analisis de carbohidratos - TÉCNICAS DE ANÁLISIS

analisis de carbohidratos - TÉCNICAS DE ANÁLISIS

ANALISIS DE CARBOHIDRATOS
Celulosa
n
Prof. Ing. Alex Fernando López Córdoba, Esp
Tecnicatura Superior en Alimentos
ESCUELA MEH
Introducción
¿Que es un carbohidrato?
Son polihidroxi aldehídos o cetonas o
compuestos que conducen a ellos por hidrólisis
y sus derivados.
Se denominan Hidratos de carbono por
responder muchos de ellos a la formula
empírica:
C (H2O)n
Introducción
¿Que es un carbohidrato?
Se producen en la fotosíntesis.
Las plantas verdes contienen clorofila que
capta de la luz solar la energía necesaria para
realizar el proceso:
6 CO2
+ H2O
C6(H2O)6 + 6 O2
Introducción
¿Como se clasifican?
C
a
r
b
o
h
i
d
r
a
t
o
s
Monosacáridos
Cetosas
Azúcares
Oligosacáridos
Polisacáridos
Aldosas
-2
Di
-3
Tri
-4
tetr
-5
pent
-6
Hex
- 7 Hept
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
H
OH
O
C
+
R OH
H C OR
R´
R´
+
Aldehido
R´
Alcohol
Hemiacetal
OH
O
C
+
R OH
R´
Cetona
R´
C OR
R´
+
Alcohol
Hemicetal
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
O
H
HO C H
C
H C OH
HO C H
H C OH
O
H C OH
H C OH
HO C H
H C OH
H C OH
H C OH
H C
H C OH
CH2OH
β-D-glucopiranosa
O
HO C H
H C
CH 2OH
CH 2OH
D-glucosa
Anillo de 6 miembros
α-D-glucopiranosa
Como el del pirano
piranosas
O
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
HO C CH2OH
HO C H
O
H C OH
H C
CH2OH
β-D-fructofuranosa
O
HOCH2
HOCH2
C
C OH
HO C H
O
HO C H
H C OH
H C OH
H C
H C OH
CH2OH
CH2OH
D-fructosa
Anillo de 5 miembros
α-D-fructofuranosa
Como el del furano
furanosas
O
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
CH2OH
HO C H
O
H H
H C OH
HO C H
H C OH
H C
OH
O
HO
OH
H H
H
OH
CH2OH
Estructura en proyección de
Fischer
Estructura en proyección de
Haworth
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
CH2OH
HO C H
O
H H
H C OH
HO C H
H C OH
HOCH2
C
OH
O
HO
OH
H H
H
OH
H
Estructura en proyección de
Fischer
Una permutación
Inversión en C5
Estructura en proyección de
Haworth
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
CH2OH
HO C H
O
H H
H C OH
HO C H
H C OH
HOCH2
C H
Estructura en proyección de
Fischer
Dos permutaciones
Igual configuración
O
HO
OH
OH
H H
H
OH
Estructura en proyección de
Haworth
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
CH2OH
HO C H
O
H H
H C OH
HO C H
H C OH
HOCH2
C H
Estructura en proyección de
Fischer
O
HO
OH
OH
H H
H
OH
Estructura en proyección de
Haworth
Los sustituyentes a la izquierda en Fischer
están hacia arriba en Hawort
Monosacáridos
Estructura
Estructura cíclica
CH2OH
HO
O
H H
HO
OH
H
CH2OH
OH
O
H H
HO
HO
OH
Estructura en proyección de
Haworth
Conformación silla
OH
Maltosa
6
6
CH2OH
CH2OH
5
O
1
4
OH
OH
2
α−D-glucosa
1
4
OH
+
OH
3
OH
α ο β −D-glucosa
CH2OH
OH
2
OH
OH
3
O
5
CH2OH
O
enlace glucosídico α−1,4
OH
O
OH
OH
O
OH
α ο β -maltosa
OH
OH
• Maltosa.- Es el azúcar de malta. Grano germinado de
cebada que se utiliza en la elaboración de la cerveza.
Se obtiene por hidrólisis de almidón y glucógeno.
Posee dos moléculas de glucosa unidas por enlace
tipo α (1-4).
Lactosa
CH2OH
glucosa
O
CH2OH
O
OH
OH
galactosa
OH
OH
O
OH
enlace galactosídico β−1,4
OH
• Lactosa.- Es el azúcar de la leche de los
mamíferos. Así, por ejemplo, la leche de vaca
contiene del 4 al 5% de lactosa.
