ELISA ANTICUERPOS ANTIESPERMA

INSTRUCCIONES DE USO
ELISA ANTICUERPOS ANTIESPERMA
Cat. Nº: BS-10-20
Tamaño: 12 tiras con 8 pozos cada uno. Almacenamiento: 2ºC-8ºC.
Inmunoenzayo enzimático (ELISA) para la determinación de anticuerpos contra los
antigenos de espermatozoides en suero.
-Solo para uso diagnósticoCE Registro E.U Nº: DE/CA80/IVD1696
Certificación de Calidad acorde con:
DIN en ISO 13485
DIN en ISO 9001:2000
Registro Nº: CE 0483-0215, Certificado por mdc.
BIOSERV
DIAGNOSTICS
www.bioserv-diagnostics.com
BS-10-20 ELISA Anticuerpos antiesperma.
USO PREVISTO:
El kit de ELISA Anticuerpos Antiespermatozoide de BIOSERV es un test
cuantitativo para la determinación de anticuerpos dirigidos contra espermatozoides
humanos. Este test es para uso con suero humano.
RELEVANCIA CLINICA:
Los Anticuerpos dirigidos contra los antígenos de los espermatozoides causan
infertilidad en hombres y mujeres. La aplicación de el kit de ELISA Anticuerpos
Antiespermatozoide de BIOSERV es recomendado para el diagnostico de infertilidad
causados por desordenes inmunológicos.
La infertilidad es un problema en crecimiento que confrontan muchas parejas
en edad reproductiva. En alrededor de un 20% de estos casos la presencia de
Anticuerpos anti-espermatozoides en muestras de pacientes son detectados.
La definición de infertilidad acorde con WHO (Manual de laboratorio para la
examinación de semen humano) es la ausencia de concepción dentro de los 12 meses
de sexo sin protección. La mayor causa de desordenes inmunológicos de infertilidad
es la formación de anticuerpos dirigidos contra antigenos de espermatozoides.
Los Anticuerpos Antiespermatozoides interfieren con la capacidad de los
espermatozoides de fertilizar. El efecto inhibitorio de los anticuerpos
antiespermatozoides en la movilidad del espermatozoide debido a la unión a su
superficie y a procesos de aglutinación.
La penetración del espermatozoide en la mucosa cervical es obstaculizada por
la presencia de anticuerpos antiespermatozoide en el líquido seminal y/o en el moco
cervical. Los anticuerpos antiespermatozoide influyen negativamente en la capacidad y
en la reacción acrosomica del espermatozoide y por consiguiente impide la interacción
del espermatozoide con el oocito.
La interacción del espermatozoide con el oocito y la subsecuente unión y la
penetración de la zona pelucida puede ser inhibida por los anticuerpos
antiespermatozoides.
Los anticuerpos antiespermatozoides pueden estar disueltos en el eyaculado o
unidos a la superficie del espermatozoide. Los mismos pueden ser encontrados en
hombres y mujeres. En mujeres pueden ser encontrados en el moco cervical, líquido
del oviducto o folicular. Los hombres que poseen mas del 50% de los espermatozoides
unidos a muestran una reducida fertilidad.
CAMPOS DE APLICACIÓN:
El kit de ELISA Anticuerpos Antiespermatozoide de BIOSERV puede ser
aplicado en la práctica clínica para el diagnóstico de infertilidad causado por
desordenes inmunológicos.
METODOLOGIA DEL ENSAYO:
El kit de ELISA Anticuerpos Antiespermatozoide de BIOSERV es un
Inmunoenzayo en fase sólida para la determinación cuantitativa de anticuerpos
antiespermatozoides en suero humano.
El plato de ELISA es cubierto con proteínas del espermatozoide las cuales son
reconocidas por los anticuerpos antiespermatozoides. Las muestras y los calibradores
son pipeteados en los pozos y luego son incubados. Durante la incubación se produce
un complejo antigeno-anticuerpo, luego del paso de lavado se adiciona el conjugado
(anti-anticuerpo unido con peroxidada de rábano picante) formándose un complejo de
tres partes en el caso que existan anticuerpos antiespermatozoide en la muestra, se
procede a un segundo lavado y luego se añade el sustrato de la enzima TMB
observándose una reacción de color que es detenida por la adición de ácido sulfúrico.
La D.O es medida a una longitud de onda de 450 nm.
1.
2. Contenedor para tiras sueltas.
1x
MATERIALES REQUERIDOS PERO NO INCLUIDOS
1.
2.
3.
