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CIENCIA VETERINARIA VOLUMEN 10 - NÚMERO 1 - 2008 GENERAL PICO - LA PAMPA, REPÚBLICA ARGENTINA ISSN: 1515-1883 Revista de Publicaciones Científicas de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de La Pampa. Calle 5 y 116 (6360) General Pico - La Pampa - República Argentina. TEL/FAX 02302-421607/422617/421920 On line: www.vet.unlpam.edu.ar Director Dr. Guillermo Esteban Meglia Comité Editorial Dr. Guillermo Héctor Pechin1 Dr. Nicolás Álvarez Rubianes1 Dr. Ricardo Enrique Toso1 1 Facultad de Ciencias Veterinarias – UNLPam Evaluadores Externos Dr. Ricardo Bosch Dr. Roberto Brevedan Dr. Marcelo Sagardoy Dr. Alberto Dick Dr. Néstor Caffini Los expertos son designados por el Comité Editorial en función del tema de los trabajos recibidos. Edición y Diagramación Secretaría de Ciencia,Técnica y Posgrado Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de La Pampa Informes Dirección de Prensa y Difusión Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de La Pampa Calle 5 y 116 (6360) General Pico - La Pampa – República Argentina TEL/FAX 02302-421607/422617/421920 int. 6105 E-mail [email protected] Los artículos de la revista no pueden ser reproducidos total o parcialmente sin la autorización expresa del Comité Editorial. La Dirección no se responsabiliza por los conceptos vertidos en los artículos publicados, los que tienen sus respectivos autores responsables. Armado e Impresión Editora L&M S.R.L. - Martínez de Hoz Nº 454 - Tel. (02952) 432806 - General Acha – La Pampa 1 2 FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Universidad Nacional de La Pampa AUTORIDADES Rector Lic. Sergio Daniel Maluendres Decano Dr. Hugo Roberto Álvarez Vicedecano Dr. José María Romero Secretario Académico Dr. Nicolás Álvarez Rubianes Secretario Administrativo Lic. Laura Biasotti Secretario de Ciencia, Técnica y Posgrado Dr. Jorge Roberto Dubarry Secretario de Extensión Dr. Horacio Arrizabalaga Secretario de Relaciones Interinstitucionales Dr. Juan Enrique Romero Secretario de Cultura Dra.Virginia Dora Maisterrena 3 4 ÍNDICE INFORMACIÓN INSTITUCIONAL La Facultad de Ciencias Veterinarias de la UNLPam acreditó exitosamente su carrera de Medicina Veterinaria 7 EDITORIAL ¿Enfermedades Zoonóticas emergentes o nuevas respuestas como consecuencia del avance científico? 8 TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN Survey of sheep antibodies of smooth and rough strains of brucella in the North Patagonic area of La Pampa Meglia, G. E.; Gastaldo, M. F.; Gomez, B.; Dubarry, J.; Oriani, S.; Alvarez Rubianes N. 9 Progesterona, estrógenos y expresión de integrinas en la gestación temprana porcina Williamson, D. M.; Yaful, G. N.; Riesco, O. F.; Koncurat, M. A. 13 Determinación de constantes fisicoquímicas de humor vítreo de equinos Noia, M. A.; Coll Cárdenas, F.; Olivera, D.; Marengo, L.; de la Sota, P.; Cura, S.; Anconetani, M. M.; González, G. 24 Epidemiología y parasitismo gastrointestinal en equinos del departamento Maracó, provincia de La Pampa, República Argentina Lamberti, R.; Gino, L.; Calvo, C.; Bertorello Mascaro, G.; Benito, A. 32 Diagnóstico de Clamidiosis en aves de la ciudad de General Pico, La Pampa,Argentina Baruta, D. A.; Ardoino, S. M.; Lacolla, D. V.; García, M. G.; Mariani, E. L.; Riesco, S. R.; Sosa, R. E. 37 PREMIOS Y DISTINCIONES Premio Profesor Dr. Osvaldo Eckell, Academia Nacional de Agronomía y Veterinaria a la Médico Veterinario Marta Monina 42 Instrucciones a los autores 52 5 6 LA FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS DE LA UNLPAM MEDICINA VETERINARIA ACREDITÓ EXITOSAMENTE SU CARRERA DE Nuestra Facultad ha superado exitosamente el proceso de acreditación por parte de la Comisión Nacional de Evaluación y Acreditación Universitaria (CONEAU). Esto avala, a nivel nacional, la calidad de la carrera y la importancia de la Facultad. Es un logro originado en el trabajo mancomunado y sistemático de más de treinta años de toda la comunidad de la Facultad y de la sociedad pampeana que la acepta y la contiene, impulsado por el accionar de las autoridades y del Consejo Directivo quienes han priorizado, en sus decisiones, la ca-lidad de la enseñanza de grado mediante políticas institucionales basadas en la actualización de nuestro cuerpo docente y del personal de apoyo, la generación de nuevos espacios físicos (aulas, laboratorios, hospitales escuela, biblioteca informática, campos) y la provisión de elementos didácticos de apoyo a la docencia que aseguran el constante desarrollo Institucional y la calidad académica con que se imparte nuestra Carrera. Si bien, desde siempre, la Facultad buscó mejorar la calidad de la enseñanza, tomando como meta el perfil del egresado demandado por la sociedad, desde el mes de diciembre de 2002, comenzaron a realizarse acciones orientadas por los estándares para la Acreditación de la Carrera de MedicinaVeterinaria, que fueron elaborados por el Consejo de Decanos de Veterinaria (CONADEV) tomando indicadores para de acreditación elaborados por el MERCOSUR y consensuándolos con las asociaciones profesionales. Los estándares del MERCOSUR se elaboraron en el segundo quinquenio de la década del noventa y sus indicadores fueron de un nivel elevado. Se adoptaron éstos para que las Facultades de Ciencias Veterinarias de nuestro país, luego de acreditar exitosamente en el ámbito nacional, puedan presentarse sin inconveniente para la acreditación en una de las regiones más amplias del planeta para los campos de las Ciencias Veterinarias. Como consecuencia, la comunidad de la Facultad, antes de la convocatoria nacional para presentarse a la acreditación comenzó a realizar autoevaluaciones parciales para detectar las debilidades más evidentes y, a partir de ellas, elaborar programas de mejoras viables en infraestructura, equipamiento, bioseguridad y personal de apoyo para la gestión, enseñanza, investigación, extensión y transferencias de tecnologías. Esta anticipación a los hechos resalta una de las grandes fortalezas que posee la comunidad de la Facultad, su capacidad de planificación, instrumento que ha resultado relevante para confeccionar una excelente autoevaluación y su consecuente plan de mejoras para superar exitosamente el control de calidad de los títulos que hemos emitido y emitiremos; esto redundará en un mayor reconocimiento y prestigio de nuestros egresados. De esta manera se retorna a la sociedad, un profesional que cumple adecuadamente con los insignes roles que nuestra profesión nos tiene asignados: producción de alimentos de origen animal y control de su inocuidad y calidad; producción de fibras de origen animal; control de las enfermedades que se transmiten de los animales al hombre (zoonosis); atención al bienestar de los animales de compañía, de estima, deportivos, recreativos, de trabajo y los utilizados con fines terapéuticos: todos estos roles necesariamente encuadrados en el nuevo paradigma de las Ciencias Ve- terinarias que comprende tres factores: Ética profesional Bienestar animal Cuidado del ambiente. Hacemos llegar por este medio nuestro sincero agradecimiento a cada uno de los miembros de la comunidad Universitaria y de la sociedad pampeana, sin cuyo compromiso, comprensión y apoyo, este logro hubiese sido inviable. 7 ¿ENFERMEDADES ZOONÓTICAS EMERGENTES O NUEVAS RESPUESTAS COMO CONSECUENCIA DEL AVANCE CIENTÍFICO? En la actualidad 57 millones de personas mueren anualmente en el mundo de las cuales el 26%, es decir, 15 millones, son atribuibles a causas infecciosas. Numerosos informes científicos en todo el mundo dan cuenta de la emergencia o re emergencia de enfermedades, de las cuales un porcentaje importante son zoonosis. Previo al desarrollo de las causas probables que originan la aparición o re aparición de las enfermedades zoonóticas, es importante definir la terminología de emergente, como de reciente reconocimiento o infecciones que han sido identificadas y taxonómicamente clasificadas recientemente; o re emergente, como previamente reconocida, las cuales han sido incluidas en la terminología de las ciencias médicas. No obstante, si nos retrotraemos en la historia, las nuevas enfermedades fueron muchas veces denominadas como “introducción”, “aparición”, “en progreso”, etc. Las enfermedades zoonóticas son particularmente trascendentes en el contexto de las enfermedades emergentes en el hombre, ya que la mayoría de las mismas son de origen animal.Aproximadamente 1415 microorganismos infecciosos son patógenos para el hombre incluyendo 217 virus y priones, y 538 bacterias y rickettsias. Por nombrar un ejemplo, se estima que el número total de virus en la naturaleza ronda los 130.000, de los cuales solo el 4% han sido identificados, además es importante remarcar que la mayoría de los agentes infecciosos tanto para los humanos como para los animales domésticos provienen de la vida silvestre. A la fecha se menciona como posibles causas de la elevada frecuencia de enfermedades emergentes, la intensa actividad humana y su influencia sobre el medio ambiente, la apertura de ecosistemas cerrados, la propagación de extensas áreas con monocultivos, los cambios genéticos inherentes a los mi8 croorganismos, en especial la extrema variabilidad de los virus ARN que conducen a la aparición de nuevas variantes, permitiéndoles en muchos casos superar la barrera de las especies. Por el contrario, la variabilidad genética bacteriana es más paulatina y su re emergencia esta mas condicionada a las variaciones inherentes del sistema inmunitario del huésped, tal es el caso de la re emergencia mundial de tuberculosis en los pacientes inmuno comprometidos a causa del virus del SIDA. En contraposición a la extrema variabilidad viral y la oportunidad que ello genera para su supervivencia, el accionar humano en producción animal, se desplaza en dirección opuesta. Como ejemplo, si se toma en cuenta las aproximadas 700 razas de ganado bovino existentes en el mundo, muchas de ellas están en riesgo de extinción, solo algunas han sido mejoradas por sus méritos productivos, pero esta erosión en la variabilidad genética es un punto de preocupación ya que las transformaría más vulnerables a los cambios adaptativos frente a circunstancias externas que pudieran ocurrir o a la aparición de nuevos virus o variantes de las ya existentes. También es cierto que en la actualidad hay una nueva mirada hacia la preservación de razas tradicionales con una heterocigosis marcada, para usarlas como material genético de reserva hacia el cual se pueda acudir en caso de qué circunstancias pongan en peligro la sobrevivencia de razas de alto valor productivo, pero también con alto grado de homocigosis lo que tiene una desventaja, la exigua capacidad adaptativa frente a circunstancias que pongan en riesgo de vida y por ende su extinción. SURVEY OF SHEEP ANTIBODIES OF SMOOTH AND ROUGH STRAINS OF BRUCELLA IN THE NORTH PATAGONIC AREA OF LA PAMPA Guillermo E Meglia1, Marcelo F Gastaldo1, Bettina Gomez2, Jorge Dubarry2, Susana Oriani1, Nicolas Alvarez Rubianes1 1Department of Epizootiology and Public Health, 2Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, National University of La Pampa, Calle 5 y 116, 6360 General Pico, La Pampa,Argentina. [email protected] Abstract Brucellosis is an infectious disease that affects domestic animals, producing heavily losses through abortions, and infertility in rams.The flock epidemiology situation in the north Patagonic area of Argentina (La Pampa) to the present disease is unknown; consequently the objective was to determine the prevalence of the disease. Out of 10.000 sheep, there were sampled 1.800 animals according to the application of the minimum sample size for estimating a rate with specified degree of precision in the Departments of Mara-co, Chapaleufu, Realico, Rancul, Conhelo and Quemu-Quemu representing an area of 22.072 km2, in the frame of reintroduction of sheep production in the province. Independently of the number of sheep per farm, 2030% of the flock was sampled, that represent 15% (270) rams and 85% (1.530) ewes. After collecting serum from jugular blood, the samples were analysed either for the presence of antibodies against smooth strain through Buffer Plate Agglutination Test (BPA); or antibodies against rough strain of brucella through Agar Gel Immuno-diffusion Test (AGID). Bewilderment of all the animals was negative to both tests. Despite brucellosis is a high prevalent infectious di-sease in other part of the country, these results emphasise the condition of free areas of the disease. Key words: ovine, brucellosis, La Pampa Introduction Brucelosis is an infectious disease of high economic impact affecting several animal species, particularly those of economic interest such as bovine and ovine (Samartino, 2002). The World Organisation for Animal Health (OIE) considers the disease as a treat of public health, and a boundary for international trade of animals (OIE, 2004). Brucelosis is caused by a GRAM (-) bacteria, classified by antigenic differences and host specificity in: Brucella ovis (ovine), Brucella canis (canines), Brucella suis (porcine), Brucella abortus (bovines) and Brucella melitensis (ovine and caprine). In humans the infections are basically produced by Brucella abortus or melitensis which show that host specificity is not strict (Young, 1995;Wallach et al., 1998, World Health Organization, 2008). In Argentina the disease is high prevalent in bovines, around 4-5% (Samartino, 2002), but there is not precise data that document the epidemiology situation of the disease in ovine. Brucella melitensis, and ovis in less proportion, are the more common subtypes found in sheep-rearing countries (Garin-Bastuji et al., 1998; Minas et al., 2004). Local data from Patagonia and Buenos Aires province, show the presence of Brucella ovis infection, represented by infertility in rams and abortus in sheep (Alton et al., 1988; Robles et al., 1998; Lopez et al., 2005). It is well known the laborious situation to control and eradicate brucelosis from beef cattle, despite the execution of actions such as compulsory vaccination from 3 to 8 months female calf, and segregation of adult positive animals. Those actions, certainly effective, are taken without any concern about the bacteriological situation of the ovine flock (potential host of Brucella abortus subtype), that usually share paddocks with cattle. Consequently, it is highly relevant to generate basic information about the current bacteriological situation of La Pampa ovine flock. In the frame of the national ovine law, where the sheep industry is recovering through precise actions taken by the 9 local and national governments, it is important to originate information to favour the productive process and to generate knowledge of the epidemiology status of the disease.Therefore, the main objective of the project was to determine the prevalence of the disease in the ovine flock in the north of La Pampa province. 