control RF Negativo y la
aglutinación con grandes agregados se observa con el control positivo.
INTERPRETACION
Prueba Cualitativa:
Resultado negativo: Una reacción negativa se indica por la suspensión uniforme
sin muestras de aglutinación en la mezcla de reacción. La reacción del
espécimen se debe comparar con los controles positivo y negativo para RF.
Resultado positivo: Una reacción positiva es indicada por cualquier aglutinación
observada en la mezcla de reacción.
Prueba Semicuantitativa:
La concentración del suero es el reciproco de la dilución mas alta en que
muestra reacción positiva.
Un estimado de la concentración de RF en un espécimen se puede expresar en
IU/mL usando la siguiente ecuación:
TECO DIAGNOSTICS
FACTOR REUMATOIDE
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IU/ml de espécimen=IU/mL control X titulo del espécimen
Positivo
Fabricado por:
Negativo
Figura 1.
LIMITACIONES.
1.- Los resultados se deben leer en 2 minutos después de mezclar o extender el
reactivo sobre la laminilla.
2.- No se ha encontrado la existencia de prozona a titulaciones elevadas.
3.- Los incrementos de RF pueden estar alrededor de enfermedades diferentes a
artritis reumatoide como infección por mononucleosis, sarcodosis, lupus
eritematoso, síndrome de Sjorgen`s6,7.
4.- Algunos pacientes con artritis reumatoide pueden no tener RF en suero. 6
VALORES ESPERADOS.
1.- El diagnostico de artritis reumatoide está basado en exámenes clínicos, pero
los exámenes de laboratorio son útiles para apoyar el diagnostico clínico y para
avaluar la severidad y curso de la enfermedad. Uno de los marcadores clínicos
para artritis reumatoide es el factor Reumatoide en suero. Factor Reumatoide es
un término usado para describir una variedad de anticuerpos o complejos
inmunes o ambos, que suceden con artritis reumatoide así como en una variedad
de enfermedades8.
2.- Los diferentes estudios han mostrado que las reacciones serológicas son
positivas para factor reumatoide en el 90% de los pacientes con artritis
reumatoide comparado con menos de 5% en grupos de control.1
DESEMPEÑO
1.- Sensibilidad: 8 IU/mL o más.
2.- Comparación:
A. Resultado cualitativo:
Se evaluó en un total de 75 muestras de pacientes de hospitales. La prueba
cualitativa se evaluó por comparación con una prueba de aglutinación
comercialmente disponible. Este estudio mostró un 96% de correlación entre
ambas pruebas. La discrepancia se obtuvo en muestras con dilución muy cercana
al límite de sensibilidad de los reactivos.
B. Resultados semicuantitativos.
Se cuantificó un panel de 10 sueros positivos para RF. Los resultados del estudio
indicaron una precisión del 100%.
REFERENCIAS:
Distribuido por:
Grupo Tecnología y Laboratorios S.A de C.V.
T. (81) 8370 7992
www.grupotecnolab.com