Sacarosa
6
6
CH2OH
O
5
1
OH
2
OH
3
α−D-glucosa
OH
-H2O
+
CH2OH
1
4
OH
6
OH
2
OH
3
O
6
CH2OH
2
OH
OH
O
OH
5
4
4
OH
2
O
OH
5
O
5
4
OH
enlace glucosídico α−1,2
CH2OH
3
β−D-fructosa
CH2OH
1
3
CH2OH
1
• Se conoce como azúcar de remolacha, azúcar de caña, azúcar
de mesa o simplemente azúcar. Es el compuesto orgánico puro
de mayor venta en el mundo.
• El cuerpo humano es incapaz de utilizar la sacarosa o
cualquier otro disacárido en forma directa, debido a que estas
moléculas resultan muy grandes para pasar a través de las
membranas celulares. Por lo que, el disacárido debe
fragmentarse, por hidrólisis, en sus dos unidades de
monosacáridos.
DISACÁRIDOS REDUCTORES
los disacáridos están formados por la unión de dos monosacáridos, que se realiza de dos formas:
Mediante enlace monocarbonílico, entre el C1 anomérico de un monosacárido y un C no anomérico de
otro monosacárido, como se ve en las fórmulas de la lactosa y maltosa. Estos disacáridos conservan el
carácter reductor .
Mediante enlace dicarbonílico, si se establece entre los dos carbonos anoméricos de los dos
monosacáridos, con lo que el disacárido pierde su poder reductor, por ejemplo como ocurre en la
sacarosa
Polisacáridos
CH2OH
CH2OH
H
HO
O
H
OH
H
H
OH
H
H
O
O
H
OH
H
H
OH
CH2OH
CH2OH
H
H
O
O
H
OH
H
H
OH
H
H
O
n
Amilosa
Soluble en agua
20% del almidón
O
H
OH
H
H
OH
H
OH
Amilopectina
Insoluble en agua
80% del almidón
El almidón
• El almidón es un polisacárido de reserva
alimenticia predominante en las plantas, y
proporciona el 70-80% de las calorías
consumidas por los humanos de todo el
mundo. Tanto el almidón como los productos
de la hidrólisis del almidón (amilosa y
amilopectina) constituyen la mayor parte de
los carbohidratos digestibles de la dieta
habitual.
Diferencia entre amilosa y amilopectina
• La amilopectina se diferencia de la amilosa en
que contiene ramificaciones que le dan una
forma molecular a la de un árbol; las ramas
están unidas al tronco central (semejante a la
amilosa) por enlaces α-D-(1,6), localizadas
cada 15-25 unidades lineales de glucosa.
Diferencia entre amilosa y amilopectina
• Su peso molecular es muy alto ya que algunas
fracciones llegan a alcanzar hasta 200 millones
de daltones.
• La amilopectina constituye alrededor del 80%
de los almidones más comunes. Algunos
almidones están constituidos exclusivamente
por amilopectina y son conocidos como
céreos.
MÉTODOS DE ANÁLISIS DE
CARBOHIDRATOS
• MÉTODOS QUÍMICOS
• MÉTODO FLUORIMÉTRICO
• MÉTODOS ENZIMÁTICOS
• CROMATOGRAFÍA DE GASES
• CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
• MÉTODOS FÍSICOS
MÉTODOS QUÍMICOS
• REACCIONES DEL H2SO4 Y CARBOHIDRATOS
• ÁCIDO FENOL SULFÚRICO
• FUNDAMENTO.FUNDAMENTO.- PROVIENE DE LOS
PRODUCTOS DE REACCIÓN Y DEGRADACIÓN
DEL ÁCIDO Y EL AZÚCAR.
ÁCIDO FENOL SULFÚRICO
– EL AZÚCAR SE TORNA PRINCIPALMENTE
HIDROXIMETILFURFURAL (HMF) O FURFURAL (F)
LOS CUALES SON REALMENTE DETERMINADOS
LEYENDO LA ABSORBANCIA A 490nm
H2SO4
CONC.
FENOL + CARBOHIDRATO → AMARILLO – NARANJA
CALOR
ÁCIDO FENOL SULFÚRICO
H+
H+
• POLISACÁRIDOS → MONOSACÁRIDOS → F + HMF
∆
∆
VENTAJAS DEL MÉTODO
• ES SENCILLO
• ES RÁPIDO
• SENSIBLE A MUY BAJOS NIVELES DE AZÚCAR
(E.G. 5μg)
• ESPECÍFICO PARA CARBOHIDRATOS.