300 farms at the Departments of Mara-co, Chapaleufu, Realico, Rancul, Conhelo and Quemu-Quemu, representing an area of 22.072 km2, at the north of La Pampa province. Independently of the farm flock size, 20-30% of animals were sampled, and the total number to be sampled for the project (n) was estimated by the equation suggested by Smith (1995) with specified degree of freedom.As it Methods was not known the historic record of prevalence of ovine brucelosis in the province, we Animals and size of the sample Adult Merino and Corriedale sheep (ewes and suggested a 5% prevalence, taken as reference rams), belonging to flocks registered in La the province bovine information of the disPampa Ovine Plan, were blood sampled during ease, so that, and applying the equation sited a period of six months. At the initial time of by Smith, the number of animals to be samthe project, 10.000 sheep were distributed in pled was 1.800. Ninf = P (1-P) Z2 d2 P = the estimated prevalence of infection (as a decimal) Z = corresponds to the degree of confidence in our estimate (usually Z = 1.96 for 95% confidence in our estimate) d = the maximun difference between observed and true prevalence that we are willing to accept (as a decimal) dies against the rough strain of Brucella ovis. The gel was prepared dissolving 1,2 g of noble agar, 8.5 g of NaCl and merthiolate 1:10.000 in 100 ml of distilled water pH 8,2, in a boiling water bath. A plaque was covered with approximately 15 ml of melted gel, and then it was solidified, a hole was cut using a gel puncher.The hole was 3 mm in diameter and 3 mm apart, organised in a hexagonal pattern around a central hole, also 3 mm in diameter. Antibodies detection All serum samples were analysed for the pres- Control and test sera were placed in wells ence of antibodies against the smooth strain of with the antigen in the central well.The result Brucella spp. through the Buffer Plate Aggluti- was read after the incubation at room temnation Test (BPA) (potential positives to Bru- perature during 48 hours in a humid chamber cella melitensis and abortus). Eighty µl of (Lopez et al., 2005). The antigen, precipitates serum and 30 µl of antigen (B.P.A. with positive sera of rough strain of Brucella, Agropharma,Argentina) were mixed in a 3 x 3 was supplied by SENASA (National Animal cm2 glass plaque during 8 minutes and any sign Health Service) Argentina, which also provides of agglutination was considered positive there- the control standard serum. after Angus and Burton, 1984; Alton et al., Five percent of the AGID negative samples were sent to a referent laboratory (Laborato1988). Agar gel inmunodifusion test (AGID) was used rio Central, INTA Castelar, Buenos Aires, Arto determine the presence of serum antibo- gentina) to be analysed for Complement Blood samples Glass tubes without additives were used for sampling of serum, which were analysed for presence of antibodies against both smooth and rough strains of Brucella.The tubes were centrifuged at 2000 g for 15 minutes to obtain serum, which were frozen at -20 ºC until analyses. 10 fixation and ELISA in order to corroborate the AGID results. of samples (5%), we compared AGID with Complement Fixation and ELISA test (data not showed).All the negative samples to AGID were also negative to Complement Fixation, Results and just 7% were positive to ELISA with the Out of 1.800 sampled, 270 represented rams optic density value at the limit of the cut point, (15%) and 1.530 ewes (85%).All 1.800 serum suggested as a false positive reaction. sampled were negative to the presence of antibodies at both tests, BPA and AGID. Fifty percent of the rams (135) were clinically palpated, Conclusions to detect genital abnormality at the time of Despite the high increased in the number of blood sampling, but none of them were diag- sheep in the north patagonic area of La Pampa, nosed with any lesion. Despite it is an unspe- the activity of brucelosis in the flock was nil. cific diagnosis, in the present trial correlates The epidemiology situation of the disease is positively with the antibodies tests. relevant, and at the same time caution must be taken by the animal health authorities and farmers in order to avoid the introduction of Discussion the disease in the defined area. In many areas of Argentina, and in contrast to other sheep-rearing countries such as Spain or Italy, the predominant strain of infection is Acknowledgements Brucella ovis (Robles et al., 1998; Lopez et al., The authors thank the farmers exceptional 2005), which has many advantages in control predisposition, the national and departmental and eradication programmes to Brucella animal health commissions, the Mara-co Founmelitensis infections. The ovis strain of Bru- dation for Animal Health (FUMASA) and the cella lacks the lipopolissacaride responsible for Agricultural Federation of Argentina (FAA) the exacerbated virulence, and it has high host district 8, General Pico, La Pampa. specificity restricted to the ovine population, relevant characteristics that make this bacterium feasible to control and eradicate (Marin et al., 1989). The north-patagonic flock, with especial reference to La Pampa, has developed considerable during the last five years. The farmers, taking the governmental benefit, bought sheep without considering the health status as a priority, nevertheless and bewilderment of the results, the presence of the disease in the defined area is nil. Different laboratories suggest the AGID test as a subjective assay, and are replaced by more sensitive and objective test such as enzime linked inmunoabsorband assay (ELISA). On the other hand, the World Organization for Animal Health ensures that the sensitibity of the AGID is similar to the ELISA test, and because of the low cost and simplicity it is still the recommended technique for Brucella ovis diagnose (Young, 1995). With a reduced number 11 References Alton, G.G., Jones, L.M., Angus, R.D., Verger, J.M. 1988. Serological methods.Techniques for the Brucellosis laboratory. Institut National de la Recherche Agronomique. Paris, France. Angus, R.D., Burton, C.E. 1984. The production and evaluation of a buffered plate antigen for use in a presumptive test for brucellosis. Development Biological Standardisation, 56: 349-356. Garin-Brastuji, B., Blasco, J.M., Gayon, M., Verger, J.M. 1998. Brucella melitensis in sheep: present and future.Veterinary Research, 29: 255-274. López, G., Ayala, S.M., Escobar, G.I., Lucero, N.E., 2005. Use of Brucella canis antigen for detection of ovine serum antibodies against Brucella ovis.Veterinary Microbiology, 105: 181-187. Marin, C., Jimenez de Bagues, M., Blanco, J., Gamazo, C., Moriyon, I., Díaz, R., 1989. Comparison of three serological tests for Brucella ovis infection of rams using different antigenic extracts. Veterinary Record, 125: 504508. Minas, A., Minas, M., Stournara, A., Tselepidis, S., 2004. The "effect" of Rev-1 vacci- 12 nation of sheep and goats on human brucellosis in Greece. PreventiveVeterinary Medicine, 64: 41-47. Office International des Epizooties. 2004. In: International animal health code, 2.3.1. Acceded March 14. Robles, C.A., Uzal, F.A., Olaechea, F.V., Low, C., 1998. Epidemiological observations in corriedale flock affected by Brucella ovis. Veterinary Research Communication, 22: 435-443. Samartino, L.E., 2002. Brucellosis in Argentina. Veterinary Microbiology, 90: 71-80. Smith, R.D., 1995. Statistical significance, In: Veterinary Clinical Epidemiology. A problem – oriented approach. 2nd Edition. Library of Congress, USA. pp. 145-159. Wallach. J., Samartino, L., Efron, A., Baldi, P., 1998. Human infection by Brucella melitensis: an outbreak attributed to contact with infected goat. FEMS Imm Med Microb. (19) 315321. World Health Organisation 2008. In:Terrestrial Manual. Bovine Brucellosis. Chapter 2.4.3 Young, E.J., 1995. An overview of human brucellosis. Clinical Infectious Diseases, 5: 283-290. PROGESTERONA, ESTRÓGENOS Y EXPRESIÓN DE INTEGRINAS EN LA GESTACIÓN TEMPRANA PORCINA Williamson, D M1,3;Yaful, G N2; Riesco, O F1 y Koncurat, M A1 1Cátedra Biología General, Departamento de Ciencias Básicas, 2Cátedra Obstetricia y Fisiopatología de la Reproducción, Departamento de Producción Animal, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Pampa. Calle 5 y 116- (6360) General Pico, La Pampa. 3Becaria CONICET. [email protected] Resumen La placenta porcina es epiteliocorial, adecidua, plegada, no invasiva y difusa. Por su ubicación de barrera entre la madre y los embriones es el blanco natural del sistema endócrino y de la expresión de las moléculas de adhesión y sus ligandos tales como las integrinas. El objetivo de éste estudio fue correlacionar la expresión placentaria de las integrinas αvβ3, β1, α3 y β3 con las concentraciones de progesterona y estrógenos presentes en suero y extractos placentarios durante la preñez temprana porcina. Se utilizaron 25 cerdas mestizas que se agruparon en tres períodos: 5 días, pre- implantación; 15-20 días, “ventana de implantación”; 23-49 días post-implantación y 6 cerdas no preñadas. La presencia de integrinas se determinó por inmunoperoxidasa directa e indirecta. La determinación de progesterona (P4) y estrógenos (E2) se realizó por Inmunoensayo Enzimático Quimioluminiscente en fase sólida. La expresión de todas las integrinas estudiadas fue mayor en el período de post-implantación (23-49 días de gestación), seguido por el período de peri-implantación (5 días de gestación). Las concentraciones de P4 sérica (ng/ml) en cerdas vacías fueron inferiores a las de las cerdas gestantes (12.53±7.53 vs. 43.77±6.92, P<0.01). Las concentraciones de P4 en extractos placentarios maternos (HoPM) fueron similares en cerdas vacías y gestantes (P>0.35) y entre los distintos períodos de gestación estudiados (P>0.13) y en los extractos placentarios fetales (HoPF) fueron superiores a las de los HoPM (62.16±3.67 vs. 1.97±3.70, P<0.01). Las concentraciones de E2 (pg/ml) sérico en cerdas vacías fueron similares a las de las cerdas gestantes (19.36±4.83 vs. 23.15±4.40, P>0.49), mientras que en los HoPF fueron superiores a las de los HoPM (3864.26±501.43 vs. 895.42±515.17, P<0.01). En conclusión, se postula que la expresión de las integrinas estudiadas en el útero durante la gestación temprana porcina acompaña la presencia de los E2, secretados principalmente por el componente placentario fetal. Palabras clave: integrinas, progesterona, estrógenos, placenta, cerdos. Summary Progesterone, estrogen and integrins expression in porcine early pregnancy Porcine placenta is epitheliochorial, adecidua, folded, non-invasive and diffuse. Due to its location as a barrier between mother and embryos, it becomes both the natural target of the endocrine system and the expression of adhesion molecules and their ligands such as integrins.The aim of this study was to correlate placental expression of αvβ3, β1, α3 and β3 integrins with progesterone and estrogen concentrations present in serum and placental extracts during porcine early pregnancy. 25 mixed breed pregnant sows assembled in three periods: 5 d, 15-20 d and 23-49 d and 6 non-pregnant were used.The presence of integrins by direct and indirect immunoperoxidase was fixed. Determination of progesterone (P4) and estrogens (E2) by chemiluminescent immunoassay in solid phase was fulfilled.The expression of all the studied integrins was greater in the period of post-implantation (23-49 d of gestation), followed by the period of pre-implantation (5 d of gestation). The concentrations of serum P4 (ng/ml) in empty sows were lower to those of the pregnant swines (12.53±7.53 vs. 43.77±6.92, 13 P<0.01).The concentrations of P4 in maternal placental extracts (HoPM) were similar in empty and pregnant swines (P>0.35) and among the different periods of gestation studied (P>0.13). Serum E2 concentration (pg/ml) in empty sows were similar to those of pregnant swines (19.36±4.83 vs. 23.15±4.40, P>0.49).While in HoPF were higher to those of HoPM (3864.26±501.43 vs. 895.42±515.17, P<0.01). In conclusion, it is postulated that the expression of the integrins studied in the uterus during porcine early pregnancy accompanies the presence of E2, secreted mainly by the fetal placental. Key Words: integrins, progesterone, estrogens, placenta, pigs. Introducción La placenta porcina es epiteliocorial, adecidua, plegada, no invasiva y difusa. Está conformada por interdigitaciones entre las vellosidades del trofoectodermo y el epitelio uterino lo que permite el reconocimiento, adhesión e implantación de los conceptus en ésta especie. Por su ubicación de barrera entre la madre y los embriones es el blanco natural del sistema endócrino y de la expresión de las moléculas de adhesión y sus ligandos tales como las integrinas, Muc-1, fibronectina u osteopontina (Bowen and Hunt 2000; Rashev et al., 2005). En el conejo, la integrina αvβ3 está presente en el trofoblasto y en el embrión y puede estar involucrada en las interacciones maternas embrionarias tempranas (Illera et al., 2003). En la mujer, se considera a las integrinas como probables marcadores de la receptividad uterina para la implantación del embrión, y que esta acción ocurre cuando el útero se encuentra bajo la influencia de la progesterona (P4) (Carson et al., 2000). Hanashi et al. (2003), demuestran que la integrina β1 participa en la fase final de la implantación en la decidua humana. En especies con placenta epiteliocorial, se sugiere que la integrina α5β1 participa en eventos moleculares involucrados en los procesos de implantación (Rashev et al., 2005). Numerosos trabajos plantean el papel de las 14 integrinas y de sus ligandos comparando su expresión entre el útero durante el ciclo estral con la preñez temprana porcina (Bowen et al., 1996; Bowen and Hunt 2000; Jaeger et al., 2001; Bridger et al., 2008). Sin embargo, no evalúan su presencia en relación a la concentración de progesterona y estrógenos presentes tantos en suero como en la placenta. La acción de las principales hormonas sexuales secretadas por el ovario, E2 y P4, produce una serie de cambios en el endometrio de la cerda gestante que permite la implantación de los embriones, provocando la proliferación y diferenciación de las células endometriales (Rider et al., 1998). La progesterona, conocida como la hormona de la preñez, prepara al útero para la implantación y el mantenimiento de la preñez, posee un efecto estimulador sobre la secreción de proteínas uterinas, aumenta la actividad de las glándulas secretorias en el endometrio e inhibe la movilidad del miometrio (Mueller et al., 2006) por alterar la permeabilidad iónica de los músculos del miometrio lo que provoca la disminución de la excitabilidad de la célula (Qsuires, 2006). Los estrógenos desempeñan un papel importante en la proliferación y expansión de la placenta, en el movimiento de agua y electrolitos, en la permeabilidad celular y en la regulación del flujo de sangre uterina. Desde la hipótesis de Bazer y Thatcher (1977), postulando que la secreción de estrógenos realizada por el conceptus porcino constituye parte de las señales necesarias para que se produzca el reconocimiento de los embriones por su madre, numerosos trabajos apoyan la propuesta; así Ziecik, 2002, sostiene que se producen cambios en la relación de PGE2:PGF2α, siendo el estradiol el agente más eficaz del cambio. El objetivo de éste estudio fue correlacionar la expresión placentaria de las integrinas αvβ3, β1, α3 y β3 con las concentraciones de progesterona y estrógenos presentes en suero y extractos placentarios durante la preñez temprana porcina. Materiales y Métodos Animales yTractos Reproductivos: Se utilizaron 25 cerdas mestizas en diferentes períodos gestacionales comprendidos entre los 5 y 49 días de preñez y 6 cerdas no preñadas provenientes de criaderos de la zona norte de la provincia de La Pampa, Argentina. Las cerdas fueron sacrificadas en los períodos de gestación programados. Inmediatamente después de recolectados los tractos reproductivos se lavaron con solución salina de Hank´s (SSH) conteniendo 10.000 U/ml de penicilina, 10 mg/ml de estreptomicina y 2,5 µg/ml de fungizona y se guardaron a 4ºC hasta su procesamiento en el laboratorio. La gestación temprana se consideró en este trabajo en tres períodos: 5 días que se correspondería con el período de pre-implantación, el 2do período entre 15 a 20 días fin de la “ventana de implantación” y el 3er período de 23 a 49 días como post-implantacional. Las cerdas vacías fueron utilizadas como controles. En cerdas de gestación controlada de 5 días de preñez los embriones fertilizados se obtuvieron mediante flushing con PBS de los cuernos y fueron contados a través de una lupa Stemi 2000-CS, Carl Zeiss (Alemania).También se tomaron muestras de porciones de endometrio. Obtención de Suero: A cada cerda se le extrajo sangre por corte de la vena yugular. La sangre se mantuvo a temperatura ambiente hasta lograr retracción del coágulo y exudado del suero. Se la centrifugó a 1800 rpm durante 10 minutos, se fraccionó en alícuotas y conservó a –20ºC. Obtención de Homogenatos de Placenta Porcina (HoPP) y de Útero no Preñado Porcino (HoU): Los extractos placentarios se obtuvieron de la siguiente manera: a ± 5 g de tejido placentario porcino materno o fetal con tres partes de solución fisiológica se los molió a fin de obtener un macerado. Luego se centrifugó y el sobrenadante se guardó a –20ºC, denominándolos Homogenatos de Placenta Porcina Materna (HoPM) y Homogenatos de Placenta Porcina Fetal (HoPF). Los Homogenatos de útero provenientes de hembras porcinas no preñadas (HoU) fueron procesados de la misma manera (Koncurat et al. (1999). Procesamiento del tejido placentario: Parte del tejido placentario, tanto materno como fetal, se fijó en formol tamponado con fosfato