teco diagnostics

TECO DIAGNOSTICS
GLICOHEMOGLOBINA
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GLICOHEMOGLOBINA:
Para la determinación de Glicohemoglobina en sangre.
INTRODUCCIÓN.
Durante la vida circulatoria de una célula roja, la glicohemoglobina se forma
continuamente por la adición de glucosa a la N- Terminal de la cadena beta de la
hemoglobina. Este proceso no enzimático, refleja la exposición promedio de la
hemoglobina a la glucosa durante un largo periodo. En un estudio clásico,
Trivelli et.al.1 demostró que la Glicohemoglobina en pacientes diabéticos es 2-3
veces mas elevada que la encontrada en individuos normales. Algunos estudios
indican que la glicohemoglobina sirve como indicador del control metabólico del
diabético, ya que los niveles de glicohemoglobina se aproximan a los valores
normales en diabéticos con control metabólico2.3,4
La glicohemoglobina ha sido operacionalmente definida como la “fracción
rápida” de hemoglobinas (HBAla, Alc) la cual migra primero en una
cromatografía de columna de resina con intercambio de cationes. La
hemoglobina no glicosilada, la cual consiste de hemoglobina pura, se ha
designado HbAo. El presente procedimiento emplea una resina de captación
débil para cationes para la separación rápida de glicohemoglobina (fracción
rápida) de la hemoglobina no glicosilada.
PRINCIPIO
Una preparación hemolizada de sangre total se mezcla continuamente por 5
minutos con una resina con captación débil para cationes. En este tiempo, la
HbAo se une a la resina. Después del periodo de mezcla, se usa un filtro para
separar la resina del sobrenadante que contiene la glicohemoglobina. El
porcentaje de glicohemoglobina se determina midiendo la absorbancia a 415 nm
de la fracción de glicohemoglobina y la fracción de hemoglobina total. La
proporción de las dos absorbancias da el porcentaje de glicohemoglobina.
REACTIVOS.
El equipo contiene:
1.- Reactivo de Resina: 8 mg/ml resina de intercambio de cationes, con buffer
pH 6.9
2.- Reactivo Lisante: 10 mM Cianuro de Potasio, surfactante
3.- Estándar de glicohemoglobina: 10% glicohemoglobina.
4.- Separadores de suero.
PREPARACION DEL REACTIVO.
1.- Reactivo lisante de Glicohemoglobina.: Lleve el contenido a temperatura
ambiente.
2. Resina de intercambio de cationes: Lleve los contenidos a temperatura
ambiente. Agite e invierta un mínimo de 10 veces, agite la botella después de
agregar cada 5 tubos.
ALMACEAJE DEL REACTIVO.
La resina y los agentes lisantes deben almacenarse refrigerados (2-8°C). Todos
los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta
INDICIO FISICO O QUIMICO DE INESTABILIDAD.
La alteración de la apariencia física de los reactivos, o valores de suero control
fuera del rango aceptable pueden ser indicadores de la inestabilidad del reactivo.
INSTRUMENTOS.
Utilice un espectrofotómetro a 415 nm
COLECTA Y PREPARACION DE LA MUESTRA.
No es necesaria la preparación especial de la muestra. No se requieren
especímenes de ayuno. No se requieren aditivos o preservativos adicionales.
Colecte la sangre venosa con EDTA usando una técnica aséptica. La
glicohemoglobina en sangre total colectada con EDTA es estable por una
semana de 2-8°C.
INTERFERENCIAS
Las muestras lipémicas pueden dar resultados elevados. La Hemoglobina Fetal
(HbF) tiene características de unión a la resina similares a la glicohemoglobina.
La HbS y la HbC glicosiladas se unen más fuerte que la HbA1 y produce valores
más bajos. Otras hemoglobinopatías (p.e. betatalasemia y anemia hemolítica)
también producen resultados bajos.
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO PROPORCIONADOS
1.- Micro pipetas 20 µL y 100 µL.
2.- Pipetas de 500 µL, 3 ml y 5 ml.
3.- Tubos de vidrio 13 x 100 mm.
4.- Tubos con capacidad para 0.6 y 5 ml.
5.- Rotor.
6.- Controles de Glicohemoglobina. Nivel normal. Nivel elevado.
PROCEDIMIENTO.
A. Preparación del hemolisado:
1.- Dispense 500 µL de reactivo lisante en tubos* etiquetados control, estándar
y muestra, etc.
2.- Agregue 100 µL de muestra sanguínea bien mezclada, estándar o control a
los tubos respectivos. Mezcle.
3.- Repose por 5 minutos.
*Tubos de plástico o de vidrio de la medida adecuada son aceptables.
B. Preparación de la Glicohemoglobina.
1.- Ponga 3.0 ml de resina de intercambio cationico en tubos de 13 x 100 mm
(tubo de vidrio*) etiquetados: control, estándar, muestra etc.