• NO EXISTE INTERFERENCIA CON PROTEÍNAS
VENTAJAS DEL MÉTODO
• A MENUDO NO ES NECESARIA LA
CLARIFICACIÓN DE LA MUESTRA
• LOS REACTIVOS SON BARATOS Y ESTABLES
• COLOR ESTABLE
• RESULTADOS REPRODUCIBLES
• RESULTADOS CONFIABLES
DESVENTAJAS DEL MÉTODO
• LOS CARBOHIDRATOS QUE NO
PROPORCIONAN HMF Y F EN LA
DESCOMPOSICIÓN ÁCIDA RESULTAN EN UNA
AMPLIA GAMA DE COLORES. POR TANTO EL
MÉTODO NO MIDE TODOS LOS
CARBOHIDRATOS
DESVENTAJAS DEL MÉTODO
• MIDE LA MAYORÍA DE LOS CARBOHIDRATOS
PERO LA INTENSIDAD DEL COLOR VARÍA
AMPLIAMENTE ENTRE LOS CARBOHIDRATOS,
POR LO QUE SE DEBE SELECCIONAR UNO DE
ELLOS COMO REFERENCIA
DESVENTAJAS DEL MÉTODO
• LA PROPORCIÓN DE H2SO4 ES MUY IMPORTANTE YA
QUE SE ADICIONA H2SO4 COMO FUENTE DE CALOR A
LA MUESTRA ACUOSA.
• SE DEBE EVITAR LA CONTAMINACIÓN PROVENIENTE
DEL PAPEL FILTRO O POLVO DE CELULOSA
ANTRONA – ÁCIDO SULFÚRICO
(9,10 DIHIDRO-9-OXOANTRACENO)
• FUNDAMENTO
EL MÉTODO ES BÁSICAMENTE IGUAL AL DEL
FENOL PERO EL COLOR QUE SE OBTIENE ES
AZÚL – VERDE Y SE LEE A UNA ABSORBANCIA
DE 620nm.
•
TIENE LAS MISMAS VENTAJAS Y
DESVENTAJAS QUE EL MÉTODO ANTERIOR.
DETERMINACIONES DE
AZÚCARES REDUCTORES
AZÚCAR + ÁLKALI → FRAGMENTOS DE AZÚCAR REDUCTOR
+
Cu(OH)2 ← COMPLEJO DE COBRE DE
TARTRATO Y CITRATO
↓
∆
OH
H2O + Cu2O ---- CuOH ---- Cu+ + MEZCLA DE ÁCIDOS DE
AZÚCAR
SOLUCIÓN DE FEHLING
• FUNDAMENTO
•
DOS SOLUCIONES :
SOLUCIÓN A: SULFATO DE COBRE CRISTALINO
• SOLUCIÓN B: TARTRATO DE SODIO Y POTASIO (O
CITRATO DE SODIO) + HIDRÓXIDO DE SODIO (O
HIDRÓXIDO DE POTASIO O CARBONATO DE SODIO)
SOLUCIÓN DE FEHLING
• FUNDAMENTO
EL CITRATO O TARTRATO EVITA LA PRECIPITACIÓN DEL
HIDRÓXIDO CÚPRICO
EL ÁLKALI ENOLIZA A LOS AZÚCARES Y PROVOCA SU
ROMPIMIENTO EN FRAGMENTOS REACTIVOS QUE PUEDEN
OXIDARSE INMEDIATAMENTE: Cu++ (CÚPRICO) ES REDUCIDO
A Cu+ (EL IÓN CUPROSO)
SOLUCIÓN DE FEHLING
• FUNDAMENTO
A MEDIDA QUE LOS IONES Cu++ SE REDUCEN
POR LOS FRAGMENTOS DE AZÚCAR, LOS
IONES Cu+ SE COMBINAN CON LOS IONES
HIDROXILO PARA FORMAR HIDRÓXIDO DE
COBRE (DE COLOR AMARILLO, Cu+).
SOLUCIÓN DE FEHLING
• FUNDAMENTO
EL CuOH REDUCIDO PIERDE H2O EN
PRESENCIA DE CALOR PARA DAR COMO
RESULTADO ÓXIDO CUPROSO INSOLUBLE
(Cu2O)
SOLUCIÓN DE FEHLING
• FUNDAMENTO
LA DETERMINACIÓN DEL COBRE REDUCIDO SE
PUEDE LLEVAR A CABO POR GRAVIMETRÍA,
VOLUMETRÍA, O POR MÉTODOS ELECTROLÍTICOS.