al 10% y se realizaron los cortes histológicos de ± 5 µm. Determinación de Integrinas: Sobre los cortes histológicos se realizó la técnica de inmunohistoquímica indirecta LSAB (Labeled Strptavidin Biotin Method): se lavó el tejido con solución salina tamponada (PBS), se agregó peróxido de hidrógeno al 3% (para bloquear la peroxidasa endógena) durante 5´, se lavó con PBS y se agregó anticuerpo de ratón anti-subunidad de integrina β1 humana monoclonal 1:100 (Chemicon) o anticuerpo de conejo anti-integrina α3 humana policlonal 1:500 (Chemicon) o anticuerpo de conejo anti-integrina β3 humana policlonal 1:200 (Chemicon); se incubó 20´, se lavó nuevamente con PBS. Se agregó el segundo anticuerpo biotilinado (inmunoglobulina anti-anticuerpos de conejo, ratón y cabra) incubando 20´ y se lavó con PBS. Se colocó gotas de estreptavidina-peroxidasa de rábano picante (streptavidina/HRP de Dako Cytomation) y se incubó 20´, se lavó con PBS nuevamente, se cubrió con solución cromógena diaminobencidina (DAB), 15´, se lavó con agua destilada y se contrastó con hematoxilina (2´), se lavó con agua, se montó y observó en un microscopio Axiophot (Zeiss). Para la determinación de αVβ3 se utilizó un anticuerpo de ratón anti-integrina αVβ3 humana monoclonal conjugado con biotina (Chemicon), dilución 1:100, que se reveló de igual manera que la técnica descripta anteriormente. Determinación de hormonas esteroides en extractos placentarios y suero: La determinación de progesterona (P4) y estrógenos (E2) se realizó por Inmunoensayo Enzimático Quimioluminiscente en fase sólida en un equipo DPC (Diagnostic Product Corporation, Los Angeles, CA). Cada unidad de análisis de la hormona respectiva, contiene una bola recubierta de anticuerpos policlonales de conejo anti15 hormona. El anticuerpo anti-hormona se encuentra unido a una perla de poliestireno y encerrado en una copa de reacción denominada Immulite Test Unit®. La muestra compite en la Test Unit® con hormonas marcadas con un “ligando” durante 30 minutos. El material no unido es descartado por lavado centrífugo. En una segunda etapa se agrega un anticuerpo “anti-ligando” marcado con la enzima fosfatasa alcalina. La Test Unit® fue incubada por otros 30 minutos y el material no unido nuevamente descartado por lavado centrifugado. Posteriormente, se agregó un sustrato (ester fosfato de adamantyl dioxetano) cuya hidrólisis genera un compuesto quimioluminiscente (emisión de luz) el que es leído en un fotomultiplicador incorporado en el equipo. Análisis estadístico: Para realizar el análisis estadístico de los datos obtenidos de los dosajes hormonales en sueros y extractos placentarios, éstos fueron clasificados en 4 periodos de gestación: no gestantes, a los 5, de 15 a 20, y de 23 a 49 días de gestación. Las concentraTRACTO REPRODUCTIVO EPITELIO UTERINO Útero vacío + 5 días 15-20 días 23-49 días VELLOSIDADES PLACENTARIAS Fet. Mat. ND + ++ – ++ ciones de P4 y E2 fueron analizadas por ANOVA (Di Rienzo et al., 2001). Los resultados de la determinación de integrinas fueron expresados en forma semicualitativa (Rashev et al., 2005), con una escala elegida en función de la coloración detectada, determinando que: (-): negativo (+): baja positividad (++): positividad intermedia (+++): alta positividad Resultados Expresión de Integrinas: La expresión de todas las integrinas estudiadas fue mayor en el período de post-implantación (23-49 días de gestación), seguido por el período de peri-implantación (5 días de gestación). Expresión de la Integrina αvβ3: Tabla 1: Expresión de la subunidad αVβ3 de las integrinas en útero vacío y placentas de diferentes períodos gestacionales. GLÁNDULAS UTERINAS VASOS SANGUÍNEOS +++ – – + ++ – ++ +++ TEJIDO CONECTIVO Fet. Fet: Fetal; Mat: Materno; ND: No Determinado; +, ++, +++: Diferentes Grados de Positividad. 16 Foto 1: Placenta porcina de 20 días de gestación donde se observa la expresión en el tejido conectivo y vasos sanguíneos de la integrina αvβ3, (20 x). Mat. ++ ++ + +++ Expresión de la Subunidad β1: Tabla 2: Expresión de la subunidad β1 de las integrinas en útero vacío y placentas de diferentes períodos gestacionales. TRACTO REPRODUCTIVO EPITELIO UTERINO Útero vacío + 5 días VELLOSIDADES PLACENTARIAS Fet. ++ (Fil) 15-20 días ++ 23-49 días Mat. +++ (apical) – +++ GLÁNDULAS UTERINAS VASOS SANGUÍNEOS TEJIDO CONECTIVO +++ – ++ – – ++ + + +++ +++ Fet. Fet: Fetal; Mat: Materno; ND: No Determinado; +, ++, +++: Diferentes Grados de Positividad. Mat. ++ ++ Foto 2: Placenta porcina de 5 días de gestación donde se observa la expresión en el epitelio uterino de la subunidad de las integrinas 1, (20 x). Expresión de la Subunidad de Integrina a3: Tabla 3: Expresión de la subunidad a3 de las integrinas en útero vacío y placentas de diferentes períodos gestacionales. TRACTO REPRODUCTIVO EPITELIO UTERINO Útero vacío ++ 5 días VELLOSIDADES PLACENTARIAS Fet. ++ (apical) – – 15-20 días 23-49 días Mat. ++ ++ GLÁNDULAS UTERINAS VASOS SANGUÍNEOS – ++ + ++ – - /+ ++ – – ++ TEJIDO CONECTIVO Fet. + Fet: Fetal; Mat: Materno; ND: No Determinado; +, ++, +++: Diferentes Grados de Positividad. Mat. + ++ 17 Foto 3: Placenta porcina de 37 días de gestación donde se observa la presencia de la subunidad de las integrinas 3, (20 x). Expresión de la Subunidad de Integrina b3: Tabla 4: Expresión de la subunidad b3 de las integrinas en útero vacío y placentas de diferentes períodos gestacionales. TRACTO REPRODUCTIVO EPITELIO UTERINO Útero vacío ++ 5 días 15-20 días 23-49 días VELLOSIDADES PLACENTARIAS Fet. ++ (Fil) +++ Mat. + (apical) – – +++ GLÁNDULAS UTERINAS VASOS SANGUÍNEOS – – ND ++ – – ++ ++ TEJIDO CONECTIVO Fet. Mat. +++ +++ + Fet: Fetal; Mat: Materno; ND: No Determinado; +, ++, +++: Diferentes Grados de Positividad. ++ Foto 4: Placenta porcina de 5 días de gestación donde se observa la presencia de la subunidad de las integrinas b3 a nivel apical del epitelio uterino, vasos sanguíneos y tejido conectivo materno, (20x). 18 La detección de integrinas en útero d (25.98±6.37 vs. 52.67±7.02, P<0.01); y las vacío se encuentra en las Tablas 1, 2, 3 cerdas con gestaciones de 23-49 d tuvieron menores concentraciones de P4 sérica que las y 4. cerdas con gestaciones de 15-20 d Detección de Progesterona: La deter- (34.70±6.88 vs. 70.65±7.53, P<0.01). minación de P4 se realizó en suero y en ex- Las concentraciones de P4 en extractos platractos placentarios maternos y fetales. Las centarios maternos (HoPM) fueron similares concentraciones de P4 sérica (ng/ml) en cer- en cerdas vacías y gestantes (P>0.35) y entre das vacías fueron inferiores a las de las cerdas los distintos períodos de gestación estudiados gestantes (12.53±7.53 vs. 43.77±6.92, P<0.01). (P>0.13). Las cerdas con gestaciones de 5 d tuvieron Por el contrario, las concentraciones de P4 en menores concentraciones de P4 sérica que las los HoPF fueron superiores a las de los HoPM cerdas con gestaciones de 15-20 d y de 23-49 (62.16±3.67 vs. 1.97±3.70, P<0.01) (Figura 1). Figura 1. Concentración de P4 en suero, extracto placentario materno (HoPM) y fetal (HoPF) según los tres períodos de gestación temprana y útero (HoUP) de hembras vacías. Detección de estrógenos. Las concentraciones de E2 en HoPM (pg/ml) Las concentraciones de E2 (pg/ml) sérico en fueron similares en cerdas vacías y gestantes (P>0.48). Por el contrario, los HoPM provecerdas vacías fueron similares a las de las cerdas gestantes nientes de gestaciones de 5 d tuvieron (19.36±4.83 vs. 23.15±4.40, P>0.49). Sin em- menores concentraciones de E2 que las bargo, las cerdas con gestaciones de 5 d tu- provenientes de gestaciones de 15-20 d y 23vieron mayores concentraciones de E2 sérico 49 d (276.42±103.38 vs. 712.46±42.78; que las cerdas con gestaciones de 15-20 d y de P<0.01), y los de 15-20 d tuvieron menores 23-49 d (34.85±4.08 vs.17.30±4.60, P<0.01;). concentraciones que los 23-49 d También las cerdas con gestaciones de 23-49 (529.50±48.35 vs. 895.42±37.22; P<0.01). d tuvieron mayores concentraciones de E2 Las concentraciones de E2 en los HoPF fueron sérico que las cerdas con gestaciones de 15- superiores a las de los HoPM 20 d (24.04±4.41 vs. 10.56±4.83, P<0.06) (3864.26±501.43 vs. 895.42±515.17, P<0.01). (Figura 2 y 3). 19 Figura 2. Concentración de E2 en suero, extracto placentario materno (HoPM) y fetal (HoPF) según los tres períodos de gestación temprana y hembras vacías. Figura 3. Concentraciones séricas de P4 y E2 durante la gestación temprana porcina Discusión Pocos estudios evalúan la expresión de las integrinas y su relación con las hormonas esteroideas a nivel sérico y en la placenta materna o fetal durante la gestación temprana porcina. Bowen et al. (1996), determinaron por inmunofluorescencia indirecta la expresión de las subunidades a1, a3, a4, av, b1 y b3 durante la implantación porcina en el epitelio luminal uterino, sin embargo Keys et al. (1989), demostraron que la placenta porcina presenta la característica de autofluorescer, lo que también comprobamos en nuestro laboratorio, por lo que en el presente trabajo se utiliza una técnica de inmunohistoquímica. El período de 15-20 días del presente estudio no evidencia presencia de la integrina avb3 ni 20 de las subunidades b1, a3 y b3 en las vellosidades maternas, siendo un dato que no se correlaciona con los presentados por Lin et al. (2007) y por Rashev et al. (2005). Por el contrario, encontramos expresión de las subunidades b1 y b3 en la porción placentaria del filamento embrionario durante este período de implantación. En nuestro laboratorio hemos observado la presencia de filamentos insertos en el endometrio junto a embriones ya formados (Foto 5) y consideramos al producto enetapa de filamento como futura pérdida embrionaria, dada la disparidad de desarrollo en relación al embrión, lo que concuerda con los hallazgos de Yaful (2009) y lo informado por Freking et al. (2007). Foto 5: Tracto Reproductor de 17 días donde se observa la presencia de un filamento embrionario y un embrión. Los patrones de expresión de las integrinas a nivel de las glándulas endometriales indicarían que avb3, b1 y b3 estarían mayormente involucradas en el período postimplantacional, cumpliendo funciones en el mantenimiento de la arquitectura glandular placentaria. Por el contrario, la subunidad a3 participaría en la construcción de la interfase feto-materna, particularmente en la de tipo interareolar, ya que no se encuentra presente en glándulas uterinas en ningún período estudiado. También se observa expresión baja e intermedia de las integrinas estudiadas a nivel del epitelio uterino de hembras vacías. En nuestro laboratorio hemos descubierto altas concentraciones de P4 en los extractos placentarios fetales, hipotetizando que la placenta fetal es una fuente alternativa de producción de P4 durante la preñez porcina (Yaful et al., 2005), fenómeno que no observamos en los extractos placentarios maternos. En suero se registró un pico de P4 durante el período de la “ventana de implantación” que apuntala el rol sistémico de ésta hormona durante la gestación. Recientemente Franczak y Kotwica (2009) demostraron que el endometrio y miometrio porcino producen E2 en cultivo y ambos pueden incrementar su producción in vitro si se proporciona P4 al medio. En este trabajo no se realizaron ensayos inVitro, pero se pudo determinar actividad esteroideogénica en el endometrio uterino desde los 5 días postfertilización. Se detectaron valores altos de E2 séricos desde los 5 días de preñez en comparación a los hallados en cerdas vacías; valores que descendieron a los 15-20 días para aumentar nuevamente en el período de 23-49 días y que coinciden con las dos fases estrogénicas consideradas por Spencer y Bazer (2004). En acuerdo con lo hallado por Franczak y Kotwica (2008) se determinaron concentraciones altas de E2 en los extractos placentarios maternos, pero fueron menores a los detectados en extractos fetales, de manera tal que se puede afirmar que la secreción estrogénica es debida principalmente al componente placentario de origen fetal. Se postula que durante la gestación temprana es determinante la relación temporal entre las concentraciones séricas de E2 y P4, y que el descenso de E2 hallado entre los 15-20 días de preñez, que se acompaña de un aumento de P4, sería importante para la implantación de los productos y la continuidad de la gestación. Todas las integrinas estudiadas aumentan su 21 expresión a los 5 días de gestación en el endometrio gestante. Esto supone que la remodelación celular necesaria para el establecimiento y continuidad de la preñez porcina podría deberse a la influencia de los E2, ya que se observó que los picos de E2 sérico se correlacionan con la presencia de las integrinas, tanto en el período de pre-implantación como en el de post-implantación. En conclusión, se postula que la expresión de las integrinas estudiadas en el útero durante la gestación temprana porcina acompaña la presencia de los E2, secretados principalmente por el componente placentario fetal. 22 Bibliografía Bowen, J.A.; Bazer, F.W. and Burghardt, R.C. 1996. Spatial and temporal analyses of integrin and muc-1 expression in porcine uterine epithelium and trophoectoderm in vivo. Biology of Reproduction, 55: 1098-1106. Bowen, J.A. and Hunt, J.S. 2000. The role of Integrins in Reproduction. Pro Soc Exp Biol Med. 223: 331-343. Bridger, P.; Haupt, S.; Leiser, R.; Johnson, G.; Burghardt, R.; Tinneberg, H. and Pfarrer, C. 2008. 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González2. 1 Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLP, 60 y 118, La Plata; 2Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLPam. [email protected] Resumen El humor vítreo es una sustancia transparente y gelatinosa, formada principalmente por agua, que se encuentra en la cavidad del ojo por detrás del cristalino, tratándose de un espacio avascular y cerrado. En medicina veterinaria, el análisis post-mortem de este líquido biológico puede servir para determinar diversos tipos de enfermedades metabólicas, renales y nutricionales. El objetivo del presente trabajo fue caracterizar el humor vítreo equino mediante la determinación de su densidad, viscosidad y tensión superficial, la concentración de proteínas, y los macrominerales Na, K, P, Ca y Mg. El humor vítreo fue obtenido de equinos sanos, sacrificados en el Frigorífico Indio Pampa. La densidad fue cuantificada a partir del método del picnómetro; el comportamiento reológico se estudió con el viscosímetro digital de rotación HAAKE, RS 600, y la tensión superficial mediante el método del anillo a partir del tensiómetro de Du Noüy. Las proteínas totales fueron determinadas por un método colorimétrico, técnica PROTI U/LCR (Weiner LAB), al igual que el contenido de P (técnica Fosfatemia,Weiner LAB); en tanto, los contenidos de Ca y Mg se determinaron por espectrofotometría de absorción atómica y los de Na y K, por fotometría de llama. Los resultados de densidad, viscosidad y tensión superficial del líquido biológico estudiado a 20ºC fueron de 1.0025 g.cm-3, 2.13 cp y 51.0045 dinas.cm-1, respectivamente y presentaron una buena correlación lineal con respecto a la temperatura. Los contenidos de proteínas, P, Na, K, Ca y Mg resultaron ser de 0.033 g. dl-1, 1,1200 g. dl-1, 151.82 mEq.l-1, 3.7200 mEq.l- 1, 3.2125 mg dl-1 y 1.5379 mg dl-1, respectivamente. Se puede concluir que a partir de la caracterización postmortem de este fluído orgánico, se podrá inferir el estado de salud antemortem de los equinos. Palabras claves: humor vítreo, equinos, cons24 tantes fisicoquímicas, proteínas. Abstract The humor vitreous is a transparent and gelatinous substance, composed primarily of water, which is located in the cavity of the eye behind the lens, in the case of an avascular area and closed. In veterinary medicine, the postmortem analysis of the biological liquid can be used to identify various types of metabolic diseases, kidney and nutrition.. The objective of the present work was to characterize the vitreous equine by determining its density, viscosity and surface tension, the concentration of protein, Na, K, P, Ca and Mg.Vitreous humor was obtained from healthy horse, killed in the Fridge Indio Pampa.The density was quantified from the method of pycnometer; rheological behaviour was studied using the digital rotary viscometer HAAKE, RS 600, and surface tension tension by the method of the ring from tensiometer Du Noüy.Total