4.
5.
Lector de microplaca con filtro de 450 nm.
Pipetas con capacidad de: 5 ul, 50ul y 500 ul.
Tubos para dilución de las muestras.
Agua destilada
Papel absorbente.
PRECAUCIONES:
1. Este Kit es para uso in vitro únicamente.
2. Evite contacto directo con la solución de parada, puede producir irritación y
quemaduras.
3. No pipetee reactivos con la boca.
4. Considere las muestras como potencialmente infecciosas y trátelas con
extremo cuidado.
5. La manipulación del ensayo debe hacerse en concordancia con los
procedimientos definidos por el manual de seguridad nacional.
INSTRUCCIONES PARA LA PREPARACION DE LOS REACTIVOS:
1. Los componentes del Kit no deben ser intercambiados con componentes de
otros Kits.
2. Todos los reactivos y muestras deben mantenerse a temperatura ambiente
antes de su uso.
3. Todos los reactivos deben mezclarse sin producir espuma.
4. Una vez que el procedimiento ha sido comenzado todos los pasos deben
ejecutarse sin interrupción.
5. Pipetee todos los reactivos y muestras al final del pozo.
6. Use una punta diferente para cada muestra.
7. Antes de comenzar el ensayo, todos los reactivos deben ser preparados y listo
para su uso.
8. Para óptimos resultados es importante lavar los pozos detenidamente luego de
la incubación
9. Se recomienda procesar las muestras por duplicado para minimizar las
consecuencias de la manipulación.
ALMACEN Y ESTABILIDAD
1. Guarde el equipo a 2-8°C.
2. El equipo permanece estable hasta la fecha de expiración.
3. La solución de lavado es estable por 4 semanas a temperatura de refrigerador
2. Las tiras no usadas deben guardarse inmediatamente en la bolsa con su desecante,
sellarlas muy bien y colocarlas a 2-8 °C. Después de que la bolsa ha sido abierta las
tiras son estables al menos hasta por 4 semanas.
MUESTRA:
Suero.
PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO:
1. Por lo menos 1 hora antes del uso, mantenga todos los componentes del equipo a
temperatura ambiente y mezcle los reactivos líquidos cuidadosamente en el vórtex.
2. Prepare la Solución de lavado (10x). Diluya la Solución concentrada (50 ml)
añadiendo 450 ml de agua destilada.
3. Diluya las muestras 1:100 con el diluyente de muestra. 5 ul de suero + 195 ul de
buffer de dilución.
4. Dispense 50ul de cada calibrador en el respectivo pozo.
5. Dispense 50 ul de suero diluido en el pozo respectivo.
6. Incube 60 min a 37 ºC.
7. Lave el microplato 3 veces con 200 ul de solución de lavado.
8. Se sugiere eliminar el exceso de solución de lavado de los pozos volteando la placa
sobre un papel absorbente.
9. Agregue 50 µl del conjugado a todos los pozos. Incube el microplato sellado por 60
min a 37°C.
10. Lave el microplato 5 veces con 200 ul de solución de lavado.
11. Se sugiere eliminar el exceso de solución de lavado de los pozos volteando la
placa sobre un papel absorbente.
12. Dispense 50 ul del sustrato inmediatamente luego de lavar cada pozo.
13. Incube por 30 minutos a temperatura ambiente.
14. Detenga la reacción enzimática añadiendo 50 ul de solución de parada en cada
pozo.
15. Mida la D.O de las muestras a 450 nm.
CALCULO DE LOS RESULTADOS:
1. Calcule la absorbancia promedio para cada set de calibradores, controles y
muestras de pacientes.
2. La D.O de cada calibrador es dibujado en el eje de las y el correspondiente valor
del calibrador en el eje de las x. La curva de calibración resultante es usada para
determinar los valores de las muestras de pacientes por interpolación.
3. Usando la absorbancia de cada muestra determine la concentración de anticuerpo
anti-espermatozoide en la muestra en U/ml.
LIMITACIONES DEL ENSAYO
1. Muestras muy bemolizadas o lipémicas no deben ser utilizadas. Pacientes con
ciertas patologías como: gammapatías monoclonales y policlonales, enfermedades
autoinmunes, entre otras.
VALORES ESPERADOS:
Valores Normales: 0-60 U/ml
Valores elevados: sobre 60 U/ml
Nota: En el caso de valores cercanos al valor cut-off (55 a 65 U/ml) recomendamos
una nueva determinación usando una nueva muestra tomada dentro de las dos
semanas siguientes.