EL PESO DEL Cu2O SÓLO ES APLICABLE A MUESTRAS
RELATIVAMENTE PURAS.
DESVENTAJAS DEL MÉTODO
DE FEHLING
• LA REDUCCIÓN DEL COBRE Y LA OXIDACIÓN DE
LOS AZÚCARES NO ES ESTQUIOMÉTRICA .
• LA PRODUCCIÓN DE ÓXIDO CUPROSO VARÍA,
DEPENDIENDO DEL REACTIVO ÁLKALI, LA
VELOCIDAD Y TIEMPO DE CALENTAMIENTO Y
LA CONCENTRACIÓN DE AZÚCARES EN LA
MUESTRA
DESVENTAJAS DEL MÉTODO
DE FEHLING
• LOS AZÚCARES DIFIEREN EN SU HABILIDAD
PARA REDUCIR LA SOLUCIÓN CÚPRICA, POR
TANTO, LA TITULACIÓN (O PESO O
ABSORBANCIA) DEBEN SER CONVERTIDOS EN
(mg DE COBRE) Y POSTERIORMENTE SE
RECURRIRÁ A TABLAS PARA DETERMINAR LA
CONCENTRACIÓN DE AZÚCAR PRESENTE EN LA
MUESTRA
MÉTODO DE MUNSON WALKER
• FUNDAMENTO
NaOH + Cu++ + AZÚCAR REDUCTOR → CU+ + AZÚCAR
∆ (Cu2O) OXIDADO
LA DETERMINACIÓN DEL Cu2O PUEDE SER GRAVIMÉTRICA, PERO ES
GENERALMENTE MEJOR TITULAR EL ÓXIDO CUPROSO. ESTO SE PUEDE
REALIZAR MEDIANTE UNO DE LOS SIGUIENTES MÉTODOS (SE LLEVAN
MUCHO TIEMPO):
TITULACIÓN DEL PERMANGANATO DE POTASIO
• EL Cu2O REACCIONA CON EL IÓN
FÉRRICO (Cu+++) EL CUAL ES REDUCIDO AL
IÓN FERROSO (Cu++). POSTERIORMENTE
EL IÓN FERROSO ES TITULADO (+2 →+3)
CON PERMANGANATO (+3, ROSA → +2,
INCOLORO)
1) Cu2O + Fe2(SO4)3 → 2FeSO4 + CuSO4 + CuO
TITULACIÓN DEL PERMANGANATO DE POTASIO
2) 10 FeSO4 + 2KMnO4 + 8H2SO4 →
5Fe2(SO4)3 + K2SO4 + 2MnSO4 + 8H2O
TITULACIÓN DEL TIOSULFATO DE SODIO
• SE OXIDA EL Cu+ A Cu++ CON ÁCIDO NÍTRICO.
POSTERIORMENTE SE HIERVE LA MUESTRA
PARA ELIMINAR EL EXCESO DE HNO3
HNO3
Cu2O → Cu(NO3)2
∆
TITULACIÓN DEL TIOSULFATO DE SODIO
• SE AÑADE UNA CANTIDAD CONOCIDA DE
SOLUCIÓN DE KI
2I- + 2Cu++ → 2Cu+ + I2
TITULACIÓN DEL TIOSULFATO DE SODIO
• SE TITULA EL I2 LIBERADO CON UNA
SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE TIOSULFATO DE
SODIO (Na2S2O3)
S2O3-2
I2 + I- → I3- → S4O6-2 + 3 I(TRIIODURO)
SE USA ALMIDÓN COMO INDICADOR: AZÚL → INCOLORO
DESVENTAJAS DEL MÉTODO
• NO SE PUEDE DISTINGUIR ENTRE LOS
DIFERENTES AZÚCARES REDUCTORES.
• SE REQUIEREN MUESTRAS RELATIVAMENTE
GRANDES (100 A 200mg DE GLUCOSA POR
DETERMINACIÓN.