proteins were determined by means of a quantitative colorimetric method, technique PROTI U/LCR (Weiner LAB.) at same that contents of P (technique Fosfatemia (Weiner LAB); while the contents of Ca and Mg were determined by atomic absorption spectrometry and its of Na and K, by flame photometry. Results obtained for density, viscosity and surface tension were 1.0025 g.cm-3, 2.13 cp y 51.0045 dinas.cm-1, respectively and showed a good linear correlation with respect to temperature. Protein contents, P, Na, K, Ca and Mg were 0.033 g.dl-1, 1.1200 g. dl-1 , 151.82 mEq.l1, 3.7200 mEq.l-1, 3.2125 mgs dl-1 and 1.5379 mgs dl-1, respectively. One can conclude that after the postmortem characterization of this organic fluid, it may infer the state of health of the horses antemortem. Key words: Vitreous humor, horses, physicochemical constants, proteins. Introducción El humor vítreo es una sustancia transparente y gelatinosa, formada principalmente por agua, que se encuentra en la cavidad del ojo por detrás del cristalino, tratándose de un espacio avascular y cerrado.Tiene un volumen aproximado de 4 ml, constituyendo cerca de un 80% del globo ocular. Sin embargo, hace poco tiempo que se conoce su verdadera estructura e importancia (Mulla, 2005). Su estructura gelatinosa se mantiene unida por un fino tramado fibrilar, compuesto fundamentalmente por largas moléculas de proteoglicanos. Está compuesto en un 99% por agua, colágeno y ácido hialurónico. Su viscosidad disminuye de la periferia hacia el centro, reduciéndose aún más con la edad del animal. En adultos jóvenes un 80% es gel y un 20% líquido que contiene ácido hialurónico pero no fibrillas. Con la edad el volumen líquido del humor vítreo aumenta hasta el 50%. El cuerpo vítreo es una matriz extracelular que contiene proteínas estructurales fibrilares asociadas con cantidades variables de ácido hialurónico y varios tipos de proteínas, glicoproteínas y proteoglicanos (Swann, 1991). El colágeno es la principal proteína fibrilar del cuerpo vítreo, en especial del tipo II (Ayad and Weiss, 1984). El ácido hialurónico es el principal glicosaminoglicano presente en el humor. Este es un biomaterial viscoelástico, componente importante del humor vítreo y líquido sinovial de las articulaciones. Tiene propiedades reológicas únicas que no tienen los polímeros sintéticos. Estas propiedades únicas indican el uso potencial del ácido como una ayuda quirúrgica, especialmente para la sustitución del humor vítreo natural en los procedimientos oftálmicos. Los aminoácidos libres están presentes en concentraciones mucho más pequeñas que en las que se encuentran en el plasma, y las glicoproteínas, contienen una menor cantidad de carbohidratos (Mulla, 2005). El humor vítreo contiene además, urea, creatinina, sodio, potasio, calcio, magnesio, cloro y fósforo. Las concentraciones químicas y las propiedades físicas son generalmente más es- tables a bajas temperaturas (McLaughlin and McLaughlin, 1988), siendo también menos susceptible de contaminación. En medicina veterinaria, la aplicación más frecuente de estos análisis post-mortem puede servir para determinar diversos tipos de enfermedades metabólicas, renales y nutricionales (Varela and Bossart, 2005); pudiéndose hacer una extrapolación de las concentraciones antemortem y la correlación con la concentración de algunos electrolitos en el suero. Puede ser considerado para determinar, por ejemplo, la magnesemia antemortem, ya que el humor vítreo permanece sin cambios hasta 48 h postmortem (Ramírez et al., 1998). Otros líquidos biológicos, en tanto, tales como la sangre, orina o líquido cerebroespinal, son más susceptibles a sufrir cambios postmortem, debido a contaminación bacteriana, liberación de sustancias químicas intracelulares y metabolismo postmortem de los productos químicos (McLaughlin and McLaughlin, 1988). Los objetivos del presente trabajo fueron determinar las constantes fisicoquímicas (densidad, viscosidad y tensión superficial) como también la concentración de proteínas, sodio (Na), calcio (Ca), fósforo (P), potasio (K) y magnesio (Mg) del humor vítreo, extraído en forma postmortem de equinos sanos, con el fin de caracterizarlo. Materiales y Métodos Obtención de las muestras El humor vítreo fue obtenido de equinos sanos, sacrificados en el Frigorífico Indio Pampa, Establecimiento Oficial Nº 51, de la ciudad de Trenque Lauquen de la Provincia de Buenos Aires. En la sala de faena, se practicó la enucleación del globo ocular, el cual se conservó a -18 ±0.1ºC en freezer (Fig. 1a). En el laboratorio, el globo ocular fue incidido en la zona media, para permitir de esta forma la separación del humor acuoso, cristalino y humor vítreo (Fig. 1b). Este último, finalmente, fue descongelado for25 mando un pool (Fig. 1c). Luego, el líquido fue quedar libre de membranas y fibras hialinas centrifugado 30 minutos a 5000 rpm a fin de (Fig. 1d). Fig. 1. Extracción y posteriores tratamientos del humor vítreo equino. a) Enucleación del globo ocular de equinos. b) Separación de los humores acuoso, cristalino y humor vítreo. c) Separación del humor vítreo. d) Humor vítreo, luego de descongelado y centrifugado. Densidad Se determinó la densidad del humor vítreo de los equinos a partir del método del picnómetro (Kolthoff and Sandell, 1988). Para esta determinación se utilizó un picnómetro de 5ml, realizándose las diferentes determinaciones tras sucesivas pesadas mediante una balanza analítica de precisión Metler, modelo H35AR. El humor vítreo fue sometido a una serie de temperaturas, en un rango entre 20 a 40ºC±0,1°C, a intervalos de 5ºC. La constancia térmica se logró a partir de un baño termostático. trabajó en ambiente termostatizado realizándose las determinaciones dentro del rango de las temperaturas de estudio (20 a 40°C ± 0,1°C) y se utilizó un programa computarizado denominado Rotovisco Versión 2.3 HAAKE para adquirir y analizar los datos obtenidos. Tensión Superficial La tensión superficial se cuantificó mediante la técnica del anillo empleando el tensiómetro de Du Noüy, mo-delo CSC (70535), el cual trabaja con una sensibilidad de 0.1 dinas/cm. Se mantuvo el mismo rango de temperaturas para las determinaciones (20-40ºC± 0,1°C), controladas a partir de un baño termostático. Viscosidad El comportamiento reológico de las muestras de humor vítreo de equino se estudió con un Proteínas totales viscosímetro digital de rotación HAAKE, RS La determinación de proteínas totales se rea600, Rheostress, que lleva incorporado el sis- lizó mediante la técnica colorimétrica PROTI tema M5/NV (Martín-Viaña, y col., 2002). Se U/LCR (Weiner LAB.). 26 Las Proteínas totales presentes en la muestra reaccionan en medio ácido con el complejo Rojo de Pirogalol-Molibdato originando un nuevo complejo que se cuantifica por espectrofotometría a 600 nm. rrollándose el color en medio arsenito/citrato. El arsenito/citrato se combina con el exceso de molibdato impidiendo su reacción posterior con el fosfato liberado de esteres lábiles. El color obtenido se mide entre 620 y 650 nm. Determinación de Ca y Mg Los contenidos de Ca y Mg se determinaron por espectrofotometría de absorción atómica, después de la dilución de las muestras 1:50 en CaCl2 al 0.2%, en el Laboratorio de Nutrición Mineral de la Facultad de CienciasVeterinarias, UNLP. Diseño experimental y análisis estadístico Un total de 35 muestras de humor vítreo de equinos sanos fue analizado, determinándose la densidad, la viscosidad y la tensión superficial de estas muestras, luego de exponerlas a diferentes temperaturas, dentro de un rango de 20 a 40°C±0.1°C. Cada experimento fue realizado por duplicado.También se determinó en cada una de ellas, la concentración de proteínas totales, P, Na, K, Ca y Mg. El análisis de la varianza y el test de Fisher (LSD) fueron aplicados con un nivel de significación de 0.05 y 0.01. Se utilizó el programa estadístico SYSTAT (Systat Inc., version 5.0). Determinación de Na y K Los contenidos de Na y K se determinaron mediante un fotómetro de llama (Metrolab). El Fotómetro de llama es, como su nombre lo indica (photos = luz, metro, medir), un instrumento capaz de medir la luz emitida por una llama en la que interviene el ion a analizar. Cada metal, calentado sobre una llama de mechero en determinadas condiciones, produce un color característico. Así, un compuesto de Sodio expuesto sobre un hilo de Platino, sobre una llama, produce un color amarillo – anaranjado; en tanto, el Potasio produce una coloración violeta. Este efecto es utilizado por el fotómetro de llama para determinar la concentración de una solución desconocida, luego de calibrar el aparato con una solución cuya concentración se conoce (Botta, 2007). La sensibilidad del fotómetro de llama es de 23 mg/L. Resultados Densidad Los resultados de las determinaciones de la densidad absoluta del humor vítreo a las diferentes temperaturas de estudio, se presentan en la Tabla 1. El valor de la densidad absoluta a 20°C resultó de 1,0026 g.cm-3, siendo comparable a los hallados para ovinos y bovinos para la misma determinación, aunque levemente inferior (Frígoli et al., 1990). A partir de los datos obtenidos a las diferentes temperaturas ensayadas, podemos obDeterminación de P servar además, una marcada dependencia La determinación de P se realizó mediante la lineal de la densidad absoluta con la tempetécnica fosfatemia (Weiner LAB.), empleando ratura (r2=0.84), en donde a medida que aumentó este último parámetro, el valor de la un método colorimétrico. El Fósforo inorgánico reacciona en medio densidad fue en franca disminución, comporácido con el molibdato, que es reducido por el tamiento esperable para los líquidos (Potter, ácido ascórbico a azul de molibdeno, desa- 2002). Tabla 1. Determinación de la densidad absoluta del humor vítreo de equinos.. TEMPERATURA (ºC) 20 25 30 35 40 DENSIDAD ABSOLUTA (g.cm-3 ) 1.0026 0.9992 0.9972 0.9967 0.9872 27 Viscosidad A partir de los ensayos reológicos dinámicos, curvas de esfuerzo versus velocidad de deformación, se obtuvieron los valores de viscosidad dinámica a las distintas temperaturas ensayadas. Para 20ºC, el parámetro en estudio resultó de 2,18 cp, valor que disminuyó con el incremento de la temperatura. Las curvas reológicas se presentan en la Figura 2 (a, b, c, d y e), para cada temperatura ensayada. Fig. 2: Representaciones Gráficas de las viscosidades dinámicas del humor vítreo de equinos a las diferentes temperaturas. a (20ºC); b (25ºC); c (30ºC); d (35ºC) y e (40ºC). Los puntos indican los resultados experimentales. 28 Tensión Superficial mados son los obtenidos a partir de las corLas tensiones superficiales resultantes, a las recciones correspondientes entre los resultadistintas temperaturas ensayadas se presentan dos de las tensiones superficiales medidas (P) en la Tabla 2. El valor para la tensión superficial y el factor de corrección (F). del humor vítreo de equino a 20ºC resultó de Con respecto a la dependencia con la tem51.0025 dinas.cm-1. Dicho parámetro pre- peratura mencionada se debe hacer hincapié sentó, al igual que la densidad y la viscosidad que a medida que este parámetro fue en dinámica, una dependencia lineal con la tem- franco aumento, el resultado de la tensión superatura. Cabe destacar que los valores infor- perficial real fue descendiendo. Tabla 2. Determinación de la tensión superficial de humor vítreo de equinos. TEMPERATURA (ºC) 20 25 30 35 40 TENSION SUPERFICIAL (dinas.cm-1 ) 1.0026 0.9992 0.9972 0.9967 0.9872 Efecto de la temperatura sobre la densidad, la ln k = ln A – Ea/RT (2) viscosidad y la tensión superficial del humor ésta última expresión corresponde a la vítreo de equinos ecuación de una recta que no pasa por el oriEl efecto de la temperatura sobre los gen del sistema de coordenadas y cuya penparámetros físicos determinados fue interpre- diente se obtiene al representar el ln de k en función de 1/ T. tado mediante la ecuación de Arrhenius: En la Figura 3 se observan los gráficos k = A.exp (-Ea/RT) (1) obtenidos al aplicar esta ecuación en relación a los parámetros densidad, viscosidad y tendonde T es la temperatura en ºK, Ea es la energía de activación (Joule/mol), A es un factor sión superficial del humor vítreo de equinos. preexponencial y R es la constante de los Podemos observar que existe una correcta gases 8.31 (Joule/ºK mol). La Energía de acti- relación entre la variación de la temperatura y vación (Ea) puede ser considerada como la los parámetros físicos determinados. En todos sensibilidad del humor vítreo frente a los cam- los casos se observó un buen coeficiente de correlación r2 (densidad: 0.84; viscosidad: 0.90; bios térmicos. Aplicando logaritmos naturales a ambos tensión superficial: 0.98). miembros de la ecuación (1) se obtiene: Fig. 3: Aplicación del modelo de Arrhenius para evaluar el efecto de la temperatura sobre los parámetros físicos de densidad (), viscosidad () y tensión superficial () del humor vítreo de equinos. 29 Proteínas Totales, Ca, Na, K, Mg y P: hallados a partir de las muestras de humor Los resultados promedio de las determina- vítreo equino se presentan en la Tabla 3. ciones de proteínas totales, Ca, Na, P, K y Mg Tabla 3. Determinación de las proteínas totales, Ca y Mg de humor vítreo de equinos. Promedio S.D. Proteínas (g.dl-1) 0.0330 0.0061 Magnesio Calcio (mg. dl-1) (mg. dl-1) 3.2125 0.8754 1.5379 0.2254 Los resultados obtenidos se compararon con los realizados en experiencias anteriores en otras especies animales (Tabla 4). Se puede observar que para el caso de las proteínas, el humor vítreo de los equinos resultó tener el valor más bajo (0.033 g dl-1), al igual que para los contenidos de K y P (3.7200 mEq.l-1 y 1.12 mg dl-1, respectivamente). Los contenidos de Potasio Fósforo Sodio (mEq.l-1) (mg. dl-1) (mEq. l-1) 151,82 21,8578 3,7200 0,7416 1,1200 0,5939 Na del humor vítreo equino resultaron ser los mayores con respecto a las demás especies (151.8 mEq.l-1). En tanto para el caso de los electrolitos Ca y Mg, los valores presentados en este fluido orgánico, resultaron intermedios con respecto a los de las demás especies pecuarias comparadas (3.2125 mg dl-1 para el Ca y 1.5379 mg dl-1, para el Mg). Tabla 4. Comparación de los resultados promedios de proteínas totales, Na, K, P, Ca y Mg de humor vítreo de equinos, bovinos, ovinos y porcinos. Proteínas (g. dl-1) Calcio (mg. dl-1) Magnesio (mg. dl-1) Sodio (mEq. l-1) Potasio (mEq. l-1) Fósforo (mg. dl-1) Humor vítreo equino Humor vítreo bovino Humor vítreo ovino Humor vítreo porcino 3.212 3.200 2.600 4.100 3.100 2.600 1.320 142.0 141.0 135.0 7.000 4.800 5.100 1.800 4.300 2.100 0.033 1.537 151.8 3.7200 1.120 0.070 Conclusiones Los resultados obtenidos para la densidad absoluta del humor vítreo de equinos fueron inferiores a los presentados por ovinos y bovinos para la misma determinación, dentro del mismo rango de temperaturas. En cuanto a la viscosidad dinámica mostró una clara dependencia con la variación de la temperatura al igual que para el caso de la tensión superficial. Las distintas muestras analizadas presentaron valores semejantes entre sí para las determi30 0.064 0.054 naciones químicas de proteínas totales y el ionograma realizado, brindando así un reflejo del estado de salud que presentaban los animales muestreados. Se puede concluir que a partir de la caracterización postmortem de este fluido orgánico, se podrá inferir el estado de salud antemortem de los equinos. Bibliografía Ayad, S.; Weiss, J.B. 1984. A new look at vitreous-humour collagen. Biochemical Journal, 218: 835-840. Botta, R. 2007. La aplicación de la química analítica y la electromedicina en la determinación del intervalo postmortem. www.criminologia.com.es Frígoli, A.; Carrozza, J.; Noia, M. 1990. Constantes Bio-Fisicoquímicas del humor vítreo de ovinos. Parte III. Densidad y pH en función de la temperatura. Revista Medicina Veterinaria, 71, 3, 132-136. Kolthoff, I.M. y Sandell, E.J. 1988. Quantitative Chemical Analysis. Edit NIGAR. Edición 1988. 