Coloración PAPANICOLAOU - Especialidades Diagnósticas IHR Ltda

Coloración PAPANICOLAOU - Especialidades Diagnósticas IHR Ltda

Coloración PAPANICOLAOU

Juego de soluciones para la coloración de citologías por el método de Papanicolaou
PRINCIPIO
La tinción de Papanicolaou es el método de tinción más utilizado para
material citológico. En el primer paso se tiñen los núcleos con una
solución de hematoxilina. Los núcleos aparecen azules a violeta. El
segundo paso es la tinción del citoplasma con una solución anaranjada,
que presenta especialmente las células maduras y queratinizadas. Las
estructuras diana se tiñen de anaranjado con diferentes intensidades. En
el tercer paso de tinción se usa la llamada solución polícroma, que es una
mezcla de eosina, verde luz SF y pardo de Bismarck. Con la solución
polícroma se muestra la diferenciación del epitelio escamoso simple.
MUESTRAS
Muestras ginecológicas, cada muestra (fondo, cervix y endocervix) se
extiende muy suavemente para evitar destrucción de estructuras. Los
extendidos no deben ser grumosos y deben cubrir, por lo menos, 1/3 parte
de la placa cada uno.
Se deben usar láminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para
quitar la grasa.
Toda muestra biológica
potencialmente infecciosa.
debe
se
considerada
como
CONTENIDOS
PAPANICOLAOU HEMATOXILINA –Listo para su uso
Hematoxilina Certificada
Potasio y Alumino Sulfato 12-H R.A.
Mercurio II Oxido R.A.
Acido Acetico R.A.
Alcohol al 96%
Agua desmineralizada Tipo II
5g/l
100 g/l
2.5g/l
12 ml
50 ml
csp
PROCEDIMIENTO
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PAPANICOLAOU NARANJA G –Listo para su uso
Anaranjado G Certificado
Acido Fosfotungstico al 0.015% Sol Alcoholica
5g/l
0.15g/l
PAPANICOLAOU SOLUCION EA-50 –Listo para su uso
Eosina Y certificada al 0.5%
Bismark Bronw certificado al 0.5%
Verde FCF amarillento cerfificado al 0.5%
Acido fosfotungstico al 0.2% Sol alcoholica
450 ml
100 ml
450 ml
100 ml
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
•
Las soluciones deben almacenarse entre 15°C y 30°C y protegidos
de la luz. Después de abierto el contenido almacenado entre 15°C y
30°C y protegidos de la luz es estable hasta la fec ha de caducidad
indicada en la etiqueta.
•
La presencia de un ligero precipitado en los colorantes de
Hematoxilina y Naranja G, debido a los cambios de temperatura, no
altera su capacidad de tinción. Filtrar en caso necesario
•
Temperaturas inferiores a 15°C pueden precipitar c olorantes de las
soluciones colorantes.
•
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.
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10 pases (ni lentos ni rápidos) en el alcohol de 80 %.
10 pases en alcohol al 70 %.
10 pases en alcohol al 50 %.
10 pases en agua destilada.
Hematixilina de Harris por 3 minutos (tiempo variable).
Pases en agua destilada (hasta quitar el exceso de colorante).
6 pases en Hcl al 0.5 %.
Agua corriente por cinco min. (chorro lento).
10 pases en agua destilada.
10 pases en alcohol al 50 %.
10 pases en alcohol al 70 %.
10 pases en alcohol al 80 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
Colocar en Naranja G por 1 ½ minutos (tiempo variable).
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
Colorear en EA-50 por 3 min. (tiempo variable).
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases en alcohol al 96 %.
10 pases muy lentos en Isopropanol (dejar un rato para que se
deshidraten y después secar bien.
10 pases muy lentos y dejando un buen rato para que se
deshidraten bien, en la mezcla de Isopropanol-Xilol. (secar
bien gradilla)
Montar las laminas.
RESULTADO
Los núcleos se tiñen en azul a violeta, mientras que el citoplasma muestra
varios tonos de azul, naranja, rosa o rojo asi:
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
•
Observe la simbología en los rótulos de las soluciones.
•
Los colorantes EA, que contienen metanol, y el colorante OG 6, que
contiene etanol, son tóxicos por ingestión e inflamables. Manipular
con precaución.
•
Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como
desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para
el desecho de compuestos peligrosos.
Citoplasma Basofilo
Citoplasma Acidofilo
Citoplasma
Queratinizado
Eritrócitos
Núcleos
Verde azulado
Rosa
Rosa a Naranja
Rojo
Azul a violeta
MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS
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Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cubetas de tinción
Agua
Cronometro y/o timer
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CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad en la microscopia de extendidos sanguíneos
depende directamente de la formación y experiencia del profesional que
validara la calidad de los extendidos, coloración, etc.…
Alcohol al 96%
Alcohol al 80%
Alcohol al 70%
Alcohol al 50%
HCl al 5%
Isopropanol
Xilol
NOTAS SOBRE EL EMPLEO
• El microscopio usado debe cumplir los requisitos de un laboratorio de
diagnóstico médico.
• La técnica descrita anteriormente puede modificarse de acuerdo con
las preferencias del operador para lograr mayor o menor intensidad de
coloración, lo cual implica variaciones en los tiempos de tinción,
decoloración, lavado,...
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Coloración PAPANICOLAOU
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Juego de soluciones para la coloración de citologías por el método de Papanicolaou
Si las muestras pasan de 3 días de tomadas, antes de colorearlas
deben hidratarse sumergiéndose en agua destilada entre 8 y 15
minutos.
Nunca debe realizarse citologías vaginales durante el periodo
menstrual.
Los alcoholes del paso 18 al 20 del proceso de la coloración. Deben
cambiarse muy frecuentemente. Siendo lo ideal cada vez que se
coloree.
Una buena coloración, además de contar con un buen colorante,
depende del extendido. Este no debe ser muy grueso y se debe evitar
la formación de grumos o estrías.
El espesor de cada extendido implica a cada laboratorio en particular
a establecer los tiempos ideales de coloración.
Usar placas preferiblemente nuevas, desprovistas de ralladuras y
grasa.
Las soluciones de tinción empleadas para la tinción de Papanicolaou
están listas para el uso, la dilución de las soluciones no es necesaria,
disminuye la calidad de la tinción y la estabilidad.
Si se utiliza un aparato automático de tinción, deben tenerse en
cuenta las instrucciones de empleo del fabricante del aparato y del
software.
Eliminar el aceite de inmersión en exceso antes de archivar.
BIBLIOGRAFÍA
1. Street CM: Papanicolaou Techniques in Exfoliative Cytology. IN Laboratory
Technique in Biology and Medicine, 3rd ed. EV Cowdry Editor, Williams & Wilkins,
Baltimore, 1952, p 253
2. Johnson PL, Klein MN: Application of Papanicolaou stain to paraffin sections. Stain
Technol 31:223, 1956
3. Liu W: A simplified cytologic staining technic. Am J Clin Pathol 54:767, 1970
4. A Manual for Cytotechnology, C Keebler, J Reagen, Editors, American Society of
Clinical Pathologists Press, Chicago (IL), 1983, p 323
Índice de Símbolos
Producto para
diagnóstico
in-vitro
Referencia o
Código
Pruebas
por Kit
Para usar
consulte las
instrucciones
Precaución
Consultar las
instrucciones
Fabricante
Número de Lote
Fecha de
Caducidad
Fecha de
Fabricación
Limite de
Temperatura
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