MÉTODO SOMOGY I-NELSON
• AZÚCAR REDUCTOR + Cu++ → Cu+ + AZÚCAR
REDUCTOR
MÉTODO SOMOGY I-NELSON
• PROCEDIMIENTO:
Muestra
(Azúcar reductor +)
Reactivo de Somogyi
Cu+2
Calor
Azúcar Oxidante + CU+ (Cu2O)
CU+1(red)
CU+1(oxi)
AsMo (ox)
AsMo (red) Es de un fuerte color azul
Se leé la absorbancia a 500 nm. Se cuantifica con la curva estándar
Reactivos para el Método de Somogy i y
Nelson para azúcares reductores
• Reactivo de Somogy i
– NaCO3 - Carbonato de sodio
– NaHCO3 – Bicarbonato de Sodio
– KaNaC4H4O6 – Tartrato de Sodio Potasio
– CuSO4·5H2O –Sulfato de Cobre
• Reactivo de Nelson
– (NH4)6Mo7O24 - Molibdato de amonio
– Na2HAsO7·H2O – Arsenato de Sodio
– H2SO4 – Ácido Sulfúrico
MÉTODO FLUORIMÉTRICO
• FUNDAMENTO
ESTE MÉTODO ES POSIBLE CUANDO LOS
COMPUESTOS ABSORBEN RADIACIÓN A
LONGITUD DE ONDA CORTA Y LUEGO EMITEN
RADIACIÓN A UNA LONGITUD DE ONDA MÁS
LARGA.
DETERMINACIÓN DE GLUCOSA POR EL MÉTODO
FLUORIMÉTRICO
• EXTRACCIÓN CON ISO-BUTIL METIL
CETONA.
• REACCIÓN CON HIDRACIDA DE ÁCIDO pHIDROXIBENZOICO
• ADICIÓN DE REACTIVO Y LECTURA A UNA
EMSIÓN DE 470nm
• EXCITACIÓN A 454nm
MÉTODOS ENZIMÁTICOS
• INFORMACIÓN GENERAL
REQUIEREN DE UN EXTRACTO NEUTRO O
ÁCIDO LIBRE DE ALCOHOLES Y METALES
PESADOS (NO SE PUEDEN USAR SALES DE
PLOMO PARA CLARIFICAR LOS EXTRACTOS)
APLICACIÓN DE LOS MÉTODOS
ENZIMÁTICOS
• SON POSIBLES PARA UN GRAN NÚMERO DE
CARBOHIDRATOS O COMPUESTOS
RELACIONADOS:
MONOSACÁRIDOS
DISACÁRIDOS
POLISACÁRIDOS
ALOCHOLES Y POLIOLES
ÁCIDOS
FUNDAMENTO
• GLUCOSA
EXISTEN KITS QUE CONTIENEN LOS SIGUIENTES REACTIVOS
PARA LA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA:
BUFFER,
o – DIANISIDINA · 2HCl (CROMÓGENO REDUCIDO)
CATALASA
GLUCOSA OXIDASA
REACCIONES
GLUCOSA
OXIDASA
H2O + O2 + GLUCOSA → LACTONA DE ÁCIDO DGLUCÓNICO + H2O
CATALASA
H2O2 → H2O + ½ O2
O2 + CROMÓGENO INCOLORO, REDUCIDO →
CROMÓGENO AZÚL OXIDADO
DETERMINACIÓN ENZIMÁTICA DE
SACAROSA/GLUCOSA
• LA CONCENTRACIÓN DE GLUCOSA ES
DETERMINADA ANTES Y DESPUÉS DE LA
HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA
DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA ANTES DE
LA INVERSIÓN
• A UN pH DE 7.6 LA ENZIMA HEXOQUINASA
(HK) CATALIZA LA FOSFORILACIÓN DE GLUCOSA
MEDIANTE EL ADENOSIN TRIFOSFATO. EN
PRESENCIA DE GLUCOSA 6-FOSFATO
DESHIDROGENASA (G6P-DH) LA GLUCOSAFOSFATO PRODUCIDA ES ESPECÍFICAMENTE
OXIDADA POR EL NADP A GLUCONATOFOSFATO CON LA FORMACIÓN DE NADP
REDUCIDO.
REACCIONES
HK
GLUCOSA + ATP → G6P + ADP
G6P-DH
G6P + NADP+ → GLUCONATO-FOSFATO + NADPH + H+
EL NADPH FORMADO EN ESTA REACCIÓN ES
ESTEQUIOMÉTRICO CON LA CANTIDAD DE GLUCOSA
Y SE MIDE MEDIANTE EL AUMJENTO EN
ABOSROBANCIA A 334, 340 Ó 365 nm.
INVERSIÓN ENZIMÁTICA.