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Se evaluaron 10 equinos elegidos al azar de cada establecimiento. Los resultados de las muestras de materia fecal tomadas mensualmente mostraron los porcentajes de h.p.g. mayores en los meses de enero, febrero, marzo, noviembre y diciembre (P <0,01). Las especies encontradas fueron Cyatostomum spp. 76%, Triodontophorus spp. 17,5%, Strongylus spp. 4,5% y Trichostrongylus spp. 2%. Las muestras de pasturas se tomaron cada 15 días en los potreros donde pastaban los equinos en estudio. El mayor porcentaje de larvas se observó en los meses de marzo, abril, mayo, octubre y noviembre (P <0,01) y los principales géneros encontrados fueron Cyatostomum spp. 71 %, Triodontophorus spp. 19,5 %, Strongylus spp. 7,5 % y Trichostrongylus spp. 2%. Estos resultados sugieren que los tratamientos antiparasitarios deberían realizarse en otoño, primavera y verano. Palabras claves: parásitos equinos, epidemiología, Departamento Maracó, equino Abstract An epidemiologic survey of the gastrointestinal parasites that affect equines was carried out in 4 farms in Maracó Department, La Pampa Province, from March 15, 2005 to February 28, 2007.Ten equines chosen randomly from each farm were evaluated. The sample results of faecal matter taken each month showed the h.p.g. porcentages higher in the months of January, February, March, November and December (P <0,001). The species found were Cyatostomun spp. 76%, Triodon32 thophorus spp. 17,5%, Strongylus spp. 4,5 % y Trichostrongylus spp. 2%. Samples of the pastures were taken every fifteen days in the pasture grounds where the equines under study were grazing. The greatest amount of larvae were observed in the months of March,April, May, October and November (P <0,01) and the most important genre found were Cyatostomun spp. 71%, Triodontophorus spp. 19,5%, Strongylus spp. 7,5% y Trichostrongylus spp. 2%. These results suggested that the antiparasitic treatments should be undergone in autumn, spring and summer. Key words: equine parasites, epidemiology, Maracó Department, equine. Introducción En la provincia de La Pampa un importante número de productores se dedica a la cría de equinos para deporte, tareas rurales y producción de carne. Uno de los problemas más frecuentes que afectan la rentabilidad de esta actividad son las parasitosis gastrointestinales. Esta enfermedad se presenta en forma subclínica provocando pérdidas en el desarrollo corporal y en el rendimiento de los animales (Bulman, 1985; Bulman, 1997). Los equinos se contagian al ingerir las larvas 3 que se encuentra en pasturas desarrollando la enfermedad en los animales susceptibles. Estos parásitos que pertenecen al Orden Estrongiloidea ejercen mayor daño cuando las larvas que se encuentran enquistadas en la pared intestinal, emergen hacia la luz del órgano causan una diarrea muy severa. Las larvas pueden permanecer durante algún tiempo en estado de hipobiosis en la mucosa intestinal. Este mecanismo favorece la supervivencia de la especie ya que, en épocas de sequía mientras que las larvas que atraviesan el ciclo de vida libre mueren, las que están enquistadas sobreviven, además de impedir que los antiparasitarios actúen sobre ellas en ese estadio (Soulsby, 1987; Fusé et al., 2002). El diagnóstico de la enfermedad presenta dificultades como consecuencia de la escasa correlación entre la cantidad de huevos en materia fecal y larvas enquistadas, con respecto a la presencia de síntomas clínicos (Tolosa et al., 1999). Los estadios pos larvarios producen síntomas tales como dolor abdominal, cólicos, diarrea, constipación, anemia, estados de debilidad, emaciación, apetito caprichoso entre otros. Otra parasitosis de gran importancia en los equinos es la provocada por los Grandes Estróngilos que afectan a los animales en los tres primeros años de vida. Producen cólicos y secuelas como consecuencia de las migraciones larvales pudiendo provocar la muerte de los animales. En el presente trabajo se evaluó la dinámica poblacional en el animal y en el medio ambiente con la finalidad de conocer el comportamiento epidemiológico de esta parasitosis para recomendar las fechas más propicias para desparasitar y proponer pautas en el manejo de los equinos para evitar las reinfecciones. (Carreras et al., 1993;Tolosa et al., 1994;Tolosa et al., 1999). Materiales y Métodos El presente trabajo se realizó en 4 establecimientos “Anquilovo”, “La Maruja”, “La Isleta” y “El Trébol” pertenecientes al Departamento Maracó, Provincia de La Pampa (Fig. 1) desde el 15/03/05 hasta el 28/02/07. Fig. 1. Mapa de la Provincia de La Pampa. El recuadro sombreado señala el Departamento Maracó donde fueron tomadas las muestras. En la ampliación del Departamento Maracó se indican los establecimientos “El Trébol” (A), “La Isleta” (B),“La Maruja” (C) y “Anquilovo” (D). Determinación de h.p.g. de materia fecal Se seleccionaron al azar 10 equinos por establecimiento tomando mensualmente muestras de materia fecal. El conteo de huevos por gramo de materia fecal (h.p.g.) se realizó empleando la técnica de Mac Master modificada. Se obtuvieron los valores medios mensuales del h.p.g. de los equinos pertenecientes a los cuatro establecimientos para evaluar la fluctuación en los distintos meses. Las diferencias entre los valores de h.p.g. obtenidos en cada mes se compararon utilizando el Test t de Student. Determinación de géneros actuantes Se utilizaron las técnicas de Thienpont et al. (1979) y Corticelli y Lai Boch et al. (1986). Determinación de larvas por gramo de forraje seco Se recolectaron muestras de pasto quincenalmente en potreros de pastos naturales donde pastaban los equinos. El conteo de larvas por gramo de materia seca se realizó empleando la técnica descripta por Fiel et al. (1998). Se promediaron los valores de los mismos meses de cada año para evaluar la fluctuación en las distintas estaciones. Las diferencias entre el 33 número de larvas obtenidas en cada mes se compararon utilizando el Test t de Student. en los meses de noviembre, diciembre, enero, febrero, marzo (P< 0,01) (Gráfico Nº 2). En los coprocultivos se observaron los siguientes géneros: Cyatostomum spp. 76%,Trio-dontophorus spp. 17,5%, Strongylus spp. 4,5%,Trichostrongylus spp. 2% (Gráfico Nº 3). Los géneros encontrados en el pasto fueron: Cyatostomum spp. 71%,Triodontophorus spp. 19,5%, Strongylus spp. 7,5%, Trichostrongylus spp. 2% (Gráfico Nº 4). Resultados El promedio quincenal de larvas 3 por Kg de pasto de materia seca en pasturas en los 4 establecimientos durante los 2 años fue mayor en los meses de marzo, abril, mayo y en octubre y noviembre (P <0,01), (Gráfico 1). Los mayores valores de h.p.g. se registraron 6000 5000 4000 3000 2000 1000 15-01-07 15-11-06 15-09-06 15-07-06 15-05-06 15-03-06 15-01-06 15-11-05 15-09-05 15-07-05 15-05-05 0 15-03-05 N° Larvas III/Kg pasto seco Gráfico Nº 1. Números de larvas 3 por Kg de materia seca de pasto recolectada en los cuatro establecimientos cada 15 días durante el período comprendido entre 15/03/2005 y 28/02/2007. Test “t” de Student (P <0,01). Se comparan los meses de marzo, abril - mayo y octubre – noviembre con respecto al resto de los meses. Gráfico Nº 2. Recuentos de huevos por gramo de materia fecal mensual de los animales de los cuatro establecimientos durante el período comprendido entre 30/03/2005 y 28/02/02007. 2000 h.p.g. 1600 1200 800 400 07 30 -0 1- 106 30 -1 906 06 30 -0 30 -0 7- 506 6 30 -0 30 -0 30 -0 6 30 -0 1 105 5 30 -1 -0 90 30 30 -0 705 -0 5 -0 5 30 30 -0 3 -0 5 0 Test “t” de Student (P <0,01). Se comparan los meses de noviembre, diciembre, enero, febrero, marzo con respecto al resto de los meses. Gráfico Nº 3. Porcentajes de géneros de parásitos encontrados en coprocultivos en los períodos comprendidos entre 15/03/2006 al 28/02/2006 y entre 01/03/2006 al 28/02/2007. 34 Gráfico Nº 4. Porcentajes encontrados de larvas 3 infectantes en pasturas en los períodos comprendidos entre 15/03/2005 al 28/02/2006 y entre 01/03/2006 al 28/02/2007. Referencia: Año 1: período comprendido entre 15/03/2005 y 28/02/2006. Año 2: período comprendido entre 01/03/2006 y 28/02/2007. Discusión y Conclusiones En todos los casos se encontraron infestaciones mixtas con algunos de los géneros Cyatostomum, Triodontophorus, Strongylus o Trichostrongylus. En ningún caso se hallaron parasitosis de un solo género. La mayor carga parasitaria en las pasturas se observó en los meses de Marzo, Abril, Mayo, Octubre y Noviembre. Estos resultados no difieren sustancialmente con los encontrados por Tolosa et al. (1994) en campos de la Provincia de Córdoba y con los obtenidos por Fusé et al. (2002) en campos de la Provincia de Buenos Aires. De acuerdo con los resultados hallados en este trabajo, la época recomendada para realizar los tratamientos serian en otoño, primavera y verano con el fin de evitar las parasitosis subclínicas. Desde el punto de vista estadístico, como el muestreo no fue realizado en forma probabilística no se puede inferir que el comportamiento de estas variables sea el mismo en toda la población de equinos del departamento. Sin embargo de acuerdo con los trabajos realizados en Córdoba y Buenos Aires podría esperarse un comportamiento similar. Agradecimientos A la Dra. Laura Cavagión y al Dr. Ricardo Toso por su invalorable y desinteresada colaboración. A todo el personal de los establecimientos en que se desarrolló el trabajo, sin su invalorable colaboración sería imposible haberlo realizado. 35 Bibliografía Boch, J.; Supperer, R. 1986. Parasitología en Medicina Veterinaria. Editorial Hemisferio Sur. Segunda Edición en Español. Bulman, G. M. 1997. Principales Parásitos de los Equinos. Recientes Progresos en su Investigación y Control. Veterinaria Argentina. Vol. XIV, Nº. 133: 162-178 (parte I), y Nro. 134: 237-250 (parte II). Bulman, G. M. 1985. Patogénesis de la Ciatostomosis (Triconemosis, parasitación por pequeños estróngilos) en el equino. Una Actualización.Veterinaria Argentina,Vol. II, Nº. 19: 810-821. Carreras, F. F.; Brejov, G. D.; Caro, R. R. 1993. Tratamiento de las Enfermedades Parasitarias de los Animales Domésticos. Editorial Hemisferio Sur. Primera Edición. Pág. 4346. Cordero del Campillo, M.; Rojo Vázquez, F. 1999. ParasitologíaVeterinaria. Editorial MC GRAW HILL. España. Interamericana. Primera Edición. Pág. 545-565. Fiel, C. A.; Steffan, P. E.; Ferreyra, D. A. 1998. Manual para el diagnóstico de nematodes en bovinos. Edición auspiciada por la División Sanidad Animal de Bayer Argentina S. A. Pág. 7-22. 36 Fusé, L. A.; Samuel, C. A.; Rodríguez, H. O.; Passucci, J. 2002. Epidemiología y control de endoparásitos en potrancas criollas. Revista Medicina Veterinaria,Vol. 83, Nº 4: 154-158. Soulsby, E. J. L. 1987. Parasitología y Enfermedades Parasitarias en los Animales Domésticos. Séptima Edición Española. Editorial Interamericana, México. Pág. 172-182. Thienpont D.; Rochette, F.; Vanparijs, O. F. J. 1979. Diagnóstico de las Helmintiasis por medio del examen coprológico. Janssen Research Fundation, Beerse, Bélgica. Pág. 69-89. Tolosa, J.; Chiaretta, A. 1994. Eficacia comparativa de Moxidectín gel e Ivermectina pasta contra estadíos larvarios de Cyathostominae en equinos. VII Congreso Argentino de Ciencias Veterinarias. Buenos Aires. Tolosa, J.; Chiaretta, A.; Sanchez, J. 1999. Parasitosis de los Equinos. Una actualización sobre su etiopatogenia y su control. Universidad Nacional Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria. La Plata, Buenos Aires. Edición auspiciada por Fort Dodge Sanidad Animal S.A. DIAGNÓSTICO DE CLAMIDIOSIS EN AVES DE LA CIUDAD DE GENERAL PICO, LA PAMPA. ARGENTINA Baruta, D.A.1;Ardoino, S.M.1; Lacolla, D.V.1; García, M.G.1; Mariani, E.L.1; Riesco, S.R.1; Sosa, R.E.1; 1 Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLPam. Calle 5 y 116. General Pico, La Pampa. [email protected] Resumen La clamidiosis, producida por Chlamydophila psittaci, es una zooantroponosis que afecta a las aves originando un importante cuadro clínico en el hombre. A los efectos de detectar la presencia de este agente etiológico, se tomaron 120 muestras, consistentes en hisopados conjuntivales de aves psitácidas, en la ciudad de General Pico La Pampa, provenientes de domicilios particulares y comercios destinados a la venta de las mismas. A tal fin se utilizaron técnicas de citodiagnóstico (Giemsa e Inmunofluorescencia directa) como pruebas tamiz, confirmándose mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se concluye que la enfermedad está presente en la ciudad. Palabras Clave: diagnóstico, clamidophila psittaci, aves, clamidiosis Abstract Clamidiosis is a zooantrophonosis that affects birds, producing important clinical synthoms in human beings. 120 conjuntival secretion samples were taken from psitacid birds of particular houses and pets shop, in General Pico, La Pampa with the purpose of detecting the presence of this etyologic agent.To such aim, cell diagnostic techniques (Giemsa and direct Inmunofluorescence) were used as first tests, confirming themselves by the Polymerase Chain Reaction (PCR). One concludes that the disease is present in the city. Key words: diagnosis, clamidophila psittaci, birds, clamidiosis Introducción La clamidiosis aviar es una enfermedad infectocontagiosa, zooantroponótica, producida por una bacteria gram negativa de vida in- tracelular obligada, llamada Clamidophila psittaci. Fue descripta por primera vez por Ritter en 1879 en una familia Suiza dedicada a la importación de aves psitácidas (Andersen et al., 1997). En nuestro país diferentes estudios realizados en la ciudad de Buenos Aires describieron la frecuencia de la enfermedad, medida en términos absolutos de números de casos, por la imposibilidad de emplear otras medidas de resumen, al desconocerse la población de aves expuestas y susceptibles existentes en el lugar y tiempo considerados (Molina et al., 2001). La transmisión se lleva a cabo fundamentalmente por vía aerógena, a través del polvo de las plumas, de las expectoraciones y excrementos de las aves infectadas, ya sean enfermas o portadoras sanas. Los factores predisponentes que favorecen la transmisión de la enfermedad son: cambios de temperatura, falta de higiene, ventilación deficiente, contacto entre aves en cautiverio y salvajes, y en general, cualquier causante de estrés. Las aves más jóvenes son más susceptibles que las adultas. La sintomatología incluye disnea, derrame nasal y ocular, cierre de uno o ambos párpados, plumas erizadas, somnolencia, anorexia y diarrea verdosa-grisácea. Cabe destacar que pocas aves presentan una sintomatología clara, por lo que resulta sumamente dificultoso realizar un diagnóstico clínico preciso (Andersen et al., 1997). Las lesiones asientan principalmente en aparato digestivo y respiratorio. La presentación de la enfermedad puede ser aguda, sub-aguda o crónica. Algunas aves que son portadoras asintomáticas, ante una deficiencia del sistema inmunitario desarrollan la enfermedad clínica (Andersen et al., 1997). Las aves infectadas se constituyen en la fuente de contacto hacia el hombre (Barboni de Stella et al., 2001). En el hombre la principal 37 puerta de entrada del agente es por inhalación. La sintomatología clínica incluye neumonía, tos, cansancio, fiebre y dolor de cabeza. Las muestras de elección en aves para la ejecución de las diferentes pruebas son hisopados conjuntivales, cloacales, faríngeos y coanales (McElnea y Cross, 1999). El diagnóstico de clamidiosis (enfermedad) o clamidiasis (infección) se lleva a cabo en el laboratorio, mediante pruebas de aglutinación de cuerpos elementales (EBA), aglutinación en látex y fijación directa de complemento, pero las variaciones de respuesta individual hacen necesaria la realización de pruebas adicionales tales como ELISA, inmunocromatografía, inmunofluorescencia directa y PCR (Vanrompay et al., 1994; Grimes y Arizmendi, 1996;Van Loock et al., 2005). La confirmación del mismo se efectúa a través de la puesta en evidencia de las clamidias mediante tinciones especiales tales como Giemsa, Giménez, y pruebas inmunoquímicas. El citodiagnóstico, cuya sensibilidad es del 70% y su especificidad del 90%, es una técnica rápida y económica en una primera etapa diagnóstica (Barboni de Stella et al., 1999). Distintos trabajos compararon los resultados obtenidos mediante diferentes técnicas de diagnóstico. Sobre 96 aves testeadas, 33 fueron positivas a PCR, 29 de estas a inmunofluorescencia directa y solo 21 a la tinción de Giménez modificada (Celebi y Ak, 2006). Otros autores realizaron trabajos similares obteniéndose concordancia en los resultados (Barboni de Stella et al., 2001). En la ciudad de General Pico en los últimos años se han presentado casos de clamidiosis en seres humanos, por lo que se decidió hacer un relevamiento de la presencia de dicha enfermedad en aves psitácidas