Nota: Mezcle la resina por inversión 10 veces antes de usarse. Mezcle después
de agregar a cada 5 tubos.
2.- Agregue 100 µL de hemolizado (del paso A3)
3. Posicione los filtros separadores en los tubos de manera que el tapón de goma
quede 1 cm sobre el nivel del líquido.
4.- Ponga los tubos en el mezclador por 5 minutos.
5.- Quite los tubos del mezclador.
6.- Empuje el separador de filtro hasta que la resina esté firmemente
comprimida.
7. Vierta el sobrenadante en otro tubo o directamente en la cubeta para su
lectura.
8.- Ajuste el instrumento a cero en 415 nm (390-420 nm) con agua desionizada
como blanco.
9.- Lea y anote la absorbancia de los tubos. Estos son los valores para la
Glicohemoglobina.
*No use tubos plásticos.
C. Fracción de Hemoglobina Total.
1.- Dispense 5.0 ml de agua en tubos* etiquetados: Estándar, Control, Muestra,
etc.
2.- Ponga 20 µL de Hemolisado (del paso A3) en los tubos propiamente
etiquetados. Mezcle.
3.- Ponga el instrumento en ceros a 415 nm con agua desionizada como blanco.
4.- Lea los valores de absorbancia para el estándar, control estándar, etc. Estos
valores son para hemoglobina total.
*Se pueden usar tubos de plástico o de vidrio.
CONTROL DE CALIDAD.
Se recomienda que se incluyan los controles en cada grupo de pruebas. Se
pueden usar controles comerciales con valores normales y elevados para
Glicohemoglobina.
CALCULOS.
Los resultados para la muestra desconocida deberán ser determinados de la
siguiente manera:
% Glicohemoglobina (Desc.) =R (desc.) x Estándar conoc.
R (Est.)
Donde:
R (Desc) = Cociente (desconocido) =Abs Glico (desconocida)
Abs de Hb total (desconocida)
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GLICOHEMOGLOBINA
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Ejemplo:
Un estándar con 8.0% de glicohemoglobina tiene Abs= 0.480 para la
glicohemoglobina y Abs= 0.575 para la hemoglobina total. Una muestra no
conocida tiene una Abs glicohemoglobina =0.962 y una Abs. Glicohemoglobina
total=0.746. La concentración de glicohemoglobina de la muestra no conocida se
calcula como sigue:
REFERENCIAS.
R (desconocido)= 0.962 = 1.29
0.746
R (Estándar) =0.480 = 0.835
0.575
Fabricado por:
% Glico. (Desconocida)= 1.29 x 8.0 = 12.4%
0.835
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO.
Las muestras de pacientes con hemoglobinopatías o tiempos de sobrevivencia
eritrocítica decrecida pueden mostrar resultados incorrectos. Vea la sección
“Colecta del espécimen”.
VALORES ESPERADOS
6.6 – 8.6%.
Este rango representa un intervalo de 95% de intervalo de confianza para 100
pacientes con valores de glucosa normal y sin historial de diabetes. Un estudio
de 31 sujetos diabéticos mostraron valores de glicohemoglobina de 8.4% y
16.0%. Para la población diabética, una comparación de la glucosa en plasma en
ayuno con el nivel de glicohemoglobina dio un coeficiente de correlación igual a
0.84.
CARACTERISTICAS DE DESARROLLO.
Linearidad:
La prueba de glicohemoglobina muestra una linearidad del nivel de
glicohemoglobina en el rango de 4.0% - 20.0%. Las muestras sanguíneas con
una hemoglobina total mayor a 18 g/dL deben diluirse x 2 con agua desionizada
antes de la prueba.
Precisión:
Dentro de pruebas:
La precisión dentro de la prueba fue establecida evaluando sangre con niveles
elevados y normales de glicohemoglobina veinte veces cada una.
Nivel
Media
D.E.
% C.V.
Normal 7.8
0.21
2.7
Elevado 13.4
0.23
1.7
Entre corridas. La precisión entre pruebas fue establecida evaluando la sangre
con niveles de glicohemoglobina normales y elevados para diez pruebas llevadas
a cabo por un periodo de cinco días.
Nivel
Media
D.E.
% C.V.
Normal 7.6
0.31
4.1
Elevado 13.0
0.60
4.6
CORRELACION.
Un estudio comparativo del procedimiento de la Glicohemoglobina Teco y otro
método ampliamente usado comercialmente mostró correlación (r) de 0.96.
SENSIBILIDAD
El procedimiento de glicohemoglobina tiene una sensibilidad de 0.02% de
glicohemoglobina por 0.001 unidades de absorbancia.
Distribuido por:
Grupo Tecnología y Laboratorios S.A de C.V.
T. (81) 8370 7992
www.grupotecnolab.com