• A pH DE 4.6 LA SACAROSA ES HIDROLIZADA POR LA
ENZIMA ß-FRUCTOSIDASA (INVERTASA) A GLUCOSA Y
FRUCTOSA:
ß-FRUCTOSIDASA
SACAROSA + H2O → GLUCOSA + FRUCTOSA
EL CONTENIDO DE GLUCOSA ES CALCULADO DE LA
DIFERENCIA DE CONCENTRACIONES DE GLUCOSA ANTES Y
DESPUÉS DE LA INVERSIÓN ENZIMÁTICA
MÉTODOS FÍSICOS
DENSIMETRÍA
• FUNDAMENTO
LA GRAVEDAD ESPECÍFICA DE UNA SOLUCIÓN DE
AZÚCAR ES UNA FUNCIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE
SOLUTO A UNA TEMPERATURA DEFINIDA. LA
PRESENCIA DE OTROS MATERIALES SOLUBLES AFECTA
LA GRAVEDAD ESPECÍFICA DE LA SOLUCIÓN, PERO ESTE
MÉTODO PROPORCIONA UNA APROXIMACIÓN A LA
CANTIDA DE AZÚCAR PRESENTE EN SOLUCIONES DE
AZÚCAR RELATIVAMENTE PURA
DETERMINACIÓN POR
DENSITOMETRÍA
• EL INSTRUMENTO DE MEDICIÓN ES UN
HIGRÓMETRO (TAMBIÉN UTILIZADO PARA MEDIR
SÓLIDOS SOLUBLES TOTALES).
• SE HA DISEÑADO UN HIGRÓMETRO ESPECIAL PARA
LEER EL % DE AZÚCAR DIRECTAMENTE A 20°C
(GRADOS BRIX).
ÍNDICE DE REFRACCIÓN
FUNDAMENTO
• EL ÍNDICE DE REFRACCIÓN DE UNA SOLUCIÓN DE
AZÚCAR ES UNA MEDIDA DE SU CONCENTRACIÓN.
• LAS SOLUCIONES DE DIFERENTES AZÚCARES DE
IGUAL CONCENTRACIÓN TIENEN
APROXIMADAMENTE EL MISMO ÍNDICE DE
REFRACCIÓN
POLARIMETRÍA
FUNDAMENTO
• SI SE PUEDE HACER QUE TODOS LOS RAYOS
TENGAN ORIENTADOS SUS COMPONENTES
ELÉCTRICOS Y MAGNÉTICOS EN LA MISMA
DIRECCIÓN, LA RADIACIÓN SERÁ POLARIZADA
EN PLANO. ESTO SE PUEDE LOGRAR
MEDIANTE EL USO DE UN FILTRO
POLARIZADOR.
POLARIMETRÍA
FUNDAMENTO
• CUANDO LA LUZ POLARIZADA BRILLA EN UNA
MOLÉCULA ASIMÉTRICA (UN COMPUESTO QUE NO
PUEDE PRODUCIR UNA IMAGEN AL ESPEJO). LA LUZ
ES ROTADA. ESTO ES LLAMADO “COMPUESTO
ÓPTICAMENTE ACTIVO” (e.g. GLUCOSA).
• SI UN COMPUESTO TIENE SIMETRÍA LA LUZ
POLARIZADA NO SERÁ AFECTADA.
POLARIMETRÍA
FUNDAMENTO
• EL SEGUNDO FILTRO ES ROTADO MANUALMENTE
PARA COMPAGINAR VISUALMENTE LAS SOMBRAS DE
UN COLOR. ESTO ROTA AL RAYO DE LUZ POLARIZADA
DE REGRESO A SU POSICIÓN ORIGINAL.
• SE MIDE EL GRADO DE ROTACIÓN REQUERIDO.
MAGNITUD DE LA
ROTACIÓN
DEPENDIENTE DE:
• LA LONGITUD DE ONDA DE LA LUZ
UTILIZADA.
• LONGITUD DE LA CELDA
• NATURALEZA DE LA SUBSTANCIA ACTIVA
Y SU CONCENTRACIÓN
• TEMPERATURA
POLARÍMETROS vs SACARÍMETROS
• POLARÍMETRO: USA LUZ MONOCROMÁTICA Y
LEE EN GRADOS ANGULARES (SE DEBE
RELACIONAR CON LA CONCENTRACIÓN DE
AZÚCAR).
• SACARÍMETRO: USA LUZ BLANCA Y LEE LA
CONCENTRACIÓN DE AZÚCAR DIRECTA.