locales, a través de tres técnicas diagnósticas diferentes. Nº Muestras 120 Negativas 108 Giemsa 12 38 Materiales y Métodos Se examinaron 120 aves psitácidas domiciliarias y provenientes de lugares de venta, sobre una población total cuyo número es desconocido, ya que se trata de mascotas domésticas. El muestreo se realizó mediante un hisopado ocular, previo lavaje del ojo con solución fisiológica, luego de lo cual se realizaron improntas para el citodiagnóstico con la coloración de Giemsa, para poner en evidencia los cuerpos de inclusión. Las muestras positivas se chequearon mediante inmunofluorescencia directa utilizando el kit comercial Chlamidia direct IF (55321) de BioMérieux, siguiendo las instrucciones indicadas por el fabricante (Barboni de Stella et. al., 1999). De igual modo con las muestras positivas a inmunoflusorescencia directa, se ejecutó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la que se emplearon los oligonucleótidos cebadores específicos para el gen ompA de Chlamydophila psittaci: CPS1: 5`- ACG CAT GCA AGA CAC TCC TCA AAG CC – 3` y CPS2: 5`- ACG AAT TCC TAG GTT CTG ATA GCG GGA C-3`. La reacción se llevó a cabo en 30 ciclos de 1 segundo a 96ºC, 1 minuto a 59ºC y 1 minuto a 72ºC, con una elongación final a 72ºC durante 7 minutos. Los productos se analizaron en geles de agarosa al 1,5% en buffer TBE 0,5X, teñídos con solución de bromuro de etidio (Celebi y Ak, 2006). Resultados Sobre un total de 120 muestras procesadas, 12 presentaron positividad a la coloración de Giemsa, de éstas solo 5 resultaron positivas al ser analizadas por inmunofluorescencia directa y una por PCR (Tabla 1). Positivas Inmunofluorescencia Directa 5 PCR 1 Discusión y Conclusiones De los resultados obtenidos se demuestra la presencia del agente etiológico de la enfermedad en la población de aves psitácidas de la ciudad de General Pico. La proporción de aves positivas obtenidas de acuerdo con el método de diagnóstico, coinciden con los resultados reportados por otros autores, y concuerdan con lo esperado de acuerdo con la especificidad y sensibilidad de cada uno (Barboni de Stella et al, 1999, Barboni de Stella et al, 2001, Grimes y Arizmendi, 1996). De los análisis comparativos de las técnicas realizados en los trabajos mencionados, se deduce que en la actualidad no es posible recomendar la utilización exitosa del citodiagnóstico en aves vivas para la clínica veterinaria privada. En primer lugar resulta compleja la toma de muestras por hisopado conjuntival, no solo por el tamaño del ave, sino también por la poca cantidad de tejido que se puede extraer, sumado al stress que representan dos o tres lavajes oculares. Los extendidos y coloración de Giemsa, en algunos casos deben ser repetidos varias veces para obtener una buena lectura. Otra circunstancia que dificulta el diagnóstico en el animal vivo es la escasa signología clínica. En algunos casos la sola aparición de una hepatopatía crónica, que si bien podría ser puesta en evidencia con un enzimograma hepático, en la mayoría de los casos hace que se excluya la clamidiasis y que solo se diagnostique en casos fatales. El kit de inmunofluorescencia utilizado ha sido desarrollado y estandarizado para su uso en clamidiasis humana, donde la muestra presenta un contenido de células muy superior al que podemos obtener de las aves vivas. Esta puede ser una de las causas de variación en el diag- nóstico. La gran especificidad de este test para la detección de Clamidiasis humana puede llevar a error en la identificación de Clamidophila psittaci. Coincidimos con otros autores (Barboni de Stella et al., 1999) en que las técnicas citológicas pueden resultar una alternativa, pero solo para un diagnóstico presuntivo de Clamidiosis aviar. En relación al objetivo del presente trabajo, referido a la casuística de clamidiosis en esta localidad, consideramos necesario un mayor relevamiento de aves psitácidas, teniendo en cuenta el actual incremento de locales de venta (pets shop) de mascotas no tradicionales. Además, con el número de aves positivas detectadas, no pareciera ser considerada de importancia la posible transmisión de la enfermedad en forma masiva al ser humano. Agradecimientos Los autores agradecen Dr. Marcelo Rodríguez Fermepin, cátedra de Microbiología de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UBA por su desinteresada colaboración en este trabajo. 39 Bibliografía Andersen, A.A.; Grimes, J.E.; Wyrick, P.B. 1997. Diseases of poultry. Chlamydiosis (Psitacosis, Ornithosis). Tenth edition. Iowa State University Press. Ames, Iowa, USA. p. 333-349. Barboni de Stella, A. M.; Guida, N.; Picos, J. A.; Grimaldi, P.; Moras, E. V. 2001. Clamidiasis aviar. Comparación de técnicas diagnósticas. InVet, 3: 161-164. Barboni de Stella, A. M.; Guida, N.; Pozo, O.; Del Rio Alonso, L.: Grimoldi, F.; Moras, E.V. 1999. Comparación del citodiagnóstico y la prueba de ELISA para la detección de clamidias en aves. Revista Argentina Microbiología, 31: 31-32. Celebi, B.S.; Ak, S. 2006. A comparative study to detecting Chlamydophila psittaci in pet birds using isolation in embryonated egg and polimerasa chain reaction.Avian Diseases. 50: 489-93. Grimes, J.E.; Arizmendi, F. 1996. Usefulness and limitations of three methods for diagnosing or excluding chlamydiosis in birds. Journal American Veterinary Medical Association, 209: 747-750 Grimes, J.E.; Arizmendi, F.; Carter, C.N.; Sneed, L. 1996. Diagnostic serologic 40 testing of cage and aviary birds for chlamydiosis and suggested confirmatory testing. Journal Veterinary Diagnostic Investigation, 8:38-44. McElnea, C.L.; Cross, G.M. 1999. Methods of detection of Chlamydia psittacci in domesticated and wild birds.AustralianVeterinary Journal, 77: 516-521. Molina, J.L.; Iachini, R.J.: Mena Segura, C.A.; Palazzolo, A.E.; Gury Dohmen, F.E. 2001. Vigilancia epidemiológica de Clamidiosis aviar. Ciudad de Buenos Aires. 1993-1999. InVet, 3: 165-170. Vanrompay, D.; Van Nerom, A.; Ducatelle, R.; Haesebrouk, F. 1994. Evaluatioon of five IMMunoassays for detection of Chlamydia psittaci in cloacal and conjuctival specimens from turkeys. Journal Clinical Microbiology, 32: 1470-1474 Van Loock, M.; Verminnen, K.; Messmer, T.; Volckaet, G.; Goddeeris, B.; Vanrompay, D. 2005. Use of a nested PCR-enzyme immunoassay with an internal control to detect Chlamydophila psittaci in turkeys. BMC Infectious Disiases 5:76 Versión e l e c t r ó n i c a : h t t p : / / w w w. b i o m e d c e n tral.com/1471-2334/5/76 ACADEMIA NACIONAL DE AGRONOMÍA Y VETERINARIA TOMO LXII BUENOS AIRES, REPÚBLICA ARGENTINA ISSN 0327-8093 Entrega del Premio "Prof. Dr. Osvaldo A. Eckell" Versión 2007 Sesión Pública Extraordinaria del 14 de agosto de 2008 41 PASADO Y PRESENTE DE LA MEDICINA EQUINA PROF. M.V. MARTA INÉS MONINA Desde el comienzo de la humanidad, el hombre siempre estuvo fascinado por comprender a las criaturas que lo rodean. Las pinturas rupestres así lo testimonian desde 15.000 años A.C. El hombre prehistórico de la futura Europa se interesó por registrar rumiantes (vacas, bisontes, etc.) y caballos y con menor interés otras especies como rinocerontes, mamuts y algunos felinos, mientras que en la región Africana lo eran otros animales como los búfalos, cebras, rinocerontes y grandes felinos. Sin lugar a dudas el interés en esa época era primordialmente la provisión de alimentos. Unos 10.000 años A.C. se registró el inicio de alguna forma de agricultura y cría pastoril que cambió la historia de la humanidad, la domesticación de las especies fue una realidad y el perro aparece como una de las primeras criaturas que se incorpora a la vida del hombre. Esta actividad se da en la región del cercano oriente, donde se registra el inicio de la cría de cabras y ovejas. Dos mil años después se incorpora el bovino y el gato adopta al hombre como su compañero. En Sudamérica los primeros camélidos domésticos se registran hace unos 7.500 años mientras que el caballo llega a la historia de la domesticación en el norte de Rusia, aproximadamente 5.000 años atrás. Ligado a la necesidad de desarrollar tácticas de guerra se convierte en el arma más poderosa antes de la aparición de las armas de fuego. La domesticación hizo que las especies cambiaran su importancia, dejaron su rol de simples animales de presa para convertirse en importantes entidades económicas. Los egipcios no conocieron al caballo hasta la invasión de los hicsos (1.539- 1.078 A.C.) pero pronto se convirtieron en maestros de la cría y la equitación, iniciaron la cruza del caballo con la burra para producir burdéganos. Gracias a la caballería pudieron llevar su imperio hasta el río Éufrates. El primer reporte sobre hiplatría data del 42 1.400 A.C, en la cultura asiría, famosa por el cuidado y entrenamiento de los caballos. Ellos cruzaban burros con yeguas para producir muías. Cuando declinan los asirios, surgen las culturas meda y persa basadas en la caballería de Darío, que fueron conquistados en el 322 A.C. por Alejandro Magno admirador de Aristóteles y experto en el manejo del caballo de guerra. Otra escuela de domesticación del caballo, independiente de la rusa, fue la china, durante la dinastía Shung (1.766-1.027 A.C), donde se lo usaba para el tiro de carruajes. Durante la dinastía Tang, el número de caballos en China ascendió de 5.000 a 700.000 animales. Unos pocos trabajos sobre medicina equina han sobrevivido a estas culturas. En el siglo X A.C. existía un título asimilable al de veterinario que se encargaba de la salud de los caballos del ejército. Sun Yang (480 A.C.) considerado el padre de la medicina veterinaria china fue el primero en dedicarse a la acupuntura veterinaria. Por el año 400A.C. se organizaron las ciencias de la salud que incluían a los Médicos para Animales: Shoui o veterinarios y los Shu ma o hipiatras. El centro intelectual del mundo antiguo nace en Grecia (600 A.C), con la era de la filosofía, surgen los estudios teóricos a través de la hipótesis, la experimentación y el razonamiento lógico en todas las ciencias. Dentro de esta innovación del pensamiento aparece un trabajo de investigación profundo sobre la conformación del equino, realizado por Jenofonte (430 – 354 A.C.) en el que trata en detalle la equitación con indicaciones sobre adiestramiento y alimentación.Algunas de sus conclusiones aún son tenidas en cuenta en la actualidad. El caballo basó su importancia en la especialización de su aparato locomotor y el rendimiento deportivo, a diferencia de las especies con interés en la producción de alimentos y vestimenta. Su gran capacidad de transporte le dio este rol que, combinado a su proximidad con el hombre, motivó a los primeros investigadores griegos y romanos a estudiar el movimiento y no sorprende que en la antigüedad los primeros escritos se hayan hecho evaluando la marcha. Aristóteles (admirado por Alejandro Magno) realizó el primer estudio documentado sobre locomoción animal (340 A.C), describiendo las marchas lentas de los cuadrúpedos. Los romanos -menos pensadores que los griegos- asimilaron los conocimientos de Grecia, Asia Menor y Alejandría, organizaron e implementaron el razonamiento y el conocimiento científico y tecnológico de las otras culturas y llegaron a ser uno de los imperios más grandes de la historia. El caballo jugaba un rol importantísimo en sus armas y empleaban un gran número de veterinarios a los que llamaban mulomedici, recién después de las reglas militares creadas por Commodus (180 – 192 DC) aparece el término veterinario. Debido a la popularidad de las carreras de carruajes tirados por dos o cuatro caballos también empleaban una categoría de veterinario no conocido hasta ese entonces, el «especialista en carreras», del que Pelagonio de Niara fue un ejemplo. En su libro Ars Veterinaria, daba directivas para realizar sangrías, técnica ya conocida por los egipcios y los griegos. Remarcaba lo importante de una buena conformación en la selección del caballo ideal (cascos negros, ollares y pecho anchos y extremidades no excesivamente anguladas, eran considerados rasgos ideales) y como la característica más apreciada en aquella época era la velocidad, buscaban el predominio de los de origen itálico, español y de África septentrional. Los veterinarios de aquella época se dedicaban principalmente a curar heridas y enfermedades. La importancia de la profesión quedó plasmada en la compilación de todo lo conocido en el campo como Corpus hippiatricorum Graecorum o Hippiatrika publicada entre los años 900 y 1000D.C, pero en realidad pensados en la IV centuria. El jefe militar veterinario de Constantino El Grande,Apsyrtos (300 – 360 D.C.) es quien introdujo la importancia de la comprensión, cuidado y tratamiento del aparato locomotor del equino. Al declinar las antiguas culturas y caer el Imperio Romano, las ciencias entraron en un cono de sombra. En Europa durante la oscura Edad Media, la inseguridad y la ignorancia reinaron por centurias. Simultáneamente los árabes iniciaron la invasión desde la India hasta España apoyados por una caballería liviana. Sólo fueron detenidos en Potier en el año 752 D.C. por la acción de la caballería pesada, una estrategia parecida al uso de los tanques de la Primera Guerra Mundial. Mientras la cultura europea declinaba, la árabe florecía a expensas de los escritos científicos de la antigüedad que aún perduran. Los árabes hicieron su contribución a la medicina equina. Akhi Hizam al-Furusiyah wa al- Khayl escribió el primer libro sobre las características, conducta y enfermedades del equino en 860 D.C. Más tarde Abu Bakr ibn el.bedr al Baytar (1309 – 1340 D.C.) escribió un excelente libro sobre medicina veterinaria, el Kamil as Sina'atayn donde trata sobre el cuidado y manejo del caballo, incluyendo las estrategias de los líderes en conducción, remarcando los detalles sobre apariencia, conformación y marcha. La importancia del caballo para el hombre árabe llegó a tal punto, que terminan considerando que ambos se unirán en el paraíso. En Europa, durante la primera mitad de la Edad Media, el pensamiento filosófico, la medicina y la medicina veterinaria perdieron interés. La iglesia consideraba que las enfermedades eran un don divino y sólo los poderes sobrenaturales podían determinar la cura de los pacientes. Se creó una actitud hostil hacia lo científico y lo místico y las supersticiones pasaron a ocupar un papel fundamental. Recién al final de la Edad Media a través de la traducción de los libros árabes comenzó el cambio. Estos tratados traducidos al latín se transformaron en las bases del Renacimiento. El Emperador Federico II fue un avanzado, criado entre el Cristianismo Occidental y el Islamismo del Este. Con un especial interés por los animales, propuso renovar la investigación, de ahí que su mariscal Jordanus Ruffus publica su «De Medicina Equorum» en 1250, considerado como el primer nuevo libro 43 sobre medicina equina. Así, en el Renacimiento comienza un proceso revolucionario, se renueva el interés por el pensamiento y las ciencias, incluida la medicina veterinaria. Primero direccionada al legado de la antigüedad, luego orientada a través de los métodos modernos de observación y conclusión, y más recientemente apoyada en el planteamiento de hipótesis, con los subsecuentes test experimentales. Los estudios sobre el movimiento y la anatomía de los animales de Leonardo daVincí (1452 – 1519), comprenden una obra magistral para la época. Leonardo intrigado por la increíble flexibilidad de la columna de los caballos realiza un profundo estudio de su anatomía. Carlo Ruini en 1598 escribe su libra de anatomía Dell Anatomía et dell'lnfirmita del Cavallo. En el capítulo sobre las enfermedades no se separa de lo publicado por Jordanus Ruffus en De Medicina Equorum. Giovanni Borelli (1608 – 1679) profesor de matemáticas en la Universidad de Pisa aplica los conocimientos de física al estudio del movimiento de los animales, calculando la fuerza de los músculos y reconoce que estos se encuentran bajo el control del sistema nervioso. Describe el centro de gravedad y analiza el desplazamiento de los miembros para las distintas marchas («De motu animalium»). Sus estudios recién fueron reconocidos al final de la XVIII centuria. En español se denominan mariscal, albéitar y veterinario a quienes se dedican a atender la salud animal. Mariscal proviene del alemán marh y skalk que significaban respectivamente caballo y sirviente. Del griego hippiatrós (hippos: caballo e iatros: médico) que en sirio pasa a pyatra y de ahí al árabe como biyatr, baitar y albaitar (albéitar).Veterinario (del latín veterinae: bestia o animal de carga) Quien previene o cura las enfermedades de los animales. El siglo XVII se caracterizó por los grandes mariscales, uno de ellos fue William Cavendysh, el primer duque de Newcastle (1592 – 1676) uno de los más famosos entrenadores de caballos, tuvo que dejar Gran Bretaña cuando la armada de Carlos I fue 44 derrotada por las tropas de Cromwell. En su exilio escribió un libro sobre el manejo de los caballos («Méthode nouvelle et invention extraordinaire de dresser les chevaux et les travailler selom lanature»), que primero se editó en Francia. En 1683 el herrero de la Corona Británica,Andrew Snape (por aquel entonces no existía el veterinario como figura), publica su primer libro de anatomía del equino en idioma inglés, copiando en parte y mejorando la obra de Ruini. Otro mariscal fue el francés Jacques de Solleysel que publicó un trabajo de dos volúmenes «Cuidado y enfermedades del equino» en 1733. George Leclerc, conde de Bufón (1707 – 1778) con gran conocimiento escribió una descripción zoológica del caballo. La medicina veterinaria como ciencia prosperó a mediados del 1700 por dos razones fundamentales: se necesitaban los mejores veterinarios para disminuir la gran pérdida de caballos en la guerra y se debían contrarrestar las pérdidas de ganado debido a las plagas que las acechaban. Se calcula que 200 millones de vacas murieron por la peste bovina en Europa entre 1711 y 1780 produciendo una gran crisis agropecuaria. Por otro lado comenzaba un nuevo movimiento intelectual en Europa con origen en Francia. Montesquieu, Rousseau y Voltaire enfatizaron sobre el rol de la razón sobre todas las cosas. Estas circunstancias crearon un punto de partida óptimo para la educación veterinaria. Claude Bourgelat director de la escuela de equitación de Lyon, obtuvo permiso real para transformar su escuela en la primera escuela de veterinaria en 1761. Unos años después estableció una segunda cercana a París, el nuevo centro de Alfort no tardó en dar sus primeros resultados. En 1779 presentó el primer tratado sobre la mecánica del movimiento equino escrito por M. Goiffon y su ayudante Vincent, que fue líder en este tipo de estudios hasta fines del siglo XIX. Luego los alemanes desarrollaron técnicas de filmación para ajustar el estudio del movimiento. Actualmente Francia vuelve a ocupar un lugar de privilegio con la escuela de Jean-Marie Denoix en lo concerniente al diagnóstico de las claudicaciones del equino. Otros países siguieron el ejemplo, el imperio Austrohúngaro inauguró su escuela en 1796. Las primeras escuelas de medicina veterinaria, se enfocaban principalmente al estudio del caballo. Todavía en algunas universidades sigue siendo la especie ejemplo, que mantiene su rol primario de transporte y arma de guerra, superando en importancia económica al resto de las especies domésticas. Por la mitad del siglo XIX ya había escuelas de veterinaria en casi todos los países. EEUU tuvo su primer Veterinary College en Filadelfia en 1852 con un crecimiento muy lento. En Holanda los estudios veterinarios se iniciaron en 1821 con 24 alumnos y desde 1848 a 1855 sólo se inscribieron 8 alumnos. Nuestro país no estuvo ajeno a la evolución del mundo. En 1883 se iniciaron los estudios de veterinaria en el Instituto Agronómico Veterinario de Santa Catalina (Lomas de Zamora) con profesores contratados en Europa. En 1888 egresaron los tres primeros veterinarios, en 1890, se trasladaron las instalaciones a La Plata y en junio de ese año se inició el dictado de clases en la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de La Plata. En 1904 se crea el Instituto Superior de Agronomía y Veterinaria que en 1909 se convierte en Facultad de Agronomía y Veterinaria de la Universidad de Buenos Aires. Recién en 1973 se separan las escuelas para dar forma definitiva a las Facultades de Ciencias Veterinarias y de Agronomía. Estas dos universidades son las que siembran las semillas de la enseñanza de las ciencias veterinarias en el país y surgen de ellas los grandes maestros de la medicina equina nacional (los profesores A. Pires, G. Toucedo, R. Gamboa, R. Buide, G. Garbers entre otros). Simultáneamente, durante la segunda mitad del siglo XIX comienza el gran cambio en los estudios de microbiología, científicos como L. Pasteur y R. Koch proveen las bases para el es- tudio de enfermedades que hasta ese entonces eran de origen misterioso. El patólogo R.Virchow establece las bases de la patología celular rompiendo las teorías humorales. Fue el tiempo de comenzar el control de las grandes plagas del ganado: la peste bovina y la pleuroneumonía. En el caballo, el muermo una grave plaga y zoonosis - fue estudiada por Schütz y Lóffleren 1886. El caballo mantuvo su valor en los campos de batalla durante el siglo XIX hasta que surgió la artillería con armas de fuego y las pérdidas fueron catastróficas. Napoleón perdió más de 30.000 caballos y cerca de 300.000 hombres durante su expedición a Rusia. En la guerra de los Bóers (1899-1902) murieron unos 300.000 caballos. En todo el siglo XIX murieron millones de caballos en los frentes de guerra. Los caballos mantuvieron su importancia en el sector transporte hasta la segunda mitad del siglo cuando fueron reemplazados por el ferrocarril. En Gran Bretaña de 1850 a 1875 el trazado de rieles aumentó de 5000 a 14.500 millas. A fines del siglo XIX y principios del XX la escuela germana tuvo su gran apogeo. El «Manual de anatomía comparada de los animales domésticos» de Wilhelm Ellenberg (18481928) y Herman Baum (1864-1932) siguió editándose hasta 1970. La escuela de anatomía alemana formó a los grandes investigadores de la dinámica del movimiento con técnicas más que sofisticadas para la época. En la Primera Guerra Mundial el caballo todavía mantenía una importancia radical. La expedición de Gran Bretaña en Francia en 1914 comenzó con 53.000 caballos, en 1917 se cree que llegaban a 1.000.000 en servicio activo. Mientras que Alemania censaba 1.250.000. En las regiones del Este de África dominada por Alemania (Tanzania), se desarrollaban estrategias veterinarias para luchar contra las enfermedades tropicales, principalmente la tripanosomiasis, también se adoptaban medidas profilácticas en las áreas infectadas por la mosca Tse-Tse, que dejaba grandes pérdidas de animales a las fuerzas imperiales. 45 Por 1920 Bantoiu un veterinario rumano estudió la relación entre conformación y «performance». Sus colegas Stratul (1922), Nícolescu (1923) y Radescu (1923) estudiaron las relaciones entre los Sangre Pura de Carrera (SPC) y los Hannoverianos. Antes de la segunda guerra mundial los alemanes de la escuela de Wíechert (1927) siguieron comparando conformación y «performance» con el propósito de obtener parámetros morfométricos que ponderen el potencial de «performance». Buchmann (1929) estudió las diferencias de las marchas entre las distintas razas. En todo el mundo se intentó estudiar la relación entre raza y dinámica del movimiento con el propósito de definir cuáles serían las características más convenientes para las largas marchas durante la guerra. En 1937, Max Kadletz investigó la incidencia de la edad en el desarrollo de la artritis. En la preguerra, Wilhem Krügerfue el más prolífico investigador de la cinemática de los miembros del equino. En la Argentina antes de la segunda guerra mundial, Magne de la Croix inició los estudios fotográficos secuenciales y evaluó por esta técnica la marcha del galope (1929). En Brasil Armando Chieffi también se dedicó al estudio de la marcha de los cuadrúpedos. En Holanda Kroon y van der Plank (1929) estudiaron el mecanismo de los cascos, a través de derivaciones eléctricas. En Francia se estudió la acción de los músculos y los ligamentos. En Suiza comenzó el estudio cinematográfico de alta velocidad para evaluar los movimientos de los trotadores y en Checoeslovaquia, J. Kolda (1937) comenzó a evaluar la anatomía funcional del equino. En 1934 en Estados Unidos, Harry Laughlin desarrolló una fórmula para cruzar información sobre edad, peso transportado, distancia y tiempo empleado con el propósito de cuantificar la «performance» del SPC. En Rusia, Ivanov y Borissov (1935), estudiaron la importancia del músculo peroneus tertius en el caballo de pie y en movimiento. Al comenzar la Segunda Guerra Mundial, en septiembre de 1939, los lanceros polacos trataron de impedir el avance de los tanques alemanes, pero la diferencia de fuerzas prácti46 camente los diezmó. Si bien los alemanes usaban 1.350.000 caballos como medio de transporte (de los que aproximadamente el 60% murió en combate) quedó claro que la mecanización, finalizó con el rol del caballo en la guerra tras 5.000 años de prestar servicio. En el ejército moderno el único papel que le queda es de ceremonial. A modo de ejemplo, cabe mencionar que en 1918 EEUU tenía aproximadamente 21.000.000 de caballos y 1.000.000 de automóviles. En 1947 llegaba a 8.000.000 de caballos y 2.000.000 de muías, mientras que en Gran Bretaña, la población de equinos en 1913 era aproximadamente 1.324.000 y en 1956 sólo 233.500. Esto se daba en toda Europa. Es interesante analizar el número de consultas equinas que se realizaban en las Facultades de Veterinaria. En la preguerra en la Clínica de Grandes Animales de Utrecht, se recibían más equinos que bovinos. En la posguerra inmediata cambió a 1:1 hasta 1960 y recién en 1964 comenzó a elevarse la consulta de equinos, pero esta vez ocupando su nuevo rol en la sociedad como caballos de deporte y placer. Si bien el caballo mantuvo su importancia a nivel local y rural hasta nuestros días, la Segunda Guerra dejó a Europa en ruinas y era más importante por entonces solucionar los desastres ocasionados por la guerra que investigar. En la posguerra inmediata casi todo el mundo se vio obligado a vivir un período caracterizado por la privación de lujo, trabajando con escasos recursos hasta que se obtuvo la reparación de los daños ocasionados por la contienda. Toda la producción científica en medicina equina durante este período disminuyó considerablemente. Aunque sin el empuje original, los grandes investigadores continuaron. Muchas tesis para el doctorado en medicina veterinaria, en las universidades alemanas, se basaron en el estudio de las enfermedades y del análisis del movimiento del equino. Richter en 1953 estudió la correlación de los datos morfométricos con la «performance» de los American trotter. En 1960 en Checoeslovaquia, Dusek comenzó a investigar la relación entre parámetros conformacionales y la «performance» de equinos de salto. Recién al finalizar la década del 50' y el inicio de los 60' la economía mundial comienza a florecer y al final de los 60', los países afectados por la posguerra obtienen una tasa positiva de crecimiento económico y prosperidad. Los grandes imperios coloniales van desapareciendo y comienza el desarrollo tecnológico del mundo industrializado. Nuestro país no estuvo ajeno al resto del mundo (ver tabla), con una superficie de 3.761.274 km2 (2.791.810 continentales) en el año 1914 se registraban 9.000.000 de caballos para una población de 8.000.000 de habitantes según lo señalado por el BCRA. Según la misma fuente en 1930 llegaba a 9.800.000 caballos para 12.000.000 de habitantes, en 1980 la población equina bajaba drásticamente a 3.000.000 para 28.000.000 de personas, en 1993 a menos de 2.000.000 para 33.000.000 según la misma fuente y en 1999 no supera 1.200.000 cabezas, para 36.580.000 de habitantes. De acuerdo a datos aportados por la consultora Mora y Araujo los 1.200.000 equinos se encuentran distribuidos en un 21% en la Pampa Húmeda, 20% en el noreste, 17% en el centro del país, 17% en el norte y el resto distribuidos en el resto del país. De ese total, 106.000 aproximadamente están identificados bien como ejemplares de raza, bien por actividad. El resto se trata de equinos sin identificar. Entre las razas con registro podemos mencionar la Pura Sangre de carrera, Árabe,Anglo árabe, Criollo, Percherón, Silla argentino, Silla belga, Silla francés, Polo, Cuarto de Milla,American trotter, Paso peruano,Tiro argentino, etc. Es de destacar que esta población equina constituye el 4% de la actividad agropecuaria y el 14% de la pecuaria de-nuestro país, generando un movimiento de $ 1.400.000.000 al año, generado en una muy amplia gama de actividades: juego, organización de eventos, transporte, herrería, veterinaria, talabartería, farmacia, etc. La misma consultora afirma que en nuestro país cada caballo que ingresa a la actividad hípica genera 6 a 7 puestos de trabajo y que se registran unos 73.000 empleos directos, 110.000 empleos indirectos y que 733.000 personas dependen de la Industria Hípica. REFERENCIAS ECONÓMICAS Y POBLACIONALES Evolución del PBI (Producto Bruto Interno); PBA (Producto Bruto Agrícola); PBG (Producto Bruto Ganadero); valores en valores $. Costo de Factores: (1) Serie histórica 1914-77, en millones a pesos en valores cte. 1970. (2) Serie histórica 1980-94, en millones de pesos 1970 (valor cte, 1986) 47 Si bien la asociación entre el hombre y el caballo se evidencia desde el comienzo de la humanidad, su rol fue cambiando. Pasó de ser simplemente alimento a arma de guerra, elemento de transporte, de trabajo, de placer y de deporte, pero nunca perdió su rol de afecto con el hombre, con un valor muy cercano al que ocupa el perro como compañero de la humanidad. Al perder su valor como arma estratégica, termina la primera época de oro del caballo. Prácticamente se podría afirmar que esta declinación se produce entre las dos guerras mundiales. Si bien durante la 2a Guerra Mundial la investigación en este área llega a un punto muy alto, el comienzo de la revolución mecánica a fines de la primera guerra, hizo que el rol primitivo del caballo en el transporte y la guerra, fuera disminuyendo progresivamente hasta quedar prácticamente marginalizado y al final de 1940, ocurrió un eclipse casi total para la disciplina. En la década del 60, una vez superada la profunda crisis de la posguerra resurge el interés por la especie equina, pero esta vez desde los deportes ecuestres que comienzan a cobrar real importancia a través de las carreras llanas, carreras con obstáculos, carreras de trote, adiestramiento, salto, «endurance», prueba completa, polo, pato, etc. Se concretaron nuevas competencias y se organizaron grandes eventos como los Juegos Ecuestres Mundiales. El primero se desarrolló en 1990 en Estocolmo y nacen las organizaciones encargadas de fiscalizar y reglamentar cada disciplina. Si hubo una época de oro del caballo que finaliza con las dos guerras mundiales, puede asegurarse que entre 1970 y 1990 comienza la segunda era de oro de esta especie, acompañada por el surgimiento de la mayor cantidad de centros de investigación en todo el mundo. Pese a haber perdido el valor económico como herramienta de trabajo o máquina de guerra, el surgimiento del caballo deportivo fue el motor para revivir la investigación. Este interés por la medicina veterinaria equina y la especialización acompañada por la innovación tecnológica de la época crecen hasta niveles impensados en épocas pasadas. En 48 1958 el suizo Bjorck fue el primero en usar herraduras de fuerza para analizar la reacción de la pista. En 1962, Peter Knezevic en Austria comenzó a evaluar la dinámica a través de la inserción de agujas de fuerza. En 1964 el veterinario turco Ihsan Aysan, analizó la dinámica de las claudicaciones. La Universidad de Utrecht, que mantiene hasta estos días su tradicional centro de estudios para la investigación de la biodinámica del movimiento, comenzó su especialidad con el trabajo de Dick Badoux sobre la fricción creada entre el pie y la pista, publicado en Nature en 1964. Todos estos estudios se volcaron a la investigación clínica de los desórdenes de la locomoción, que llegó a su máxima expresión con el advenimiento de las imágenes computadas por sensores ópticos y la evaluación de la locomoción sobre cintas ergométricas. Al final de los 60' comienzan investigaciones específicas en el área equina. En los Estados Unidos, los proyectos de Taylor era/(1966), Rooney (1968), Sola (1969) y Cheney et al (1970) indican el inicio de una serie de estudios revolucionarios en la investigación de la medicina equina, principalmente en el campo de la biomecánica y el análisis del movimiento, la patología, la medicina interna y la cirugía. A partir de los 70', el caballo comienza a interesar como un atleta de alta competición y ello implica satisfacer todas las demandas que las disciplinas exigen de él. Aumenta el valor económico individual de cada caballo y esto permite utilizar técnicas cada vez más sofisticadas para el diagnóstico y el tratamiento eficaz de las enfermedades. El desarrollo de la tecnología computada permite a través del "hardware" y del "software" capturar y analizar los movimientos ultra-rápidos con un detalle inesperado. En 1970 en Suiza, Fredricson et al comienzan los estudios de filmación con película de alta velocidad, los estudios en tres dimensiones y la evaluación a través de la técnica analítica de la industria aeronáutica. El máximo esplendor en la evaluación de la dinámica equina se logra entre 1970 y 1980 en las escuelas suiza y francesa. En 1991, el análisis del movimiento se es- tablece como una disciplina científica en un Workshop Internacional de locomoción animal (IWAL). Esta idea fue concebida y creada por Henk Schamhardt y Ton van den Bogert de la Universidad de Utrecht. Otros IWAL se organizaron por Hilary Clayton en California en 1993 y por Eric Barrey en Saumur, Francia, en 1996 y Florian Buchner organizó el 4o IWAL en Viena. Las escuelas de Suecia, Norteamérica y los países de Europa occidental mantienen el interés en los estudios sobre medicina equina y locomoción, ayudados por la revolución electrónica, el avance tecnológico y el análisis computado del movimiento. En 1992 se construye un laboratorio para la investigación del movimiento en Utrecht que utiliza como sistemas de evaluación el CODA 3 y el Proreflex. En Francia varias líneas de investigación surgen en esta década, en el Instituto Nacional para la Investigación Agronómica (INRA) en Alfort, con Jean-Marie Denoix anatomista interesado en la clínica ortopédica y el diagnóstico por imágenes. En el resto de Europa siguen trabajando los mismos centros actualizados permanentemente. En Canadá, en el Western College of Veterinary Medicine de Saskatoon surgen investigadores de primer nivel, Doug Leach, Hilary Clayton (1998). En los EEUU, Jim Rooney patólogo de Kentucky desde su libro Biomechanics of lameness in horses (1969) hasta la actualidad, sigue aportando con sus investigaciones en patología. Calvin Kobluc en la Universidad de Minnesota crea un sistema de análisis de movimiento por video. La nueva tecnología también es empleada en el diagnóstico por imágenes, la ultrasonografía utilizada a partir de la década del 80' en reproducción, con el propósito de desarrollar técnicas de fertilización asistida y transferencia embrionaria para mejorar la «performance» reproductiva de la especie. Actualmente ha alcanzado tecnología suficiente como para emitir diagnósticos de anátomo-estructura ecográfica de alta definición, prácticamente en toda la economía del organismo. La radiología evoluciona progresivamente hasta la digitalización y computación de imá- genes. La endoscopía y videoendoscopía también evolucionan a medida que la innovación tecnológica lo hace, al igual que la centellografía, termografía, resonancia magnética, tomografía, etc., permitiendo ajustar el diagnóstico a la detallada expresión. A principio del siglo XXI comienza la investigación del genoma equino, que permitirá conocer la intimidad de los desórdenes genéticos generadores de patologías. Mejoran los métodos y técnicas de diagnóstico por laboratorio clínico, microbiológico, de alimentos, dosaje hormonal, etc. Tampoco queda rezagada la evolución en la terapéutica. Existe una gran producción en investigación básica y aplicada en nuevas tendencias farmacológicas y ya se pueden ver los primeros resultados de la utilización de células madres, en la regeneración de tejidos dañados que hasta hace muy poco descartaban al paciente para la práctica deportiva. La fisío- y quinesioterapia aplicadas a la especie equina como las terapéuticas alternativas también hacen a la especialización. Como resultado de la capacidad del equino para desarrollar diferentes habilidades atléticas, la expectativa de «performance» en las competencias actuales, requiere un alto nivel de cuidado y entrenamiento, que puede alcanzarse por la utilización de un gran conocimiento y comprensión de la anatomía y fisiología de los atletas equinos de elite y de la medicina preventiva aplicada durante la preparación física y la competencia. La comunidad científica responde a esta necesidad de conocimientos e información comprendiendo a la medicina deportiva equina como una disciplina relativa a los deportes ecuestres, desarrollada en forma paralela al crecimiento de estos y brindando respuesta a los interrogantes que se generan. El hecho de mejorar los sistemas de salud, las expectativas del cliente, los requerimientos tanto deportivos, como de placer o de producción, a nivel de la industria equina han favorecido la investigación de métodos cada vez más sofisticados, tanto para el diagnóstico como para el manejo del enfermo, provo49 cando un cambio de actitud en los médicos veterinarios especialistas en cada tema. Estas especialidades son una tendencia en prácticamente todas las universidades del mundo. En los últimos 20 años, se han producido los cambios más notables en el campo de la medicina equina, de la mano de los grandes avances tecnológicos. Se han creado una gran oportunidad de programas de posgraduación y la gran cantidad de veterinarios que los siguieron han provocado un gran complejo de cambios en la disciplina, tanto en lo que hace a la medicina interna, la cirugía, la reproducción, la metodología de diagnóstico, etc. con resultados positivos sobre la misma. En el Reino Unido, el médico veterinario se gradúa en la universidad como Bachellor, con el grado de Ciencias Veterinarias o como miembro del Royal College of Veterinary Surgeons y el grado de especialista lo logra a través de estudios de posgrado. Una gran parte de la investigación en medicina equina inglesa, se lleva a cabo en el Equine Research Station de Newmarket dependiente del Animal Health Trust, fundado en 1946. Esta investigación ocupa numerosos campos: cirugía, diagnóstico por imágenes, patología, alimentación, reproducción, etc. En los Estados Unidos, la medicina veterinaria se encuentra en continuo crecimiento. Si bien los graduados que siguen la especialización en Medicina Equina son un porcentaje muy reducido, existen numerosos cursos de pos graduación en todas las universidades del país. La investigación está organizada por el Departamento de Agricultura o por emprendimientos privados, en su gran mayoría dependientes de universidades. Uno de los establecimientos de mayor reconocimiento a nivel mundial es el New Bolton Center de la Universidad de Pennsylvania, donde se llevan a cabo numerosos proyectos de innovación en investigación en medicina equina. En nuestro país los estudiantes egresan de las Facultades de Ciencias Veterinarias como MédicosVeterinarios oVeterinarios, para ellos existe una gran oferta de cursos de posgrado. En 2008 la Facultad de Ciencias Veterinarias 50 de la Universidad de Buenos Aires, ha implementado la especialidad en Medicina Deportiva del Equino como estudio de posgrado. Existe la figura de Hospital Escuela prácticamente en todas las Universidades y varios emprendimientos privados especializados en Medicina Equina entre los que se destacan el Centro Veterinario del Hipódromo de San Isidro, el de la Asociación de Propietarios del Turf de La Plata, el ya prácticamente inaugurado Centro Hospitalario y de Rehabilitación Kawell de San Andrés de Giles. Prov de Bs.As. También se encuentra la Asociación Argentina de Veterinaria Equina cuya finalidad es la de promover la veterinaria y las ciencias afines relacionadas con la salud y el bienestar del caballo, promover y afirmar el desarrollo profesional de sus miembros, estimular la investigación, la expansión e innovación tecnológica en el área de la salud y la producción e industria equina. La oferta de cursos de especialización en esta disciplina es infinita y prácticamente en todo el mundo existen numerosas oportunidades tanto para el Médico Veterinario como para los asistentes. Teniendo en cuenta que al comienzo del siglo XXI se puede asegurar que el caballo internacionalmente ha recuperado y sobrepasado el valor económico de la antigüedad en términos individuales y que la industria hípica está en pleno auge, es de esperar que la especialidad de la Medicina Equina siga en franco progreso acompañando la evolución tecnológica internacional. Bibliografía Back, W; Clayton, H. 2001. Equine locomotion. Ed.W.B. Saunders Company. Inglaterra. Dossenbach, M.; Dossenbach, H. 1987. The noble horse. Ed. Portland House. New York. USA. Gury Dohmen, E. 1997. Pasado, presente y futuro del caballo. En: Revista de Medicina Veterinaria. Número Centenario: 46-48 Kidd, J. 1976. The complete horse encyclopedia. The Hamlyn Publishing Group Ltd. UK. Offringa, C. 1981. Van Gildestein naar Uithof. D1.2, Utrecht: Faculteit der Diergeneeskunde. Pérez, O. A. 2005. Vida de ilustres caballos. Colegio de Médicos Veterinarios. Prov. de Sta. Fe. Reed, S; Byaly, W. 1998. Equine internal medicine. Ed.W.B. Saunders Company. Inglaterra. Snape, A. 1997. The anatomy of an horse. Una reproducción de la Edición 1683, con comentarios de David Ramey. Ed. Howell Book House. van Weren, R. 2001. History of locomotor research (en Back, W; Clayton, Hilary: en Equine locomotion. Ed.W.B. Saunders Company. Inglaterra :1- 35. 51 INSTRUCCIONES A LOS AUTORES Objetivos generales de la publicación CIENCIA VETERINARIA es una publicación de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional de La Pampa, destinada a la difusión de trabajos científicos en este campo del conocimiento, generados en nuestra Unidad Académica y en otras Instituciones. Reflejará, además, las actividades académicas, de posgrado y de extensión que se desarrollen en esta Facultad. Normas generales de redacción 1) Los trabajos deberán ser enviados para su publicación en idioma español, aunque se aceptarán trabajos en idiomas inglés y portugués. 2) Los trabajos se enviarán por triplicado, impresos en hoja tamaño A4, numeradas correlativamente, con un margen de 3 cm a la izquierda y 2 cm a la derecha. Se acompañarán de una versión realizada en procesador de textos Microsoft Office Word 2003, grabada en un medio electrónico (CD), utilizando letra tipo Times New Roman, tamaño 12. 3) El material enviado será analizado por el Comité Editorial, el que lo someterá a consideración del referato externo. El Editor Científico informará al autor del trabajo de las correcciones y recomendaciones sugeridas por el evaluador y determinará en función de ello la aceptación o rechazo del mismo. 4) La falta de cumplimiento de cualquiera de las normas implica la devolución del trabajo para su adecuación. 5) Ni la Facultad de CienciasVeterinarias ni el Editor se hacen solidarios con las opiniones vertidas en los trabajos, siendo los autores los únicos responsables. 6) Se deja establecido que el hecho de recibir un trabajo no conlleva la obligación de su publicación por parte de la Revista. 52 7) Las separatas correrán por cargo y cuenta de los autores. Los mismos deberán indicar con anterioridad el número de separatas que desean. 8) Una vez publicados los trabajos queda prohibida su reproducción total o parcial, salvo expresa autorización de la Revista. Normas particulares de redacción 9) La revista constará de las siguientes secciones: I.Trabajos de investigación. II.Artículos de revisión. III. Comunicaciones. IV. Misceláneas. V. Información institucional. 10) Trabajos de investigación: a. Los trabajos deberán ser inéditos y no podrán exceder de 20 páginas, e incluir más de 30 citas bibliográficas. El Editor se reservará el derecho de ampliar este límite si fuera necesario. b. Los trabajos se organizarán de la siguiente manera:Título, Resumen en castellano e inglés (Summary), con palabras claves, Introducción, Materiales y Métodos, Resultados, Discusión, Conclusiones y Bibliografía. c. El Título será breve y reflejará el contenido del trabajo. Se escribirá en tipografía mayúscula/minúscula. d. El nombre de los autores se indicará de la siguiente manera: apellido, y separado por una coma, las iníciales de los nombres. Si hubiera más de uno, los autores se enunciarán separados por punto y coma. La Institución a la que pertenezcan cada uno de ellos se colocará en renglón aparte, identificadas con superíndices en números arábigos. e. El Resumen no excederá las 300 palabras y explicará brevemente los objetivos principales, el desarrollo del trabajo, los resultados obtenidos y las conclusiones. f. El resumen en inglés (Summary). g. Debajo del Resumen y del Summary se consignarán no más de 5 palabras claves, en el ítem “Palabras claves” o “Key words”, según corresponda. h. Las citas bibliográficas en el texto se indicarán de la siguiente manera, según se trate de uno, dos o más de dos autores: Richmond (1992). Richmond y Lewis (1992). Richmond et al. (1992). i. La Bibliografía se escribirá en el ítem correspondiente, ordenada alfabéticamente y organizada de la siguiente manera: i.1. En el caso de publicaciones periódicas: Autores: apellido, iniciales de los nombres, separados del siguiente autor por punto y coma. Año de publicación.Título del trabajo. Nombre completo de la publicación.Volumen, dos puntos, números de la primera y última páginas del artículo. Ej: Giroux, E.L.; Durieux, M.; Schechter, P.J. 1976.A study of zinc distribution in human serum. Bioinorganic Chemistry, 5: 211-218. i.2. En el caso de libros: Autores: de la misma manera que en publicaciones periódicas. Año de publicación. Nombre completo del libro. Número de edición. Editorial. Ciudad, país. Páginas consultadas. Ej. Steel, R.G.D.; Torrie, J.H. 1992. Bioestadística: principios y procedimientos. McGraw-Hill. 1a Ed. (traducción de la 2a ed. en inglés). México, D.F., México. p. 368-391. j.1. Las Tablas se presentarán en el mismo documento. El título debe ir en la parte superior, precedido por el número correlativo (en arábigo,“Tabla No”). j.2. Los Gráficos se presentarán de la misma manera que las Tablas, guardándose en el mismo documento si el procesador de textos lo permitiera. De lo contrario se guardarán en un documento aparte, indicándose el software utilizado para su confección. Se aceptarán hasta 3 fotografías en blanco y negro, pudiendo el Editor ampliar este número si fuere conveniente. Deberán ir acompañadas del detalle: Foto No y título explicativo. El tamaño será de 9 x 13 cm. Debido a que en la publicación pueden reducirse, el autor puede señalar la sección que se quiere resaltar, marcándola en un papel transparente super- puesto. 11) Artículos de revisión: Contendrán las siguientes secciones: título, resumen, texto, bibliografía. Estos artículos no excederán de 40 páginas y 70 citas bibliográficas, pudiendo el editor reducir o ampliar estas cifras si lo creyera conveniente. Deberán ser enviados de acuerdo a los lineamientos generales del ítem 10. 12) Comunicaciones: Esta sección estará destinada a la comunicación de hallazgos preliminares en trabajos de investigación en marcha, descripción de nuevas técnicas, presentación de casos, etc. Su organización deberá seguir las recomendaciones generales del ítem 10. No deberán exceder de 10 páginas y 10 citas bibliográficas, pudiendo el Editor aumentar o reducir estas cifras si fuera conveniente. 13) Misceláneas: Se incluirán en esta sección las informaciones de divulgación general o difusión que se consideren convenientes. 14) Información institucional: Esta sección estará destinada a difundir aquellas actividades de la Facultad que tengan relación con los objetivos generales de la publicación. 15) Cualquier cuestión no especificada en estas Instrucciones será resuelta por el Comité Editorial de la revista. Se entregará 1 ejemplar a: - cada uno de los directores de Proyectos de Investigación. - cada uno de los Secretarios de Ciencia y Técnica de las Facultades de Ciencias Veterinarias de Universidades Nacionales. - Secretaría de Ciencia,Técnica y Posgrado – UNLPam. - Biblioteca Central – UNLPam. - Biblioteca de la FCV – UNLPam. - Decanato de la FCV – UNLPam. - Círculo de Legisladores de la Provincia de La Pampa. 53 54